本発明は、選択されたムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を含む、慢性閉塞性肺疾患および喘息のような呼吸器疾患の処置に使用するための、医薬品、キットまたは組成物を提供する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)および喘息の処置に有用な複数薬学的活性物質の組合せ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺の本来的機能は、その脆弱な構造の、汚染物質、微生物、アレルゲン、および発癌物質を含む環境への多大な暴露を必要とする。ライフスタイルの選択と遺伝的素因の相互作用によって形成される宿主因子がこの暴露への応答に影響する。肺の損傷または感染は、広範囲の呼吸器系の疾患(または呼吸器疾患)を発症させ得る。多くのこれらの疾患は、大衆保健上極めて重要である。呼吸器疾患は、急性肺傷害、急性呼吸器窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、職業性肺疾患、肺癌、結核、線維症、塵肺、肺炎、気腫、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)および喘息を含む。
【０００３】
最も一般的な呼吸器疾患の一つは喘息である。喘息は、一般に間欠的な呼吸気流閉塞が原因の臨床症状を伴う気道の炎症性障害として定義される。それは発作性の喘鳴、呼吸困難および咳により臨床的に特徴付けられる。それは、有病率および重症度が上昇しているように見える、慢性機能障害性の疾患である。先進国における子供の１５％および成人の５％が喘息に罹患していると推計される。故に、治療は通常の生活が可能となり、同時に基礎疾患である炎症の処置の基礎をもたらすような症状の抑制を目的とすべきである。
【０００４】
ＣＯＰＤは、正常な呼吸を阻害し得る広汎な肺疾患群に用いられる病名である。現在の臨床ガイドラインは、ＣＯＰＤを、完全に可逆性ではない気道空気流制限によって特徴付けられる疾病状態と定義している。気道空気流制限は、通常進行性で、かつ有害粒子またはガスに対する肺の炎症性応答と関係するもの両方である。このような粒子およびガスに対する最重要寄与源は、少なくとも西側諸国ではタバコの煙である。ＣＯＰＤ患者は咳、息切れ、および痰の過剰分泌を含む種々の症状を呈し、このような症状は、好中球、マクロファージ、および上皮細胞を含む多くの細胞群の機能障害に由来する。ＣＯＰＤに含まれる２つの最も重要な症状は慢性気管支炎および肺気腫である。
【０００５】
慢性気管支炎は、気管支の長期にわたる炎症であり、後者は粘膜形成の増大およびその他の変化をもたらす。患者の症状は、咳および痰の喀出である。慢性気管支炎は、より頻繁で重篤な呼吸器感染、気管支の狭窄および閉塞、呼吸困難および呼吸不能に至り得る。
【０００６】
肺気腫は、肺胞および／または小気管支の末端に影響する慢性肺疾患である。肺はその弾力性を失い、そのために、肺の当該領域は拡張する。当該拡張領域は古い空気を滞留させ、それを新鮮な空気と効率的に交換しない。その結果呼吸困難をもたらし、そして血中への酸素の供給不足を生じる。肺気腫患者の主症状は息切れである。
【０００７】
呼吸器疾患の処置に使用される治療剤はβ_２−アドレナリン受容体アゴニストを含む。これらの薬剤(ベータ２(β_２)−アゴニストとしても既知)は、気管支平滑筋を弛緩させ、気道閉塞を軽減し、肺高度膨脹を軽減し、そして息切れを減らすことにより、呼吸器疾患の症状を軽減する。１日１回β２アゴニストとして現在治験中の化合物がExpert Opin. Investig. Drugs 14 (7), 775-783 (2005)に記載されている。
【０００８】
呼吸器疾患の処置に使用される他の群の治療剤はムスカリンアンタゴニストである。ムスカリン受容体は、５種のファミリーメンバーＭ_１、Ｍ_２、Ｍ_３、Ｍ_４およびＭ_５を有するＧタンパク質共役受容体(ＧＰＣＲ)ファミリーである。５種のムスカリンサブタイプのうち、３種(Ｍ_１、Ｍ_２およびＭ_３)がヒト肺組織で生理学的作用を発揮することが知られている。副交感神経は、ヒト気道で気管支収縮反射の主経路であり、アセチルコリンをムスカリン受容体に対して送達することにより気道緊張を仲介する。気道緊張は呼吸器障害、例えば喘息および慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)の患者で高まっており、そしてこの理由でムスカリン受容体アンタゴニストが気道疾患における治療について開発されている。ムスカリン受容体アンタゴニスト(antagonsists)は、診療では抗コリン剤ともしばしば呼ばれ、ＣＯＰＤの個体の第一選択薬として広く認められており、その使用は文献で徹底的にレビューされている(例えばLee et al, Current Opinion in Pharmacology 2001,1, 223-229)。
【０００９】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストまたはムスカリンアンタゴニストでの処置はかなりの成果を得ることができているが、しばしばこれらの薬剤の効果は満足とはほど遠いことがある。さらに、呼吸器疾患、例えば喘息およびＣＯＰＤの複雑さの点から、何らかの一つのメディエーターがそれだけでこの疾患を十分に治療できる可能性はなさそうである。それ故に呼吸器疾患、例えばＣＯＰＤおよび喘息に対する新規治療、特に疾患修飾能を有する治療への医学的な切迫した要求がある。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は：
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるムスカリンアンタゴニストである第一活性成分と、β_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を組み合わせて含む、医薬品を提供する。
【００１１】
本発明に従うムスカリンアンタゴニストをβ_２−アドレナリン受容体アゴニストと組み合わせて呼吸器疾患の処置に使用したとき、有益な効果が観察され得る。有益な効果は、２種の活性成分を同時に(一医薬製剤としてまたは別の製剤を介していずれか)、または別の医薬製剤を介して連続的にまたは別々に投与したときに観察され得る。
【００１２】
本発明の医薬品は、例えば、第一および第二活性成分を混合して含む医薬組成物であり得る。あるいは、本医薬品は、例えば、第一活性成分の製剤および第二活性成分の製剤と、場合により、それを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与に関する指示を含むキットであり得る。
【００１３】
本発明の組合せ剤の第一活性成分は：
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるムスカリンアンタゴニストである。
【００１４】
本発明のムスカリンアンタゴニストは、Ｍ３受容体に高い効力を示す同時係属出願ＰＣＴ／ＧＢ２００８／０００５１９(ＷＯ２００８／０９９１８６)に記載した新規化合物群の中から選択される。ムスカリンアンタゴニストの名称は、実施例に記載した構造式、およびカーン・インゴルド・プレローグシステムに従う立体異性に基づき、MDL Information Systems Inc.により提供されるBeilstein Autonom 2000 naming packageにより作成したＩＵＰＡＣ名である。例えば、名称(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンは次の構造から作成された：
【化１】

【００１５】
本発明のムスカリンアンタゴニストは、４級窒素原子上の正荷電と結合するアニオンＸを含む。本アニオンＸは、任意の一価または多価(例えば二価)酸の薬学的に許容されるアニオンであり得る。本発明の一態様においてＸは、鉱酸のアニオン、例えばクロライド、ブロマイド、アイオダイド、スルフェート、ナイトレートまたはホスフェート；または適当な有機酸のアニオン、例えばトルエンスルホネート(トシレート)、エジシレート(エタン−１,２−ジスルホネート)、イセチオネート(２−ヒドロキシエチルスルホネート)、ラクテート、オレアート(oleic)、マレアート((Ｚ)−３−カルボキシ−アクリレート)、スクシネート(３−カルボキシ−プロピオネート)、マレート((Ｓ)−３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロピオネート)、ｐ−アセトアミドベンゾエート、アセテート、マレアート、フマレート、シトレート、オキサレート、スクシネート、タートレート、メタンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、ベンゼンスルホネート、ナパジシレート(ナフタレン−１,５−ジスルホネート)(例えばヘミナパジシレート)、２,５−ジクロロベンゼンスルホネート、(キシナホエート)１−ヒドロキシ−２−ナフトエートまたは１−ヒドロキシナフタレン−２−スルホネートであり得る。
【００１６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは臭化物塩の形である。
【００１７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネート；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド；および
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
から選択される。
【００１８】
本発明の組合せ剤における第二活性成分はβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである。本発明のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは、β_２受容体を刺激し、気管支拡張剤として作用できる任意の化合物または物質であり得る。本明細書の文脈において、特にことわらない限り、β_２−アドレナリン受容体アゴニストに関する全ての記載は、該β_２−アドレナリン受容体アゴニストから形成され得る活性塩、溶媒和物または誘導体および全ての鏡像体およびその混合物を含む。β_２−アドレナリン受容体アゴニストの可能な塩または誘導体は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、マレイン酸の塩のような酸付加塩、および薬学的に許容されるエステル類(例えばＣ_１−Ｃ_６アルキルエステル類)である。β_２−アゴニストは溶媒和物、例えば水和物の形であり得る。
【００１９】
この態様に従う医薬品で使用し得るβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは、メタプロテレノール、イソプロテレノール、イソプレナリン、アルブテロール、サルブタモール(例えば硫酸塩として)、フォルモテロール(例えばフマル酸塩として)、サルメテロール(例えばキシナホ酸塩として)、テルブタリン、オルシプレナリン、ビトルテロール(例えばメシル酸塩として)、ピルブテロールまたはインダカテロールを含む。この態様のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは、長時間作用型β_２−アゴニスト(すなわち２４時間を超えて持続する活性を有するβ_２−アゴニスト)、例えばサルメテロール(例えばキシナホ酸塩として)、フォルモテロール(例えばフマル酸塩として)、バンブテロール(例えば塩酸塩として)、カルモテロール(ＴＡ ２００５、化学的に２(１Ｈ)−キノロン、８−ヒドロキシ−５−[１−ヒドロキシ−２−[[２−(４−メトキシ−フェニル)−１−メチルエチル]−アミノ]エチル]−モノヒドロクロライド、[Ｒ−(Ｒ＊,Ｒ＊)]として同定され、またChemical Abstract Service Registry Number 137888-11-0としても同定され、米国特許４,５７９,８５４に開示されている)、インダカテロール(CAS no 312753-06-3; QAB-149)、ホルムアニリド誘導体、例えばＷＯ２００２／７６９３３に開示された３−(４−{[６−({(２Ｒ)−２−[３−(ホルミルアミノ)−４−ヒドロキシフェニル]−２−ヒドロキシエチル}アミノ)ヘキシル]オキシ}−ブチル)−ベンゼンスルホンアミド、ベンゼンスルホンアミド誘導体、例えばＷＯ２００２／８８１６７に開示された３−(４−{[６−({(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−[４−ヒドロキシ−３−(ヒドロキシ−メチル)フェニル]エチル}アミノ)−ヘキシル]オキシ}ブチル)ベンゼンスルホンアミド、ＷＯ２００３／０４２１６４およびＷＯ２００５／０２５５５５に開示されたアリールアニリン受容体アゴニスト、ＷＯ２００４／０３２９２１、ＵＳ２００５／２２２１４４に開示されたインドール誘導体、化合物GSK 159797、GSK 159802、GSK 597901、GSK 642444およびGSK 678007であり得る。
【００２０】
本発明の一態様において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロールである。フォルモテロールの化学名はＮ−[２−ヒドロキシ−５−[(１)−１−ヒドロキシ−２−[[(１)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミドである。フォルモテロールの製造は、例えば、ＷＯ９２／０５１４７に開示されている。この態様の一面において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはフマル酸フォルモテロールである。本発明は、フォルモテロールの全ての光学異性体およびラセミ体を含むその混合物の使用を包含することは理解されよう。それ故に、例えば、用語フォルモテロールは、Ｎ−[２−ヒドロキシ−５−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシ−２−[[(１Ｒ)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミド、Ｎ−[２−ヒドロキシ−５−[(１Ｓ)−１−ヒドロキシ−２−[[(１Ｓ)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミドおよびラセミ体を含むかかる鏡像体の混合物を包含する。
【００２１】
本発明の一態様において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストは：
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド、
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミド、および
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン、
またはその薬学的に許容される塩から選択される。この態様に従うβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは、本明細書の実験的製造の章に記載の通り製造し得る。この態様のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストの名称は、IUPAC NAME, ACD Labs Version 8 naming packageにより作成したＩＵＰＡＣ名である。
【００２２】
本発明のさらなる態様において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストは：
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド、
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド、および
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンジヒドロブロマイド
から選択される。
【００２３】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロール(例えばフマル酸塩として)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００２４】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロール(例えばフマル酸塩として)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００２５】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロール(例えばフマル酸塩として)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００２６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロール(例えばフマル酸塩として)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００２７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはフォルモテロール(例えばフマル酸塩として)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００２８】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００２９】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００３０】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３１】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３２】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３３】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００３４】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００３５】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストは７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンまたはその薬学的に許容される塩(例えば二臭化水素酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３８】
本発明の一態様において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩である。この態様に従うβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＷＯ２００８／０７５０２６Ａ１に記載の通り製造し得る。この態様の別の面において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドビス−トリフルオロ酢酸塩である。この態様の別の面において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドジヒドロ臭化物塩である。この態様の別の面において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドジ−Ｄ−マンデル酸塩である。
【００３９】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えばジヒドロブロマイドまたはジ−Ｄ−マンデル酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００４０】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えばジヒドロブロマイドまたはジ−Ｄ−マンデル酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００４１】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えばジヒドロブロマイドまたはジ−Ｄ−マンデル酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４２】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えばジヒドロブロマイドまたはジ−Ｄ−マンデル酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４３】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストはＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えばジヒドロブロマイドまたはジ−Ｄ−マンデル酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストは(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４４】
本発明の組合せ剤は、呼吸器疾患の処置に有益な治療効果を提供し得る。かかる可能性のある効果の例は、次の１個以上のパラメータの改善を含む：肺への炎症性細胞流入の軽減、軽度および重度増悪、ＦＥＶ_１(一秒量)、肺活量(ＶＣ)、最大呼気流量(ＰＥＦ)、症状スコアおよびクオリティ・オブ・ライフ。
【００４５】
本発明のムスカリンアンタゴニスト(第一活性成分)およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニスト(第二活性成分)を呼吸器疾患を処置するために同時に、連続的にまたは別々に投与し得る。連続投与により、これらの複数活性成分を、任意の順番で、一方の直後に他方を投与することを意味する。それらを別々に投与しても望む効果をなお有し得るが、この方法で投与するとき、一般に４時間以上は離れないで、より好都合には２時間以上離れないで、より好都合には３０分間以上離れないで、そして最も好都合には１０分間以上離れないで投与する。
【００４６】
本発明のこれらの複数活性成分を経口または非経腸(例えば静脈内、皮下、筋肉内または関節内)投与により慣用の全身投与形態、例えば錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、水性または油性溶液または懸濁液、エマルジョンおよび滅菌注射可能水性または油性溶液または懸濁液で投与してよい。これらの複数活性成分をまた局所的に(肺および／または気道に)溶液、懸濁液、エアロゾル剤および乾燥粉末製剤の形で投与してよい。これらの投与形態は、通常、例えば、アジュバント、担体、結合剤、滑剤、希釈剤、安定化剤、乾燥剤、乳化剤、粘性調節剤、界面活性剤、防腐剤、香味剤および着色剤から選択され得る１種以上の薬学的に許容される成分を含む。当業者には理解される通り、これらの複数活性成分を投与する最も好適な方法は多くの因子による。
【００４７】
本発明の一態様において、これらの複数活性成分を別々の医薬製剤により投与してよい。それ故、一面において、本発明は、本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分の製剤、およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分の製剤、および場合によりそれを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与のための指示を含むキットを提供する。
【００４８】
他の態様において、これらの複数活性成分は一医薬組成物により投与してよい。それ故、本発明は、さらに、本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分、およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を混合して含む、医薬組成物を提供する。
【００４９】
本発明の医薬組成物は、ムスカリンアンタゴニスト(第一活性成分)とβ_２−アドレナリン受容体アゴニスト(第二活性成分)および薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することにより製造し得る。それ故、本発明のさらなる面において、本発明のムスカリンアンタゴニストとβ_２−アドレナリン受容体アゴニストおよび薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することを含む、医薬組成物の製造方法が提供される。
【００５０】
本発明に従い投与される各活性成分の治療用量は、用いる特定の活性成分、活性成分を投与する方式、および処置する状態または障害により変わることは理解されよう。
【００５１】
本発明の一態様において、本発明のムスカリンアンタゴニストを吸入により投与する。吸入により投与するとき、本発明のムスカリンアンタゴニストの投与量は、一般に、０.１マイクログラム(μg)〜５０００μg、０.１〜１０００μg、０.１〜５００μg、０.１〜１００μg、０.１〜５０μg、０.１〜５μg、５〜５０００μg、５〜１０００μg、５〜５００μg、５〜１００μg、５〜５０μg、５〜１０μg、１０〜５０００μg、１０〜１０００μg、１０〜５００μg、１０〜１００μg、１０〜５０μg、２０〜５０００μg、２０〜１０００μg、２０〜５００μg、２０〜１００μg、２０〜５０μg、５０〜５０００μg、５０〜１０００μg、５０〜５００μg、５０〜１００μg、１００〜５０００μg、１００〜１０００μgまたは１００〜５００μgの範囲である。この投与量を、一般に、１日１〜４回、好都合には１日１回または２回、および最も好都合には１日１回で投与する。
【００５２】
本発明の一態様において、β_２−アドレナリン受容体アゴニストを好都合には吸入により投与し得る。吸入により投与するとき、β_２−アドレナリン受容体アゴニストの投与量は、０.１〜５０μg、０.１〜４０μg、０.１〜３０μg、０.１〜２０μg、０.１〜１０μg、５〜１０μg、５〜５０μg、５〜４０μg、５〜３０μg、５〜２０μg、５〜１０μg、１０〜５０μg、１０〜４０μg、１０〜３０μg、または１０〜２０μgの範囲である。この投与量を、一般に、１日１〜４回、好都合には１日１回または２回、および最も好都合には１日１回で投与する。
【００５３】
一態様において、本発明は、本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分、およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を組み合わせて含む医薬品を提供し、ここで、各活性成分は吸入投与用に製剤されている。
【００５４】
一態様において複数活性成分の医薬製剤を同時に投与してよい。
【００５５】
一態様において複数活性成分の異なる医薬製剤を連続的に投与してよい。
【００５６】
一態様において複数活性成分の異なる医薬製剤を別々に投与してよい。
【００５７】
本発明のこれらの複数活性成分は、好都合には吸入により(例えば肺および／または気道に局所的に)、溶液、懸濁液、エアロゾルおよび乾燥粉末製剤の形で投与される。例えば定量噴霧式吸入器を、適当な噴射剤に分散されており、そしてさらなる賦形剤、例えばエタノール、界面活性剤、滑剤または安定化剤を伴うかまたは伴わない、これらの複数活性成分の投与に使用できる。適当な噴射剤は炭化水素、クロロフルオロカーボンおよびヒドロフルオロアルカン(例えばヘプタフルオロアルカン)噴射剤、または任意のかかる噴射剤の混合物を含む。好ましい噴射剤はＰ１３４ａおよびＰ２２７であり、これらの各々は単独でまたは他の噴射剤および／または界面活性剤および／または他の賦形剤と共に使用し得る。噴霧水性懸濁液または、好ましくは、溶液も、適当なｐＨおよび／または張性調節剤と共にまたは伴わずに、単位投与または多回投与量のいずれかとして使用し得る。
【００５８】
これらの複数活性成分の乾燥粉末および加圧ＨＦＡエアロゾルを経口または経鼻吸入により投与し得る。吸入用に、本化合物は望ましくは微粉化されている。微粉化化合物は、好ましくは１０μm未満の質量中央直径を有し、噴射剤混合物に分散剤、例えばＣ_８−Ｃ_２０脂肪酸またはその塩(例えば、オレイック酸)、胆汁酸塩、リン脂質、アルキルサッカライド、過フッ素化またはポリエトキシル化界面活性剤、または他の薬学的に許容される分散剤の助けを借りて懸濁され得る。
【００５９】
一つの可能性は、微粉化した本発明の化合物と担体物質、例えば、モノ−、ジ−またはポリサッカライド、糖アルコール、または他のポリオールの混合である。適当な担体は類、例えば、ラクトース、グルコース、ラフィノース、メレジトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、スクロース、マンニトール；およびデンプンである。あるいは微粉化化合物を他の物質でコーティングしてよい。粉末混合物をまた、各々所望用量の活性化合物を含む硬ゼラチンカプセルに分配してよい。
【００６０】
他の可能性は、微粉化した粉末を、吸入過程の間に崩壊する球体に加工することである。この球体化粉末を、多投与量吸入器、例えば、投与ユニットが所望量を定量し、それがその後患者により吸入されるTurbuhaler^{(登録商標)}として既知のもの薬剤貯蔵部に充填し得る。この系で、活性成分は、担体物質を伴いまたは伴わず、患者に送達される。
【００６１】
本発明の組合せ剤は、呼吸器−管障害、例えば慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、全てのタイプの慢性気管支炎(それに伴う呼吸困難を含む)、喘息(アレルギー性および非アレルギー性；‘喘鳴幼児症候群(wheezy-infant syndrome)’)、成人／急性呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、慢性呼吸器閉塞、気管支機能亢進、肺線維症、肺気腫、およびアレルギー性鼻炎、他の薬物治療、特に他の吸入薬物治療の結果の気道反応性亢進の増悪または塵肺(例えばアルミニウム肺症、炭粉沈着症、石綿肺症、石肺症、ダチョウ塵肺症、鉄沈着症、珪肺症、タバコ症および綿肺症)の処置または予防に有用である。
【００６２】
乾燥粉末吸入器は、これらの複数活性成分を、単独でまたは薬学的に許容される担体と共に、後者の場合、微粉化粉末または秩序混合物として投与するために使用し得る。乾燥粉末吸入器は一投与量または多回投与量であってよく、乾燥粉末または粉末含有カプセルを利用してよい。
【００６３】
定量吸入器、ネブライザーおよび乾燥粉末吸入器は既知であり、種々のかかる装置が利用可能である。
【００６４】
本発明は、さらに、治療において同時に、連続的にまたは別々に使用するための本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物を提供する。
【００６５】
本発明は、さらに、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患または喘息の処置用医薬の製造における、本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。
【００６６】
本発明はさらに、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患または喘息処置に使用する医薬の製造における、本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。
【００６７】
本発明は、なおさらに呼吸器疾患の処置方法であって：
(ａ)一定(治療有効)量の本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分；および
(ｂ)一定(治療有効)量のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分；
を、それらを必要とする患者に同時に、連続的にまたは別々に投与することを含む、方法を提供する。
【００６８】
本明細書の文脈で、用語“治療”はまた、異なる具体的指示がない限り、“予防”も含む。用語“治療的”および“治療的に”もこれに従い解釈すべきである。予防は、当該疾患または状態の前のエピソードに罹患したか、または、他の方法でリスクが増加していると見なされるヒトの処置に特に関連すると期待される。特定の疾患または状態を発症するリスクのあるヒトは、一般に、該疾患または状態の家族歴を有するか、または、遺伝子試験またはスクリーニングで該疾患または状態の発症に特に感受性であることが同定されているヒトを含む。
【００６９】
用語“疾患”は、他に定義しない限り、用語“状態”および“障害”と同様の意味を有し、本明細書および特許請求の範囲で交換可能に使用されている。用語“医薬”および“活性成分”は、本発明の組合せ剤を構成する化合物、例えばムスカリンアンタゴニストまたはβ_２−アドレナリン受容体アゴニストを意味する。
【００７０】
本発明の医薬品、キットまたは組成物は場合により第三活性成分を含んでよく、該第三活性成分は呼吸器疾患の処置に適切な物質である。本発明に包含し得る第三活性成分の例は
・ ホスホジエステラーゼ阻害剤、
・ ケモカイン受容体機能のモジュレーター、
・ キナーゼ機能の阻害剤、
・ プロテアーゼ阻害剤、
・ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、および
・ 非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト
から選択される。
【００７１】
この態様の第三活性成分として使用し得るホスホジエステラーゼ阻害剤の例は、ＰＤＥ４阻害剤、例えばアイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤、ＰＤＥ３阻害剤およびＰＤＥ５阻害剤を含む。例は化合物
(Ｚ)−３−(３,５−ジクロロ−４−ピリジル)−２−[４−(２−インダニルオキシ−５−メトキシ−２−ピリジル]プロパンニトリル、
Ｎ−[９−アミノ−４−オキソ−１−フェニル−３,４,６,７−テトラヒドロピロロ[３,２,１−ｊｋ][１,４]ベンゾジアゼピン−３(Ｒ)−イル]ピリジン−３−カルボキサミド(ＣＩ−１０４４)、
３−(ベンジルオキシ)−１−(４−フルオロベンジル)−Ｎ−[３−(メチルスルホニル)フェニル]−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
(１Ｓ−ｅｘｏ)−５−[３−(ビシクロ[２.２.１]ヘプト−２−イルオキシ)−４−メトキシフェニル]テトラヒドロ−２(１Ｈ)−ピリミジノン(アチゾラム)、
Ｎ−(３,５,ジクロロ−４−ピリジニル)−２−[１−(４−フルオロベンジル)−５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル]−２−オキソアセトアミド(ＡＷＤ−１２−２８１)、
β−[３−(シクロペンチルオキシ)−４−メトキシフェニル]−１,３−ジヒドロ−１,３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−プロパンアミド(ＣＤＣ−８０１)、
Ｎ−[９−メチル−４−オキソ−１−フェニル−３,４,６,７−テトラヒドロピロロ[３,２,１−ｊｋ][１,４]ベンゾジアゼピン−３(Ｒ)−イル]ピリジン−４−カルボキサミド(ＣＩ−１０１８)、
ｃｉｓ−[４−シアノ−４−(３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル)シクロヘキサン−１−カルボン酸(シロミラスト)、
８−アミノ−１,３−ビス(シクロプロピルメチル)キサンチン(シパムフィリン(cipamfylline))、
Ｎ−(２,５−ジクロロ−３−ピリジニル)−８−メトキシ−５−キノリンカルボキサミド(Ｄ−４４１８)、
５−(３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン)−２−イミノチアゾリジン−４−オン(Darbufelone)、
２−メチル−１−[２−(１−メチルエチル)ピラゾロ[１,５−ａ]ピリジン−３−イル]−１−プロパノン(イブジラスト)、
２−(２,４−ジクロロフェニルカルボニル)−３−ウレイドベンゾフラン−６−イルメタンスルホネート(リリミラスト(Lirimilast))、
(−)−(Ｒ)−５−(４−メトキシ−３−プロポキシフェニル)−５−メチルオキサゾリジン−２−オン(メソプラム(mesopram))、
(−)−ｃｉｓ−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１,２,３,４,４ａ,１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−(４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル)−ベンゾ[ｃ][１,６]ナフチリジン(プマフェントリン(Pumafentrine))、
３−(シクロプロピルメトキシ)−Ｎ−(３,５−ジクロロ−４−ピリジル)−４−(ジフルオロメトキシ)ベンズアミド(ロフルミラスト)、
ロフルミラストのＮ−オキシド、
５,６−ジエトキシベンゾ[ｂ]チオフェン−２−カルボン酸(Tibenelast)、
２,３,６,７−テトラヒドロ−２−(メシチルイミノ)−９,１０−ジメトキシ−３−メチル−４Ｈ−ピリミド[６,１−ａ]イソキノリン−４−オン(trequinsin)、および
３−[[３−(シクロペンチルオキシ)−４−メトキシフェニル]−メチル]−Ｎ−エチル−８−(１−メチルエチル)−３Ｈ−プリン−６−アミン(Ｖ−１１２９４Ａ)
を含む。
【００７２】
この態様の第三活性成分として使用し得るケモカイン受容体機能のモジュレーターの例は、ＣＣＲ３受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ４受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５受容体アンタゴニストおよびＣＣＲ８受容体アンタゴニストを含む。
【００７３】
この態様の第三活性成分として使用し得るキナーゼ機能の阻害剤の例は、ｐ３８キナーゼ阻害剤およびＩＫＫ阻害剤を含む。
【００７４】
この態様の第三活性成分として使用し得るプロテアーゼ阻害剤の例は、好中球エラスターゼの阻害剤またはＭＭＰ１２の阻害剤を含む。
【００７５】
この態様の第三活性成分として使用し得るステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストは、ブデソニド、フルチカゾン(例えばプロピオン酸エステルとして)、モメタゾン(例えばフロ酸エステルとして)、ベクロメタゾン(例えば１７−プロピオン酸エステルまたは１７,２１−ジプロピオン酸エステルとして)、シクレソニド、ロテプレドノール(例えばエタボネートとして)、エチプレドノール(例えばジクロロアセテートとして)、トリアムシノロン(例えばアセトニドとして)、フルニソリド、ゾチカゾン(zoticasone)、フルモキソニド(flumoxonide)、ロフレポニド、ブチキソコート(例えばプロピオン酸エステルとして)、プレドニゾロン、プレドニゾン、チプレダン(tipredane)、ステロイドエステル類、例えば６α,９α−ジフルオロ−１７α−[(２−フラニルカルボニル)オキシ]−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６α,９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−１７α−プロピオニルオキシ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−(２−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イル)エステルおよび６α,９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７α−[(４−メチル−１,３−チアゾール−５−カルボニル)オキシ]−３−オキソ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、ＤＥ４１２９５３５に従うステロイドエステル類、ＷＯ２００２／００６７９、ＷＯ２００５／０４１９８０に従うステロイド、またはステロイドGSK 870086、GSK 685698およびGSK 799943を含む。
【００７６】
この態様の第三活性成分として使用し得る非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストのモジュレーターの例は、ＷＯ２００６／０４６９１６に記載されたものを含む。
【００７７】
本発明を以下の非限定的実施例により説明する。実施例において、次の図面が示される：
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；ベンゼンスルホネート(実施例２)のＸ線粉末回折パターン。
【図２】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド(実施例３)のＸ線粉末回折パターン。
【図３】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(実施例４)のＸ線粉末回折パターン。
【図４】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド(実施例５)のＸ線粉末回折パターン。
【図５】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド(実施例７)のＸ線粉末回折パターン。
【図６】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(実施例８)のＸ線粉末回折パターン。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
ムスカリンアンタゴニストの製造
本発明のムスカリンアンタゴニストは次の通り製造し得る。ここに記載した別の塩は、ここに記載する方法に準じた方法を使用して通常の化学により製造し得る。
【００８０】
ムスカリンアンタゴニストの製造に関する一般的実験詳細
特に断らない限り、次の一般的条件をムスカリンアンタゴニストの製造に使用した。
全ての反応を特に断らない限り窒素の雰囲気下に行った。ＮＭＲスペクトルを、４００MHzで操作する５mm逆検出三重共鳴プローブを用いるVarian Unity Inova 400分光計または４００MHzで操作する５mm逆検出三重共鳴ＴＸＩプローブを用いるBruker Avance DRX 400分光計または３００MHzで操作する標準５mmデュアル周波数プローブを用いるBruker Avance DPX 300分光計で得た。シフトは、テトラメチルシランに対するppmで示す。生成物をカラムクロマトグラフィーで精製するとき、‘フラッシュシリカ’は、クロマトグラフィー用シリカゲル、０.０３５〜０.０７０mm(２２０〜４４０メッシュ)(例えばFluka silica gel 60)、および１０p.s.i.までの窒素圧を適用した加速カラム溶出または半自動化CombiFlash(登録商標)Companion精製系の使用によるまたは減圧下Biotage(登録商標)Isolute Flash Si IIカートリッジの手動溶出またはBiotage(登録商標)SP1半自動化系の使用を意味する。全ての溶媒および市販試薬は受領したまま使用した。ＳＣＸクロマトグラフィーをBiotage(登録商標)Isolute SCXまたはSCX-2予充填カートリッジを使用して行った。
【００８１】
引用される液体クロマトグラフィー質量分析(ＬＣＭＳ)法を以下に記載する：
方法１
Ｃ１８逆相カラム(５μm粒子系の１００×３.０mm Higgins Clipeus)を用いるWaters Micromass ZQ2000、Ａ：水＋０.１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ギ酸で溶出。勾配：
【表１】

検出 − ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ(インラインＵＶディテクターでのＭＳのために１００μlスプリット) ＭＳイオン化方法− エレクトロスプレー(陽イオン)
【００８２】
方法２
Ｃ１８逆相カラム(３０×４.６mm Phenomenex Luna ３μm粒子系)を用いるWaters Platform LC四重極質量分光計、Ａ：水＋０.１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ギ酸で溶出。勾配：
【表２】

検出 − ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ(インラインＵＶディテクターでのＭＳのために２００μlスプリット) ＭＳイオン化方法− エレクトロスプレー(陽および陰イオン)。
【００８３】
実験部分で使用する略語：ＡＩＢＮ＝２,２’−アゾビス(２−メチルプロピオニトリル)；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＩＭＳ＝工業料メチル化アルコール；ＬＣＭＳ＝液体クロマトグラフィー−質量分析；ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド；ＲＴ＝室温；Ｒｔ＝保持時間；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＳＣＸ＝強カチオン交換クロマトグラフィー。
【００８４】
実施例２の結晶形の分析について：
示差走査熱量測定(ＤＳＣ)を、Mettler Toledo TS0801ROサンプルロボットおよび自動化サンプルカルーセルを備えたMettler Toledo DSC823eで行った。サンプルを４０μl アルミニウムパンに調製し、サンプルの蓋をロボットにより自動的に穿孔し、３０〜２５０℃で１０℃／分で分析を行った。典型的に、１−３mgのサンプルを分析に使用し、分析を５０ml 分^−１の乾燥窒素パージ下に行った。装置を保証されたインジウムを使用してエネルギーおよび温度について較正した。
【００８５】
熱重量分析(ＴＧＡ)を、TS0801 ROサンプルロボットおよび自動化サンプルカルーセルを備えたMettler Toledo thermogravimetric analyser(TGA851e)で行った。各パンの蓋を分析前に手動で穿孔し、３０〜４００℃で１０℃／分で行った。典型的に、１−３mgのサンプルを分析に使用した。６０ml 分^−１の窒素パージを分析中サンプル上に維持した。装置を温度について較正した。
【００８６】
粉末Ｘ線回折(ＰＸＲＤ)を、Bruker AXS C2 GADDS回折計で、Ｃｕ Ｋ_ａ放射(４０kV、４０mA)、自動化ＸＹＺステージ、自動サンプル位置調整のためのレーザービデオ顕微鏡およびHiStar二次元領域検出器を使用して回収した。Ｘ線光学は、０.３mmのピンホールコリメーターと組み合わせた一ゲーベル多層膜鏡から成った。ビーム分岐、すなわちサンプル上へのＸ線ビームの有効サイズは約４mmであった。θ−θ連続走査モードを、３.２°〜４２.７°の有効な２θ範囲をもたらすサンプル対ディテクター距離間で用いた。典型的にサンプルをＸ線ビームに１２０秒間曝した。サンプルを、磨かずに受け取った材料を使用して平板切片として製造した。約１−２mgのサンプルを平らな表面を得るためにスライドガラスに軽く押しつけた。
【００８７】
動的蒸気収着(ＤＶＳ)分析を、Surface Measurementシステム(ＳＭＳ)DVS-Intrinsic moisture sorption analyserを使用して行った。装置をSMS Analysis Suiteソフトウェア(DVS-Intrinsic Control v1.0.0.30)により制御した。データの解析を、DVS Standard Analysis Suite (v6.0.0.7)と共にMicrosoft Excel 2007を使用して行った。サンプル温度を２５℃に維持し、サンプル湿度を、２００ml 分^−１の合計流速で湿および乾燥窒素流を混合することにより得た。相対湿度は、サンプル近くに位置する較正済Rotronicプローブ(ダイナミック・レンジ１−１００％相対湿度(ＲＨ))を使用して測定した。％ＲＨの関数としてのサンプルの重量変化を常に微量天秤によりモニターした(精度±０.００５mg)。典型的にＰＸＲＤは分析前に行うべきである。続いて２０mgのサンプルを焼結(tared)ステンレススチールメッシュバスケットに環境条件下で入れた。サンプルを４０％ＲＨおよび２５℃(典型的室条件)で載せるか、載せず、サンプルを、表１に示すパラメータを使用する２サイクルにわたる段階的ＤＶＳレジメンに付した。ＤＶＳ等温線をこのデータから計算し、最終ＰＸＲＤを固体状態形態の変化を確認するための分析後に行った。
【００８８】
【表３】

【００８９】
実施例３、４、５、７および８の結晶形態の分析について：
Ｘ線粉末回折(ＸＲＰＤ) − PANalytical X'Pert機で２θ−θ配置で、またはPANalytical CubiX PRO機で、φ−φ配置で、０.０２°増分あたり１００秒間暴露で、２°〜４０° ２φの走査範囲にわたり行った。Ｘ線を、４５kVおよび４０mAで操作する銅長高精度焦点チューブで発生させた。銅Ｘ線の波長は１.５４１８Åであった。データを、〜２mgの化合物が入ったゼロ・バックグラウンド・ホルダー上で集めた。ホルダーはシリコンの一結晶から成り、それは、非回折平面に沿って切断し、その後磨いて光学的に平に仕上げた。この表面上へのＸ線投射は、Bragg消光により打ち消された。
【００９０】
示差走査熱量測定(ＤＳＣ)サーモグラムを、アルミニウムパンおよび穿孔した蓋と共に、TA Q1000示差走査熱量計を使用して測定した。サンプル重量は０.５〜５mgの間で変化した。本工程は、窒素ガス流(５０ml／分)下で、１０℃／分で一定速度で温度を上昇させて、２５〜３００℃の試験温度で行った。
【００９１】
熱重量蒸気吸着(ＴＧＡ)サーモグラムを、白金パンと共にTA Q500 Thermogravimetric Analyserを使用して分析した。サンプル重量は１〜５mgの間で変化した。本工程は、窒素ガス流(６０ml／分)下で、１０℃／分で一定速度で温度を上昇させて、室温〜３００℃の試験温度で行った。
【００９２】
重量蒸気収着(ＧＶＳ)プロファイルをSurface Measurements Systems Dynamic Vapour Sorption DVS-1またはDVS Advantage装置を使用して測定した。固体サンプル約１−５mgをガラス容器に入れ、サンプル重量をデュアルサイクル工程法の間記録した(１０％ＲＨ段階の４０〜９０〜０〜９０〜０％相対湿度(ＲＨ))。
【００９３】
中間体１ − (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン
【化２】

(Ｒ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン−３−オール(１.２５ｇ)、ＣｕＩ(９３.１mg)、１,１０−フェナントロリン(１７６mg)、Ｃｓ_２ＣＯ_３(３.１９ｇ)および３−フルオロ−ヨード−ベンゼン(１.１１ｇ)のトルエン(２.５mL)溶液を１００℃で２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、セライトを通して濾過した。不溶性物質を数回酢酸エチルで洗浄した。濾液を５％硫酸銅溶液、水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。ＳＣＸによる精製により、(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(４９０mg、４５％)を褐色油状物として得た。ＬＣＭＳ(方法２、Ｒｔ ２.０９分)。ＭＨ^＋＝２２２。
【００９４】
中間体２−３を(Ｒ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン−３−オールおよび適当なアリールアイオダイドから中間体１について記載する方法に準じて製造した。中間体２−３のデータ：
【表４】

【００９５】
中間体４ − (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン
【化３】

(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタンを３−フルオロチオフェノールから次の通り製造した：３−フルオロチオフェノール(５ｇ)のＤＭＦ(５ml)溶液を、ＮａＨ(１.５６ｇの鉱油中６０％分散)のＤＭＦ(４０mL)懸濁液に室温で添加した。３０分間後、メタンスルホン酸(Ｓ)−(１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクト−３−イル)エステル(５.３ｇ)(J. Med. Chem., 1992, 35, 2392-2406)のＤＭＦ(５mL)を混合物に滴下し、反応混合物を７０℃で一夜加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液に分配した。層を分離し、水性相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。ＳＣＸクロマトグラフィーによる精製により、(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(４.５ｇ、７３％)を得た。中間体４のデータ：NMR (300MHz, MeOD): 7.33 (1 H, td, J=8.04, 6.01 Hz), 7.22-7.13 (2 H, m), 7.01-6.93 (1 H, m), 3.81-3.70 (1 H, m), 3.58-3.48 (1 H, m), 3.14-2.91 (2H, m), 2.92-2.77 (2 H, m), 2.26-2.15 (1 H, m), 2.01-1.77 (4 H, m), 1.70-1.58 (1 H, m)。
【００９６】
中間体Ａ − (Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
【化４】

表題化合物を(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸から次の通り得た：
工程１：１,１’−カルボニルジイミダゾール(２５.０ｇ、１５４mmol)を、撹拌している(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸(３０.０ｇ、１２８mmol)の乾燥ＴＨＦ(６００mL)懸濁液に添加した。９０分間、室温で撹拌後、水素化ホウ素ナトリウム(１１.６ｇ、３０７mmol)を１時間にわたり少しずつ添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応を水(１００mL)の添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、粗固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(０−５％メタノールのＤＣＭ溶液で溶出)での精製により、(Ｒ)−１−シクロヘキシル−１−フェニル−エタン−１,２−ジオール(２０.７ｇ、７３％)を得た。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.41-7.33 (4 H, m), 7.28-7.24 (1 H, m), 3.99 (1 H, d), 3.83 (1 H, d), 2.68 (1 H, br s), 1.86-1.80 (1 H, m), 1.78-1.64 (3 H, m), 1.63-1.57 (1 H, m), 1.47-1.41 (1 H, m), 1.27-0.94 (5 H, m)。
【００９７】
工程２：塩化オキサリル(１５.５mL、２０１mmol)の乾燥ＤＣＭ(９００mL)溶液を−７８℃に窒素雰囲気下に冷却した。ＤＭＳＯ(２８.５mL、４０１mmol)のＤＣＭ(２５mL)溶液を滴下し、混合物を−７８℃で１０分間撹拌した。(Ｒ)−１−シクロヘキシル−１−フェニル−エタン−１,２−ジオール(２９.５ｇ、１３４mmol)のＤＣＭ(２５０mL)溶液を１時間にわたり滴下し、濃いスラリーを得た。内部温度を−４５℃にした。トリエチルアミン(９２.８mL、６６９mmol)を滴下し、添加完了後混合物を室温に温めた。混合物を１Ｎ塩酸(５００mL×２)、水(５００mL)および塩水(５００mL)で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、蒸発させて、オレンジ色油状物を得た。これをＩＭＳ(３２０mL)に溶解し、予め形成したヒドロキシルアミンヒドロクロライド(１４.０ｇ、２０１mmol)および炭酸ナトリウム(２１.３ｇ、２０１mmol)の水(２１０mL)溶液に少しずつ添加した。得られたエマルジョンを室温で一夜撹拌し、ＤＣＭおよび水に分配した。有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−１５％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−アセトアルデヒドオキシム(２５.９ｇ、８３％)を得た。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.76 (1 H, s), 7.44-7.41 (2 H, m), 7.37-7.33 (2 H, m), 7.27-7.23 (1 H, m), 7.22 (1 H, br s), 3.34 (1 H, s), 1.90-1.60 (5 H, m), 1.37-1.05 (6 H, m)。
【００９８】
工程３：(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−アセトアルデヒドオキシム(８ｇ、３４mmol)および２,６−ルチジン(１０mL、８６mmol)のＤＣＭ(１５０mL)溶液を氷浴で冷却した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート(１５.６mL、８６mmol)を滴下した。混合物を１０分間、０℃で撹拌し、室温に３０分間温めた。反応を水(５０mL)の添加によりクエンチした。有機相を層分離カートリッジを通して単離し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(１０−２０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、モノおよびビスＴＭＳ保護された化合物の混合物を得た。これをメタノールに溶解し、室温に一夜静置し、真空で蒸発させて、(Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−アセトアルデヒドオキシム(１０ｇ、９６％)を得た。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.62 (1 H, s), 7.32-7.28 (4 H, m), 7.26-7.21 (1 H, m), 7.11 (1 H, s), 1.93-1.85 (2 H, m), 1.76-1.71 (1 H, m), 1.68-1.56 (2 H, m), 1.49-1.42 (1 H, m), 1.27-0.78 (5 H, m), 0.11 (9 H, m)。
【００９９】
工程４：(Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−アセトアルデヒドオキシム(６ｇ、１９.６mmol)の溶液を乾燥ＤＣＭ(４００mL)に形成し、−７８℃に冷却した。照明を抑えながら、次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル(４.３ｇ、３９.３mmol)のＤＣＭ(１０mL)溶液を滴下した。２時間、−７８℃の後、トリエチルアミン(４.１mL、２９.４mmol)のＤＣＭ(１０mL)溶液を滴下した。さらに１０分間、−７８℃の後、混合物を０℃に温めた。この時点で、プロパルギルクロライド(１４.４mL、１９６mmol)を添加し、混合物を室温に一夜温めた。混合物を塩水(２００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−１０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、粗５−クロロメチル−３−((Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−メチル)−イソオキサゾールを得た。これをＴＨＦ(１００mL)に再溶解し、氷浴で冷却し、テトラブチルアンモニウムフルオライド(１９.６mLのＴＨＦ中１Ｍ)溶液を滴下した。この混合物を３０分間、０℃撹拌し、酢酸エチルおよび水に分配した。有機相を乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−２０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、表題化合物を白色固体として得た(３.５ｇ、５８％)。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.51 (2 H, m), 7.32 (2 H, m), 7.25-7.21 (1 H, m), 6.29 (1 H, s), 4.52 (2 H, s), 2.80 (1 H, s), 2.34-2.28 (1 H, m), 1.81-1.76 (1 H, m), 1.72-1.62 (3 H, m), 1.36-1.02 (6 H, m)。
【０１００】
中間体Ｂ − (Ｒ)−(５−ブロモメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
【化５】

工程１：(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸ヒドラジド
(Ｒ)−シクロヘキシルマンデル酸(２.３４ｇ)をＤＣＭ(２０mL)に溶解し、１,１’−カルボニルジイミダゾール(１.９５ｇ)で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物をヒドラジン一水和物(１.０mL)で処理し、さらに３０分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＮａＯＨ溶液および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た(２.０ｇ、８１％)。ＬＣＭＳ(方法２、２.７３分)。ＭＨ^＋＝２４９。
【０１０１】
工程２：クロロ−酢酸Ｎ’−((Ｒ)−２−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−２−フェニル−アセチル)−ヒドラジド
前記化合物(１.０ｇ)をＤＣＭ(２０mL)に溶解し、０℃でジイソプロピルエチルアミン(０.８３mL)およびクロロアセチルクロライド(０.３９ml)で処理した。室温に温め、１０分間撹拌後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、所望の化合物(１.１ｇ、７３％)を白色固体として得た。ＬＣＭＳ(方法２、３.２０分)。ＭＨ^＋＝３２５。
【０１０２】
工程３：(Ｒ)−(５−クロロメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
前記化合物(１７０mg)、トシルクロライド(９６mg)および１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン(１７５mg)のＤＣＭ(２mL)溶液を室温で一夜撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ_３溶液(２回)、塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。カラムクロマトグラフィー(シリカ、０−１００％シクロヘキサン／酢酸エチル)での精製により、表題化合物を白色固体として得た(１０５mg、６３％)。表題化合物のデータ：ＬＣＭＳ(方法２、３.７９分)。ＭＨ^＋＝３０７。
【０１０３】
工程４：前記化合物(４.６６ｇ)およびリチウムブロマイド(６.６ｇ)のアセトン(２００ml)溶液を一夜還流した。反応混合物を冷却し、真空蒸発させ、水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。得られた固体をアセトン(２００ml)に再溶解し、リチウムブロマイド(６.６ｇ)で処理し、一夜加熱還流した。反応混合物を冷却し、真空で濃縮し、水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を得た(４.６５ｇ、８４％)。表題化合物のデータ：ＬＣＭＳ(方法２、３.９０分)。ＭＨ^＋＝３５３。¹H NMR δ (ppm)(CHCl_３-d): 7.60-7.53 (2 H, m), 7.41-7.25 (3 H, m), 4.49 (2 H, s), 3.28 (1 H, s), 2.33 (1 H, s), 1.85-1.73 (1 H, m), 1.68 (3 H, s), 1.44-1.09 (6 H, m)。
【０１０４】
中間体Ｃ − (５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール
【化６】

表題化合物をメチル５−メチルイソオキサゾール−３−カルボキシレートから次の通り得た：
工程１。フェニルマグネシウムブロマイド(エーテル中３Ｍ溶液；１００mL)をメチル５−メチルイソオキサゾール−３−カルボキシレート(２０.２ｇ)の無水ＴＨＦ(３００mL)溶液に、−１０℃で窒素雰囲気下に滴下した。反応混合物を−１０℃で５分間撹拌し、ＲＴに温め、１８時間静置した。反応混合物を冷１Ｍ ＨＣｌ(３００mL)に注ぎ、エーテルで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ_３、水、および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、(５−メチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(３７.２１ｇ、９８％)を蝋状固体として得た。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.39-7.25 (m, 10 H), 5.84 (s, 1 H), 3.69 (s, 1 H), 2.38 (s, 3 H)。
【０１０５】
工程２。乾燥１,２−ＤＣＥ(５００mL)をアルゴンで１５分間パージした。(５−メチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(３７.９ｇ)を、窒素下、撹拌品柄添加し、ＮＢＳ(２８.０ｇ)およびＡＩＢＮ(４.７ｇ)を添加した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌した。さらにＮＢＳ(２８.０ｇ)およびＡＩＢＮ(４.７ｇ)を反応混合物に添加し、撹拌を８０℃で３時間続けた。反応混合物をＲＴに冷却し、１Ｍ ＨＣｌ(５００mL)に注ぎ、エーテルで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ_３、水、および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させた。１０−１００％シクロヘキサン−ＤＣＭで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーでの精製により、表題化合物(２６.０ｇ、５２％)を、少量の未変化出発物質、および二臭素化および三臭素化不純物を含む薄黄色固体として得た。表題化合物のデータ：¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.38-7.23 (m, 10 H), 6.18 (s, 1 H), 4.35 (s, 2 H), 3.63 (s, 1 H)。
【０１０６】
表題化合物をまたエチル２−クロロ−２−(ヒドロキシイミノ)アセテートから次の通り得ることができる：
工程Ａ − (５−ヒドロキシメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール
トリエチルアミン(６９mL)のエーテル(３１mL)溶液に、４時間にわたり、シリンジポンプの助けを借りて、激しく撹拌しているプロパルギルアルコール(３７.５mL)およびエチル２−クロロ−２−(ヒドロキシイミノ)アセテート(７５ｇ)のエーテル(５００mL)溶液に室温で添加した。反応混合物を一夜撹拌し、濾過し、濾液を水(２回)で洗浄した。水性相を合わせ、塩化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチルで再抽出した(２回)。合わせた有機相を乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、主に５−ヒドロキシメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルエステルから成る濃い油状物(８２ｇ)を得た。これをＴＨＦ(７００mL)に溶解し、−１０℃に冷却し、フェニルマグネシウムクロライド(７５０mL、ＴＨＦ中２.０Ｍ)溶液で、−２℃以下の温度に維持しながら処理した。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌した。反応混合物を注意深く氷冷濃塩酸(２００mL)および氷(５００mL)に添加し、層を分離した。水性層をエーテルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させた。エーテルでの摩砕により、(５−ヒドロキシメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(８２.３ｇ、５９％(２工程))を白色固体として得た。¹H NMR (300MHz, DMSO): δ 7.39-7.25 (m, 10 H), 6.82 (s, 1 H), 6.34 (s, 1 H), 5.62 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 4.54 (d, J=6.0 Hz, 2 H)。
【０１０７】
工程Ｂ − (５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール
前記化合物(４０ｇ)およびテトラブロモメタン(７０.８ｇ)のＤＣＭ(３５０mL)溶液を−１５℃に冷却し、温度を−８℃以下に維持しながらトリフェニルホスフィン(４８.５ｇ)で少しずつ処理した。反応を１０℃に温め、直接シリカゲルパッドに注ぎ、ＤＣＭ(２５００mL)で溶出した。溶離剤を蒸発させ、カラムクロマトグラフィー(０−２５％酢酸エチルのシクロヘキサン溶液)で精製して、表題化合物(４３ｇ、８８％)を濃い、麦わら色油状物として得た。¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ 7.38-7.23 (m, 10 H), 6.18 (s, 1 H), 4.35 (s, 2 H), 3.63 (s, 1 H)。
【実施例】
【０１０８】
実施例１ − (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド
【化７】

(Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ａ)(１.７４ｇ)および(Ｒ)−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体２)(１.２６ｇ)をアセトニトリル(２５mL)中で混合し、５０℃で１時間加熱した。得られた白色固体を濾過により回収し、酢酸エチルおよびエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物(２.９ｇ)を得た。これを沸騰しているアセトニトリル(１２５ml)に溶解し、撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物(２.４ｇ、８１％)を得た。実施例１のデータ：¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆): δ 7.51-7.46 (m, 2 H), 7.32 (t, 2 H), 7.25-7.12 (m, 3 H), 7.02-6.95 (m, 2 H), 6.79 (s, 1 H), 5.90 (s, 1 H), 4.88 (s, 1 H), 4.77 (s, 2 H), 3.91 (dd, 1 H), 3.54-3.34 (m, 5 H), 2.39 (s, 1 H), 2.24-2.09 (m, 2 H), 2.06-1.97 (m, 1 H), 1.94-1.80 (m, 2 H), 1.68 (d, 1 H), 1.58 (d, 3 H), 1.28-1.13 (m, 3 H), 1.10-0.98 (m, 3 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.６８分)。Ｍ^＋＝４９１。
【０１０９】
実施例２ − (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネート
【化８】

(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；クロライド(実施例１)(２.０ｇ)をＤＣＭ(２０ml)に溶解し、ベンゼンスルホン酸ナトリウム(３.４ｇ)の水(２０ml)溶液中、徹底的に撹拌した。有機層を分離し、再びベンゼンスルホン酸ナトリウム(３.４ｇ)の水(２０ml)溶液中で徹底的に撹拌した。有機層を乾燥させ(ＭｇＳＯ_４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を白色泡状物として得た。これを沸騰しているプロパン−２−オール(４８ml)に溶解した。熱溶液を濾過し、濾液を撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。２時間後、混合物を０℃に冷却し、結晶を濾過により回収し、真空乾燥させた。表題化合物(２.１ｇ)を８５％収率で得た。¹H NMR δ (ppm)(DMSO-d_６): 7.62-7.58 (2 H, m), 7.52-7.47 (2 H, m), 7.35-7.26 (5 H, m), 7.26-7.13 (3 H, m), 7.02-6.95 (2 H, m), 6.80 (1 H, s), 5.89 (1 H, s), 4.88 (1 H, s), 4.75 (2 H, s), 3.91 (1 H, dd, J=13.17, 8.11 Hz), 3.58-3.35 (5 H, m), 2.40 (1 H, s), 2.25-1.95 (3 H, m), 1.96-1.80 (2 H, m), 1.69 (1 H, d, J=10.55 Hz), 1.63-1.52 (3 H, m), 1.29-0.96 (6 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７３分)。Ｍ^＋＝４９１。
【０１１０】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＴＧＡ、ＰＸＲＤおよびＤＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣで１０℃／分で決定し、１７８℃(±１℃)で開始する鋭い吸熱事象を有することが判明した。融解前の重量損失はＴＧＡにより無視できた。ＰＸＲＤ分析は、サンプルが極めて結晶性であることを示した(図１参照)。ＤＶＳ分析は、８０％ＲＨ(±０.１％)で０.２％(％ｗ／ｗ)の質量増加を生じた。
【０１１１】
実施例３ − (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド
【化９】

(Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ａ)(３.００ｇ)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体１)(２.１７ｇ)をアセトニトリル(６０mL)中で混合し、５０℃で２時間加熱した。反応混合物を真空蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー(１−１５％メタノールのＤＣＭ溶液で溶出)で精製して、表題化合物を白色泡状物として得た。これを沸騰しているアセトニトリル(５００ml)に溶解し、室温にゆっくり冷却した。得られた白色結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.９ｇ、７５％)。¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆): δ 7.49 (dd, 2 H), 7.40-7.29 (m, 3 H), 7.25-7.20 (m, 1 H), 6.93-6.79 (m, 4 H), 5.90 (s, 1 H), 4.96 (s, 1 H), 4.77 (s, 2 H), 3.95 (dd, 1 H), 3.49 (d, 4 H), 2.43 (s, 1 H), 2.26-2.10 (m, 2 H), 2.07-1.98 (m, 1 H), 1.95-1.82 (m, 2 H), 1.69 (d, 1 H), 1.59 (s, 4 H), 1.28-1.14 (m, 3 H), 1.10-0.98 (m, 3 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７０分)。Ｍ^＋＝４９１。
【０１１２】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約１３４℃(±２℃)で開始する広い吸熱事象(融解)開始が葉名した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図２)参照。ＧＶＳ分析は、第一サイクルで約５％および第二サイクルで６.５％の質量増加を生じた。
【０１１３】
実施例４ − (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート
【化１０】

(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；クロライド(実施例３)(３.２ｇ)の温ＤＣＭ(５０ml)およびメタノール(０.５ml)溶液を徹底的に撹拌し、アンモニウムイセチオネート(５ｇ)の水(２０ml)で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、０℃に冷却し、０.５時間撹拌した。得られた白色沈殿を濾過により回収し、水およびエーテルで洗浄し、真空乾燥させた。沈殿を沸騰しているアセトニトリル(１７２ml)に溶解した。得られた溶液を熱い間に濾過し、撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。２時間後、得られた白色結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.０７ｇ、８２％)。¹H NMR δ (ppm)(DMSO-d_６): 7.47-7.42 (2 H, m), 7.35-7.25 (3 H, m), 7.21-7.13 (1 H, m), 6.81 (4 H, d, J=43.75 Hz), 5.84 (1 H, s), 4.92 (1 H, s), 4.70 (2 H, s), 4.40 (1 H, t, J=5.72 Hz), 3.90 (1 H, dd, J=13.18, 8.10 Hz), 3.58 (2 H, td, J=6.74, 5.72 Hz), 3.48-3.29 (5 H, m), 2.56 (2 H, t, J=6.74 Hz), 2.39 (1 H, s), 2.21-2.04 (2 H, m), 2.03-1.94 (1 H, m), 1.93-1.77 (2 H, m), 1.64 (1 H, d, J=10.36 Hz), 1.54 (3 H, d, J=9.07 Hz), 1.24-1.10 (3 H, m), 1.10-0.93 (3 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７２分)。Ｍ^＋＝４９１。
【０１１４】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約２１４℃(±２℃)で開始する鋭い融解を有することが判明した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図３参照)。ＧＶＳ分析は８０％ＲＨで質量増加を生じなかった。
【０１１５】
実施例５ − (Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１１】

(Ｒ)−(５−ブロモメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ｂ)(２.９３ｇ)および(Ｒ)−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体２)(１.８ｇ)のアセトニトリル(６０ml)溶液を５０℃で一夜加熱した。反応混合物を真空蒸発させ、エーテルで摩砕して、表題化合物(４.７ｇ)を得て、それを沸騰している酢酸エチルから再結晶した。¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆): δ 7.44-7.39 (m, 2 H), 7.34-7.21 (m, 3 H), 7.16-7.09 (m, 2 H), 6.97-6.90 (m, 2 H), 6.39 (s, 1 H), 4.92 (s, 2 H), 4.82 (s, 1 H), 3.97-3.87 (m, 1 H), 3.59-3.37 (m, 5 H), 2.38 (s, 1 H), 2.22 (t, 1 H), 2.11 (s, 1 H), 2.00 (s, 1 H), 1.84 (s, 2 H), 1.66 (s, 2 H), 1.57 (t, 2 H), 1.32 (d, 1 H), 1.23-1.00 (m, 3 H), 1.03-0.88 (m, 2 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.２９分)。Ｍ^＋＝４９２。
【０１１６】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、二重吸熱事象が観察された。融解開始は約１６９℃(±２℃)と概算された。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図４参照)。ＧＶＳ分析は、８０％ＲＨで約０.８％の質量増加を生じた。
【０１１７】
実施例６ − (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１２】

(５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(中間体Ｃ)(１.１ｇの約４０％純度サンプル)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体４)(２１８mg)のアセトニトリル(１０ml)を室温で１時間撹拌した。得られた沈殿を濾過により回収し、真空乾燥させた。これを沸騰しているアセトニトリル(１３０ml)に溶解し、熱い間に濾過し、撹拌しながら室温にゆっくり冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３１２mg、５１％)。¹H NMR δ (ppm)(400MHz, CH_３OH-d_４): 7.40-7.22 (13 H, m), 7.09-7.03 (1 H, m), 6.83 (1 H, s), 4.71 (2 H, s), 4.07-3.98 (2 H, m), 3.69-3.38 (5 H, m), 2.50-2.39 (1 H, m), 2.29-2.25 (1 H, m), 2.24-2.14 (1 H, m), 2.18-1.93 (2 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.３６分)。Ｍ^＋＝５０１.１９。
【０１１８】
実施例７ − (Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１３】

(５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(中間体Ｃ)(４.７ｇの約６７％純度サンプル)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体３)(２ｇ)のアセトニトリル(５０ml)溶液を５０℃で１.５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、固体を濾過により回収し、酢酸エチルおよびエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(４.３６ｇ、８８％)。これを沸騰しているプロパン−２−オール(７６０ml)に濾過し、熱い間に濾過し、撹拌しながら室温にゆっくり冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.７２ｇ)。¹H NMR δ (ppm)(400MHz, CH_３OH-d_４): 7.39-7.26 (10 H, m), 7.16 (1 H, t, J=8.63 Hz), 6.84 (1 H, s), 6.75-6.66 (2 H, m), 4.93-4.87 (1 H, m), 4.79-4.70 (2 H, m), 4.03-3.95 (1 H, m), 3.67-3.48 (5 H, m), 2.56-2.52 (1 H, m), 2.40-2.31 (1 H, m), 2.20-2.11 (4 H, m), 2.10-1.93 (2 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.３７分)。Ｍ^＋＝４９９.２０。
【０１１９】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約２４２℃(±２℃)で開始する鋭い融解が判明した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図５参照)。ＧＶＳ分析は、８０％ＲＨで約０.１％の質量増加を生じた。
【０１２０】
実施例８ − (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート
オーバーヘッドスターラーを備えた５Ｌフラスコ中の撹拌している(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロ(Cyco)ヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド^１(１５５.８３ｇ)およびＤＣＭ(２３８０mL)の懸濁液に、ＭｅＯＨ(２３.８mL)を一度に添加した。数分撹拌後、溶液が形成された。撹拌している塩化物塩の溶液に、イセチオン酸アンモニウム塩(６１.６０ｇ)の水(９４５mL)溶液を５分間にわたり添加した。得られた二相反応混合物を激しく撹拌し、数分後、(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートの種晶を少し添加した。さらに３５分間の撹拌後に少し添加した。固体形成の痕跡がフラスコ側面に観察された。室温で２.５時間撹拌し、高密度沈殿が形成し始めた。少量の反応混合物の顕微鏡下の試験は、結晶性物質を示した。撹拌している反応混合物を氷浴で冷却した内部温度４℃で３５分間)。固体は、さらに顆粒状になった。固体を濾過により回収し、冷水(４００−６０mLずつ全量３.１Ｌ)、続いてエーテル(５×５００mL)。で洗浄した。それを空気中で吸引乾燥し、真空で４０℃で一夜、そしてさらに６時間乾燥させて、生成物を白色結晶性固体(１５２.４８ｇ)として得た。ＬＣ−ＭＳ(方法２)：Ｒ_ｔ ８.９１分、ｍ／ｚ ４９１ [Ｍ]^＋。純度＞９９％。
【０１２１】
生成物(１５２.４８ｇ)を撹拌しながら、還流しているＩＭＳ(２.８Ｌ)に溶解し、熱溶液を濾過した。この溶液を熱いまま維持し、１０Ｌ加熱ジャケット付リアクターで撹拌し、一方残った物質(１５１.６４ｇ)を還流しているＩＭＳ(２.８Ｌ)に溶解し、熱いまま濾過した。２溶液を１０Ｌ加熱ジャケット付リアクターで合わせ、撹拌し、還流した。少量の物質が析出し始め、それ故にさらにＩＭＳ(３５０mL)を溶液が形成されるまで添加した。撹拌している溶液(撹拌速度８８−８９rpm)を徐々に冷却した[約１時間にわたり７８℃(還流温度)から７６.５℃(内部温度)、続いて４.５時間にわたり７６.５−２０℃(内部温度)、そして、２０℃で一夜撹拌]。種晶を撹拌している溶液に７７℃、６９℃および５９℃で添加した。固体物質がリアクターの底に析出し始めた。混合物をさらに冷却するにつれその後数分間でさらなる結晶化が観察された。一夜撹拌後固体を濾過により回収し、冷ＩＭＳ(〜３００ml)で洗浄し、空気中で吸引により(２.５時間)、続いて真空で４０℃で一夜乾燥させて、結晶性(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(２７４.４８ｇ)を得た。
【０１２２】
ＬＣ−ＭＳ(方法２)：Ｒ_ｔ ８.８４分、ｍ／ｚ ４９１[Ｍ]^＋。純度＞９９％。^１ (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロ(Cyco)ヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドの製造は実施例３およびＷＯ２００８／０９９１８６に記載されている。
【０１２３】
結晶性物質のサンプルをＸＲＰＤ、ＧＶＳおよびＤＳＣにより分析した。ＤＳＣにより決定した融点は、２１３℃(開始)(±２℃)であることが判明した。ＧＶＳ決定により、８０％ＲＨ(±０.３％)で０.１５％の重量増加となった。ＸＲＰＤスペクトルを図６に示す。
【０１２４】
ムスカリンアンタゴニストの生物学的活性
ムスカリンアンタゴニストの化合物の阻害効果を、ムスカリン受容体放射性リガンド結合アッセイにより測定した。
組み換えヒトＭ３受容体をＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現させた。細胞膜を調製し、[３Ｈ]−Ｎ−メチルスコポラミン([３Ｈ]−ＮＭＳ)と化合物の結合をシンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)で評価した。インキュベーション時間は１６時間、環境温度で、１％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ存在下であった。アッセイを白色９６ウェル透明底ＮＢＳプレート(Corning)で行った。アッセイ前に、Ｍ３受容体含有ＣＨＯ細胞膜をＳＰＡ ＷＧＡ(小麦胚芽アグルチニン)ビーズ(GE Healthcare)にコーティングした。非特異的結合を１μMアトロピン存在下で決定した。
【０１２５】
放射活性をMicrobetaシンチレーションカウンター(PerkinElmer)で２分間／ウェル読み取り時間の３Ｈプロトコルを使用して測定した。[３Ｈ]−ＮＭＳ結合の化合物による阻害を、典型的に０.０３nM〜１μMの濃度範囲を使用して決定し、プレートについてプレート特異的放射性リガンド結合に対する阻害パーセントとして示した。化合物による[３Ｈ]−ＮＭＳ結合の濃度依存的阻害をｐＩＣ_５０として示した。
【０１２６】
試験した全ての化合物は、Ｍ３結合アッセイで５nM未満の効力(Ｋｉ値)を有する。特に、Ｍ３結合アッセイで実施例１は０.８０nMのＫｉを示し、実施例３は０.６６nMのＫｉを示し、実施例５は０.７０nMのＫｉを示し、実施例６は０.１５nMのＫｉを示し、そして実施例７は０.４０nMのＫｉを示す。
【０１２７】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストの製造
本発明の組合せ剤に用い得る以下のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストを次の通り製造し得る。
【０１２８】
β_２−アドレナリン受容体アゴニスト製造のための一般的実験詳細
^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、Varian Inova 400MHzまたはVarian Mercury-VX 300MHz装置で記録した。クロロホルム−ｄ(δ_Ｈ ７.２７ppm)、ジメチルスルホキシド−ｄ_６(δ_Ｈ ２.５０ppm)、アセトニトリル−ｄ_３(δ_Ｈ １.９５ppm)またはメタノール−ｄ_４(δ_Ｈ ３.３１ppm)の中央ピークを内部参照として使用した。カラムクロマトグラフィーをシリカゲル(０.０４０−０.０６３mm、Merck)を使用して行った。特に断らない限り、出発物質は市販されていた。全溶媒および市販試薬は研究室グレートであり、受領したまま使用した。
【０１２９】
次の方法をＬＣ／ＭＳ分析に使用した：
装置Agilent 1100；カラムWaters Symmetry ２.１×３０mm；質量ＡＰＣＩ；流速０.７ml／分；波長２５４nm；溶媒Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；勾配１５−９５％／Ｂ８分間、９５％Ｂ １分間。
【０１３０】
分析的クロマトグラフィーを、３.５μｍ粒子系のSymmetry C_1８−カラム、２.１×３０mmで、移動相としてアセトニトリル／水／０.１％トリフルオロ酢酸を、０.７ml／分の流速で、８分間にわたり５％〜９５％アセトニトリルの勾配で使用して行った。
【０１３１】
実施例で使用する略語または用語は次の意味を有する：
【表５】

【０１３２】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストおよびその製造に使用する中間体を、記載する構造に基づき、IUPAC NAME, ACD Labs Version 8 naming packageを使用して命名する。
【０１３３】
β_２−アドレナリン受容体アゴニスト１：(ＢＡ１)：製造例１
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化１４】

ａ) ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパノエート
１−ナフタレンエタノール(１０ｇ)をベンジルトリメチル水酸化アンモニウム(Ｔｒｉｔｏｎ Ｂ^{(登録商標)}；０.９mLのメタノール中４０％溶液)で処理し、得られた混合物を真空で３０分間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート(８.１９ｇ)で処理した。得られた混合物をゆっくり室温に温め、一夜撹拌した。粗混合物を続いてアルミニウムオキシド(３０ｇ)に吸着させ、ジエチルエーテル(２００mL)で溶出した。有機物を濃縮して、粗物質(１６.６ｇ)を得て、それを１：８、ジエチルエーテル：ヘキサンで溶出するフラッシュシリカクロマトグラフィーで精製して、副題化合物を得た(１２.８３ｇ)。
¹H NMR (CDCl₃) δ 8.05 (dd, 1H), 7.84 (dd, 1H), 7.72 (dd, 1H), 7.54-7.34 (m, 4H), 3.81-3.69 (m, 4H), 3.35 (t, 2H), 2.52-2.47 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。
【０１３４】
ｂ) ３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパン酸
ジクロロメタン(３０mL)に取り込んだｔｅｒｔ−ブチル３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパノエート(６.１９ｇ)をトリフルオロ酢酸(５mL)で処理した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、さらに１mLのトリフルオロ酢酸を添加し、溶液一夜撹拌した。混合物を濃縮し、２Ｍ 水酸化ナトリウム溶液(３０mL)に取り込み、エーテル(２×２０mL)で洗浄した。水性層を酸性化し（１Ｍ塩酸を使用)、エーテルで抽出した(２×３０mL)。合わせた有機物を塩水(２０mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、副題化合物(５.６６ｇ)を透明油状物として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 8.05 (bs, 1H), 7.85 (bs, 1H), 7.74 (bs, 1H), 7.50-7.38 (m, 4H), 3.84-3.75 (bm, 4H), 3.39 (bs, 2H), 2.65 (bs, 2H)。
【０１３５】
ｃ) Ｎ−(２−ジエチルアミノエチル)−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド
塩化オキサリル(０.３３ｇ)を、３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパン酸(０.５３ｇ)のジクロロメタン(１０mL)、ジメチルホルムアミド(１滴)に滴下し、撹拌を室温で１時間続けた。混合物を濃縮し、ジクロロメタン(１０mL)に再溶解し、２−(２−ジエチルアミノエチルアミノ)エタノール(０.３５ｇ)およびジイソプロピルエチルアミン(０.５６ｇ)のジクロロメタン(１０mL)溶液に滴下した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、希釈し(ジクロロメタン、５０mL)、水(２×２０mL)、塩水(２０mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、粗生成物(０.９１ｇ)を得て、それをフラッシュカラムクロマトグラフィー(５−７％メタノールのジクロロメタン溶液で溶出)で精製して、０.６３ｇの副題化合物を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 8.05 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.52-7.47 (m, 2H), 7.42-7.35 (m, 2H), 3.84-3.78 (m, 6H), 3.72-3.70 (m, 1/2H), 3.45-3.35 (m, 6H), 2.79-2.77 (m, 1+1/2H), 2.62-2.58 (m, 2H), 2.54-2.49 (m, 4H), 1.04-1.01 (m, 6H)。
【０１３６】
ｄ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド
ジメチルスルホキシド(０.０９７ｇ)のジクロロメタン(１mL)溶液に、塩化オキサリル(０.０７９ｇ)のジクロロメタン(１０mL)溶液を−７８℃で添加した。反応を１５分間撹拌し、Ｎ−(２−ジエチルアミノエチル)−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド(０.２２ｇ)のジクロロメタン(１mL＋１mL洗液)溶液を添加し、反応混合物をさらに１５分間撹拌した。トリエチルアミン(０.２９ｇ)を添加し、反応を１時間にわたり室温に温め、混合物を希釈し(ジクロロメタン３０mL)、有機物を重炭酸ナトリウム(２０mL)、塩水(２０mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、副題化合物(０.２１ｇ)を得た。
【０１３７】
粗生成物をメタノール(１０mL)に溶解し、７−(２−アミノエチル)−４−ヒドロキシ−１,３−ベンズ(ben)チアゾール−２(３Ｈ)−オンヒドロクロライド(Organic Process Research & Development 2004, 8(4), 628-642に略記の通り製造；０.１３１ｇ)を酢酸(０.１mL)および水(０.１mL)と共に添加した。室温で３０分間撹拌後、ナトリウムシアノボロハイドライド(０.０２０ｇ)を添加し、反応混合物を一夜撹拌した。アンモニア(メタノール中７Ｎ、１mL)を添加し、混合物を濃縮した。粗残留物を１％アンモニア；５％−７％メタノールのジクロロメタン溶液で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。粗生成物を直接次工程に使用した。
【０１３８】
ｅ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化１５】

Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド(０.０５２ｇ)をエタノール(１.５mL)に溶解し、４８％臭化水素酸(２１μl)で処理した。白色固体ジヒドロ臭化物塩(０.０５８ｇ)を濾過により回収した。
MS: APCI(+ve) 579 (M+1)
¹H NMR δ(DMSO) 11.78-11.71 (m, 1H), 10.11-10.06 (m, 1H), 9.51-9.43 (m, 0.33H), 9.21-9.13 (m, 0.66H), 8.75-8.66 (m, 1H), 8.59-8.51 (m, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.95-7.90 (m, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.60-7.48 (m, 2H), 7.47-7.39 (m, 2H), 6.87 (t, 1H), 6.76 (dd, 1H), 3.78-3.53 (m, 10H), 3.25-3.09 (m, 10H), 2.91-2.80 (m, 2H), 2.73-2.61 (m, 2H), 1.26-1.15 (m, 6H)。ＮＭＲは、２９８Ｋで回転異性体の約２：１混合物を示した。
【０１３９】
β_２−アドレナリン受容体アゴニスト１：(ＢＡ１)：製造例２
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化１６】

ａ) Ｎ’−(２,２−ジメトキシエチル)−Ｎ,Ｎ−ジエチル−エタン−１,２−ジアミン
【化１７】

Ｎ,Ｎ−ジエチル−エチレンジアミン(１５０ｇ)のメタノール(５００mL)メタノール溶液を、グロオキサールジメチルアセタール(６０ｗｔ％水溶液、２２５ｇ)を１０−１５℃で急速に滴下して処理した。添加完了後溶液を１５℃に、続いて２２℃に温め、この温度に１６時間静置した。反応混合物を５％パラジウム／炭素(Johnson-Mattheyタイプ３８Ｈペースト、１５ｇ)で処理し、ＧＣ／ＭＳにより反応が完了するまで６barで水素化した。触媒を濾過により除去し、濾液を蒸発乾固して(トルエン共沸蒸留、２.５Ｌ)、１９６.２ｇの副題化合物を得た。
¹H NMR (CDCl₃): 4.48 (t, 1H), 3.39 (s, 6H), 2.75 (d, 2H), 2.69 (t, 2H), 2.57-2.48 (m, 6H), 1.01 (ts, 6H)。
【０１４０】
ｂ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２,２−ジメトキシエチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド
【化１８】

塩化オキサリル(１５１mL)を、４５分間にわたり、３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパン酸(３８９ｇ)(実施例７ 工程ｂ))のジクロロメタン(２.１Ｌ)およびＤＭＦ(０.５mL)中の溶液に滴下した。反応混合物をさらに１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＤＣＭ(１.７Ｌ)に再溶解し、１.７５時間にわたり、０℃でＮ’−(２,２−ジメトキシエチル)−Ｎ,Ｎ−ジエチルエタン−１,２−ジアミン(３２５ｇ)およびイソプロピルジエチルアミン(５５１mL)のＤＣＭ(１.７Ｌ)溶液に滴下した。得られた混合物を室温で３時間撹拌し、水性飽和重炭酸ナトリウム溶液(５×１Ｌ)、水(１.５Ｌ)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、６５０ｇの副題化合物を得た。
m/e 431 (M+H⁺, 100%)
【０１４１】
ｃ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]−Ｎ−(２−オキソエチル)プロパンアミド
【化１９】

Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２,２−ジメトキシエチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド(９３ｇ)のＤＣＭ(２７０mL)溶液を、０℃で、トリフルオロ酢酸(２７０mL)を１.５時間にわたり滴下して処理した。反応後反応混合物を室温に温め、さらに１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を水性飽和重炭酸ナトリウム溶液(１８００mL、注)に注いだ。水性混合物をＤＣＭで抽出し(４×４００mL)、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残留物を次工程に直接使用した。
【０１４２】
ｄ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化２０】

７−(２−アミノ−エチル)−４−ヒドロキシ−３Ｈ−ベンゾチアゾール−２−オンヒドロクロライド(５３ｇ)の乾燥ＮＭＰ(２１６mL)中の懸濁液を６０℃に加熱し、ＮａＯＨ(８.２ｇ)のメタノール(１０２mL)溶液で一度に処理した。明オレンジ色懸濁液を室温に冷却し、Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]−Ｎ−(２−オキソエチル)プロパンアミドのジクロロメタン(４７５mL)溶液を２０分間にわたり滴下して処理した。反応を２５分間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(９１.５ｇ)を２０分間にわたり少しずつ添加し、混合物をさらに５０分間撹拌した。反応混合物を水(１.８Ｌ)に注ぎ、酸性溶液(ｐＨ５)をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(ＴＢＭＥ)(３×５００mL)で洗浄した。水性相を固体炭酸カリウムの添加によりｐＨ８に塩基性化し、ジクロロメタン(３×７５０mL)で抽出した；合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、暗油状物を得た。これをエタノール(２００mL)に溶解し、４８％水性臭化水素酸(７３mL)を添加した。溶液を３０分間熟成させ(aged)、蒸発乾固した。残留物をエタノール(５６０mL)で摩砕した；得られた固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させた。粘性固体を沸騰しているエタノール(１００mL)に懸濁し、熱い間に濾過した。回収した固体を真空で５０℃で乾燥させた。この物質をエタノール／水(３：１、５００mL)から再結晶した。一夜静置後、得られた固体を濾過により回収し、氷冷エタノール(７５mL)で洗浄した。真空で５０℃で２４時間乾燥させて、５７ｇの表題化合物を得た。
【０１４３】
β_２−アドレナリン受容体アゴニスト２：(ＢＡ２)：
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化２１】

ａ) ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパノエート
２−(３−クロロフェニル)エタノール(２０ｇ)をベンジルトリメチル水酸化アンモニウム(Ｔｒｉｔｏｎ Ｂ^{(登録商標)})(２.６７mL)で処理し、得られた混合物を真空で３０分間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、ｔ−ブチルアクリレート(１７.４０ｇ)で処理した。反応を室温に温め、１６時間撹拌した。混合物をエーテル(７５mL)で溶出するアルミニウムオキシド(１５ｇ)で精製した。回収した濾液を濃縮して、副題化合物(３４.４０ｇ)を油状物として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 7.26-7.07 (m, 4H), 3.69-3.59 (m, 4H), 2.86-2.81 (t, 2H), 2.50-2.45 (t, 2H), 1.43 (s, 9H)
【０１４４】
ｂ) ３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパン酸
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパノエート(実施例１ａ)、３４.４０ｇ)をジクロロメタン(１５０mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(５０mL)で処理した。混合物を室温で３時間撹拌し、真空で濃縮し、ジクロロメタン(２×１０mL)と共沸蒸留した。残留物をジクロロメタン(３００mL)に取り込み、飽和炭酸水素ナトリウム(２００mL)で抽出した。塩基性層をジクロロメタン(２０mL)で洗浄し、２Ｍ塩酸で酸性化した。酸性層をジクロロメタン(２×２００mL)で抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、副題化合物(２４.５０ｇ)を油状物として得た。
m/e 227 [M-H]
【０１４５】
ｃ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２,２−ジメトキシエチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミド
【化２２】

塩化オキサリル(９.５０mL)を４５分間にわたり、３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパン酸(２２.５０ｇ)(実施例１ｂ)のジクロロメタン(１２０ml)およびＤＭＦ(０.５mL)中の溶液に滴下した。反応混合物をさらに１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＤＣＭ(１.７Ｌ)に再溶解し、１.７５時間にわたり、０℃で、Ｎ’−(２,２−ジメトキシエチル)−Ｎ,Ｎ−ジエチルエタン−１,２−ジアミン(２０.２０ｇ)(実施例１６ａ)およびイソプロピルジエチルアミン(３４.４３mL)のＤＣＭ(２００mL)溶液に滴下した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌し、水性飽和重炭酸ナトリウム溶液(３×１Ｌ)、水(１.５Ｌ)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、３９.５０ｇの副題化合物。
m/e 415 (M+H⁺, 83%)
【０１４６】
ｄ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]−Ｎ−(２−オキソエチル)プロパンアミド
【化２３】

Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２,２−ジメトキシエチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミド(実施例１ｃ)(２０ｇ)のＤＣＭ(５００mL)溶液を、０℃で、トリフルオロ酢酸(５０mL)の３０分間にわたる滴下により処理した。反応後反応混合物を室温に温め、さらに１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を水性飽和重炭酸ナトリウム溶液(１８００mL、注)に注いだ。水性混合物をＤＣＭ(３×４００mL)で抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残留物を次工程に直接使用した。
【０１４７】
ｅ) Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミドジヒドロブロマイド
【化２４】

７−(２−アミノ−エチル)−４−ヒドロキシ−３Ｈ−ベンゾチアゾール−２−オンヒドロクロライド(１１.７７ｇ)の乾燥ＮＭＰ(５０mL)中の懸濁液を６５℃に加熱し、ＮａＯＨ(１.８３ｇ)のメタノール(２３mL)で一度に処理した。明オレンジ色懸濁液を室温に冷却し、Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]−Ｎ−(２−オキソエチル)プロパンアミド(実施例１ｄ)のジクロロメタン(５０mL)溶液の３０分間にわたる滴下により処理した。反応を３０分間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(２０.３３ｇ)を２０分間にわたり少しずつ添加し、混合物をさらに１６時間撹拌した。反応混合物を水(１.８Ｌ)に注ぎ、固体炭酸カリウムの添加によりｐＨ８に塩基性化し、ジクロロメタン(２×５００mL)で抽出した；合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、暗油状物。残留物を溶離剤として１０％(０.１％ａｑＮＨ_３／ＭｅＯＨ)／ＤＣＭを用いるシリカクロマトグラフィーで精製して、副題化合物を褐色油状物として得た。収量(６.５８ｇ)。これをエタノール(１５０mL)に溶解し、４８％水性臭化水素酸(１０mL)を添加した。溶液を３０分間熟成させ(aged)、蒸発乾固した。残留物をエタノール(１００mL)で摩砕した；得られた固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させた。この物質をエタノール／水(６：１、５００mL)から再結晶させた；一夜静置後、得られた固体を濾過により回収し、氷冷エタノール(７５mL)で洗浄した。真空で、５０℃で２４時間の乾燥により、４.９６ｇの表題化合物を得た。
MS: APCI(+ve): 563 (M+1) ９９.３％純度(Ｔ９５０５Ｍ)。
1H NMR (DMSO, 90℃), δ 11.75-11.73 (m, 1H), 10.08-10.06 (d, 1H), 8.65 (bs, 1H), 7.33-7.19 (m, 4H), 6.89-6.84 (t, 1H), 6.77-6.74 (m, 1H), 3.68-3.58 (m, 8H), 3.17-3.16 (m, 10H), 2.86-2.80 (m, 4H), 2.67-2.62 (m, 2H), 1.23-1.19 (t, 6H)。
元素分析
ＣＨＮＳ Ｃ：４６.５４％(４６.３９)；Ｈ：５.７５％(５.７０)；Ｎ：７.９４％(７.７３)；Ｓ：４.４６％(４.４２)
【０１４８】
β_２−アドレナリン受容体アゴニスト３：(ＢＡ３)：
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンジヒドロブロマイド
【化２５】

ａ) １−クロロ−２−[(Ｅ)−２−ニトロビニル]ベンゼン
【化２６】

２−クロロベンズアルデヒド(販売Aldrich)(１０.０ｇ)をニトロメタン(２６.０５ｇ)およびアンモニウムアセテート(２１.９２ｇ)と酢酸(２００mL)中で混合し、混合物を４０分間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、酢酸の大部分を真空で除去した。残留物をジクロロメタンに溶解し、水、炭酸カリウム溶液(×２)、再び水で洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質をオレンジ色油状物として得た(１２.８３ｇ)。
¹H NMR δ(CDCl₃) 8.41 (d, 1H), 7.62-7.57 (m, 2H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.43 (dt, 1H), 7.34 (ddd, 1H)
【０１４９】
ｂ) ２−(２−クロロフェニル)エタナミン
【化２７】

アルミニウムハイドライドを、硫酸(８.４０mL)の乾燥ＴＨＦ(６０mL)溶液を、撹拌している１.０Ｍ リチウムアルミニウムハイドライドのＴＨＦ溶液(３１４mL)に、０−１０℃で、窒素雰囲気下滴下することにより調製した。５℃で３０分間撹拌後、１−クロロ−２−[(Ｅ)−２−ニトロビニル]ベンゼン(１２.８３ｇ)の乾燥ＴＨＦ(１６０mL)溶液を内部温度を０℃〜１０℃に維持しながら滴下した。添加が完了したら、反応を５分間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、次いで０℃に冷却し、イソプロパノール(２２mL)を、温度を２０℃以下に維持しながら注意深く滴下した。２Ｍ 水酸化ナトリウム(３５mL)を、温度を２０℃以下に維持しながら注意深く滴下した。混合物を室温で３０分間撹拌し、セライトの層を通して濾過し、ＴＨＦ(×３)で洗浄した。濾液を蒸発乾固した。残留物を物質の充填に酢酸エチルを使用し、溶離剤として１０％トリエチルアミンの酢酸エチル溶液、続いて１０％トリエチルアミンの４５％エタノール：４５％酢酸エチル溶液を使用するシリカカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の物質(４.６６ｇ)を得た。
¹H NMR δ(CDCl₃) 7.36 (dd, 1H), 7.25-7.13 (m, 3H), 2.98 (dt, 2H), 2.91-2.87 (m, 2H)
【０１５０】
ｃ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート
【化２８】

撹拌している２−(２−クロロフェニル)エタナミン(２５.５７ｇ)およびトリエチルアミン(２２.８７mL)の乾燥ＴＨＦ(３００mL)溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート(３５.８５ｇ)の乾燥ＴＨＦ(５０mL)溶液を、１０分間にわたり、環境温度で、窒素雰囲気下に滴下した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空で除去して、所望の物質を黄色油状物として得た(４２.０ｇ)。
¹H NMR δ(CDCl₃) 7.35 (d, 1H), 7.25-7.14 (m, 3H), 4.57 (s, 1H), 3.43-3.35 (m, 2H), 2.95 (t, 2H), 1.43 (d, 9H)
【０１５１】
ｄ) ｔｅｒｔ−ブチルアリル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート
【化２９】

エーテル(×３)で洗浄してある水素化ナトリウム(鉱油中６０％)(７.２３ｇ)の乾燥ＤＭＦ(２００mL)懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート(４２.０ｇ)の乾燥ＤＭＦ(５０mL)溶液を、１５分間にわたり、３５℃で、窒素雰囲気下に添加した。添加が完了したら、混合物を５０℃で９０分間撹拌した。混合物を室温に冷却し、アリルブロマイド(１５.６３mL)を、外的冷却を使用して温度を２５℃に維持しながらゆっくり添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した(×３)。有機物を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残留物を１％酢酸エチルのイソヘキサン溶液で充填し、溶離剤としてイソヘキサンの酢酸エチル溶液(０％、１％、２％、％５)を使用するシリカカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の物質(２７.０ｇ)を得た。いくつかの混合フラクションが存在したため、それらを合わせ、上記の通りシリカカラムクロマトグラフィーで再精製して、さらに４ｇの所望の物質を得た。両方の生成物を合わせて、合計３１.０ｇ得た。
¹H NMR δ(CDCl₃) 7.36-7.31 (m, 1H), 7.21-7.12 (m, 3H), 5.83-5.68 (m, 1H), 5.17-5.05 (m, 2H), 3.86-3.66 (m, 2H), 3.41 (t, 2H), 3.03-2.90 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)
HPLC: 95.90%@ 220nm [M+H-Boc]+=196.1 (Calc=295.1339)(multimode+)
【０１５２】
ｅ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化３０】

ｔｅｒｔ−ブチルアリル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート(３１.０ｇ)を２−メルカプトエタノール(７.３７mL)、およびＡＩＢＮ(１.１５ｇ)と混合し、６５℃で４５分間撹拌した。混合物を冷却し、さらにメルカプトエタノール(１mL)およびＡＩＢＮ(２００mg)を添加した。混合物６５℃でさらに３０分間加熱した。物質を、物質を２０％酢酸エチルのイソヘキサン溶液で充填し、２０％酢酸エチルのイソヘキサンで溶出し、５０％に変えるシリカカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の物質(３１.９４ｇ)を得た。
¹H NMR δ(CDCl₃) 7.38-7.32 (m, 1H), 7.22-7.13 (m, 3H), 3.75-3.68 (m, 2H), 3.41 (t, 2H), 3.32-3.14 (m, 2H), 3.03-2.91 (m, 2H), 2.72 (t, 2H), 2.54-2.36 (m, 2H), 1.85-1.71 (m, 2H), 1.42 (s, 9H)
HPLC: 92.31%@ 220nm [M+H-Boc]+=274.1 (Calc=373.1478)(multimode+)
【０１５３】
ｆ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化３１】

三酸化硫黄：ピリジン複合体(３０.５２ｇ)をＤＭＳＯ(２００mL)に溶解し、室温で、窒素雰囲気下、１５分間撹拌した。ＤＣＭ(１００mL)を添加し、ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート(２３.９ｇ)およびヒューニッヒ塩基(６３.５mL)のＤＣＭ(１６０mL)を一度に添加した(発熱)。得られた混合物を環境温度で１５分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、１Ｎ ＨＣｌ、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去した。物質を、２０％酢酸エチルのイソヘキサン溶液で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の物質(１２.４３ｇ)を得た。
¹H NMR δ(CDCl₃) 9.46 (t, 1H), 7.36-7.32 (m, 1H), 7.21-7.13 (m, 3H), 3.40 (t, 2H), 3.29-3.13 (m, 4H), 3.02-2.90 (m, 2H), 2.45-2.34 (m, 2H), 1.82-1.69 (m, 2H), 1.49-1.36 (m, 9H)
【０１５４】
ｇ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−{[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化３２】

ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート(１１.３２ｇ)をメタノール(２００mL)と酢酸(１.７４ml)の混合物に溶解した。７−[(１Ｒ)−２−アミノ−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンヒドロクロライド(８.０ｇ)を溶液に添加し、混合物を室温で、窒素雰囲気下、１時間撹拌した。ナトリウムシアノボロハイドライド(１.９２ｇ)を添加し、混合物をさらに２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物を水で希釈し、０.８８０水性アンモニアで塩基性化し、酢酸エチルで抽出した(×３)(抽出中セライトを通して濾過した)。有機物を合わせ、塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色残留物(１５.５ｇ)を得た。物質を、溶離剤としてＤＣＭとＭｅＯＨ(２％、５％、１０％、２０％および３０％、全て１％０.８８０水性ＮＨ_３含有)を使用するシリカカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の物質(６.６７ｇ)を得た(３８％収率)。
¹H NMR δ(DMSO) 7.43-7.38 (m, 1H), 7.30-7.21 (m, 3H), 6.86 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 4.56 (dd, 1H), 3.23-3.10 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.71-2.48 (m, 8H), 2.46-2.39 (m, 2H), 1.72-1.62 (m, 2H), 1.40-1.22 (m, 9H)
HPLC: 97.46%@ 220nm [M+H]+=582.1 (Calc=582.1863)(multimode+)
【０１５５】
ｈ) ７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンジヒドロブロマイド
【化３３】

撹拌している工程ｇ)(５.９３ｇ)からのＢｏｃ化合物のＤＣＭ(２０mL)懸濁液に、トリフルオロ酢酸(２０mL)を０℃で添加し、得られた混合物を窒素下、３０分間撹拌した。混合物をトルエンで希釈し、溶媒を除去し、トルエンと共沸蒸留した(×２)。残留物をアセトニトリルに溶解し、４８％水性ＨＢｒで酸性化し、真空で濃縮した(乾固しない)。混合物をさらにアセトニトリルで希釈し、沈殿した固体を濾過により回収し、アセトニトリルで洗浄し、真空下乾燥させて、６.３５ｇを得た。３.８％不純物が存在したため(パートｅ)からの異性体)、物質をアセトニトリル：水の１：１混合物に溶解し、分取ＨＰＬＣ(Sunfire ３０×８０mm Ｃ８カラム；１０分間にわたりＮＨ_４ＯＡｃ緩衝液；アセトニトリル５−５０％)で精製した。得られた物質を一夜デシケーター中、１０mbarでＫＯＨおよびＨ_２ＳＯ_４で乾燥させた。得られた二酢酸塩を水に溶解し、０.８８０水性アンモニアで塩基性化した。白色ガム状物が形成され、水性物を傾捨し、ガム状物を真空で乾燥させて、遊離塩基(４.１１ｇ)を得た。これを熱エタノールに溶解し、溶液を濾過し、室温に冷却した。溶液を４８％水性ＨＢｒで酸性化し、結晶化させた。白色固体を濾過により回収し、エタノールで洗浄し、真空で乾燥させて、３.８１ｇのクロップ１を得た。
¹H NMR δ(DMSO) 11.67 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.70 (s, 4H), 7.50-7.30 (m, 4H), 6.94 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.96-4.90 (m, 1H), 3.22-3.02 (m, 10H), 2.86-2.76 (m, 2H), 2.66 (t, 2H), 1.91 (quintet, 2H)
HPLC: 99.63%@ 220nm [M+H]+=482 (calc=482.1339)(MultiMode+)
元素分析：
【表６】

【０１５６】
母液を蒸発乾固し、アセトニトリルで摩砕した。固体を濾過により回収して、７１９mgのクロップ２を得た(合計４.５３ｇ)。
¹H NMR δ(DMSO) 11.67 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.80-8.60 (m, 4H), 7.50-7.29 (m, 4H), 6.94 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.96-4.89 (m, 1H), 3.22-3.00 (m, 10H), 2.85-2.76 (m, 2H), 2.66 (t, 2H), 1.90 (quintet, 2H)
HPLC: 99.20%@ 220nm [M+H]+=482 (calc=482.1339)(MultiMode+)
元素分析：
【表７】

【０１５７】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストの生物学的活性
アドレナリンβ_２仲介ｃＡＭＰ産生
細胞調製
Ｈ２９２細胞を２２５cm^２ フラスコインキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ_２で、１０％(ｖ／ｖ)ＦＢＳ(ウシ胎児血清)および２mM Ｌ−グルタミン含有ＲＰＭＩ培地中増殖させた。
【０１５８】
実験法
付着Ｈ２９２細胞を組織培養flasksから、Accutase^ＴＭ細胞脱離溶液で１５分間処理することにより除去した。Flasksを１５分間、加湿インキュベーターで３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。脱離細胞をＲＰＭＩ培地(１０％(ｖ／ｖ)ＦＢＳおよび２mMのＬ−グルタミン含有)に０.０５×１０^６細胞／mLで再懸濁した。１００μL中の５０００細胞を、組織培養処理９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、細胞を一夜、加湿インキュベーターで３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。培養培地を除去し、細胞を２回１００μLアッセイ緩衝液で洗浄し、５０μLアッセイ緩衝液(１０mMのＨＥＰＥＳ ｐＨ７.４および５mMのグルコース含有ＨＢＳＳ溶液)で置き換えた。細胞を室温で２０分間休ませ、その後２５μLのロリプラム(２.４％(ｖ／ｖ)ジメチルスルホキシド含有アッセイ緩衝液に１.２mMで製造)を添加した。細胞を、ロリプラムと１０分間インキュベートし、その後化合物Ａを添加し、細胞を６０分間、室温でインキュベートした。アッセイ中の最終ロリプラム濃度は３００μMであり、最終媒体濃度は１.６％(ｖ／ｖ)ジメチルスルホキシドであった。上清の除去により反応を停止し、１回１００μLアッセイ緩衝液で線樹脂、５０μL溶解緩衝液で置き換えた。細胞単層を−８０℃で３０分間(または一夜)凍結させた。
【０１５９】
AlphaScreen^ＴＭ ｃＡＭＰ検出
ｃＡＭＰ(環状アデノシン一リン酸)の細胞溶解物中の濃度をAlphaScreen^ＴＭ方法を使用して測定した。凍結細胞プレートを、プレートシェーカーで２０分間融解し、次いで１０μLの細胞溶解物を９６ウェル白色プレートに移した。ビオチニル化ｃＡＭＰとプレインキュベートした、４０μLの混合したAlphaScreen^ＴＭ検出ビーズを各ウェルに添加し、プレートを室温で１０時間、暗所でインキュベートした。AlphaScreen^ＴＭシグナルを、製造社の推奨設定で、EnVision分光光度計(Perkin-Elmer Inc.)を使用して測定した。ｃＡＭＰ濃度を標準ｃＡＭＰ濃度を使用した同じ実験で決定した較正曲線を参照して決定した。化合物Ａの濃度応答曲線を構築し、データをｐＥＣ_５０および内因性活性両方を決定するために４パラメータロジスティック方程式に適合させた。内因性活性を、各実験でフォルモテロールについて決定された最大活性に対する分画として示した。結果を表１に示す。
【０１６０】
選択性アッセイ
アドレナリンα１Ｄ
膜調製
膜を、組み換えヒトα１_Ｄ受容体を発現するヒト胚腎臓２９３(ＨＥＫ２９３)細胞から調製した。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１６１】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。１０μLの[^３Ｈ]−プラゾシン(０.３nM最終濃度)および１０μLの化合物Ａ(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[^３Ｈ]−プラゾシン結合について１０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または１０μLのＢＭＹ７３７８(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して１００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１６２】
総特異的結合(Ｂ_０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ_０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([^３Ｈ]−プラゾシン結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ_５０として示した([^３Ｈ]−プラゾシン結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。結果は下記表３に示す。
【０１６３】
アドレナリンβ１
膜調製
組み換えヒトアドレナリンベータ１受容体を含む膜をEuroscreenから得た。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１６４】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。１０μLの[^１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール(０.０３６nM最終濃度)および１０μLの化合物Ａ(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[^１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合について１０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または１０μLのプロプラノロール(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して１００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１６５】
総特異的結合(Ｂ_０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ_０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([^１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ_５０として示した([^１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。結果を下記表１に示す。
【０１６６】
ドーパミンＤ２
膜調製
組み換えヒトドーパミンサブタイプＤ２ｓ受容体を含む膜を、Perkin Elmerから得た。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１６７】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。３０μLの[^３Ｈ]−スピペロン(０.１６nM最終濃度)および３０μLの化合物Ａ(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[^３Ｈ]−スピペロン結合について３０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または３０μLのハロペリドール(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して３００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１６８】
総特異的結合(Ｂ_０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ_０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([^３Ｈ]−スピペロン結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ_５０として示した([^３Ｈ]−スピペロン結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。結果を表３に示す。
【０１６９】
【表８】

【０１７０】
インビトロ組合せモデル
メタコリンで予め収縮させたモルモットからの単離気管環に対する化合物活性の評価
次のプロトコルを使用して、β２−アゴニストと組み合わせた本発明のムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの効果を評価し得る。
【０１７１】
２−アドレナリン受容体アゴニストおよび／またはムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの添加は、ムスカリンアゴニストであるメタコリンで予め収縮させた単離モルモット気管輪を弛緩させる。雄アルビノDunkin Hartleyモルモット(３００−３５０ｇ)を頸椎脱臼により殺し、気管を摘出する。付着結合組織を除去し、気管を輪断片に切断する(２−３mm幅)。これらを組成(mM)：ＮａＣｌ １１７.５６、ＫＣｌ ５.３６、ＮａＨ_２ＰＯ_４ １.１５、ＭｇＳＯ_４ １.１８、グルコース １１.１０、ＮａＨＣＯ_３ ２５.００およびＣａＣｌ_２ ２.５５の修飾Krebs溶液を含む１０mL臓器浴に懸濁する。これを３７℃に維持し、連続的にＯ_２中５％ＣＯ_２を通気し、インドメタシン(２.８μM)、コルチコステロン(１０μM)、アスコルベート(１mM)、ＣＧＰ２０７１２Ａ(１μM)およびフェントラミン(３μM)をKrebs溶液に添加する：インドメタシンは、シクロオキシゲナーゼ生成物合成による平滑筋緊張を阻止するため、コルチコステロンは取り込み２工程を阻止するため、アスコルベートはカテコラミン酸化を阻止するため、そしてＣＧＰ２０７１２Ａおよびフェントラミンは、それぞれβ１−およびα−アドレナリン受容体活性の何らかの複雑な作用を避けるため。
【０１７２】
気管輪を２個のステンレススチールフックの間に吊り下げ、そのフックの一方は等尺性力変換器に結合され、他方は臓器浴の固定支持体に結合している。等尺性力の変化を記録する。アセチル−β−メチルコリンクロライド(メタコリン)、インドメタシン、コルチコステロン−２１−アセテート、フェントラミンヒドロクロライド、アスコルビン酸、ＣＧＰ２０７１２Ａ メタンスルフェートをSigma Chemical Companyから得る。インドメタシンを１０％ｗ／ｖ Ｎａ_２ＣＯ_３に溶解し、コルチコステロン２１−アセテートをエタノールに溶解し、他の化合物はＤＭＳＯに溶解する。ムスカリンアンタゴニストおよびフォルモテロールは、組織への添加前にKrebsで希釈し、浴中のＤＭＳＯの濃度は＜０.１％であった。
【０１７３】
各実験の開始時、１.０ｇ.ｗｔ.の力を組織に負荷し、これを定常になるまで３０分間平衡器官にわたり元に戻す。組織を１μMのムスカリンアゴニストであるメタコリンに暴露して、組織生存能を評価する。組織を浸かっているKrebs溶液を３回変えることにより洗浄する。３０分間後、組織を再び１μM メタコリンで前収縮させる。収縮がプラトーに達したら、１nM フォルモテロール、１０nMのムスカリンアンタゴニストまたはそれらの組合せを浸かっている媒体に添加し、６０分間静置する。
【０１７４】
データをADInstruments Chart5 for windows softwareを使用して回収し、生じた緊張をメタコリン添加前およびその応答がプラトーに達した後に測定する。ムスカリンアンタゴニストおよび／またはフォルモテロールに対する応答を、添加後１０分間隔で測定する。全ての応答は、メタコリン誘発収縮の阻害パーセントとして示す。
【０１７５】
インビボ組合せモデル
麻酔したモルモットの肺機能の評価
以下のプロトコルを使用して、β２−アゴニストと組み合わせた本発明のムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの効果を評価し得る。
【０１７６】
雄Dunkin-Hartleyモルモット(３００−６００ｇ)を秤量し、媒体(０.０５Ｍ ホスフェート、０.１％Ｔｗｅｅｎ ８０、０.６％食塩水、ｐＨ６)または化合物を、回復可能なガス麻酔(酸素中５％ハロタン)下に気管内経路により投与する。動物に化合物または媒体を、メタコリン投与２時間前に投与する。
モルモットを、最初の気管支収縮剤投与約３０分前にペントバルビトン(１mL／kgの６０mg／mL溶液ｉ.ｐ.)で麻酔する。気管にカニューレを挿入し、動物を一定体積呼吸器ポンプ(Harvard Rodent Ventilator model 683)で、６０呼吸／分の速度および一回換気量５mL／kgで換気する。頸静脈にメタコリンまたは維持麻酔(０.１mLのベントバルビトン溶液、６０mg／mL、必要に応じて)投与用のカニューレを挿入する。
【０１７７】
動物を気道抵抗性を測定するためにFlexivent System(SCIREQ, Montreal, Canada)に移す。動物を、６０呼吸／分の速度および一回換気量５mL／kgで換気する(擬似正弦曲線換気パターン)。２−３cm Ｈ_２Ｏの呼吸終末陽圧を提供する。呼吸器抵抗性をFlexivent“snapshot”facility (１秒間、１Hz周波数)を使用して測定する。安定なベースライン抵抗性値が得られたら、動物に、メタコリンを、頸部カテーテルから４分感覚で用量を増加させながら(０.５、１、２、３および５μg／kg、ｉ.ｖ)投与する。気管支収縮剤の各投与後、ピーク抵抗性値を記録する。モルモットを、肺機能測定終了後、静脈内への約１.０mL ペントバルビトンナトリウム(Euthatal)により殺す。化合物により生じる気管支保護パーセンテージを、気管支収縮剤の各投与量で、下記の通り計算する：
【数１】

式中、％変化Ｒ_ｖｅｈは、媒体処置群での気道抵抗性の変化の最大パーセンテージの平均である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるムスカリンアンタゴニストである第一活性成分と、β_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を組み合わせて含む、医薬品。
【請求項２】
第一活性成分が、臭化物塩であるムスカリンアンタゴニストである、請求項１に記載の医薬品。
【請求項３】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストがフォルモテロールである、請求項１または２に記載の医薬品。
【請求項４】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストが：
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド、
Ｎ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(３−クロロフェニル)エトキシ]プロパンアミド、および
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン、
またはその薬学的に許容される塩
から選択される、請求項１または２に記載の医薬品。
【請求項５】
β_２−アドレナリン受容体アゴニストがＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の医薬品。
【請求項６】
ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストがＮ−[２−(ジエチルアミノ)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬品。
【請求項７】
ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そしてβ_２−アドレナリン受容体アゴニストがＮ−シクロヘキシル−Ｎ^３−[２−(３−フルオロフェニル)エチル]−Ｎ−(２−{[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)−β−アラニンアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬品。
【請求項８】
呼吸器疾患の処置用医薬の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬品の使用。
【請求項９】
呼吸器疾患が慢性閉塞性肺疾患である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
呼吸器疾患の処置方法であって：
(ａ)一定(治療有効)量の本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分；および
(ｂ)一定(治療有効)量のβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分；
を、それらを必要とする患者に同時に、連続的にまたは別々に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
請求項１または２に定義するムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分の製剤と、β_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分、および場合によりそれを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与に関する指示を含む、キット。
【請求項１２】
請求項１または２に定義するムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分およびβ_２−アドレナリン受容体アゴニストである第二活性成分を、混合して含む、医薬組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【公表番号】特表２０１１−５３０５８７（Ｐ２０１１−５３０５８７Ａ）
【公表日】平成２３年１２月２２日（２０１１．１２．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２２９３５（Ｐ２０１１−５２２９３５）
【出願日】平成２１年８月１１日（２００９．８．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＳＥ２００９／０５０９２５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１９０９８
【国際公開日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＷＩＮＤＯＷＳ
【出願人】（３９１００８９５１）アストラゼネカ・アクチエボラーグ (625)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ　ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
【出願人】（５０７２５９７３０）パルメイゲン・セラピューティクス・（シナジー）・リミテッド (23)
【氏名又は名称原語表記】ＰＵＬＭＡＧＥＮ　ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ　（ＳＹＮＥＲＧＹ）　ＬＩＭＩＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】