健康保持剤
【課題】 内臓脂肪型肥満にならないように予防する必要があるが、嗜好を変えて摂食を減らすのは精神的に苦痛を感じてなかなか続かないので、通常の食事形態をとりながら余剰エネルギーを除いてエネルギー以外の栄養素はできるかぎり摂取できる健康保持剤及び食品を提供する。
【解決手段】 リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用により糖質及び脂質の消化吸収を抑制又は阻害するグネツムのレスベラトロール２量体を有効成分として健康保持剤及び飲食品に含有させる。
【解決手段】 リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用により糖質及び脂質の消化吸収を抑制又は阻害するグネツムのレスベラトロール２量体を有効成分として健康保持剤及び飲食品に含有させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リパーゼ阻害作用及び多糖加水分解酵素阻害作用を有する新規な健康保持剤及び食品に関する。即ち、体内でエネルギー源となる脂質及び糖質の消化吸収を抑制又は阻害することにより血中の中性脂肪及び総コレステロールを低下させて万病の原因と言われている内臓脂肪型肥満を予防するための新規な健康保持剤及び食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、フレンチパラドックスの基となった赤ワインに含まれていることで周知のこととなった抗酸化作用のあるポリフェノールが求められている。日本に於いては動物性食品の摂取が増える一方で植物性食品である野菜の摂取量が減少傾向にあるので、植物の防御機構を担うポリフェノールの摂取も当然減っている。それ故に成人病・若年性成人病といった生活習慣病（内臓脂肪型肥満・メタボリックシンドローム）が増加の一途を辿っている。そこで、本発明者らは、グネツムグネモン（学名Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎ Ｌ．）の果実に初めて着目し、その利用として日持ち向上及びラジカル消去作用を有するグネツム食品（特許文献１）、グネツムエキス（特許文献２）、発酵食品（特許文献３）及びメリンジョ茶（特許文献４）の発明を行っている。
【０００３】
グネツムグネモンは、インドネシアでは若葉、花、未熟果実を野菜として、種子を潰して乾燥後油で揚げた食品（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）として利用しているにすぎず、生物作用を積極的に活用する機能性食品への利用は未だ行われていないのが現状である。
【０００４】
グネツム科グネツム属植物の生理作用に関する例として、バイマイトウ（学名：Ｇｎｅｔｕｍｕ ｍｏｎｔａｎｕｍ）の養毛作用（特許文献５）、グネツム科植物の根から得られる抽出物に含まれるレスベラトロール重合体の抗菌作用（特許文献６）、グネツムエキスのコラーゲン産生促進作用・ヒアルロン酸産生促進作用・エラスターゼ阻害作用・ヒアルロニダーゼ阻害作用（特許文献７）が開示されている。また、グネツム種子の主たる有用成分は、ポリフェノールの一種であるスチルベノイド類のレスベラトロール２量体のグネチンＣ、グネモノシドＡ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤであり、抗菌作用・抗酸化作用（ラジカル消去作用）を有することが記載されている（特許文献２）。
【０００５】
レスベラトロール単量体に関しては、ブドウ、イタドリ根やラッカセイに含まれていることが特許文献８に開示されており、ＡＭＰＫ活性化作用による脂質代謝活性化剤・肥満抑制剤・糖尿病予防改善剤・肝臓肥大抑制剤・脂肪肝抑制剤としての飲食品（特許文献９）、ペルオキシソーム増殖応答性受容体α活性化による循環器系障害（脳組織障害−脳梗塞・頭部外傷・脳塞栓・一過性脳虚血発作、心血管障害−虚血性心疾患−狭心症・心筋梗塞、脊髄組織障害−脊髄梗塞・脊髄外傷）の進展抑制医薬組成物（特許文献１０）、血糖値低下剤としての飲食品（特許文献１１）、足の浮腫み・冷えを改善させる食品組成物（特許文献１２）、持久力向上剤（特許文献１３）、四肢関節の関節痛や腰痛・坐骨神経痛の再発予防・症状緩和に有用な経口組成物（特許文献１４）、風邪およびインフルエンザ様疾患に関連した症状の予防及び治療のための組成物（特許文献１５）、インフルエンザウイルス感染の治療用剤（特許文献１６）、神経障害および神経変性疾患治療用組成物（特許文献１７）、中枢神経系疾患の進行遅延剤（特許文献１８）、抗炎症用栄養補助食品組成物（特許文献１９）、心肥大および心疾患を抑制するプロテインキナーゼＣ−μ（ＰＫＤ）阻害剤（特許文献２０）への利用、並びにブドウ由来のリスベラトロールを１５ｍｇ／ｋｇ以上含有させる飲食品の製造方法（特許文献２１）が開示されている。また、マウスを使用した皮膚ガン抑制作用（非特許文献１）、高カロリー餌摂取マウスの健康改善による寿命延長（非特許文献２）など多くの報告がある。
【０００６】
しかしながら、レスベラトロール２量体に関しては前記抗菌作用・抗酸化作用（特許文献２）及びテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用（非特許文献３）が検討されている程度に過ぎない。
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−８１４０５号公報
【特許文献２】国際特願ＰＣＴ／ＪＰ２００５−０１６８２４
【特許文献３】特願２００６−１９６２９３
【特許文献４】特願２００７−１５９９０４
【特許文献５】特開平１１−６０４５０号公報
【特許文献６】特開２００５−２３０００号公報
【特許文献７】特開２００６−１６９２２５号公報
【特許文献８】特開２００５−２８１１７９号公報
【特許文献９】特開２００６−２７３８３４号公報
【特許文献１０】特開２００３−３００９０４号公報
【特許文献１１】特開２００７−１２６３９０号公報
【特許文献１２】特開２００３−２８６８０９号公報
【特許文献１３】特開２００７−１４５８０９号公報
【特許文献１４】特開２００１−７２５８２号公報
【特許文献１５】特表２００３−５０５５００号公報
【特許文献１６】特表２００６−５０７２９５号公報
【特許文献１７】特表２００３−５１３９１７号公報
【特許文献１８】特表２００５−５３３０４２号公報
【特許文献１９】特表２００６−５２８９５０号公報
【特許文献２０】特表２００７−５０５１５８号公報
【特許文献２１】特開２００５−１４３３７７号公報
【非特許文献１】Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，２１８−２２０（１９９７）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，４４４，３３７−３４２（２００６）
【非特許文献３】Ｊ．Ｗｏｏｄ Ｓｃｉ．，４８、６４−６８（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
近年、日本人は食品の欧米化により畜肉食品の摂取が多くなるとともに脂肪の摂取が増してエネルギー（カロリー）の取り過ぎ状態になっているために内臓脂肪型肥満になる人が増加している。この状態を放置すると高脂血症、高血圧症や糖尿病などの生活習慣病を罹患し、遂には動脈硬化を引き起こして狭心症、心筋梗塞、脳梗塞や閉塞性動脈硬化症などを発症することになる。このような病気にならないためには内臓脂肪型肥満にならないように予防する必要があるが、嗜好を変えて摂食を減らすのは精神的に苦痛を感じるので、なかなか続かないのが現状である。この点に鑑み、通常の食事形態をとりながら余剰エネルギー除いてエネルギー以外の栄養素はできるかぎり摂取できる健康保持剤及び食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、グネツム果実の利用の一環として上記課題を解決するために鋭意研究を続けた結果、レスベラトロール単量体が種子に副成分として含まれているだけでなく、その２量体が新たにリパーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用により糖質及び脂質の消化吸収を抑制又は阻害するグネツムのレスベラトロール２量体を有効成分とする健康保持剤及び食品に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食としているグネツムに含まれるレスベラトロール単量体及び２量体は安全であり、単量体による種々の生物作用以外に２量体は抗菌作用及びラジカル消去作用だけでなくリパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用を有するので、健康保持剤を服用することにより消化管における糖質及び脂質の消化吸収が抑制されて血糖及び中性脂肪（血中トリグリセリド）の上昇が抑制され、血中コレステロールも低下して内臓脂肪型肥満の予防が期待される。また、このような作用を有するレスベラトロール２量体を含有する飲食品を摂取して日常生活の中で内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防するのに貢献できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で言うグネツムはグネツム科に属する植物のことであり、その中のグネモン（別名メリンジョ、学名Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎ Ｌ．、英名Ｇｎｅｍｏｎ ｔｒｅｅ、インドネシア名Ｍｅｌｉｎｊｏ、Ｂｅｌｉｎｊｏ）は、東南アジアで広く栽培され、インドネシアでは若葉、花、果実を野菜として食され、その種子は潰してから乾燥し、油で揚げて（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）食されており好適である。本発明には可食部である果実、種子、葉及び花を用いる。必要ならば根も混合することができる。使用する果実及び種子は、未熟又は完熟を問わず、そのままでもよく、果皮及び種皮を剥離した中身の仁、即ち胚及び胚乳（内乳）が好ましく、乾燥及び未乾燥（生）のいずれでも好適であり、裁断機や破砕機で破砕してもよく、粉砕機で粉砕してもよい。グネツムをそのまま或いはこのように処理したものを一般的方法により溶媒抽出して得られるエキス又は特許文献２におけるエキスが好適である。また、特許文献２で残留した破砕内乳及び油で揚げていないウンピンも同様に使用することができる。
【００１２】
本発明で言うレスベラトロール２量体は、スチルベノイドに属するレスベラトロールが２分子結合した化合物のことであり、グネチンＣ及びその配糖体であるグネモノシドＡ、グネモノシドＢ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤ、グネチンＤ、ビニフェリン及びその配糖体であるグネモノシドＥ、グネモノールＭ、グネモノールＥなどがある。
【００１３】
本発明で言う健康保持剤は，レスベラトロール２量体を有効成分とし、これに任意の助剤、賦形剤などを配合して固形剤化、或いは水または有機溶媒などを適宜配合して液剤化したものである。本発明の健康保持剤を、内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防のために経口剤として用いる場合の服用（投与）量は、服用の目的や服用者の状況（性別、年齢、体重、肥満度、総合的健康度合いなど）により異なるが、通常、１日の服用量として、グネツムエキス（抽出物）を重量換算で、１〜５００ｍｇ／体重ｋｇの範囲で服用することができる。５００ｍｇ／体重ｋｇを超える服用も何ら問題はない。
【００１４】
本発明におけるリパーゼとは、グリセロールエステルを加水分解して脂肪酸を遊離する狭義の意味ではなく、いわゆる脂肪酸エステルを脂肪酸とアルコールに加水分解する酵素のことを指し、動植物及び微生物に広く分布している。
【００１５】
本発明における多糖加水分解酵素とは、二糖類以上の多糖を加水分解して糖鎖を短くする酵素のことであり、例えば人や動物の唾液及び膵液のα−アミラーゼは澱粉を加水分解してマルトースを産生する酵素である。α−グルコシダーゼは人や動物の小腸に存在し、植物や微生物などにも広く存在し、マルターゼやシュクラーゼを包含し、非還元末端に存在するα―グルコシド結合を加水分解する酵素で、マルトースやショ糖などの２糖類を加水分解して単糖に変換する。
【００１６】
本発明で言う中性脂肪低下作用及び血糖低下作用は、単に中性脂肪及び血糖だけでなく同様に内臓脂肪型肥満の要因とされている総コレステロール及び低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の上昇を抑えて基準内（正常）にすることを意味し、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）を高めて肥満を抑制（抗肥満）することである。
【００１７】
本発明で言う飲食品は、レスベラトロール２量体を有効成分として含有又は配合する飲食物であり、特定保健用食品とすることができ、そのまま、或いは従来食品に使用されている各種成分と共に配合することにより製造される。食品の形態としては、固形食品、クリームやジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等のあらゆる食品形態とすることができ、例えば、顆粒、錠剤、カプセル、ドリンク剤などの製剤、常用されている任意の基材を配合する清涼飲料、ジュース、コーヒー、紅茶、リキュール、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、飴（キャンデー）、キャラメル、チューインガム、チョコレート、グミ、アイスクリーム、プディング、卵製品、羊羹、水羊羹、おかき、餅、団子、煎餅、クレープ、お好み焼き、パン、クッキー、麺類、ハンバーグ、水練製品、てんぷら、発酵食品などの飲食物が挙げられる。
【００１８】
必要ならば、明日葉、甘茶、アマチャヅル、アロエ、イチョウ葉、ウーロン茶、ウコン、ウラジロガシ、エゾウコギ、エゾウコギ、オオバコ、カキオドシ、柿、カミツレ、カモミール、カリン、ガルシニア、河原決明、菊花、クチナシ、桑、クコ、月桂樹、紅茶、紅豆杉、コンフリー、昆布、桜、サフラン、シイタケ、シソ、ショウガ、しょうが、スギナ、スワンギ、セキショウ、センダングサ、センブリ、ソバ、タマリン度、タラノキ、タンポポ、チコリ、杜仲、ナタマメ、ニワトコ、ネズミモチ、ハトムギ、ハブ、松葉、マテ、麦茶、メグスリノキ、ユーカリ、ヨモギ、羅漢果、緑茶、ルイボス、霊芝、ガランガル、ギムネマ、グァバ葉、ゲンノショウコ、玄米、ゴボウ、ドクダミ、バナバ、ビワの葉、紅花などのいわゆる生薬・健康茶及びそれらの抽出物などを添加配合してもよい。
【００１９】
必要に応じてエリスリトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、果糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、サイクロデキストリンなどを混合して苦味や渋みをマスクすることができる。
【００２０】
本発明の飲食品を内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防のために用いるにあたり、飲食品としての風味や色調を考慮すると，グネツムそのまま及び／又はそのエキスの配合量は乾燥重量換算で０．０１〜９０％の範囲、好ましくは、０．０５〜８０％の範囲である。本発明の飲食品は、その種類に応じてブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖などの甘味料、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸などの酸味料、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌーα−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウムなどの酸化防止剤、グリセリン、プロピレングリコールなどの品質改良剤、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルなどの乳化剤、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天などの糊料（増粘剤、安定剤、ゲル化剤）、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウムなどの強化剤、アミノ酸などの調味料、カルシウム塩類、着色料、膨張剤、着香料、保存料など、一般的飲食品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００２１】
また、目的に応じて通常動物飼料に用いられている各種成分を適宜配合して粉末、顆粒、ペースト、カプセル、シロップ、固形状、ゲル状、液状、懸濁液、乳液などの形態とすることにより家畜用飼料やキャットフード、ドッグフードやウサギ用フードなどのペットフードなどの動物飼料とすることができる。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２３】
実施例１（粉末の製造）
グネモンの乾燥内乳１０ｋｇを粉砕機で粉砕してグネツム粉末９．７ｋｇを得た。
【００２４】
実施礼２（エキスの製造及び成分の単離）
グネモンの乾燥果実１６．２ｋｇの粉砕物を５０％エタノール８０Ｌに２日間浸漬し、抽出液を減圧濃縮乾固してグネツムエキスを１３００ｇ（収率８％）得た。本エキスの１／２０量６５ｇをセパビーズＳＰ８２５（ダイヤイオン）カラムクロマトグラフィーにより溶出順にまとめて分画１、２及び３とした。分画２をセファーデックスＬＨ２０カラムクロマトグラフィーにより分離精製して［α］５４６ ＋６８．３°（ｃ＝０．７、メタノール、２３）の淡褐色無定形固体としてグネモノシドＡを２．７ｇ（収率０．３４％）を得た。分画３をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離精製してｍｐ２７５−６℃（分解）の白色微細柱状晶としてトランス−レスベラトロール０．１６ｇ（収率０．０２％）、［α］５４６ −２３．２°（ｃ＝０．５，メタノール，２３）の淡黄色無定形固体としてグネチンＣを３．６６ｇ（収率０．４５％）及びｍｐ２０５−６°、［α］５４６ −６５．６°（ｃ＝０．６，メタノール，３４）の微褐色針状晶としてグネモノシドＤを４．３６ｇ（収率０．５４％）得た。このようにして得られたグネツムエキス並びにグネモノシドＡ、トランス−レスベラトロール、グネチンＣ及びグネモノシドＤを以下の試験に試料として供した。
【００２５】
実施例３（リパーゼ阻害試験）
本試験には塩化ナトリウム（０．１５Ｍ）及び塩化カルシウム（１．３ｍＭ）を含有するｐＨ８の１３ｍＭトリス緩衝液を用いた。本緩衝液に溶かした０．１ｍＭオレイン酸４−メチルウンベリフェリル溶液０．５ｍＬに試料の１０％メタノール溶液０．２５ｍＬを加え、次いで本緩衝液に溶かしたリパーゼ溶液（豚膵液由来、シグマ製）０．２５ｍＬを加えてよく混合し、２５℃で３０分間反応させた後、ｐＨ４．２の０．１Ｍクエン酸緩衝液４ｍＬを加えて反応を停止させた。リパーゼの働きにより生じる４−メチルウンベリフェロンに基づく本反応液の蛍光強度（励起波長３５５ｎｍ、発光波長４６０ｎｍ）を測定してリパーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めた。その結果、実施例２のグネツムエキスが７．１ｐｐｍ、グネチンＣが３．４μＭ、グネモノシドＤが１４μＭ及びグネモノシドＡが１７μＭであったが、レスベラトロールは２０μＭ濃度で阻害率が８％であった。
【００２６】
実施例４（α−アミラーゼ阻害試験）
本試験には塩化ナトリウム（８０ｍＭ）及び塩化カルシウム（１０ｍＭ）を含有するｐＨ７の１０ｍＭトリス緩衝液を用いた。本緩衝液に溶かしたα−アミラーゼ溶液（豚膵液由来、シグマ製）０．２ｍＬと試料の１０％メタノール溶液２ｍＬの混合液に、本緩衝液に溶かした０．４％馬鈴薯澱粉溶液２ｍＬを加えてよく混合し、３７℃で２０分間反応させた。本反応液１ｍＬに０．５Ｍ塩酸０．５ｍＬを加えて反応を停止させ、０．２ｍＭヨウ素液３．５ｍＬを加えて混合した後、精製水５ｍＬを加えて６００ｎｍにおける吸光度を測定した。試料溶液の代わりに１０％メタノール２ｍＬ、更にα−アミラーゼ溶液の代わりに本緩衝液０．２ｍＬを加えてそれぞれ対照及びブランクとし、同様に操作して吸光度を測定した。それらの吸光度からα−アミラーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めたところ、実施例２のグネツムエキスが４９ｐｐｍ、グネチンＣが２５μＭ、グネモノシドＤが９３μＭ及びグネモノシドＡが１２８μＭであったが、レスベラトロールは２００μＭ濃度で阻害率が６％であった。
【００２７】
実施例５（α−グルコシダーゼ阻害試験）
３０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７）に溶かしたα―グルコシダーゼ（イースト由来、シグマ製）溶液０．２５ｍＬと試料の１０％メタノール溶液０．２５ｍＬの混合液に、同緩衝液に溶かした０．１％マルトース溶液０．５ｍＬを加えてよく混合し、３７℃で３０分間反応させた後、反応液０．５ｍＬをグルコースＣII−テストワコー発色液（和光純薬工業製）３ｍＬに加えて混合・発色させ、５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。試料溶液の代わりに１０％メタノール０．２５ｍＬ、更にα−グルコシダーゼ溶液の代わりに同緩衝液０．２５ｍＬを加えてそれぞれ対照及びブランクとし、同様に操作して吸光度を測定した。それらの吸光度からα−グルコシダーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めたところ、実施例２のグネツムエキスが１４ｐｐｍ、グネチンＣが６．２μＭ、グネモノシドＤが２２μＭ及びグネモノシドＡが３５μＭであったが、レスベラトロールは５０μＭ濃度で阻害率が７％であった。
【００２８】
実施例６（錠剤の製造）
実施例２のグネツムエキス５００ｇ、デキストリン（マックス１０００、松谷化学製）５００ｇ、乳糖１０００ｇ及びステアリン酸マグネシウム１０ｇを混合し、本混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤（グネツムエキス５０ｍｇ含有）を製造した。
【００２９】
実施例７（ショ糖負荷試験−血糖値上昇抑制試験）
本試験の趣旨に同意した中性脂肪及び総コレステロール値が過去３年間に亘り高めの被験者（３５〜５９歳；男性３名；女性２名）を被験者として、食後の血糖値に及ぼす本発明の健康保持剤の影響を調べるためにショ糖負荷試験を行った。被験者は、試験前日２２時以降絶食し、当日９時前後にショ糖５０ｇを水２００ｍＬと共に飲んで試験を開始した。実施例６の錠剤は試験５分前に４錠（エキス量：２００ｍｇ）服用し、血糖値は、開始時、３０分、１時間及び２時間後に採血してグルコースＣII−テストワコー（和光純薬工業製）を用いる方法により測定した。また、同じ被験者に対してグネツムエキスを含まない錠剤をプラセボとして同様の試験を行った。なお、両試験は１週間の間隔を空けて行った。その結果、実施例６の錠剤を服用したときの血糖値の平均値は、開始時が９３ｍｇ／ｄＬ、３０分後が１３２ｍｇ／ｄＬ、１時間後が１１４ｍｇ／ｄＬ、２時間後が８７ｍｇ／ｄＬであり、プラセボの場合は、開始時が９３ｍｇ／ｄＬ、３０分後が１４５ｍｇ／ｄＬ、１時間後が１２６ｍｇ／ｄＬ、２時間後が９３ｍｇ／ｄＬであった。したがって、本発明の健康保持剤の服用により血糖値の上昇を抑制する効果が認められた。
【００３０】
実施例８（血中脂質低下試験）
実施例７と同じ５名の被験者（中性脂肪値：１８５〜２４９ｍｇ／ｄＬ、総コレステロール値：２１１〜２４５ｍｇ／ｄＬ）に、実施例６の錠剤を毎食後に４錠（エキス量：２００ｍｇ）ずつ、１日３回、１４日間服用させた。なお、食事は特に制限を付けず通常のメニューとした。試験実施前及び服用１４日間後の血液検査を行い、中性脂肪、総コレステロール及び高密度リポタンパク質コレステロール値を調べた。その結果、中性脂肪値は、男性被験者の平均値が試験実施前２２８ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１２０ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前１９４ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１３９ｍｇ／ｄＬであった。総コレステロール値は、男性被験者の平均値が試験実施前２３１ｍｇ／ｄＬ、試験実施後２０２ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前２１７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１８８ｍｇ／ｄＬであった。高密度リポタンパク質コレステロール値は、男性被験者の平均値が試験実施前４７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後５２ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前５７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後８６ｍｇ／ｄＬであった。したがって、本発明の健康保持剤の服用により、服用前に比して中性脂肪は男性で４７％、女性で２９％減少し、総コレステロールも男性で１３％、女性で１３％減少したのに対し、高密度リポタンパク質コレステロールは男性で１１％、女性で５１％増加したことから、内臓脂肪型肥満の指標である中性脂肪及び総コレステロールが低下して善玉コレステロールと言われている高密度リポタンパク質コレステロールが上昇し、健康が改善された。なお、本発明の健康保持剤服用による体調の変化はなく、血液検査、その他の血液生化学検査及び尿検査の検査値のいずれも異常がなく、副作用も認められなかった。
【００３１】
実施例９（キャンディー）
実施例２のグネツムエキス１部、グラニュー糖２８０部、水飴２１０部、ク エ ン酸５部、香料１部及び色素１部を配合してキャンディーを製造した。本キャンディーは苦みもなく、味は良好であった。
【００３２】
実施例１０（ジュース）
実施例２のグネツムエキス１部、冷凍濃縮温州みかん果汁２５部、果糖ブドウ糖液糖５５部、クエン酸１部、Ｌ−アスコルビン酸０．１部、香料１部、色素０．５部及び水４００部を配合してジュースを製造した。本ジュースはみかんの風味や色に変化がなかった。
【００３３】
実施例１１（チューインガム）
実施例２のグネツムエキス１部、チューインガムベース３００部、ショ糖８００部、水飴３００部、軟化剤６０、香料１３部及び色素１部を配合してチューインガムを製造した。本チューインガムは苦みもなく、味は良好であった。
【００３４】
実施例１２（チョコレート）
実施例２のグネツムエキス１部、チョコレート２２０部、ショ糖７５、カカオバター１００部及び全脂粉乳１００部を配合してチョコレートを製造した。配合されたグネツムエキスがチョコレートの風味や色に影響を与えることはなく、美味しいものであった。
【００３５】
実施例１３（クッキー）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉２．３部、全卵１．６部、マーガリン１．９部、上白糖２．５部、ベーキングパウダー０．０２及び水０．７３部を配合してクッキーを製造した。本クッキーは風味がよくて苦みもなく、味は良好であった。
【００３６】
実施例１４（おかき））
実施例１のグネツム粉末１部、餅粉１部、食塩０．０２部及び水２部を配合しておかきを製造した。本おかきは風味が良く、良好な味であった。
【００３７】
実施例１５（クレープ）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉０．４部、全卵０．２部、牛乳０．２部、食塩０．０１部、バニラエッセンス適量及び水１．２部を配合してクレープを製造した。本クレープは良好な風味と味を有していた。
【００３８】
実施例１６（固形ドッグフード）
実施例１のグネツム粉末１部、ミートミール１．９部、チキンエキス０．２５部、植物油脂０．２５部、炭水化物０．９部、炭酸カルシウム０．０２５部、食塩０．０１部、複合ビタミン剤０．０５部及び水０．５部を配合してドッグフードを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食としているグネツムに含まれるレスベラトロール単量体及び２量体は安全であり、単量体による種々の生物作用以外に２量体は抗菌作用及びラジカル消去作用だけでなくリパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用を有するので、健康保持剤を服用することにより消化管における糖質及び脂質の消化吸収が抑制されて血糖及び血中トリグリセリド（中性脂肪）の上昇が抑制され、血中コレステロールも低下し、高密度リポタンパク質コレステロールは上昇して内臓脂肪型肥満の予防が期待され、生活習慣病の予防に有用である。また、レスベラトロール２量体を含有した飲食品を摂取して日常生活の中で内臓脂肪型肥満や単なる肥満の改善あるいは予防に貢献できる。したがって、健康な人はもちろん、太り気味の人のためのダイエット飲食品或いは糖尿病患者用の飲食品としても有用である。更に、本発明の健康保持剤及び飲食品を飼料として使用することはペットや家畜などの動物のダイエット及び糖尿病や肥満の改善或いは予防に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リパーゼ阻害作用及び多糖加水分解酵素阻害作用を有する新規な健康保持剤及び食品に関する。即ち、体内でエネルギー源となる脂質及び糖質の消化吸収を抑制又は阻害することにより血中の中性脂肪及び総コレステロールを低下させて万病の原因と言われている内臓脂肪型肥満を予防するための新規な健康保持剤及び食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、フレンチパラドックスの基となった赤ワインに含まれていることで周知のこととなった抗酸化作用のあるポリフェノールが求められている。日本に於いては動物性食品の摂取が増える一方で植物性食品である野菜の摂取量が減少傾向にあるので、植物の防御機構を担うポリフェノールの摂取も当然減っている。それ故に成人病・若年性成人病といった生活習慣病（内臓脂肪型肥満・メタボリックシンドローム）が増加の一途を辿っている。そこで、本発明者らは、グネツムグネモン（学名Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎ Ｌ．）の果実に初めて着目し、その利用として日持ち向上及びラジカル消去作用を有するグネツム食品（特許文献１）、グネツムエキス（特許文献２）、発酵食品（特許文献３）及びメリンジョ茶（特許文献４）の発明を行っている。
【０００３】
グネツムグネモンは、インドネシアでは若葉、花、未熟果実を野菜として、種子を潰して乾燥後油で揚げた食品（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）として利用しているにすぎず、生物作用を積極的に活用する機能性食品への利用は未だ行われていないのが現状である。
【０００４】
グネツム科グネツム属植物の生理作用に関する例として、バイマイトウ（学名：Ｇｎｅｔｕｍｕ ｍｏｎｔａｎｕｍ）の養毛作用（特許文献５）、グネツム科植物の根から得られる抽出物に含まれるレスベラトロール重合体の抗菌作用（特許文献６）、グネツムエキスのコラーゲン産生促進作用・ヒアルロン酸産生促進作用・エラスターゼ阻害作用・ヒアルロニダーゼ阻害作用（特許文献７）が開示されている。また、グネツム種子の主たる有用成分は、ポリフェノールの一種であるスチルベノイド類のレスベラトロール２量体のグネチンＣ、グネモノシドＡ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤであり、抗菌作用・抗酸化作用（ラジカル消去作用）を有することが記載されている（特許文献２）。
【０００５】
レスベラトロール単量体に関しては、ブドウ、イタドリ根やラッカセイに含まれていることが特許文献８に開示されており、ＡＭＰＫ活性化作用による脂質代謝活性化剤・肥満抑制剤・糖尿病予防改善剤・肝臓肥大抑制剤・脂肪肝抑制剤としての飲食品（特許文献９）、ペルオキシソーム増殖応答性受容体α活性化による循環器系障害（脳組織障害−脳梗塞・頭部外傷・脳塞栓・一過性脳虚血発作、心血管障害−虚血性心疾患−狭心症・心筋梗塞、脊髄組織障害−脊髄梗塞・脊髄外傷）の進展抑制医薬組成物（特許文献１０）、血糖値低下剤としての飲食品（特許文献１１）、足の浮腫み・冷えを改善させる食品組成物（特許文献１２）、持久力向上剤（特許文献１３）、四肢関節の関節痛や腰痛・坐骨神経痛の再発予防・症状緩和に有用な経口組成物（特許文献１４）、風邪およびインフルエンザ様疾患に関連した症状の予防及び治療のための組成物（特許文献１５）、インフルエンザウイルス感染の治療用剤（特許文献１６）、神経障害および神経変性疾患治療用組成物（特許文献１７）、中枢神経系疾患の進行遅延剤（特許文献１８）、抗炎症用栄養補助食品組成物（特許文献１９）、心肥大および心疾患を抑制するプロテインキナーゼＣ−μ（ＰＫＤ）阻害剤（特許文献２０）への利用、並びにブドウ由来のリスベラトロールを１５ｍｇ／ｋｇ以上含有させる飲食品の製造方法（特許文献２１）が開示されている。また、マウスを使用した皮膚ガン抑制作用（非特許文献１）、高カロリー餌摂取マウスの健康改善による寿命延長（非特許文献２）など多くの報告がある。
【０００６】
しかしながら、レスベラトロール２量体に関しては前記抗菌作用・抗酸化作用（特許文献２）及びテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用（非特許文献３）が検討されている程度に過ぎない。
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−８１４０５号公報
【特許文献２】国際特願ＰＣＴ／ＪＰ２００５−０１６８２４
【特許文献３】特願２００６−１９６２９３
【特許文献４】特願２００７−１５９９０４
【特許文献５】特開平１１−６０４５０号公報
【特許文献６】特開２００５−２３０００号公報
【特許文献７】特開２００６−１６９２２５号公報
【特許文献８】特開２００５−２８１１７９号公報
【特許文献９】特開２００６−２７３８３４号公報
【特許文献１０】特開２００３−３００９０４号公報
【特許文献１１】特開２００７−１２６３９０号公報
【特許文献１２】特開２００３−２８６８０９号公報
【特許文献１３】特開２００７−１４５８０９号公報
【特許文献１４】特開２００１−７２５８２号公報
【特許文献１５】特表２００３−５０５５００号公報
【特許文献１６】特表２００６−５０７２９５号公報
【特許文献１７】特表２００３−５１３９１７号公報
【特許文献１８】特表２００５−５３３０４２号公報
【特許文献１９】特表２００６−５２８９５０号公報
【特許文献２０】特表２００７−５０５１５８号公報
【特許文献２１】特開２００５−１４３３７７号公報
【非特許文献１】Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，２１８−２２０（１９９７）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，４４４，３３７−３４２（２００６）
【非特許文献３】Ｊ．Ｗｏｏｄ Ｓｃｉ．，４８、６４−６８（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
近年、日本人は食品の欧米化により畜肉食品の摂取が多くなるとともに脂肪の摂取が増してエネルギー（カロリー）の取り過ぎ状態になっているために内臓脂肪型肥満になる人が増加している。この状態を放置すると高脂血症、高血圧症や糖尿病などの生活習慣病を罹患し、遂には動脈硬化を引き起こして狭心症、心筋梗塞、脳梗塞や閉塞性動脈硬化症などを発症することになる。このような病気にならないためには内臓脂肪型肥満にならないように予防する必要があるが、嗜好を変えて摂食を減らすのは精神的に苦痛を感じるので、なかなか続かないのが現状である。この点に鑑み、通常の食事形態をとりながら余剰エネルギー除いてエネルギー以外の栄養素はできるかぎり摂取できる健康保持剤及び食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、グネツム果実の利用の一環として上記課題を解決するために鋭意研究を続けた結果、レスベラトロール単量体が種子に副成分として含まれているだけでなく、その２量体が新たにリパーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、リパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用により糖質及び脂質の消化吸収を抑制又は阻害するグネツムのレスベラトロール２量体を有効成分とする健康保持剤及び食品に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食としているグネツムに含まれるレスベラトロール単量体及び２量体は安全であり、単量体による種々の生物作用以外に２量体は抗菌作用及びラジカル消去作用だけでなくリパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用を有するので、健康保持剤を服用することにより消化管における糖質及び脂質の消化吸収が抑制されて血糖及び中性脂肪（血中トリグリセリド）の上昇が抑制され、血中コレステロールも低下して内臓脂肪型肥満の予防が期待される。また、このような作用を有するレスベラトロール２量体を含有する飲食品を摂取して日常生活の中で内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防するのに貢献できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で言うグネツムはグネツム科に属する植物のことであり、その中のグネモン（別名メリンジョ、学名Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎ Ｌ．、英名Ｇｎｅｍｏｎ ｔｒｅｅ、インドネシア名Ｍｅｌｉｎｊｏ、Ｂｅｌｉｎｊｏ）は、東南アジアで広く栽培され、インドネシアでは若葉、花、果実を野菜として食され、その種子は潰してから乾燥し、油で揚げて（ウンピン；ｅｍｐｉｎｇ）食されており好適である。本発明には可食部である果実、種子、葉及び花を用いる。必要ならば根も混合することができる。使用する果実及び種子は、未熟又は完熟を問わず、そのままでもよく、果皮及び種皮を剥離した中身の仁、即ち胚及び胚乳（内乳）が好ましく、乾燥及び未乾燥（生）のいずれでも好適であり、裁断機や破砕機で破砕してもよく、粉砕機で粉砕してもよい。グネツムをそのまま或いはこのように処理したものを一般的方法により溶媒抽出して得られるエキス又は特許文献２におけるエキスが好適である。また、特許文献２で残留した破砕内乳及び油で揚げていないウンピンも同様に使用することができる。
【００１２】
本発明で言うレスベラトロール２量体は、スチルベノイドに属するレスベラトロールが２分子結合した化合物のことであり、グネチンＣ及びその配糖体であるグネモノシドＡ、グネモノシドＢ、グネモノシドＣ及びグネモノシドＤ、グネチンＤ、ビニフェリン及びその配糖体であるグネモノシドＥ、グネモノールＭ、グネモノールＥなどがある。
【００１３】
本発明で言う健康保持剤は，レスベラトロール２量体を有効成分とし、これに任意の助剤、賦形剤などを配合して固形剤化、或いは水または有機溶媒などを適宜配合して液剤化したものである。本発明の健康保持剤を、内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防のために経口剤として用いる場合の服用（投与）量は、服用の目的や服用者の状況（性別、年齢、体重、肥満度、総合的健康度合いなど）により異なるが、通常、１日の服用量として、グネツムエキス（抽出物）を重量換算で、１〜５００ｍｇ／体重ｋｇの範囲で服用することができる。５００ｍｇ／体重ｋｇを超える服用も何ら問題はない。
【００１４】
本発明におけるリパーゼとは、グリセロールエステルを加水分解して脂肪酸を遊離する狭義の意味ではなく、いわゆる脂肪酸エステルを脂肪酸とアルコールに加水分解する酵素のことを指し、動植物及び微生物に広く分布している。
【００１５】
本発明における多糖加水分解酵素とは、二糖類以上の多糖を加水分解して糖鎖を短くする酵素のことであり、例えば人や動物の唾液及び膵液のα−アミラーゼは澱粉を加水分解してマルトースを産生する酵素である。α−グルコシダーゼは人や動物の小腸に存在し、植物や微生物などにも広く存在し、マルターゼやシュクラーゼを包含し、非還元末端に存在するα―グルコシド結合を加水分解する酵素で、マルトースやショ糖などの２糖類を加水分解して単糖に変換する。
【００１６】
本発明で言う中性脂肪低下作用及び血糖低下作用は、単に中性脂肪及び血糖だけでなく同様に内臓脂肪型肥満の要因とされている総コレステロール及び低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の上昇を抑えて基準内（正常）にすることを意味し、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）を高めて肥満を抑制（抗肥満）することである。
【００１７】
本発明で言う飲食品は、レスベラトロール２量体を有効成分として含有又は配合する飲食物であり、特定保健用食品とすることができ、そのまま、或いは従来食品に使用されている各種成分と共に配合することにより製造される。食品の形態としては、固形食品、クリームやジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等のあらゆる食品形態とすることができ、例えば、顆粒、錠剤、カプセル、ドリンク剤などの製剤、常用されている任意の基材を配合する清涼飲料、ジュース、コーヒー、紅茶、リキュール、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、飴（キャンデー）、キャラメル、チューインガム、チョコレート、グミ、アイスクリーム、プディング、卵製品、羊羹、水羊羹、おかき、餅、団子、煎餅、クレープ、お好み焼き、パン、クッキー、麺類、ハンバーグ、水練製品、てんぷら、発酵食品などの飲食物が挙げられる。
【００１８】
必要ならば、明日葉、甘茶、アマチャヅル、アロエ、イチョウ葉、ウーロン茶、ウコン、ウラジロガシ、エゾウコギ、エゾウコギ、オオバコ、カキオドシ、柿、カミツレ、カモミール、カリン、ガルシニア、河原決明、菊花、クチナシ、桑、クコ、月桂樹、紅茶、紅豆杉、コンフリー、昆布、桜、サフラン、シイタケ、シソ、ショウガ、しょうが、スギナ、スワンギ、セキショウ、センダングサ、センブリ、ソバ、タマリン度、タラノキ、タンポポ、チコリ、杜仲、ナタマメ、ニワトコ、ネズミモチ、ハトムギ、ハブ、松葉、マテ、麦茶、メグスリノキ、ユーカリ、ヨモギ、羅漢果、緑茶、ルイボス、霊芝、ガランガル、ギムネマ、グァバ葉、ゲンノショウコ、玄米、ゴボウ、ドクダミ、バナバ、ビワの葉、紅花などのいわゆる生薬・健康茶及びそれらの抽出物などを添加配合してもよい。
【００１９】
必要に応じてエリスリトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、果糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、サイクロデキストリンなどを混合して苦味や渋みをマスクすることができる。
【００２０】
本発明の飲食品を内臓脂肪型肥満や単なる肥満を改善あるいは予防のために用いるにあたり、飲食品としての風味や色調を考慮すると，グネツムそのまま及び／又はそのエキスの配合量は乾燥重量換算で０．０１〜９０％の範囲、好ましくは、０．０５〜８０％の範囲である。本発明の飲食品は、その種類に応じてブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖などの甘味料、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸などの酸味料、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌーα−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウムなどの酸化防止剤、グリセリン、プロピレングリコールなどの品質改良剤、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルなどの乳化剤、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天などの糊料（増粘剤、安定剤、ゲル化剤）、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウムなどの強化剤、アミノ酸などの調味料、カルシウム塩類、着色料、膨張剤、着香料、保存料など、一般的飲食品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００２１】
また、目的に応じて通常動物飼料に用いられている各種成分を適宜配合して粉末、顆粒、ペースト、カプセル、シロップ、固形状、ゲル状、液状、懸濁液、乳液などの形態とすることにより家畜用飼料やキャットフード、ドッグフードやウサギ用フードなどのペットフードなどの動物飼料とすることができる。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２３】
実施例１（粉末の製造）
グネモンの乾燥内乳１０ｋｇを粉砕機で粉砕してグネツム粉末９．７ｋｇを得た。
【００２４】
実施礼２（エキスの製造及び成分の単離）
グネモンの乾燥果実１６．２ｋｇの粉砕物を５０％エタノール８０Ｌに２日間浸漬し、抽出液を減圧濃縮乾固してグネツムエキスを１３００ｇ（収率８％）得た。本エキスの１／２０量６５ｇをセパビーズＳＰ８２５（ダイヤイオン）カラムクロマトグラフィーにより溶出順にまとめて分画１、２及び３とした。分画２をセファーデックスＬＨ２０カラムクロマトグラフィーにより分離精製して［α］５４６ ＋６８．３°（ｃ＝０．７、メタノール、２３）の淡褐色無定形固体としてグネモノシドＡを２．７ｇ（収率０．３４％）を得た。分画３をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離精製してｍｐ２７５−６℃（分解）の白色微細柱状晶としてトランス−レスベラトロール０．１６ｇ（収率０．０２％）、［α］５４６ −２３．２°（ｃ＝０．５，メタノール，２３）の淡黄色無定形固体としてグネチンＣを３．６６ｇ（収率０．４５％）及びｍｐ２０５−６°、［α］５４６ −６５．６°（ｃ＝０．６，メタノール，３４）の微褐色針状晶としてグネモノシドＤを４．３６ｇ（収率０．５４％）得た。このようにして得られたグネツムエキス並びにグネモノシドＡ、トランス−レスベラトロール、グネチンＣ及びグネモノシドＤを以下の試験に試料として供した。
【００２５】
実施例３（リパーゼ阻害試験）
本試験には塩化ナトリウム（０．１５Ｍ）及び塩化カルシウム（１．３ｍＭ）を含有するｐＨ８の１３ｍＭトリス緩衝液を用いた。本緩衝液に溶かした０．１ｍＭオレイン酸４−メチルウンベリフェリル溶液０．５ｍＬに試料の１０％メタノール溶液０．２５ｍＬを加え、次いで本緩衝液に溶かしたリパーゼ溶液（豚膵液由来、シグマ製）０．２５ｍＬを加えてよく混合し、２５℃で３０分間反応させた後、ｐＨ４．２の０．１Ｍクエン酸緩衝液４ｍＬを加えて反応を停止させた。リパーゼの働きにより生じる４−メチルウンベリフェロンに基づく本反応液の蛍光強度（励起波長３５５ｎｍ、発光波長４６０ｎｍ）を測定してリパーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めた。その結果、実施例２のグネツムエキスが７．１ｐｐｍ、グネチンＣが３．４μＭ、グネモノシドＤが１４μＭ及びグネモノシドＡが１７μＭであったが、レスベラトロールは２０μＭ濃度で阻害率が８％であった。
【００２６】
実施例４（α−アミラーゼ阻害試験）
本試験には塩化ナトリウム（８０ｍＭ）及び塩化カルシウム（１０ｍＭ）を含有するｐＨ７の１０ｍＭトリス緩衝液を用いた。本緩衝液に溶かしたα−アミラーゼ溶液（豚膵液由来、シグマ製）０．２ｍＬと試料の１０％メタノール溶液２ｍＬの混合液に、本緩衝液に溶かした０．４％馬鈴薯澱粉溶液２ｍＬを加えてよく混合し、３７℃で２０分間反応させた。本反応液１ｍＬに０．５Ｍ塩酸０．５ｍＬを加えて反応を停止させ、０．２ｍＭヨウ素液３．５ｍＬを加えて混合した後、精製水５ｍＬを加えて６００ｎｍにおける吸光度を測定した。試料溶液の代わりに１０％メタノール２ｍＬ、更にα−アミラーゼ溶液の代わりに本緩衝液０．２ｍＬを加えてそれぞれ対照及びブランクとし、同様に操作して吸光度を測定した。それらの吸光度からα−アミラーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めたところ、実施例２のグネツムエキスが４９ｐｐｍ、グネチンＣが２５μＭ、グネモノシドＤが９３μＭ及びグネモノシドＡが１２８μＭであったが、レスベラトロールは２００μＭ濃度で阻害率が６％であった。
【００２７】
実施例５（α−グルコシダーゼ阻害試験）
３０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７）に溶かしたα―グルコシダーゼ（イースト由来、シグマ製）溶液０．２５ｍＬと試料の１０％メタノール溶液０．２５ｍＬの混合液に、同緩衝液に溶かした０．１％マルトース溶液０．５ｍＬを加えてよく混合し、３７℃で３０分間反応させた後、反応液０．５ｍＬをグルコースＣII−テストワコー発色液（和光純薬工業製）３ｍＬに加えて混合・発色させ、５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。試料溶液の代わりに１０％メタノール０．２５ｍＬ、更にα−グルコシダーゼ溶液の代わりに同緩衝液０．２５ｍＬを加えてそれぞれ対照及びブランクとし、同様に操作して吸光度を測定した。それらの吸光度からα−グルコシダーゼ活性を５０％阻害する試料の濃度（ＩＣ５０）を求めたところ、実施例２のグネツムエキスが１４ｐｐｍ、グネチンＣが６．２μＭ、グネモノシドＤが２２μＭ及びグネモノシドＡが３５μＭであったが、レスベラトロールは５０μＭ濃度で阻害率が７％であった。
【００２８】
実施例６（錠剤の製造）
実施例２のグネツムエキス５００ｇ、デキストリン（マックス１０００、松谷化学製）５００ｇ、乳糖１０００ｇ及びステアリン酸マグネシウム１０ｇを混合し、本混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤（グネツムエキス５０ｍｇ含有）を製造した。
【００２９】
実施例７（ショ糖負荷試験−血糖値上昇抑制試験）
本試験の趣旨に同意した中性脂肪及び総コレステロール値が過去３年間に亘り高めの被験者（３５〜５９歳；男性３名；女性２名）を被験者として、食後の血糖値に及ぼす本発明の健康保持剤の影響を調べるためにショ糖負荷試験を行った。被験者は、試験前日２２時以降絶食し、当日９時前後にショ糖５０ｇを水２００ｍＬと共に飲んで試験を開始した。実施例６の錠剤は試験５分前に４錠（エキス量：２００ｍｇ）服用し、血糖値は、開始時、３０分、１時間及び２時間後に採血してグルコースＣII−テストワコー（和光純薬工業製）を用いる方法により測定した。また、同じ被験者に対してグネツムエキスを含まない錠剤をプラセボとして同様の試験を行った。なお、両試験は１週間の間隔を空けて行った。その結果、実施例６の錠剤を服用したときの血糖値の平均値は、開始時が９３ｍｇ／ｄＬ、３０分後が１３２ｍｇ／ｄＬ、１時間後が１１４ｍｇ／ｄＬ、２時間後が８７ｍｇ／ｄＬであり、プラセボの場合は、開始時が９３ｍｇ／ｄＬ、３０分後が１４５ｍｇ／ｄＬ、１時間後が１２６ｍｇ／ｄＬ、２時間後が９３ｍｇ／ｄＬであった。したがって、本発明の健康保持剤の服用により血糖値の上昇を抑制する効果が認められた。
【００３０】
実施例８（血中脂質低下試験）
実施例７と同じ５名の被験者（中性脂肪値：１８５〜２４９ｍｇ／ｄＬ、総コレステロール値：２１１〜２４５ｍｇ／ｄＬ）に、実施例６の錠剤を毎食後に４錠（エキス量：２００ｍｇ）ずつ、１日３回、１４日間服用させた。なお、食事は特に制限を付けず通常のメニューとした。試験実施前及び服用１４日間後の血液検査を行い、中性脂肪、総コレステロール及び高密度リポタンパク質コレステロール値を調べた。その結果、中性脂肪値は、男性被験者の平均値が試験実施前２２８ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１２０ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前１９４ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１３９ｍｇ／ｄＬであった。総コレステロール値は、男性被験者の平均値が試験実施前２３１ｍｇ／ｄＬ、試験実施後２０２ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前２１７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後１８８ｍｇ／ｄＬであった。高密度リポタンパク質コレステロール値は、男性被験者の平均値が試験実施前４７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後５２ｍｇ／ｄＬ、女性被験者の平均値が試験実施前５７ｍｇ／ｄＬ、試験実施後８６ｍｇ／ｄＬであった。したがって、本発明の健康保持剤の服用により、服用前に比して中性脂肪は男性で４７％、女性で２９％減少し、総コレステロールも男性で１３％、女性で１３％減少したのに対し、高密度リポタンパク質コレステロールは男性で１１％、女性で５１％増加したことから、内臓脂肪型肥満の指標である中性脂肪及び総コレステロールが低下して善玉コレステロールと言われている高密度リポタンパク質コレステロールが上昇し、健康が改善された。なお、本発明の健康保持剤服用による体調の変化はなく、血液検査、その他の血液生化学検査及び尿検査の検査値のいずれも異常がなく、副作用も認められなかった。
【００３１】
実施例９（キャンディー）
実施例２のグネツムエキス１部、グラニュー糖２８０部、水飴２１０部、ク エ ン酸５部、香料１部及び色素１部を配合してキャンディーを製造した。本キャンディーは苦みもなく、味は良好であった。
【００３２】
実施例１０（ジュース）
実施例２のグネツムエキス１部、冷凍濃縮温州みかん果汁２５部、果糖ブドウ糖液糖５５部、クエン酸１部、Ｌ−アスコルビン酸０．１部、香料１部、色素０．５部及び水４００部を配合してジュースを製造した。本ジュースはみかんの風味や色に変化がなかった。
【００３３】
実施例１１（チューインガム）
実施例２のグネツムエキス１部、チューインガムベース３００部、ショ糖８００部、水飴３００部、軟化剤６０、香料１３部及び色素１部を配合してチューインガムを製造した。本チューインガムは苦みもなく、味は良好であった。
【００３４】
実施例１２（チョコレート）
実施例２のグネツムエキス１部、チョコレート２２０部、ショ糖７５、カカオバター１００部及び全脂粉乳１００部を配合してチョコレートを製造した。配合されたグネツムエキスがチョコレートの風味や色に影響を与えることはなく、美味しいものであった。
【００３５】
実施例１３（クッキー）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉２．３部、全卵１．６部、マーガリン１．９部、上白糖２．５部、ベーキングパウダー０．０２及び水０．７３部を配合してクッキーを製造した。本クッキーは風味がよくて苦みもなく、味は良好であった。
【００３６】
実施例１４（おかき））
実施例１のグネツム粉末１部、餅粉１部、食塩０．０２部及び水２部を配合しておかきを製造した。本おかきは風味が良く、良好な味であった。
【００３７】
実施例１５（クレープ）
実施例１のグネツム粉末１部、薄力粉０．４部、全卵０．２部、牛乳０．２部、食塩０．０１部、バニラエッセンス適量及び水１．２部を配合してクレープを製造した。本クレープは良好な風味と味を有していた。
【００３８】
実施例１６（固形ドッグフード）
実施例１のグネツム粉末１部、ミートミール１．９部、チキンエキス０．２５部、植物油脂０．２５部、炭水化物０．９部、炭酸カルシウム０．０２５部、食塩０．０１部、複合ビタミン剤０．０５部及び水０．５部を配合してドッグフードを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によると、東南アジアで量が豊富で常食としているグネツムに含まれるレスベラトロール単量体及び２量体は安全であり、単量体による種々の生物作用以外に２量体は抗菌作用及びラジカル消去作用だけでなくリパーゼ阻害作用、α−アミラーゼ阻害作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用を有するので、健康保持剤を服用することにより消化管における糖質及び脂質の消化吸収が抑制されて血糖及び血中トリグリセリド（中性脂肪）の上昇が抑制され、血中コレステロールも低下し、高密度リポタンパク質コレステロールは上昇して内臓脂肪型肥満の予防が期待され、生活習慣病の予防に有用である。また、レスベラトロール２量体を含有した飲食品を摂取して日常生活の中で内臓脂肪型肥満や単なる肥満の改善あるいは予防に貢献できる。したがって、健康な人はもちろん、太り気味の人のためのダイエット飲食品或いは糖尿病患者用の飲食品としても有用である。更に、本発明の健康保持剤及び飲食品を飼料として使用することはペットや家畜などの動物のダイエット及び糖尿病や肥満の改善或いは予防に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グネツムのレスベラトロール２量体を有効成分とすることを特徴とする健康保持剤
【請求項２】
前記有効成分がリパーゼ阻害作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項３】
前記有効成分が多糖加水分解酵素阻害作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項４】
前記有効成分が中性脂肪低下作用及び／又は血糖低下作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項５】
グネツムのレスベラトロール２量体を含有し、中性脂肪低下作用及び／又は血糖低下作用を有することを特徴とする飲食品
【請求項１】
グネツムのレスベラトロール２量体を有効成分とすることを特徴とする健康保持剤
【請求項２】
前記有効成分がリパーゼ阻害作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項３】
前記有効成分が多糖加水分解酵素阻害作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項４】
前記有効成分が中性脂肪低下作用及び／又は血糖低下作用を有することを特徴とする請求項１記載の健康保持剤
【請求項５】
グネツムのレスベラトロール２量体を含有し、中性脂肪低下作用及び／又は血糖低下作用を有することを特徴とする飲食品
【公開番号】特開２００９−１３１２３（Ｐ２００９−１３１２３Ａ）
【公開日】平成２１年１月２２日（２００９．１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１７７９６７（Ｐ２００７−１７７９６７）
【出願日】平成１９年７月６日（２００７．７．６）
【出願人】（３９１０１２０４０）株式会社ホソダＳＨＣ (14)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１月２２日（２００９．１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月６日（２００７．７．６）
【出願人】（３９１０１２０４０）株式会社ホソダＳＨＣ (14)
【Ｆターム（参考）】
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