分子スペーサーアーム、製造方法、ならびに分子もしくは生体分子を有する分析チップ上での利用
本発明は、分子スペーサーアーム、固体支持体への分子単位の固定方法、ならびに分子もしくは生体分子を有する分析チップ上での該スペーサーアームの利用に関する。該スペーサーアームは式（Ｉ）であり、
式中：
Ｘ０、Ｘ４＝Ｃ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｎ、Ｐ、Ａｓ；
Ｘ１−３＝Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、もしくは、アリール、Ｃ１−６位でのヘテロアリール；
Ｚ１−２＝Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓ、ここでＲ＝Ｃ１−６位でのアルキル；
Ｒ１−３＝Ｈ、もしくは、アルキル、アリール、Ｃ１−６位でのヘテロアリール；
［Ｇｐ］＝Ｎ＜の保護基；
ｎ、ｍおよびｎ＝１以上の整数；
［Ｓｕｐ］＝Ｈ、もしくは、シラン化固体支持体；
［ｍｏ］＝Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位
である。
式中：
Ｘ０、Ｘ４＝Ｃ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｎ、Ｐ、Ａｓ；
Ｘ１−３＝Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、もしくは、アリール、Ｃ１−６位でのヘテロアリール；
Ｚ１−２＝Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓ、ここでＲ＝Ｃ１−６位でのアルキル；
Ｒ１−３＝Ｈ、もしくは、アルキル、アリール、Ｃ１−６位でのヘテロアリール；
［Ｇｐ］＝Ｎ＜の保護基；
ｎ、ｍおよびｎ＝１以上の整数；
［Ｓｕｐ］＝Ｈ、もしくは、シラン化固体支持体；
［ｍｏ］＝Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位
である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分子スペーサーアーム、固体支持体に分子単位を繋ぐ該スペーサーアームの調製方法、ならびに、分子もしくは生体分子を有する分析チップ上でのこのスペーサーアームの利用（使用）に関する。
【０００２】
以降の開示においては、角括弧［］の間の番号は、本記載末尾の文献リストにある。
【０００３】
本発明により目的とされる分析チップは、より具体的には、しかし排除的にではなく、生物学的分析に用いられるバイオチップおよびミクロシステムである。これらは、３種のカテゴリー：
ＤＮＡチップ
チップ上ラボ＜＜Ｌａｂ−Ｏｎ−Ｃｈｉｐ＞＞
細胞チップ＜＜Ｃｅｌｌ−Ｏｎ−Ｃｈｉｐ＞＞
に帰される。
【０００４】
現在、新しいタイプのバイオチップ、糖チップ＜＜Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ＞＞が、至急求められている。このバイオチップは、天然もしくは合成基質の搭載の結果、または、オリゴ糖配列（オリゴ糖鎖）の違いに関する固相（支持された）マルチパラレル合成（コンビナトリアル・ケミストリー）の結果であり、オリゴ糖鎖は、内因性糖共役体の所定の大きなファミリーの分子の多様性の代表であり、例えば、ヘパラン硫酸である。本発明は特に、この新しいタイプのバイオチップによく適しており、つまり、これらの分子の、バイオチップ支持体への、化学的プロセスによる固定化を可能にし、先行技術と比較して有効であり、単純化されている。
【０００５】
これらの分子もしくは生体分子は＜＜分子単位＞＞として呼ばれ、本発明のスペーサーアームの仲介により、固体支持体に固定され得、例えば、核酸（ＤＮＡもしくはＲＮＡ）、糖、糖蛋白、糖脂質等であり得る。更に他の例も、以下に与えられる。
【背景技術】
【０００６】
バイオチップの大多数においては、スペーサーは、固体支持体［２］と、例えば、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド［３］、もしくはオリゴ糖［４］プローブとの間の結合を与える。このスペーサーは、一時に（同時に）複数の役割、繋いでいる分子、空間的な距離をあけるアーム、該プローブの開裂部位等を演じることができる。
【０００７】
該プローブによる標的の認識部位との該支持体の接近は実際、該プローブ／標的認識を障害、もしくは防ぐことさえあり、これゆえ、該バイオチップの分析の緻密さおよび質を害する。このことは特に、該プローブが小さい場合、例えば、糖チップの場合、当てはまる。
【０００８】
以下の原則式が、該スペーサーの形成次いで開裂の一般的なスキームを指し示し、式中、Ｘ’が固体支持体を表し、Ｘ”が分子単位を表す。
【０００９】
【化１】
【００１０】
数多くのスペーサーアームが今日までに実現されているが、これらはかなりの数の未解決の不便さを持っている。実際、これらの構造がこれらの該固体支持体への固定化に利用可能な化学プロセスの厳しい限界を暗喩するか、および／または、これらが容易に全タイプの生体分子に取り付かないようにするか、および／または、これらがとても化学的に安定であるので、一旦該固体支持体に固定されれば、元の生体分子に戻ってしまうこれらの開裂が容易に起き得ず、この最終体もしくは該支持体の劣化に至り得る。
【００１１】
米国特許第６，５７９，７２５号明細書（文献［４］）は、オリゴ糖を固定しているスペーサーアームを記載する。このスペーサーアームは、より先の先行技術のものよりも効果的であるが、同時に前記問題全てを解決することを可能にするものではない。その長さ、その機能、その反応性、およびその障害が常に、希望どおりに生じさせられないことも、特記できる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は精確に、先行技術の前記問題点を一気に解決することを可能にし、これは、以下の式（Ｉ）の分子スペーサーアームを提供することにある。
【００１３】
【化２】
【００１４】
式中、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は：
Ｘ０およびＸ４が各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、およびＳｉの中から選択され；
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々例えば２〜２０炭素原子を含み；
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｃ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、例えば１〜４０炭素原子を含み；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
［Ｇｐ］は２級アミン−Ｎ−の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子を表し；
式中：
ｎ、ｍ、およびｐは整数であり、各々１以上であり、お互い独立に、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦４０となるように選択され；
式中：
［Ｓｕｐ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームが共有結合的に固定され得るシラン化固体支持体を表し；
式中：
［ｍｏ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位を表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
勿論、Ｘ０〜Ｘ４は、本発明のスペーサーアーム骨格を形成している原子であり、基であって、例えば、Ｈ、Ｏ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み、これらの原子に固定されることが可能である。
【００１６】
このスペーサーアーム（Ｉ）は一般的に、分子単位［ｍｏ］を固体支持体［Ｓｕｐ］へと固定するのに利用可能であり、例えば、バイオチップ、もしくはより有利には糖チップを製造し、ここで［ｍｏ］は一般的に、該バイオチップを機能させる分子である。
【００１７】
本発明によれば、好ましくは、該スペーサーアーム（Ｉ）においては上で定義されたとおりであり：
Ｘ０およびＸ４は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉの中から選択され得；および／または
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され得、各々例えば２〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｎ、Ｃ−Ｒ、およびＳｉ−Ｒの中から選択され得、ここでＲはアルキルであり、１〜３０炭素原子、好ましくは１〜２０炭素原子、好ましくは１〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され得、各々２〜１０炭素原子を含む。
【００１８】
本発明によれば、ｎ、ｍ、およびｐもお互い独立に、１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦３０、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦２０、更に好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦１０となるよう選択され得る。
【００１９】
例えとして、本発明によれば、スペーサーアーム（Ｉ）においては上で定義されたとおりであり、Ｘ０およびＸ４がＣであり、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がＣであり、Ｚ１およびＺ２がＣであり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３がＨである。
【００２０】
本発明によれば、保護基［Ｇｐ］は、２級アミンの当業者に知られた保護基のいずれか１種であり得る。これは好ましくは、該スペーサーアームの合成の化学に耐えるように選択され、その固定化は該支持体上であり、その固定化は分子単位［ｍｏ］とのものである。これは例えば、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基（Ｒ）、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、Ｆｍｏｃ等の中から選択され得、スペーサーアーム（Ｉ）の２級アミンと共に、以下の化学基のうちの１種を形成する（＞Ｎとは、保護された２級アミンを指し示す、Ｐｈ＝フェニル、Ｍｅ＝メチル）。
＞Ｎ−Ａｃ：アセタミド（＞Ｎ−ＣＯ−Ｍｅ）
＞Ｎ−Ｂｎ：ベンジルアミド
＞Ｎ−Ｒ：Ｃ１〜Ｃ４０アリールアミド
＞Ｎ−Ｔｒｏｃ：２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＣｌ３）
＞Ｎ−Ｚ：ベンジルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）
＞Ｎ−ＴＣＡ：トリクロロアセトアミデート（＞Ｎ−ＣＯ−ＣＣｌ３）
＞Ｎ−ＢＯＣ：ｔ−ブチルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＭｅ３）
＞Ｎ−Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルカルバメート
【００２１】
【化３】
【００２２】
好ましくは、本発明によれば、該保護基は、Ａｃ、ＢＯＣ、もしくはＣ１〜Ｃ４０アリール基の中から選択される。
【００２３】
本発明によれば、分子［Ｇｐ］は、該スペーサーアームの機能に参画しており、例えば、Ｃ１〜Ｃ４０、例えばＣ１〜Ｃ３０、例えばＣ１〜Ｃ２０、もしくはＣ１〜Ｃ１０のアルキルもしくはアリールであり得る。これは如何なる置換基でもあり得、必ずしも保護的でなく、使用時に該スペーサーアームの機能に参画できる。これは例えば、疎水性基であり得、該スペーサーアームを、固定すべき分子［ｍｏ］および／または該スペーサーアーム使用中のその役割に対して、より特異的および／またはより選択的にすることを可能にし、例えば、糖チップもしくは蛋白チップ上においてである。
【００２４】
本発明によれば、該固体支持体は例えば、シラン化され得る全ての支持体たり得る。これは例えば、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーたり得る。これは例えば、シリカ、ガラス、もしくは、当業者に知られた他の素材主体たり得、例えば、バイオチップの支持体もしくは表面を製造するためである。該支持体のシラン化は、当業者に知られた全ての方法により、実施（実現）され得る。
【００２５】
本発明によれば、分子単位［ｍｏ］は、天然もしくは合成分子であり得る。これは例えば分析面での理由により、支持体に固定されねばならない全ての分子であり得る。これは小分子であり得、例えば、約１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている。これが糖である場合、［ｍｏ］は例えば、１８０〜１０，０００ｇ／モルの分子量を持ち得る。これが蛋白もしくはペプチドである場合、［ｍｏ］は例えば、５，５００〜４００，０００ｇ／モル、一般的には５，５００〜２２０，０００ｇ／モルの分子量を持ち得る（殆どの蛋白の分子量である）。
【００２６】
この分子単位［ｍｏ］は例えば、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、
酵素、糖蛋白、脂質、脂肪酸、糖脂質、糖脂質蛋白等の中から選択され得る。
【００２７】
単糖の中では、グルコース、グルコサミン、アジドグルコサミン、Ｄ−リボース、Ｄ
−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース
、２−デオキシ−Ｄ−リボース、Ｌ−フコース、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−Ｄ−グルコサミ
ン、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−ノイラミン酸
、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−イズロン酸、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール等を引用で
きる。
【００２８】
オリゴ糖の中では、サッカロース、ラクトース、ヘパラン硫酸断片（分解物）、ヘパリ
ンの糖断片、コンドロイチン、デルマタン硫酸、ルイス抗原等を引用できる。
【００２９】
多糖の中では、ヘパラン硫酸の、ヘパリンの、コンドロイチンの糖部分、デルマタン硫酸等を引用できる。
【００３０】
糖共役体の中では、ヘパラン硫酸、ヘパリン、コンドロイチン、デルマタン硫酸等を引用できる。
【００３１】
ペプチドおよび蛋白の中では、ケモカイン、サイトカイン、インシュリン、フィブリノーゲン、ミオシン、ヘモグロビン等を引用できる。
【００３２】
酵素の中では、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、分解酵素（リアーゼ）、異性化酵素、連結酵素（リガーゼ）を引用できる。
【００３３】
糖蛋白の中では、免疫（免役、イムノ）グロブリンＧ、ヒアルロン酸等を引用できる。
【００３４】
脂質の中では、加水分解可能な脂質：
脂肪（グリセロール＋３脂肪酸）、ワックス（脂肪酸＋脂肪アルコール）、ステロールエステル（ステロール＋脂肪酸）、燐脂質（ホスファチジル酸（グリセロール、２脂肪酸＋ホスフェート））、ホスファリド（グリセロール＋２脂肪酸＋ホスフェート）、スフィンゴ脂質（スフィンゴシン＋脂肪酸＋ホスフェート＋アミノアルコール）；
加水分解可能でない脂質：
アルカン、カロテノイド、ステロール（コレステロール）、ステロイド（エストラジオール、テストステロン）、酸（脂肪酸）、エイコサノイド
等を引用できる。
【００３５】
脂肪酸の中では、アラキドン酸、リノレイン酸、リノレン酸、ラウリル酸、ネルボニック（ｎｅｒｖｏｎｉｑｕｅ）酸、パルミチン酸、オレイン酸等を引用できる。
【００３６】
糖脂質の中では、ガラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ガングリオシド、セレブロシド（脂肪酸＋スフィンゴシン＋１糖）、ガングリオシド（脂肪酸＋スフィンゴシン＋数多くの糖、ノイラミン酸）等を引用できる。
【００３７】
糖脂質蛋白の中では、ＭＰＢ８３ＴＭ、ＧＬＰ１９ＴＭ、およびＩＲＢＰＴＭを引用できる。
【００３８】
本発明は、分子単位［ｍｏ］の、固体支持体への、スペーサーアーム、有利には本発明のものの仲介による、共有結合的な固定方法にも関する。
【００３９】
本方法は、以下のステップを含み得る。
（ｉ）式：
【００４０】
【化４】
【００４１】
の化合物の、ニトリル官能基の還元
（ｉｉ）式：
【００４２】
【化５】
【００４３】
の生体分子のアリル官能基からの、アルデヒド官能基の形成
（ｉｉｉ）形成される２級アミンの保護を伴うこの還元されたニトリル官能基と、該アルデヒド官能基との間での還元的アミノ化であって、該支持体へのその固定化のために活性化された生体分子を得、この活性化された生体分子は式：
【００４４】
【化６】
【００４５】
である。
（ｉｖ）固体支持体のシラン化、および、このシラン化された固体支持体の官能基化。式：
【００４６】
【化７】
【００４７】
の分子を用いる。
（ｖ）該支持体を官能基化させる分子と、この活性化された生体分子との間でのメタセシス化反応であって、本発明によるスペーサーアームを形成させ、該生体分子と該支持体とを繋ぐ。
【００４８】
この方法において、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および［ｍｏ］は、上に定義されたとおりである。
【００４９】
本発明によれば、式：
【００５０】
【化８】
【００５１】
の化合物は例えば、アリル化糖であり得、［ｍｏ］が該糖である。このアリル化糖は、当業者に知られた如何なるプロセスによっても得られ、該糖を変化させない。例えば、文献［５］に記載のプロセスであり得る。
【００５２】
本発明によれば、該２級アミンも、保護基により保護され得る。このため、本発明のプロセスは、保護基［Ｇｐ］の、該２級アミン官能基への固定化ステップも含み得る。該保護基は、上に定義されたとおりであり得る。これの該２級アミンへの固定化は、当業者に知られた如何なる化学プロセスによっても実施され得、例えば、文献［７］に記載のプロセスの１つに従う。
【００５３】
本発明のこのプロセスの種々のステップを実施に移すには、当業者に知られた有機化学の古典的プロセスが利用され得る。このため、例として、ニトリル還元ステップに関しては、文献［６］に記載のプロセスが利用され得る。生体分子のアリル官能基からのアルデヒド官能基の形成ステップに関しては、文献［５］に記載のオゾン分解プロセスが利用され得る。還元的アミノ化、次いで、その還元されたニトリルと該アルデヒド官能基との間でのその窒素の保護ステップに関しては、活性化された生体分子を得るために、文献［７］に記載のプロセスが使用され得る。該固体支持体のシラン化およびこれの官能基化ステップに関しては、文献［８］に記載のプロセスが利用され得る。該メタセシス反応に関しては、文献［１０］に記載のプロセスが利用され得る。
【００５４】
本発明のスペーサーアームはこれゆえ、結合されている３つの部分から創出され得、一方では、還元的アミノ化、次いで該分子単位側での窒素の保護により、もう一方では、Ｇｒｕｂｂｓのメタセシス反応による。Ｇｒｕｂｂｓの該メタセシスは例えば、文献［１１］に記載される。
【００５５】
該炭素鎖中に挿入される窒素原子は、複数の利点を有する。２本の鎖の取り付けの間に得られ、２級アミンの形で見出され、種々の方式で保護でき、該スペーサーに特異的な反応性を与える。この機能は場合毎に、種々の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子により、有利に調節可能であり、該スペーサーアームの親水性もしくは疎水性を変動させて制御し、その立体障害を制御することを可能にする。該スペーサーアームのこの部分の求電子性／求核性または酸性／塩基性を調節することも、有利に可能である。該窒素原子の保護基の性質はこれゆえ好ましくは、反応、相互作用、または、特徴付けもしくは分析の操作の条件を最適化していく狙いを持って、該スペーサーの開裂前もしくは後に選ばれ、該分子単位を解放する。例えば、アセチル基を用いると、その小さな大きさのために、かすかな立体障害が得られ、これは、該スペーサーアームの利用の間の、例えば分子チップ上での分子認識の最適化を可能にする。例えばまた、ブチル基を用いると、該スペーサーのこの部分を疎水性にする疎水性炭素置換基が得られ、これは例えば、該スペーサーアームの親水性部分（［ｍｏ］）に対して、より特異的、より選択的な親水性蛋白の認識を可能にする。
【００５６】
本発明はこれゆえ、調節可能なスペーサーアーム（もしくは＜＜スペーサー＞＞）を提供し、その種々の構造が、該アームの反応性、つまり、これの化学的および／または電気化学的および／または立体的挙動に、影響を与える。
【００５７】
本発明は、簡単かつ効果的に実施可能であり、該スペーサーは有利に、以下の３つの特性を有し、特に、糖チップ製造のために実施される場合である。
【００５８】
−まず、該スペーサーは上手くアームの機能を発揮し、その糖鎖を、この鎖を支持する固体表面から離しておく。
【００５９】
−次に、該スペーサーは、開裂可能なアームである。容易にかつ狙ったように、該スペーサーを開裂させることが可能であり、該糖を、該支持相から単離する。
【００６０】
−最後に、該スペーサーは、そのかすかな化学的官能基割合（程度）のために、該糖単位上で、例えば糖チップの利用の間に実施される数多くの反応条件において、不活性なままである。
【００６１】
前記利点の他、本発明者らは、本発明の種々の実験を実施に移す間に、以下のことに気付いた。
【００６２】
−該スペーサーアームが、該固体支持体の存在による立体（障害）の問題を克服することを可能にする。良好な立体的な条件において、得られた糖チップ上での蛋白／糖相互作用を研究することを可能にする。該蛋白の該糖リガンドに対する接近の間に、その将来の潜在的相互作用に害であった先行技術において提示された立体障害の問題を、解決させる。
【００６３】
−該アームの長さが調節可能である。異なる大きさの相同官能基の賢明な選択が、特に出発反応試薬の選択を通して、異なるサイズのスペーサーの調製を可能にする。
【００６４】
−該糖鎖と該固体支持体との間の距離を選択することだけが可能なだけでなく、その保護基による該スペーサーのこの部分の親水性もしくは疎水性を制御することも可能である。
【００６５】
−該スペーサーの化学構造の簡潔さはそれに、数多くの有機反応の間の化学的非反応性を付与し、これは、その製造、および、該糖チップの利用の場合である。
【００６６】
−該スペーサーは、その相互作用化学官能基がないために、他の分子との潜在的相互作用に影響せず、これは、このシステムが糖チップ、もしくはより一般的に小分子チップの関係において利用される場合である。
【００６７】
−該スペーサーは精確におよび選択的に、そのＣ＝Ｃ２重結合レベルで、生体分子、例えばオリゴ糖を変化させない反応条件において、開裂可能である。実際、例えば、オゾン分解（Ｏ３）、Ｇｒｕｂｂｓのメタセシス（Ｇｒｕｂｂｓ触媒）、もしくは、ジオールのオスミウム酸化開裂（ＯｓＯ４、ＮａＩＯ４）後のジヒドロキシル化、および、当業者に知られる温和な他の化学反応が便利に、該開裂に利用され得る。
【００６８】
−該スペーサーが容易に開裂でき、この開裂が該糖構造を修飾しないとの事実が、単離オリゴ糖鎖の構造およびコンホメーション解析の制御を実施することを可能にする。該糖合成の間に該固体支持体に取り付けられた（＜＜ロード＞＞）糖プローブ量を計算することも、容易である。
【００６９】
このスペーサーの利点の１つは、文献［１］に記載のものと比較すると（例えば、オクテンジオール）、その長さ、その官能基、その反応性、およびその立体障害の適応性にあり、希望どおりに生成され得る。
【００７０】
本発明者は同様に、本発明のスペーサーが、非常に大きな範囲の糖、オリゴ糖、もしくは多糖との結合を可能にすることを特記し、これらは非常にしばしば予め合成され、これらの還元部分のアノマー位においてアリル基により保護される。１ステップで、これらの糖単位は実際変換され得、該スペーサー上で直接結合する。これゆえ、このスペーサーは有利に、数多くの糖分子と相容れ、例えば、文献［７］、［１２］、および［１３］において既に合成され、記載されている。
【００７１】
本発明は例えば糖チップ、例えば、特定蛋白を認識しているオリゴ糖配列のスクリーニングにより同定にかかるチップの製造に利用され得、例えば、文献［１］に記載の技術に従う。本願では、本発明が該スクリーニングプロセスを最適化し、これゆえより効果的かつより速く、治療もしくはバイオテクノロジー目的の分子を持つことを可能にする。この能力は、本発明のその他の応用にも存在していると期待できる。
【００７２】
本発明はバイオチップ上でも利用され得、ここではスペーサーアームが、固体支持体と、オリゴペプチドプローブ、オリゴヌクレオチドプローブ、および／またはオリゴ糖プローブとの間の結合を形成しなくてはならない。特に、本発明のスペーサーアームは、文献［３］に記載のもののようなオリゴペプチドチップ、もしくは、文献［４］に記載のもののようなオリゴ糖チップ上において、利用され得る。
【００７３】
他の特徴および利点も、例示目的で与えられる以降の実施例を読んでいくと、当業者には明らかとなる。
【実施例】
【００７４】
１）例として、１４炭素鎖に対応している長さのスペーサーの合成が、以下に開示され、当業者にアクセス可能なものの中から選ばれる操作プロトコールを利用している。太字の参照番号は、以下の反応スキームに関する。
選ばれる化合物は：
グルコースタイプ（１、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）：１位アリル化糖）の単糖（１）。分子単位［ｍｏ］を構成している。
４−ペンテンニトリル（３）。還元すべきニトリル官能基を持っている。
７−オクテニルトリメトキシシラン（８）。該支持体の官能基化用。
である。該固体支持体は、シリカ主体のＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｐｏｒｅ ＧｌａｓｓＴＭ（ＣＰＧ）ビーズにより、構成される。
以下の反応スキームは、オリゴ糖（１）の支持体（６）への固定化に関するこれらの実施例において企画される化学反応を一緒に纏め、本発明によるスペーサーアームによる。これらの化学反応は、文字Ａ〜Ｆにより指し示される。該スペーサーアームの開裂反応の１例は、以下の実施例Ｇに提示される。
この反応スキーム上で、糖の上で指し示される基＜＜Ｒ＞＞は、その表現を簡素化するために、意図的に分類されていない。これらの基＜＜Ｒ＞＞は置換基を表し、同一でも異なっていてもよく、該糖を形成している環上の種々の位置にあってよく、一般的に糖において見られる置換基であり得る。ここに提示される特定例において、利用される糖はＮ−アセチルグルコサミンであり、当業者は、化合物（１）、（２）、（５）、および（１０）の種々の位置における置換基＜＜Ｒ＞＞を同定するのに、全く困難ではない。
【００７５】
実施例Ａ：本オリゴ糖の活性化（反応Ａ）
オゾン分解反応が、この実施例において利用（使用）される。使用されるプロセスは、文献［５］に記載される。
アノマー位においてアリル化された糖（１、０．９３ミリモル）が、ジクロロメタンとメタノールとの１／１混合物（混合溶媒）５ｍＬに溶解され、溶媒が冷浴中、温度−７８℃（アセトン＋ドライアイス）に浸される。オゾンＯ３が次いで、該溶液中でバブリングされなくてはならず、その青色（過剰なオゾンの特徴）の出現から直ぐ、該オゾンがアルゴン（もしくは窒素）で置き換えられる。反応が完結したら、ジメチルスルフィド（Ｍｅ２Ｓ、４．６５ミリモル、５当量）の添加により、還元していくようにされる。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）が次いで、形成される。溶媒（反応）がゆっくり、常温まで一夜に亘り戻り、次いで真空下にエバポレーションされる。有機物の残渣が、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）を用いて回収され、水洗される。有機相が真空下にエバポレーションされ、次いでトルエン共沸される。粗生成物が、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製される（溶出液：石油エーテル／酢酸エチル＝８／２）。
こうして、アルデヒド（２）が、収率７５％で得られる。
【００７６】
実施例Ｂ：ニトリルの還元（反応Ｂ）
使用される化学プロセスは、文献［６］に記載される。
水素化リチウムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４、３８１ｍｇ、１０．０３ミリモル、１当量）が、蒸留したてのジエチルエーテル（２０ｍＬ）中に導入される。
４−ペンテンニトリル（３、８１４ｍｇ、１ｍＬ、１０．０３ミリモル）がゆっくり、反応溶媒に加えられ、窒素雰囲気下に、温度０℃において（氷浴）、攪拌される。攪拌は約２０分間、常温において継続されなくてはならない。
次に、水（０．４ｍＬ）、次いで２０％水酸化ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ）、そして仕上げにもう１つ別量の水（１．４ｍＬ）が、加えられる。これらの添加は、その中和が激しくなる可能性があるので、非常に前もって注意して実施されねばならない。ジエチルエーテル溶液がデカンテーションされると、無機物の白色残渣から、上清が抽出される。
白色固体（該残渣）が２回、ジエチルエーテルを用いて洗浄され、有機相が再び合わされる。３Ｍ塩酸（ＨＣｌ）がこの有機相に加えられ、酸性ｐＨ（ｐＨ＜７）を得る。反応し切っていない４−ペンテンニトリルがエーテル相に残っている一方、前記アミンは水相に移行する。
抽出後、該水相がこうして保存され、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の３Ｍ溶液がこれに加えられ、塩基性ｐＨ（ｐＨ＞７）に変わる。アミノ化された生成物が次いで、この新たな抽出の間にエーテル相に移行していく。このように抽出されたエーテル相が、硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）により（フラスコ中で）乾燥され、次いで真空下にエバポレーションされる（ロータリー・エバポレーター）。
粗アミン（クルードのアミン、４）が次いで、分画蒸留により精製される（バルブ・オーブン、Ｔ≒９６℃±９℃）。
１ＨＮＭＲ解析（ＢｒｕｅｃｋｅｒＡＭ２５０）：５．８２（ｄｄｔ、３Ｊｔｒａｎｓ＝１８Ｈｚ、３Ｊｃｉｓ＝１３Ｈｚ、３Ｊ（ＨＩ）＝６．５Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨ＝）、５．００（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２＝）、２．７０（ｔ、３ＪＩＩ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩＩＩ）、２．１０（ｔｔｄ、３Ｊ（ＨＩＩ）＝６．５Ｈｚ、３Ｊ（ＨＣ）＝６．５Ｈｚ、３Ｊ（Ｈ２Ｃ−）＝１．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩ）、１．７０（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．５６（ｑｕｉｎｔ．、３Ｊ（ＨＩＩ）＝３Ｊ（ＨＩＩＩ）＝６．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩＩ）
１３ＣＮＭＲ解析（ＢｒｕｅｃｋｅｒＡＭ２５０）：１３８．６（ＣＨ＝）、１１４．６（ＣＨ２＝）、４２．０（ＣＨ２−Ｎ）、３３．１（ＣＨ２）、３１．４（ＣＨ２）
【００７７】
実施例Ｃ：還元的アミノ化（反応Ｃ）
使用される化学プロセスは、文献［７］に記載される。
アルデヒド（２、２０．８７ミリモル）が、水素化カルシウム（ＣａＨ２）から蒸留したてのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１．２ｍＬ）に溶解され、溶媒が攪拌に付され、アミン（４、３１．３０ミリモル、２当量）が加えられる。２０分台の後、ナトリウムシアノボロヒドリド（ＮａＢＨ３ＣＮ、８３．４７ミリモル、４当量）が混合物に加えられ、常温において一夜攪拌され続ける。
（それでも）反応が完結しなければ、ＮａＢＨ３ＣＮ（１当量）を再び加えることが可能である。次に、反応が完結したら、ピリジン（２．４ｍＬ）および無水酢酸（Ａｃ２Ｏ、８３．４７ミリモル、２当量／アミン）が、混合物に加えられる。
反応が完結したら（添加後約１時間）、粗化合物が、ジエチルエーテルおよび水を用いて抽出される。再び合わされた有機相が、硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）により乾燥され、次いで濾過され、真空下にエバポレーションされ、次いでトルエン共沸される。
化合物（５）が次いで、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製される（溶出液勾配：シクロヘキサン／酢酸エチル＝７／３〜５／５）。
【００７８】
実施例Ｄ：本固体支持体の官能基化（反応ＤおよびＥ）
使用された化学プロセスが、文献［７］に記載される。
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｐｏｒｅ Ｇｌａｓｓビーズ（６、ＣＰＧ、５００Å、２ｇ）が非常に穏やかに２時間、常温において、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、７００ｍｇ）の脱イオン水（ＥＤＩ、６ｍＬ）と９９％エタノール（ＥｔＯＨ、８ｍＬ）との溶液中、攪拌される。次いで該ビーズが遠心され、上清が抽出され、該ビーズが潤沢なＥＤＩを用いて洗浄され、中性ｐＨに到達する。
該ビーズが次いで真空下に（ロータリー・エバポレーター）乾燥され、常温に１時間、塩酸（ＨＣｌ０．２Ｎ）中に保たれ、その後水洗され、遠心され、乾燥され、次いで８０℃のインキュベーターに１５分間入れられる。次いでエタノールで、次いでトルエンを用いて洗浄される（遠心）。
次いで乾燥され、その後引き続いてのシラン化ステップにおいて沈澱され、こうして、反応混合物が用いられる直前に調製されたことになる。
ＣＰＧビーズ（７）が、トルエン（４５ｍＬ）、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、１．３５ｍＬ）、および７−オクテニルトリメトキシシラン（８、Ｃ１１Ｈ２４Ｏ３Ｓｉ、分子量２３２．３９、１００μＬ）の混合物中に導入され、反応溶媒が８０℃に１６時間置かれる（インキュベーター）。
該ビーズが該混合物から遠心により抽出され、エタノールを用いて複数回濯がれ、次いで乾燥される（ロータリー・エバポレーター）。次いで温度１１０℃に３時間付され、架橋ステップを実施する（インキュベーター）。
シラン化ステップおよび架橋ステップがこうして実施され、該シラン化ステップの間に反応しなかった表面シラノールの残りの酸性および親水性を中和する必要がある（＜＜末端封鎖＞＞）。トリメチルシリルクロリド（ＴＭＳＣｌ、１０９ｍｇ、１３０μＬ）およびトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、５０６ｍｇ、７００μＬ）のジクロロメタン（ＤＣＭ、１０ｍＬ）溶液が、シラン化されたＣＰＧビーズに加えられ、混合物が穏やかに２時間、２５℃において攪拌され続ける。
該ビーズが次いで、ジクロロメタン（遠心）、次いでアセトニトリル（遠心）で充分に濯がれる。該ビーズは次いで、真空下に乾燥され（ロータリー・エバポレーター）、インキュベーターに入れられ（８０℃）、その乾燥を完全にする。
シラン化ビーズ（９）が、こうして得られる。
【００７９】
実施例Ｆ：メタセシス反応（反応Ｆ）
使用される化学プロセスは、文献［９］に記載される。
シラン化ＣＰＧビーズ（９）（２ｇ、３０μモル／ｇ）が、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中で、窒素雰囲気下に攪拌に付される。糖−スペーサーシステム（５）（３００μモル、＞５当量）が次いで溶媒に、Ｇｒｕｂｂｓ触媒（６μモル、５ｍｇ、０．１当量）と共に加えられる。該反応溶媒が次いで還流、つまり温度４４℃とされる。
６時間後、もう１部別のＧｒｕｂｂｓ触媒（６μモル、５ｍｇ、０．１当量）が加えられる。混合物は４４℃において更に６時間維持され、次いで常温に戻される。
該ビーズが濾過され、ジクロロメタンおよびエタノールで充分洗浄される（遠心）。該ビーズが次いで、真空下にエバポレーションされ、乾燥される。
糖ビーズ（１０）が、こうして得られる。
【００８０】
【化９】
【００８１】
実施例Ｇ：本プローブの開裂（反応Ｇ）
使用される化学プロセスは、文献［１０］に記載される。
固体支持体−本発明のスペーサー−オリゴ糖鎖（システム（１０））が得られたら、該糖鎖を変性させることなく、該スペーサーを開裂させることが可能となる。
この実験プロトコールは、文献［５］に記載される。該化学反応式は、以下のとおりである。
【００８２】
【化１０】
【００８３】
糖ＣＰＧビーズ（１０）が、ジクロロメタン／メタノール＝１／１混合溶媒中で、ゆっ
くり攪拌に付される。該溶媒は、温度−７８℃（アセトン＋液体窒素）にされる。
次いで、オゾンＯ３が、青色が出現するまで、反応溶媒中へバブリングされる。
次いで、アルゴンが混合物中へ数分間バブリングされ、その後、溶媒をジメチルスルフ
ィドで中和し、次いで、該反応溶媒が放置され、一夜の間に常温にまで戻る。
該ビーズがジエチルエーテルで回収され、濾過され、ジエチルエーテルおよび水で複数
回濯がれる。
ビーズ（１２）が次いで脇に避けられ、上清が抽出され（ジエチルエーテル／水）、有
機相が硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）で乾燥され、真空下にエバポレーション
され、トルエン共沸される。
生成物（１１）が次いで得られる。
【００８４】
２）本発明による他の分子が、上に開示された操作プロトコールを利用しながら、製造さ
れた（実施例Ａ〜Ｆ）。これらの分子が、以降の実施例において、詳述される。
【００８５】
実施例Ｈ：
この実施例では、［ｍｏ］がペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）であり、本発明のスペーサーアームに、そのＣ末端により取り付けられる。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。こうして、この実施例では、実施例Ａ〜Ｆの反応スキームの分子（１）が、ＲＧＤにより置き換えられる。
ＲＧＤペプチドが取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは、式：
【００８６】
【化１１】
【００８７】
である。
【００８８】
実施例Ｉ：
この実施例は、実施例Ｈにおけるものと同一の［ｍｏ］を使用するが、本発明のスペーサーアームに、そのＮ末端により取り付けられる。更に、本発明のスペーサーアームの：
【００８９】
【化１２】
【００９０】
において、Ｘ１はＣであり、ｎ＝２０である。Ｃにより、水素化された（水素を有する）炭素（炭化水素）を意味するよう上手く意図される。
得られたビーズは式：
【００９１】
【化１３】
【００９２】
である。
【００９３】
実施例Ｊ：
この実施例では、［ｍｏ］は＜＜シアリルルイスＡ＞＞である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。その保護基はＢｏｃである。その固定化に関する化学は、当業者に知られている。
シアリルルイスＡが取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【００９４】
【化１４】
【００９５】
である。
【００９６】
実施例Ｋ：
この実施例では、［ｍｏ］は硫酸化された化合物である。支持体は上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
この硫酸化された化合物が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【００９７】
【化１５】
【００９８】
である。
もう１つ別のプロトコールでは、炭素Ｘ４が、硫黄原子で置き換えられた。対応しているビーズが得られた。
【００９９】
実施例Ｌ：
この実施例では、［ｍｏ］は保護された糖である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
この保護された糖が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【０１００】
【化１６】
【０１０１】
である。
【０１０２】
実施例Ｍ：
この実施例では、［ｍｏ］がシアル酸である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
シアル酸が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【０１０３】
【化１７】
【０１０４】
である。
【０１０５】
書誌的事項
[1] WO-A-03/008927: Dukler, N. Dotan, A. Shtavi, A. Gargir.
[2] H. M. I. Osborn, T. H. Khan, Tetrahedron, 1999, 55, 1807-1850.
[3] D. A. Stetsenko, M. J. Gai, Bioconjugate Chemistry, 2001, 12, 576-586.
[4] US-A-6,579,725: P. H. Seeberger, R. B. Andrade.
[5] R. Roy, C. A. Laferriere, Canadian Journal of Chemistry, 1990, 68, 2045-2054.
[6] L. H. Amundsen, L. S. Nelson, Journal of the American Chemical Society, 1951, 73, 242-244.
[7] J. F. Tolborg, K. J. Jensen, Chemical Communication, 2000, 147-148.
[8] F. Vinet, A. Hoang, EN 00 16940.
[9] K. Biswas, D. M. Coltart, S. J. Danishefsky, Tetrahedron Letters, 2002, 43, 6107-6110.
[10] C. Sylvain, A. Wagner, C. Miokowski, Tetrahedron Letters, 1997, 38, 1043-1044.
[11] Q. J. Plante, E. R. Palmacci, P. H. Seeberger, Science, 2001, 291, 1523-1527.
[12] P. H. Seeberger, Chem. Com., 2003, 1115-1121.
[13] D. M. Ratner, E. R. Swanson, P. H. Seeberger, Org. Lett. 2003, 4717-4720.
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分子スペーサーアーム、固体支持体に分子単位を繋ぐ該スペーサーアームの調製方法、ならびに、分子もしくは生体分子を有する分析チップ上でのこのスペーサーアームの利用（使用）に関する。
【０００２】
以降の開示においては、角括弧［］の間の番号は、本記載末尾の文献リストにある。
【０００３】
本発明により目的とされる分析チップは、より具体的には、しかし排除的にではなく、生物学的分析に用いられるバイオチップおよびミクロシステムである。これらは、３種のカテゴリー：
ＤＮＡチップ
チップ上ラボ＜＜Ｌａｂ−Ｏｎ−Ｃｈｉｐ＞＞
細胞チップ＜＜Ｃｅｌｌ−Ｏｎ−Ｃｈｉｐ＞＞
に帰される。
【０００４】
現在、新しいタイプのバイオチップ、糖チップ＜＜Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ＞＞が、至急求められている。このバイオチップは、天然もしくは合成基質の搭載の結果、または、オリゴ糖配列（オリゴ糖鎖）の違いに関する固相（支持された）マルチパラレル合成（コンビナトリアル・ケミストリー）の結果であり、オリゴ糖鎖は、内因性糖共役体の所定の大きなファミリーの分子の多様性の代表であり、例えば、ヘパラン硫酸である。本発明は特に、この新しいタイプのバイオチップによく適しており、つまり、これらの分子の、バイオチップ支持体への、化学的プロセスによる固定化を可能にし、先行技術と比較して有効であり、単純化されている。
【０００５】
これらの分子もしくは生体分子は＜＜分子単位＞＞として呼ばれ、本発明のスペーサーアームの仲介により、固体支持体に固定され得、例えば、核酸（ＤＮＡもしくはＲＮＡ）、糖、糖蛋白、糖脂質等であり得る。更に他の例も、以下に与えられる。
【背景技術】
【０００６】
バイオチップの大多数においては、スペーサーは、固体支持体［２］と、例えば、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド［３］、もしくはオリゴ糖［４］プローブとの間の結合を与える。このスペーサーは、一時に（同時に）複数の役割、繋いでいる分子、空間的な距離をあけるアーム、該プローブの開裂部位等を演じることができる。
【０００７】
該プローブによる標的の認識部位との該支持体の接近は実際、該プローブ／標的認識を障害、もしくは防ぐことさえあり、これゆえ、該バイオチップの分析の緻密さおよび質を害する。このことは特に、該プローブが小さい場合、例えば、糖チップの場合、当てはまる。
【０００８】
以下の原則式が、該スペーサーの形成次いで開裂の一般的なスキームを指し示し、式中、Ｘ’が固体支持体を表し、Ｘ”が分子単位を表す。
【０００９】
【化１】
【００１０】
数多くのスペーサーアームが今日までに実現されているが、これらはかなりの数の未解決の不便さを持っている。実際、これらの構造がこれらの該固体支持体への固定化に利用可能な化学プロセスの厳しい限界を暗喩するか、および／または、これらが容易に全タイプの生体分子に取り付かないようにするか、および／または、これらがとても化学的に安定であるので、一旦該固体支持体に固定されれば、元の生体分子に戻ってしまうこれらの開裂が容易に起き得ず、この最終体もしくは該支持体の劣化に至り得る。
【００１１】
米国特許第６，５７９，７２５号明細書（文献［４］）は、オリゴ糖を固定しているスペーサーアームを記載する。このスペーサーアームは、より先の先行技術のものよりも効果的であるが、同時に前記問題全てを解決することを可能にするものではない。その長さ、その機能、その反応性、およびその障害が常に、希望どおりに生じさせられないことも、特記できる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は精確に、先行技術の前記問題点を一気に解決することを可能にし、これは、以下の式（Ｉ）の分子スペーサーアームを提供することにある。
【００１３】
【化２】
【００１４】
式中、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は：
Ｘ０およびＸ４が各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、およびＳｉの中から選択され；
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々例えば２〜２０炭素原子を含み；
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｃ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、例えば１〜４０炭素原子を含み；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
［Ｇｐ］は２級アミン−Ｎ−の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子を表し；
式中：
ｎ、ｍ、およびｐは整数であり、各々１以上であり、お互い独立に、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦４０となるように選択され；
式中：
［Ｓｕｐ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームが共有結合的に固定され得るシラン化固体支持体を表し；
式中：
［ｍｏ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位を表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
勿論、Ｘ０〜Ｘ４は、本発明のスペーサーアーム骨格を形成している原子であり、基であって、例えば、Ｈ、Ｏ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み、これらの原子に固定されることが可能である。
【００１６】
このスペーサーアーム（Ｉ）は一般的に、分子単位［ｍｏ］を固体支持体［Ｓｕｐ］へと固定するのに利用可能であり、例えば、バイオチップ、もしくはより有利には糖チップを製造し、ここで［ｍｏ］は一般的に、該バイオチップを機能させる分子である。
【００１７】
本発明によれば、好ましくは、該スペーサーアーム（Ｉ）においては上で定義されたとおりであり：
Ｘ０およびＸ４は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉの中から選択され得；および／または
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され得、各々例えば２〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｎ、Ｃ−Ｒ、およびＳｉ−Ｒの中から選択され得、ここでＲはアルキルであり、１〜３０炭素原子、好ましくは１〜２０炭素原子、好ましくは１〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され得、各々２〜１０炭素原子を含む。
【００１８】
本発明によれば、ｎ、ｍ、およびｐもお互い独立に、１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦３０、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦２０、更に好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦１０となるよう選択され得る。
【００１９】
例えとして、本発明によれば、スペーサーアーム（Ｉ）においては上で定義されたとおりであり、Ｘ０およびＸ４がＣであり、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がＣであり、Ｚ１およびＺ２がＣであり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３がＨである。
【００２０】
本発明によれば、保護基［Ｇｐ］は、２級アミンの当業者に知られた保護基のいずれか１種であり得る。これは好ましくは、該スペーサーアームの合成の化学に耐えるように選択され、その固定化は該支持体上であり、その固定化は分子単位［ｍｏ］とのものである。これは例えば、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基（Ｒ）、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、Ｆｍｏｃ等の中から選択され得、スペーサーアーム（Ｉ）の２級アミンと共に、以下の化学基のうちの１種を形成する（＞Ｎとは、保護された２級アミンを指し示す、Ｐｈ＝フェニル、Ｍｅ＝メチル）。
＞Ｎ−Ａｃ：アセタミド（＞Ｎ−ＣＯ−Ｍｅ）
＞Ｎ−Ｂｎ：ベンジルアミド
＞Ｎ−Ｒ：Ｃ１〜Ｃ４０アリールアミド
＞Ｎ−Ｔｒｏｃ：２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＣｌ３）
＞Ｎ−Ｚ：ベンジルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）
＞Ｎ−ＴＣＡ：トリクロロアセトアミデート（＞Ｎ−ＣＯ−ＣＣｌ３）
＞Ｎ−ＢＯＣ：ｔ−ブチルカルバメート（＞Ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＣＭｅ３）
＞Ｎ−Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルカルバメート
【００２１】
【化３】
【００２２】
好ましくは、本発明によれば、該保護基は、Ａｃ、ＢＯＣ、もしくはＣ１〜Ｃ４０アリール基の中から選択される。
【００２３】
本発明によれば、分子［Ｇｐ］は、該スペーサーアームの機能に参画しており、例えば、Ｃ１〜Ｃ４０、例えばＣ１〜Ｃ３０、例えばＣ１〜Ｃ２０、もしくはＣ１〜Ｃ１０のアルキルもしくはアリールであり得る。これは如何なる置換基でもあり得、必ずしも保護的でなく、使用時に該スペーサーアームの機能に参画できる。これは例えば、疎水性基であり得、該スペーサーアームを、固定すべき分子［ｍｏ］および／または該スペーサーアーム使用中のその役割に対して、より特異的および／またはより選択的にすることを可能にし、例えば、糖チップもしくは蛋白チップ上においてである。
【００２４】
本発明によれば、該固体支持体は例えば、シラン化され得る全ての支持体たり得る。これは例えば、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーたり得る。これは例えば、シリカ、ガラス、もしくは、当業者に知られた他の素材主体たり得、例えば、バイオチップの支持体もしくは表面を製造するためである。該支持体のシラン化は、当業者に知られた全ての方法により、実施（実現）され得る。
【００２５】
本発明によれば、分子単位［ｍｏ］は、天然もしくは合成分子であり得る。これは例えば分析面での理由により、支持体に固定されねばならない全ての分子であり得る。これは小分子であり得、例えば、約１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている。これが糖である場合、［ｍｏ］は例えば、１８０〜１０，０００ｇ／モルの分子量を持ち得る。これが蛋白もしくはペプチドである場合、［ｍｏ］は例えば、５，５００〜４００，０００ｇ／モル、一般的には５，５００〜２２０，０００ｇ／モルの分子量を持ち得る（殆どの蛋白の分子量である）。
【００２６】
この分子単位［ｍｏ］は例えば、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、
酵素、糖蛋白、脂質、脂肪酸、糖脂質、糖脂質蛋白等の中から選択され得る。
【００２７】
単糖の中では、グルコース、グルコサミン、アジドグルコサミン、Ｄ−リボース、Ｄ
−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース
、２−デオキシ−Ｄ−リボース、Ｌ−フコース、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−Ｄ−グルコサミ
ン、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル（Ａｃ）−ノイラミン酸
、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−イズロン酸、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール等を引用で
きる。
【００２８】
オリゴ糖の中では、サッカロース、ラクトース、ヘパラン硫酸断片（分解物）、ヘパリ
ンの糖断片、コンドロイチン、デルマタン硫酸、ルイス抗原等を引用できる。
【００２９】
多糖の中では、ヘパラン硫酸の、ヘパリンの、コンドロイチンの糖部分、デルマタン硫酸等を引用できる。
【００３０】
糖共役体の中では、ヘパラン硫酸、ヘパリン、コンドロイチン、デルマタン硫酸等を引用できる。
【００３１】
ペプチドおよび蛋白の中では、ケモカイン、サイトカイン、インシュリン、フィブリノーゲン、ミオシン、ヘモグロビン等を引用できる。
【００３２】
酵素の中では、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、分解酵素（リアーゼ）、異性化酵素、連結酵素（リガーゼ）を引用できる。
【００３３】
糖蛋白の中では、免疫（免役、イムノ）グロブリンＧ、ヒアルロン酸等を引用できる。
【００３４】
脂質の中では、加水分解可能な脂質：
脂肪（グリセロール＋３脂肪酸）、ワックス（脂肪酸＋脂肪アルコール）、ステロールエステル（ステロール＋脂肪酸）、燐脂質（ホスファチジル酸（グリセロール、２脂肪酸＋ホスフェート））、ホスファリド（グリセロール＋２脂肪酸＋ホスフェート）、スフィンゴ脂質（スフィンゴシン＋脂肪酸＋ホスフェート＋アミノアルコール）；
加水分解可能でない脂質：
アルカン、カロテノイド、ステロール（コレステロール）、ステロイド（エストラジオール、テストステロン）、酸（脂肪酸）、エイコサノイド
等を引用できる。
【００３５】
脂肪酸の中では、アラキドン酸、リノレイン酸、リノレン酸、ラウリル酸、ネルボニック（ｎｅｒｖｏｎｉｑｕｅ）酸、パルミチン酸、オレイン酸等を引用できる。
【００３６】
糖脂質の中では、ガラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ガングリオシド、セレブロシド（脂肪酸＋スフィンゴシン＋１糖）、ガングリオシド（脂肪酸＋スフィンゴシン＋数多くの糖、ノイラミン酸）等を引用できる。
【００３７】
糖脂質蛋白の中では、ＭＰＢ８３ＴＭ、ＧＬＰ１９ＴＭ、およびＩＲＢＰＴＭを引用できる。
【００３８】
本発明は、分子単位［ｍｏ］の、固体支持体への、スペーサーアーム、有利には本発明のものの仲介による、共有結合的な固定方法にも関する。
【００３９】
本方法は、以下のステップを含み得る。
（ｉ）式：
【００４０】
【化４】
【００４１】
の化合物の、ニトリル官能基の還元
（ｉｉ）式：
【００４２】
【化５】
【００４３】
の生体分子のアリル官能基からの、アルデヒド官能基の形成
（ｉｉｉ）形成される２級アミンの保護を伴うこの還元されたニトリル官能基と、該アルデヒド官能基との間での還元的アミノ化であって、該支持体へのその固定化のために活性化された生体分子を得、この活性化された生体分子は式：
【００４４】
【化６】
【００４５】
である。
（ｉｖ）固体支持体のシラン化、および、このシラン化された固体支持体の官能基化。式：
【００４６】
【化７】
【００４７】
の分子を用いる。
（ｖ）該支持体を官能基化させる分子と、この活性化された生体分子との間でのメタセシス化反応であって、本発明によるスペーサーアームを形成させ、該生体分子と該支持体とを繋ぐ。
【００４８】
この方法において、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および［ｍｏ］は、上に定義されたとおりである。
【００４９】
本発明によれば、式：
【００５０】
【化８】
【００５１】
の化合物は例えば、アリル化糖であり得、［ｍｏ］が該糖である。このアリル化糖は、当業者に知られた如何なるプロセスによっても得られ、該糖を変化させない。例えば、文献［５］に記載のプロセスであり得る。
【００５２】
本発明によれば、該２級アミンも、保護基により保護され得る。このため、本発明のプロセスは、保護基［Ｇｐ］の、該２級アミン官能基への固定化ステップも含み得る。該保護基は、上に定義されたとおりであり得る。これの該２級アミンへの固定化は、当業者に知られた如何なる化学プロセスによっても実施され得、例えば、文献［７］に記載のプロセスの１つに従う。
【００５３】
本発明のこのプロセスの種々のステップを実施に移すには、当業者に知られた有機化学の古典的プロセスが利用され得る。このため、例として、ニトリル還元ステップに関しては、文献［６］に記載のプロセスが利用され得る。生体分子のアリル官能基からのアルデヒド官能基の形成ステップに関しては、文献［５］に記載のオゾン分解プロセスが利用され得る。還元的アミノ化、次いで、その還元されたニトリルと該アルデヒド官能基との間でのその窒素の保護ステップに関しては、活性化された生体分子を得るために、文献［７］に記載のプロセスが使用され得る。該固体支持体のシラン化およびこれの官能基化ステップに関しては、文献［８］に記載のプロセスが利用され得る。該メタセシス反応に関しては、文献［１０］に記載のプロセスが利用され得る。
【００５４】
本発明のスペーサーアームはこれゆえ、結合されている３つの部分から創出され得、一方では、還元的アミノ化、次いで該分子単位側での窒素の保護により、もう一方では、Ｇｒｕｂｂｓのメタセシス反応による。Ｇｒｕｂｂｓの該メタセシスは例えば、文献［１１］に記載される。
【００５５】
該炭素鎖中に挿入される窒素原子は、複数の利点を有する。２本の鎖の取り付けの間に得られ、２級アミンの形で見出され、種々の方式で保護でき、該スペーサーに特異的な反応性を与える。この機能は場合毎に、種々の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子により、有利に調節可能であり、該スペーサーアームの親水性もしくは疎水性を変動させて制御し、その立体障害を制御することを可能にする。該スペーサーアームのこの部分の求電子性／求核性または酸性／塩基性を調節することも、有利に可能である。該窒素原子の保護基の性質はこれゆえ好ましくは、反応、相互作用、または、特徴付けもしくは分析の操作の条件を最適化していく狙いを持って、該スペーサーの開裂前もしくは後に選ばれ、該分子単位を解放する。例えば、アセチル基を用いると、その小さな大きさのために、かすかな立体障害が得られ、これは、該スペーサーアームの利用の間の、例えば分子チップ上での分子認識の最適化を可能にする。例えばまた、ブチル基を用いると、該スペーサーのこの部分を疎水性にする疎水性炭素置換基が得られ、これは例えば、該スペーサーアームの親水性部分（［ｍｏ］）に対して、より特異的、より選択的な親水性蛋白の認識を可能にする。
【００５６】
本発明はこれゆえ、調節可能なスペーサーアーム（もしくは＜＜スペーサー＞＞）を提供し、その種々の構造が、該アームの反応性、つまり、これの化学的および／または電気化学的および／または立体的挙動に、影響を与える。
【００５７】
本発明は、簡単かつ効果的に実施可能であり、該スペーサーは有利に、以下の３つの特性を有し、特に、糖チップ製造のために実施される場合である。
【００５８】
−まず、該スペーサーは上手くアームの機能を発揮し、その糖鎖を、この鎖を支持する固体表面から離しておく。
【００５９】
−次に、該スペーサーは、開裂可能なアームである。容易にかつ狙ったように、該スペーサーを開裂させることが可能であり、該糖を、該支持相から単離する。
【００６０】
−最後に、該スペーサーは、そのかすかな化学的官能基割合（程度）のために、該糖単位上で、例えば糖チップの利用の間に実施される数多くの反応条件において、不活性なままである。
【００６１】
前記利点の他、本発明者らは、本発明の種々の実験を実施に移す間に、以下のことに気付いた。
【００６２】
−該スペーサーアームが、該固体支持体の存在による立体（障害）の問題を克服することを可能にする。良好な立体的な条件において、得られた糖チップ上での蛋白／糖相互作用を研究することを可能にする。該蛋白の該糖リガンドに対する接近の間に、その将来の潜在的相互作用に害であった先行技術において提示された立体障害の問題を、解決させる。
【００６３】
−該アームの長さが調節可能である。異なる大きさの相同官能基の賢明な選択が、特に出発反応試薬の選択を通して、異なるサイズのスペーサーの調製を可能にする。
【００６４】
−該糖鎖と該固体支持体との間の距離を選択することだけが可能なだけでなく、その保護基による該スペーサーのこの部分の親水性もしくは疎水性を制御することも可能である。
【００６５】
−該スペーサーの化学構造の簡潔さはそれに、数多くの有機反応の間の化学的非反応性を付与し、これは、その製造、および、該糖チップの利用の場合である。
【００６６】
−該スペーサーは、その相互作用化学官能基がないために、他の分子との潜在的相互作用に影響せず、これは、このシステムが糖チップ、もしくはより一般的に小分子チップの関係において利用される場合である。
【００６７】
−該スペーサーは精確におよび選択的に、そのＣ＝Ｃ２重結合レベルで、生体分子、例えばオリゴ糖を変化させない反応条件において、開裂可能である。実際、例えば、オゾン分解（Ｏ３）、Ｇｒｕｂｂｓのメタセシス（Ｇｒｕｂｂｓ触媒）、もしくは、ジオールのオスミウム酸化開裂（ＯｓＯ４、ＮａＩＯ４）後のジヒドロキシル化、および、当業者に知られる温和な他の化学反応が便利に、該開裂に利用され得る。
【００６８】
−該スペーサーが容易に開裂でき、この開裂が該糖構造を修飾しないとの事実が、単離オリゴ糖鎖の構造およびコンホメーション解析の制御を実施することを可能にする。該糖合成の間に該固体支持体に取り付けられた（＜＜ロード＞＞）糖プローブ量を計算することも、容易である。
【００６９】
このスペーサーの利点の１つは、文献［１］に記載のものと比較すると（例えば、オクテンジオール）、その長さ、その官能基、その反応性、およびその立体障害の適応性にあり、希望どおりに生成され得る。
【００７０】
本発明者は同様に、本発明のスペーサーが、非常に大きな範囲の糖、オリゴ糖、もしくは多糖との結合を可能にすることを特記し、これらは非常にしばしば予め合成され、これらの還元部分のアノマー位においてアリル基により保護される。１ステップで、これらの糖単位は実際変換され得、該スペーサー上で直接結合する。これゆえ、このスペーサーは有利に、数多くの糖分子と相容れ、例えば、文献［７］、［１２］、および［１３］において既に合成され、記載されている。
【００７１】
本発明は例えば糖チップ、例えば、特定蛋白を認識しているオリゴ糖配列のスクリーニングにより同定にかかるチップの製造に利用され得、例えば、文献［１］に記載の技術に従う。本願では、本発明が該スクリーニングプロセスを最適化し、これゆえより効果的かつより速く、治療もしくはバイオテクノロジー目的の分子を持つことを可能にする。この能力は、本発明のその他の応用にも存在していると期待できる。
【００７２】
本発明はバイオチップ上でも利用され得、ここではスペーサーアームが、固体支持体と、オリゴペプチドプローブ、オリゴヌクレオチドプローブ、および／またはオリゴ糖プローブとの間の結合を形成しなくてはならない。特に、本発明のスペーサーアームは、文献［３］に記載のもののようなオリゴペプチドチップ、もしくは、文献［４］に記載のもののようなオリゴ糖チップ上において、利用され得る。
【００７３】
他の特徴および利点も、例示目的で与えられる以降の実施例を読んでいくと、当業者には明らかとなる。
【実施例】
【００７４】
１）例として、１４炭素鎖に対応している長さのスペーサーの合成が、以下に開示され、当業者にアクセス可能なものの中から選ばれる操作プロトコールを利用している。太字の参照番号は、以下の反応スキームに関する。
選ばれる化合物は：
グルコースタイプ（１、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）：１位アリル化糖）の単糖（１）。分子単位［ｍｏ］を構成している。
４−ペンテンニトリル（３）。還元すべきニトリル官能基を持っている。
７−オクテニルトリメトキシシラン（８）。該支持体の官能基化用。
である。該固体支持体は、シリカ主体のＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｐｏｒｅ ＧｌａｓｓＴＭ（ＣＰＧ）ビーズにより、構成される。
以下の反応スキームは、オリゴ糖（１）の支持体（６）への固定化に関するこれらの実施例において企画される化学反応を一緒に纏め、本発明によるスペーサーアームによる。これらの化学反応は、文字Ａ〜Ｆにより指し示される。該スペーサーアームの開裂反応の１例は、以下の実施例Ｇに提示される。
この反応スキーム上で、糖の上で指し示される基＜＜Ｒ＞＞は、その表現を簡素化するために、意図的に分類されていない。これらの基＜＜Ｒ＞＞は置換基を表し、同一でも異なっていてもよく、該糖を形成している環上の種々の位置にあってよく、一般的に糖において見られる置換基であり得る。ここに提示される特定例において、利用される糖はＮ−アセチルグルコサミンであり、当業者は、化合物（１）、（２）、（５）、および（１０）の種々の位置における置換基＜＜Ｒ＞＞を同定するのに、全く困難ではない。
【００７５】
実施例Ａ：本オリゴ糖の活性化（反応Ａ）
オゾン分解反応が、この実施例において利用（使用）される。使用されるプロセスは、文献［５］に記載される。
アノマー位においてアリル化された糖（１、０．９３ミリモル）が、ジクロロメタンとメタノールとの１／１混合物（混合溶媒）５ｍＬに溶解され、溶媒が冷浴中、温度−７８℃（アセトン＋ドライアイス）に浸される。オゾンＯ３が次いで、該溶液中でバブリングされなくてはならず、その青色（過剰なオゾンの特徴）の出現から直ぐ、該オゾンがアルゴン（もしくは窒素）で置き換えられる。反応が完結したら、ジメチルスルフィド（Ｍｅ２Ｓ、４．６５ミリモル、５当量）の添加により、還元していくようにされる。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）が次いで、形成される。溶媒（反応）がゆっくり、常温まで一夜に亘り戻り、次いで真空下にエバポレーションされる。有機物の残渣が、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）を用いて回収され、水洗される。有機相が真空下にエバポレーションされ、次いでトルエン共沸される。粗生成物が、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製される（溶出液：石油エーテル／酢酸エチル＝８／２）。
こうして、アルデヒド（２）が、収率７５％で得られる。
【００７６】
実施例Ｂ：ニトリルの還元（反応Ｂ）
使用される化学プロセスは、文献［６］に記載される。
水素化リチウムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４、３８１ｍｇ、１０．０３ミリモル、１当量）が、蒸留したてのジエチルエーテル（２０ｍＬ）中に導入される。
４−ペンテンニトリル（３、８１４ｍｇ、１ｍＬ、１０．０３ミリモル）がゆっくり、反応溶媒に加えられ、窒素雰囲気下に、温度０℃において（氷浴）、攪拌される。攪拌は約２０分間、常温において継続されなくてはならない。
次に、水（０．４ｍＬ）、次いで２０％水酸化ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ）、そして仕上げにもう１つ別量の水（１．４ｍＬ）が、加えられる。これらの添加は、その中和が激しくなる可能性があるので、非常に前もって注意して実施されねばならない。ジエチルエーテル溶液がデカンテーションされると、無機物の白色残渣から、上清が抽出される。
白色固体（該残渣）が２回、ジエチルエーテルを用いて洗浄され、有機相が再び合わされる。３Ｍ塩酸（ＨＣｌ）がこの有機相に加えられ、酸性ｐＨ（ｐＨ＜７）を得る。反応し切っていない４−ペンテンニトリルがエーテル相に残っている一方、前記アミンは水相に移行する。
抽出後、該水相がこうして保存され、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の３Ｍ溶液がこれに加えられ、塩基性ｐＨ（ｐＨ＞７）に変わる。アミノ化された生成物が次いで、この新たな抽出の間にエーテル相に移行していく。このように抽出されたエーテル相が、硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）により（フラスコ中で）乾燥され、次いで真空下にエバポレーションされる（ロータリー・エバポレーター）。
粗アミン（クルードのアミン、４）が次いで、分画蒸留により精製される（バルブ・オーブン、Ｔ≒９６℃±９℃）。
１ＨＮＭＲ解析（ＢｒｕｅｃｋｅｒＡＭ２５０）：５．８２（ｄｄｔ、３Ｊｔｒａｎｓ＝１８Ｈｚ、３Ｊｃｉｓ＝１３Ｈｚ、３Ｊ（ＨＩ）＝６．５Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨ＝）、５．００（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２＝）、２．７０（ｔ、３ＪＩＩ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩＩＩ）、２．１０（ｔｔｄ、３Ｊ（ＨＩＩ）＝６．５Ｈｚ、３Ｊ（ＨＣ）＝６．５Ｈｚ、３Ｊ（Ｈ２Ｃ−）＝１．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩ）、１．７０（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．５６（ｑｕｉｎｔ．、３Ｊ（ＨＩＩ）＝３Ｊ（ＨＩＩＩ）＝６．５Ｈｚ、２Ｈ、ＣＨＩＩ）
１３ＣＮＭＲ解析（ＢｒｕｅｃｋｅｒＡＭ２５０）：１３８．６（ＣＨ＝）、１１４．６（ＣＨ２＝）、４２．０（ＣＨ２−Ｎ）、３３．１（ＣＨ２）、３１．４（ＣＨ２）
【００７７】
実施例Ｃ：還元的アミノ化（反応Ｃ）
使用される化学プロセスは、文献［７］に記載される。
アルデヒド（２、２０．８７ミリモル）が、水素化カルシウム（ＣａＨ２）から蒸留したてのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１．２ｍＬ）に溶解され、溶媒が攪拌に付され、アミン（４、３１．３０ミリモル、２当量）が加えられる。２０分台の後、ナトリウムシアノボロヒドリド（ＮａＢＨ３ＣＮ、８３．４７ミリモル、４当量）が混合物に加えられ、常温において一夜攪拌され続ける。
（それでも）反応が完結しなければ、ＮａＢＨ３ＣＮ（１当量）を再び加えることが可能である。次に、反応が完結したら、ピリジン（２．４ｍＬ）および無水酢酸（Ａｃ２Ｏ、８３．４７ミリモル、２当量／アミン）が、混合物に加えられる。
反応が完結したら（添加後約１時間）、粗化合物が、ジエチルエーテルおよび水を用いて抽出される。再び合わされた有機相が、硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）により乾燥され、次いで濾過され、真空下にエバポレーションされ、次いでトルエン共沸される。
化合物（５）が次いで、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製される（溶出液勾配：シクロヘキサン／酢酸エチル＝７／３〜５／５）。
【００７８】
実施例Ｄ：本固体支持体の官能基化（反応ＤおよびＥ）
使用された化学プロセスが、文献［７］に記載される。
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｐｏｒｅ Ｇｌａｓｓビーズ（６、ＣＰＧ、５００Å、２ｇ）が非常に穏やかに２時間、常温において、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、７００ｍｇ）の脱イオン水（ＥＤＩ、６ｍＬ）と９９％エタノール（ＥｔＯＨ、８ｍＬ）との溶液中、攪拌される。次いで該ビーズが遠心され、上清が抽出され、該ビーズが潤沢なＥＤＩを用いて洗浄され、中性ｐＨに到達する。
該ビーズが次いで真空下に（ロータリー・エバポレーター）乾燥され、常温に１時間、塩酸（ＨＣｌ０．２Ｎ）中に保たれ、その後水洗され、遠心され、乾燥され、次いで８０℃のインキュベーターに１５分間入れられる。次いでエタノールで、次いでトルエンを用いて洗浄される（遠心）。
次いで乾燥され、その後引き続いてのシラン化ステップにおいて沈澱され、こうして、反応混合物が用いられる直前に調製されたことになる。
ＣＰＧビーズ（７）が、トルエン（４５ｍＬ）、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、１．３５ｍＬ）、および７−オクテニルトリメトキシシラン（８、Ｃ１１Ｈ２４Ｏ３Ｓｉ、分子量２３２．３９、１００μＬ）の混合物中に導入され、反応溶媒が８０℃に１６時間置かれる（インキュベーター）。
該ビーズが該混合物から遠心により抽出され、エタノールを用いて複数回濯がれ、次いで乾燥される（ロータリー・エバポレーター）。次いで温度１１０℃に３時間付され、架橋ステップを実施する（インキュベーター）。
シラン化ステップおよび架橋ステップがこうして実施され、該シラン化ステップの間に反応しなかった表面シラノールの残りの酸性および親水性を中和する必要がある（＜＜末端封鎖＞＞）。トリメチルシリルクロリド（ＴＭＳＣｌ、１０９ｍｇ、１３０μＬ）およびトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、５０６ｍｇ、７００μＬ）のジクロロメタン（ＤＣＭ、１０ｍＬ）溶液が、シラン化されたＣＰＧビーズに加えられ、混合物が穏やかに２時間、２５℃において攪拌され続ける。
該ビーズが次いで、ジクロロメタン（遠心）、次いでアセトニトリル（遠心）で充分に濯がれる。該ビーズは次いで、真空下に乾燥され（ロータリー・エバポレーター）、インキュベーターに入れられ（８０℃）、その乾燥を完全にする。
シラン化ビーズ（９）が、こうして得られる。
【００７９】
実施例Ｆ：メタセシス反応（反応Ｆ）
使用される化学プロセスは、文献［９］に記載される。
シラン化ＣＰＧビーズ（９）（２ｇ、３０μモル／ｇ）が、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中で、窒素雰囲気下に攪拌に付される。糖−スペーサーシステム（５）（３００μモル、＞５当量）が次いで溶媒に、Ｇｒｕｂｂｓ触媒（６μモル、５ｍｇ、０．１当量）と共に加えられる。該反応溶媒が次いで還流、つまり温度４４℃とされる。
６時間後、もう１部別のＧｒｕｂｂｓ触媒（６μモル、５ｍｇ、０．１当量）が加えられる。混合物は４４℃において更に６時間維持され、次いで常温に戻される。
該ビーズが濾過され、ジクロロメタンおよびエタノールで充分洗浄される（遠心）。該ビーズが次いで、真空下にエバポレーションされ、乾燥される。
糖ビーズ（１０）が、こうして得られる。
【００８０】
【化９】
【００８１】
実施例Ｇ：本プローブの開裂（反応Ｇ）
使用される化学プロセスは、文献［１０］に記載される。
固体支持体−本発明のスペーサー−オリゴ糖鎖（システム（１０））が得られたら、該糖鎖を変性させることなく、該スペーサーを開裂させることが可能となる。
この実験プロトコールは、文献［５］に記載される。該化学反応式は、以下のとおりである。
【００８２】
【化１０】
【００８３】
糖ＣＰＧビーズ（１０）が、ジクロロメタン／メタノール＝１／１混合溶媒中で、ゆっ
くり攪拌に付される。該溶媒は、温度−７８℃（アセトン＋液体窒素）にされる。
次いで、オゾンＯ３が、青色が出現するまで、反応溶媒中へバブリングされる。
次いで、アルゴンが混合物中へ数分間バブリングされ、その後、溶媒をジメチルスルフ
ィドで中和し、次いで、該反応溶媒が放置され、一夜の間に常温にまで戻る。
該ビーズがジエチルエーテルで回収され、濾過され、ジエチルエーテルおよび水で複数
回濯がれる。
ビーズ（１２）が次いで脇に避けられ、上清が抽出され（ジエチルエーテル／水）、有
機相が硫酸マグネシウム（硫マグ、ＭｇＳＯ４）で乾燥され、真空下にエバポレーション
され、トルエン共沸される。
生成物（１１）が次いで得られる。
【００８４】
２）本発明による他の分子が、上に開示された操作プロトコールを利用しながら、製造さ
れた（実施例Ａ〜Ｆ）。これらの分子が、以降の実施例において、詳述される。
【００８５】
実施例Ｈ：
この実施例では、［ｍｏ］がペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）であり、本発明のスペーサーアームに、そのＣ末端により取り付けられる。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。こうして、この実施例では、実施例Ａ〜Ｆの反応スキームの分子（１）が、ＲＧＤにより置き換えられる。
ＲＧＤペプチドが取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは、式：
【００８６】
【化１１】
【００８７】
である。
【００８８】
実施例Ｉ：
この実施例は、実施例Ｈにおけるものと同一の［ｍｏ］を使用するが、本発明のスペーサーアームに、そのＮ末端により取り付けられる。更に、本発明のスペーサーアームの：
【００８９】
【化１２】
【００９０】
において、Ｘ１はＣであり、ｎ＝２０である。Ｃにより、水素化された（水素を有する）炭素（炭化水素）を意味するよう上手く意図される。
得られたビーズは式：
【００９１】
【化１３】
【００９２】
である。
【００９３】
実施例Ｊ：
この実施例では、［ｍｏ］は＜＜シアリルルイスＡ＞＞である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。その保護基はＢｏｃである。その固定化に関する化学は、当業者に知られている。
シアリルルイスＡが取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【００９４】
【化１４】
【００９５】
である。
【００９６】
実施例Ｋ：
この実施例では、［ｍｏ］は硫酸化された化合物である。支持体は上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
この硫酸化された化合物が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【００９７】
【化１５】
【００９８】
である。
もう１つ別のプロトコールでは、炭素Ｘ４が、硫黄原子で置き換えられた。対応しているビーズが得られた。
【００９９】
実施例Ｌ：
この実施例では、［ｍｏ］は保護された糖である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
この保護された糖が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【０１００】
【化１６】
【０１０１】
である。
【０１０２】
実施例Ｍ：
この実施例では、［ｍｏ］がシアル酸である。支持体は、上に開示した操作プロトコール中のものと同一である。
シアル酸が取り付けられるビーズが、こうして得られる。これは式：
【０１０３】
【化１７】
【０１０４】
である。
【０１０５】
書誌的事項
[1] WO-A-03/008927: Dukler, N. Dotan, A. Shtavi, A. Gargir.
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
の分子スペーサーアームであって、式中：
Ｘ０およびＸ４は、該スペーサーアームを介しての［ｍｏ］および［Ｓｕｐ］の結合を可能にするよう調節可能な置換基であり、Ｘ０およびＸ４はＨとは異なり、各々、該スペーサーアームの他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、およびＳｉの中から選択され；
式中、置換基Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は：
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｃ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、１〜４０炭素原子を含み；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
［Ｇｐ］は２級アミン−Ｎ−の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子を表し；
式中：
ｎ、ｍ、およびｐは整数であり、各々１以上であり、お互い独立に、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦４０となるように選択され；
式中：
［Ｓｕｐ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームが共有結合的に固定されることができるシラン化固体支持体を表し；
式中：
［ｍｏ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位を表す
スペーサーアーム。
【請求項２】
Ｘ０およびＸ４が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉの中から選択され；および／または
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｚ１およびＺ２が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｎ、Ｃ−Ｒ、およびＳｉ−Ｒの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、１〜３０炭素原子を含み；および／または
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜１０炭素原子を含む、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項３】
保護基［Ｇｐ］が、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、およびＦｍｏｃの中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項４】
固体支持体［Ｓｕｐ］が存在している場合、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項５】
［Ｓｕｐ］がシリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１もしくは４に記載のスペーサーアーム。
【請求項６】
［ｍｏ］が存在している場合、１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている
分子である、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項７】
［ｍｏ］が存在している場合、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、
酵素、糖蛋白、脂質、脂肪酸、糖脂質、および糖脂質蛋白の中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項８】
［ｍｏ］が存在している場合、糖である、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項９】
分子単位［ｍｏ］をシラン化固体支持体［Ｓｕｐ］に固定するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のスペーサーアームの使用。
【請求項１０】
［ｍｏ］が１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている分子である、請求項
９に記載の使用。
【請求項１１】
［ｍｏ］が、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、および、天然もしくは合成小分子の中
から選択され、［Ｓｕｐ］が、前記スペーサーアームが固定されるべきシラン化固体支持
体を表す、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
［Ｓｕｐ］が、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
［Ｓｕｐ］が、シリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
バイオチップを生産するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
糖チップを生産するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
分子単位［ｍｏ］の支持体への、スペーサーアームの仲介による、共有結合による固定方法であって、以下のステップ：
（ｉ）式：
【化２】
の化合物のニトリル官能基の還元
（ｉｉ）式：
【化３】
の生体分子のアリル官能基からの、アルデヒド官能基の形成
（ｉｉｉ）形成された２級アミンの保護を伴うこの還元されたニトリル官能基と、該アルデヒド官能基との間での還元的アミノ化であって、該支持体へのその固定化のために活性化された生体分子を得、この活性化された生体分子が式：
【化４】
である、還元的アミノ化
（ｉｖ）固体支持体のシラン化、および、このシラン化された固体支持体の、式：
【化５】
の分子での官能基化
（ｖ）該支持体を官能基化させる分子と、この活性化された生体分子との間でのメタセシス化反応であって、本発明によるスペーサーアームを形成させ、該生体分子と該支持体とを繋ぐメタセシス化反応
を含み、式中、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および［ｍｏ］は、請求項１において定義されたとおりである、方法。
【請求項１７】
式：
【化６】
の化合物がアリル化糖であり、［ｍｏ］が該糖である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
［Ｓｕｐ］が、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
［Ｓｕｐ］が、シリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１６もしくは１８に記載
の方法。
【請求項２０】
［ｍｏ］が、１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている分子である、請求
項１６に記載の使用。
【請求項２１】
［ｍｏ］が、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、酵素、糖蛋白、脂質
、脂肪酸、糖脂質、および糖脂質蛋白の中から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
［ｍｏ］が糖である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
保護基［Ｇｐ］の、前記２級アミン官能基への固定化ステップも含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
［Ｇｐ］が、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、およびＦｍｏｃの中から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
バイオチップの生産のための、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項２６】
糖チップの生産のための、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
の分子スペーサーアームであって、式中：
Ｘ０およびＸ４は、該スペーサーアームを介しての［ｍｏ］および［Ｓｕｐ］の結合を可能にするよう調節可能な置換基であり、Ｘ０およびＸ４はＨとは異なり、各々、該スペーサーアームの他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、およびＳｉの中から選択され；
式中、置換基Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は：
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は各々他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｐ、Ａｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
Ｚ１およびＺ２は各々他の置換基とは独立に、Ｃ−Ｒ、Ｓｉ−Ｒ、Ｃ、Ｎ、Ｐ、およびＡｓの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、１〜４０炭素原子を含み；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は各々他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜２０炭素原子を含み；
［Ｇｐ］は２級アミン−Ｎ−の保護基、もしくは、該スペーサーアームの機能に参画する分子を表し；
式中：
ｎ、ｍ、およびｐは整数であり、各々１以上であり、お互い独立に、好ましくは１≦ｎ、ｍ、およびｐ≦４０となるように選択され；
式中：
［Ｓｕｐ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームが共有結合的に固定されることができるシラン化固体支持体を表し；
式中：
［ｍｏ］は、Ｈ、もしくは、該スペーサーアームの仲介により共有結合的に該シラン化固体支持体上に固定されることを目的とされる分子単位を表す
スペーサーアーム。
【請求項２】
Ｘ０およびＸ４が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉの中から選択され；および／または
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、および、アリールおよびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜１０炭素原子を含み；および／または
Ｚ１およびＺ２が他の置換基とは独立に、Ｃ、Ｎ、Ｃ−Ｒ、およびＳｉ−Ｒの中から選択され、ここでＲはアルキルであり、１〜３０炭素原子を含み；および／または
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が他の置換基とは独立に、Ｈ、アルキル、アリール、およびヘテロアリールの中から選択され、各々２〜１０炭素原子を含む、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項３】
保護基［Ｇｐ］が、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、およびＦｍｏｃの中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項４】
固体支持体［Ｓｕｐ］が存在している場合、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項５】
［Ｓｕｐ］がシリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１もしくは４に記載のスペーサーアーム。
【請求項６】
［ｍｏ］が存在している場合、１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている
分子である、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項７】
［ｍｏ］が存在している場合、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、
酵素、糖蛋白、脂質、脂肪酸、糖脂質、および糖脂質蛋白の中から選択される、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項８】
［ｍｏ］が存在している場合、糖である、請求項１に記載のスペーサーアーム。
【請求項９】
分子単位［ｍｏ］をシラン化固体支持体［Ｓｕｐ］に固定するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のスペーサーアームの使用。
【請求項１０】
［ｍｏ］が１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている分子である、請求項
９に記載の使用。
【請求項１１】
［ｍｏ］が、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、および、天然もしくは合成小分子の中
から選択され、［Ｓｕｐ］が、前記スペーサーアームが固定されるべきシラン化固体支持
体を表す、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
［Ｓｕｐ］が、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
［Ｓｕｐ］が、シリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
バイオチップを生産するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
糖チップを生産するための、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
分子単位［ｍｏ］の支持体への、スペーサーアームの仲介による、共有結合による固定方法であって、以下のステップ：
（ｉ）式：
【化２】
の化合物のニトリル官能基の還元
（ｉｉ）式：
【化３】
の生体分子のアリル官能基からの、アルデヒド官能基の形成
（ｉｉｉ）形成された２級アミンの保護を伴うこの還元されたニトリル官能基と、該アルデヒド官能基との間での還元的アミノ化であって、該支持体へのその固定化のために活性化された生体分子を得、この活性化された生体分子が式：
【化４】
である、還元的アミノ化
（ｉｖ）固体支持体のシラン化、および、このシラン化された固体支持体の、式：
【化５】
の分子での官能基化
（ｖ）該支持体を官能基化させる分子と、この活性化された生体分子との間でのメタセシス化反応であって、本発明によるスペーサーアームを形成させ、該生体分子と該支持体とを繋ぐメタセシス化反応
を含み、式中、置換基Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および［ｍｏ］は、請求項１において定義されたとおりである、方法。
【請求項１７】
式：
【化６】
の化合物がアリル化糖であり、［ｍｏ］が該糖である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
［Ｓｕｐ］が、プレート、ビーズ、もしくはキャピラリーの中から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
［Ｓｕｐ］が、シリカ主体もしくはガラス主体である、請求項１６もしくは１８に記載
の方法。
【請求項２０】
［ｍｏ］が、１８０〜４００，０００ｇ／モルの分子量を持っている分子である、請求
項１６に記載の使用。
【請求項２１】
［ｍｏ］が、単糖、オリゴ糖、多糖、糖共役体、ペプチド、蛋白、酵素、糖蛋白、脂質
、脂肪酸、糖脂質、および糖脂質蛋白の中から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
［ｍｏ］が糖である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
保護基［Ｇｐ］の、前記２級アミン官能基への固定化ステップも含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
［Ｇｐ］が、Ａｃ、ベンジル（Ｂｎ）、Ｃ１〜Ｃ４０アリール基、Ｔｒｏｃ、Ｚ、ＴＣＡ、ＢＯＣ、およびＦｍｏｃの中から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
バイオチップの生産のための、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項２６】
糖チップの生産のための、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【公表番号】特表２００７−５２３９４５（Ｐ２００７−５２３９４５Ａ）
【公表日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５００２７３（Ｐ２００７−５００２７３）
【出願日】平成１７年２月２２日（２００５．２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／０５０１１７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８５２６３
【国際公開日】平成１７年９月１５日（２００５．９．１５）
【出願人】（５００３４８６９７）コミッサリア ア レネルジー アトミーク (21)
【氏名又は名称原語表記】ＣＯＭＭＩＳＳＡＲＩＡＴ Ａ Ｌ´ＥＮＥＲＧＩＥ ＡＴＯＭＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月２２日（２００５．２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／０５０１１７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８５２６３
【国際公開日】平成１７年９月１５日（２００５．９．１５）
【出願人】（５００３４８６９７）コミッサリア ア レネルジー アトミーク (21)
【氏名又は名称原語表記】ＣＯＭＭＩＳＳＡＲＩＡＴ Ａ Ｌ´ＥＮＥＲＧＩＥ ＡＴＯＭＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
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