傷の治癒のためのハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル及びその製造方法
本発明は、傷の治癒のためのハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル及びその製造方法に関するもので、更に詳細には、水性媒質に非イオン性界面活性剤及び成長因子即ちＰ物質、ヒト由来細胞などが分散されたハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル組成物、この創傷治癒のための用途及びその製造方法に関するものである。
本発明のハイドロゲル状の組成物は、創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果及び細胞を保護する効果があり、扱いやすく便利であるという長所を持っている。よって、本発明の組成物を身体の一部の損傷部位に塗布或いは注射することで、組成物内の細胞が損傷部位に伝達され、創傷を効果的に治癒することができる。
本発明のハイドロゲル状の組成物は、創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果及び細胞を保護する効果があり、扱いやすく便利であるという長所を持っている。よって、本発明の組成物を身体の一部の損傷部位に塗布或いは注射することで、組成物内の細胞が損傷部位に伝達され、創傷を効果的に治癒することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷治癒のためのハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル及びその製造方法に関するもので、更に詳細には、水性媒質に非イオン性界面活性剤及びＰ物質、ヒト由来細胞などが分散されたハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル組成物、この創傷治癒のための用途及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
身体組織の損傷時における組織再建に関する研究は、長い間様々な人々によって進められてきた。薬物による組織再建や、細胞を利用した組織再建などがそれである。しかし、これらの薬物及び細胞をどのように損傷した組織にどんな組成でどのように伝達するのかということも重要な問題の１つである。こうした薬物及び細胞を伝達する方法としては、簡単に溶液状で用いたりもし、更にはコラーゲンのような生体材料を利用したシート、スポンジ及び不織布の形態を利用したり、フィブリン粘着剤を利用したりもする。
【０００３】
Ｐ物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−ｐ）は、１１のアミノ酸からなるニューロペプタイドであり、幾つかの細胞及び肉芽組織で発現されると報告されている。幾つかの研究では、角膜組織の損傷においてＰ物質が角膜再建に役立つことが報告されている。これは、単純に溶液状で使用したものであって、組織の損傷部位に長い間留まることができないという短所がある。
【０００４】
細胞を利用した組織再建は、現在何種類かの多様な形態で利用されている。シート状は皮膚、軟骨、心血関係など、細胞をシート（ｓｈｅｅｔ）状に培養して、損傷部位に適用するもので、培養皿からシート状に剥がすため、酵素（ｅｎｚｙｍｅ）による細胞の損傷で細胞の分裂能力に支障を与えうるという短所が指摘されている。かかる問題点が台頭し、施術が容易で移植しにくい部位にも簡単に生着することができる細胞懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）状が注目されている。しかし、細胞懸濁液もまた組織損傷部位に留まらずに流れるという問題があり、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）のような生態粘着剤のように用いなければならない。従って、細胞を、損傷した組織に生着を妨害しないと共に安定的に適用できる方法が要求されている。
【０００５】
非イオン界面活性剤は、水に溶けてもイオン化しないが、湿潤性が豊富で、刺激が少ないため、化粧水の可溶化剤、クリームの乳化剤及びクレンジングクリームの洗浄剤などの用途として用いられている。また、一部の非イオン界面活性剤は、医療用賦型剤などに用いられている。非イオン界面活性剤は、細胞に対する毒性が少なく、物性に優れているにもかかわらず、細胞の付着能力を阻害するという認識があり、細胞治療剤のビヒクルとしては使用できないと考えられてきた。
【０００６】
非イオン界面活性剤の親油基と親水基との程度の差に応じて溶解度、湿潤力、浸透力、乳化力及び可溶化力などの性質が異なり得る。かかる特性を利用して、非イオン界面活性剤の種類、濃度調節及び適切な生体材料を加味することで、薬物及び細胞の種類と損傷した組織の位置に応じて適切な組成を作りやすくなる。
【０００７】
従来技術として、中胚葉幹細胞及び／またはＰ物質を含む創傷治癒用組成物が公開されている（韓国特許公開１０−２００６−００３７１７６）。しかし、上記特許は、単純な１つ或いは２つの物質を混合した場合、創傷部位から離脱しやすいため、その効果を見るのが難しく、使用にも不便であった。従って、それらを創傷部位に適切に伝達（ｄｅｌｉｖｅｒｌｙ）する方法が必要である。
【０００８】
本発明者等は、細胞を効果的に伝達する方法に関して研究する中で、産業全般に用いているものの、細胞治療等には用いられていなかった非イオン界面活性剤を利用して、ハイドロゲル状の組成物を製造し試験した結果、これが細胞伝達に適するということを発見した。
【０００９】
本発明者等は、創傷を負ったマウスでＩＧＦ即ちＰ物質が含まれたハイドロゲルの使用が容易で、ハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見し、創傷を負ったマウスで中胚葉幹細胞が含まれたハイドロゲルがハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見し、創傷を負ったマウスで皮膚細胞が含まれたハイドロゲルがハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明の主たる目的は、非イオン性界面活性剤を利用したハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、上記非イオン性界面活性剤以外にＰ物質または細胞などを含む創傷治療のためのハイドロゲル組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、上記本発明の組成物の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一態様によると、本発明は、水性媒質に非イオン性界面活性剤が分散されてなるハイドロゲル状を有する細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)用ビヒクル組成物を提供する。
【００１４】
一般的に、ハイドロゲルは、親水性高分子が共有または非共有結合で架橋され作られた三次元網状構造物をいう。構成物質の親水性によって、水溶液内及び水性環境下で多量の水を吸収し膨潤するが、架橋構造により溶解しない性質を持っている。本発明において、ハイドロゲルは水性媒質に親水性高分子の一種である非イオン性界面活性剤が分散され作られる。
【００１５】
本発明において、細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)とは、創傷治癒などの目的で組成物内の細胞を適用部位である皮膚等の人体に伝達することを意味し、その際、上記組成物が細胞を入れるビヒクルまたは担体としての役割をする。
【００１６】
本発明の組成物において、前記水性媒質(ａｑｕｅｏｕｓ ｍｅｄｉｕｍ)は、人体に有害ではなく親水性を有する非イオン性界面活性剤が分散し得る如何なる水性媒質も可能であるが、好ましくは生理食塩水、リン酸緩衝溶液(ＰＢＳ)、及び細胞培養培地からなる群より選択されることを特徴とする。
【００１７】
本発明の組成物において、前記非イオン性界面活性剤は、電荷を帯びる部分はないものの、ヒドロキシ基やエチレンオキサイド基による水との水性結合によって親水性を有するようになる。非イオン性界面活性剤としては、たとえば高級アルコール、アルキルフェノールのエチレンオキサイド付加物であるポリエチレングリコール(Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ)誘導体、またはグリセリン(ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ)、ペンタエリトリトール(ｐｅｎｔａｅｒｙｔｒｉｔｏｌ)、ソルビトール(ｓｏｒｂｉｔｏｌ)、砂糖(ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ)などのポリヒドロキシ(ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙ)化合物の部分エステル類である多価アルコール(ｐｏｌｙｏｌ)誘導体等が使用できる。好ましくは、ポリエチレングリコール縮合物、例えば、脂肪酸ポリエチレングリコール縮合物(Ｎｉｏｓｏｌ, Ｍｙｒｊ)、脂肪酸アマイドポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アルコールポリエチレングリコール縮合物(Ｌｅｏｎｉｌ， Ｐｅｒｅｇａｌ Ｃ)、脂肪族アミンポリエチレングリコール縮合物、脂肪族メルカプタンポリエチレングリコール縮合物(Ｎｙｏｎ ２１８)、アルキルフェノールポリエチレングリコール縮合物(Ｉｇｅｐａｌ)及びポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物(Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ)またはこれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とし、最も好ましくは、ポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物であるポロキサマー、プルロニック(Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ, Ｐｌｕｒｏｎｉｃ)であることを特徴とする。
【００１８】
本発明において、非イオン性界面活性剤の炭化水素の鎖長は５，０００〜２０，０００分子量(ＭＷ)、ＥＯの付加物数は５０〜８０ｗｔ％であることが好ましい。炭化水素の鎖長が短すぎると十分な網状構造がきちんと形成されず、長すぎると水性媒質にきちんと分散されない。ＥＯの付加物数が多すぎるとゲル状にならず、少なすぎると親水性が減少する。
【００１９】
本発明の組成物において、前記非イオン性界面活性剤は、水性媒質に対して１５〜５０％の重量比で混合され分散されることを特徴とする。前記非イオン性界面活性剤の重量比(濃度)が低すぎるとハイドロゲル状にきちんとならず、高すぎると水性媒質にきちんと溶解されない。
【００２０】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるＩＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、及びＧＭＣＳＦからなる群より選択された成長因子または物質−Ｐ(Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ)をさらに含むことを特徴とする。前記成長因子または物質−Ｐは、本発明の組成物で上皮細胞の移動と繊維芽細胞の増殖を促進する役割を行う。
【００２１】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷の治癒を助けるコラーゲン(Ｃｏｌｌａｇｅｎ)、ヒアルロン酸(Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ)、グリコサミノグリカン(Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｅｓ)、ファイブロネクチン(Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)またはこれらの混合物からなる群より選択された細胞間物質(ＥＣＭ)をさらに含むことを特徴とする。前記細胞間物質は、本発明の組成物で細胞の付着能を増加させ、創傷治癒を促進させる役割を行う。
【００２２】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷の治癒を助けるカルボキシメチルセルロース(Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ)、アルギン酸(Ａｌｇｉｎａｔｅ)、キトサン(Ｃｈｉｔｏｓａｎ)、 ポリカプロラクトン(Ｐｏｌｙ(ｅ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ))、ポリ乳酸(Ｐｏｌｙ(ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ))、ポリグリコール酸(Ｐｏｌｙ(ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ))、ハイドロキシアパタイト (Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ)、リン酸三カルシウム(Ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ)またはこれらの混合物で構成された群より選択された生体材料(Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ)をさらに含むことを特徴とする。前記生体材料は、本発明の組成物でハイドロゲルの物性向上及び生体適合性を向上させる役割を行う。
【００２３】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、細胞をさらに含むことを特徴とする。前記組成物に含まれた細胞は、人体の適用部位に伝達され、創傷治癒等に用いられる。前記細胞の例としては、皮膚角質細胞、繊維芽細胞、色素細胞、中胚葉幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、骨髄細胞、神経細胞、上皮細胞またはこれらの混合物等が挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物において、前記細胞伝達は、創傷治癒のためであることを特徴とする。本発明で、創傷治癒とは皮膚細胞の損傷による創傷を治療や緩和することを意味する。本発明の組成物によって伝達された細胞が創傷部位の損傷した細胞を代替または補充して創傷を治癒することになる。
【００２５】
本発明の組成物は、ハイドロゲルの形態で製剤化され、創傷部位に直接塗布または注射器等によって投与できる。上記組成物は、細胞治療に一般的に用いられる薬剤学的担体と共に投与でき、このような担体として生理学的食塩水を例として挙げられる。
【００２６】
本発明の組成物は、創傷治癒等のために治療学的に有効な量で投与する。用語「治療学的に有効な量(ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ)」は、医学的治療に適用できる合理的な恩恵／危険の割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効量は疾病の重症度、年齢、性別、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時に用いられる薬物を含む要素及びその他医学分野でよく知られている要素に応じて決められる。上記要素を全て考慮して、副作用がなく最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、当業者によって容易に決定でき、例えば、成人基準で１回１ｍｇないし１０００ｍｇの本発明の組成物を投与することができる。細胞基準では、例えば、１回３×１０４ないし３×１０７の細胞／ｋｇのＭＳＣを投与することができる。
【００２７】
本発明の実施例では、本発明の組成物が創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果（図２乃至８）並びに細胞を保護する効果（図９）があることを証明した。また、本発明の組成物は、使用が簡単・便利であるという長所を有している。さらに、本発明の組成物において、非イオン界面活性剤にコラーゲンのような生体材料を混合すると、さらに大きなシナジーを起こし得るということは容易に考え出せるであろう。最も好ましくは、本発明のハイドロゲルの組成は、細胞及び／またはＰ物質、生理食塩水または細胞培養培地、非イオン界面活性剤、そして生体材料を混合して製造できるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明することにする。これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものであるので、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されはしない。
【００２９】
実施例１
50μｌの生理食塩水に１２ｐｍｏｌｅの物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７（ＢＡＳＦ社）を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲルを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較した。図２は、物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）の肉眼観察の結果、実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。
【００３０】
また、それぞれ１０ｍｌの生理食塩水に２ｇ、２．５ｇ及び３ｇのＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ１２７を溶解して２０％、２５％及び３０％のハイドロゲルを製造した。該ハイドロゲルをレオメータ（ＣＶＯ，ＢＯＨＬＩＮ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を利用して温度（１５〜３０℃）による粘度変化を観察した。図１は、２０％、２５％及び３０％の濃度でプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ） Ｆ１２７の温度（１５〜３０℃）による粘度変化を示した結果である。非イオン性界面活性剤の濃度に応じて、ハイドロゲルの特性が変化することが分かる。温度に応じて粘度を変化させ得る濃度が組織再生のために生体に注入する場合にさらに有利であるが、生体外部に塗布または付着する場合には、温度による粘度変化に関係ない。
【００３１】
実施例２
５０μｌの中胚葉幹細胞（ＭＳＣ：ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）培養培地（ＭＳＣＧＭ）に１×１０６個の中胚葉幹細胞及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲル５０μｌを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。適用後６日目に再度同じ組成のハイドロゲルを適用し、初期適用の後１４日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較し、組織学的観察を行う。図３は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用後１４日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図４は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３２】
実施例３
５０μｌの皮膚細胞培養培地（ＤＭＥＭ）に５×１０５個の皮膚細胞（繊維芽細胞、角質細胞及び色素細胞）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲル５０μｌを適用する。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較し、組織学的観察を行う。図５は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図６は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３３】
実施例４
５０μｌの生理食塩水に２５ｍｌのＩＧＦ（Ｉｎｓｕｌｉｎｅ ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７（ＢＡＳＦ社）を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲルを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較した。図７は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図８は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３４】
実施例５
９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに２×１０４個の皮膚細胞（繊維芽細胞、角質細胞及び色素細胞）を接種し、３７℃のインキュベータで１６時間培養する。培地を除去し、それぞれのｗｅｌｌ当りのハイドロゲルを濃度別で皮膚細胞の培養培地に希釈して入れ、陰性対照群として１００μｌ２．５ｍＭのＥＤＴＡを入れる。４℃で１６時間反応させ、除去する。ＭＴＴ溶液と細胞培養培地を１：９で混ぜて、３７℃で４時間反応させ、ＰＢＳで洗浄した後、ＤＭＳＯとエタノールを１：１で混ぜた溶液で２０分間攪拌して５４０ｎｍでＯＤ値を測定する。図９は、ハイドロゲルの皮膚細胞における安定性の実験結果のグラフである。４℃での細胞安定性は、ハイドロゲルを添加することで、対照群（ＤＭＥＭ）より増加し、特に、２０、２５％添加時、対照群に比べて細胞安定性が約１．５倍増加した。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
以上説明したように、本発明のハイドロゲル状の組成物は、創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果（図２乃至８）並びに細胞を保護する効果（図９）があり、使用が簡単・便利であるという長所を有している。従って、本発明の組成物を身体の一部の損傷時に塗布或いは注射することによって、組成物内の細胞が損傷部位に伝達されて、創傷を効果的に治癒することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、２０％、２５％及び３０％の濃度でプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ） Ｆ１２７の温度（１５〜３０℃）による粘度変化を示す結果である。
【図２】図２は、物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図３】図３は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図４】図４は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図５】図５は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図６】図６は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図７】図７は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図８】図８は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）示す。
【図９】図９は、ハイドロゲルの皮膚細胞の安定性実験結果のグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷治癒のためのハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル及びその製造方法に関するもので、更に詳細には、水性媒質に非イオン性界面活性剤及びＰ物質、ヒト由来細胞などが分散されたハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル組成物、この創傷治癒のための用途及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
身体組織の損傷時における組織再建に関する研究は、長い間様々な人々によって進められてきた。薬物による組織再建や、細胞を利用した組織再建などがそれである。しかし、これらの薬物及び細胞をどのように損傷した組織にどんな組成でどのように伝達するのかということも重要な問題の１つである。こうした薬物及び細胞を伝達する方法としては、簡単に溶液状で用いたりもし、更にはコラーゲンのような生体材料を利用したシート、スポンジ及び不織布の形態を利用したり、フィブリン粘着剤を利用したりもする。
【０００３】
Ｐ物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−ｐ）は、１１のアミノ酸からなるニューロペプタイドであり、幾つかの細胞及び肉芽組織で発現されると報告されている。幾つかの研究では、角膜組織の損傷においてＰ物質が角膜再建に役立つことが報告されている。これは、単純に溶液状で使用したものであって、組織の損傷部位に長い間留まることができないという短所がある。
【０００４】
細胞を利用した組織再建は、現在何種類かの多様な形態で利用されている。シート状は皮膚、軟骨、心血関係など、細胞をシート（ｓｈｅｅｔ）状に培養して、損傷部位に適用するもので、培養皿からシート状に剥がすため、酵素（ｅｎｚｙｍｅ）による細胞の損傷で細胞の分裂能力に支障を与えうるという短所が指摘されている。かかる問題点が台頭し、施術が容易で移植しにくい部位にも簡単に生着することができる細胞懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）状が注目されている。しかし、細胞懸濁液もまた組織損傷部位に留まらずに流れるという問題があり、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）のような生態粘着剤のように用いなければならない。従って、細胞を、損傷した組織に生着を妨害しないと共に安定的に適用できる方法が要求されている。
【０００５】
非イオン界面活性剤は、水に溶けてもイオン化しないが、湿潤性が豊富で、刺激が少ないため、化粧水の可溶化剤、クリームの乳化剤及びクレンジングクリームの洗浄剤などの用途として用いられている。また、一部の非イオン界面活性剤は、医療用賦型剤などに用いられている。非イオン界面活性剤は、細胞に対する毒性が少なく、物性に優れているにもかかわらず、細胞の付着能力を阻害するという認識があり、細胞治療剤のビヒクルとしては使用できないと考えられてきた。
【０００６】
非イオン界面活性剤の親油基と親水基との程度の差に応じて溶解度、湿潤力、浸透力、乳化力及び可溶化力などの性質が異なり得る。かかる特性を利用して、非イオン界面活性剤の種類、濃度調節及び適切な生体材料を加味することで、薬物及び細胞の種類と損傷した組織の位置に応じて適切な組成を作りやすくなる。
【０００７】
従来技術として、中胚葉幹細胞及び／またはＰ物質を含む創傷治癒用組成物が公開されている（韓国特許公開１０−２００６−００３７１７６）。しかし、上記特許は、単純な１つ或いは２つの物質を混合した場合、創傷部位から離脱しやすいため、その効果を見るのが難しく、使用にも不便であった。従って、それらを創傷部位に適切に伝達（ｄｅｌｉｖｅｒｌｙ）する方法が必要である。
【０００８】
本発明者等は、細胞を効果的に伝達する方法に関して研究する中で、産業全般に用いているものの、細胞治療等には用いられていなかった非イオン界面活性剤を利用して、ハイドロゲル状の組成物を製造し試験した結果、これが細胞伝達に適するということを発見した。
【０００９】
本発明者等は、創傷を負ったマウスでＩＧＦ即ちＰ物質が含まれたハイドロゲルの使用が容易で、ハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見し、創傷を負ったマウスで中胚葉幹細胞が含まれたハイドロゲルがハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見し、創傷を負ったマウスで皮膚細胞が含まれたハイドロゲルがハイドロゲルを処理しなかったマウスに比べて創傷治癒が早くなされることを発見した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明の主たる目的は、非イオン性界面活性剤を利用したハイドロゲル状の細胞伝達用ビヒクル組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、上記非イオン性界面活性剤以外にＰ物質または細胞などを含む創傷治療のためのハイドロゲル組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、上記本発明の組成物の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一態様によると、本発明は、水性媒質に非イオン性界面活性剤が分散されてなるハイドロゲル状を有する細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)用ビヒクル組成物を提供する。
【００１４】
一般的に、ハイドロゲルは、親水性高分子が共有または非共有結合で架橋され作られた三次元網状構造物をいう。構成物質の親水性によって、水溶液内及び水性環境下で多量の水を吸収し膨潤するが、架橋構造により溶解しない性質を持っている。本発明において、ハイドロゲルは水性媒質に親水性高分子の一種である非イオン性界面活性剤が分散され作られる。
【００１５】
本発明において、細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)とは、創傷治癒などの目的で組成物内の細胞を適用部位である皮膚等の人体に伝達することを意味し、その際、上記組成物が細胞を入れるビヒクルまたは担体としての役割をする。
【００１６】
本発明の組成物において、前記水性媒質(ａｑｕｅｏｕｓ ｍｅｄｉｕｍ)は、人体に有害ではなく親水性を有する非イオン性界面活性剤が分散し得る如何なる水性媒質も可能であるが、好ましくは生理食塩水、リン酸緩衝溶液(ＰＢＳ)、及び細胞培養培地からなる群より選択されることを特徴とする。
【００１７】
本発明の組成物において、前記非イオン性界面活性剤は、電荷を帯びる部分はないものの、ヒドロキシ基やエチレンオキサイド基による水との水性結合によって親水性を有するようになる。非イオン性界面活性剤としては、たとえば高級アルコール、アルキルフェノールのエチレンオキサイド付加物であるポリエチレングリコール(Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ)誘導体、またはグリセリン(ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ)、ペンタエリトリトール(ｐｅｎｔａｅｒｙｔｒｉｔｏｌ)、ソルビトール(ｓｏｒｂｉｔｏｌ)、砂糖(ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ)などのポリヒドロキシ(ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙ)化合物の部分エステル類である多価アルコール(ｐｏｌｙｏｌ)誘導体等が使用できる。好ましくは、ポリエチレングリコール縮合物、例えば、脂肪酸ポリエチレングリコール縮合物(Ｎｉｏｓｏｌ, Ｍｙｒｊ)、脂肪酸アマイドポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アルコールポリエチレングリコール縮合物(Ｌｅｏｎｉｌ， Ｐｅｒｅｇａｌ Ｃ)、脂肪族アミンポリエチレングリコール縮合物、脂肪族メルカプタンポリエチレングリコール縮合物(Ｎｙｏｎ ２１８)、アルキルフェノールポリエチレングリコール縮合物(Ｉｇｅｐａｌ)及びポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物(Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ)またはこれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とし、最も好ましくは、ポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物であるポロキサマー、プルロニック(Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ, Ｐｌｕｒｏｎｉｃ)であることを特徴とする。
【００１８】
本発明において、非イオン性界面活性剤の炭化水素の鎖長は５，０００〜２０，０００分子量(ＭＷ)、ＥＯの付加物数は５０〜８０ｗｔ％であることが好ましい。炭化水素の鎖長が短すぎると十分な網状構造がきちんと形成されず、長すぎると水性媒質にきちんと分散されない。ＥＯの付加物数が多すぎるとゲル状にならず、少なすぎると親水性が減少する。
【００１９】
本発明の組成物において、前記非イオン性界面活性剤は、水性媒質に対して１５〜５０％の重量比で混合され分散されることを特徴とする。前記非イオン性界面活性剤の重量比(濃度)が低すぎるとハイドロゲル状にきちんとならず、高すぎると水性媒質にきちんと溶解されない。
【００２０】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるＩＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、及びＧＭＣＳＦからなる群より選択された成長因子または物質−Ｐ(Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ)をさらに含むことを特徴とする。前記成長因子または物質−Ｐは、本発明の組成物で上皮細胞の移動と繊維芽細胞の増殖を促進する役割を行う。
【００２１】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷の治癒を助けるコラーゲン(Ｃｏｌｌａｇｅｎ)、ヒアルロン酸(Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ)、グリコサミノグリカン(Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｅｓ)、ファイブロネクチン(Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)またはこれらの混合物からなる群より選択された細胞間物質(ＥＣＭ)をさらに含むことを特徴とする。前記細胞間物質は、本発明の組成物で細胞の付着能を増加させ、創傷治癒を促進させる役割を行う。
【００２２】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、創傷の治癒を助けるカルボキシメチルセルロース(Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ)、アルギン酸(Ａｌｇｉｎａｔｅ)、キトサン(Ｃｈｉｔｏｓａｎ)、 ポリカプロラクトン(Ｐｏｌｙ(ｅ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ))、ポリ乳酸(Ｐｏｌｙ(ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ))、ポリグリコール酸(Ｐｏｌｙ(ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ))、ハイドロキシアパタイト (Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ)、リン酸三カルシウム(Ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ)またはこれらの混合物で構成された群より選択された生体材料(Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ)をさらに含むことを特徴とする。前記生体材料は、本発明の組成物でハイドロゲルの物性向上及び生体適合性を向上させる役割を行う。
【００２３】
本発明の組成物において、前記ハイドロゲルは、細胞をさらに含むことを特徴とする。前記組成物に含まれた細胞は、人体の適用部位に伝達され、創傷治癒等に用いられる。前記細胞の例としては、皮膚角質細胞、繊維芽細胞、色素細胞、中胚葉幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、骨髄細胞、神経細胞、上皮細胞またはこれらの混合物等が挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物において、前記細胞伝達は、創傷治癒のためであることを特徴とする。本発明で、創傷治癒とは皮膚細胞の損傷による創傷を治療や緩和することを意味する。本発明の組成物によって伝達された細胞が創傷部位の損傷した細胞を代替または補充して創傷を治癒することになる。
【００２５】
本発明の組成物は、ハイドロゲルの形態で製剤化され、創傷部位に直接塗布または注射器等によって投与できる。上記組成物は、細胞治療に一般的に用いられる薬剤学的担体と共に投与でき、このような担体として生理学的食塩水を例として挙げられる。
【００２６】
本発明の組成物は、創傷治癒等のために治療学的に有効な量で投与する。用語「治療学的に有効な量(ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ)」は、医学的治療に適用できる合理的な恩恵／危険の割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効量は疾病の重症度、年齢、性別、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時に用いられる薬物を含む要素及びその他医学分野でよく知られている要素に応じて決められる。上記要素を全て考慮して、副作用がなく最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、当業者によって容易に決定でき、例えば、成人基準で１回１ｍｇないし１０００ｍｇの本発明の組成物を投与することができる。細胞基準では、例えば、１回３×１０４ないし３×１０７の細胞／ｋｇのＭＳＣを投与することができる。
【００２７】
本発明の実施例では、本発明の組成物が創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果（図２乃至８）並びに細胞を保護する効果（図９）があることを証明した。また、本発明の組成物は、使用が簡単・便利であるという長所を有している。さらに、本発明の組成物において、非イオン界面活性剤にコラーゲンのような生体材料を混合すると、さらに大きなシナジーを起こし得るということは容易に考え出せるであろう。最も好ましくは、本発明のハイドロゲルの組成は、細胞及び／またはＰ物質、生理食塩水または細胞培養培地、非イオン界面活性剤、そして生体材料を混合して製造できるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明することにする。これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものであるので、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されはしない。
【００２９】
実施例１
50μｌの生理食塩水に１２ｐｍｏｌｅの物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７（ＢＡＳＦ社）を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲルを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較した。図２は、物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）の肉眼観察の結果、実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。
【００３０】
また、それぞれ１０ｍｌの生理食塩水に２ｇ、２．５ｇ及び３ｇのＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ１２７を溶解して２０％、２５％及び３０％のハイドロゲルを製造した。該ハイドロゲルをレオメータ（ＣＶＯ，ＢＯＨＬＩＮ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を利用して温度（１５〜３０℃）による粘度変化を観察した。図１は、２０％、２５％及び３０％の濃度でプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ） Ｆ１２７の温度（１５〜３０℃）による粘度変化を示した結果である。非イオン性界面活性剤の濃度に応じて、ハイドロゲルの特性が変化することが分かる。温度に応じて粘度を変化させ得る濃度が組織再生のために生体に注入する場合にさらに有利であるが、生体外部に塗布または付着する場合には、温度による粘度変化に関係ない。
【００３１】
実施例２
５０μｌの中胚葉幹細胞（ＭＳＣ：ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）培養培地（ＭＳＣＧＭ）に１×１０６個の中胚葉幹細胞及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲル５０μｌを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。適用後６日目に再度同じ組成のハイドロゲルを適用し、初期適用の後１４日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較し、組織学的観察を行う。図３は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用後１４日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図４は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３２】
実施例３
５０μｌの皮膚細胞培養培地（ＤＭＥＭ）に５×１０５個の皮膚細胞（繊維芽細胞、角質細胞及び色素細胞）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲル５０μｌを適用する。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較し、組織学的観察を行う。図５は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図６は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３３】
実施例４
５０μｌの生理食塩水に２５ｍｌのＩＧＦ（Ｉｎｓｕｌｉｎｅ ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）及び１００ｍｇのプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７（ＢＡＳＦ社）を混合してハイドロゲルを製造する。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（オス、５週齢）の背中に直径８ｍｍの創傷を作り、準備したハイドロゲルを適用する。対照群としては、生理食塩水を適用した。７日目にマウスの背中の創傷を肉眼で比較した。図７は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。図８は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果である。対照群（ａ）、実験群（ｂ）。肉眼観察結果の実験群の場合、対照群に比べて湿潤効果及び創傷の収縮抑制効果があり、創傷治癒の促進が分かる。また、組織学的観察の結果、表皮層と真皮層の形成が実験群でさらによく行われたことが分かる。
【００３４】
実施例５
９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに２×１０４個の皮膚細胞（繊維芽細胞、角質細胞及び色素細胞）を接種し、３７℃のインキュベータで１６時間培養する。培地を除去し、それぞれのｗｅｌｌ当りのハイドロゲルを濃度別で皮膚細胞の培養培地に希釈して入れ、陰性対照群として１００μｌ２．５ｍＭのＥＤＴＡを入れる。４℃で１６時間反応させ、除去する。ＭＴＴ溶液と細胞培養培地を１：９で混ぜて、３７℃で４時間反応させ、ＰＢＳで洗浄した後、ＤＭＳＯとエタノールを１：１で混ぜた溶液で２０分間攪拌して５４０ｎｍでＯＤ値を測定する。図９は、ハイドロゲルの皮膚細胞における安定性の実験結果のグラフである。４℃での細胞安定性は、ハイドロゲルを添加することで、対照群（ＤＭＥＭ）より増加し、特に、２０、２５％添加時、対照群に比べて細胞安定性が約１．５倍増加した。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
以上説明したように、本発明のハイドロゲル状の組成物は、創傷部位に細胞及び／またはＰ物質を適切に伝達し、湿潤効果及び創傷の収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐ効果（図２乃至８）並びに細胞を保護する効果（図９）があり、使用が簡単・便利であるという長所を有している。従って、本発明の組成物を身体の一部の損傷時に塗布或いは注射することによって、組成物内の細胞が損傷部位に伝達されて、創傷を効果的に治癒することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、２０％、２５％及び３０％の濃度でプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ） Ｆ１２７の温度（１５〜３０℃）による粘度変化を示す結果である。
【図２】図２は、物質Ｐ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ）を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図３】図３は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図４】図４は、中胚葉幹細胞を含むハイドロゲル適用１４日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図５】図５は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図６】図６は、皮膚細胞を含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図７】図７は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の肉眼観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）を示す。
【図８】図８は、ＩＧＦを含むハイドロゲル適用７日後の組織学的観察結果であり、対照群（ａ）及び実験群（ｂ）示す。
【図９】図９は、ハイドロゲルの皮膚細胞の安定性実験結果のグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性媒質に非イオン性界面活性剤が分散されてなるハイドロゲル状を有する細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)用ビヒクル組成物。
【請求項２】
前記水性媒質は、生理食塩水、リン酸緩衝溶液(ＰＢＳ)、及び細胞培養培地からなる群より選択されたことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項３】
前記非イオン性界面活性剤は、脂肪酸ポリエチレングリコール縮合物、脂肪酸アマイドポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アルコールポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アミンポリエチレングリコール縮合物、脂肪族メルカプタンポリエチレングリコール縮合物、アルキルフェノールポリエチレングリコール縮合物及びポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物またはこれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項４】
前記非イオン性界面活性剤は、ポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物であるポロキサマー(ｐｏｌｏｘａｍｅｒ)であることを特徴とする請求項３に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項５】
前記非イオン性界面活性剤は、水性媒質に対して１５〜５０％の重量比で混合されて分散されることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項６】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるＩＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、及びＧＭＣＳＦからなる群より選択された成長因子または物質-Ｐ(Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項７】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるコラーゲン(Ｃｏｌｌａｇｅｎ)、ヒアルロン酸(Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ)、グリコサミノグリカン(Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｅｓ)、ファイブロネクチン(Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)またはこれらの混合物からなる群より選択された細胞間物質(ＥＣＭ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項８】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるカルボキシメチルセルロース(Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ)、アルギン酸(Ａｌｇｉｎａｔｅ)、キトサン(Ｃｈｉｔｏｓａｎ)、 ポリカプロラクトン(Ｐｏｌｙ(ｅ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ))、ポリ乳酸(Ｐｏｌｙ(ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ))、ポリグリコール酸(Ｐｏｌｙ(ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ))、ハイドロキシアパタイト (Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ)、リン酸三カルシウム(Ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ)またはこれらの混合物で構成された群より選択された生体材料(Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項９】
前記ハイドロゲルは、細胞をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項１０】
前記細胞は、皮膚角質細胞、繊維芽細胞、色素細胞、中胚葉幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、骨髄細胞、神経細胞、上皮細胞またはこれらの混合物からなる群より選択されたことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項１１】
前記細胞伝達は、創傷治癒のためであることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項１】
水性媒質に非イオン性界面活性剤が分散されてなるハイドロゲル状を有する細胞伝達(ｄｅｌｉｖｅｒｙ)用ビヒクル組成物。
【請求項２】
前記水性媒質は、生理食塩水、リン酸緩衝溶液(ＰＢＳ)、及び細胞培養培地からなる群より選択されたことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項３】
前記非イオン性界面活性剤は、脂肪酸ポリエチレングリコール縮合物、脂肪酸アマイドポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アルコールポリエチレングリコール縮合物、脂肪族アミンポリエチレングリコール縮合物、脂肪族メルカプタンポリエチレングリコール縮合物、アルキルフェノールポリエチレングリコール縮合物及びポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物またはこれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項４】
前記非イオン性界面活性剤は、ポリプロピレングリコールポリエチレングリコール縮合物であるポロキサマー(ｐｏｌｏｘａｍｅｒ)であることを特徴とする請求項３に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項５】
前記非イオン性界面活性剤は、水性媒質に対して１５〜５０％の重量比で混合されて分散されることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項６】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるＩＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、及びＧＭＣＳＦからなる群より選択された成長因子または物質-Ｐ(Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｐ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項７】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるコラーゲン(Ｃｏｌｌａｇｅｎ)、ヒアルロン酸(Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ)、グリコサミノグリカン(Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｅｓ)、ファイブロネクチン(Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)またはこれらの混合物からなる群より選択された細胞間物質(ＥＣＭ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項８】
前記ハイドロゲルは、創傷治癒を助けるカルボキシメチルセルロース(Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ)、アルギン酸(Ａｌｇｉｎａｔｅ)、キトサン(Ｃｈｉｔｏｓａｎ)、 ポリカプロラクトン(Ｐｏｌｙ(ｅ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ))、ポリ乳酸(Ｐｏｌｙ(ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ))、ポリグリコール酸(Ｐｏｌｙ(ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ))、ハイドロキシアパタイト (Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ)、リン酸三カルシウム(Ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ)またはこれらの混合物で構成された群より選択された生体材料(Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ)をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項９】
前記ハイドロゲルは、細胞をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項１０】
前記細胞は、皮膚角質細胞、繊維芽細胞、色素細胞、中胚葉幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、骨髄細胞、神経細胞、上皮細胞またはこれらの混合物からなる群より選択されたことを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【請求項１１】
前記細胞伝達は、創傷治癒のためであることを特徴とする請求項１に記載の細胞伝達用ビヒクル組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２０１２−５０７５１０（Ｐ２０１２−５０７５１０Ａ）
【公表日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３４４０２（Ｐ２０１１−５３４４０２）
【出願日】平成２１年１１月３日（２００９．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００６４２５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６２０５９
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５１１１０９３６４）株式会社モダン・セル・アンド・ティシュー・テクノロジーズ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＭＯＤＥＲＮ ＣＥＬＬ ＆ ＴＩＳＳＵＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月３日（２００９．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００９／００６４２５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６２０５９
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５１１１０９３６４）株式会社モダン・セル・アンド・ティシュー・テクノロジーズ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＭＯＤＥＲＮ ＣＥＬＬ ＆ ＴＩＳＳＵＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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