乳清タンパク質ミセルの化粧品への使用
本発明は、タンパク質ミセル、例えば、乳清タンパク質ミセル、カゼインミセル、の局所適用に関する。本発明はさらに、ａ．乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を生成するステップと、ｂ．前記ミセル又はその凝集体を組成物中に組み入れるステップと、を含む方法によって得られる化粧品組成物に関する。本発明はまた、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、化粧料としての使用に関する。本発明はまた、タンパク質ミセル、特に乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、研磨媒体としての使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、特に化粧品組成物中への乳清タンパク質ミセル（ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｃｅｌｌｅ）の研磨剤としての使用、及び前記組成物の取得方法に関する。
【背景】
【０００２】
研磨剤を含有する不均一な組成物、例えば、粒状のペースト、粒を含む液体は、ヘルスケア及び化粧品の分野で一般的に使用されている。
【０００３】
特許出願の国際公開第０３０００２１５号パンフレットは、例えば、歯表面上に生成するタンパクフィルムを除去するために無機粉末を研磨剤として含有する歯磨き粉組成物を開示している。
【０００４】
ＵＳ６０３６９６６は、無機粉末、金属石鹸、又は有機粉末（微結晶セルロース等）から選択される、わずかに研磨性を有する粉状成分を含有する、皮膚のきめを整えるための局所用組成物を扱っている。
【０００５】
粒状生成物及びその使用の分野では探究されていない領域がまだ多い。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、当業界で使用されている研磨媒体に代わるものを提供することである。
【発明の概要】
【０００７】
それに応じて、この目的は、独立請求項の特徴によって実現される。従属請求項は、本発明の更なる中心的な考えを展開する。
【０００８】
この目的を実現するために、一般に、タンパク質の使用、例えば乳清タンパク質ミセル又は乳清タンパク質ミセルを含有する凝集体の、研磨媒体としての使用が提案される。特に、本発明は、乳清タンパク質ミセルの局所的な使用に関する。
【０００９】
本発明の別の態様では、乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物が提供される。
【００１０】
本発明の第３の態様は、化粧品組成物の製造方法に関する。
【００１１】
さらに別の態様は、そのような方法によって得られる製品に関する。
【００１２】
以下、添付の図面に示すいくつかの好ましい実施形態を参照して本発明をさらに説明する。
【発明の詳細な説明】
【００１３】
本発明によれば、タンパク質、例えば、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体、を研磨媒体として使用することができる。
【００１４】
本発明に関して使用することのできる乳清タンパク質ミセルを図７に表すが、乳清タンパク質は、タンパク質の親水性部分が凝集塊の外側の部分に配向され、タンパク質の疎水性部分がミセルの内側の「コア」に配向されるようにして並んでいる。このエネルギー的に好都合な配置によって、親水性環境においてこれらの構造体に良好な安定性が提供される。
【００１５】
特定のミセル構造は、図、特に図３、９、１０、及び１３から知ることができるが、本発明で使用するミセルは、本質的に変性乳清タンパク質の球状凝集塊からなる。本発明のミセルは、特にその規則的な球状の形を特徴とする。
【００１６】
乳清タンパク質ミセルは、まず未変性乳清タンパク質水溶液のｐＨ及び／又はイオン強度を調整し、次いで前記溶液を熱に曝す方法によって生成することができる。こうした方法は、本明細書でさらにより詳細に記載する。
【００１７】
そうして生成される乳清タンパク質ミセルは、二重の性質（親水性と疎水性）を有する。実際、変性乳清タンパク質の配置がミセル構造になると、疎水性の相、例えば脂肪液滴若しくは空気と、親水性の相との相互作用が可能になると思われる。したがって、乳清タンパク質ミセルは、完全な乳化特性及び起泡特性を有する。
【００１８】
さらに、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、生成されたミセルの８０％より多くが１ミクロンより小さいサイズとなるような、非常にシャープなサイズ分布（図１４を参照のこと）を有するようにして生成される。本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、サイズが１００〜９００ｎｍ、より好ましくは１００〜７７０ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍとなることが好ましい。
【００１９】
ミセルの平均直径は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて測定することができる。そうするためには、液体ミセルサンプルを寒天ゲルチューブに封入する。固定は、２．５％のグルタルアルデヒドを０．１ＭのｐＨ７．４カコジル酸緩衝液に溶かした溶液に浸漬し、同じ緩衝液中の２％の四酸化オスミウムで固定後洗浄することによって実現する（両方の溶液が０．０４％のルテニウムレッドを含有する）。段階的な一連のエタノール（７０、８０、９０、９６、１００％エタノール）で脱水した後、試料をＳｐｕｒｒ樹脂に包埋する（Ｓｐｕｒｒ／エタノール １：１、２：１、１００％）。樹脂を重合させた後（７０℃、４８時間）、Ｌｅｉｃａ ｕｌｔｒａｃｕｔ ＵＣＴウルトラミクロトームを用い、やや薄い及びごく薄い切片を切断する。次いで、ごく薄い切片を酢酸ウラニル及びクエン酸鉛水溶液で染色し、透過型電子顕微鏡（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２、８０ｋＶ）によって調べる。
【００２０】
特定の理論に拘泥するものではないが、ミセル生成の際、ミセルは、ミセルの全体としての静電荷が、追加のどんなタンパク質分子も寄せつけないために、サイズがそれ以上成長できないような「最大の」サイズに到達すると考えられる。このために、シャープなサイズ分布が観察されると言える（図１４を参照されたい）。
【００２１】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、任意の市販の乳清タンパク分離物又は濃縮物、すなわち、当業界で既知の任意の乳清タンパク質調製方法によって得られる乳清タンパク質、それから調製される乳清タンパク質画分、又はβラクトグロブリン（ＢＬＧ）、αラクトアルブミン、血清アルブミン等のタンパク質から製造することができる。特に、チーズ製造の副産物として得られる甘味乳清（ｓｗｅｅｔ ｗｈｅｙ）、酸カゼイン製造の副産物として得られる酸味乳清（ａｃｉｄ ｗｈｅｙ）、乳汁の精密濾過によって得られる未変性乳清、又はレンネットカゼイン製造の副産物として得られるレンネット乳清はすべて、乳清タンパク質源として使用することができる。乳清タンパク質は、単一供給源からのものであっても、任意の供給源の混合物からのものであってもよい。乳清タンパク質は、ミセル生成前にいかなる加水分解ステップも経ないことが好ましい。すなわち、乳清タンパク質は、ミセル化前にいかなる酵素的処理にもかけない。本発明によれば、ミセル生成法において、その加水分解物でなく乳清タンパク質を使用することが重要である。
【００２２】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの生成に使用する乳清分離物は、ウシ由来のものに限定されず、あらゆる哺乳類動物種からの乳清分離物（例えば、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダからのもの）がこれに含まれる。また、調製乳清は、ミネラル強化したもの、脱ミネラル化したもの、又はわずかにミネラル強化したものであってもよい。「わずかにミネラル強化した」とは、透析又はダイアフィルトレーションされ得る遊離ミネラルを除去した後の任意の調製乳清を意味するが、例えば乳清タンパク濃縮物又は分離物調製後の自然なミネラル強化によって、それに伴うミネラルを維持するものである。これらの「わずかにミネラル強化した」調製乳清では、特定のミネラル強化はなされていない。
【００２３】
乳清タンパク質ミセルの製造では、乳清タンパク質は、水溶液中に、溶液の全重量の０．１〜１２重量％、好ましくは０．１〜８重量％、より好ましくは０．２〜７重量％、さらにより好ましくは０．５〜６重量％、最も好ましくは１〜４重量％の量で存在し得る。
【００２４】
ミセル化ステップの前に存在する調製乳清タンパク質の水溶液は、追加の化合物、例えば、各乳清製造過程の副産物、他のタンパク質、ガム、カラギーナン又は炭水化物、を含んでもよい。溶液は、他の食品成分、例えば、脂肪、炭水化物、植物抽出物、を含有してもよい。このような追加の化合物の量は一般に、溶液の全重量の５０重量％を超えず、好ましくは２０％を超えず、より好ましくは１０重量％を超えない。
【００２５】
乳清タンパク質、その画分及び／又は主要なタンパク質は、精製された形で使用してもよいし、又は同様に粗生成物の形で使用してもよい。乳清タンパク質ミセルを調製するための乳清タンパク質中の二価カチオン含有量は２．５％未満、好ましくは０．２％未満であり得る。乳清タンパク質は、完全に脱ミネラル化されていることが最も好ましい。
【００２６】
ｐＨ値及びイオン強度は、乳清タンパク質ミセルの製造において重要な要素である。例えば、Ｃａ、Ｋ、Ｎａ、Ｍｇ等の遊離のカチオンを事実上欠くか激減した、広範囲に透析されたサンプルでは、５．４より低いｐＨで１０秒から２時間熱処理を行うと、カード（ｃｕｒｄ）が得られ、６．８を超えるｐＨでは可溶性の乳清タンパク質が生じる（図１を参照のこと）。したがって、このどちらかと言えば狭いｐＨ領域においてのみ、直径が１μｍ未満の乳清タンパク質ミセルが得られる。このようなミセルは、全体として負の電荷を有することになる。等電ｐＨより低いｐＨ、すなわち３．５〜５．０、より好ましくは３．８〜４．５でも、同じミセル形態を対称的に得ることができ、正の電荷をもつミセルがもたらされる（図６を参照のこと）。
【００２７】
したがって、正の電荷をもつミセルを得るには、乳清タンパク質のミセル化を、塩を含まない溶液中、タンパク質供給源のミネラル含有量に応じて、３．８〜４．５に調整されたｐＨ値で行うことができる。
【００２８】
或いは、粉末乳清タンパク質中の二価カチオン含有量が０．２％〜２．５％であるものでは、負の電荷をもつミセルを得るために、ｐＨを６．３〜９．０の範囲に調整することができる。
【００２９】
より詳細には、二価カチオン含有量が少ないもの（例えば最初の粉末乳清タンパク質の０．２％未満）では、負の電荷をもつミセルを得るために、ｐＨを５．６〜６．４の範囲に、又は５．８〜６．０の範囲にまで調整する。ｐＨは、乳清タンパク（濃縮物又は分離物）供給源のミネラル含有量に応じて、８．４まで上げることができる。特に、多量の遊離ミネラル存在下で負の電荷をもつミセルを得るには、ｐＨは７．５〜８．４、好ましくは７．６〜８．０であり、それほど多くない量の遊離ミネラル存在下で負の電荷をもつミセルを得るには、ｐＨは６．４〜７．４、好ましくは６．６〜７．２である。一般に、最初の粉末乳清タンパク質のカルシウム及び／又はマグネシウム含有量が多いほど、ミセル化ｐＨは高くなる。
【００３０】
乳清タンパク質ミセルの生成条件は、既知の脱ミネラル化技術（透析、限外濾過、逆浸透、イオン交換クロマトグラフィー・・・）のいずれかによって、タンパク質濃度が、甘味乳清、乳汁精密濾過透過液、又は酸味乳清のもの（タンパク質含有量０．９％）から、タンパク質含有量が３０％の濃縮物のものまでの範囲に及ぶ任意の液体未変性乳清タンパク質供給源を脱ミネラル化することにより標準化することができる。透析は、水（蒸留水、脱イオン水、又は軟水）に対して行うことができるが、水では、乳清タンパク質に弱く結合したイオンの除去しか可能にならないので、４．０より低いｐＨの（有機又は無機の）酸に対して透析して、乳清タンパク質のイオン性組成物をより良好に制御することが通例である。そのようにすることによって、乳清タンパク質ミセル生成のｐＨは、ｐＨ７．０より低くなり、通常は５．８〜６．６となる。
【００３１】
乳清タンパク質水溶液を加熱する前には、一般に、酸（例えば、塩酸、リン酸、酢酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸）を加えてｐＨを調整する。ミネラル含有量が多いときは一般に、アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム）の溶液を加えてｐＨを調整する。
【００３２】
或いは、ｐＨ調整ステップが所望されないならば、ｐＨを一定に保ちながら、調製乳清タンパク質のイオン強度を調節することが可能である。その場合、イオン強度は、有機又は無機のイオンによって、一定のｐＨ値７でミセル化が可能になるようにして調整することができる。図４は、７０〜８０ｍＭのアルギニンＨＣｌを加えてイオン強度を様々に変更する間、７．０という一定のｐＨ値で生成するミセルを例示するものである。
【００３３】
乳清タンパク質の熱処理の間のｐＨ値の実質的な変化が回避されるように、乳清タンパク質の水溶液に緩衝液をさらに加えてもよい。原則として、緩衝液は、任意の緩衝液系、すなわち、例えば、酢酸及びその塩（例えば、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム）、リン酸及びその塩（例えば、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４）、又はクエン酸及びその塩、から選択することができる。
【００３４】
加熱前に水溶液のｐＨ及び／又はイオン強度を調整すると、制御式の方法となり、サイズが１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７００ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍであるミセルが得られる。本明細書に記載の方法を実施したとき、１００〜７００ｎｍの寸法を有するミセルの分布が８０％より高いことが好ましい（図１４を参照のこと）。
【００３５】
本発明によれば、均整のとれた形状のミセルを得るには、乳清タンパク質が、ミセル形成前にいかなる加水分解ステップも経ないこともまた重要である。
【００３６】
ｐＨ及び／又はイオン強度を調整した後、出発乳清タンパク質水溶液を熱処理にかける。この点で、乳清タンパク質ミセルを得るには、約７０℃〜９５℃未満、好ましくは約８２〜約８９℃、より好ましくは約８４〜約８７℃の範囲、最も好ましくは約８５℃の温度であることが重要である。工業的規模では、温度を好ましくは９５℃未満、より好ましくは８０℃〜９０℃、最も好ましくは約８５℃とすることが重要なこともわかっている。
【００３７】
所望の温度に到達したならば、溶液を最低１０秒間且つ最長２時間この温度に保つ。乳清タンパク質水溶液を所望の温度範囲に保つ時間は、１２〜２５分、より好ましくは１２〜２０分の範囲をとることが好ましく、又は約１５分間であることが最も好ましい。
【００３８】
熱処理は、電子レンジ又はマイクロ波による加熱が可能な任意の同様の機器でも実現することができ、１５００Ｗの装置で沸点（高度８３３ｍで９８℃）まで加熱される４重量％のタンパク質溶液では、時間／量の比は１０秒／１０ｍＬである。保持管により延長可能なガラス管の周囲に８個以上のマグネトロンを付加することによって持続的なプロセスを用いて、温置時間を増やしてもよい。
【００３９】
図２に示すように、濁度測定はミセル形成の指標である。５００ｎｍでの吸光度によって測定される濁度は、一般に１％のタンパク質溶液で少なくとも３吸光度単位であるが、ミセル化の収率が８０％を上回るときは１６吸光度単位に達する場合もある（図２を参照のこと）。
【００４０】
物理化学的な見地からミセル形成の効果をさらに例示するために、Ｂｉｐｒｏ（登録商標）の１重量％分散液を、ＭｉｌｌｉＱ水中、ｐＨ６．０及び６．８、８５℃で１５分間加熱した。熱処理後に得られる凝集体の水力学的な直径を動的光散乱法によって測定した。凝集体の見かけ上の分子量は、いわゆるＤｅｂｙｅプロットを使用する静的光散乱法によって決定した。表面の疎水性は、システインを標準アミノ酸として使用するＤＴＮＢ法によって、疎水性のＡＮＳプローブ及び利用可能な遊離チオール基を用いて探索した。最後に、凝集体の形態をネガティブ染色によってＴＥＭで調査した。結果を表１に示す。
【００４１】
表１から、ｐＨ６．０で生成した乳清タンパク質ミセルでは、タンパク質の特有のＡＮＳ表面疎水性が、ｐＨ６．８である以外は同じ条件下で加熱した非ミセル化乳清タンパク質と比べて２分の１に低下したことが明白である。ミセルが生成したことは、非ミセル化タンパク質の０．６４×１０６ｇ／ｍｏｌと比べて、ミセル内で物質が非常に凝縮した状態（少量の水）であることを示す、２７×１０６ｇ／ｍｏｌという非常に高い分子量からもわかる。十分に興味深いことに、ミセルのζ電位は、非ミセル化タンパク質がミセルより塩基性のｐＨで生成していたとしても、非ミセル化タンパク質よりもマイナスである。これは、ミセルのより親水性の表面が溶媒に曝されるためである。最後に、ミセルのチオール反応性は、熱処理のｐＨが異なるので、非ミセル化タンパク質よりはるかに低いことを留意されたい。
【００４２】
【表１】
【００４３】
最初のタンパク質濃度がｐＨ調整及び熱処理の前に増大すると、未変性乳清タンパク質のミセルへの転換収率は低下する。例えば、乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット６７３、Ｌａｃｔａｌｉｓ社）から出発したとき、乳清タンパク質ミセルの生成収率は、８５％（４％のタンパク質から出発したとき）から５０％（１２％のタンパク質から出発したとき）に落ちる。乳清タンパク質ミセルの生成を最大（最初のタンパク質含有量の＞８５％）にするには、タンパク質濃度が１２％未満、好ましくは４％未満である乳清タンパク質水溶液から出発する方がよい。目的の最終的な用途に応じて、タンパク質濃度を調整してから熱処理すると、最適な乳清タンパク質ミセル収率を管理することができる。
【００４４】
所望の用途に応じて、濃縮前のミセルの収率は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％であり、残りの可溶性凝集体又は可溶性タンパク質含有量は、２０％未満であることが好ましい。平均ミセルサイズは、０．２００未満の多分散指数を特徴とする。乳清タンパク質ミセルは、ｐＨ４．５付近で凝集体を形成することができたが、しかし、４℃で少なくとも１２時間経過後には、巨視的な相分離の徴候はないことが観察された。
【００４５】
乳清タンパク質ミセルの純度は、生成後の残りの可溶性タンパク質量を測定することによって得られる。ミセルは、２０℃、２６９００ｇで１５分間の遠心分離によって除去する。上清を用いて、石英キュベット（光経路長１ｃｍ）中、２８０ｎｍでタンパク質量を決定する。値は、熱処理前の最初の値の百分率として示される。
【００４６】
ミセルの割合＝（最初のタンパク質量−可溶性タンパク質量）／最初のタンパク質量
【００４７】
本明細書に記載の方法を使用することによって、乳清タンパク質ミセルは、従来の方法とは異なり、生成の際、粒径の縮小をもたらすいかなる機械的ストレスも受けない。この方法では、剪断なしで、熱処理の際に乳清タンパク質の自発的なミセル化が誘発される。
【００４８】
ミセルは、懸濁液又は分散液として得ることができ、１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７７０ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍのサイズを有するものであり得る。
【００４９】
本明細書に記載の方法によって得られるミセルは、本発明の研磨媒体として使用可能な、非常に安定な不溶性の構造である。
【００５０】
本発明において、前記ミセルは、そのまま使用してもよいし、或いはその研磨特性を保持したまま、濃縮、スプレー乾燥等のさらなる処理を経てもよい。
【００５１】
実際には、熱処理後に得られるミセル分散液を、例えば、蒸発、遠心分離、沈降、精密濾過及び／又は限外濾過によってさらに濃縮することができる。
【００５２】
乳清タンパク質ミセルを濃厚にしてその濃縮物を生成すると、タンパク質が強化された生成物を、以前には成し遂げられなかった濃度で得ることができるという利点がもたらされる。すなわち、ミセル懸濁液は、４％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高いタンパク質含有量に濃縮することができる。
【００５３】
蒸発は、温度が５０℃〜８５℃の真空中でミセル分散液をエバポレーターに送ることによって実施することができる。得られる生成物は一般に、図１８に示すようにゲル又はクリームの態様を有する。このようなミセル生成物は、単独で研磨媒体若しくは化粧料として使用してもよいし、又は本発明の化粧品組成物中で使用してもよい。さらに、蒸発によって得られる乳清タンパク質ミセルの２０％タンパク濃縮物では、乳酸を用いる酸性化により、のびのよいテクスチャーを付与することができる。
【００５４】
遠心分離は、乳清タンパク質ミセル分散液をｐＨ５未満、好ましくは４．５未満に酸性化した後、大きい加速度（２０００ｇより大）又は小さい加速度（５００ｇ未満）で実施することができる。
【００５５】
酸性化によって、乳清タンパク質ミセル分散液を自発的に沈降させてもよい。ｐＨが４．５となり、沈降時間が１２時間より長いことが好ましい。
【００５６】
或いは、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの濃縮は、ミセル分散液の精密濾過によって実現することができる。この濃縮技術は、溶媒の除去によって乳清タンパク質ミセルを濃縮することができるだけでなく、非ミセル化タンパク質（例えば、未変性タンパク質、可溶性凝集体）を除去することもできる。したがって、最終的な生成物は、本質的にミセルのみからなる（透過型電子顕微鏡によって確認される。図９及び１０を参照されたい）。この場合では、膜を通る透過液の最初の流速がその最初の値の２０％に低下した後、達成可能な濃縮率が実現される。これによって、８０％より高い濃度でミセルが得られる。
【００５７】
乳清タンパク質ミセルの別の処理は、本明細書に記載の方法を使用して得られるミセル分散液で実施することができる。
【００５８】
例えば、乳清タンパク質ミセルの機能性をモジュレートするために、乳清タンパク質ミセルを、乳化剤（例えば、リン脂質）又は他のコーティング剤、例えば、タンパク質、ペプチド、タンパク加水分解物又はガム（例えば、アカシアガム）、でコーティングすることができる。タンパク質をコーティング剤として使用する場合、等電点が乳清タンパク質より有意に高いか低いいかなるタンパク質からも選択することができる。それらのタンパク質は、例えば、プロタミン、ラクトフェリン、及びいくつかのイネタンパク質である。タンパク加水分解物をコーティング剤として使用するとき、タンパク質（例えば、プロタミン、ラクトフェリン、イネタンパク質、カゼインタンパク質、乳清タンパク質、コムギタンパク質、ダイズタンパク質、又はこれらの混合物）の加水分解物であることが好ましい。コーティングは、硫酸化オレイン酸ブチル、モノ及びジグリセリンのジアセチル酒石酸エステル、モノグリセリンのクエン酸エステル、ステアロイルラクチラート、及びこれらの混合物、から選択される乳化剤であることが好ましい。図１７は、硫酸化オレイン酸ブチルでのコーティングの模式的な表現である。さらに、本明細書でさらに記載する同時噴霧乾燥（ｃｏ−ｓｐｒａｙｄｒｙｉｎｇ）でも、乳清タンパク質ミセルをコーティングすることができる。
【００５９】
別の処理、例えば、乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥、ローラー乾燥等）も、乳清タンパク質ミセルに施すことができる。すなわち、濃縮乳清タンパク質は、別の成分を加え、又は加えずに噴霧乾燥することができ、広範囲なプロセス、例えば、消耗品製造、化粧品用途、で使用される送達系（ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）又は構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）として使用することができる。
【００６０】
図８は、噴霧乾燥の間に起こるミセル凝集のために平均粒径サイズが１ミクロンより大きい、いかなる別の成分も加えずに噴霧乾燥して得られた粉末を示す。乳清タンパク質ミセル粉末の典型的な平均体積メジアン径（Ｄ４３）は、４５〜５５ミクロン、好ましくは５１ミクロンである。これら粉末の表面メジアン径（Ｄ３２）は、３〜４ミクロンであることが好ましく、３．８ミクロンであることがより好ましい。
【００６１】
噴霧乾燥後に得られる粉末の含水量は、好ましくは１０％未満、より好ましくは４％未満である。
【００６２】
そのような乳清タンパク質ミセル粉末は、少なくとも９０％の乳清タンパク質を含み、その少なくとも８０％がミセルの形態をとるので、「純粋」であるとみなす。
【００６３】
さらに、「純粋な」乳清タンパク質ミセル粉末は、水、グリセロール、エタノール、油、有機溶媒等の溶媒に対して高い結合能を有する。この粉末の水に対する結合能は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも１００％である。
【００６４】
グリセロール、エタノールガムの溶媒では、結合能は少なくとも５０％である。乳清タンパク質ミセル粉末のこの特性によって、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分等、及びこれらの混合物、からなる群より選択される別の活性薬剤と共にこれを噴霧又は充填することが可能になる。
【００６５】
活性薬剤は、粉末中に０．１〜５０％の量で含まれ得る。したがって、粉末は、これらの機能性成分の担体として働くことができる。
【００６６】
噴霧乾燥前に乳清タンパク質ミセル又はその濃縮物に混合してもよい追加の成分は、可溶性又は非可溶性の塩、ペプチド、タンパク加水分解物、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質（ミネラル、ビタミン、薬物・・・）、乳、乳タンパク質、脱脂粉乳、カゼインミセル、カゼイン塩、植物性タンパク質、アミノ酸、ポリフェノール、及びこれらの任意の混合物を含む。得られる混成乳清タンパク質ミセル粉末は、乳清タンパク質ミセルと追加の成分とを１：１〜１：１０００の重量比で含む。これによって、これらの追加の成分をさらに含む凝集塊が得られるので、本発明に従って、使用する追加の成分に応じて別の機能特性及び健康上の利益を示す研磨媒体として使用することができる。したがって、混成粉末は、例えば生理活性剤用の担体として働き得る。
【００６７】
本発明によって得られる乳清タンパク質ミセル粉末は、中空の球だけでなく潰れた球から主に構成される内部構造を特徴とする（図１９を参照されたい）。中空の球の構造は、噴霧乾燥中に、濃縮ＷＰＭ液滴内に蒸気液滴が生成したということにより容易に説明できる。温度が１００℃より高いために蒸気液滴がＷＰＭ液滴を出たので、中空の球が残った。「骨形」は、液滴からの水の蒸発と液滴内の外圧の組合せによるものである。
【００６８】
丸い中空球の内部構造を、粒子をその直径付近で切断した後ＳＥＭによって調べた（図２０、左）。粒子の壁の厚さは約５μｍであり、非常に滑らかに見えたが、内側の構造は、外観がよりざらざらしていた。拡大率を上げると、このざらつきが実際は、融合して粉末粒子の内側マトリックスを形成している最初のＷＰＭの存在によるものであったことが示された。興味深いことに、噴霧乾燥の間ミセルの球状の形は保たれ、そのうえ粒径分布は均質であった（図２０、右）。
【００６９】
すなわち、顕微鏡ベースでは、乳清タンパク質ミセル粉末は、無傷で個別化された乳清タンパク質ミセルを含んでいる中空又は潰れた球という独特な顆粒形態を特徴とする。
【００７０】
乳清タンパク質ミセル粉末は、非常に高い流動性を特徴とし、これによって使用しやすく移しやすいという利点がもたらされる。これらの粉末の安息角は、好ましくは３５°未満、より好ましくは３０°未満である。このように安息角が小さいために、この粉末を、例えば化粧品用途で流動化剤（ｆｌｏｗｉｎｇ ａｇｅｎｔ）として使用することが可能になる。
【００７１】
これらの粉末は、例えば、研磨媒体として、化粧料として、又は化粧品組成物の製造において、本発明に従って使用することもできる。
【００７２】
粉末粒子、すなわち乳清タンパク質ミセルの凝集体のサイズ、及び乳清タンパク質ミセルそれ自体のサイズは、局所的な用途で使用するとき、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体がほとんど知覚されず、皮膚を刺激せずに研磨剤として働くという利点となる。
【００７３】
その形態（例えば、濃縮物、懸濁液、乾燥粉末）にかかわらず、乳清タンパク質ミセルの重要な特徴は、乳清タンパク質の基礎的なミセル構造が保存されていることである。図１５は、薄片にしておき、それによって個々の乳清タンパク質ミセルが観察可能になっている乳清タンパク質粉末粒子を示す。ミセル構造はさらに、溶媒中で容易に復元することができる。例えば、濃縮乳清タンパク質ミセルから得られた粉末は、室温又は５０℃で容易に水に再分散できることがわかっている。乳清タンパク質ミセルのサイズ及び構造は、最初の濃縮物と比べて完全に保存される。例えば、図１３では、濃縮乳清タンパク質をタンパク質濃度２０％で噴霧乾燥したものが、５０％のタンパク質濃度で、５０℃で脱イオン水に再分散している。ミセルの構造は、ＴＥＭによって厳密に調べてあり、図１０と比べることができる。同様の形のミセルが得られた。ミセルの直径は、動的光散乱法によって３１５ｎｍであることがわかり、多分散指数は０．２であった。図１６にも、凍結乾燥した乳清タンパク質ミセル粉末の分散液を示すが、ミセルは復元されている。
【００７４】
噴霧乾燥又は凍結乾燥した粉末を復元した後、溶液中に乳清タンパク質ミセルと微量の凝集体画分トが観察されたことは、乳清タンパク質ミセルが噴霧乾燥、凍結乾燥等に関して物理的に安定であることを裏付ける。
【００７５】
興味深いことに、濃縮物は、タンパク質含有量が１０％に調整されたならば、図１１に示すように、例えば０．１５Ｍまでの塩化ナトリウム存在下において、８５℃、ｐＨ７．０、１５分間のその後の熱処理に持ちこたえることができる。比較の問題として、未変性乳清タンパク質分散液（Ｐｒｏｌａｃｔａ９０、ロット５００６５８、Ｌａｃｔａｌｉｓ）は、０．１Ｍの塩化ナトリウムの存在下、タンパク質濃度４％でゲルを形成する（図１２を参照されたい）。
【００７６】
ミセル構造の高い安定性は、濃縮ステップの間も保存される。そのために、ミセル構造によって与えられる研磨特性が、本発明の化粧品組成物の製造、貯蔵等の間損なわれないという利点が得られる。
【００７７】
本発明によれば、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、研磨媒体として使用することができる。乳清タンパク質ミセルの凝集体は、噴霧乾燥又は凍結乾燥された粉末の形態をとることができる。この凝集体は、可溶性又は非可溶性の塩、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質（ミネラル、ビタミン、薬物・・・）、及びこれらの任意の混合物、からなる群より選択される追加の成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明によれば、乳清タンパク質ミセル又はその前記凝集体は、化粧料として、又は化粧品組成物の製造用に使用することができる。
【００７９】
これらは、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分、及びこれらの混合物、からなる群より選択される別の活性薬剤と組み合わせることもできる。
【００８０】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、組成物中に、少なくとも１％の量、好ましくは５％より多い量、より好ましくは１０％より多い量、さらにより好ましくは２０％より多い量、最も好ましくは最大５０％の量で含まれることが好ましい。
【００８１】
乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末の形で存在し得る。前記分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末中の乳清タンパク質濃度は、４％より高い、好ましくは１０％より高いことが好ましい。
【００８２】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、平均サイズが１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７７０ｎｍ、より好ましくは２００〜４００ｎｍであり得る。
【００８３】
他方、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの凝集体は、平均サイズが１μｍより大きいものであり得る。
【００８４】
前記乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、シャンプー、シャワージェル等の製造で使用することができる。
【００８５】
これらは、局所的な用途で使用することもできるが、その場合、乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する。
【００８６】
前記乳清タンパク質ミセルは、局所的な用途の化粧品組成物に組み入れることができる。
【００８７】
一実施形態において、本発明は、乳清タンパク質ミセルを皮膚に適用するステップを含む、皮膚粒子の研磨方法を提供する。乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在してもよく、又は適用前に組成物中に組み入れてもよい。
【００８８】
本発明の組成物は、少なくとも１％の量、好ましくは５％より多い量、より好ましくは１０％より多い量、さらにより好ましくは２０％より多い量、最も好ましくは最大５０％の量のミセルを含み得る。
【００８９】
組成物中の乳清タンパク質の濃度は、１％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高い、最も好ましくは５０％より高いことが好ましい。
【００９０】
組成物は、溶液、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、スプレー等の形態をとり得る。
【００９１】
一実施形態において、組成物は、シャンプー等のヘアケア製品である。組成物は、シャワージェル又はボディー及び／若しくはヘアシャンプーであってもよい。
【００９２】
本発明はまた、
ａ．乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を生成するステップと、
ｂ．前記ミセル又はその凝集体を組成物に組み入れるステップと、
を含む、化粧品組成物の製造方法を提供する。
【００９３】
本発明の方法によって得られる乳清タンパク質ミセル又はその凝集体及び組成物は、上述したようなものである。
【００９４】
乳清タンパク質ミセルは研磨特性を有するので、本発明の皮膚粒子の研磨方法で使用することが可能である。これは、懸濁液、分散液、クリーム、ゲル又は粉末の形の乳清タンパク質ミセルを局所的に適用して実施することができ、乳清タンパク質ミセルは、単独で、又は別の活性物質と組み合わせて使用することができる。そのような活性物質は、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分等から選択される。さらに、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、適用前に組成物に組み入れてもよい。乳清タンパク質ミセルが組み入れられる組成物は、基本のクリーム組成物から、複雑なクレンジング溶液、石鹸、ゲル、フォーム、歯磨き粉、スプレー、シャンプー等に及ぶ。
【００９５】
乳清タンパク質ミセルを化粧料として使用してもたらされる利点は、研磨性という性質が、例えば、死んだ皮膚細胞を除去するのに重要であるというだけでなく、ミセルの本来の性質により、ミセルが他の機能を発揮することが可能となることである。機械的な研磨挙動に加え、高度な負の電荷又は正の電荷をもつ乳清タンパク質ミセルは逆の電荷をもつ皮膚由来の不純物と静電複合体を形成して、特定の除去を促進することができる。同じようにして、ミセルの自然な疎水性は、皮膚に対して一切攻撃的にも刺激性にもならずに、皮膚から親油性の不純物を除去するのに役立つ。
【００９６】
さらに、乳清タンパク質ミセルは、水性系中の脂肪及び／又は空気を長期間安定化することができるので、乳化剤、ホワイトニング（ｗｈｉｔｅｎｉｎｇ）剤、脂肪代用品、ミセル状カゼイン代用品又は泡立て剤としての使用に十分に適することが示されている。気泡安定性を図５に示し、非ミセル化乳清タンパク質対本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの使用を比較する。
【００９７】
したがって、乳清タンパク質ミセルは乳化剤として使用することができるが、この材料は、味が目立たず、その使用によって不快な臭いが生じないので、十分にそれに適する。
【００９８】
さらに、この乳清タンパク質ミセルはホワイトニング剤として役立つ状態にもあるので、１種の化合物でいくつかの課題を解決することができる。乳清は、大量に入手可能な材料であるので、これを使用すると、乳化剤、充填剤、ホワイトニング剤又は泡立て剤を必要とする製品のコストが削減される。
【００９９】
また、乳化剤の役割を果たす乳清タンパク質ミセルは、例えば、乳濁液又はフォームの安定剤として有用であるだけでなく、油性の残留物を除去し、十分なクレンジング効果をもたらすのにも役立つと言える。さらに、乳清タンパク質ミセルは、他の活性成分、例えば、ラクトフェリン、保湿剤、エモリエント剤、鎮痛剤、収斂剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、薬物、抗生物質、物質、酸、バラ水、グリセリン、と組み合わせて使用することができる。乳清タンパク質ミセルは、シャンプー中で、洗浄剤、ホワイトニング剤として、さらには着色剤として使用することができる。また、シャワージェル中で使用することもできる。
【０１００】
乳清タンパク質ミセルの適用例としては、例えば、スキンケア、口腔ケア（例えば、歯磨き粉、洗口液、歯茎洗浄剤）、ヘアケアが挙げられる。乳清タンパク質ミセル又はその濃縮物は、そのまま使用してもよいし、又は用途に応じて希釈してもよい。
【０１０１】
それに応じて、乳清タンパク質ミセルを上述のような方法に従って生成し、前記ミセルをさらに組成物中に組み入れる、化粧品組成物の製造方法も本発明によって提供される。
【０１０２】
乳清タンパク質ミセルが組み入れられる組成物は、基本のクリーム組成物から、複雑なクレンジング溶液、石鹸、ゲル、フォーム、歯磨き粉、スプレー、シャンプー等に及ぶ。こうした組成物は、さらなる活性成分、例えば、ラクトフェリン、保湿剤、エモリエント剤、沈痛剤、収斂剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、薬物、抗生物質、物質、酸、バラ蒸留水、グリセリン、スルホスクシナート、アルキルスルホン酸塩、ココベタイン、キサンタンガム、ＥＤＴＡ、ソルビン酸カリウム、ダイズ油、アーモンド油、プロピルトリモニウム、セテアレス２０、セチルアルコール、精油、植物油、水添ヒマシ油、乳化剤、安定剤、パラベン−ＤＵ、着香料、ラウリルグルコシド、ラウレス硫酸アンモニウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ブチレングリコール、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ステアリン酸ＰＥＧ−２、セテアリルアルコール、クレス１２（ｃｌｅｔｈ−１２）、ステアリルアルコール、ミエチコン（ｍｉｅｔｉｃｏｎｅ）、アラントイン、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡ四ナトリウム、メトキシ桂皮酸エチルヘキシル、グリチルレチン酸、メチルココイル酒石酸ナトリウム、ＢＨＴ、塩化ナトリウム、イミダゾリジニル尿素、αイソメチルイオノン、ベンジルサリチル酸、ブチルフェニル、メチルプロピオナル、ヒドロキシイソヘキシル３−シクロヘキセンカルボキサルデヒド、サリチル酸、ポリエチレン、トリエタノールアミン、キサンタンガム、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油、ベンゾフェノン４、イミダゾリジニル尿素、デシルグルコシド、ジメチルＭＥＡ、コカミドプロピルベタイン、グリコール酸、ＰＰＧ−２ヒドロキシエチルコカミド、グリセレス７、ジオレイン酸ＰＥＧ−１２０メチルグルコース、ココイルサルコシン酸ナトリウム、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、エチルパラベン、イソブチルパラベン、香料のメントール、シトロネロール、ゲラニオール、ヘキシルシンナマル、リモネンを含有してもよい。
【０１０３】
通常、組成物は、粉末中に乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、最高で５０％の量で含むことになる。
【０１０４】
以下の実施例は本発明を説明するものである。但し、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１０５】
本発明は、本発明のミセルの調製について詳細に説明する以下の実施例を参照することでさらに明確になる。本明細書で説明し、特許請求される発明は、本明細書に開示する詳細な実施形態によってその範囲を限定されるものではない。これらの実施形態は、本発明のいくつかの態様の説明を目的としたものである。いかなる等価な実施形態も、本発明の範囲内にあるものとする。実際、本明細書に記載したものの他に、本発明の様々な変更形態が以上の説明から当業者に明白となろう。そのような変更形態も、添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【０１０６】
〔実施例１： βラクトグロブリンのミセル化〕
βラクトグロブリン（ロットＪＥ００２−８−９２２、１３−１２−２０００）は、Ｄａｖｉｓｃｏ（米国アリゾナ州Ｌｅ Ｓｕｅｕｒ）から得た。限外濾過及びイオン交換クロマトグラフィーによって、タンパク質を甘味乳清から精製した。粉末の組成は、タンパク質８９．７％、水分８．８５％、灰分１．３６％（Ｃａ２＋ ０．０７９％、Ｍｇ２＋ ０．０１３％、Ｋ＋ ０．０９７％、Ｎａ＋ ０．５７６％、Ｃｌ− ０．０５０％）である。使用した他の試薬はすべて、分析グレードのものであった（Ｍｅｒｃｋ、ドイツ国ダルムシュタット）。
【０１０７】
タンパク質溶液は、βラクトグロブリンをＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、濃度０．２％で調製した。次いで、等分試料のｐＨを、ＨＣｌを加えて５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０に調整した。溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜３．００分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。
【０１０８】
生成物の視覚的な側面（図１）から、ミセル化の至適ｐＨが５．８であることが示唆される。
【０１０９】
〔実施例２： 乳清タンパク分離物のミセル化〕
乳清タンパク分離物（ＷＰＩ）（Ｂｉｐｒｏ（登録商標）、バッチＪＥ０３２−１−４２０）は、Ｄａｖｉｓｃｏ（米国ミネソタ州Ｌｅ Ｓｕｅｕｒ）から得た。粉末の組成は、表１で報告する。
【０１１０】
粉末乳清タンパク質をＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、タンパク質溶液をタンパク質３．４％で調製した。最初のｐＨは７．２であった。次いで、等分試料のｐＨを、０．１ＮのＨＣｌを加えて５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、及び６．６に調整した。
【０１１１】
溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜２．５０分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。
【０１１２】
加熱した乳清タンパク質の濁度は、５００ｎｍ及び２５℃で測定しておき、試料を希釈して、０．１〜３Ａｂｓ単位の範囲で測定できるようにした（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ Ｕｖｉｋｏｎ ８１０、Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）。値は、最初のタンパク質濃度３．４％について算出したものである。
【０１１３】
図２で例示するように、同じ試料について１０分以内に５００ｎｍで測定した吸光度が安定すれば（最初の値の５％未満の変動）、ミセル化のｐＨに到達したとみなした。この生成物では、ミセル化至適ｐＨは６．０〜６．２であった。熱処理前に調整したこのｐＨでは、安定な濁度は２１であり、遠心分離後に２８０ｎｍでの吸光度によって評価した残りの可溶性タンパク質は１．９％であった。ｐＨ６．０で最初のタンパク質の４５％がミセルに変換されたと結論付けることができる。
【０１１４】
【表２】
【０１１５】
〔実施例３： ミセルの顕微鏡観察〕
ミセルの生成：
粉末乳清タンパク質（ＷＰＩ９０ バッチ９８９／２、Ｌａｃｔａｌｉｓ、フランス国Ｒｅｔｉｅｒ）をＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、タンパク質溶液をタンパク質２％で調製した。次いで、等分試料のｐＨを、０．１Ｎ ＨＣｌ又は０．１Ｎ ＮａＯＨを用いて調整した。
【０１１６】
溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜２．５０分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。この生成物では、ミセル化の至適ｐＨは７．４であった。
【０１１７】
顕微鏡観察：
液体ミセル試料を、寒天ゲルチューブに封入した。固定は、２．５％のグルタルアルデヒドを０．１ＭのｐＨ７．４カコジル酸緩衝液に溶かした溶液に浸漬し、同じ緩衝液中の２％の四酸化オスミウムで固定後洗浄することによって実現した（両方の溶液が０．０４％のルテニウムレッドを含有する）。段階的な一連のエタノール（７０、８０、９０、９６、１００％エタノール）で脱水した後、試料をＳｐｕｒｒ樹脂に包埋した（Ｓｐｕｒｒ／エタノール １：１、２：１、１００％）。樹脂を重合させた後（７０℃、４８時間）、Ｌｅｉｃａ ｕｌｔｒａｃｕｔ ＵＣＴウルトラミクロトームを用い、やや薄い及びごく薄い切片を切断した。ごく薄い切片を、酢酸ウラニル及びクエン酸鉛水溶液で染色し、透過型電子顕微鏡（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２、８０ｋＶ）で調べた。
【０１１８】
ＴＥＭ顕微鏡像を図３に示す。得られたミセルは、直径２００ｎｍの球状の形を示している。
【０１１９】
粒径分布：
ｐＨ４．２５（約＋２５ｍＶのζ電位で正に帯電）及びｐＨ６．０（約−３０ｍＶのζ電位で負に帯電）で、１重量％のβラクトグロブリン分散液を８５℃で１５分間熱処理して得たミセルについて、強度に基づくミセルのサイズ分布を測定した。ミセルのＺ平均流体学的直径は、ｐＨ４．２５で２２９．３ｍｍ、ｐＨ６．０で２２７．２ｍｍであった。β−ＬＧ及び乳清タンパク質の凝集は、動的光散乱法を用いて追跡した。出力４．０ｍＷ、波長６３３ｎｍで放射するレーザーを備え付けたＮａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、英国）を使用した。この機器を、散乱角１７３°で検出を行う後方散乱の配置で使用した。これによって、混濁した試料で見られる散乱シグナルの多発がかなり減少する。試料を四角い石英セル（Ｈｅｌｌｍａ、経路長１ｃｍ）に入れた。光の経路長は、試料の濁度（漸減）に応じて、装置によって自動的に設定した。拡散強度の揺らぎから、自己相関関数を算出した。結果は図６に示す。平均的な粒子が、非常に狭い多分散指数（＜０．２００）を特徴とすることが示されている。
【０１２０】
〔実施例４： 一定ｐＨでのβラクトグロブリンのミセル化〕
２％βラクトグロブリン水溶液を使用することを条件とし、実施例１に記載の方法を繰り返した。この溶液のｐＨは、アルギニンＨＣｌ溶液を加えた後７．０に調整して、５〜２００ｍＭの最終塩濃度及び１％の最終βラクトグロブリン濃度を実現しておいた。その後、熱処理（８０℃、１０分間、約２分間の加熱）を行ってミセルを生成した。
【０１２１】
結果は図４に示すが、約５０〜７０ｍＭのイオン強度範囲でのみ、乳清タンパク質ミセルの存在を示すかなりの濁度が認められることが明白に示されている。
【０１２２】
〔実施例５： ホワイトニング剤の調製〕
未変性乳清タンパク質（ＷＰＩ９５ バッチ８４８、Ｌａｃｔａｌｉｓ、８重量％水溶液）を実施例２に従って処理した。得られる生成物の明度（Ｌ）を、２ｍｍの測定用セルを備え付けたＭａｃＢｅｔｈ ＣＥ−ＸＴＨ Ｄ６５ １０°ＳＣＥ装置を用いて、透過反射率方式で測定した。得られる明度はＬ＝７４．８であり、これは脂肪分無調整乳のＬ＝７４．５という値と同等とみなすことができた。
【０１２３】
〔実施例６： 水性フォームの調製〕
未変性βラクトグロブリン（Ｂｉｏｐｕｒｅ、Ｄａｖｉｓｃｏ、ロットＪＥ００２−８−９２２、２重量％水溶液）を１２０ｍＭのアルギニンＨＣｌ溶液と混合して、最終βラクトグロブリン濃度が１重量％、最終アルギニンＨＣｌ濃度が６０ｍＭになるようにした。次いで、１Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを７．０に調整した。次いで、混合物を８０℃で１０分間熱処理して、最初のβラクトグロブリンの９０％が、１３０ｎｍのｚ平均直径を有するミセルに変換されるようにした。この場合では、ミセルの直径は、Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、英国）を用いて測定した。試料を石英キュベットに注ぎ、散乱光の変動を自動的に記録した。得られた自己相関関数を、キュムラント法を用いて適合させて、粒子の拡散係数が算出できるようにし、その後、ストークス・アインシュタインの法則を用いてｚ平均流体学的直径が算出できるようにした。この測定では、溶媒の屈折率は、１．３３、ミセルの屈折率は１．４５として計測された。次いで、標準化されたＦｏａｍｓｃａｎｍ（商標）（ＩＴＣｏｎｃｅｐｔ）装置を用いて、得られるβラクトグロブリンミセル分散液の５０ｍＬを、１２〜１６μｍの気泡を生じるガラスフリットからの窒素注入によって泡立たせて、１８０ｃｍ３の泡沫体積を生成する。次いで、泡沫の体積安定性を、画像解析を用いて２６℃で経時的に追跡し、アルギニンＨＣｌを加えていないが同じ条件で処理したβラクトグロブリンで得られた、ミセルが生成しなかった泡沫の安定性と比較した。図５は、βラクトグロブリンミセルの存在によって、泡沫体積安定性が大いに改善されていることを示している。
【０１２４】
〔実施例７： 噴霧乾燥によって得た粉末乳清タンパク質ミセル〕
材料：
タンパク質含有量９０％の乳清タンパク分離物（ＷＰＩ、Ｐｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）、Ｌａｃｔａｌｉｓ、フランス国Ｒｅｔｉｅｒｓ）
食用ラクトース
マルトデキストリンＤＥ３９
脱イオン水
可食塩酸１Ｍ
【０１２５】
方法：
二層構造の１００Ｌ槽を用いて、脱イオン水に、泡沫生成を回避するために穏やかに攪拌しながらタンパク質濃度１０重量％でＰｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）粉末を５０℃で分散させた。すなわち、８９ｋｇの脱イオン化水に１１ｋｇのＰｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）を分散させた。１時間分散させた後、ＨＣｌを加えて、分散液のｐＨをミセル化ｐＨ（この場合では約６．３）に調整した。乳清タンパク質ミセルを生成するために、分散液の温度を８５℃に上昇させ、１５分間維持した。１５分後、温度を５０℃に下げ、１０重量％の乳清タンパク質ミセル分散液を５０ｋｇの２バッチに分割した。最初の試験では、２０ｋｇのラクトースを５０ｋｇのミセル分散液に５０℃で分散させ、３０分間攪拌した。同様に、２０ｋｇのマルトデキストリンＤＥ３９を、残りの５０ｋｇの乳清タンパク質ミセル分散液に加えた。
【０１２６】
次いで、２つの混合物を、ＮＩＲＯ ＳＤ６．３Ｎ塔に入れて流速１５Ｌ／ｈで噴霧乾燥した。空気投入温度は１４０℃、空気排出温度は８０℃とした。得られた粉末の含水量は５％未満であった。
【０１２７】
ラクトース及びマルトデキストリン（ＤＥ３９）存在下の水中での乳清タンパク質ミセルのサイズを、噴霧乾燥の前後に、動的光散乱法を用いて決定した。乳清タンパク質ミセルの粘性を弱くするために、噴霧乾燥前に分散液を希釈し、又は粉末を復元することによって、総タンパク質濃度を０．４重量％に設定した。Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用し、ミセル直径を２０回の測定から平均した。
【０１２８】
ラクトース及びマルトデキストリン（ＤＥ３９）存在下の乳清タンパク質ミセルについて求められた粒径は、それぞれ３１０．４ｎｍ及び３０６．６ｎｍであった。粉末を復元した後、それぞれの直径は、それぞれ２６５．３ｎｍ及び２６８．５であることがわかった。これらの測定では、乳清タンパク質ミセルが噴霧乾燥に関して物理的に安定であったことが確認される。この結果は、０．１重量％の乳清タンパク質ミセルの水中分散液を、１％のリンタングステン酸存在下、ｐＨ７でのネガティブ染色を使用するＴＥＭ顕微鏡観察によって確証が得られている。８０ｋＶで作動するＰｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２透過型電子顕微鏡を使用した。噴霧乾燥前、及び噴霧乾燥粉末の復元後の溶液中に、乳清タンパク質ミセルが観察された。形態及び構造のいかなる差異も検出することができなかった。
【０１２９】
〔実施例８： 蒸発による濃縮〕
Ｌａｃｔａｌｉｓの乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット５００６４８）を、タンパク質濃度４％で軟水中に１５℃で復元して、最終バッチ規模を２５００ｋｇにしておいた。１Ｍ塩酸を加えて、最終ｐＨ値が５．９０になるようにｐＨを調整した。乳清タンパク質分散液を、ｐｌａｔｅ−ｐｌａｔｅ ＡＰＶ−ｍｉｘ熱交換器を通して流速５００ｌ／ｈでポンピングした。６０℃で予熱した後、８５℃で１５分間熱処理した。乳清タンパク質ミセルの生成は、動的光散乱法を用いた粒径の測定、さらには５００ｎｍでの濁度測定によって確認した。得られた４％の乳清タンパク質ミセル分散液は、粒子流体学的半径が２５０ｎｍ、多分散指数が０．１３、濁度が８０であることを特徴とするものであった。次いで、乳清タンパク質ミセル分散液を流速５００ｌ／ｈでＳｃｈｅｆｆｅｒｓエバポレーターに送った。エバポレーター中の温度及び真空度は、タンパク質濃度が２０％である約５００ｋｇの濃縮乳清タンパク質ミセルが生成され、４℃に冷却されるように適合させた。
【０１３０】
〔実施例９： 精密濾過による濃縮〕
Ｌａｃｔａｌｉｓの乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット５００６４８）を、タンパク質濃度４％で軟水中に１５℃で復元して、最終バッチ規模を２５００ｋｇにしておいた。１Ｍ塩酸を加えて、最終ｐＨ値が５．９０になるようにｐＨを調整した。乳清タンパク質分散液を、ｐｌａｔｅ−ｐｌａｔｅ ＡＰＶ−ｍｉｘ熱交換器を通して流速５００ｌ／ｈでポンピングする。６０℃で予熱した後、８５℃で１５分間熱処理した。乳清タンパク質ミセルの生成は、動的光散乱法を用いた粒径の測定、さらには５００ｎｍでの濁度測定によって確認した。得られた４％の乳清タンパク質ミセル分散液は、粒子の流体学的半径が２６０ｎｍ、多分散指数が０．０７、濁度が８０であることを特徴とするものであった。タンパク質のミセル形態もＴＥＭによっても確認すると、平均直径が１５０〜２００ｎｍであるミセル構造がはっきりと目に見えた（図９）。乳清タンパク質ミセル分散液は、貯蔵用に４℃で冷却することができ、また、そのまま使用して、６．８ｍ２のＣａｒｂｏｓｅｐ Ｍ１４メンブレンを備えた濾過ユニットに流速１８０ｌ／ｈで送ることもできた。この場合では、乳清タンパク質ミセルの濃縮は、透過液の流速が７０ｌ／ｈに到達するまで１０〜７０℃で実施した。この場合では、最終濃縮乳清タンパク質は、２０％のタンパク質を含有していた。濃縮物中のミセルの構造をＴＥＭによって確認すると、精密濾過前の４％の乳清タンパク質分散液と比べて、目に見える有意な変化は明らかに存在しなかった（図１０）。
【０１３１】
〔実施例１０： 少なくとも９０％の乳清タンパク質を含む粉末乳清タンパク質ミセル〕
精密濾過によって得られたタンパク質２０％の２００ｋｇの乳清タンパク質ミセル濃縮物（上記実施例を参照のこと）を、噴霧化ノズル（φ＝０．５ｍｍ、噴霧角度＝６５°、圧力＝４０バール）を用いて、２５ｋｇ／ｈの生成物流速でＮｉｒｏ ＳＤ６．３Ｎ塔に注入した。生成物の入口温度は１５０℃であり、出口温度は７５℃であった。塔の気流は１５０ｍ３／ｈであった。粉末の含水量は４％未満であり、粉末は非常に高い流動性を特徴とするものであった。粉末の走査型電子顕微鏡観察では、見かけ上の直径が１０〜１００μｍの範囲である非常に丸い粒子が示された（図８）。
【０１３２】
〔実施例１１： 粉末混成乳清タンパク質ミセル〕
２０ｋｇの濃縮乳清タンパク質ミセルを、ＤＥ３９のマルトデキストリン１．７ｋｇと混合して、粉末中の最終乳清タンパク質ミセル対マルトデキストリン比が７０／３０になるようにした。この混合物を、噴霧化ノズル（φ＝０．５ｍｍ、噴霧角度＝６５°、圧力＝４０バール）を用いて、２５ｋｇ／ｈの生成物流速でＮｉｒｏ ＳＤ６．３Ｎ塔に注入した。生成物の入口温度は１５０℃であり、出口温度は７５℃であった。塔中の気流は１５０ｍ３／ｈであった。粉末中の含水量は４％未満であり、粉末は、非常に高い流動性を特徴とするものであった。
【０１３３】
実施例１０及び１１の粉末は、水で復元したとき、本質的に、濃縮乳清タンパク質ミセルと同じ構造及び形態を有するミセルを含む。
【０１３４】
〔実施例１２： ３．８％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．角質除去（Ｅｘｆｏｌｉａｔｉｎｇ）シャワージェル〕
【０１３５】
【表３】
【０１３６】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭ及びバラ蒸留水を４０℃に温め、次いでグリセリン及びキサンタンガムを加えた。このブレンドを、アルキルスルホン酸塩、ココベタイン、スルホスクシナート、及びＥＤＴＡに加えた。すべての成分を攪拌して混合し、次いでソルビン酸カリウム及び着香料を加えた。
【０１３７】
〔実施例１７： １１．８％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．ＷＰＭピーリングローション〕
【０１３８】
【表４】
【０１３９】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭを７０℃に温め、次いでグリセリンを加えた。融解させた（７０℃）油相（アーモンド油、セチルアルコール、ステアリン酸、及びポリソルベート６０）を加え、均質な分散液が得られるまで攪拌した。このブレンドを室温で冷却し、次いでパラベンＤＵ及び着香料を加えた。
【０１４０】
〔実施例１８： １４％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．ＷＰＭピーリングローション〕
【０１４１】
【表５】
【０１４２】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭを７０℃に温め、次いでグリセリン及びプロピルトリモニウムを加えた。融解させた（７０℃）油相（ダイズ油、ＣｒｅａｍＭａｋｅｒワックス、セテアレス２０、ココベタイン、セチルアルコール）を加え、均質な分散液が得られるまで攪拌した。ブレンドを室温で冷却し、次いでパラベンＤＵ及び着香料を加えた。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１】βラクトグロブリンのミセル化に対するｐＨ及び熱処理の効果を実証する実験の結果を示す図である。
【図２】５００ｎｍでの濁度測定を用いて市販の調製物（Ｂｉｐｒｏ（登録商標）、バッチＪＥ０３２−１−４２０）のミセル化ｐＨを決定するための手段を示す図である。
【図３】ｐＨ７．４での乳清タンパク質ミセル（２重量％、ＷＰＩ９５、Ｌａｃｔａｌｉｓ）を示す透過型電子顕微鏡の顕微鏡像である。スケールバーは２００ｎｍである。
【図４】タンパク質ミセルの生成に対するイオン強度（アルギニンＨＣｌ）の影響を７．０という一定ｐＨで評価する実験の結果を示す図である。
【図５】６０ｍＭのアルギニンＨＣｌ存在下、ｐＨ７．０で１重量％のβラクトグロブリンミセル（Ｄａｖｉｓｃｏ）によって安定化させた泡沫の体積安定性（ＦＶＳ）を、非ミセル化βラクトグロブリンと対照して示す図である。
【図６】１重量％のβラクトグロブリン分散液をｐＨ２〜８、８５℃で１５分間熱処理して得た乳清タンパク質の、強度による等価な流体学的直径を示す図である。乳清タンパク質ミセルは、ｐＨ４．２５（約＋２５ｍＶのζ電位で正に帯電）及びｐＨ６．０（約−３０ｍＶのζ電位で負に帯電）で得た。ミセルのＺ平均流体学的直径は、ｐＨ４．２５で２２９．３ｎｍ、ｐＨ６．０で２２７．２ｎｍであった。ネガティブ染色後にＴＥＭによって得た、対応するミセル顕微鏡像を示す。スケールバーは１μｍである。
【図７】乳清タンパク質ミセルの極めて模式的な構造を示す図である。
【図８】精密濾過後のタンパク質含有量２０％の分散液を噴霧乾燥した後に得られた粉末乳清タンパク質ミセルのＳＥＭ（走査型電子顕微鏡法）顕微鏡像である。
【図９】タンパク質含有量４％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１０】精密濾過後にタンパク質含有量２０％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１１】８５℃で１５分間の加熱後、ＮａＣｌ存在下、ｐＨ７．０で精密濾過した後にタンパク質含有量１０％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液の熱安定性を示す図である。
【図１２】８５℃で１５分間加熱した後、ＮａＣｌ存在下、ｐＨ７．０にてタンパク質含有量４％で得られた乳清タンパク質分散液の熱安定性を示す図である。
【図１３】５０℃で脱イオン水に分散させた後の純粋な乳清タンパク質ミセル噴霧乾燥粉末をベースとした４％乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１４】ｐＨ５．９で処理した４ｔ％のＰｒｏｌａｃｔａ ９０乳清タンパク質分離物を使用する本発明の方法によって得られたミセルのサイズ分布を示す図である。
【図１５】図８で示した噴霧乾燥粉末顆粒を切断した後の内部構造を示すＳＥＭ顕微鏡像である。
【図１６】室温で脱イオン水に分散させた後の純粋な凍結乾燥乳清タンパク質ミセル粉末をベースとした４％乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。スケールバーは０．５マイクロメートルである。
【図１７】ｐＨ３．０で混合比を増大させた後の、ＳＢＯ（硫酸化オレイン酸ブチル）によるＷＰＭコーティングの概略図である。灰色の円：正の表面電荷を帯びたＷＰＭ。黒色の頭＋尾：ＳＢＯに由来する負の電荷をもつ頭部及び疎水性の尾部。
【図１８】４％のＮａＣｌが加えられている、蒸発後に得られた２０％の濃縮乳清タンパク質ミセルの写真である。
【図１９】トルイジンブルー染色後の粉末乳清タンパク質ミセルのやや薄い切片の明視野光学顕微鏡の顕微鏡像である。スケールバーは５０ミクロンである。
【図２０】切断後の中空乳清タンパク質ミセル粉末粒子のＳＥＭ顕微鏡像である。左：内部構造。右：粉末粒子マトリックスを構成する乳清タンパク質ミセルの詳細。スケールバーはそれぞれ１０ミクロン及び１ミクロンである。
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、特に化粧品組成物中への乳清タンパク質ミセル（ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｃｅｌｌｅ）の研磨剤としての使用、及び前記組成物の取得方法に関する。
【背景】
【０００２】
研磨剤を含有する不均一な組成物、例えば、粒状のペースト、粒を含む液体は、ヘルスケア及び化粧品の分野で一般的に使用されている。
【０００３】
特許出願の国際公開第０３０００２１５号パンフレットは、例えば、歯表面上に生成するタンパクフィルムを除去するために無機粉末を研磨剤として含有する歯磨き粉組成物を開示している。
【０００４】
ＵＳ６０３６９６６は、無機粉末、金属石鹸、又は有機粉末（微結晶セルロース等）から選択される、わずかに研磨性を有する粉状成分を含有する、皮膚のきめを整えるための局所用組成物を扱っている。
【０００５】
粒状生成物及びその使用の分野では探究されていない領域がまだ多い。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、当業界で使用されている研磨媒体に代わるものを提供することである。
【発明の概要】
【０００７】
それに応じて、この目的は、独立請求項の特徴によって実現される。従属請求項は、本発明の更なる中心的な考えを展開する。
【０００８】
この目的を実現するために、一般に、タンパク質の使用、例えば乳清タンパク質ミセル又は乳清タンパク質ミセルを含有する凝集体の、研磨媒体としての使用が提案される。特に、本発明は、乳清タンパク質ミセルの局所的な使用に関する。
【０００９】
本発明の別の態様では、乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物が提供される。
【００１０】
本発明の第３の態様は、化粧品組成物の製造方法に関する。
【００１１】
さらに別の態様は、そのような方法によって得られる製品に関する。
【００１２】
以下、添付の図面に示すいくつかの好ましい実施形態を参照して本発明をさらに説明する。
【発明の詳細な説明】
【００１３】
本発明によれば、タンパク質、例えば、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体、を研磨媒体として使用することができる。
【００１４】
本発明に関して使用することのできる乳清タンパク質ミセルを図７に表すが、乳清タンパク質は、タンパク質の親水性部分が凝集塊の外側の部分に配向され、タンパク質の疎水性部分がミセルの内側の「コア」に配向されるようにして並んでいる。このエネルギー的に好都合な配置によって、親水性環境においてこれらの構造体に良好な安定性が提供される。
【００１５】
特定のミセル構造は、図、特に図３、９、１０、及び１３から知ることができるが、本発明で使用するミセルは、本質的に変性乳清タンパク質の球状凝集塊からなる。本発明のミセルは、特にその規則的な球状の形を特徴とする。
【００１６】
乳清タンパク質ミセルは、まず未変性乳清タンパク質水溶液のｐＨ及び／又はイオン強度を調整し、次いで前記溶液を熱に曝す方法によって生成することができる。こうした方法は、本明細書でさらにより詳細に記載する。
【００１７】
そうして生成される乳清タンパク質ミセルは、二重の性質（親水性と疎水性）を有する。実際、変性乳清タンパク質の配置がミセル構造になると、疎水性の相、例えば脂肪液滴若しくは空気と、親水性の相との相互作用が可能になると思われる。したがって、乳清タンパク質ミセルは、完全な乳化特性及び起泡特性を有する。
【００１８】
さらに、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、生成されたミセルの８０％より多くが１ミクロンより小さいサイズとなるような、非常にシャープなサイズ分布（図１４を参照のこと）を有するようにして生成される。本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、サイズが１００〜９００ｎｍ、より好ましくは１００〜７７０ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍとなることが好ましい。
【００１９】
ミセルの平均直径は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて測定することができる。そうするためには、液体ミセルサンプルを寒天ゲルチューブに封入する。固定は、２．５％のグルタルアルデヒドを０．１ＭのｐＨ７．４カコジル酸緩衝液に溶かした溶液に浸漬し、同じ緩衝液中の２％の四酸化オスミウムで固定後洗浄することによって実現する（両方の溶液が０．０４％のルテニウムレッドを含有する）。段階的な一連のエタノール（７０、８０、９０、９６、１００％エタノール）で脱水した後、試料をＳｐｕｒｒ樹脂に包埋する（Ｓｐｕｒｒ／エタノール １：１、２：１、１００％）。樹脂を重合させた後（７０℃、４８時間）、Ｌｅｉｃａ ｕｌｔｒａｃｕｔ ＵＣＴウルトラミクロトームを用い、やや薄い及びごく薄い切片を切断する。次いで、ごく薄い切片を酢酸ウラニル及びクエン酸鉛水溶液で染色し、透過型電子顕微鏡（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２、８０ｋＶ）によって調べる。
【００２０】
特定の理論に拘泥するものではないが、ミセル生成の際、ミセルは、ミセルの全体としての静電荷が、追加のどんなタンパク質分子も寄せつけないために、サイズがそれ以上成長できないような「最大の」サイズに到達すると考えられる。このために、シャープなサイズ分布が観察されると言える（図１４を参照されたい）。
【００２１】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、任意の市販の乳清タンパク分離物又は濃縮物、すなわち、当業界で既知の任意の乳清タンパク質調製方法によって得られる乳清タンパク質、それから調製される乳清タンパク質画分、又はβラクトグロブリン（ＢＬＧ）、αラクトアルブミン、血清アルブミン等のタンパク質から製造することができる。特に、チーズ製造の副産物として得られる甘味乳清（ｓｗｅｅｔ ｗｈｅｙ）、酸カゼイン製造の副産物として得られる酸味乳清（ａｃｉｄ ｗｈｅｙ）、乳汁の精密濾過によって得られる未変性乳清、又はレンネットカゼイン製造の副産物として得られるレンネット乳清はすべて、乳清タンパク質源として使用することができる。乳清タンパク質は、単一供給源からのものであっても、任意の供給源の混合物からのものであってもよい。乳清タンパク質は、ミセル生成前にいかなる加水分解ステップも経ないことが好ましい。すなわち、乳清タンパク質は、ミセル化前にいかなる酵素的処理にもかけない。本発明によれば、ミセル生成法において、その加水分解物でなく乳清タンパク質を使用することが重要である。
【００２２】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの生成に使用する乳清分離物は、ウシ由来のものに限定されず、あらゆる哺乳類動物種からの乳清分離物（例えば、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダからのもの）がこれに含まれる。また、調製乳清は、ミネラル強化したもの、脱ミネラル化したもの、又はわずかにミネラル強化したものであってもよい。「わずかにミネラル強化した」とは、透析又はダイアフィルトレーションされ得る遊離ミネラルを除去した後の任意の調製乳清を意味するが、例えば乳清タンパク濃縮物又は分離物調製後の自然なミネラル強化によって、それに伴うミネラルを維持するものである。これらの「わずかにミネラル強化した」調製乳清では、特定のミネラル強化はなされていない。
【００２３】
乳清タンパク質ミセルの製造では、乳清タンパク質は、水溶液中に、溶液の全重量の０．１〜１２重量％、好ましくは０．１〜８重量％、より好ましくは０．２〜７重量％、さらにより好ましくは０．５〜６重量％、最も好ましくは１〜４重量％の量で存在し得る。
【００２４】
ミセル化ステップの前に存在する調製乳清タンパク質の水溶液は、追加の化合物、例えば、各乳清製造過程の副産物、他のタンパク質、ガム、カラギーナン又は炭水化物、を含んでもよい。溶液は、他の食品成分、例えば、脂肪、炭水化物、植物抽出物、を含有してもよい。このような追加の化合物の量は一般に、溶液の全重量の５０重量％を超えず、好ましくは２０％を超えず、より好ましくは１０重量％を超えない。
【００２５】
乳清タンパク質、その画分及び／又は主要なタンパク質は、精製された形で使用してもよいし、又は同様に粗生成物の形で使用してもよい。乳清タンパク質ミセルを調製するための乳清タンパク質中の二価カチオン含有量は２．５％未満、好ましくは０．２％未満であり得る。乳清タンパク質は、完全に脱ミネラル化されていることが最も好ましい。
【００２６】
ｐＨ値及びイオン強度は、乳清タンパク質ミセルの製造において重要な要素である。例えば、Ｃａ、Ｋ、Ｎａ、Ｍｇ等の遊離のカチオンを事実上欠くか激減した、広範囲に透析されたサンプルでは、５．４より低いｐＨで１０秒から２時間熱処理を行うと、カード（ｃｕｒｄ）が得られ、６．８を超えるｐＨでは可溶性の乳清タンパク質が生じる（図１を参照のこと）。したがって、このどちらかと言えば狭いｐＨ領域においてのみ、直径が１μｍ未満の乳清タンパク質ミセルが得られる。このようなミセルは、全体として負の電荷を有することになる。等電ｐＨより低いｐＨ、すなわち３．５〜５．０、より好ましくは３．８〜４．５でも、同じミセル形態を対称的に得ることができ、正の電荷をもつミセルがもたらされる（図６を参照のこと）。
【００２７】
したがって、正の電荷をもつミセルを得るには、乳清タンパク質のミセル化を、塩を含まない溶液中、タンパク質供給源のミネラル含有量に応じて、３．８〜４．５に調整されたｐＨ値で行うことができる。
【００２８】
或いは、粉末乳清タンパク質中の二価カチオン含有量が０．２％〜２．５％であるものでは、負の電荷をもつミセルを得るために、ｐＨを６．３〜９．０の範囲に調整することができる。
【００２９】
より詳細には、二価カチオン含有量が少ないもの（例えば最初の粉末乳清タンパク質の０．２％未満）では、負の電荷をもつミセルを得るために、ｐＨを５．６〜６．４の範囲に、又は５．８〜６．０の範囲にまで調整する。ｐＨは、乳清タンパク（濃縮物又は分離物）供給源のミネラル含有量に応じて、８．４まで上げることができる。特に、多量の遊離ミネラル存在下で負の電荷をもつミセルを得るには、ｐＨは７．５〜８．４、好ましくは７．６〜８．０であり、それほど多くない量の遊離ミネラル存在下で負の電荷をもつミセルを得るには、ｐＨは６．４〜７．４、好ましくは６．６〜７．２である。一般に、最初の粉末乳清タンパク質のカルシウム及び／又はマグネシウム含有量が多いほど、ミセル化ｐＨは高くなる。
【００３０】
乳清タンパク質ミセルの生成条件は、既知の脱ミネラル化技術（透析、限外濾過、逆浸透、イオン交換クロマトグラフィー・・・）のいずれかによって、タンパク質濃度が、甘味乳清、乳汁精密濾過透過液、又は酸味乳清のもの（タンパク質含有量０．９％）から、タンパク質含有量が３０％の濃縮物のものまでの範囲に及ぶ任意の液体未変性乳清タンパク質供給源を脱ミネラル化することにより標準化することができる。透析は、水（蒸留水、脱イオン水、又は軟水）に対して行うことができるが、水では、乳清タンパク質に弱く結合したイオンの除去しか可能にならないので、４．０より低いｐＨの（有機又は無機の）酸に対して透析して、乳清タンパク質のイオン性組成物をより良好に制御することが通例である。そのようにすることによって、乳清タンパク質ミセル生成のｐＨは、ｐＨ７．０より低くなり、通常は５．８〜６．６となる。
【００３１】
乳清タンパク質水溶液を加熱する前には、一般に、酸（例えば、塩酸、リン酸、酢酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸）を加えてｐＨを調整する。ミネラル含有量が多いときは一般に、アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム）の溶液を加えてｐＨを調整する。
【００３２】
或いは、ｐＨ調整ステップが所望されないならば、ｐＨを一定に保ちながら、調製乳清タンパク質のイオン強度を調節することが可能である。その場合、イオン強度は、有機又は無機のイオンによって、一定のｐＨ値７でミセル化が可能になるようにして調整することができる。図４は、７０〜８０ｍＭのアルギニンＨＣｌを加えてイオン強度を様々に変更する間、７．０という一定のｐＨ値で生成するミセルを例示するものである。
【００３３】
乳清タンパク質の熱処理の間のｐＨ値の実質的な変化が回避されるように、乳清タンパク質の水溶液に緩衝液をさらに加えてもよい。原則として、緩衝液は、任意の緩衝液系、すなわち、例えば、酢酸及びその塩（例えば、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム）、リン酸及びその塩（例えば、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４）、又はクエン酸及びその塩、から選択することができる。
【００３４】
加熱前に水溶液のｐＨ及び／又はイオン強度を調整すると、制御式の方法となり、サイズが１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７００ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍであるミセルが得られる。本明細書に記載の方法を実施したとき、１００〜７００ｎｍの寸法を有するミセルの分布が８０％より高いことが好ましい（図１４を参照のこと）。
【００３５】
本発明によれば、均整のとれた形状のミセルを得るには、乳清タンパク質が、ミセル形成前にいかなる加水分解ステップも経ないこともまた重要である。
【００３６】
ｐＨ及び／又はイオン強度を調整した後、出発乳清タンパク質水溶液を熱処理にかける。この点で、乳清タンパク質ミセルを得るには、約７０℃〜９５℃未満、好ましくは約８２〜約８９℃、より好ましくは約８４〜約８７℃の範囲、最も好ましくは約８５℃の温度であることが重要である。工業的規模では、温度を好ましくは９５℃未満、より好ましくは８０℃〜９０℃、最も好ましくは約８５℃とすることが重要なこともわかっている。
【００３７】
所望の温度に到達したならば、溶液を最低１０秒間且つ最長２時間この温度に保つ。乳清タンパク質水溶液を所望の温度範囲に保つ時間は、１２〜２５分、より好ましくは１２〜２０分の範囲をとることが好ましく、又は約１５分間であることが最も好ましい。
【００３８】
熱処理は、電子レンジ又はマイクロ波による加熱が可能な任意の同様の機器でも実現することができ、１５００Ｗの装置で沸点（高度８３３ｍで９８℃）まで加熱される４重量％のタンパク質溶液では、時間／量の比は１０秒／１０ｍＬである。保持管により延長可能なガラス管の周囲に８個以上のマグネトロンを付加することによって持続的なプロセスを用いて、温置時間を増やしてもよい。
【００３９】
図２に示すように、濁度測定はミセル形成の指標である。５００ｎｍでの吸光度によって測定される濁度は、一般に１％のタンパク質溶液で少なくとも３吸光度単位であるが、ミセル化の収率が８０％を上回るときは１６吸光度単位に達する場合もある（図２を参照のこと）。
【００４０】
物理化学的な見地からミセル形成の効果をさらに例示するために、Ｂｉｐｒｏ（登録商標）の１重量％分散液を、ＭｉｌｌｉＱ水中、ｐＨ６．０及び６．８、８５℃で１５分間加熱した。熱処理後に得られる凝集体の水力学的な直径を動的光散乱法によって測定した。凝集体の見かけ上の分子量は、いわゆるＤｅｂｙｅプロットを使用する静的光散乱法によって決定した。表面の疎水性は、システインを標準アミノ酸として使用するＤＴＮＢ法によって、疎水性のＡＮＳプローブ及び利用可能な遊離チオール基を用いて探索した。最後に、凝集体の形態をネガティブ染色によってＴＥＭで調査した。結果を表１に示す。
【００４１】
表１から、ｐＨ６．０で生成した乳清タンパク質ミセルでは、タンパク質の特有のＡＮＳ表面疎水性が、ｐＨ６．８である以外は同じ条件下で加熱した非ミセル化乳清タンパク質と比べて２分の１に低下したことが明白である。ミセルが生成したことは、非ミセル化タンパク質の０．６４×１０６ｇ／ｍｏｌと比べて、ミセル内で物質が非常に凝縮した状態（少量の水）であることを示す、２７×１０６ｇ／ｍｏｌという非常に高い分子量からもわかる。十分に興味深いことに、ミセルのζ電位は、非ミセル化タンパク質がミセルより塩基性のｐＨで生成していたとしても、非ミセル化タンパク質よりもマイナスである。これは、ミセルのより親水性の表面が溶媒に曝されるためである。最後に、ミセルのチオール反応性は、熱処理のｐＨが異なるので、非ミセル化タンパク質よりはるかに低いことを留意されたい。
【００４２】
【表１】
【００４３】
最初のタンパク質濃度がｐＨ調整及び熱処理の前に増大すると、未変性乳清タンパク質のミセルへの転換収率は低下する。例えば、乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット６７３、Ｌａｃｔａｌｉｓ社）から出発したとき、乳清タンパク質ミセルの生成収率は、８５％（４％のタンパク質から出発したとき）から５０％（１２％のタンパク質から出発したとき）に落ちる。乳清タンパク質ミセルの生成を最大（最初のタンパク質含有量の＞８５％）にするには、タンパク質濃度が１２％未満、好ましくは４％未満である乳清タンパク質水溶液から出発する方がよい。目的の最終的な用途に応じて、タンパク質濃度を調整してから熱処理すると、最適な乳清タンパク質ミセル収率を管理することができる。
【００４４】
所望の用途に応じて、濃縮前のミセルの収率は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％であり、残りの可溶性凝集体又は可溶性タンパク質含有量は、２０％未満であることが好ましい。平均ミセルサイズは、０．２００未満の多分散指数を特徴とする。乳清タンパク質ミセルは、ｐＨ４．５付近で凝集体を形成することができたが、しかし、４℃で少なくとも１２時間経過後には、巨視的な相分離の徴候はないことが観察された。
【００４５】
乳清タンパク質ミセルの純度は、生成後の残りの可溶性タンパク質量を測定することによって得られる。ミセルは、２０℃、２６９００ｇで１５分間の遠心分離によって除去する。上清を用いて、石英キュベット（光経路長１ｃｍ）中、２８０ｎｍでタンパク質量を決定する。値は、熱処理前の最初の値の百分率として示される。
【００４６】
ミセルの割合＝（最初のタンパク質量−可溶性タンパク質量）／最初のタンパク質量
【００４７】
本明細書に記載の方法を使用することによって、乳清タンパク質ミセルは、従来の方法とは異なり、生成の際、粒径の縮小をもたらすいかなる機械的ストレスも受けない。この方法では、剪断なしで、熱処理の際に乳清タンパク質の自発的なミセル化が誘発される。
【００４８】
ミセルは、懸濁液又は分散液として得ることができ、１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７７０ｎｍ、最も好ましくは２００〜４００ｎｍのサイズを有するものであり得る。
【００４９】
本明細書に記載の方法によって得られるミセルは、本発明の研磨媒体として使用可能な、非常に安定な不溶性の構造である。
【００５０】
本発明において、前記ミセルは、そのまま使用してもよいし、或いはその研磨特性を保持したまま、濃縮、スプレー乾燥等のさらなる処理を経てもよい。
【００５１】
実際には、熱処理後に得られるミセル分散液を、例えば、蒸発、遠心分離、沈降、精密濾過及び／又は限外濾過によってさらに濃縮することができる。
【００５２】
乳清タンパク質ミセルを濃厚にしてその濃縮物を生成すると、タンパク質が強化された生成物を、以前には成し遂げられなかった濃度で得ることができるという利点がもたらされる。すなわち、ミセル懸濁液は、４％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高いタンパク質含有量に濃縮することができる。
【００５３】
蒸発は、温度が５０℃〜８５℃の真空中でミセル分散液をエバポレーターに送ることによって実施することができる。得られる生成物は一般に、図１８に示すようにゲル又はクリームの態様を有する。このようなミセル生成物は、単独で研磨媒体若しくは化粧料として使用してもよいし、又は本発明の化粧品組成物中で使用してもよい。さらに、蒸発によって得られる乳清タンパク質ミセルの２０％タンパク濃縮物では、乳酸を用いる酸性化により、のびのよいテクスチャーを付与することができる。
【００５４】
遠心分離は、乳清タンパク質ミセル分散液をｐＨ５未満、好ましくは４．５未満に酸性化した後、大きい加速度（２０００ｇより大）又は小さい加速度（５００ｇ未満）で実施することができる。
【００５５】
酸性化によって、乳清タンパク質ミセル分散液を自発的に沈降させてもよい。ｐＨが４．５となり、沈降時間が１２時間より長いことが好ましい。
【００５６】
或いは、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの濃縮は、ミセル分散液の精密濾過によって実現することができる。この濃縮技術は、溶媒の除去によって乳清タンパク質ミセルを濃縮することができるだけでなく、非ミセル化タンパク質（例えば、未変性タンパク質、可溶性凝集体）を除去することもできる。したがって、最終的な生成物は、本質的にミセルのみからなる（透過型電子顕微鏡によって確認される。図９及び１０を参照されたい）。この場合では、膜を通る透過液の最初の流速がその最初の値の２０％に低下した後、達成可能な濃縮率が実現される。これによって、８０％より高い濃度でミセルが得られる。
【００５７】
乳清タンパク質ミセルの別の処理は、本明細書に記載の方法を使用して得られるミセル分散液で実施することができる。
【００５８】
例えば、乳清タンパク質ミセルの機能性をモジュレートするために、乳清タンパク質ミセルを、乳化剤（例えば、リン脂質）又は他のコーティング剤、例えば、タンパク質、ペプチド、タンパク加水分解物又はガム（例えば、アカシアガム）、でコーティングすることができる。タンパク質をコーティング剤として使用する場合、等電点が乳清タンパク質より有意に高いか低いいかなるタンパク質からも選択することができる。それらのタンパク質は、例えば、プロタミン、ラクトフェリン、及びいくつかのイネタンパク質である。タンパク加水分解物をコーティング剤として使用するとき、タンパク質（例えば、プロタミン、ラクトフェリン、イネタンパク質、カゼインタンパク質、乳清タンパク質、コムギタンパク質、ダイズタンパク質、又はこれらの混合物）の加水分解物であることが好ましい。コーティングは、硫酸化オレイン酸ブチル、モノ及びジグリセリンのジアセチル酒石酸エステル、モノグリセリンのクエン酸エステル、ステアロイルラクチラート、及びこれらの混合物、から選択される乳化剤であることが好ましい。図１７は、硫酸化オレイン酸ブチルでのコーティングの模式的な表現である。さらに、本明細書でさらに記載する同時噴霧乾燥（ｃｏ−ｓｐｒａｙｄｒｙｉｎｇ）でも、乳清タンパク質ミセルをコーティングすることができる。
【００５９】
別の処理、例えば、乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥、ローラー乾燥等）も、乳清タンパク質ミセルに施すことができる。すなわち、濃縮乳清タンパク質は、別の成分を加え、又は加えずに噴霧乾燥することができ、広範囲なプロセス、例えば、消耗品製造、化粧品用途、で使用される送達系（ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）又は構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）として使用することができる。
【００６０】
図８は、噴霧乾燥の間に起こるミセル凝集のために平均粒径サイズが１ミクロンより大きい、いかなる別の成分も加えずに噴霧乾燥して得られた粉末を示す。乳清タンパク質ミセル粉末の典型的な平均体積メジアン径（Ｄ４３）は、４５〜５５ミクロン、好ましくは５１ミクロンである。これら粉末の表面メジアン径（Ｄ３２）は、３〜４ミクロンであることが好ましく、３．８ミクロンであることがより好ましい。
【００６１】
噴霧乾燥後に得られる粉末の含水量は、好ましくは１０％未満、より好ましくは４％未満である。
【００６２】
そのような乳清タンパク質ミセル粉末は、少なくとも９０％の乳清タンパク質を含み、その少なくとも８０％がミセルの形態をとるので、「純粋」であるとみなす。
【００６３】
さらに、「純粋な」乳清タンパク質ミセル粉末は、水、グリセロール、エタノール、油、有機溶媒等の溶媒に対して高い結合能を有する。この粉末の水に対する結合能は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも１００％である。
【００６４】
グリセロール、エタノールガムの溶媒では、結合能は少なくとも５０％である。乳清タンパク質ミセル粉末のこの特性によって、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分等、及びこれらの混合物、からなる群より選択される別の活性薬剤と共にこれを噴霧又は充填することが可能になる。
【００６５】
活性薬剤は、粉末中に０．１〜５０％の量で含まれ得る。したがって、粉末は、これらの機能性成分の担体として働くことができる。
【００６６】
噴霧乾燥前に乳清タンパク質ミセル又はその濃縮物に混合してもよい追加の成分は、可溶性又は非可溶性の塩、ペプチド、タンパク加水分解物、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質（ミネラル、ビタミン、薬物・・・）、乳、乳タンパク質、脱脂粉乳、カゼインミセル、カゼイン塩、植物性タンパク質、アミノ酸、ポリフェノール、及びこれらの任意の混合物を含む。得られる混成乳清タンパク質ミセル粉末は、乳清タンパク質ミセルと追加の成分とを１：１〜１：１０００の重量比で含む。これによって、これらの追加の成分をさらに含む凝集塊が得られるので、本発明に従って、使用する追加の成分に応じて別の機能特性及び健康上の利益を示す研磨媒体として使用することができる。したがって、混成粉末は、例えば生理活性剤用の担体として働き得る。
【００６７】
本発明によって得られる乳清タンパク質ミセル粉末は、中空の球だけでなく潰れた球から主に構成される内部構造を特徴とする（図１９を参照されたい）。中空の球の構造は、噴霧乾燥中に、濃縮ＷＰＭ液滴内に蒸気液滴が生成したということにより容易に説明できる。温度が１００℃より高いために蒸気液滴がＷＰＭ液滴を出たので、中空の球が残った。「骨形」は、液滴からの水の蒸発と液滴内の外圧の組合せによるものである。
【００６８】
丸い中空球の内部構造を、粒子をその直径付近で切断した後ＳＥＭによって調べた（図２０、左）。粒子の壁の厚さは約５μｍであり、非常に滑らかに見えたが、内側の構造は、外観がよりざらざらしていた。拡大率を上げると、このざらつきが実際は、融合して粉末粒子の内側マトリックスを形成している最初のＷＰＭの存在によるものであったことが示された。興味深いことに、噴霧乾燥の間ミセルの球状の形は保たれ、そのうえ粒径分布は均質であった（図２０、右）。
【００６９】
すなわち、顕微鏡ベースでは、乳清タンパク質ミセル粉末は、無傷で個別化された乳清タンパク質ミセルを含んでいる中空又は潰れた球という独特な顆粒形態を特徴とする。
【００７０】
乳清タンパク質ミセル粉末は、非常に高い流動性を特徴とし、これによって使用しやすく移しやすいという利点がもたらされる。これらの粉末の安息角は、好ましくは３５°未満、より好ましくは３０°未満である。このように安息角が小さいために、この粉末を、例えば化粧品用途で流動化剤（ｆｌｏｗｉｎｇ ａｇｅｎｔ）として使用することが可能になる。
【００７１】
これらの粉末は、例えば、研磨媒体として、化粧料として、又は化粧品組成物の製造において、本発明に従って使用することもできる。
【００７２】
粉末粒子、すなわち乳清タンパク質ミセルの凝集体のサイズ、及び乳清タンパク質ミセルそれ自体のサイズは、局所的な用途で使用するとき、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体がほとんど知覚されず、皮膚を刺激せずに研磨剤として働くという利点となる。
【００７３】
その形態（例えば、濃縮物、懸濁液、乾燥粉末）にかかわらず、乳清タンパク質ミセルの重要な特徴は、乳清タンパク質の基礎的なミセル構造が保存されていることである。図１５は、薄片にしておき、それによって個々の乳清タンパク質ミセルが観察可能になっている乳清タンパク質粉末粒子を示す。ミセル構造はさらに、溶媒中で容易に復元することができる。例えば、濃縮乳清タンパク質ミセルから得られた粉末は、室温又は５０℃で容易に水に再分散できることがわかっている。乳清タンパク質ミセルのサイズ及び構造は、最初の濃縮物と比べて完全に保存される。例えば、図１３では、濃縮乳清タンパク質をタンパク質濃度２０％で噴霧乾燥したものが、５０％のタンパク質濃度で、５０℃で脱イオン水に再分散している。ミセルの構造は、ＴＥＭによって厳密に調べてあり、図１０と比べることができる。同様の形のミセルが得られた。ミセルの直径は、動的光散乱法によって３１５ｎｍであることがわかり、多分散指数は０．２であった。図１６にも、凍結乾燥した乳清タンパク質ミセル粉末の分散液を示すが、ミセルは復元されている。
【００７４】
噴霧乾燥又は凍結乾燥した粉末を復元した後、溶液中に乳清タンパク質ミセルと微量の凝集体画分トが観察されたことは、乳清タンパク質ミセルが噴霧乾燥、凍結乾燥等に関して物理的に安定であることを裏付ける。
【００７５】
興味深いことに、濃縮物は、タンパク質含有量が１０％に調整されたならば、図１１に示すように、例えば０．１５Ｍまでの塩化ナトリウム存在下において、８５℃、ｐＨ７．０、１５分間のその後の熱処理に持ちこたえることができる。比較の問題として、未変性乳清タンパク質分散液（Ｐｒｏｌａｃｔａ９０、ロット５００６５８、Ｌａｃｔａｌｉｓ）は、０．１Ｍの塩化ナトリウムの存在下、タンパク質濃度４％でゲルを形成する（図１２を参照されたい）。
【００７６】
ミセル構造の高い安定性は、濃縮ステップの間も保存される。そのために、ミセル構造によって与えられる研磨特性が、本発明の化粧品組成物の製造、貯蔵等の間損なわれないという利点が得られる。
【００７７】
本発明によれば、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、研磨媒体として使用することができる。乳清タンパク質ミセルの凝集体は、噴霧乾燥又は凍結乾燥された粉末の形態をとることができる。この凝集体は、可溶性又は非可溶性の塩、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質（ミネラル、ビタミン、薬物・・・）、及びこれらの任意の混合物、からなる群より選択される追加の成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明によれば、乳清タンパク質ミセル又はその前記凝集体は、化粧料として、又は化粧品組成物の製造用に使用することができる。
【００７９】
これらは、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分、及びこれらの混合物、からなる群より選択される別の活性薬剤と組み合わせることもできる。
【００８０】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、組成物中に、少なくとも１％の量、好ましくは５％より多い量、より好ましくは１０％より多い量、さらにより好ましくは２０％より多い量、最も好ましくは最大５０％の量で含まれることが好ましい。
【００８１】
乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末の形で存在し得る。前記分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末中の乳清タンパク質濃度は、４％より高い、好ましくは１０％より高いことが好ましい。
【００８２】
本発明で使用する乳清タンパク質ミセルは、平均サイズが１００〜９００ｎｍ、好ましくは１００〜７７０ｎｍ、より好ましくは２００〜４００ｎｍであり得る。
【００８３】
他方、本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの凝集体は、平均サイズが１μｍより大きいものであり得る。
【００８４】
前記乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、シャンプー、シャワージェル等の製造で使用することができる。
【００８５】
これらは、局所的な用途で使用することもできるが、その場合、乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する。
【００８６】
前記乳清タンパク質ミセルは、局所的な用途の化粧品組成物に組み入れることができる。
【００８７】
一実施形態において、本発明は、乳清タンパク質ミセルを皮膚に適用するステップを含む、皮膚粒子の研磨方法を提供する。乳清タンパク質ミセルは、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在してもよく、又は適用前に組成物中に組み入れてもよい。
【００８８】
本発明の組成物は、少なくとも１％の量、好ましくは５％より多い量、より好ましくは１０％より多い量、さらにより好ましくは２０％より多い量、最も好ましくは最大５０％の量のミセルを含み得る。
【００８９】
組成物中の乳清タンパク質の濃度は、１％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高い、最も好ましくは５０％より高いことが好ましい。
【００９０】
組成物は、溶液、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、スプレー等の形態をとり得る。
【００９１】
一実施形態において、組成物は、シャンプー等のヘアケア製品である。組成物は、シャワージェル又はボディー及び／若しくはヘアシャンプーであってもよい。
【００９２】
本発明はまた、
ａ．乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を生成するステップと、
ｂ．前記ミセル又はその凝集体を組成物に組み入れるステップと、
を含む、化粧品組成物の製造方法を提供する。
【００９３】
本発明の方法によって得られる乳清タンパク質ミセル又はその凝集体及び組成物は、上述したようなものである。
【００９４】
乳清タンパク質ミセルは研磨特性を有するので、本発明の皮膚粒子の研磨方法で使用することが可能である。これは、懸濁液、分散液、クリーム、ゲル又は粉末の形の乳清タンパク質ミセルを局所的に適用して実施することができ、乳清タンパク質ミセルは、単独で、又は別の活性物質と組み合わせて使用することができる。そのような活性物質は、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分等から選択される。さらに、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体は、適用前に組成物に組み入れてもよい。乳清タンパク質ミセルが組み入れられる組成物は、基本のクリーム組成物から、複雑なクレンジング溶液、石鹸、ゲル、フォーム、歯磨き粉、スプレー、シャンプー等に及ぶ。
【００９５】
乳清タンパク質ミセルを化粧料として使用してもたらされる利点は、研磨性という性質が、例えば、死んだ皮膚細胞を除去するのに重要であるというだけでなく、ミセルの本来の性質により、ミセルが他の機能を発揮することが可能となることである。機械的な研磨挙動に加え、高度な負の電荷又は正の電荷をもつ乳清タンパク質ミセルは逆の電荷をもつ皮膚由来の不純物と静電複合体を形成して、特定の除去を促進することができる。同じようにして、ミセルの自然な疎水性は、皮膚に対して一切攻撃的にも刺激性にもならずに、皮膚から親油性の不純物を除去するのに役立つ。
【００９６】
さらに、乳清タンパク質ミセルは、水性系中の脂肪及び／又は空気を長期間安定化することができるので、乳化剤、ホワイトニング（ｗｈｉｔｅｎｉｎｇ）剤、脂肪代用品、ミセル状カゼイン代用品又は泡立て剤としての使用に十分に適することが示されている。気泡安定性を図５に示し、非ミセル化乳清タンパク質対本発明で使用する乳清タンパク質ミセルの使用を比較する。
【００９７】
したがって、乳清タンパク質ミセルは乳化剤として使用することができるが、この材料は、味が目立たず、その使用によって不快な臭いが生じないので、十分にそれに適する。
【００９８】
さらに、この乳清タンパク質ミセルはホワイトニング剤として役立つ状態にもあるので、１種の化合物でいくつかの課題を解決することができる。乳清は、大量に入手可能な材料であるので、これを使用すると、乳化剤、充填剤、ホワイトニング剤又は泡立て剤を必要とする製品のコストが削減される。
【００９９】
また、乳化剤の役割を果たす乳清タンパク質ミセルは、例えば、乳濁液又はフォームの安定剤として有用であるだけでなく、油性の残留物を除去し、十分なクレンジング効果をもたらすのにも役立つと言える。さらに、乳清タンパク質ミセルは、他の活性成分、例えば、ラクトフェリン、保湿剤、エモリエント剤、鎮痛剤、収斂剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、薬物、抗生物質、物質、酸、バラ水、グリセリン、と組み合わせて使用することができる。乳清タンパク質ミセルは、シャンプー中で、洗浄剤、ホワイトニング剤として、さらには着色剤として使用することができる。また、シャワージェル中で使用することもできる。
【０１００】
乳清タンパク質ミセルの適用例としては、例えば、スキンケア、口腔ケア（例えば、歯磨き粉、洗口液、歯茎洗浄剤）、ヘアケアが挙げられる。乳清タンパク質ミセル又はその濃縮物は、そのまま使用してもよいし、又は用途に応じて希釈してもよい。
【０１０１】
それに応じて、乳清タンパク質ミセルを上述のような方法に従って生成し、前記ミセルをさらに組成物中に組み入れる、化粧品組成物の製造方法も本発明によって提供される。
【０１０２】
乳清タンパク質ミセルが組み入れられる組成物は、基本のクリーム組成物から、複雑なクレンジング溶液、石鹸、ゲル、フォーム、歯磨き粉、スプレー、シャンプー等に及ぶ。こうした組成物は、さらなる活性成分、例えば、ラクトフェリン、保湿剤、エモリエント剤、沈痛剤、収斂剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、薬物、抗生物質、物質、酸、バラ蒸留水、グリセリン、スルホスクシナート、アルキルスルホン酸塩、ココベタイン、キサンタンガム、ＥＤＴＡ、ソルビン酸カリウム、ダイズ油、アーモンド油、プロピルトリモニウム、セテアレス２０、セチルアルコール、精油、植物油、水添ヒマシ油、乳化剤、安定剤、パラベン−ＤＵ、着香料、ラウリルグルコシド、ラウレス硫酸アンモニウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ブチレングリコール、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ステアリン酸ＰＥＧ−２、セテアリルアルコール、クレス１２（ｃｌｅｔｈ−１２）、ステアリルアルコール、ミエチコン（ｍｉｅｔｉｃｏｎｅ）、アラントイン、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡ四ナトリウム、メトキシ桂皮酸エチルヘキシル、グリチルレチン酸、メチルココイル酒石酸ナトリウム、ＢＨＴ、塩化ナトリウム、イミダゾリジニル尿素、αイソメチルイオノン、ベンジルサリチル酸、ブチルフェニル、メチルプロピオナル、ヒドロキシイソヘキシル３−シクロヘキセンカルボキサルデヒド、サリチル酸、ポリエチレン、トリエタノールアミン、キサンタンガム、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油、ベンゾフェノン４、イミダゾリジニル尿素、デシルグルコシド、ジメチルＭＥＡ、コカミドプロピルベタイン、グリコール酸、ＰＰＧ−２ヒドロキシエチルコカミド、グリセレス７、ジオレイン酸ＰＥＧ−１２０メチルグルコース、ココイルサルコシン酸ナトリウム、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、エチルパラベン、イソブチルパラベン、香料のメントール、シトロネロール、ゲラニオール、ヘキシルシンナマル、リモネンを含有してもよい。
【０１０３】
通常、組成物は、粉末中に乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、最高で５０％の量で含むことになる。
【０１０４】
以下の実施例は本発明を説明するものである。但し、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１０５】
本発明は、本発明のミセルの調製について詳細に説明する以下の実施例を参照することでさらに明確になる。本明細書で説明し、特許請求される発明は、本明細書に開示する詳細な実施形態によってその範囲を限定されるものではない。これらの実施形態は、本発明のいくつかの態様の説明を目的としたものである。いかなる等価な実施形態も、本発明の範囲内にあるものとする。実際、本明細書に記載したものの他に、本発明の様々な変更形態が以上の説明から当業者に明白となろう。そのような変更形態も、添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【０１０６】
〔実施例１： βラクトグロブリンのミセル化〕
βラクトグロブリン（ロットＪＥ００２−８−９２２、１３−１２−２０００）は、Ｄａｖｉｓｃｏ（米国アリゾナ州Ｌｅ Ｓｕｅｕｒ）から得た。限外濾過及びイオン交換クロマトグラフィーによって、タンパク質を甘味乳清から精製した。粉末の組成は、タンパク質８９．７％、水分８．８５％、灰分１．３６％（Ｃａ２＋ ０．０７９％、Ｍｇ２＋ ０．０１３％、Ｋ＋ ０．０９７％、Ｎａ＋ ０．５７６％、Ｃｌ− ０．０５０％）である。使用した他の試薬はすべて、分析グレードのものであった（Ｍｅｒｃｋ、ドイツ国ダルムシュタット）。
【０１０７】
タンパク質溶液は、βラクトグロブリンをＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、濃度０．２％で調製した。次いで、等分試料のｐＨを、ＨＣｌを加えて５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０に調整した。溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜３．００分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。
【０１０８】
生成物の視覚的な側面（図１）から、ミセル化の至適ｐＨが５．８であることが示唆される。
【０１０９】
〔実施例２： 乳清タンパク分離物のミセル化〕
乳清タンパク分離物（ＷＰＩ）（Ｂｉｐｒｏ（登録商標）、バッチＪＥ０３２−１−４２０）は、Ｄａｖｉｓｃｏ（米国ミネソタ州Ｌｅ Ｓｕｅｕｒ）から得た。粉末の組成は、表１で報告する。
【０１１０】
粉末乳清タンパク質をＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、タンパク質溶液をタンパク質３．４％で調製した。最初のｐＨは７．２であった。次いで、等分試料のｐＨを、０．１ＮのＨＣｌを加えて５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、及び６．６に調整した。
【０１１１】
溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜２．５０分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。
【０１１２】
加熱した乳清タンパク質の濁度は、５００ｎｍ及び２５℃で測定しておき、試料を希釈して、０．１〜３Ａｂｓ単位の範囲で測定できるようにした（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ Ｕｖｉｋｏｎ ８１０、Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）。値は、最初のタンパク質濃度３．４％について算出したものである。
【０１１３】
図２で例示するように、同じ試料について１０分以内に５００ｎｍで測定した吸光度が安定すれば（最初の値の５％未満の変動）、ミセル化のｐＨに到達したとみなした。この生成物では、ミセル化至適ｐＨは６．０〜６．２であった。熱処理前に調整したこのｐＨでは、安定な濁度は２１であり、遠心分離後に２８０ｎｍでの吸光度によって評価した残りの可溶性タンパク質は１．９％であった。ｐＨ６．０で最初のタンパク質の４５％がミセルに変換されたと結論付けることができる。
【０１１４】
【表２】
【０１１５】
〔実施例３： ミセルの顕微鏡観察〕
ミセルの生成：
粉末乳清タンパク質（ＷＰＩ９０ バッチ９８９／２、Ｌａｃｔａｌｉｓ、フランス国Ｒｅｔｉｅｒ）をＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に溶媒和させ、２０℃で２時間攪拌することによって、タンパク質溶液をタンパク質２％で調製した。次いで、等分試料のｐＨを、０．１Ｎ ＨＣｌ又は０．１Ｎ ＮａＯＨを用いて調整した。
【０１１６】
溶液を２０ｍｌ容ガラスバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に満たし、シリコン／ＰＴＦＥシールを含むアルミニウムカプセルで密封した。溶液を８５℃で１５分間加熱した（この温度に達する時間は２．３０〜２．５０分）。熱処理後、試料を氷水中で２０℃に冷却した。この生成物では、ミセル化の至適ｐＨは７．４であった。
【０１１７】
顕微鏡観察：
液体ミセル試料を、寒天ゲルチューブに封入した。固定は、２．５％のグルタルアルデヒドを０．１ＭのｐＨ７．４カコジル酸緩衝液に溶かした溶液に浸漬し、同じ緩衝液中の２％の四酸化オスミウムで固定後洗浄することによって実現した（両方の溶液が０．０４％のルテニウムレッドを含有する）。段階的な一連のエタノール（７０、８０、９０、９６、１００％エタノール）で脱水した後、試料をＳｐｕｒｒ樹脂に包埋した（Ｓｐｕｒｒ／エタノール １：１、２：１、１００％）。樹脂を重合させた後（７０℃、４８時間）、Ｌｅｉｃａ ｕｌｔｒａｃｕｔ ＵＣＴウルトラミクロトームを用い、やや薄い及びごく薄い切片を切断した。ごく薄い切片を、酢酸ウラニル及びクエン酸鉛水溶液で染色し、透過型電子顕微鏡（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２、８０ｋＶ）で調べた。
【０１１８】
ＴＥＭ顕微鏡像を図３に示す。得られたミセルは、直径２００ｎｍの球状の形を示している。
【０１１９】
粒径分布：
ｐＨ４．２５（約＋２５ｍＶのζ電位で正に帯電）及びｐＨ６．０（約−３０ｍＶのζ電位で負に帯電）で、１重量％のβラクトグロブリン分散液を８５℃で１５分間熱処理して得たミセルについて、強度に基づくミセルのサイズ分布を測定した。ミセルのＺ平均流体学的直径は、ｐＨ４．２５で２２９．３ｍｍ、ｐＨ６．０で２２７．２ｍｍであった。β−ＬＧ及び乳清タンパク質の凝集は、動的光散乱法を用いて追跡した。出力４．０ｍＷ、波長６３３ｎｍで放射するレーザーを備え付けたＮａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、英国）を使用した。この機器を、散乱角１７３°で検出を行う後方散乱の配置で使用した。これによって、混濁した試料で見られる散乱シグナルの多発がかなり減少する。試料を四角い石英セル（Ｈｅｌｌｍａ、経路長１ｃｍ）に入れた。光の経路長は、試料の濁度（漸減）に応じて、装置によって自動的に設定した。拡散強度の揺らぎから、自己相関関数を算出した。結果は図６に示す。平均的な粒子が、非常に狭い多分散指数（＜０．２００）を特徴とすることが示されている。
【０１２０】
〔実施例４： 一定ｐＨでのβラクトグロブリンのミセル化〕
２％βラクトグロブリン水溶液を使用することを条件とし、実施例１に記載の方法を繰り返した。この溶液のｐＨは、アルギニンＨＣｌ溶液を加えた後７．０に調整して、５〜２００ｍＭの最終塩濃度及び１％の最終βラクトグロブリン濃度を実現しておいた。その後、熱処理（８０℃、１０分間、約２分間の加熱）を行ってミセルを生成した。
【０１２１】
結果は図４に示すが、約５０〜７０ｍＭのイオン強度範囲でのみ、乳清タンパク質ミセルの存在を示すかなりの濁度が認められることが明白に示されている。
【０１２２】
〔実施例５： ホワイトニング剤の調製〕
未変性乳清タンパク質（ＷＰＩ９５ バッチ８４８、Ｌａｃｔａｌｉｓ、８重量％水溶液）を実施例２に従って処理した。得られる生成物の明度（Ｌ）を、２ｍｍの測定用セルを備え付けたＭａｃＢｅｔｈ ＣＥ−ＸＴＨ Ｄ６５ １０°ＳＣＥ装置を用いて、透過反射率方式で測定した。得られる明度はＬ＝７４．８であり、これは脂肪分無調整乳のＬ＝７４．５という値と同等とみなすことができた。
【０１２３】
〔実施例６： 水性フォームの調製〕
未変性βラクトグロブリン（Ｂｉｏｐｕｒｅ、Ｄａｖｉｓｃｏ、ロットＪＥ００２−８−９２２、２重量％水溶液）を１２０ｍＭのアルギニンＨＣｌ溶液と混合して、最終βラクトグロブリン濃度が１重量％、最終アルギニンＨＣｌ濃度が６０ｍＭになるようにした。次いで、１Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを７．０に調整した。次いで、混合物を８０℃で１０分間熱処理して、最初のβラクトグロブリンの９０％が、１３０ｎｍのｚ平均直径を有するミセルに変換されるようにした。この場合では、ミセルの直径は、Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、英国）を用いて測定した。試料を石英キュベットに注ぎ、散乱光の変動を自動的に記録した。得られた自己相関関数を、キュムラント法を用いて適合させて、粒子の拡散係数が算出できるようにし、その後、ストークス・アインシュタインの法則を用いてｚ平均流体学的直径が算出できるようにした。この測定では、溶媒の屈折率は、１．３３、ミセルの屈折率は１．４５として計測された。次いで、標準化されたＦｏａｍｓｃａｎｍ（商標）（ＩＴＣｏｎｃｅｐｔ）装置を用いて、得られるβラクトグロブリンミセル分散液の５０ｍＬを、１２〜１６μｍの気泡を生じるガラスフリットからの窒素注入によって泡立たせて、１８０ｃｍ３の泡沫体積を生成する。次いで、泡沫の体積安定性を、画像解析を用いて２６℃で経時的に追跡し、アルギニンＨＣｌを加えていないが同じ条件で処理したβラクトグロブリンで得られた、ミセルが生成しなかった泡沫の安定性と比較した。図５は、βラクトグロブリンミセルの存在によって、泡沫体積安定性が大いに改善されていることを示している。
【０１２４】
〔実施例７： 噴霧乾燥によって得た粉末乳清タンパク質ミセル〕
材料：
タンパク質含有量９０％の乳清タンパク分離物（ＷＰＩ、Ｐｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）、Ｌａｃｔａｌｉｓ、フランス国Ｒｅｔｉｅｒｓ）
食用ラクトース
マルトデキストリンＤＥ３９
脱イオン水
可食塩酸１Ｍ
【０１２５】
方法：
二層構造の１００Ｌ槽を用いて、脱イオン水に、泡沫生成を回避するために穏やかに攪拌しながらタンパク質濃度１０重量％でＰｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）粉末を５０℃で分散させた。すなわち、８９ｋｇの脱イオン化水に１１ｋｇのＰｒｏｌａｃｔａ９０（登録商標）を分散させた。１時間分散させた後、ＨＣｌを加えて、分散液のｐＨをミセル化ｐＨ（この場合では約６．３）に調整した。乳清タンパク質ミセルを生成するために、分散液の温度を８５℃に上昇させ、１５分間維持した。１５分後、温度を５０℃に下げ、１０重量％の乳清タンパク質ミセル分散液を５０ｋｇの２バッチに分割した。最初の試験では、２０ｋｇのラクトースを５０ｋｇのミセル分散液に５０℃で分散させ、３０分間攪拌した。同様に、２０ｋｇのマルトデキストリンＤＥ３９を、残りの５０ｋｇの乳清タンパク質ミセル分散液に加えた。
【０１２６】
次いで、２つの混合物を、ＮＩＲＯ ＳＤ６．３Ｎ塔に入れて流速１５Ｌ／ｈで噴霧乾燥した。空気投入温度は１４０℃、空気排出温度は８０℃とした。得られた粉末の含水量は５％未満であった。
【０１２７】
ラクトース及びマルトデキストリン（ＤＥ３９）存在下の水中での乳清タンパク質ミセルのサイズを、噴霧乾燥の前後に、動的光散乱法を用いて決定した。乳清タンパク質ミセルの粘性を弱くするために、噴霧乾燥前に分散液を希釈し、又は粉末を復元することによって、総タンパク質濃度を０．４重量％に設定した。Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ ＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用し、ミセル直径を２０回の測定から平均した。
【０１２８】
ラクトース及びマルトデキストリン（ＤＥ３９）存在下の乳清タンパク質ミセルについて求められた粒径は、それぞれ３１０．４ｎｍ及び３０６．６ｎｍであった。粉末を復元した後、それぞれの直径は、それぞれ２６５．３ｎｍ及び２６８．５であることがわかった。これらの測定では、乳清タンパク質ミセルが噴霧乾燥に関して物理的に安定であったことが確認される。この結果は、０．１重量％の乳清タンパク質ミセルの水中分散液を、１％のリンタングステン酸存在下、ｐＨ７でのネガティブ染色を使用するＴＥＭ顕微鏡観察によって確証が得られている。８０ｋＶで作動するＰｈｉｌｉｐｓ ＣＭ１２透過型電子顕微鏡を使用した。噴霧乾燥前、及び噴霧乾燥粉末の復元後の溶液中に、乳清タンパク質ミセルが観察された。形態及び構造のいかなる差異も検出することができなかった。
【０１２９】
〔実施例８： 蒸発による濃縮〕
Ｌａｃｔａｌｉｓの乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット５００６４８）を、タンパク質濃度４％で軟水中に１５℃で復元して、最終バッチ規模を２５００ｋｇにしておいた。１Ｍ塩酸を加えて、最終ｐＨ値が５．９０になるようにｐＨを調整した。乳清タンパク質分散液を、ｐｌａｔｅ−ｐｌａｔｅ ＡＰＶ−ｍｉｘ熱交換器を通して流速５００ｌ／ｈでポンピングした。６０℃で予熱した後、８５℃で１５分間熱処理した。乳清タンパク質ミセルの生成は、動的光散乱法を用いた粒径の測定、さらには５００ｎｍでの濁度測定によって確認した。得られた４％の乳清タンパク質ミセル分散液は、粒子流体学的半径が２５０ｎｍ、多分散指数が０．１３、濁度が８０であることを特徴とするものであった。次いで、乳清タンパク質ミセル分散液を流速５００ｌ／ｈでＳｃｈｅｆｆｅｒｓエバポレーターに送った。エバポレーター中の温度及び真空度は、タンパク質濃度が２０％である約５００ｋｇの濃縮乳清タンパク質ミセルが生成され、４℃に冷却されるように適合させた。
【０１３０】
〔実施例９： 精密濾過による濃縮〕
Ｌａｃｔａｌｉｓの乳清タンパク分離物Ｐｒｏｌａｃｔａ ９０（ロット５００６４８）を、タンパク質濃度４％で軟水中に１５℃で復元して、最終バッチ規模を２５００ｋｇにしておいた。１Ｍ塩酸を加えて、最終ｐＨ値が５．９０になるようにｐＨを調整した。乳清タンパク質分散液を、ｐｌａｔｅ−ｐｌａｔｅ ＡＰＶ−ｍｉｘ熱交換器を通して流速５００ｌ／ｈでポンピングする。６０℃で予熱した後、８５℃で１５分間熱処理した。乳清タンパク質ミセルの生成は、動的光散乱法を用いた粒径の測定、さらには５００ｎｍでの濁度測定によって確認した。得られた４％の乳清タンパク質ミセル分散液は、粒子の流体学的半径が２６０ｎｍ、多分散指数が０．０７、濁度が８０であることを特徴とするものであった。タンパク質のミセル形態もＴＥＭによっても確認すると、平均直径が１５０〜２００ｎｍであるミセル構造がはっきりと目に見えた（図９）。乳清タンパク質ミセル分散液は、貯蔵用に４℃で冷却することができ、また、そのまま使用して、６．８ｍ２のＣａｒｂｏｓｅｐ Ｍ１４メンブレンを備えた濾過ユニットに流速１８０ｌ／ｈで送ることもできた。この場合では、乳清タンパク質ミセルの濃縮は、透過液の流速が７０ｌ／ｈに到達するまで１０〜７０℃で実施した。この場合では、最終濃縮乳清タンパク質は、２０％のタンパク質を含有していた。濃縮物中のミセルの構造をＴＥＭによって確認すると、精密濾過前の４％の乳清タンパク質分散液と比べて、目に見える有意な変化は明らかに存在しなかった（図１０）。
【０１３１】
〔実施例１０： 少なくとも９０％の乳清タンパク質を含む粉末乳清タンパク質ミセル〕
精密濾過によって得られたタンパク質２０％の２００ｋｇの乳清タンパク質ミセル濃縮物（上記実施例を参照のこと）を、噴霧化ノズル（φ＝０．５ｍｍ、噴霧角度＝６５°、圧力＝４０バール）を用いて、２５ｋｇ／ｈの生成物流速でＮｉｒｏ ＳＤ６．３Ｎ塔に注入した。生成物の入口温度は１５０℃であり、出口温度は７５℃であった。塔の気流は１５０ｍ３／ｈであった。粉末の含水量は４％未満であり、粉末は非常に高い流動性を特徴とするものであった。粉末の走査型電子顕微鏡観察では、見かけ上の直径が１０〜１００μｍの範囲である非常に丸い粒子が示された（図８）。
【０１３２】
〔実施例１１： 粉末混成乳清タンパク質ミセル〕
２０ｋｇの濃縮乳清タンパク質ミセルを、ＤＥ３９のマルトデキストリン１．７ｋｇと混合して、粉末中の最終乳清タンパク質ミセル対マルトデキストリン比が７０／３０になるようにした。この混合物を、噴霧化ノズル（φ＝０．５ｍｍ、噴霧角度＝６５°、圧力＝４０バール）を用いて、２５ｋｇ／ｈの生成物流速でＮｉｒｏ ＳＤ６．３Ｎ塔に注入した。生成物の入口温度は１５０℃であり、出口温度は７５℃であった。塔中の気流は１５０ｍ３／ｈであった。粉末中の含水量は４％未満であり、粉末は、非常に高い流動性を特徴とするものであった。
【０１３３】
実施例１０及び１１の粉末は、水で復元したとき、本質的に、濃縮乳清タンパク質ミセルと同じ構造及び形態を有するミセルを含む。
【０１３４】
〔実施例１２： ３．８％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．角質除去（Ｅｘｆｏｌｉａｔｉｎｇ）シャワージェル〕
【０１３５】
【表３】
【０１３６】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭ及びバラ蒸留水を４０℃に温め、次いでグリセリン及びキサンタンガムを加えた。このブレンドを、アルキルスルホン酸塩、ココベタイン、スルホスクシナート、及びＥＤＴＡに加えた。すべての成分を攪拌して混合し、次いでソルビン酸カリウム及び着香料を加えた。
【０１３７】
〔実施例１７： １１．８％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．ＷＰＭピーリングローション〕
【０１３８】
【表４】
【０１３９】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭを７０℃に温め、次いでグリセリンを加えた。融解させた（７０℃）油相（アーモンド油、セチルアルコール、ステアリン酸、及びポリソルベート６０）を加え、均質な分散液が得られるまで攪拌した。このブレンドを室温で冷却し、次いでパラベンＤＵ及び着香料を加えた。
【０１４０】
〔実施例１８： １４％の乳清タンパク質ミセルを含む化粧品組成物の処方．ＷＰＭピーリングローション〕
【０１４１】
【表５】
【０１４２】
方法：
２０％濃縮ＷＰＭを７０℃に温め、次いでグリセリン及びプロピルトリモニウムを加えた。融解させた（７０℃）油相（ダイズ油、ＣｒｅａｍＭａｋｅｒワックス、セテアレス２０、ココベタイン、セチルアルコール）を加え、均質な分散液が得られるまで攪拌した。ブレンドを室温で冷却し、次いでパラベンＤＵ及び着香料を加えた。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１】βラクトグロブリンのミセル化に対するｐＨ及び熱処理の効果を実証する実験の結果を示す図である。
【図２】５００ｎｍでの濁度測定を用いて市販の調製物（Ｂｉｐｒｏ（登録商標）、バッチＪＥ０３２−１−４２０）のミセル化ｐＨを決定するための手段を示す図である。
【図３】ｐＨ７．４での乳清タンパク質ミセル（２重量％、ＷＰＩ９５、Ｌａｃｔａｌｉｓ）を示す透過型電子顕微鏡の顕微鏡像である。スケールバーは２００ｎｍである。
【図４】タンパク質ミセルの生成に対するイオン強度（アルギニンＨＣｌ）の影響を７．０という一定ｐＨで評価する実験の結果を示す図である。
【図５】６０ｍＭのアルギニンＨＣｌ存在下、ｐＨ７．０で１重量％のβラクトグロブリンミセル（Ｄａｖｉｓｃｏ）によって安定化させた泡沫の体積安定性（ＦＶＳ）を、非ミセル化βラクトグロブリンと対照して示す図である。
【図６】１重量％のβラクトグロブリン分散液をｐＨ２〜８、８５℃で１５分間熱処理して得た乳清タンパク質の、強度による等価な流体学的直径を示す図である。乳清タンパク質ミセルは、ｐＨ４．２５（約＋２５ｍＶのζ電位で正に帯電）及びｐＨ６．０（約−３０ｍＶのζ電位で負に帯電）で得た。ミセルのＺ平均流体学的直径は、ｐＨ４．２５で２２９．３ｎｍ、ｐＨ６．０で２２７．２ｎｍであった。ネガティブ染色後にＴＥＭによって得た、対応するミセル顕微鏡像を示す。スケールバーは１μｍである。
【図７】乳清タンパク質ミセルの極めて模式的な構造を示す図である。
【図８】精密濾過後のタンパク質含有量２０％の分散液を噴霧乾燥した後に得られた粉末乳清タンパク質ミセルのＳＥＭ（走査型電子顕微鏡法）顕微鏡像である。
【図９】タンパク質含有量４％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１０】精密濾過後にタンパク質含有量２０％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１１】８５℃で１５分間の加熱後、ＮａＣｌ存在下、ｐＨ７．０で精密濾過した後にタンパク質含有量１０％で得られた乳清タンパク質ミセル分散液の熱安定性を示す図である。
【図１２】８５℃で１５分間加熱した後、ＮａＣｌ存在下、ｐＨ７．０にてタンパク質含有量４％で得られた乳清タンパク質分散液の熱安定性を示す図である。
【図１３】５０℃で脱イオン水に分散させた後の純粋な乳清タンパク質ミセル噴霧乾燥粉末をベースとした４％乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。
【図１４】ｐＨ５．９で処理した４ｔ％のＰｒｏｌａｃｔａ ９０乳清タンパク質分離物を使用する本発明の方法によって得られたミセルのサイズ分布を示す図である。
【図１５】図８で示した噴霧乾燥粉末顆粒を切断した後の内部構造を示すＳＥＭ顕微鏡像である。
【図１６】室温で脱イオン水に分散させた後の純粋な凍結乾燥乳清タンパク質ミセル粉末をベースとした４％乳清タンパク質ミセル分散液のネガティブ染色ＴＥＭ顕微鏡像である。スケールバーは０．５マイクロメートルである。
【図１７】ｐＨ３．０で混合比を増大させた後の、ＳＢＯ（硫酸化オレイン酸ブチル）によるＷＰＭコーティングの概略図である。灰色の円：正の表面電荷を帯びたＷＰＭ。黒色の頭＋尾：ＳＢＯに由来する負の電荷をもつ頭部及び疎水性の尾部。
【図１８】４％のＮａＣｌが加えられている、蒸発後に得られた２０％の濃縮乳清タンパク質ミセルの写真である。
【図１９】トルイジンブルー染色後の粉末乳清タンパク質ミセルのやや薄い切片の明視野光学顕微鏡の顕微鏡像である。スケールバーは５０ミクロンである。
【図２０】切断後の中空乳清タンパク質ミセル粉末粒子のＳＥＭ顕微鏡像である。左：内部構造。右：粉末粒子マトリックスを構成する乳清タンパク質ミセルの詳細。スケールバーはそれぞれ１０ミクロン及び１ミクロンである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質ミセル、特に乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、研磨媒体としての使用。
【請求項２】
凝集体が、可溶性又は非可溶性の塩、ペプチド、タンパク加水分解物、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質、例えば、ミネラル、ビタミン、薬物、乳、乳タンパク質、脱脂粉乳、ミセル状カゼイン、カゼイン塩、植物性タンパク質、アミノ酸、ポリフェノール、及びこれらの任意の混合物、からなる群より選択される追加の成分を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、化粧料としての使用。
【請求項４】
化粧品組成物を製造するための、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の使用。
【請求項５】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が別の活性物質と組み合わせられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
活性物質が、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分、及びこれらの混合物、からなる群より選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が、組成物中に、少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは最大５０％の量で含まれる、請求項４〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末の形で存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
乳清タンパク質の濃度が４％より高い、好ましくは１０％より高い、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜７７０ｎｍ、好ましくは２００〜４００ｎｍの平均サイズを有する、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
化粧品組成物がシャンプーである、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
化粧品組成物がシャワージェルである、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
タンパク質ミセル、例えば、乳清タンパク質ミセル又はカゼインミセル、の局所適用。
【請求項１６】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する、請求項１５に記載の局所適用。
【請求項１７】
乳清タンパク質ミセルが組成物中に組み入れられる、請求項１５又は１６に記載の局所適用。
【請求項１８】
乳清タンパク質ミセルを皮膚に適用するステップを含む、皮膚粒子の研磨方法。
【請求項１９】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
乳清タンパク質ミセルが適用前に組成物中に組み入れられる、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
タンパク質、例えば、乳清タンパク質ミセル又はカゼインタンパク質ミセル或いはその凝集体、を含む研磨媒体を含む化粧品組成物。
【請求項２２】
乳清タンパク質ミセルが、組成物中に、少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは最大５０％の量で含まれる、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項２１又は２２に記載の組成物。
【請求項２４】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
乳清タンパク質の濃度が１％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高い、最も好ましくは５０％より高い、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
溶液、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、スプレー、シャンプー等の形態の、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
ボディーケア製品及び／又はヘアケア製品である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
シャンプーである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
シャワージェル製品である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
ａ．乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を生成するステップと、
ｂ．前記ミセル又はその凝集体を組成物中に組み入れるステップと
を含む、化粧品組成物の製造方法。
【請求項３１】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
乳清タンパク質ミセルが、懸濁液、分散液、クリーム、ゲル又は乾燥粉末の形態で存在する、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が組み入れられる組成物が、溶液、ペースト、ゲル、クリーム、フォーム又はスプレーである、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が組み入れられる組成物がシャンプーである、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる化粧品組成物。
【請求項１】
タンパク質ミセル、特に乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、研磨媒体としての使用。
【請求項２】
凝集体が、可溶性又は非可溶性の塩、ペプチド、タンパク加水分解物、色素成分、脂肪、乳化剤、香気成分、植物抽出物、リガンド又は生理活性物質、例えば、ミネラル、ビタミン、薬物、乳、乳タンパク質、脱脂粉乳、ミセル状カゼイン、カゼイン塩、植物性タンパク質、アミノ酸、ポリフェノール、及びこれらの任意の混合物、からなる群より選択される追加の成分を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の、化粧料としての使用。
【請求項４】
化粧品組成物を製造するための、乳清タンパク質ミセル又はその凝集体の使用。
【請求項５】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が別の活性物質と組み合わせられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
活性物質が、ペプチド、植物抽出物、タンパク加水分解物、生理活性物質、ビタミン、ミネラル、医薬、化粧品成分、及びこれらの混合物、からなる群より選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が、組成物中に、少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは最大５０％の量で含まれる、請求項４〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、ゲル、クリーム又は粉末の形で存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
乳清タンパク質の濃度が４％より高い、好ましくは１０％より高い、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜７７０ｎｍ、好ましくは２００〜４００ｎｍの平均サイズを有する、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
化粧品組成物がシャンプーである、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
化粧品組成物がシャワージェルである、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
タンパク質ミセル、例えば、乳清タンパク質ミセル又はカゼインミセル、の局所適用。
【請求項１６】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する、請求項１５に記載の局所適用。
【請求項１７】
乳清タンパク質ミセルが組成物中に組み入れられる、請求項１５又は１６に記載の局所適用。
【請求項１８】
乳清タンパク質ミセルを皮膚に適用するステップを含む、皮膚粒子の研磨方法。
【請求項１９】
乳清タンパク質ミセルが、分散液、懸濁液、クリーム、ゲル又は粉末の形態で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
乳清タンパク質ミセルが適用前に組成物中に組み入れられる、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
タンパク質、例えば、乳清タンパク質ミセル又はカゼインタンパク質ミセル或いはその凝集体、を含む研磨媒体を含む化粧品組成物。
【請求項２２】
乳清タンパク質ミセルが、組成物中に、少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは最大５０％の量で含まれる、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項２１又は２２に記載の組成物。
【請求項２４】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
乳清タンパク質の濃度が１％より高い、好ましくは１０％より高い、より好ましくは２０％より高い、最も好ましくは５０％より高い、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
溶液、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、スプレー、シャンプー等の形態の、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
ボディーケア製品及び／又はヘアケア製品である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
シャンプーである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
シャワージェル製品である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
ａ．乳清タンパク質ミセル又はその凝集体を生成するステップと、
ｂ．前記ミセル又はその凝集体を組成物中に組み入れるステップと
を含む、化粧品組成物の製造方法。
【請求項３１】
乳清タンパク質ミセルが、１００〜９００ｎｍの平均サイズを有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
乳清タンパク質ミセルの凝集体が、１μｍより大きい平均サイズを有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
乳清タンパク質ミセルが、懸濁液、分散液、クリーム、ゲル又は乾燥粉末の形態で存在する、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が組み入れられる組成物が、溶液、ペースト、ゲル、クリーム、フォーム又はスプレーである、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
乳清タンパク質ミセル又はその凝集体が組み入れられる組成物がシャンプーである、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる化粧品組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公表番号】特表２００９−５３１３７８（Ｐ２００９−５３１３７８Ａ）
【公表日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０２０６４（Ｐ２００９−５０２０６４）
【出願日】平成１９年３月２６日（２００７．３．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５２８８９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１０４１９
【国際公開日】平成１９年１０月４日（２００７．１０．４）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２６日（２００７．３．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５２８８９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１０４１９
【国際公開日】平成１９年１０月４日（２００７．１０．４）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
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