動物へのＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンの注射のための製剤
本発明は疾患の治療のための組成物、キット及び方法を提供し、組成物は可溶化剤又は賦形剤を包含してよい製薬上許容しうる担体と共に少なくとも１つのカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物及び誘導体を含有し、組成物は動物への注射に適している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物へのＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンの注射のための製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、共に２００５年１月２７日出願の米国仮特許出願第６０／６４７，４９５号及び第６０／６４７，６４８号の利益を請求し、これらの出願は参照により全体が本明細書に組み込まれる。本出願は、また、本出願と同時に出願され、そして「ＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンの送達のための経口用製剤」と題された代理人事件番号６８２７１４−９ＷＯとして識別される国際特許出願にも関連し、その開示内容はこれにより参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本出願は疾患、例えば、癌、乾癬又は他の増殖性又は炎症性の疾患、代謝性疾患、例えば糖尿病又は神経疾患、例えば神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、卒中、筋萎縮性側索硬化症及びパーキンソン病の治療のための、ヒトのような動物にカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体、例えばテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡの投与のための、注射用製剤を包含する組成物、及び、方法に関する。
【０００４】
ノルジヒドログアヤレチック酸（「ＮＤＧＡ」）は特定の実験動物において治療用途に関して試験されている。例えばJordan等は、米国特許第５，００８，２９４号において第０日目にマウス内に皮下移植したヒト乳癌ＭＸ−１に対するＮＤＧＡの作用を記載している（実施例２）。腫瘍を発生したマウスに種々の用量のＮＤＧＡを第１日目に単回腫瘍内注射において注射している。この実施例におけるＮＤＧＡのための可溶化溶媒は開示されていない。別の実施例において、４ｍＬのＤＭＳＯ（即ちジメチルスルホキシド）及び６ｍＬの蒸留水中の、１０−２ＭのＮＤＧＡの保存溶液を細胞に対するインビトロ試験の為に使用している（実施例５）。
【０００５】
フアング（Huang）等は米国特許６，２１４，８７４に記載の通り、ＮＤＧＡの特定の誘導体（即ちＮＤＧＡ誘導体）の治療用途を試験している。１つの実験においては、ＮＤＧＡ誘導体をＤＭＳＯに溶解している（実施例５）。
【０００６】
ヒトへの投与のためのＤＭＳＯの使用は問題視されている。更に又、ＤＭＳＯの使用は望ましくない副作用、例えば沈静、頭痛、嘔気、眠気、眼の熱傷感又は痛み、および感知可能な呼気悪臭を伴っている。（例えばブロビン，アール・ディ（Brobyn，R.D.）“The human toxicology of dimethyl sulfoxide”，Am．N.Y. Acad．Sci．243：497-506，January 27，1975参照）。国際公開０４／１１２６９６号としての２００４年１２月２９日公開のＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１６１１７に記載の通りカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ又はＮＤＧＡ誘導体（総称して「ＮＤＧＡ化合物」）がヒト及び他の動物のための治療薬として有用であるとすれば、そのようなカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４Ｎを可溶化するためのＤＭＳＯを含有する製剤ではない新しい製剤を開発することが高度に望ましいことである。更に又、そのような製剤が安全であるのみならず、安定であり、動物に投与した場合に最小限の副作用を有していれば望ましいことである。ヒト及び他の動物においてインビボで所望の標的組織にこれらの化合物の有効量を分布できるような上記化合物のための製剤を開発することもまた望ましいことである。本発明はこれらの所望の利益を提供するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の１つの目的は、本明細書に記載したカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の可溶化のための１つ以上の新しい製剤を提供することであり、ここでそのような製剤はＤＭＳＯを含有せず、動物への注射に適するものである。
【０００８】
本発明の別の１つの目的は、ヒトを含む動物に投与した場合に、安全でより少ない有害副作用を有する上記した製剤を提供することである。
【０００９】
本発明の別の１つの目的は、商業的に合理的な期間、安定性を有する上記した１つ以上としての製剤を提供することである。
【００１０】
動物に非経口（parenterally）投与できる上記のもの１つ以上としての製剤を提供することが本発明の目的の別の１つである。
【００１１】
本発明の別の１つの目的は、動物への投与において、循環中において、商業的に合理的な半減期を有する上記した１つ以上としての製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記した１つ以上の本発明の目的によれば、以下に例示される本発明の実施形態が提供される。
【００１３】
活性な薬学的成分及び製薬上許容しうる担体を含む動物への経口投与のための組成物であって、活性な薬学的成分がカテコールブタンを含み、そして担体が（ａ）水溶性有機溶媒、ただし水溶性有機溶媒がプロピレングリコールである場合は、プロピレングリコールは白色ワセリン非存在下、キサンタンガム（xanthan gum：xantham gum xanthum gumとしても知られる）非存在下、及び、グリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下のものであり、水溶性有機溶媒がポリエチレングリコールである場合は、ポリエチレングリコールはアスコルビン酸又はブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）の非存在下に存在し、そして、ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール４００である場合は、ポリエチレングリコール４００はポリエチレングリコール８０００の非存在下に存在するもの；（ｂ）シクロデキストリン；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、ただし界面活性剤が非イオン性界面活性剤の場合は非イオン性界面活性剤がキサンタンガムの非存在下に存在するもの；（ｄ）変性セルロース；（ｅ）ヒマシ油以外の水不溶性脂質、及び担体（ａ）〜（ｅ）の何れかの組合せ、からなる群から選択される可溶化剤及び賦形剤の少なくとも１つを含む、組成物。
【００１４】
本発明は又、（ａ）本発明の組成物を提供すること、及び（ｂ）前記組成物を対象に注射することにより前記組成物を投与することを含む対象における疾患の治療方法であって、前記組成物が前期活性な薬学的成分の有効量を含む方法も包含する。
【００１５】
更に、本発明は、本発明の組成物及びその使用のための説明書を含む疾患の治療のためのキットを包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
図面の簡単な説明
上記した要旨並びに以下に記載する本発明の詳細な説明は添付する図面と組み合わせて読むことにより良好に理解される。本発明の説明の目的のためには、現時点で好ましい実施形態を図面において示す。しかしながら、本発明は示した実施形態に限定されない。
【００１７】
図面は以下の通りである。
【００１８】
図１は、図１Ａ及び図１Ｂを含み、Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果である。図１Ａは、Ｍ４Ｎ処置の非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比をグラフで示したものであり、ここでＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供された。図１ＢはＭ４Ｎ処置非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比をグラフで示したものであり、ここでＭ４Ｎは、ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤（以下「ＣＰＥ」製剤と称する）中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供した。
【００１９】
図２は、図２Ａ及び図２Ｂを含み、そしてＤＭＳＯ（図２Ａ）製剤中又はＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤中（図２Ｂ）におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定をグラフで示したものである。Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【００２０】
図３は、図３Ａ及び図３Ｂを含み、３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用をグラフで示したものである。図３Ａは非対数目盛、図３Ｂは対数目盛を用いて濃度を示している。
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明は増殖性疾患、例えば癌及び乾癬、高血圧、肥満、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、中枢神経系の疾患又は神経変性疾患、例えば疼痛、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、認知症、卒中及び炎症性疾患、前悪性新生物形成又は形成異常、感染症、例えばウイルス感染症、非限定的に例えばヒト免疫不全ウイルス（「ＨＩＶ」）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（「ＨＴＬＶ」）、ヒトパピローマウイルス（「ＨＰＶ」）、単純ヘルペスウイルス（「ＨＳＶ」）、Ｂ型肝炎ウイルス（「ＨＢＶ」）、エプスタイン・バーウイルス（「ＥＢＶ」）、水痘帯状疱疹、アデノウイルス、パルボウイルス、ヤコブクロイツフェルトウイルス（「ＪＣウイルス」）等によるものを包含する疾患の治療のための新規な組成物、キット及び方法を提供する。
【００２２】
本発明は、特定の製薬上許容しうる可溶化剤中に溶解したＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４ＮのようなＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンを含有する新規な組成物を提供するものであり、ここで、他の希釈剤、賦形剤等（「担体」と総称する）と共に疾患の治療の為のヒトのような対象への注射の為に適切である製剤を構成する。このような製剤は注射、例えば静脈内注射に適している。適当な製薬上許容しうる担体は、（ａ）ＤＭＳＯ以外の水溶性有機溶媒、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、例えばＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸、プロピレングリコール（「ＰＧ」）、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、エタノール、ベンジルアルコール又はジメチルアセトアミド；（ｂ）シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（「ＨＰ−β−ＣＤ」）又はスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（「ＳＢＥ−β−ＣＤ」）；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、例えば非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノラウリン酸（ポリソルベートとしても知られている）、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｗｅｅｎ」は登録商標である。） ２０又はＴｗｅｅｎ ８０として市販されているポリソルベート２０及びポリソルベート８０、ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸（「ＴＰＧＳ」）、グリセロールモノオレイン酸（グリセリルモノオレイン酸としても知られている）、エステル化脂肪酸又はＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標：以下、省略するが「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ」は登録商標である。）ＥＬとして市販されているモル比３５：１におけるエチレンオキシドとヒマシ油との間の反応生成物；（ｄ）修飾セルロース、例えばエチルセルロース（「ＥＣ」）、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）、メチルセルロース（「ＭＣ」）又はカルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）；及び（ｅ）水不溶性脂質、例えばワックス、油又は脂肪乳剤、例えばＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標：以下、省略するが「Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ」は登録商標である。）から選択される少なくとも１つを包含する。好ましくはＰＧを使用する場合は、これは白色ワセリンの非存在下、キサンタンガムの非存在下、及びグリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下において使用する。好ましくは、ＰＥＧを使用する場合は、これはアスコルビン酸又はＢＨＴの非存在下に使用し；非イオン性界面活性剤を使用する場合は、それはキサンタンガムの非存在下に使用し；そして、油が、ヒマシ油以外の油である。
【００２３】
本発明の一実施形態において、本明細書に記載した化合物を、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸（「ＰＥＧ化合物」）に溶解する。好ましくは、ＰＥＧ ４００を使用する場合は、それはＰＥＧ ８０００の非存在下に存在する。別の実施形態においては、本明細書に記載した化合物を、修飾シクロデキストリン、例えば、ＨＰ−β−ＣＤに溶解する。別の実施形態においては、本発明の化合物は、１つ以上のＰＥＧ化合物及びＨＰ−β−ＣＤを含有する複合製剤中に可溶化及び希釈する。別の実施形態においては、複合製剤中のＰＥＧ化合物は、修飾セルロースと置き換えるか、これと組み合わせることができる。適当な修飾セルロースは、例えば、ＥＣ又はＨＰＭＣを包含する。本明細書の目的のために、本発明の化合物の可溶化は室温において、又は加熱下で実施できる。特に、有用なのは、可溶化の過程において熱を適用する場合に、冷却後にも溶液中に本化合物を維持するような可溶化剤である。
【００２４】
更に別の実施形態においては、本明細書に記載したカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物を、ＥＣ又はＨＰＭＣのような修飾されたセルロース中に可溶化する。ＥＣは使用前にエタノール（（「ＥｔＯＨ」）中に希釈できる。
【００２５】
本発明は、また、本発明の化合物のための可溶化剤としての水不溶性脂質を提供する。水不溶性脂質は、例えば油並びに混合脂肪乳剤組成物、例えば製造元の推奨により使用されるＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Pharmacia＆Upjohn、現Pfizer）を包含する。例えば、成人の用量は脂肪２ｇ／ｋｇ体重／日を超えないように推奨される（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ １０％、２０％及び３０％で、それぞれ２０ｍＬ、１０ｍＬ及び６．７ｍＬ／ｋｇ）。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ １０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油１００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール２２ｇ、注射用水で全量１０００ｍＬとする、を含有するとされている。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ８に調整する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ ２０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油２００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール２２ｇ、注射用水で全量１０００Ｌとする、を含有する。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ８に調整する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ ３０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油３００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール１６．７ｇ、注射用水で全量１０００ｍＬとする、を含有する。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ７．５に調節する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ製品は、２５℃未満の制御された室温で保存し、凍結してはならない。
【００２６】
別の実施形態においては、本発明は、単独、又は他の油或いは何れかのＰＥＧ化合物及びＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０と組み合わせたコーン油、ゴマ油、ペパーミント油、ダイズ油、ミネラルオイル、グリセロールを提供する。
【００２７】
本発明は、可溶化剤としてプロピレングリコール及び上記の何れかの組合せのような物質を包含する。
【００２８】
更に、本発明は本製剤の送達に適合する静脈内（「ＩＶ」）挿管材（cubing）のような動物への組成物の注射又は注入のために適する物質を包含する。適当な挿管材は重合体、例えばポリテトラフルオロエチレン（「ＰＴＦＥ」）単独又はフルオロエラストマー、例えばＣＨＥＭ−Ｓｕｒｅ（Barnant Company）と組み合わせたもの、ポリエチレン、ポリプロピレン、フッ素化エチレンプロピレン（「ＦＥＰ」）、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｅｆｌｏｎ」は登録商標である。）及び白金硬化シリコーン（小型）（Cole-Parmer）等から作成されたものを包含する。
【００２９】
本発明は、以下の定義を参考にしながら更に良好に理解できるものであり、これらは本明細書の他の部分で定義される他の用語と共に使用される。
【００３０】
濃度、又は用量に言及する際に本明細書において使用される「約」という用語は、±１０％〜２０％までの特定の数を意味する。
【００３１】
用語「活性な薬学的成分」、「ＡＰＩ」又は「化合物」への言及は、本明細書においては、本明細書に記載する医薬組成物中に存在する式Ｉのカテコールブタン、又は、ＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の１つ以上を意味する。
【００３２】
「アルキレンジオキシ」という用語は、本明細書においては、メチレン又は置換されたメチレンジオキシ又はエチレン又は置換されたエチレンジオキシを指す。
【００３３】
式Ｉ又は式ＩＩにおける−Ｒ基の１つに言及する場合の「未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩」とは、本明細書においては、アミノ酸残基又は置換されたアミノ酸残基を意味し、非限定的に、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、５−ヒドロキシリジン、４−ヒドロキシプロリン、チロキシン、３−メチルヒスチジン、ε−Ｎ−メチルリジン、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、アミノアジピン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、Ｎ−メチルアルギニン、Ｎ−アセチルリジン及びＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸又は上記した何れかの塩、例えば塩化物塩を包含する。
【００３４】
本発明において使用するために適する「緩衝液」とは当該分野で知られた従来の何れかの緩衝液であり、例えばトリス、リン酸塩、イミダゾール及び炭酸水素塩を包含する。
【００３５】
「担体」とは、本明細書においては、非毒性の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、溶媒（vehicle）、賦形剤（excipient）、可溶化剤、カプセル化物質又は何れかの従来の型の製剤用補助剤を指し、活性な薬学的成分以外の組成物の成分の全てを包含する。担体は追加的な物質、例えば水和剤又は乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含有してよい。他の物質、例えば抗酸化剤、湿潤剤、粘度安定剤及び同様の物質を必要に応じて添加してよい。
【００３６】
「カテコールブタン」とは本明細書においては、下記式Ｉの化合物を意味する。
【００３７】
【化１】
ここで、式中、Ｒ１及びＲ２は各々独立して−Ｈ、低級アルキル、低級アシル、アルキレンを示すか；又は−Ｒ１Ｏ及び−Ｒ２Ｏは各々独立して未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し；そしてＲ７、Ｒ８及びＲ９は各々独立して−Ｈ、−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示すか、又は何れかの２つの隣接する基は一緒になってアルキレンジオキシであってよい。
【００３８】
「シクロデキストリン」とは、本明細書においては未修飾シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリンを意味し、そして非限定的に、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、及びそれに修飾が加えられた何れかの修飾シクロデキストリン、例えばＨＰ−β−ＣＤ又はＳＢＥ−β−ＣＤを包含する。シクロデキストリンは、典型的には６（α−シクロデキストリン）、７（β−シクロデキストリン）、８（γ−シクロデキストリン）個の糖、糖当たり３つまでの置換を有し、従って０〜２４の一次的置換が可能である（一次的置換とはシクロデキストリン環に直接連結している置換として定義される）。本発明において使用される修飾された、又は未修飾シクロデキストリンは、適切な量及び位置の一次的置換又は他の修飾の何れかを有してよい。
【００３９】
ＮＤＧＡの「誘導体」とは、本明細書においては「ＮＤＧＡ誘導体」を意味する（後述）。
【００４０】
用語「疾患」は、本明細書においては本発明の組成物の適用が治療効果をもたらす全ての疾患、状態、感染、症候群又は障害を包含する。そのような「疾患」は、非限定的に例えば、癌、乾癬及び他の増殖性疾患、炎症性障害、例えば、関節リューマチ、骨関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、高血圧、肥満、糖尿病、疼痛、卒中及び／又は他の神経学的障害又は神経変性の疾患又は状態、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）及び前悪性の状態、例えば上皮内新生物形成又は形成異常、及び感染性疾患を包含する。
【００４１】
「Ｇ４Ｎ」又は「テトラ−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシニルＮＤＧＡ」又は「テトラジメチルグリシニルＮＤＧＡ」とは、本明細書においては、固体形態又は溶液の何れかにおける、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が各々独立して−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が各々−ＣＨ３を示すような式ＩＩのＮＤＧＡ誘導体である。
【００４２】
「低級アシル」とは、本明細書においては、Ｃ１−Ｃ６アシル、好ましくはＣ１−Ｃ３アシルを意味する。
【００４３】
「低級アルキル」とは、本明細書においては、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ３アルキルを意味する。
【００４４】
「Ｍ４Ｎ」又は「テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ」とは、本明細書においては、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が各々独立して−ＯＣＨ３を示し、そしてＲ１８及びＲ１９が各々−ＣＨ３を示すような式ＩＩのＮＤＧＡ誘導体である。
【００４５】
「修飾セルロース」とは、本明細書においては、セルロース分子への１つ以上の修飾を含むセルロース、例えばＥＣ、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ及びＭＣを意味する。
【００４６】
「ＮＤＧＡ」とは本明細書においてはノルジヒドログアヤレチック酸を意味し、そして下記式を有する。
【００４７】
【化２】
【００４８】
「ＮＤＧＡ化合物」とは、本明細書においては単一の、又は総称的にＮＤＧＡ、及び／又はＮＤＧＡ誘導体の何れかの１つ以上を意味する。
【００４９】
「ＮＤＧＡ誘導体」とは、本明細書においては下記式（ＩＩ）を有するＮＤＧＡの誘導体を意味する。
【００５０】
【化３】
ここで、式中、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、各々独立して−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、又は未置換又は置換されたアミノ酸残基又は製薬上許容しうるその塩を示し；そしてＲ１８及びＲ１９は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し、ここでＲ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、同時に−ＯＨではない。即ち、用語は、ＮＤＧＡのメチル化誘導体、例えばテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）、トリ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ３Ｎ）、ジ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ２Ｎ）及びモノ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ１Ｎ）、を包含する。或いは、ＮＤＧＡ誘導体は、ＮＤＧＡのヒドロキシル又はメチル基の水素の１つ以上が置換されている化合物、例えば、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アルコキシ、低級アシルオキシ、又はアミノ酸又は置換されたアミノ酸又はその塩を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が、各々独立して−Ｈ又はアルキル、例えば低級アルキルを示すものであってよい。用語は、例えば、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−ＯＣＨ３又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ３又は二置換アミノ酸残基、例えばＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸残基、例えば−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が、各々独立して−Ｈ又は低級アルキル、例えば−ＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ３を示す化合物を包含する。
【００５１】
本明細書においては、「パーセント」、「パーセンテージ」又は符号「％」とは、組成物中に存在する担体の量に基づいた組成物中の示された成分の比率を意味し、何れかの特定の成分に関して示されるとおり重量／重量（ｗ／ｗ）、重量／容量（ｗ／ｖ）又は容量／容量（ｖ／ｖ）によるものであり、これらは全て組成物中に存在する担体の量に基づいている。即ち、複数のタイプの担体は、示される通り１００％までの量で存在してよく、これはＡＰＩの存在を排除するものではなく、その量は％として、又は、組成物中に存在する特定のｍｇ数、又は存在する特定のｍｇ／ｍＬ数として示してよく、ここで％、ｍｇ／ｍＬは組成物中に存在する総担体量に基づいている。特定のタイプの担体が組み合わせて存在することにより担体を１００％としてよい。
【００５２】
「製薬上許容しうる担体」とは本明細書においては、使用される用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、そして製剤中の他の成分と適合性を有する。例えば本発明のカテコールブタン、ＮＤＧＡ化合物又はＮＤＧＡ誘導体を含有する製剤に対する担体は、好ましくは、酸化剤及びこれらに悪影響を与えることがわかっている他の化合物を包含しない。製薬上許容しうる担体は可溶化剤を含む。適当な製薬上許容しうる担体は、非限定的に、水、ブドウ糖、グリセロール、食塩水、エタノール、緩衝液、Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ（登録商標：以下、省略するが「Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ」は登録商標である。）ＥＬ、リン酸緩衝食塩水、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、修飾シクロデキストリン及びこれらの組合せ等の、全て上記したものを包含する。
【００５３】
「製薬上許容しうる賦形剤」という用語は溶媒、アジュバント又は希釈剤又は他の補助的物質、例えば当該分野における従来品を包含し、これらはパブリックに容易に入手でき、そして使用する用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、そして製剤中の他の成分と適合性を有する。例えば製薬上許容しうる補助的物質は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤、安定化剤、湿潤剤等を包含する。
【００５４】
用語「可溶化剤」は、本明細書においてはカテコールブタン又はＮＤＧＡ、例えばＮＤＧＡ誘導体１つ以上が溶解する組成物を意味する。可溶化剤は、また担体又は製薬上許容しうる担体であってよい。
【００５５】
用語「対象」、「宿主」及び「患者」は、本発明の組成物により治療される動物、非限定的に例えば、サル、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類牧畜動物、哺乳類競技用動物、及び哺乳類愛玩動物、を指すために本明細書においては互換的に使用される。
【００５６】
本明細書の投与に関してカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物又は誘導体に言及する場合の「実質的に精製された」化合物は、カテコールブタン、ＮＤＧＡ化合物又はＮＤＧＡ誘導体ではない物質（以下「非−ＮＤＧＡ物質」）を実質的に含有しないものである。実質的に含有しないとは、非ＮＤＧＡ物質を少なくとも約５０％含有しない、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、更により好ましくは少なくとも約９０％、そしてなおより好ましくは少なくとも約９５％非ＮＤＧＡ物質を含有しないことを意味する。
【００５７】
本明細書においては、用語「治療」、「治療する」は、所望の薬理学的及び／又は生理学的作用を得ることを指す。作用は、状態又は疾患又はその症状を完全又は部分的に防止する意味において予防的であってよく、及び／又は、状態又は疾患及び／又は状態又は疾患に寄与する有害作用の部分的又は完全な治癒の意味において治療的であってよい。対象の「治療」とは例えば哺乳類、特にヒトにおける状態又は疾患の何れかの治療を包含し、そして（ａ）状態又は疾患に罹患しやすいがそれを有するとはまだ診断されていない対象において状態又は疾患が発生することを防止すること；（ｂ）状態又は疾患が発生又は進行することを抑制すること、例えばその発生を停止させること；及び（ｃ）状態又は疾患を緩解（relieving）、緩和(alleviating)又は軽減(ameliorating)すること、例えば、状態又は疾患の退行(regression)又は鎮静(remission)を誘発することを包含する。
【００５８】
本発明を更に説明する前に、本発明は記載した特定の実施形態に限定されず、それ自体当然ながら変動してよいものとする。本明細書において使用した用語類は特定の実施形態を説明する目的のみのためであり限定する意図がないことは、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定されるためである。
【００５９】
ある範囲の値が提示される場合は、その範囲の上限と下限の間の各介在値は、特段の記載がない限り、加減の単位の１０分の１まで、そして、その記載された範囲内の何れかの他の記載された又は介在する数値が本発明に包含されるものとする。これらのより小さい範囲の上限及び下限はより小さい範囲内に独立して包含されてよく、そしてまた本発明内に包含され、記載された範囲内の何れかの特定的に除外された範囲の対象となる。記載された範囲が限度の一方又は両方を包含する場合は、これらの包含される限度の何れか又は両方を排除する範囲もまた本発明に包含される。
【００６０】
本明細書においては、特段の記載が無い限り、単数型の標記は複数形の対象も包含する。即ち、例えば「ある化合物」とはそのような化合物の複数を包含し、そして「ＮＤＧＡ化合物」に言及する場合は、１つ以上のＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体および当該分野で知られた同等物への言及を包含する。
【００６１】
本明細書において記載した全ての公開物、例えば特許、特許出願及び雑誌記事は、参照により全体が本明細書に組み込まれるそれらに引用されている参考文献を含めて、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【００６２】
本明細書において考察する公開物は本出願の出願日より前のその開示に関してのみ提示する。本明細書に記載した如何なるものも、本発明が以前の発明によりそのような公開物に先行する資格を有さないことを受け入れるものではない。更に又、提示した公開物の日付は個々に確認する必要がある実際の公開日とは異なる場合がある。本出願のテキスト内で記載した参考文献の引用は請求項の前の文献目録においてより完全に特定されている。
【００６３】
以下に記載する本発明は例示のためのみに提示するものであり、本発明を如何様にも制限するものとは解釈すべきでない。
【００６４】
カテコールブタンの調製
【００６５】
本発明のカテコールブタンは当該分野で知られた何れかの方法により造できる。例えばそのような化合物は米国特許第５，００８，２９４号に記載されているように調製できる。
【００６６】
ＮＤＧＡ誘導体の調製
【００６７】
ＮＤＧＡは市販品製造元、例えばAlexis Biochemicals Corp., San Diego, CA, USA（カタログ番号LKT-N5669）又はA.G. Scientific, Inc., San Diego, CA, USA（カタログ番号N1071）又はCayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA（カタログ番号70300）から購入してよい。
【００６８】
ＮＤＧＡ誘導体及びその製剤は、当該分野における何れかの従来法により製造してよい。例えば、ＮＤＧＡ誘導体は米国特許第５，００８，２９４号；米国特許第６，２９１，５２４号；フー，ジェイ・アール（Hwu, J.R.）他（１９９８年）；又はマクドナルド，アール・ダブリュ（McDonald, R.W.）他（２００１年）に記載の通り製造できる。
【００６９】
本発明の１つの実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ、別名メソ−１，４−ビス（３，４−ジメトキシフェニル）−２，３−ジメチルブタン、又はＭ４Ｎは、以下の通り製造され、即ち反応フラスコ中のメタノール中にＮＤＧＡ及び水酸化カリウムを含有する溶液を製造する。次に、ジメチルスルフェートを反応フラスコに添加し、反応を進行させる。反応は最終的には水で急冷（quench）することにより生成物を沈殿させる。沈殿物を濾過により単離し、真空オーブン中で乾燥する。次に化合物を塩化メチレン及びトルエンの溶液中に溶解し、その後アルミナ カラムを通して精製する。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、固体をイソプロパノール中に再懸濁し、濾過により精製する。濾滓を真空オーブン中で乾燥する。得られたテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）は、イソプロパノール中濾滓を還流、及び、濾過による結晶の再単離により結晶化させる。
【００７０】
本発明の一部の実施形態においては、本発明の特定のＮＤＧＡ誘導体、例えばＧ４Ｎ、別名メソ−１，４−ビス［３，４−（ジメチルアミノアセトキシ）フェニル］−（２Ｒ，３Ｓ）−ジメチルブタン又はテトラ−ジメチルグリシニルＮＤＧＡ、又はその塩酸塩及びアミノ酸置換基を有する同様の化合物もまた、従来法、例えば米国特許第６，４１７，２３４号に記載に従って製造できる。
【００７１】
治療用組成物の調製
【００７２】
本発明は、活性な薬学的成分（「ＡＰＩ」）としてのカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ誘導体、及び、製薬上許容しうる担体又は賦形剤を含む医薬組成物を包含する組成物を提供する。典型的には、本発明の組成物は活性な薬学的成分又はＡＰＩ、即ちカテコールブタン、例えば本明細書に記載するＮＤＧＡ化合物及びＮＤＧＡ誘導体を約０．１％〜約９９％（less than about 0.1% up to about 99%）を含有し；場合により本発明は約２％〜約９０％のＡＰＩを含有する。
【００７３】
本発明は更に、カテコールブタン、例えば、ＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４Ｎが、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、又は約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、又は約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、又は約４０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するような組成物を提供する。１つの実施形態において、ＮＤＧＡ化合物は、本明細書に記載した組成物中、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ又は約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【００７４】
代替として表現すれば、本発明の組成物の別の実施形態は約０．１ｍｇ未満〜約２００ｍｇ以上（less than about 0.1mg to about 200mg or more）のＡＰＩ、例えば、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ又は約２００ｍｇのＡＰＩを含有してよい。
【００７５】
製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、ＡＰＩが溶解する可溶化剤の１つ以上を含有してよい。製薬上許容しうる担体又は賦形剤は追加的に希釈剤を含有してよい。
【００７６】
一実施形態において、本発明は、ＤＭＳＯ以外の水溶性有機溶媒を１つ以上を含有する可溶化剤を提供する。好ましい水溶性有機溶媒に属するものは、エタノール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド、ＰＶＰ、ＰＧ及びＰＥＧ化合物、例えばＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸、である。本発明の組成物中のＰＥＧ化合物は、約５％〜約１００％、又は約５％〜約６０％、又は約１０％〜約９０％、又は約２０％〜約８０％、又は約３０％〜約７０％、又は約４０％〜約６０％の量で存在し、全ての濃度は容量／容量（ｖ／ｖ）の比率で示す。ＰＧは、約２．５％〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在してよい。
【００７７】
本発明の組成物中のＰＥＧ化合物の濃度は、同様に存在している他の可溶化剤又は希釈剤又は賦形剤に依存して変動する。例えば、本発明のＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸は、約５％、約１０％、約１２．５％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％の濃度であることができ、これらの濃度は全て容量／容量（ｖ／ｖ）の比率で示す。
【００７８】
本発明は、また、修飾シクロデキストリンを含むシクロデキストリン中の、カテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物の組成物を提供する。本明細書に記載するシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンであってよく、そして、修飾シクロデキストリンは、例えば、ＨＰ−β−ＣＤ及びＳＢＥ−β−ＣＤを包含してよい。１つの実施形態において、本発明の組成物は、修飾シクロデキストリンを約５％〜約８０％、又は約１０％〜約７０％、又は約２０％〜約６０％、又は約３０％〜約５０％の濃度で含有し、これらの濃度全ては重量／容量（ｗ／ｖ）の比率で示す。
【００７９】
更に別の実施形態においては、修飾シクロデキストリン、例えばＨＰ−β−ＣＤは、組成物中に、約１２．５％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％又は約７５％の濃度で存在し、これらの濃度全ては、重量／容量（ｗ／ｖ）の比率で示す。
【００８０】
単独又は他のものと共に本発明の組成物中で使用してよい別の製薬上許容しうる担体又は賦形剤としては、イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、非イオン性界面活性剤であるポリソルベート、例えばＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０として市販されているポリソルベート２０及びポリソルベート８０、両親媒性界面活性剤であるＴＳＧＳ等が挙げられる。適当な界面活性剤の別の例は、非限定的に、グリセロールモノオレイン酸及びエステル化脂肪酸、例えば典型的には植物油のエステル転移で製造されるもの、Gattefosse Corp., Paramus，NJ，USAよりＬａｂｒａｆｉｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｌａｂｒａｆｉｌ」は登録商標である。）、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｌａｂｒａｓｏｌ」は登録商標である。）及びＧｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標：以下、省略するが「Ｇｅｌｕｃｉｒｅ」は登録商標である。）のような幾つかの種類及び等級において入手できるものを包含する。界面活性剤は何れかの所望の有効量において、例えば、約１％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは約９％（ｖ／ｖ）〜約８０％（ｖ／ｖ）、より好ましくは約１０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）の濃度として存在できる。特定の例として、非イオン性界面活性剤の好ましい濃度は、約９％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度におけるＴｗｅｅｎ ２０、および約３３％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。界面活性剤の全比率は、容量比率（ｖ／ｖ）である。
【００８１】
単独又は他のものと共に本発明の組成物中で使用してよい別の製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、修飾セルロース、例えば、ＥＣ、ＨＰＭＣ、ＭＣ及びＣＭＣである。修飾セルロースは、何れかの望ましい有効量、例えば、約０．１％〜約２５％、又は約０．５％〜約７．５％、又は約１．０％〜約５％の濃度において存在できる。特定の例においては、ＥＣは、約５％〜約２０％の濃度で存在してよく；ＨＰＭＣは、約０．５％〜約１％の濃度で存在してよく；ＭＣは、約１％〜約３％の濃度で存在してよく；そして、ＣＭＣは、約１％〜約４％の濃度で存在してよい。修飾セルロースの比率は、容量当たりの重量（ｗ／ｖ）である。
【００８２】
本発明の組成物中で、単独又は他のものと共に使用してよい他の製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、水不溶性脂質、例えば油、又は混合脂肪乳剤である。油の例として、コーン油、ゴマ油、ペパーミント油、ダイズ油、ミネラルオイル及びグリセロール等を包含する。混合脂肪乳剤組成物は、例えば、上述の通りＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ乳液等が入手可能である。
【００８３】
水不溶性担体は、水溶性担体、例えばＰＥＧ化合物及び界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０の、何れか１つ以上と組み合わせて使用してよい。
【００８４】
水不溶性脂質担体は、何れかの所望の有効量において、例えば約１０％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）、又は約１５％（ｖ／ｖ）〜約８５％（ｖ／ｖ）、又は約２５％（ｖ／ｖ）〜約７５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在できる。油は、約９％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在してよい。混合脂質乳剤は、約１０％（ｗ／ｖ）〜約３０％（ｗ／ｖ）、そして、好ましくは、約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してよい。
【００８５】
種々の担体成分の組合せを、上述の通りＡＰＩと共に使用してよい。現時点で好ましいそのような実施形態の非限定的な例は、２５％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ ３００、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ、担体の平衡である動物への注射用に適した水（「ＷＦＩ」、即ち製薬業界においてみとめられた等級の水を示すもの）における１０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの組成物である。この好適な実施形態においては、ＨＰ−β−ＣＤは６〜８程度（degree）の置換を有するが、他の実施形態における他の置換も上述の通り本発明の範囲に包含される。
【００８６】
本明細書に記載したカテコールブタンが、溶解し、そして溶液中に残存する限り、本明細書に記載した可溶化剤又は希釈剤の１つ以上を組成物に添加することによりそのような処置を必要とする対象へのそれの送達を最適化してよい。
【００８７】
別の実施形態においては、本発明は注射に適する食塩水又は水である希釈剤を提供する。本発明の１つの態様において、医薬組成物の浸透圧が高い場合には、注射に適する水を希釈剤として使用する。
【００８８】
本発明における使用に適する製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、種々の公開物に記載されている。有用な担体又は賦形剤の例は、例えばジェンナロ，エイ・アール（Gennaro, A.R.）（２００３年）；アンセル，ヒチ・シー（Ansel, H.C.）他（２００４年）；ロウ，アール・シー（Rowe, R.C.）他（２００３年）；及びガーグ，エス（Garg, S.）他（２００１年）に記載されている。
【００８９】
液体形態の組成物は緩衝液を包含してよく、これは、カテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の所望の用途に従って選択され、そして意図する用途に対して適切な他の物質も包含してよい。適切な緩衝液は当業者が容易に選択できるものであり、その広範な種類は当該分野で知られており、意図する用途に適している。
【００９０】
治療方法
【００９１】
カテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物を含有する組成物はそのようなカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物が使用できる何れかの数の疾患における処置を必要とする対象において、治療薬として、又は、そのような治療の為に使用できる。
【００９２】
本発明は、疾患、例えば増殖性疾患、例えば良性及び悪性の癌、乾癬及び前悪性の状態及び新生物形成、例えば上皮内新生物形成又は形成異常の処置のための方法及び組成物を提供する。本発明は、また、糖尿病、例えばＩ型及びＩＩ型糖尿病、肥満及びそのようなものから生じる合併症、例えば心臓血管疾患、卒中及び高血圧の処置を提供する。本発明は、更に炎症性疾患、例えば関節リューマチ、骨関節炎、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び他の免疫系関連の疾患の処置を提供する。更に、また、本発明は、神経学的疾患、例えば、中枢神経系の疾患および神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病、認知症、筋萎縮性側索硬化症及びパーキンソン病の処置を提供する。更に別の実施形態において、本発明は感染症、例えば、転写又は複製のためにＳｐ１結合を必要とするウイルスを包含するウイルス感染症、の処置を提供する。Ｓｐ１結合を必要とするこのようなウイルスの例は、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＢＶ、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス及びＪＣウイルスを包含する。
【００９３】
ヒト及び非ヒト動物を包含する種々の動物宿主が、対象となる方法に従って治療可能である。一般的に、そのような宿主は「哺乳類（mammals又はmammalian）」であり、これらの用語は哺乳類に分類される生物、例えば肉食動物目（例えばイヌ及びネコ）、げっ歯類（例えばモルモット及びラット）、及び他の哺乳類、例えばウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ウサギ、ブタ及び霊長類（例えばヒト、チンパンジー及びサル）を指すために広範に使用される。多くの実施形態において、宿主はヒトである。動物モデルは、ヒトの疾患の処置のためのモデルを提供するなどの実験調査の為に有利である。更に又、本発明は獣医科の医療にも適用される。
【００９４】
製剤、用量及び投与経路
【００９５】
本発明の１つの実施形態において、本発明の組成物の有効量を宿主に投与し、ここで「有効量」とは、所望の結果を得るために十分な用量を意味する。一部の実施形態においては、例えば所望の結果は、少なくとも、新生物形成又は形成異常の進行の抑制である。
【００９６】
投与すべき適切な用量は、治療すべき対象、例えば対象の全身健康状態、対象の年齢、疾患の疾患又は状態、対象の体重、腫瘍の大きさ等に応じたものである。一般的に、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ以下（about 0.1mg to about 500mg or less）を小児に投与し、約０．１ｍｇ〜約５グラム以下（about 0.1mg to about 5g or less）を成人に投与してよい。典型的な用量は、対象のｋｇ体重当たり活性な薬学的成分を約１０ｍｇから、対象のｋｇ体重当たり活性な薬学的成分を約６００ｍｇの広い範囲内に含まれる。活性剤は、単回の、又はより典型的には複数回投与において投与できる。所定の薬剤に対する好ましい用量は種々の手段により当業者が容易に決定できる。他の有効な用量は、用量応答曲線を調製する日常的試行により当業者により容易に決定される。薬剤の量は当然ながら使用する特定の薬剤に応じて変動する。
【００９７】
活性剤の投与の頻度は用量の場合と同様に年齢、体重、疾患の状況、健康状態及び患者の応答性に基づいて看護者により決定される。即ち薬剤は一回以上、毎日、毎週、毎月又は慣習的に決定されたように適宜投与してよい。薬剤は間欠的に、例えば数日、数週又は数ヶ月の期間にわたり投与し、その後は一定時間、例えば３又は６ヶ月が経過するまで再投与せず、そしてその後は再度、数日、数週又は数ヶ月の期間にわたり投与してよい。
【００９８】
薬学的剤形においては、活性剤は単独又は他の薬学的活性剤又は治療薬、例えば他の小分子、抗体又はタンパク質治療薬との適切な付随並びに組合せにおいて投与してよい。以下の方法及び賦形剤は例示に過ぎず、限定的なものではない。
【００９９】
更に又、所望により担体又は賦形剤は、補助的物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤を少量含有してよい。このような剤形を調製する実際の方法は既知であるか、又は当業者の知る通りである。例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Co. Rawlins, EA，（１９９７年）を参照できる。投与すべき組成物又は製剤は何れの場合においても治療すべき対象において所望の状態を達成するために適切なある量のＡＰＩを含有する。
【０１００】
注射又は静脈内投与用の単位剤型（unit dosage form）は、滅菌水、規定濃度（normal）の生理食塩水又は他の製薬上許容しうる担体中の溶液として組成物中にＡＰＩを含んでよい。
【０１０１】
本明細書において「単位剤型」という用語は、ヒト及び動物の対象に対する単位用量（unitary dosage）として適する物理的に個別の単位を指し、各単位は、製薬上許容しうる希釈剤、担体又は溶媒（vehicle）と共に、所望の作用をもたらすのに十分な量として計算された所定量の本発明のＡＰＩを含有する。本発明の新規単位剤型に関する仕様は、使用する特定の化合物及び達成すべき作用及び宿主における各化合物に関わる薬物動力学に応じて変動する。
【０１０２】
活性剤の複数又は単位用量（multiple or unit doses）を伴ったキットは本発明に包含される。そのようなキットにおいては、カテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体を含有する組成物の複数又は単位用量を保持する容器に加えて、目的の病理学的状態を処置する場合の薬剤の使用及びそれに伴う利益を説明した説明書を伴った情報提供用パッケージインサートが包含される。場合により本発明の組成物の投与のためのアプリケーターを各キットに包含させる。
【０１０３】
本注射用組成物は非経口的、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、皮下及び小胞内（intravesicularly）において、治療すべき疾患に対して適切に、そして当該分野で従来通りに、投与することができる。本発明の組成物は注射により投与することを意図しているが、それらは他の経路、例えば局所、鼻腔内、吸入又は移植投与により投与することが適当である場合もある。
【実施例】
【０１０４】
以下に記載する実施例は本質的に例示的なものであり、本発明を限定するものと解釈してはならない。
【０１０５】
実施例１．ＨＰ−β−ＣＤ及び／又はＰＥＧ ３００中にＭ４Ｎを含有する製剤。
【０１０６】
本実施例においては、Ｍ４ＮはＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１６１１７に記載の通り調製し、そして、可溶化剤中に可溶化した。得られた溶液は場合により賦形剤及び／又は希釈剤と混合した。可溶化剤及び賦形剤は、互換的に、或いは相互に組み合わせて使用してよい。使用した１つの可溶化剤又は賦形剤はResearch Diagnostics, Inc.より入手可能なエンドトキシン制御のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（「ＨＰ−β−ＣＤ」）（カタログ番号RDI-82004HPB、ロット番号H3N188P）（Flanders, NJ, USA）であった。使用した別の可溶化剤又は賦形剤はSpectrum Chemicals, Inc.より入手したＰＥＧ ３００（カタログ番号P0108、ロット番号TB1228）（Gardena, CA, USA）であった。
【０１０７】
本発明の１つの実施形態においては、ＨＰ−β−ＣＤ及びＰＥＧ ３００は単一の製剤中に存在する。この製剤を製造するためには、Ｍ４Ｎを先ずＰＥＧ ３００に溶解してＰＥＧ ３００中Ｍ４Ｎ溶液（「Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００」）を形成した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を次に予め製造しておいたＨＰ−β−ＣＤ溶液に添加してＰＥＧ ３００及びＨＰ−β−ＣＤ中のＭ４Ｎ溶液（以後「ＣＰＥ」製剤と称する）を形成した。
【０１０８】
ＨＰ−β−ＣＤ溶液を調製する際には、体積膨張を考慮しなければならない。例えば４０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ溶液については、０．７ｍＬ／ｇの体積膨張（即ち添加ＨＰ−β−ＣＤグラム当たり水０．７ｍＬが置換される）を考慮しなければならない。
【０１０９】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するための４０％ＨＰ−β−ＣＤの１００ｍＬ溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中にＷＦＩ６５ｍＬを投入した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約４０グラムのＨＰ−β−ＣＤを攪拌中のＷＦＩにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＨＰ−β−ＣＤを対向させることによりＨＰ−β−ＣＤの結晶がビーカー壁面に固着するのを防止した。ＨＰ−β−ＣＤ溶液を約２４時間、又は、ＨＰ−β−ＣＤが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。得られた溶液は約９３ｍＬであった。この溶液に、約７ｍＬのＷＦＩを添加して１００ｍＬとし、約４０％ＨＰ−β−ＣＤの最終溶液を調製した。最終溶液を約１時間攪拌し、遮光下に室温で保存した。修飾シクロデキストリン溶液を調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることにより所望の容量又は濃度を得てよい。他の濃度又は他の修飾シクロデキストリン溶液は、例えばＨＰ−β−ＣＤを、上述の方法において適切な濃度となるように調節された他の修飾シクロデキストリンと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１１０】
４０％ＨＰ−β−ＣＤ中、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの溶液１０ｍｌを以下の通り調製した。約１０ｍｌの４０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１０ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における４０％ＨＰ−β−ＣＤにゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物は場合により８０℃で約３０分間（又は、より大容量の溶液が所望の場合は、より長時間、例えば、Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物１００ｍｌに対して、８０℃にて１時間）又は必要に応じて、より長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ溶液は、遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより同様に調製してよい。表１に示す結果は７日間より長期間にわたり４０％ＨＰ−β−ＣＤ製剤中１ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度において冷却した後にもＭ４Ｎが溶液であり続けたことを明らかにしている。
【０１１１】
ＰＥＧ ３００中、約２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの溶液１００ｍｌを以下の通り調製した。約１００ｍｌのＰＥＧ ３００を、攪拌棒を含むガラスビーカーに添加した。ガラスビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。ビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止するためにスパーテルを用いてビーカーの中央部におけるＰＥＧ ３００に約２．５ｇのＭ４Ｎをゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物を２４時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物は、場合により６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物の５００ｍｌについては６０℃で１時間）又は、必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうか、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物又は溶液を観察した。全てのＭ４Ｎが溶解していることが観察された後、得られたＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を即座に、又は、４８時間の有効期限の前、又は結晶又は他の沈殿物が形成する前に使用した。結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶液中に再溶解するまで、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を、再度６０℃で１時間、高温磁気プレート上で攪拌しながら加熱した。最終Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液は遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のＰＥＧ中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば上述の方法におけるＰＥＧ ３００をＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えることにより同様に調製してよい。
【０１１２】
５０％ＰＥＧ ３００（ｖ／ｖ）、２０％ＨＰ−β−ＣＤ（ｗ／ｖ）及び１２．５ｍｇのＭ４Ｎを含有する製剤の１００ｍＬの保存液（stock solution）は、磁気プレート上の攪拌棒の入ったガラスビーカーに予め調製しておいた４０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液（上述の通り調製）５０ｍｌを添加し、攪拌棒を中速で攪拌し、予め調製しておいた５０ｍLのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液（上述の通り調製）をゆっくり、例えば約１０ｍL／分の速度で、添加することにより調製した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００は、それがビーカー壁面に固着するのを防止するため、そして、完全な溶解を確実に行うためにビーカーの中央にピペットを使用して添加した。ＨＰ−β−ＣＤ溶液へのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の添加は、最初は白色溶液の状態であったが、連続攪拌により最終的には透明となった。この操作法は適宜スケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００及びＨＰ−β−ＣＤの所望の容量及び濃度としてよい。保存液は、０．２２μｍのＰＶＤＦ膜、例えばMilliporeより入手可能な予備滅菌された真空駆動型使い捨てボトルトップフィルターメンブレン（カタログ番号SCGV T05 RE）（Billerica, MA, USA）を用いて濾過滅菌した。濾過処置は真空力により駆動し、濾液を予め滅菌した２５０ｍL容量のガラスビンに収集した。次にビンを密封し、遮光下に室温で保存した。ＨＰ−β−ＣＤ中の、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ４００又はＭ４Ｎ／ＰＥＧ ４００モノラウリン酸の保存液は、上述の方法においてＰＥＧ ３００をＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えることにより同様に調製できる。
【０１１３】
上述の態様において調製したＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ４００／ＨＰ−β−ＣＤ又はＭ４Ｎ／ＰＥＧ ４００モノラウリン酸／ＨＰ−β−ＣＤの保存液はインビトロで使用する前、又は、動物への投与の為に希釈することができる。希釈が必要な場合は、保存液は好ましくは食塩水の代わりにＷＦＩで希釈し、例えば、浸透圧を低く維持する。ＷＦＩ中の保存液の１：１希釈物１００ｍLを調製するために、約５０ｍＬの保存液をガラスバイアルに添加した。約５０ｍＬのＷＦＩをバイアル中の５０ｍＬの保存液に添加し、希釈された溶液を形成した。ガラスバイアルを閉じ、バイアルを数回振とう反転させることにより希釈された溶液を十分混合した。希釈された溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦ膜、例えばMilliporeより入手可能な予備滅菌された真空駆動型使い捨てボトルトップフィルターメンブレン（カタログ番号SCGV T05 RE）（Billerica, MA, USA）を用いて濾過滅菌した。濾過処置は真空強制により駆動し、濾液を予め滅菌した２５０ｍＬ容量ガラスビンに収集した。次にビンを密封し、遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることにより必要な容量又は希釈度、例えば１：２又は１：４の希釈度としてよい。
【０１１４】
５０％ＰＥＧ ３００及び２０％ＨＰ−β−ＣＤを含有するプラセボ対照として使用するのに適する製剤は以下のように調製できる。プラセボ又は対照製剤の１００ｍＬ溶液を調製するために、磁気プレート上の攪拌棒の入ったガラスビーカーに４０％ＨＰ−β−ＣＤ約５０ｍＬを添加する。磁気プレートは中速でＨＰ−β−ＣＤ溶液を攪拌するように設定する。約５０ｍＬのＰＥＧ ３００を、ビーカーの壁面にＰＥＧ ３００が固着しないようにビーカーの中央部にピペットを用いて、ガラスビーカー内の５０ｍＬのＨＰ−β−ＣＤにゆっくり添加する。混合物を約１時間、又は完全に混合するまで攪拌する。このプラセボ製剤を真空力により駆動される０．２２μｍのＰＶＤＦメンブレンフィルターを用いて濾過滅菌する。濾液を予め滅菌した２５０ｍＬ容量ガラスビンに収集する。ガラスビンを密封し、遮光下に室温で保存した。この処方を必要に応じてスケールアップ又はダウンすることにより所望の濃度及び容量としてよい。更にまた、ＰＥＧ ３００は所望によりＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えてもよい。
【０１１５】
ＨＰ−β−ＣＤ及び／又はＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００を含有する製剤中、及び、上記又は同様の方法に従って調製したＨＰ−β−ＣＤ及びプロピレングリコール（「ＰＧ」）、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）又はＴｗｅｅｎ ８０を含有する製剤中のＭ４Ｎの溶解性の結果並びに得られた製剤の特性を表１〜５に示し、表中、Ｎは「No」、Ｙは「Yes」を示す。
【０１１６】
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【０１１７】
全製剤が４℃で２４時間及び５０００ｒｐｍで５分間の遠心分離に耐容性を示し、目視可能な沈殿物は形成しなかった。５０％ＰＥＧ ３００、２０％ＨＰ−β−ＣＤ、１２．５ｍｇ／ｍＬＭ４Ｎの保存液を含有する製剤は少なくとも４ヶ月、４℃に耐容性を示した。１：１又は１：２希釈度で調製した同じ保存液希釈物もまた少なくとも４ヶ月、４℃に耐容性を示した。
【０１１８】
【表２】
【０１１９】
【表３】
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
【表５】
【０１２２】
同様に、Ｍ４Ｎはエタノール、ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）、プロピレングリコール又はグリセロールを包含する水溶性有機溶媒のような他の可溶化剤中に可溶化してもよい。
【０１２３】
実施例２．培養物中の腫瘍細胞の増殖及び細胞死に対するＤＭＳＯ中又は複合ＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ製剤中のＭ４Ｎの作用
【０１２４】
１０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下「ＣＰＥ製剤」と称する）、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下、「ＣＰＥ２５／３０製剤」と称する）、及び、２７％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び３３％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下、「ＣＰＥ３３／２７製剤」と称する）の２種の腫瘍細胞ライン、即ちＨＰＶ−１８陽性ヒト子宮頸癌細胞ラインＨｅＬａ及びＨＰＶ陰性ヒト子宮頸癌細胞ラインＣ−３３Ａにおける細胞死及び増殖に対する作用を試験した。両方の腫瘍細胞ラインを、漸増量のＭ４Ｎ：０μＭ、２０μＭ、４０μＭ、６０μＭ及び８０μＭで、ＤＭＳＯ又はＣＰＥ製剤と共に７２時間処置した。各製剤は総量１％の増殖培地（１０％ウシ胎児血清、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×非必須アミノ酸溶液及び１０００ＩＵ／ｍＬペニシリン／１０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン溶液を添加したＬ−グルタミン含有最小必須培地）に添加した。対照細胞を同じ条件下に増殖させ、未処置のまま放置した。処置又は未処置の７２時間後、各試料中の細胞の総数及び生細胞の数をトリパンブルー色素排除法により計数した。各試料の細胞増殖速度及び死細胞の比率を分析した。この実験の結果を図１、図２及び表６〜１２に示す。
【０１２５】
図１は、Ｃ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞の処置について、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの漸増濃度に対してプロットした処置細胞数／未処置細胞数の比をグラフで示したものである。図２は、２種の癌細胞ライン、即ち培養物中のＣ−３３Ａ及びＨｅＬａ細胞の処置について、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの漸増濃度に対してプロットした死細胞の比率をグラフで示したものである。
【０１２６】
結果は、未処置対照と比較した場合に、試験した腫瘍細胞ラインの両方に対して、死細胞の％で測定した場合、Ｍ４Ｎ非存在下のＤＭＳＯ単独が顕著な抗増殖作用及びある程度の毒性作用を有していることを示している。これとは対照的に、未処置対照と比較した場合に２種の腫瘍細胞ラインに対してＣＰＥ製剤単独は抗増殖作用及び極めて僅かな毒性作用を有している。
【０１２７】
細胞増殖速度は、同製剤における非Ｍ４Ｎ処置の対照（すなわち０μｇ／ｍＬまたはＭ４Ｎの０μｇ）と比較した場合に、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの処置後、両方の細胞ラインにおいて低減していた。実際、抗増殖作用はＣＰＥ製剤中ではＭ４Ｎの用量依存性であるように思われた。ＣＰＥ製剤においては、例えば、約２０μＭ又は７．２μｇ／ｍＬのＭ４Ｎが両方の腫瘍細胞タイプに対して細胞増殖の約５０％抑制をもたらすのに十分であることがわかった。ＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの濃度を更に増大させると、両方の細胞タイプに対して抗増殖作用が更に増大した。
【０１２８】
一般的に、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤のいずれかにおけるより高用量のＭ４Ｎは、Ｃ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞の両方に対して細胞死のより高い比率を誘導した。しかしながら、ＤＭＳＯ製剤中のＭ４ＮはＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの相当する濃度よりも細胞に対してより高毒性であった。ＤＭＳＯ製剤中で試験したＭ４Ｎの最高濃度（８０μＭ又は２８．７μｇ／ｍＬ）は、細胞集団の約４０％において細胞死を促進したが、ＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの同濃度は、本実験においては細胞集団の僅か約２０％のみにおいて細胞死を促進した。
【０１２９】
これらの結果は両方の細胞ラインにおいて再現性があるとわかった。本試験のデータはＣＰＥ製剤中のＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中のＭ４Ｎと同様に細胞の増殖を停止させる能力を有している一方、ＤＭＳＯ製剤よりも低い細胞毒性を誘発することを示している。
【０１３０】
経時的なＣＰＥ製剤の有効性を試験するために連続した時点からデータを収集した。データによれば、２〜８℃で保存した１２ヶ月の期間の後、ＣＥＰ製剤は新規製造時と同様に有効であることを示していた。細胞の生存率はＣＰＥ製剤を保存した１２ヶ月にわたって同様に留まった。細胞死及び増殖速度は同じ範囲内に留まった。
【０１３１】
元のＣＰＥ製剤を新規ＣＰＥ２５／３０製剤と比較するためにデータを収集した。経時的な製剤の有効性を試験するため、並びに、新しい製剤が過古いものと比較してどの程度良好に機能するかを試験するために、０及び３ヶ月において試験を実施した。データはＣＰＥ２５／３０製剤は元のＣＰＥ製剤と同様に腫瘍細胞の増殖の抑制において有効であることを示している。細胞生存率は、ＣＰＥ製剤又はＣＰＥ２５／３０製剤の何れかを用いて薬剤の種々の濃度で処置したＨｅＬａ細胞の間で同様であった。細胞死及び増殖は経時的に見た場合でさえも同じ範囲内に留まった。
【０１３２】
ＨｅＬａ細胞に対してゼロ時点において、元のＣＰＥ製剤をＣＰＥ３３／２７製剤と比較しながら情報を収集した。データは、ＣＰＥ３３／２７がＨｅＬａ細胞に対し、細胞生存率、死細胞の比率及び増殖速度において、ある程度の影響を有していることを示していた。
【０１３３】
【表６】
【０１３４】
【表７】
【０１３５】
【表８】
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
【表１０】
【０１３８】
【表１１】
【０１３９】
【表１２】
【０１４０】
実施例３．Ｍ４Ｎの複数のロットを使用して同じ結果を得ることができる。
【０１４１】
種々のロットの薬剤の有効性を示すためにＭ４Ｎの種々のロットを試験した。ＨｅＬａ細胞を漸増量のＭ４Ｎ：０μＭ、２０μＭ、４０μＭ、６０μＭ及び８０μＭで、ＣＰＥ製剤と共に７２時間処置した。各製剤は総量１％の増殖培地（１０％ウシ胎児血清、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×非必須アミノ酸溶液及び１０００ＩＵ／ｍＬペニシリン／１０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン溶液を添加したＬ−グルタミン含有最小必須培地）に添加した。対照細胞を同じ条件下で増殖させ、未処置のまま放置した。処置又は未処置の７２時間後、各試料中の細胞の総数及び生細胞の数をトリパンブルー色素排除法により計数した。各試料中の細胞増殖速度及び死細胞の比率を分析した。この実験の結果を表１３及び１４に示す。これらの結果は使用したＭ４Ｎのロットに関わらず、薬剤の有効性が同様に留まっていることを示している。
【０１４２】
【表１３】
【０１４３】
【表１４】
【０１４４】
実施例４．静脈内注入毒性試験
【０１４５】
本試験の目的は、Convince Research Products（Cumberland，Virginia，USA）より供給された雄性及び雌性のビーグル犬への静脈内注射により投与した場合のテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）の最大耐容用量を測定することであった。初回投与時、約６〜９ヶ月齢の雄１匹及び雌１匹の計２匹のビーグル犬に２０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び５０％ＰＥＧ ３００を含有するシクロデキストリン溶媒を試験日（「ＳＤ」）第１日目に、その後、シクロデキストリン溶媒中で調製したＭ４Ｎ（即ち被験品）の漸増濃度を投与した。予め処方した（preformed）シクロデキストリン溶媒及び被験品は室温で保存した。希釈剤として使用した滅菌水は、Baxter Health Care Corp．（Deerfield, Michigan, USA）又はAbbott Laboratories（North Chicago, Illinois, USA）より入手し、室温で保存した。
【０１４６】
被験品、シクロデキストリン溶媒及び希釈剤は、製剤目的のための１００％純度とみなした。投薬用製剤（dose formation）は、被験品又はシクロデキストリン溶媒の適切な量を、滅菌シリンジを用いてガラス容器に添加することにより、各投薬日に調製した。各用量につき、等量の滅菌水をＭ４Ｎ製剤又はシクロデキストリン溶媒に添加することにより、５０：５０（ｖ／ｖ）希釈物を形成した。２００ｍｇ／ｋｇ用量に対しては、希釈は必要としなかった。全製剤は、穏やかに反転することにより混合し、適切な溶液が形成されるようにした。製剤は薬物適用カセット（medication cassette）に搭載し、必要時まで室温で保存した。
【０１４７】
Ｍ４Ｎは、ＳＤ３に２５ｍｇ／ｋｇ、ＳＤ５に５０ｍｇ／ｋｇ、そしてＳＤ８に１００ｍｇ／ｋｇを投与した。雌のみが全量１００ｍｇ／ｋｇ用量を投与され、それは注入ラインにおける沈殿により生じた機械的不具合のためであり、雄イヌは意図した用量の約７２ｍｇ／ｋｇ（即ち７２％）を投与された。２匹の別のビーグル犬に２００ｍｇ／ｋｇを投与したが、機械的困難が生じ、雄には意図した量の約１８０ｍｇ／ｋｇ（９０％）が投与され、雌に投与した量は測定されなかった。
【０１４８】
ＳＤ１３において、１２．５ｍｇ／ｍＬの製剤の粘度に関連すると考えられるポンプの機械的故障により投薬が完了できなかった。未使用の製剤は褐色ガラスバイアルに移し、室温で保存した後、ＳＤ１５に滅菌水で５０：５０（ｖ／ｖ）希釈することにより再調製した。次に、６．２５ｍｇ／ｍＬ希釈液を薬物適用カセットに搭載した。
【０１４９】
使用動物は、初回投薬の前に少なくとも７日間実験室の条件に順化させ、担当獣医師による検疫を通過させた。その間、各動物は耳部入墨及び各ケージラベルに記録した一次的番号により識別した。動物は従来通り、そして、ＵＳＤＡ動物福祉法（USDA Animal Welfare Act）、実験動物の人道的管理と使用に関するＰＨＳ指針（PHS Policy on Humane Care and Use of Laboratory Animals）及び実験動物の利用及び管理に関する米国動物実験関連省庁連絡委員会原則（US Interagency Research Animal Committee Principles for the Utilization and Care of Research Animals）に従って管理した。
【０１５０】
飼料及び飲料水は、特段の記載が無い限り任意に摂取させた。食餌又は水中には、試験の目的の達成を妨害すると考えられる濃度では、汚染物質は存在していなかった。投薬中及び理化学的検査時には、動物に、愛玩行動、掻毟行動及び話し掛けのような積極的な人的関わりを与えた。頸静脈カテーテル処置のため、イヌは手術後にケージ外で運動をさせることは無かった。ゴム製コング玩具又はナイロン製玩具をケージ内に入れた。
【０１５１】
無菌的外科的手法を用いて、動物の頸静脈に留置カテーテルを挿管し、鎮痛剤及び抗生物質を手術当日に予防的に、そして抗生物質及び／又は鎮痛剤を手術後８日間、投与した。試験の概要は表１５、１６及び１７に示す。
【０１５２】
【表１５】
【０１５３】
【表１６】
【０１５４】
【表１７】
【０１５５】
用量１、２及び３は偶発事象を伴うことなく送達された。ＳＤ８において、１００ｍｇ／ｋｇの投薬中に、シリンジのポンプが早期に停止し、意図した１２３．２ｍＬ用量のうち僅か８８．６ｍＬのみが雄イヌ（Ｎｏ．１０５２９）に送達された。ポンプは必要に応じて手動で再開したが、全用量を投与されたのは雌イヌ（Ｎｏ．１０５３０）のみであった。
【０１５６】
ＳＤ１５において、希釈した被験品製剤を、及び８時間の目標注入持続時間で、２００ｍｇ／ｋｇ用量をイヌＮｏ．１０５６７及びＮｏ．１０５６８に投与しようと試みた。投薬７時間４５分後、雄イヌ用ポンプが停止した。従って、雄イヌ（Ｎｏ．１０５６７）には、意図した３２０ｍＬ用量のうち僅か２８９ｍＬのみが投与された。投薬２時間１２分後、注入針が雌イヌ（Ｎｏ．１０５６８）の注入ラインから脱落していたことが判明し、投薬を中止した。雌イヌに静脈内送達されたＭ４Ｎの量は測定されなかった。
【０１５７】
各静脈内注入終了後、滅菌食塩水１ｍＬを緩徐な大量瞬時注射として投与することにより、被験物質を注入ラインから動物内に注入した後、ヘパリン食塩水溶液を注射して注入ラインを充填することにより開存性を維持した。動物を観察した。ケージサイドの観察では、死亡、瀕死性、全身状態及び毒性の兆候が観察された。臨床観察では、皮膚及び体毛の特性の評価、手術部位、眼及び粘膜、呼吸、循環、自律神経及び中枢神経系、及び、身体運動性および挙動様式を観察した。血液を採取し、２．５ｍＬ容の血清分離用試験管にいれ、血清中Ｍ４Ｎ濃度分析に付した。試験管は数回反転させ、氷水上に保存し、約３０００ｒｐｍにより約１０分間４℃で遠心分離した。血清を微量遠心管に移し、−７５±１０℃で保存した。
【０１５８】
試料は、ドライアイス上でGeneLogicのAnalytical Chemistry Laboratory（Gaithersburg, Maryland, USA）に発送して被験品分析に付した。イヌ血清少量、少なくとも０．５ｍＬをアセトニトリルで処理し、濾過し、そして濾液を、タンデム型質量分析検出を伴ったＨＰＬＣカラムに注入（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）する方法が含まれた。分析対象は内標準としてトリアゾラムを用いた外標準曲線を用いて定量した。
【０１５９】
雄性イヌＮｏ．１０５２９及び雌性イヌＮｏ．１０５３０をそれぞれＳＤ９及び１７に試験から除外し、安楽死させて失血させた。雄性イヌ１０５６７及び雌性イヌＮｏ．１０５６８は、ＳＤ１７に安楽死させ、失血させた。全動物とも、Ｎｅｍｂｕｔａｌ（登録商標）の静脈内注射により安楽死させた。
【０１６０】
全てのイヌは、死亡時後、可能な限り早期に剖検に付した。身体外表面、手術部位、全ての開口部、頭部、胸部及び腹部の体腔部とその内容物の観察を含む肉眼的剖検を実施した。骨髄スメアは、大腿骨髄から調製した。スライドを風乾し、メタノール中に固定し、後日評価するために保存した。組織は、１０％中性緩衝ホルマリン（「ＮＢＦ」）中に保存した。更に、血管アクセスポート（「ＶＡＰ」）に連結した注入ラインを収集し、両端で結び、ＮＢＦ中に保存した。腎臓、肺、膀胱及び何れかの肉眼的病変部を包埋し、切片化し、染色し、そして認定病理専門獣医が検査した。検査した組織中には被験品に関連する病理学的所見は存在しなかった。
【０１６１】
結果として、Ｍ４Ｎの投与は死亡率に影響しなかった。明らかな投与関連の臨床観察事項又は体重への影響はなかった。被験品関連の肉眼的病理所見又は顕微鏡的変化は観察されなかった。Ｍ４Ｎの血清中濃度は、注入期の直後に最高であり、そして、Ｍ４Ｎ濃度は全ての測定時点において雄イヌよりも雌イヌで高値であった。Ｍ４Ｎは注入期間後１６時間にもなお検出可能であり、検出量は投与量の増大に従って増大した。
【０１６２】
結論として、投与関連の有害作用は約２００ｍｇ／ｋｇの用量まで観察されなかった。
【０１６３】
実施例５．追加の静脈内注入毒性試験
【０１６４】
Ａ．ビーグル犬におけるＭ４Ｎ（ＣＰＥ）の７日間静脈内注入毒性試験
【０１６５】
本試験は、ビーグル犬において連続７日間の単回静脈内注入として投与した場合の３０％ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％ＰＥＧ中に製剤されたＭ４Ｎの毒性薬物動態プロファイルを評価するために実施した。本試験は、イヌにおけるＭ４Ｎのこの特定の製剤の第１の試験を構成し、毒性を評価し、希釈された製剤（１０ｍｇ／ｍ対５ｍｇ／ｍＬ）の耐容性を比較するために実施した。
【０１６６】
合計１２匹のビーグル犬（雄８匹／雌４匹）に５４分（群２）又は１０８分（群１、３及び４）の静脈内注入を介して、Ｍ４Ｎを投薬した。全動物に対し、連続７日間にわたり、一日１回の７投薬を行った。
【０１６７】
以下のパラメーター、即ち臨床観察項目及び体重を評価した。被験品の分析は試験第１日目及び７日目に実施し、血液試料（目標容量２．０ｍＬ）は以下の時点において適切な容器に各動物から採取した。
【０１６８】
【表１８】
【０１６９】
肉眼的剖検は、群１及び３の動物に対して実施し、全ての注射部位を組織学的検討の為に処理した。詳細な臨床観察によれば、以下の所見、即ち一過性の可逆的な後肢の協調性不良が群２、３及び４において観察された。これらの観察事項の大部分は、群３及び４で観察された。変色した尿が群１及び３で生じた。この所見は溶媒群で観察されたため、溶媒関連と考えられる。３例の前肢領域の腫脹は、群１、２及び３で観察され、第３日に開始し、第４日に終了した。所見は、同じ投薬領域（橈側皮静脈）における複数回の針の挿入に起因する刺激を示すと思われる。速い呼吸の単一の観察事例は、群３の雌について単発的に偶発したものとして観察され、再度観察されることは無かった。最後に、下痢、嘔吐、粘液様糞便及び軟便が散発的に観察された。これらの観察事例はビーグル犬で一般的であり、ストレス誘導性であり、被験品関連ではないと考えられた。
【０１７０】
血清分析によれば、最低ピーク被験品濃度（名目上１８７５９ｎｇ／ｍＬ）が、４５ｍｇ／ｋｇ（５ｍｇ／ｍＬ）を投与した群４の動物において観察された。より高いピーク濃度（名目３３４２０ｎｇ／ｍＬ）は、４５ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した群２の動物で観察された。予測された通り、最高濃度（名目４６７０４ｎｇ／ｍＬ）は、９０ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した群３の動物で観察された。全群について最大濃度時間は、注入終了時であった（群２では０．９時間、群３及び４では１．８時間）。溶媒を投与した群１の動物の何れかの試料においても被験品は観察されなかった。１回投与後の濃度曲線を図３Ａ（非対数目盛）及び図３Ｂ（対数目盛）に示す。
【０１７１】
肉眼的剖検を、群１及び３の動物に対して実施した。注射部位を採取して組織学的検討の為に処理した。組織学的検討によれば、対照の注射部位は、処置動物のものよりも影響が少ないように観察され、対照と比較して、処置動物の注射部位はより肥厚化し、変色していた。このことは、被験品は溶媒よりも刺激性が強いことを示唆している。剖検に付した動物にその他の肉眼的所見は観察されなかった。
【０１７２】
Ｂ．２８日間回復期間を設けたビーグル犬におけるＭ４Ｎ（ＣＰＥ）の１４日間反復静脈内注入毒性試験
【０１７３】
雄性及び雌性のビーグル犬に、１４日間の静脈内注入を介してＣＰＥ（５０％ＰＥＧ ３００中の２０％ＨＰ−β−ＣＤ中における１２．５ｍｇ／ｍＬ）を投与し、２８日間回復期間を設けて、何れかの処置関連毒性の可逆性を調べた。最初は、３２匹（雌雄各１６匹）を無作為に４群（群１及び４は雌雄各５匹、群２及び３は雌雄各３匹）のうちの１つに割付け、５０％ＰＥＧ ３００中の２０％ＨＰ−β−ＣＤ（プラセボ）又は被験品（ＣＰＥ）を２２．５、４５又は９０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。全動物に、静脈内注入により合計１４回の一日当たりの用量を投与した。投薬後、群当たり雌雄各３匹のイヌをＳＤ１６に安楽死させ、群１及び４の残りの雌雄各２匹を２８日間の回復期間を通して維持した。
【０１７４】
試験中に評価したパラメーターは死亡、臨床観察事項、体重及び体重変化、摂餌量、眼科的、心臓学的、臨床病理、臓器重量及び巨視的な及び微視的な病理の項目を包含した。
【０１７５】
ＣＰＥ投与は死亡率には影響せず、全動物とも予定終了時まで生存した。体重、体重変化又は摂餌量には影響は無かった。投与関連の眼科的作用は、観察されなかった。可逆的なＣＮＳ活性（運動失調）の一過性の兆候が、２回９０ｍｇ／ｋｇにおける１匹に観察された。全ての他の臨床観察事例は投与に無関係の単発的発生と考えられた。
【０１７６】
心臓学的には、被験品関連の作用は観察されなかった。投与前及びＳＤ１３において、プラセボ投与の雄１匹が、心室性期外拍動を示し、ＳＤ１において、４５ｍｇ／ｋｇＣＰＥを投与した雌１匹が心室に伝導しない１心房性の拍動を示したが、これらの所見の何れも投与関連とはみなされなかった。
【０１７７】
臨床病理パラメーターには、被験品関連作用は観察されなかった。有意に低値の絶対網状赤血球数が、ＳＤ１５に２２．５ｍｇ／ｋｇＣＰＥ投与の雄において観察されたが、変化は最小限であり、投与前の数値と同様であり、生物学的または毒性学的に有意とはみなされなかった。
【０１７８】
ＳＤ１６において、２２．５及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＰＥを投与した雄の絶対脾臓重量における統計学的有意差は、対照群（プラセボ）における動物個体変動に関連するものであった。相対臓器重量には有意差は無かった。
【０１７９】
ＳＤ１６の剖検において全動物の注入部位で観察された病変部は、静脈内注入処置の二次的なものと考えられ、投与関連ではなかった。注入部位の赤色化が４５ｍｇ／ｋｇＣＰＥ群の雌１匹で観察され、微視的には多病巣性、軽度、内膜の血管肥厚化、平滑筋細胞の多病巣性、軽度の血管過形成、及び、多病巣性、軽度、亜急性、皮下の周囲血管炎と相関付けられ、投薬技法により誘発された刺激を示していた。プラセボ及び９０ｍｇ／ｋｇＣＰＥ群の一部の雄性及び雌性の動物は、広汎性の軽度〜中等度の脾臓のうっ血を示しており、安楽死状態に起因するものであった。ＳＤ１６、４２及び４３の剖検時に観察された他の全ての巨視的及び微視的な所見は偶発的と考えられ、投与関連性ではなかった。
【０１８０】
結論として、ビーグル犬では最大９０ｍｇ／ｋｇ用量においてＣＰＥの静脈内注入の１４日間後に投与関連の有害作用は観察されなかった。
【０１８１】
Ｃ．ビーグル犬におけるＩＶ用量変動試験
【０１８２】
２０％のＨＰ−β−ＣＤ／５０％ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（１２．５ｍｇ／ｍＬ）を雄イヌ１匹にＩＶ注入により投与した（１０ｍＬ／ｋｇ／時）。注入ライン内の圧力増大及びシリンジからの被験製剤の漏出が起こった。投薬により唾液分泌、散瞳、赤色化尿、重度の運動失調、振戦及び痙攣が起こった。観察事例が重度であると考えられたため、動物は瀕死とみなされ、安楽死が予定された。安楽死の前に、イヌは回復しているように見えた。：全ての以前に観察された臨床観察事例は重症度が顕著に低下した。
【０１８３】
同一の投薬を、５ｍＬ／ｋｇ／時の注入速度で雌イヌ１匹に対して試みたが、非協調／不均衡性の運動及び頻尿が投薬後に生じた。イヌは投薬１時間及び１５分以内で回復し、継続的又は追加的な有害臨床兆候は示さなかった。
【０１８４】
別の雄及び雌に、１５０ｍｇ／ｋｇ次いで１２５ｍｇ／ｋｇで投薬した。重度の運動失調、眼振、赤色尿又は糞、頻尿、投薬中の啼鳴、呼吸困難、嘔吐及び／又は唾液分泌が、これらの用量レベルで生じた。両方の動物とも投薬１時間内に回復し、その後は追加的な重要な臨床兆候は観察されなかった。
【０１８５】
２００、１５０及び１２５ｍｇ／ｋｇで観察された偶発的な臨床、ケージサイド、投薬後、又は予定外の観察事例は、最小限〜軽度の鼻及び／又は耳の紅潮、排泄の変化（軟質及び／又は粘液性の糞）及び透明な鼻分泌物及び赤色膣分泌物の各１例を包含していた。これらの所見は頻繁に生じ、投与とは無関係の一般的な臨床検査上の所見と考えられた。１２５ｍｇ／ｋｇ投与の雌のＳＤ４３における、投薬中のパドリング挙動の１例が生じたが、それは投薬用スリングの使用に起因するものであり、やはり投与とは無関係とみなされた。
【０１８６】
２匹の余分（未処置）のイヌを試験計画に追加し、１３日間隔での１２回の総投薬につき、５ｍＬ／ｋｇ／時の注入速度で７５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した。唯一観察された投薬後の観察事例は、ＳＤ７における雌の赤茶色尿の単回の観察であり、この事象の有意性は不明である。臨床観察事例には、雄の軟便及び雌の泡のような白色吐瀉物が包含されたが、これらの所見は頻繁又は単発的な偶発例であり、投与とは無関係とみなされた。脆弱化四肢の投薬後観察事例がＳＤ２において雄で観察され、スリング拘束材の使用に起因していた。両方のイヌは何れかの観察臨床兆候からも投薬１時間以内に回復した。Ｍ４Ｎ投与は体重に影響せず、肉眼的病変部は剖検時には観察されなかった。その他の投与関連観察事例はなかった。
【０１８７】
Ｄ．スプラーグドーリー（Sprague Dawley）ラットにおける８日間ＩＶ注入毒性試験
【０１８８】
ＰＥＧ ３００中の１０％ＨＰ−β−ＣＤ中におけるＭ４Ｎ（６．２５ｍｇ／ｍＬ）の漸増用量、０、１００、１５０又は２００ｍｇ／ｍＬを、８ｍＬ／ｋｇ／時で雄性及び雌性のスプラーグドーリーラット（雌雄各３匹）に、４日毎に一回ＩＶ注入により投与した。最初の４回の注入後、試験を延長して、最大１４日までの４時間の毎日の注入も行った。Ｍ４Ｎに関連する顕著な死亡例は生じなかった。雄性ラット１匹が溶媒投与中に第１日目投薬時に死亡し、雌性ラット１匹が試験第５日目において被験物質１００ｍｇ／ｋｇの注入終了時に死亡していた。一匹が被験品を投与されておらず（溶媒のみ）、また、もう一方のラットでは単発例であり他のラットは２００ｍｇ／ｋｇ／日の投薬で複数日間生存していたことから、これらの死亡は被験品関連とはみなされなかった。
【０１８９】
発生した臨床及び剖検の観察事例は、注入口と注入ラインに対し二次的なものであった。これらの観察事例は、頚部又は腋窩における浮腫及び後肢の限定された使用を包含していた。試験の連続毎日投薬期間は、雄１匹及び雌１匹のラットにおいて振戦が生じた。又、雄１匹及び雌１匹のラットで眼瞼下垂及び活動亢進が生じた。これらのみが、被験品２００ｍｇ／ｋｇ／日投薬に関連していた臨床観察事例であった。
【０１９０】
試験期間を通じて、雌雄ラット共に体重増加した。最高体重増加は、溶媒投与後に生じた。摂餌量値は溶媒と被験品の投与後で同様であった。
【０１９１】
本試験で評価したラットの限定数に基づいて、最大連続８日間までの溶媒又は２００ｍｇ／ｋｇ／日もの高用量における被験品の投与は、ラットによる耐容性を示し、毎日投与後に一部有害臨床観察事例を誘発していた。発生した大部分の臨床観察事例及び全ての剖検所見は、ラットへの投薬の為に使用した注入口と注入ラインに関連しているとみなされた。屠殺時において、全ての注入ラインは頸静脈の外部に移動及び／又はもはや開存しておらず、塊状物（おそらくは被験品）が注入口／ラインの位置に存在していた。
【０１９２】
実施例６．修飾セルロース中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０１９３】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するための５０％ＨＰ−β−ＣＤ（ｗ／ｖ）及び０．５％ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）（ｗ／ｖ）の１０ｍＬの溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中に５．９ｍＬの動物への注射に適した水（ＷＦＩ）を投入した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。５グラムのＨＰ−β−ＣＤを攪拌中のＷＦＩにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＨＰ−β−ＣＤを指向させた。ＨＰ−β−ＣＤ溶液を約２４時間、又は、ＨＰ−β−ＣＤが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。得られた溶液は約９．４ｍＬであった。この溶液に約０．６ｍＬのＷＦＩを添加して１０ｍＬとし、５０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液（ｗ／ｖ）を調製した。５０ミリグラムのＨＰＭＣを５０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液に添加し、約１時間、又はＨＰＭＣが溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。最終溶液を約１時間攪拌し、次に遮光下に室温で保存した。修飾セルロースを含有する修飾シクロデキストリンを調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることによりＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ溶液の所望の容量又は濃度を得てよい。他の修飾シクロデキストリン／修飾セルロース溶液は、例えば上述の方法において、ＨＰ−β−ＣＤを他の修飾シクロデキストリンと、又は、ＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１９４】
５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ中約１０ｍｇ／ｍＬで濃度の１０ｍＬのＭ４Ｎ溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣにゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物を２４時間、又は全てのＭ４Ｎが均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物は約９０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物については９０℃にて１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうか、Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物を観察した。最終Ｍ４Ｎ５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液は遮光下に室温で保存した。Ｍ４Ｎは９０℃で加熱した場合には１ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度でこの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ製剤中で溶解しており、冷却後も溶液として留まり、室温における安定性は7日間より長期間であった。Ｍ４Ｎはこの同じ製剤中５０ｍｇ／ｍＬ濃度においては９０℃でさえも溶解しなかった。
【０１９５】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン／セルロース溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより、又はＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより同様に調製してよい。
【０１９６】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するためのエタノール（ｗ／ｖ）中５％エチルセルロース（「ＥＣ」）の１０ｍＬの溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中に１０ｍＬの１００％エチルアルコール（「ＥｔＯＨ」）を投入し、円形Ｔｅｆｒｏｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｅｆｒｏｎ」は登録商標である。）カバーにより被覆した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。５００ミリグラムのＥＣを攪拌中のエタノールにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＥＣを指向させることにより、ＥＣ粉末がビーカー壁面に固着するのを防止した。ＥＣ溶液を約２時間、又は、ＥＣが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。最終溶液は遮光下に室温で保存した。
【０１９７】
修飾セルロース溶液を調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることにより所望の容量又は濃度を得てよい。他の修飾セルロース溶液は、例えば上記した方法において、ＥＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１９８】
５％ＥＣ（ｗ／ｖ）中の約２０ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ）の濃度のＭ４Ｎの溶液（「ＥＣ製剤」）１０ｍＬを以下の通り調製した。上述の通り調製した約１０ｍＬの５％ＥＣ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定し、円形Ｔｅｆｒｏｎカバーで被覆した。約２００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における５％ＥＣ製剤にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば５００ｍＬのＭ４Ｎ／ＥＣ混合物については６０℃にて１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ＥＣ溶液は遮光下に室温で保存した。
【０１９９】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の修飾セルロース、例えばＨＰＭＣ、ＭＣ及びＣＭＣの溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤も同様に調製してよい。修飾セルロース中のＭ４Ｎの溶解性の結果を表１９に示す。
【０２００】
結果によれば、熱を適用することなくＥＣ製剤中において１ｍｇ／ｍＬでＭ４Ｎが可溶であり、室温で３日間を超えて安定であったことを示している。Ｍ４Ｎは４０℃において１０ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、そして冷却後も溶液状態に留まり、この溶液は３日間を超えて室温で安定であった。Ｍ４Ｎは６０℃において２０ｍｇ／ｍＬの濃度でＥＣ製剤中に可溶であり、そして冷却後も溶液状態に留まり、この溶液は３日間を超えて室温で安定であった。３０ｍｇ／ｍＬ濃度のＭ４Ｎは６０℃でＥＣ製剤中において可溶であったが、冷却により溶液状態に留まることはできなかった。５０ｍｇ／ｍＬ又は１００ｍｇ／ｍＬレベルのようなより高濃度のＭ４Ｎは９０℃でＥＣ製剤中において可溶であったが、冷却により溶液状態に留まることはできなかった。
【０２０１】
【表１９】
【０２０２】
実施例７．水不溶性脂質及び水溶性有機溶媒中のＭ４Ｎの溶解性
【０２０３】
ゴマ油中約５０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの１０ｍＬの溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬのゴマ油を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約５００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるゴマ油にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物を約２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／ゴマ油混合物については６０℃で１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物又は溶液を観察した。結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、Ｍ４Ｎ／ゴマ油溶液を高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃で１時間加熱した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油溶液は遮光下に室温で保存した。
【０２０４】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の水不溶性脂質中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述した方法においてゴマ油をコーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。結果を表１９に示す。
【０２０５】
表２０は、例えば、Ｍ４Ｎが１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬまでの濃度範囲における６０℃でのコーン油中で可溶であり、そして、１００ｍｇ／ｍＬのレベルを除き、Ｍ４Ｎは冷却後に溶液状態に留まり、溶液は、１及び１０ｍｇ／ｍＬ濃度において３日間を超えて安定であり、２０、４０及び５０ｍｇ／ｍＬのレベルにおいて３日間未満、そして６０ｍｇ／ｍＬのレベルでは１日間未満、安定であることを示している。更に、Ｍ４Ｎは、３０ｍｇ／ｍＬのレベルでは６０℃においてオリーブ油中で可溶であったが、冷却後は溶液状態に留まることはできなかった。
【０２０６】
ゴマ油中において、Ｍ４Ｎは１０ｍｇ／ｍＬのレベルでは室温で、そして２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ及び５０ｍｇ／ｍＬの濃度では６０℃で可溶であり、冷却後も溶液状態に留まった。１０ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で３日間を超えて安定であり、３０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で３日間未満安定であり、そして５０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で１日間未満安定であった。
【０２０７】
８５％ゴマ油及び１５％Ｔｗｅｅｎ ２０中、約６０ｍｇ／ｍＬの濃度の１０ｍＬのＭ４Ｎの溶液を以下の通り調製した。約８．５ｍＬのゴマ油を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１．５ｍＬのＴｗｅｅｎ ２０をビーカーの中央部にゆっくり添加した。約６００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが付着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は、約２時間、或いはすべてのＭ４Ｎが溶解、または均一に懸濁し、塊状物がなくなるまで、撹拌した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物については６０℃で１時間）又は、必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は遮光下に室温で保存した。保存中結晶が形成した場合は、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃に加熱できる。
【０２０８】
この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、水溶性有機溶媒と組み合わされた他の水不溶性脂質中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるゴマ油又はＴｗｅｅｎ ２０をコーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油、Ｔｗｅｅｎ ８０、コハク酸ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００「（ＴＰＧＳ）」、レシチン、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、ポリエチレングリコール（「ＰＧ」）又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。水不溶性脂質中のＭ４Ｎの溶解性の結果を表２０に示す。
【０２０９】
表２０は、例えば、６０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは、５５℃において８５％ゴマ油及び１５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する製剤中で可溶であり、そして、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは４５℃の同じ製剤中で可溶であったが、Ｍ４Ｎは冷却時にはこれらの製剤中では溶液状態に留まらなかった。一方、２９ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは、６０℃において８９％ゴマ油及び１１％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する僅かに異なる製剤中で可溶であり、冷却時も溶液状態に留まり、そして７日間超室温で安定であった。
【０２１０】
食塩水中約２．９ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの乳剤１ｍＬを以下の通り調製した。約０．９ｍｌの０．９％食塩溶液を１．５ｍＬ容のポリプロピレン試験管に入れた。８９％のゴマ油及、１１％のＴｗｅｅｎ ２０中において２９ｍｇ／ｍＬの濃度で約０．１ｍｌのＭ４Ｎ溶液をポリプロピレン試験管に添加した。食塩水中のＭ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液又は混合物を１分間激しく回転混合した。６０％最大プローブ振幅の振幅に調節したミクロチッププローブを用いて５分間Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液を超音波処理することにより乳剤を調製した。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０乳剤を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０乳剤は室温で遮光下に室温で保存した。
【０２１１】
この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他の界面活性剤と組み合わせた他の脂質又は水溶性有機溶媒中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるゴマ油又はＴｗｅｅｎ ２０を、コーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油、Ｔｗｅｅｎ ８０、ＴＰＧＳ、レシチン、ＰＧ、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより、同様に作成してよい。
【０２１２】
【表２０−１】
【表２０−２】
【表２０−３】
【０２１３】
表２１は、水溶性有機溶媒ＥｔＯＨ、ＰＧ、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ＰＶＰ及びこれらの特定の組合せ中における、Ｍ４Ｎの溶解性に関して得られた結果を示す。
【０２１４】
【表２１】
【０２１５】
実施例８．非イオン性界面活性剤中のＭ４Ｎの溶解性
【０２１６】
Ｔｗｅｅｎ ２０中、約６０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの１０ｍＬの溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬのＴｗｅｅｎ ２０を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約６００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるＴｗｅｅｎ ２０にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば５００ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物については６０℃１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は遮光下に室温で保存した。保存中に結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液を高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃にて約１時間加熱した。
【０２１７】
この方法をスケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして、加熱温度は、Ｍ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤又は両親媒性界面活性剤中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＴｗｅｅｎ ２０をＴｗｅｅｎ ８０又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｗｅｅｎ ８０及びＴｗｅｅｎ ２０とＰＥＧ ４００との組合せにおけるＭ４Ｎの溶解性の結果を表２２に示す。
【０２１８】
表２２は、Ｍ４Ｎが室温において１ｍｇ／ｍＬの濃度でＴｗｅｅｎ ２０及びＴｗｅｅｎ ８０に可溶であることを示している。Ｔｗｅｅｎ ２０溶液中のＭ４Ｎ（以下、「Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０」称する）は７日間を超えて室温で安定であり、Ｔｗｅｅｎ ８０溶液中のＭ４Ｎ（以下、「Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ８０」と称する）は観察３日間を超えて安定であった。より高濃度のＭ４Ｎも、５０℃でＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０に可溶であった。更に又、Ｍ４ＮはＴｗｅｅｎ ２０中で６０ｍｇ／ｍＬまで、及び、Ｔｗｅｅｎ ８０中で５０ｍｇ／ｍＬまでの濃度において冷却後も溶液状態に留まったが、Ｔｗｅｅｎ ２０中での８０ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬのレベルでは冷却時に不溶性となった。１０ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は７日間を超えて室温で安定であると観察された。４０ｍｇ／ｍＬ及び８０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は３日間未満室温で安定であると観察された。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ８０溶液については、１０ｍｇ／ｍＬ溶液は３日間を超えて室温で安定であるように観察されたが、５０ｍｇ／ｍＬ溶液は１日間未満の室温で安定であった。
【０２１９】
結果は又、Ｍ４Ｎは５０％Ｔｗｅｅｎ ２０と５０％ＰＥＧ ４００の組合せにおいては６５℃での加熱時に試験したＭ４Ｎの６０ｍｇ／ｍＬ濃度まで安定であったことを示している。Ｍ４Ｎは冷却によっても、これらの製剤中で溶液状態に留まり、溶液は３日間を超えて室温で安定であった。
【０２２０】
表２３は、μｇ／ｍＬにおけるＭ４Ｎの濃度及びμＭ量におけるその相当する濃度を示す。
【０２２１】
【表２２】
【０２２２】
【表２３】
【０２２３】
実施例９．ＨＰ−β−ＣＤ中にＭ４Ｎを含有する凍結乾燥製剤
【０２２４】
ＨＰ−β−ＣＤ中の、約１８５ｍｇ／ｇ（ｗ／ｗ）の濃度の１２０ｍｇのＭ４Ｎ凍結乾燥粉末を以下の通り調製した。等モル量のＨＰ−β−ＣＤ及びＭ４Ｎを使用してＨＰ−β−ＣＤとＭ４Ｎの間の複合体形成比率を増大させた。約９８ｍｇのＨＰ−β−ＣＤ及び約２２．２ｍｇのＭ４Ｎを、１．５ｍＬ容量のポリプロピレン試験管中で混合した。約０．２ｍＬのＷＦＩを、ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ粉末混合物の入ったポリプロピレン試験管内の混合物に添加し、１分間、回転混合することにより水中のＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎの懸濁液を形成した。ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液を２４時間−２０℃で凍結した。次に、ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液を６０℃にて約２時間、真空下に、１４００ｒｐｍで遠心分離し、懸濁液から水を全て除去した。ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ複合体の乾燥粉末は約１２０ｍｇの重量であった。このＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ粉末複合体を次に水又は他の可溶化剤に溶解又は再懸濁した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ粉末複合体を遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリンにＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより同様に調製してよい。表１に示す結果は、約８１．５％のＨＰ−β−ＣＤ及び１８．５％のＭ４ＮからなるＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液の凍結乾燥後にＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎの粉末複合体が得られたことを示している。
【０２２５】
ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ中、約１５０ｍｇ／ｇ（ｗ／ｗ）の濃度のＭ４Ｎの凍結乾燥粉末４００ｍｇを以下の通り調製した。上述の通り調製した、約１ｍＬの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液を、１．５ｍＬ容量のポリプロピレン試験管に添加した。約６０ｍｇのＭ４Ｎを、ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ懸濁液の入ったポリプロピレン試験管に添加し、１分間回転混合することによりＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を調製した。ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を、２４時間−２０℃で凍結した。次にＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を約５時間６０℃の真空下に１４００ｒｐｍで遠心分離し、懸濁液から水を全て除去した。ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ複合体の乾燥粉末は約４００ｍｇの重量であった。このＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ粉末複合体を、次に水又は他の可溶化剤に溶解又は再懸濁した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ粉末複合体を遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン／セルロース溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより、又は、ＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。表１９に示す結果は、約８４％のＨＰ−β−ＣＤ、１％のＨＰＭＣ及び１５％のＭ４ＮからなるＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液の凍結乾燥後にＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎの粉末複合体が得られたことを示している。
【０２２６】
実施例１０．Ｍ４Ｎの送達のためのＩＶ管材の試験
【０２２７】
本実験において、適合性及びＭ４Ｎの静脈内送達の最適化について種々の管材を試験した。適合性に関する試験は、目視による検査及びＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析に基づいた。
【０２２８】
目視による検査は、以下の通り行った。試験すべき製剤（「製剤材料」）約５ｍＬを長さ約２０ｃｍの管材に通した。製剤材料を室温（２５℃）で約２４時間管材内部に保持した。次に、製剤材料を、数回（例えば、約５回）管材を循環させ、そしてビーカー又は採取試験管内に収集した。製剤材料は沈殿又は粒子が存在しないか慎重に検査し、その際例えばビーカー又は採取試験管を白色の背景、次いで暗色の背景に対向させて保持した。
【０２２９】
ＨＰＬＣ分析を用いた適合性の試験は、試験すべき管材、時間の長さ及び管材の目的に応じて方法が変動した。本試験では異なる管材を通過する循環の前後における溶液中のＭ４Ｎの量を測定した。
【０２３０】
適合性を測定するための閾値は、９０％試験純度、即ち、管材との相互作用の後、及び試験の終了の後に、溶液中にＭ４Ｎの約９０％が残存していた場合に材料は適合性とみなした。９０％閾値未満の何れの量も不適合な管材とみなした。結果は表２４に示す。
【０２３１】
本試験はＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）及びフルオロエラストマー（Barnant Company, Barrington, IL, USA）、ポリプロピレン（Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA）、ＦＥＰ（フッ化エチレンプロピレン）（Saint-Gobain, Mickleton, NJ, USA）、ＰＴＦＥ（Cole-Parmer）、ポリエチレン（Intramedic, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA）及び白金硬化シリコーン（小型）（Cole-Parmer）が、全て本明細書に記載した製剤中のＭ４Ｎの送達に適合していることを示している。
【０２３２】
【表２４】
【０２３３】
実施例１１．医薬組成物の膀胱内投与
【０２３４】
上記した医薬組成物の１つ以上を例えば６週間毎週８００ｍｇの用量において例えば膀胱のインサイチュの癌治療の為に、膀胱内に投与することができる。組成物はＡＰＩ、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＭ４Ｎを含有する。ＡＰＩ、例えばＭ４Ｎは、５ｍＬバイアル当たり２００ｍｇで組成物中に存在し、そして、２℃〜−８℃（３６°Ｆ〜４６°Ｆ）で冷蔵庫内に保存される。組成物の対象への投与の前に、バイアルを冷蔵庫から取り出し、加熱することなく室温に戻す。組成物は、０．９％規定濃度食塩水注射用（Normal Saline Injection）ＵＳＰ ５５ｍＬに８００ｍｇ（２０ｍＬ）を添加することにより希釈してよい。膀胱の洗浄はＡＰＩの膀胱内投与（上述の通り希釈した場合には総容量７５ｍＬ）により実施し、ＡＰＩを２時間貯留させ、次に排出（void out）する。適切な適合性のある管材を上述の通り使用する。
【０２３５】
医師又は患者は、膀胱が傷害、炎症又は穿孔を有する場合には、粘膜の一体性の消失により全身吸収が起こる場合があるため、ＡＰＩを含有する組成物を投与しないように指導される。重度の過敏性膀胱症状を有する患者においては、ＡＰＩが導入及び貯留の時間中に過敏性膀胱の症状を誘発する場合があるため、化合物を慎重に使用しなければならない。患者は、２４時間は尿が赤又はピンクの色を帯びる場合があることを通知される。
【０２３６】
実施例１２．健康男性被験者８人における１４Ｃ−標識Ｍ４Ｎのヒト第０相３元クロスオーバーマイクロドース薬物動態試験
【０２３７】
本試験は摂食及び絶食条件下における単回経口投薬又は単回静脈内投薬（表２５においてそれぞれ用法Ａ−Ｃ）の何れかとしての治療量未満の用量としてヒトに投与された場合のＭ４Ｎの吸収量を評価するために設計された。試験は健康男性被験者の目標集団における３期クロスオーバー試験設計とし、投薬の間の少なくとも7日間の最小期間により各々が分離された約３５時間よりなる３つの試験期間で構成されていた。各試験期間の過程の間、薬物動態用の血液試料を投薬後の特定の時点において採取し、尿は所定の時間間隔で採取した。被験者は投薬後２４時間において試験の特定の処置を完了した後に、退院させた。
【０２３８】
本試験においてＭ４Ｎは１００μｇの量でヒトに投与した。Ｍ４Ｎは１４Ｃ（１００μｇ当たり３．３ｋＢｑ）で僅かに標識し、健康ボランティアに投与した。Ｍ４Ｎの各経口用量はサイズ０のゼラチンカプセル中、０．１ｍｇの１４Ｃ標識したＭ４Ｎ及び３７６．８ｍｇのグリセロールモノオレイン酸からなるものとした。Ｍ４Ｎの単回静脈内注入は瞬時大量注入法の為に１ｍＬに水で希釈した０．１ｍｇ／ｍＬの１４Ｃ標識したＭ４Ｎ、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧからなるものとした。各被験者から血液及び尿を採取した後、試料は１４Ｃ含有量について加速器質量分析装置（ＡＭＳ）を用いて分析することによりＴｍａｘにおけるＭ４Ｎの最高濃度（Ｃｍａｘ）、試験の採血時点まで（ＡＵＣ０−ｔ）及び全て（ＡＵＣ０−∞）におけるＭ４Ｎの全ての吸収を表す全曲線下面積（ＡＵＣ）、各試料の終末相半減期（Ｔ１／２）、及び、Ｍ４ＮのＩＶ投薬と比較した場合のＭ４Ｎの経口投与の相対的及び全ての生体利用能（Ｆｒｅｌ及びＦ）を求めた。１４Ｃに関する薬物動態パラメーターの平均±ＳＤ値を表２５に示す。Ｍ４Ｎのベースライン水準は投薬間の期間後に対象に残存するＭ４Ｎに関して補正することにより、何れかの後の投薬に対してＭ４Ｎの水準が誇張されないようにした。
【０２３９】
【表２５】
【０２４０】
経口用量に関しては、総１４Ｃに関するＣｍａｘ値は高脂肪朝食後の１４Ｃ標識Ｍ４Ｎ１００μｇ経口投与後（Ｃｍａｘ＝５．９４±１．３３ｐｍｏｌ／Ｌ）のほうが一夜絶食後の経口投与後（Ｃｍａｘ＝９．２９±１．４０ｐｍｏｌ／Ｌ）よりも低値であった。Ｔｍａｘは絶食よりも摂食においてより遅延した。摂食投与被験者においては、Ｔｍａｘ、即ちＣｍａｘの時間は高度に変動性であり、投薬後１．５〜２４時間の範囲であり、そして絶食被験者においては、Ｔｍａｘは一般的に投薬後１時間に起こっていた（範囲０．５０〜２．００時間）。ＡＵＣ０−ｔ値は絶食被験者よりも摂食投与被験者において一般的に低値であった。
【０２４１】
静脈内投薬後には、最高濃度（Ｃｍａｘ＝１０．３１±１．７７ｐｍｏｌ／Ｌ）が１０被験者中８例において初回サンプリング時（投薬後０．０８時間）に予測どおり観察された。２被験者においては、Ｔｍａｘは投薬後０．１７時間であった。総１４Ｃ血漿中濃度に関するＡＵＣ０−ｔ値は、摂食投与被験者における単回経口投薬後のほうが静脈内投薬後よりも僅かに低値であった。逆に、相当するＡＵＣ０−ｔ値は絶食被験者における単回経口投薬後のほうが静脈内投与後よりも僅かに高値であった。
【０２４２】
試験製剤は経口及び静脈内投与の両方において十分耐容性が示された。重篤又は重度な有害事象は観察されず、そして何れの対象も試験投与に関連する有害事象による中断はなかった。生命徴候又はＥＣＧにおいて臨床上有意な変化は観察されなかった。
【０２４３】
本試験に関する結論において、Ｍ４Ｎの見かけの吸収は摂食及び絶食状態において経口投与後に極めて高値であった。摂食の存在下においては、吸収の速度及び程度は絶食状態と比較して低値であり、Ｃｍａｘ時の時間は、摂食時の投与において延長された。これらの結論は１４Ｃ標識Ｍ４Ｎの経口投与用量が吸収前に分解されないという推定に基づいて行われている。
【０２４４】
実施例１３．水溶性有機溶媒中のＭ４Ｎの溶解性に関する追加試験
【０２４５】
表２６に示した水溶性有機溶媒の組合せ中のＭ４Ｎの溶解性を４８時間評価した。室温での２、２４及び４８時間のインキュベーション後、逆相ＨＰＬＣ（「ＲＰ−ＨＰＬＣ」）により試料を分析することによりＭ４Ｎの溶解性を定量した。Ｍ４Ｎ試料を調製するために、アセトンに溶解した２００μＬの１００ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎを１．５ｍＬのポリプロピレンマイクロ試験管に投入した。試料が完全に乾燥するまで４８時間溶媒を室温で蒸発させた。
【０２４６】
水混和性の有機溶媒の製剤を１５ｍＬのポリプロピレン遠心管中に調製した。各製剤１０ｍＬを調整した。各溶媒は２５℃におけるその対応する密度を用いた重量に基づいて添加した。短時間混合後、各製剤を０．４５μｍ界面活性剤非含有酢酸セルロース（「ＳＦＣＡ」）フィルターを介して濾過し、新しい１５ｍＬ試験管内に回収した。製剤は使用時まで室温で保存した。
【０２４７】
各製剤の組合せ（表２６、Ｂｅｎｚ＝ベンジルアルコール；Ｃｒｅｍ＝Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ；ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド；Ｔ８０＝Ｔｗｅｅｎ ８０）４００μＬをマイクロ試験管に添加し、５０ｍｇ／ＭＬＭ４Ｎの最高溶解性とした。Ｍ４Ｎ溶解性は室温での２、２４および４８時間インキュベーション時にＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した。各時点において、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離することにより存在する固体のＭ４Ｎをペレット化した。表２６に示す通り、試験した製剤条件の半分超が１０ｍｇ／ＭＬ超の濃度までＭ４Ｎを可溶化することができた。２及び４８時間におけるグリセロール中のＭ４Ｎの溶解性は検出不可能であった。
【０２４８】
【表２６】
【０２４９】
実施例１４．水性溶液中のＭ４Ｎの溶解性
【０２５０】
ヒドロキシプロピルＨＰ−β−ＣＤ又はスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（ＳＥ−β−ＣＤ）（Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｃａｐｔｉｓｏｌ」は登録商標である。）、CyDex, Inc., Lenexa, KS, USA）の何れかを含有する水溶液中のＭ４Ｎの溶解の溶解性を実施例１４における上述した室温において最大４８時間評価した。１０検体のＨＰ−β−ＣＤ及びＳＥ−β−ＣＤの５０％溶液を容積に対する重量基準（weight to volume basis）で調製した。試料中で使用するＭ４Ｎは、実施例１４に記載する通り調製した。１．０ｇ〜５．０ｇの各化合物を、分析用天秤（OHAUS Analytical Plus Balance）上の１０ｍＬのメスフラスコに計量投入した。各試料を注射用水（ＷＦＩ）で１０ｍＬに定容（q.s.）した。４０℃で１時間インキュベートした後、調製物を０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターで濾過して新しい１５ｍＬ試験管に採取した。調製物は使用時まで室温で保存した。
【０２５１】
表２７に示す通り、ＷＦＩ、０．９％の食塩水、５％のブドウ糖（ＤＳＷ）中のＭ４Ｎの溶解性は、本試験の過程を通して、ＲＰ−ＨＰＬＣの定量限界未満であった。ＨＰ−β−ＣＤ及びＣａｐｔｉｓｏｌの濃度及び時間の関数として増大したＭ４Ｎ溶解性が注目される。
【０２５２】
【表２７】
【０２５３】
水混和性溶媒を用いた２０種超の製剤条件は、１０ｍｇ／ｍＬを超える（greater than 10mg/mL）濃度にまでＭ４Ｎを可溶化することができた。ＷＦＩ、０．９％食塩水、Ｄ５Ｗ中のＭ４Ｎの溶解性は、ＲＰ−ＨＰＬＣ法の検出限界未満であった。Ｍ４Ｎの溶解性はＨＰ−β−ＣＤ及びＣａｐｔｉｓｏｌの濃度及び時間の関数として増大する。
【０２５４】
実施例１５．ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０２５５】
ＨＰ−β−ＣＤの種々の濃度におけるＭ４Ｎの水溶解性をＨｉｇｕｃｈｉ及びＣｏｎｎｏｒｓ（１９６５年）により報告された方法により評価した。つまり、Ｍ４Ｎを正確に計量し、その水溶性を超過した量において添加し、４８時間漸増濃度（０〜３５０ｍｍｏｌ／Ｌ）のＨＰ−β−ＣＤの水溶液と共に室温で穏やかに回転（〜１２ｒｐｍ）させた。次にＭ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ溶液を０．４５μｍＳＦＣＡフィルターで濾過し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した。
【０２５６】
大部分の薬剤／シクロデキストリン複合体は包接複合体であると考えられたが、シクロデキストリンは、非包接複合体及びミセル様構造を介して薬剤を溶解できる複合体凝集塊を形成することも知られている。位相−溶解性のプロファイルは、包接複合体の形成を確認するものではなく、シクロデキストリンの漸増濃度が薬剤の溶解性にどのように影響するかを説明するのみであった。Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ複合体の形成は、非直線的であったが、化学量論的な（並びに安定性定数の）厳密な測定は、本実施例の実験では検討しなかったものの、ＮＭＲ又は電位差測定のような他の手段により測定可能である。
【０２５７】
実施例１６．ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ ３００緩衝溶液中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０２５８】
１５ｍＭ緩衝溶液中における１０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ（７５：２５の、４０％のＨＰ−β−ＣＤ：４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ ＰＥＧ ３００の比で調製）の安定性を６０℃でのインキュベートの後に評価した。
【０２５９】
ＨＰ−β−ＣＤの緩衝４０％溶液を、容積に対する重量基準で調製した。試料中で使用するＭ４Ｎは実施例１４に記載する通り調製した。２．０ｇのＨＰ−β−ＣＤを、分析用天秤（OHAUS Analytical Plus Balance）上の５ｍＬのメスフラスコに計量投入した。１００ｍＭの緩衝溶液の１ｍＬを、各フラスコに添加した。各試料を、ＷＦＩで５ｍＬに定容した。４０℃で１時間インキュベートした後、調製物を、０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターで濾過して新しい１５ｍＬの試験管に採取した。調製物は使用時まで室温で保存した。
【０２６０】
７５０μＬの４０％ＨＰ−β−ＣＤ緩衝溶液を、１．５ｍＬのポリプロピレン マイクロチューブに投入した。２５０μＬの４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ ＰＥＧ ３００を、各マイクロチューブに添加することにより、Ｍ４Ｎの１０ｍｇ／ｍＬの溶解性を可能とした。試料チューブを穏やかに反転させた後、各溶液のｐＨをＯｒｉｏｎ、４２０Ａ型ｐＨメーター（Model 420A pH meter）を用いて測定した。最初のアリコットを、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析用に採取した。次に、被験試料を、Precision ６０℃ インキュベーター内に投入した。Ｍ４Ｎ安定性は、ＲＰ−ＨＰＬＣで評価した。各時点において、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離することにより、固体Ｍ４Ｎをペレット化した。
【０２６１】
表２８に示す通り、種々のＭ４Ｎ溶液の濃度の僅かな低下が、６０℃での１４日インキュベーション後に観察された。ＲＰ−ＨＰＬＣデータは、Ｍ４Ｎの濃度の低下の程度に相応する試料不純物の増大を明らかにしなかった。しかしながら、ｐＨ依存性の変化が、Ｍ４Ｎ不純物で観察されたが、これらの不純物は総ピーク面積の０．１％未満を構成するのみであった。インキュベーション期間中の見かけの試料のｐＨの変化が観察された場合でもそれは僅かであった（表２８）。
【０２６２】
【表２８】
【０２６３】
Ｍ４Ｎの回収量の損失によって示される、見かけの試料ｐＨ又は緩衝液とは無関係の均一な安定性低下が６０℃での１４日インキュベーション後に観察された。
【０２６４】
実施例１７．１１〜１４ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ溶液中におけるＭ４Ｎの安定性
【０２６５】
製造仕様書を裏付けるために、本試験では、種々のＭ４Ｎの標的濃度におけるＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤの組み合わせの２４時間室温安定性を調べた。Ｍ４Ｎ保存液の保存液試料を、以下の通り６０℃で３３〜５６ｍｇ／ｍＬの薬剤濃度において、１００％ＰＥＧ ３００中に調製した。
【０２６６】
６０℃で少なくとも２時間インキュベートした後、Ｍ４Ｎ大量（bulk）製剤を、実施例１４及び１７に記載の手順を用いてＰＥＧ ３００中に、３３、４４、４８、５２、５５及び５６ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｗ）の濃度に可溶化した。４４ｍｇ／ｍＬ超（above 44 mg/mL）のＭ４Ｎの完全な可溶化のためには激しく回転混合することが必要であった。Ｍ４Ｎ保存液を０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターを通して濾過し、調製３０分以内に使用した。別個に、４０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤの溶液を滅菌ＷＦＩ中で調整し、濾過した。４０％ＨＰ−β−ＣＤ保存液及びＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００保存液の組合せを、１．５ｍＬのポリプロピレンマイクロチューブ内で混合した。Ｍ４Ｎの安定性は、室温での２及び２４時間のインキュベート時にＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した。
【０２６７】
Ｍ４Ｎ保存液の必要量を４０％ＨＰ−β−ＣＤに添加することにより表２９に示す薬剤及び賦形剤の最終濃度とした。試料を室温で穏やかに（〜１２ｒｐｍ）回転させた。インキュベートの２及び２４時間時に、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、５０μＬのアプリコットをＲＰ−ＨＰＬＣ分析用に取り除いた。標的Ｍ４Ｎ又は製剤とは関係なく、２４時間インキュベーション後は溶解性における変化が観察された場合でもそれは僅かであった（表２９）。
【０２６８】
【表２９】
【０２６９】
２５％のＰＥＧ ３００及び３０％のＨＰ−β−ＣＤの最終濃度に製剤された１１〜１４ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎを含有する被験試料は、室温で２４時間のインキュベーション後、安定であった。
【０２７０】
実施例１８．４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の安定性
【０２７１】
１００％のＰＥＧ ３００に溶解した４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの安定性を、３０℃、４５℃及び６０℃における２４時間までのインキュベーションで評価した。ＰＥＧ ３００中の４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの保存液は、実施例１８に記載の手順に従って６０℃で調製した。その後、アプリコットを取り除いて適温でインキュベートした。インキュベーションの全過程中、４５０ｒｐｍで試料を回転させた。全体を通じて目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣデータの収集を行った。表３０に示す通り、３０℃で６時間のインキュベーション後、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００製剤において微小な結晶が観察され、２４時間後にはより顕著となった。結晶の形成には、可溶性Ｍ４Ｎの消失が伴っていた（表３１）。４５℃及び６０℃でインキュベートした４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の試料は、目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣ分析で試験したところ２４時間インキュベートベーション後に安定であった（表３０及び３１）。何れのインキュベーション温度においても不純物ピークの量又はタイプで変化は観察されなかった。
【０２７２】
【表３０】
【０２７３】
【表３１】
【０２７４】
３０℃で６時間のインキュベーション後、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００製剤において微小結晶が観察された。２４時間後、より多くの結晶が観察され、そして、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析により測定した場合に、＞５％の可溶性Ｍ４Ｎが消失していた。
【０２７５】
４５℃及び６０℃でインキュベートした４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００試料は目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した場合、２４時間のインキュベーション後に安定であった。
【０２７６】
上記した実施形態はその広範な発明上の概念から逸脱することなく変更できることは当業者の知る通りである。従って、本発明は開示した特定の実施形態に限定されず、添付する請求項により定義される本発明の精神及び範囲内の変更を包含することを意図している。
【０２７７】
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【図面の簡単な説明】
【０２７８】
【図１Ａ】Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果を示し、Ｍ４Ｎ処置の非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比を示すグラフであり、ここでＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供された。
【図１Ｂ】Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果を示し、Ｍ４Ｎ処置非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比を示すグラフであり、ここでＭ４Ｎは、ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤（「ＣＰＥ」製剤）中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供した。
【図２Ａ】ＤＭＳＯ製剤中におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定を示すグラフであり、Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【図２Ｂ】ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤中におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定を示すグラフであり、Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【図３Ａ】３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用を示すグラフであり、非対数目盛を用いて濃度を示す。
【図３Ｂ】３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用を示すグラフであり、対数目盛を用いて濃度を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物へのＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンの注射のための製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、共に２００５年１月２７日出願の米国仮特許出願第６０／６４７，４９５号及び第６０／６４７，６４８号の利益を請求し、これらの出願は参照により全体が本明細書に組み込まれる。本出願は、また、本出願と同時に出願され、そして「ＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンの送達のための経口用製剤」と題された代理人事件番号６８２７１４−９ＷＯとして識別される国際特許出願にも関連し、その開示内容はこれにより参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本出願は疾患、例えば、癌、乾癬又は他の増殖性又は炎症性の疾患、代謝性疾患、例えば糖尿病又は神経疾患、例えば神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、卒中、筋萎縮性側索硬化症及びパーキンソン病の治療のための、ヒトのような動物にカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体、例えばテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡの投与のための、注射用製剤を包含する組成物、及び、方法に関する。
【０００４】
ノルジヒドログアヤレチック酸（「ＮＤＧＡ」）は特定の実験動物において治療用途に関して試験されている。例えばJordan等は、米国特許第５，００８，２９４号において第０日目にマウス内に皮下移植したヒト乳癌ＭＸ−１に対するＮＤＧＡの作用を記載している（実施例２）。腫瘍を発生したマウスに種々の用量のＮＤＧＡを第１日目に単回腫瘍内注射において注射している。この実施例におけるＮＤＧＡのための可溶化溶媒は開示されていない。別の実施例において、４ｍＬのＤＭＳＯ（即ちジメチルスルホキシド）及び６ｍＬの蒸留水中の、１０−２ＭのＮＤＧＡの保存溶液を細胞に対するインビトロ試験の為に使用している（実施例５）。
【０００５】
フアング（Huang）等は米国特許６，２１４，８７４に記載の通り、ＮＤＧＡの特定の誘導体（即ちＮＤＧＡ誘導体）の治療用途を試験している。１つの実験においては、ＮＤＧＡ誘導体をＤＭＳＯに溶解している（実施例５）。
【０００６】
ヒトへの投与のためのＤＭＳＯの使用は問題視されている。更に又、ＤＭＳＯの使用は望ましくない副作用、例えば沈静、頭痛、嘔気、眠気、眼の熱傷感又は痛み、および感知可能な呼気悪臭を伴っている。（例えばブロビン，アール・ディ（Brobyn，R.D.）“The human toxicology of dimethyl sulfoxide”，Am．N.Y. Acad．Sci．243：497-506，January 27，1975参照）。国際公開０４／１１２６９６号としての２００４年１２月２９日公開のＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１６１１７に記載の通りカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ又はＮＤＧＡ誘導体（総称して「ＮＤＧＡ化合物」）がヒト及び他の動物のための治療薬として有用であるとすれば、そのようなカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４Ｎを可溶化するためのＤＭＳＯを含有する製剤ではない新しい製剤を開発することが高度に望ましいことである。更に又、そのような製剤が安全であるのみならず、安定であり、動物に投与した場合に最小限の副作用を有していれば望ましいことである。ヒト及び他の動物においてインビボで所望の標的組織にこれらの化合物の有効量を分布できるような上記化合物のための製剤を開発することもまた望ましいことである。本発明はこれらの所望の利益を提供するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の１つの目的は、本明細書に記載したカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の可溶化のための１つ以上の新しい製剤を提供することであり、ここでそのような製剤はＤＭＳＯを含有せず、動物への注射に適するものである。
【０００８】
本発明の別の１つの目的は、ヒトを含む動物に投与した場合に、安全でより少ない有害副作用を有する上記した製剤を提供することである。
【０００９】
本発明の別の１つの目的は、商業的に合理的な期間、安定性を有する上記した１つ以上としての製剤を提供することである。
【００１０】
動物に非経口（parenterally）投与できる上記のもの１つ以上としての製剤を提供することが本発明の目的の別の１つである。
【００１１】
本発明の別の１つの目的は、動物への投与において、循環中において、商業的に合理的な半減期を有する上記した１つ以上としての製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記した１つ以上の本発明の目的によれば、以下に例示される本発明の実施形態が提供される。
【００１３】
活性な薬学的成分及び製薬上許容しうる担体を含む動物への経口投与のための組成物であって、活性な薬学的成分がカテコールブタンを含み、そして担体が（ａ）水溶性有機溶媒、ただし水溶性有機溶媒がプロピレングリコールである場合は、プロピレングリコールは白色ワセリン非存在下、キサンタンガム（xanthan gum：xantham gum xanthum gumとしても知られる）非存在下、及び、グリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下のものであり、水溶性有機溶媒がポリエチレングリコールである場合は、ポリエチレングリコールはアスコルビン酸又はブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）の非存在下に存在し、そして、ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール４００である場合は、ポリエチレングリコール４００はポリエチレングリコール８０００の非存在下に存在するもの；（ｂ）シクロデキストリン；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、ただし界面活性剤が非イオン性界面活性剤の場合は非イオン性界面活性剤がキサンタンガムの非存在下に存在するもの；（ｄ）変性セルロース；（ｅ）ヒマシ油以外の水不溶性脂質、及び担体（ａ）〜（ｅ）の何れかの組合せ、からなる群から選択される可溶化剤及び賦形剤の少なくとも１つを含む、組成物。
【００１４】
本発明は又、（ａ）本発明の組成物を提供すること、及び（ｂ）前記組成物を対象に注射することにより前記組成物を投与することを含む対象における疾患の治療方法であって、前記組成物が前期活性な薬学的成分の有効量を含む方法も包含する。
【００１５】
更に、本発明は、本発明の組成物及びその使用のための説明書を含む疾患の治療のためのキットを包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
図面の簡単な説明
上記した要旨並びに以下に記載する本発明の詳細な説明は添付する図面と組み合わせて読むことにより良好に理解される。本発明の説明の目的のためには、現時点で好ましい実施形態を図面において示す。しかしながら、本発明は示した実施形態に限定されない。
【００１７】
図面は以下の通りである。
【００１８】
図１は、図１Ａ及び図１Ｂを含み、Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果である。図１Ａは、Ｍ４Ｎ処置の非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比をグラフで示したものであり、ここでＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供された。図１ＢはＭ４Ｎ処置非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比をグラフで示したものであり、ここでＭ４Ｎは、ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤（以下「ＣＰＥ」製剤と称する）中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供した。
【００１９】
図２は、図２Ａ及び図２Ｂを含み、そしてＤＭＳＯ（図２Ａ）製剤中又はＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤中（図２Ｂ）におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定をグラフで示したものである。Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【００２０】
図３は、図３Ａ及び図３Ｂを含み、３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用をグラフで示したものである。図３Ａは非対数目盛、図３Ｂは対数目盛を用いて濃度を示している。
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明は増殖性疾患、例えば癌及び乾癬、高血圧、肥満、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、中枢神経系の疾患又は神経変性疾患、例えば疼痛、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、認知症、卒中及び炎症性疾患、前悪性新生物形成又は形成異常、感染症、例えばウイルス感染症、非限定的に例えばヒト免疫不全ウイルス（「ＨＩＶ」）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（「ＨＴＬＶ」）、ヒトパピローマウイルス（「ＨＰＶ」）、単純ヘルペスウイルス（「ＨＳＶ」）、Ｂ型肝炎ウイルス（「ＨＢＶ」）、エプスタイン・バーウイルス（「ＥＢＶ」）、水痘帯状疱疹、アデノウイルス、パルボウイルス、ヤコブクロイツフェルトウイルス（「ＪＣウイルス」）等によるものを包含する疾患の治療のための新規な組成物、キット及び方法を提供する。
【００２２】
本発明は、特定の製薬上許容しうる可溶化剤中に溶解したＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４ＮのようなＮＤＧＡ化合物を包含するカテコールブタンを含有する新規な組成物を提供するものであり、ここで、他の希釈剤、賦形剤等（「担体」と総称する）と共に疾患の治療の為のヒトのような対象への注射の為に適切である製剤を構成する。このような製剤は注射、例えば静脈内注射に適している。適当な製薬上許容しうる担体は、（ａ）ＤＭＳＯ以外の水溶性有機溶媒、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、例えばＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸、プロピレングリコール（「ＰＧ」）、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、エタノール、ベンジルアルコール又はジメチルアセトアミド；（ｂ）シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（「ＨＰ−β−ＣＤ」）又はスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（「ＳＢＥ−β−ＣＤ」）；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、例えば非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノラウリン酸（ポリソルベートとしても知られている）、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｗｅｅｎ」は登録商標である。） ２０又はＴｗｅｅｎ ８０として市販されているポリソルベート２０及びポリソルベート８０、ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸（「ＴＰＧＳ」）、グリセロールモノオレイン酸（グリセリルモノオレイン酸としても知られている）、エステル化脂肪酸又はＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標：以下、省略するが「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ」は登録商標である。）ＥＬとして市販されているモル比３５：１におけるエチレンオキシドとヒマシ油との間の反応生成物；（ｄ）修飾セルロース、例えばエチルセルロース（「ＥＣ」）、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）、メチルセルロース（「ＭＣ」）又はカルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）；及び（ｅ）水不溶性脂質、例えばワックス、油又は脂肪乳剤、例えばＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標：以下、省略するが「Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ」は登録商標である。）から選択される少なくとも１つを包含する。好ましくはＰＧを使用する場合は、これは白色ワセリンの非存在下、キサンタンガムの非存在下、及びグリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下において使用する。好ましくは、ＰＥＧを使用する場合は、これはアスコルビン酸又はＢＨＴの非存在下に使用し；非イオン性界面活性剤を使用する場合は、それはキサンタンガムの非存在下に使用し；そして、油が、ヒマシ油以外の油である。
【００２３】
本発明の一実施形態において、本明細書に記載した化合物を、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸（「ＰＥＧ化合物」）に溶解する。好ましくは、ＰＥＧ ４００を使用する場合は、それはＰＥＧ ８０００の非存在下に存在する。別の実施形態においては、本明細書に記載した化合物を、修飾シクロデキストリン、例えば、ＨＰ−β−ＣＤに溶解する。別の実施形態においては、本発明の化合物は、１つ以上のＰＥＧ化合物及びＨＰ−β−ＣＤを含有する複合製剤中に可溶化及び希釈する。別の実施形態においては、複合製剤中のＰＥＧ化合物は、修飾セルロースと置き換えるか、これと組み合わせることができる。適当な修飾セルロースは、例えば、ＥＣ又はＨＰＭＣを包含する。本明細書の目的のために、本発明の化合物の可溶化は室温において、又は加熱下で実施できる。特に、有用なのは、可溶化の過程において熱を適用する場合に、冷却後にも溶液中に本化合物を維持するような可溶化剤である。
【００２４】
更に別の実施形態においては、本明細書に記載したカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物を、ＥＣ又はＨＰＭＣのような修飾されたセルロース中に可溶化する。ＥＣは使用前にエタノール（（「ＥｔＯＨ」）中に希釈できる。
【００２５】
本発明は、また、本発明の化合物のための可溶化剤としての水不溶性脂質を提供する。水不溶性脂質は、例えば油並びに混合脂肪乳剤組成物、例えば製造元の推奨により使用されるＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Pharmacia＆Upjohn、現Pfizer）を包含する。例えば、成人の用量は脂肪２ｇ／ｋｇ体重／日を超えないように推奨される（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ １０％、２０％及び３０％で、それぞれ２０ｍＬ、１０ｍＬ及び６．７ｍＬ／ｋｇ）。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ １０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油１００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール２２ｇ、注射用水で全量１０００ｍＬとする、を含有するとされている。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ８に調整する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ ２０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油２００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール２２ｇ、注射用水で全量１０００Ｌとする、を含有する。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ８に調整する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ ３０％は、１０００ｍＬ中に、精製ダイズ油３００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、無水グリセロール１６．７ｇ、注射用水で全量１０００ｍＬとする、を含有する。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて概ねｐＨ７．５に調節する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ製品は、２５℃未満の制御された室温で保存し、凍結してはならない。
【００２６】
別の実施形態においては、本発明は、単独、又は他の油或いは何れかのＰＥＧ化合物及びＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０と組み合わせたコーン油、ゴマ油、ペパーミント油、ダイズ油、ミネラルオイル、グリセロールを提供する。
【００２７】
本発明は、可溶化剤としてプロピレングリコール及び上記の何れかの組合せのような物質を包含する。
【００２８】
更に、本発明は本製剤の送達に適合する静脈内（「ＩＶ」）挿管材（cubing）のような動物への組成物の注射又は注入のために適する物質を包含する。適当な挿管材は重合体、例えばポリテトラフルオロエチレン（「ＰＴＦＥ」）単独又はフルオロエラストマー、例えばＣＨＥＭ−Ｓｕｒｅ（Barnant Company）と組み合わせたもの、ポリエチレン、ポリプロピレン、フッ素化エチレンプロピレン（「ＦＥＰ」）、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｅｆｌｏｎ」は登録商標である。）及び白金硬化シリコーン（小型）（Cole-Parmer）等から作成されたものを包含する。
【００２９】
本発明は、以下の定義を参考にしながら更に良好に理解できるものであり、これらは本明細書の他の部分で定義される他の用語と共に使用される。
【００３０】
濃度、又は用量に言及する際に本明細書において使用される「約」という用語は、±１０％〜２０％までの特定の数を意味する。
【００３１】
用語「活性な薬学的成分」、「ＡＰＩ」又は「化合物」への言及は、本明細書においては、本明細書に記載する医薬組成物中に存在する式Ｉのカテコールブタン、又は、ＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の１つ以上を意味する。
【００３２】
「アルキレンジオキシ」という用語は、本明細書においては、メチレン又は置換されたメチレンジオキシ又はエチレン又は置換されたエチレンジオキシを指す。
【００３３】
式Ｉ又は式ＩＩにおける−Ｒ基の１つに言及する場合の「未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩」とは、本明細書においては、アミノ酸残基又は置換されたアミノ酸残基を意味し、非限定的に、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、５−ヒドロキシリジン、４−ヒドロキシプロリン、チロキシン、３−メチルヒスチジン、ε−Ｎ−メチルリジン、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、アミノアジピン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、Ｎ−メチルアルギニン、Ｎ−アセチルリジン及びＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸又は上記した何れかの塩、例えば塩化物塩を包含する。
【００３４】
本発明において使用するために適する「緩衝液」とは当該分野で知られた従来の何れかの緩衝液であり、例えばトリス、リン酸塩、イミダゾール及び炭酸水素塩を包含する。
【００３５】
「担体」とは、本明細書においては、非毒性の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、溶媒（vehicle）、賦形剤（excipient）、可溶化剤、カプセル化物質又は何れかの従来の型の製剤用補助剤を指し、活性な薬学的成分以外の組成物の成分の全てを包含する。担体は追加的な物質、例えば水和剤又は乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含有してよい。他の物質、例えば抗酸化剤、湿潤剤、粘度安定剤及び同様の物質を必要に応じて添加してよい。
【００３６】
「カテコールブタン」とは本明細書においては、下記式Ｉの化合物を意味する。
【００３７】
【化１】
ここで、式中、Ｒ１及びＲ２は各々独立して−Ｈ、低級アルキル、低級アシル、アルキレンを示すか；又は−Ｒ１Ｏ及び−Ｒ２Ｏは各々独立して未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し；そしてＲ７、Ｒ８及びＲ９は各々独立して−Ｈ、−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示すか、又は何れかの２つの隣接する基は一緒になってアルキレンジオキシであってよい。
【００３８】
「シクロデキストリン」とは、本明細書においては未修飾シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリンを意味し、そして非限定的に、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、及びそれに修飾が加えられた何れかの修飾シクロデキストリン、例えばＨＰ−β−ＣＤ又はＳＢＥ−β−ＣＤを包含する。シクロデキストリンは、典型的には６（α−シクロデキストリン）、７（β−シクロデキストリン）、８（γ−シクロデキストリン）個の糖、糖当たり３つまでの置換を有し、従って０〜２４の一次的置換が可能である（一次的置換とはシクロデキストリン環に直接連結している置換として定義される）。本発明において使用される修飾された、又は未修飾シクロデキストリンは、適切な量及び位置の一次的置換又は他の修飾の何れかを有してよい。
【００３９】
ＮＤＧＡの「誘導体」とは、本明細書においては「ＮＤＧＡ誘導体」を意味する（後述）。
【００４０】
用語「疾患」は、本明細書においては本発明の組成物の適用が治療効果をもたらす全ての疾患、状態、感染、症候群又は障害を包含する。そのような「疾患」は、非限定的に例えば、癌、乾癬及び他の増殖性疾患、炎症性障害、例えば、関節リューマチ、骨関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、高血圧、肥満、糖尿病、疼痛、卒中及び／又は他の神経学的障害又は神経変性の疾患又は状態、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）及び前悪性の状態、例えば上皮内新生物形成又は形成異常、及び感染性疾患を包含する。
【００４１】
「Ｇ４Ｎ」又は「テトラ−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシニルＮＤＧＡ」又は「テトラジメチルグリシニルＮＤＧＡ」とは、本明細書においては、固体形態又は溶液の何れかにおける、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が各々独立して−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が各々−ＣＨ３を示すような式ＩＩのＮＤＧＡ誘導体である。
【００４２】
「低級アシル」とは、本明細書においては、Ｃ１−Ｃ６アシル、好ましくはＣ１−Ｃ３アシルを意味する。
【００４３】
「低級アルキル」とは、本明細書においては、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ３アルキルを意味する。
【００４４】
「Ｍ４Ｎ」又は「テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ」とは、本明細書においては、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が各々独立して−ＯＣＨ３を示し、そしてＲ１８及びＲ１９が各々−ＣＨ３を示すような式ＩＩのＮＤＧＡ誘導体である。
【００４５】
「修飾セルロース」とは、本明細書においては、セルロース分子への１つ以上の修飾を含むセルロース、例えばＥＣ、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ及びＭＣを意味する。
【００４６】
「ＮＤＧＡ」とは本明細書においてはノルジヒドログアヤレチック酸を意味し、そして下記式を有する。
【００４７】
【化２】
【００４８】
「ＮＤＧＡ化合物」とは、本明細書においては単一の、又は総称的にＮＤＧＡ、及び／又はＮＤＧＡ誘導体の何れかの１つ以上を意味する。
【００４９】
「ＮＤＧＡ誘導体」とは、本明細書においては下記式（ＩＩ）を有するＮＤＧＡの誘導体を意味する。
【００５０】
【化３】
ここで、式中、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、各々独立して−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、又は未置換又は置換されたアミノ酸残基又は製薬上許容しうるその塩を示し；そしてＲ１８及びＲ１９は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し、ここでＲ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、同時に−ＯＨではない。即ち、用語は、ＮＤＧＡのメチル化誘導体、例えばテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）、トリ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ３Ｎ）、ジ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ２Ｎ）及びモノ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ１Ｎ）、を包含する。或いは、ＮＤＧＡ誘導体は、ＮＤＧＡのヒドロキシル又はメチル基の水素の１つ以上が置換されている化合物、例えば、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アルコキシ、低級アシルオキシ、又はアミノ酸又は置換されたアミノ酸又はその塩を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が、各々独立して−Ｈ又はアルキル、例えば低級アルキルを示すものであってよい。用語は、例えば、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−ＯＣＨ３又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ３又は二置換アミノ酸残基、例えばＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸残基、例えば−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−を示し；そしてＲ１８及びＲ１９が、各々独立して−Ｈ又は低級アルキル、例えば−ＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ３を示す化合物を包含する。
【００５１】
本明細書においては、「パーセント」、「パーセンテージ」又は符号「％」とは、組成物中に存在する担体の量に基づいた組成物中の示された成分の比率を意味し、何れかの特定の成分に関して示されるとおり重量／重量（ｗ／ｗ）、重量／容量（ｗ／ｖ）又は容量／容量（ｖ／ｖ）によるものであり、これらは全て組成物中に存在する担体の量に基づいている。即ち、複数のタイプの担体は、示される通り１００％までの量で存在してよく、これはＡＰＩの存在を排除するものではなく、その量は％として、又は、組成物中に存在する特定のｍｇ数、又は存在する特定のｍｇ／ｍＬ数として示してよく、ここで％、ｍｇ／ｍＬは組成物中に存在する総担体量に基づいている。特定のタイプの担体が組み合わせて存在することにより担体を１００％としてよい。
【００５２】
「製薬上許容しうる担体」とは本明細書においては、使用される用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、そして製剤中の他の成分と適合性を有する。例えば本発明のカテコールブタン、ＮＤＧＡ化合物又はＮＤＧＡ誘導体を含有する製剤に対する担体は、好ましくは、酸化剤及びこれらに悪影響を与えることがわかっている他の化合物を包含しない。製薬上許容しうる担体は可溶化剤を含む。適当な製薬上許容しうる担体は、非限定的に、水、ブドウ糖、グリセロール、食塩水、エタノール、緩衝液、Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ（登録商標：以下、省略するが「Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ」は登録商標である。）ＥＬ、リン酸緩衝食塩水、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、修飾シクロデキストリン及びこれらの組合せ等の、全て上記したものを包含する。
【００５３】
「製薬上許容しうる賦形剤」という用語は溶媒、アジュバント又は希釈剤又は他の補助的物質、例えば当該分野における従来品を包含し、これらはパブリックに容易に入手でき、そして使用する用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、そして製剤中の他の成分と適合性を有する。例えば製薬上許容しうる補助的物質は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤、安定化剤、湿潤剤等を包含する。
【００５４】
用語「可溶化剤」は、本明細書においてはカテコールブタン又はＮＤＧＡ、例えばＮＤＧＡ誘導体１つ以上が溶解する組成物を意味する。可溶化剤は、また担体又は製薬上許容しうる担体であってよい。
【００５５】
用語「対象」、「宿主」及び「患者」は、本発明の組成物により治療される動物、非限定的に例えば、サル、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類牧畜動物、哺乳類競技用動物、及び哺乳類愛玩動物、を指すために本明細書においては互換的に使用される。
【００５６】
本明細書の投与に関してカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物又は誘導体に言及する場合の「実質的に精製された」化合物は、カテコールブタン、ＮＤＧＡ化合物又はＮＤＧＡ誘導体ではない物質（以下「非−ＮＤＧＡ物質」）を実質的に含有しないものである。実質的に含有しないとは、非ＮＤＧＡ物質を少なくとも約５０％含有しない、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、更により好ましくは少なくとも約９０％、そしてなおより好ましくは少なくとも約９５％非ＮＤＧＡ物質を含有しないことを意味する。
【００５７】
本明細書においては、用語「治療」、「治療する」は、所望の薬理学的及び／又は生理学的作用を得ることを指す。作用は、状態又は疾患又はその症状を完全又は部分的に防止する意味において予防的であってよく、及び／又は、状態又は疾患及び／又は状態又は疾患に寄与する有害作用の部分的又は完全な治癒の意味において治療的であってよい。対象の「治療」とは例えば哺乳類、特にヒトにおける状態又は疾患の何れかの治療を包含し、そして（ａ）状態又は疾患に罹患しやすいがそれを有するとはまだ診断されていない対象において状態又は疾患が発生することを防止すること；（ｂ）状態又は疾患が発生又は進行することを抑制すること、例えばその発生を停止させること；及び（ｃ）状態又は疾患を緩解（relieving）、緩和(alleviating)又は軽減(ameliorating)すること、例えば、状態又は疾患の退行(regression)又は鎮静(remission)を誘発することを包含する。
【００５８】
本発明を更に説明する前に、本発明は記載した特定の実施形態に限定されず、それ自体当然ながら変動してよいものとする。本明細書において使用した用語類は特定の実施形態を説明する目的のみのためであり限定する意図がないことは、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定されるためである。
【００５９】
ある範囲の値が提示される場合は、その範囲の上限と下限の間の各介在値は、特段の記載がない限り、加減の単位の１０分の１まで、そして、その記載された範囲内の何れかの他の記載された又は介在する数値が本発明に包含されるものとする。これらのより小さい範囲の上限及び下限はより小さい範囲内に独立して包含されてよく、そしてまた本発明内に包含され、記載された範囲内の何れかの特定的に除外された範囲の対象となる。記載された範囲が限度の一方又は両方を包含する場合は、これらの包含される限度の何れか又は両方を排除する範囲もまた本発明に包含される。
【００６０】
本明細書においては、特段の記載が無い限り、単数型の標記は複数形の対象も包含する。即ち、例えば「ある化合物」とはそのような化合物の複数を包含し、そして「ＮＤＧＡ化合物」に言及する場合は、１つ以上のＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体および当該分野で知られた同等物への言及を包含する。
【００６１】
本明細書において記載した全ての公開物、例えば特許、特許出願及び雑誌記事は、参照により全体が本明細書に組み込まれるそれらに引用されている参考文献を含めて、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【００６２】
本明細書において考察する公開物は本出願の出願日より前のその開示に関してのみ提示する。本明細書に記載した如何なるものも、本発明が以前の発明によりそのような公開物に先行する資格を有さないことを受け入れるものではない。更に又、提示した公開物の日付は個々に確認する必要がある実際の公開日とは異なる場合がある。本出願のテキスト内で記載した参考文献の引用は請求項の前の文献目録においてより完全に特定されている。
【００６３】
以下に記載する本発明は例示のためのみに提示するものであり、本発明を如何様にも制限するものとは解釈すべきでない。
【００６４】
カテコールブタンの調製
【００６５】
本発明のカテコールブタンは当該分野で知られた何れかの方法により造できる。例えばそのような化合物は米国特許第５，００８，２９４号に記載されているように調製できる。
【００６６】
ＮＤＧＡ誘導体の調製
【００６７】
ＮＤＧＡは市販品製造元、例えばAlexis Biochemicals Corp., San Diego, CA, USA（カタログ番号LKT-N5669）又はA.G. Scientific, Inc., San Diego, CA, USA（カタログ番号N1071）又はCayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA（カタログ番号70300）から購入してよい。
【００６８】
ＮＤＧＡ誘導体及びその製剤は、当該分野における何れかの従来法により製造してよい。例えば、ＮＤＧＡ誘導体は米国特許第５，００８，２９４号；米国特許第６，２９１，５２４号；フー，ジェイ・アール（Hwu, J.R.）他（１９９８年）；又はマクドナルド，アール・ダブリュ（McDonald, R.W.）他（２００１年）に記載の通り製造できる。
【００６９】
本発明の１つの実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ、別名メソ−１，４−ビス（３，４−ジメトキシフェニル）−２，３−ジメチルブタン、又はＭ４Ｎは、以下の通り製造され、即ち反応フラスコ中のメタノール中にＮＤＧＡ及び水酸化カリウムを含有する溶液を製造する。次に、ジメチルスルフェートを反応フラスコに添加し、反応を進行させる。反応は最終的には水で急冷（quench）することにより生成物を沈殿させる。沈殿物を濾過により単離し、真空オーブン中で乾燥する。次に化合物を塩化メチレン及びトルエンの溶液中に溶解し、その後アルミナ カラムを通して精製する。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、固体をイソプロパノール中に再懸濁し、濾過により精製する。濾滓を真空オーブン中で乾燥する。得られたテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）は、イソプロパノール中濾滓を還流、及び、濾過による結晶の再単離により結晶化させる。
【００７０】
本発明の一部の実施形態においては、本発明の特定のＮＤＧＡ誘導体、例えばＧ４Ｎ、別名メソ−１，４−ビス［３，４−（ジメチルアミノアセトキシ）フェニル］−（２Ｒ，３Ｓ）−ジメチルブタン又はテトラ−ジメチルグリシニルＮＤＧＡ、又はその塩酸塩及びアミノ酸置換基を有する同様の化合物もまた、従来法、例えば米国特許第６，４１７，２３４号に記載に従って製造できる。
【００７１】
治療用組成物の調製
【００７２】
本発明は、活性な薬学的成分（「ＡＰＩ」）としてのカテコールブタン、例えばＮＤＧＡ誘導体、及び、製薬上許容しうる担体又は賦形剤を含む医薬組成物を包含する組成物を提供する。典型的には、本発明の組成物は活性な薬学的成分又はＡＰＩ、即ちカテコールブタン、例えば本明細書に記載するＮＤＧＡ化合物及びＮＤＧＡ誘導体を約０．１％〜約９９％（less than about 0.1% up to about 99%）を含有し；場合により本発明は約２％〜約９０％のＡＰＩを含有する。
【００７３】
本発明は更に、カテコールブタン、例えば、ＮＤＧＡ誘導体、例えばＭ４Ｎが、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、又は約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、又は約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、又は約４０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するような組成物を提供する。１つの実施形態において、ＮＤＧＡ化合物は、本明細書に記載した組成物中、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ又は約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【００７４】
代替として表現すれば、本発明の組成物の別の実施形態は約０．１ｍｇ未満〜約２００ｍｇ以上（less than about 0.1mg to about 200mg or more）のＡＰＩ、例えば、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ又は約２００ｍｇのＡＰＩを含有してよい。
【００７５】
製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、ＡＰＩが溶解する可溶化剤の１つ以上を含有してよい。製薬上許容しうる担体又は賦形剤は追加的に希釈剤を含有してよい。
【００７６】
一実施形態において、本発明は、ＤＭＳＯ以外の水溶性有機溶媒を１つ以上を含有する可溶化剤を提供する。好ましい水溶性有機溶媒に属するものは、エタノール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド、ＰＶＰ、ＰＧ及びＰＥＧ化合物、例えばＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸、である。本発明の組成物中のＰＥＧ化合物は、約５％〜約１００％、又は約５％〜約６０％、又は約１０％〜約９０％、又は約２０％〜約８０％、又は約３０％〜約７０％、又は約４０％〜約６０％の量で存在し、全ての濃度は容量／容量（ｖ／ｖ）の比率で示す。ＰＧは、約２．５％〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在してよい。
【００７７】
本発明の組成物中のＰＥＧ化合物の濃度は、同様に存在している他の可溶化剤又は希釈剤又は賦形剤に依存して変動する。例えば、本発明のＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸は、約５％、約１０％、約１２．５％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％の濃度であることができ、これらの濃度は全て容量／容量（ｖ／ｖ）の比率で示す。
【００７８】
本発明は、また、修飾シクロデキストリンを含むシクロデキストリン中の、カテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物の組成物を提供する。本明細書に記載するシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンであってよく、そして、修飾シクロデキストリンは、例えば、ＨＰ−β−ＣＤ及びＳＢＥ−β−ＣＤを包含してよい。１つの実施形態において、本発明の組成物は、修飾シクロデキストリンを約５％〜約８０％、又は約１０％〜約７０％、又は約２０％〜約６０％、又は約３０％〜約５０％の濃度で含有し、これらの濃度全ては重量／容量（ｗ／ｖ）の比率で示す。
【００７９】
更に別の実施形態においては、修飾シクロデキストリン、例えばＨＰ−β−ＣＤは、組成物中に、約１２．５％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％又は約７５％の濃度で存在し、これらの濃度全ては、重量／容量（ｗ／ｖ）の比率で示す。
【００８０】
単独又は他のものと共に本発明の組成物中で使用してよい別の製薬上許容しうる担体又は賦形剤としては、イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、非イオン性界面活性剤であるポリソルベート、例えばＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０として市販されているポリソルベート２０及びポリソルベート８０、両親媒性界面活性剤であるＴＳＧＳ等が挙げられる。適当な界面活性剤の別の例は、非限定的に、グリセロールモノオレイン酸及びエステル化脂肪酸、例えば典型的には植物油のエステル転移で製造されるもの、Gattefosse Corp., Paramus，NJ，USAよりＬａｂｒａｆｉｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｌａｂｒａｆｉｌ」は登録商標である。）、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｌａｂｒａｓｏｌ」は登録商標である。）及びＧｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標：以下、省略するが「Ｇｅｌｕｃｉｒｅ」は登録商標である。）のような幾つかの種類及び等級において入手できるものを包含する。界面活性剤は何れかの所望の有効量において、例えば、約１％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは約９％（ｖ／ｖ）〜約８０％（ｖ／ｖ）、より好ましくは約１０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）の濃度として存在できる。特定の例として、非イオン性界面活性剤の好ましい濃度は、約９％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度におけるＴｗｅｅｎ ２０、および約３３％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。界面活性剤の全比率は、容量比率（ｖ／ｖ）である。
【００８１】
単独又は他のものと共に本発明の組成物中で使用してよい別の製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、修飾セルロース、例えば、ＥＣ、ＨＰＭＣ、ＭＣ及びＣＭＣである。修飾セルロースは、何れかの望ましい有効量、例えば、約０．１％〜約２５％、又は約０．５％〜約７．５％、又は約１．０％〜約５％の濃度において存在できる。特定の例においては、ＥＣは、約５％〜約２０％の濃度で存在してよく；ＨＰＭＣは、約０．５％〜約１％の濃度で存在してよく；ＭＣは、約１％〜約３％の濃度で存在してよく；そして、ＣＭＣは、約１％〜約４％の濃度で存在してよい。修飾セルロースの比率は、容量当たりの重量（ｗ／ｖ）である。
【００８２】
本発明の組成物中で、単独又は他のものと共に使用してよい他の製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、水不溶性脂質、例えば油、又は混合脂肪乳剤である。油の例として、コーン油、ゴマ油、ペパーミント油、ダイズ油、ミネラルオイル及びグリセロール等を包含する。混合脂肪乳剤組成物は、例えば、上述の通りＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ乳液等が入手可能である。
【００８３】
水不溶性担体は、水溶性担体、例えばＰＥＧ化合物及び界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０の、何れか１つ以上と組み合わせて使用してよい。
【００８４】
水不溶性脂質担体は、何れかの所望の有効量において、例えば約１０％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）、又は約１５％（ｖ／ｖ）〜約８５％（ｖ／ｖ）、又は約２５％（ｖ／ｖ）〜約７５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在できる。油は、約９％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在してよい。混合脂質乳剤は、約１０％（ｗ／ｖ）〜約３０％（ｗ／ｖ）、そして、好ましくは、約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してよい。
【００８５】
種々の担体成分の組合せを、上述の通りＡＰＩと共に使用してよい。現時点で好ましいそのような実施形態の非限定的な例は、２５％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ ３００、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ、担体の平衡である動物への注射用に適した水（「ＷＦＩ」、即ち製薬業界においてみとめられた等級の水を示すもの）における１０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの組成物である。この好適な実施形態においては、ＨＰ−β−ＣＤは６〜８程度（degree）の置換を有するが、他の実施形態における他の置換も上述の通り本発明の範囲に包含される。
【００８６】
本明細書に記載したカテコールブタンが、溶解し、そして溶液中に残存する限り、本明細書に記載した可溶化剤又は希釈剤の１つ以上を組成物に添加することによりそのような処置を必要とする対象へのそれの送達を最適化してよい。
【００８７】
別の実施形態においては、本発明は注射に適する食塩水又は水である希釈剤を提供する。本発明の１つの態様において、医薬組成物の浸透圧が高い場合には、注射に適する水を希釈剤として使用する。
【００８８】
本発明における使用に適する製薬上許容しうる担体又は賦形剤は、種々の公開物に記載されている。有用な担体又は賦形剤の例は、例えばジェンナロ，エイ・アール（Gennaro, A.R.）（２００３年）；アンセル，ヒチ・シー（Ansel, H.C.）他（２００４年）；ロウ，アール・シー（Rowe, R.C.）他（２００３年）；及びガーグ，エス（Garg, S.）他（２００１年）に記載されている。
【００８９】
液体形態の組成物は緩衝液を包含してよく、これは、カテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体の所望の用途に従って選択され、そして意図する用途に対して適切な他の物質も包含してよい。適切な緩衝液は当業者が容易に選択できるものであり、その広範な種類は当該分野で知られており、意図する用途に適している。
【００９０】
治療方法
【００９１】
カテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物を含有する組成物はそのようなカテコールブタン又はＮＤＧＡ化合物が使用できる何れかの数の疾患における処置を必要とする対象において、治療薬として、又は、そのような治療の為に使用できる。
【００９２】
本発明は、疾患、例えば増殖性疾患、例えば良性及び悪性の癌、乾癬及び前悪性の状態及び新生物形成、例えば上皮内新生物形成又は形成異常の処置のための方法及び組成物を提供する。本発明は、また、糖尿病、例えばＩ型及びＩＩ型糖尿病、肥満及びそのようなものから生じる合併症、例えば心臓血管疾患、卒中及び高血圧の処置を提供する。本発明は、更に炎症性疾患、例えば関節リューマチ、骨関節炎、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び他の免疫系関連の疾患の処置を提供する。更に、また、本発明は、神経学的疾患、例えば、中枢神経系の疾患および神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病、認知症、筋萎縮性側索硬化症及びパーキンソン病の処置を提供する。更に別の実施形態において、本発明は感染症、例えば、転写又は複製のためにＳｐ１結合を必要とするウイルスを包含するウイルス感染症、の処置を提供する。Ｓｐ１結合を必要とするこのようなウイルスの例は、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＢＶ、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス及びＪＣウイルスを包含する。
【００９３】
ヒト及び非ヒト動物を包含する種々の動物宿主が、対象となる方法に従って治療可能である。一般的に、そのような宿主は「哺乳類（mammals又はmammalian）」であり、これらの用語は哺乳類に分類される生物、例えば肉食動物目（例えばイヌ及びネコ）、げっ歯類（例えばモルモット及びラット）、及び他の哺乳類、例えばウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ウサギ、ブタ及び霊長類（例えばヒト、チンパンジー及びサル）を指すために広範に使用される。多くの実施形態において、宿主はヒトである。動物モデルは、ヒトの疾患の処置のためのモデルを提供するなどの実験調査の為に有利である。更に又、本発明は獣医科の医療にも適用される。
【００９４】
製剤、用量及び投与経路
【００９５】
本発明の１つの実施形態において、本発明の組成物の有効量を宿主に投与し、ここで「有効量」とは、所望の結果を得るために十分な用量を意味する。一部の実施形態においては、例えば所望の結果は、少なくとも、新生物形成又は形成異常の進行の抑制である。
【００９６】
投与すべき適切な用量は、治療すべき対象、例えば対象の全身健康状態、対象の年齢、疾患の疾患又は状態、対象の体重、腫瘍の大きさ等に応じたものである。一般的に、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ以下（about 0.1mg to about 500mg or less）を小児に投与し、約０．１ｍｇ〜約５グラム以下（about 0.1mg to about 5g or less）を成人に投与してよい。典型的な用量は、対象のｋｇ体重当たり活性な薬学的成分を約１０ｍｇから、対象のｋｇ体重当たり活性な薬学的成分を約６００ｍｇの広い範囲内に含まれる。活性剤は、単回の、又はより典型的には複数回投与において投与できる。所定の薬剤に対する好ましい用量は種々の手段により当業者が容易に決定できる。他の有効な用量は、用量応答曲線を調製する日常的試行により当業者により容易に決定される。薬剤の量は当然ながら使用する特定の薬剤に応じて変動する。
【００９７】
活性剤の投与の頻度は用量の場合と同様に年齢、体重、疾患の状況、健康状態及び患者の応答性に基づいて看護者により決定される。即ち薬剤は一回以上、毎日、毎週、毎月又は慣習的に決定されたように適宜投与してよい。薬剤は間欠的に、例えば数日、数週又は数ヶ月の期間にわたり投与し、その後は一定時間、例えば３又は６ヶ月が経過するまで再投与せず、そしてその後は再度、数日、数週又は数ヶ月の期間にわたり投与してよい。
【００９８】
薬学的剤形においては、活性剤は単独又は他の薬学的活性剤又は治療薬、例えば他の小分子、抗体又はタンパク質治療薬との適切な付随並びに組合せにおいて投与してよい。以下の方法及び賦形剤は例示に過ぎず、限定的なものではない。
【００９９】
更に又、所望により担体又は賦形剤は、補助的物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤を少量含有してよい。このような剤形を調製する実際の方法は既知であるか、又は当業者の知る通りである。例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Co. Rawlins, EA，（１９９７年）を参照できる。投与すべき組成物又は製剤は何れの場合においても治療すべき対象において所望の状態を達成するために適切なある量のＡＰＩを含有する。
【０１００】
注射又は静脈内投与用の単位剤型（unit dosage form）は、滅菌水、規定濃度（normal）の生理食塩水又は他の製薬上許容しうる担体中の溶液として組成物中にＡＰＩを含んでよい。
【０１０１】
本明細書において「単位剤型」という用語は、ヒト及び動物の対象に対する単位用量（unitary dosage）として適する物理的に個別の単位を指し、各単位は、製薬上許容しうる希釈剤、担体又は溶媒（vehicle）と共に、所望の作用をもたらすのに十分な量として計算された所定量の本発明のＡＰＩを含有する。本発明の新規単位剤型に関する仕様は、使用する特定の化合物及び達成すべき作用及び宿主における各化合物に関わる薬物動力学に応じて変動する。
【０１０２】
活性剤の複数又は単位用量（multiple or unit doses）を伴ったキットは本発明に包含される。そのようなキットにおいては、カテコールブタン、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＮＤＧＡ誘導体を含有する組成物の複数又は単位用量を保持する容器に加えて、目的の病理学的状態を処置する場合の薬剤の使用及びそれに伴う利益を説明した説明書を伴った情報提供用パッケージインサートが包含される。場合により本発明の組成物の投与のためのアプリケーターを各キットに包含させる。
【０１０３】
本注射用組成物は非経口的、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、皮下及び小胞内（intravesicularly）において、治療すべき疾患に対して適切に、そして当該分野で従来通りに、投与することができる。本発明の組成物は注射により投与することを意図しているが、それらは他の経路、例えば局所、鼻腔内、吸入又は移植投与により投与することが適当である場合もある。
【実施例】
【０１０４】
以下に記載する実施例は本質的に例示的なものであり、本発明を限定するものと解釈してはならない。
【０１０５】
実施例１．ＨＰ−β−ＣＤ及び／又はＰＥＧ ３００中にＭ４Ｎを含有する製剤。
【０１０６】
本実施例においては、Ｍ４ＮはＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１６１１７に記載の通り調製し、そして、可溶化剤中に可溶化した。得られた溶液は場合により賦形剤及び／又は希釈剤と混合した。可溶化剤及び賦形剤は、互換的に、或いは相互に組み合わせて使用してよい。使用した１つの可溶化剤又は賦形剤はResearch Diagnostics, Inc.より入手可能なエンドトキシン制御のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（「ＨＰ−β−ＣＤ」）（カタログ番号RDI-82004HPB、ロット番号H3N188P）（Flanders, NJ, USA）であった。使用した別の可溶化剤又は賦形剤はSpectrum Chemicals, Inc.より入手したＰＥＧ ３００（カタログ番号P0108、ロット番号TB1228）（Gardena, CA, USA）であった。
【０１０７】
本発明の１つの実施形態においては、ＨＰ−β−ＣＤ及びＰＥＧ ３００は単一の製剤中に存在する。この製剤を製造するためには、Ｍ４Ｎを先ずＰＥＧ ３００に溶解してＰＥＧ ３００中Ｍ４Ｎ溶液（「Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００」）を形成した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を次に予め製造しておいたＨＰ−β−ＣＤ溶液に添加してＰＥＧ ３００及びＨＰ−β−ＣＤ中のＭ４Ｎ溶液（以後「ＣＰＥ」製剤と称する）を形成した。
【０１０８】
ＨＰ−β−ＣＤ溶液を調製する際には、体積膨張を考慮しなければならない。例えば４０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ溶液については、０．７ｍＬ／ｇの体積膨張（即ち添加ＨＰ−β−ＣＤグラム当たり水０．７ｍＬが置換される）を考慮しなければならない。
【０１０９】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するための４０％ＨＰ−β−ＣＤの１００ｍＬ溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中にＷＦＩ６５ｍＬを投入した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約４０グラムのＨＰ−β−ＣＤを攪拌中のＷＦＩにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＨＰ−β−ＣＤを対向させることによりＨＰ−β−ＣＤの結晶がビーカー壁面に固着するのを防止した。ＨＰ−β−ＣＤ溶液を約２４時間、又は、ＨＰ−β−ＣＤが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。得られた溶液は約９３ｍＬであった。この溶液に、約７ｍＬのＷＦＩを添加して１００ｍＬとし、約４０％ＨＰ−β−ＣＤの最終溶液を調製した。最終溶液を約１時間攪拌し、遮光下に室温で保存した。修飾シクロデキストリン溶液を調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることにより所望の容量又は濃度を得てよい。他の濃度又は他の修飾シクロデキストリン溶液は、例えばＨＰ−β−ＣＤを、上述の方法において適切な濃度となるように調節された他の修飾シクロデキストリンと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１１０】
４０％ＨＰ−β−ＣＤ中、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの溶液１０ｍｌを以下の通り調製した。約１０ｍｌの４０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１０ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における４０％ＨＰ−β−ＣＤにゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物は場合により８０℃で約３０分間（又は、より大容量の溶液が所望の場合は、より長時間、例えば、Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物１００ｍｌに対して、８０℃にて１時間）又は必要に応じて、より長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／４０％ＨＰ−β−ＣＤ混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ溶液は、遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより同様に調製してよい。表１に示す結果は７日間より長期間にわたり４０％ＨＰ−β−ＣＤ製剤中１ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度において冷却した後にもＭ４Ｎが溶液であり続けたことを明らかにしている。
【０１１１】
ＰＥＧ ３００中、約２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの溶液１００ｍｌを以下の通り調製した。約１００ｍｌのＰＥＧ ３００を、攪拌棒を含むガラスビーカーに添加した。ガラスビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。ビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止するためにスパーテルを用いてビーカーの中央部におけるＰＥＧ ３００に約２．５ｇのＭ４Ｎをゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物を２４時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物は、場合により６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物の５００ｍｌについては６０℃で１時間）又は、必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうか、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００混合物又は溶液を観察した。全てのＭ４Ｎが溶解していることが観察された後、得られたＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を即座に、又は、４８時間の有効期限の前、又は結晶又は他の沈殿物が形成する前に使用した。結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶液中に再溶解するまで、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液を、再度６０℃で１時間、高温磁気プレート上で攪拌しながら加熱した。最終Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液は遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のＰＥＧ中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば上述の方法におけるＰＥＧ ３００をＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えることにより同様に調製してよい。
【０１１２】
５０％ＰＥＧ ３００（ｖ／ｖ）、２０％ＨＰ−β−ＣＤ（ｗ／ｖ）及び１２．５ｍｇのＭ４Ｎを含有する製剤の１００ｍＬの保存液（stock solution）は、磁気プレート上の攪拌棒の入ったガラスビーカーに予め調製しておいた４０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液（上述の通り調製）５０ｍｌを添加し、攪拌棒を中速で攪拌し、予め調製しておいた５０ｍLのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００溶液（上述の通り調製）をゆっくり、例えば約１０ｍL／分の速度で、添加することにより調製した。Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００は、それがビーカー壁面に固着するのを防止するため、そして、完全な溶解を確実に行うためにビーカーの中央にピペットを使用して添加した。ＨＰ−β−ＣＤ溶液へのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の添加は、最初は白色溶液の状態であったが、連続攪拌により最終的には透明となった。この操作法は適宜スケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ３００及びＨＰ−β−ＣＤの所望の容量及び濃度としてよい。保存液は、０．２２μｍのＰＶＤＦ膜、例えばMilliporeより入手可能な予備滅菌された真空駆動型使い捨てボトルトップフィルターメンブレン（カタログ番号SCGV T05 RE）（Billerica, MA, USA）を用いて濾過滅菌した。濾過処置は真空力により駆動し、濾液を予め滅菌した２５０ｍL容量のガラスビンに収集した。次にビンを密封し、遮光下に室温で保存した。ＨＰ−β−ＣＤ中の、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ４００又はＭ４Ｎ／ＰＥＧ ４００モノラウリン酸の保存液は、上述の方法においてＰＥＧ ３００をＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えることにより同様に調製できる。
【０１１３】
上述の態様において調製したＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ、Ｍ４Ｎ／ＰＥＧ ４００／ＨＰ−β−ＣＤ又はＭ４Ｎ／ＰＥＧ ４００モノラウリン酸／ＨＰ−β−ＣＤの保存液はインビトロで使用する前、又は、動物への投与の為に希釈することができる。希釈が必要な場合は、保存液は好ましくは食塩水の代わりにＷＦＩで希釈し、例えば、浸透圧を低く維持する。ＷＦＩ中の保存液の１：１希釈物１００ｍLを調製するために、約５０ｍＬの保存液をガラスバイアルに添加した。約５０ｍＬのＷＦＩをバイアル中の５０ｍＬの保存液に添加し、希釈された溶液を形成した。ガラスバイアルを閉じ、バイアルを数回振とう反転させることにより希釈された溶液を十分混合した。希釈された溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦ膜、例えばMilliporeより入手可能な予備滅菌された真空駆動型使い捨てボトルトップフィルターメンブレン（カタログ番号SCGV T05 RE）（Billerica, MA, USA）を用いて濾過滅菌した。濾過処置は真空強制により駆動し、濾液を予め滅菌した２５０ｍＬ容量ガラスビンに収集した。次にビンを密封し、遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることにより必要な容量又は希釈度、例えば１：２又は１：４の希釈度としてよい。
【０１１４】
５０％ＰＥＧ ３００及び２０％ＨＰ−β−ＣＤを含有するプラセボ対照として使用するのに適する製剤は以下のように調製できる。プラセボ又は対照製剤の１００ｍＬ溶液を調製するために、磁気プレート上の攪拌棒の入ったガラスビーカーに４０％ＨＰ−β−ＣＤ約５０ｍＬを添加する。磁気プレートは中速でＨＰ−β−ＣＤ溶液を攪拌するように設定する。約５０ｍＬのＰＥＧ ３００を、ビーカーの壁面にＰＥＧ ３００が固着しないようにビーカーの中央部にピペットを用いて、ガラスビーカー内の５０ｍＬのＨＰ−β−ＣＤにゆっくり添加する。混合物を約１時間、又は完全に混合するまで攪拌する。このプラセボ製剤を真空力により駆動される０．２２μｍのＰＶＤＦメンブレンフィルターを用いて濾過滅菌する。濾液を予め滅菌した２５０ｍＬ容量ガラスビンに収集する。ガラスビンを密封し、遮光下に室温で保存した。この処方を必要に応じてスケールアップ又はダウンすることにより所望の濃度及び容量としてよい。更にまた、ＰＥＧ ３００は所望によりＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸と置き換えてもよい。
【０１１５】
ＨＰ−β−ＣＤ及び／又はＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００を含有する製剤中、及び、上記又は同様の方法に従って調製したＨＰ−β−ＣＤ及びプロピレングリコール（「ＰＧ」）、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）又はＴｗｅｅｎ ８０を含有する製剤中のＭ４Ｎの溶解性の結果並びに得られた製剤の特性を表１〜５に示し、表中、Ｎは「No」、Ｙは「Yes」を示す。
【０１１６】
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【０１１７】
全製剤が４℃で２４時間及び５０００ｒｐｍで５分間の遠心分離に耐容性を示し、目視可能な沈殿物は形成しなかった。５０％ＰＥＧ ３００、２０％ＨＰ−β−ＣＤ、１２．５ｍｇ／ｍＬＭ４Ｎの保存液を含有する製剤は少なくとも４ヶ月、４℃に耐容性を示した。１：１又は１：２希釈度で調製した同じ保存液希釈物もまた少なくとも４ヶ月、４℃に耐容性を示した。
【０１１８】
【表２】
【０１１９】
【表３】
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
【表５】
【０１２２】
同様に、Ｍ４Ｎはエタノール、ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）、プロピレングリコール又はグリセロールを包含する水溶性有機溶媒のような他の可溶化剤中に可溶化してもよい。
【０１２３】
実施例２．培養物中の腫瘍細胞の増殖及び細胞死に対するＤＭＳＯ中又は複合ＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ製剤中のＭ４Ｎの作用
【０１２４】
１０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下「ＣＰＥ製剤」と称する）、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下、「ＣＰＥ２５／３０製剤」と称する）、及び、２７％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び３３％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（以下、「ＣＰＥ３３／２７製剤」と称する）の２種の腫瘍細胞ライン、即ちＨＰＶ−１８陽性ヒト子宮頸癌細胞ラインＨｅＬａ及びＨＰＶ陰性ヒト子宮頸癌細胞ラインＣ−３３Ａにおける細胞死及び増殖に対する作用を試験した。両方の腫瘍細胞ラインを、漸増量のＭ４Ｎ：０μＭ、２０μＭ、４０μＭ、６０μＭ及び８０μＭで、ＤＭＳＯ又はＣＰＥ製剤と共に７２時間処置した。各製剤は総量１％の増殖培地（１０％ウシ胎児血清、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×非必須アミノ酸溶液及び１０００ＩＵ／ｍＬペニシリン／１０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン溶液を添加したＬ−グルタミン含有最小必須培地）に添加した。対照細胞を同じ条件下に増殖させ、未処置のまま放置した。処置又は未処置の７２時間後、各試料中の細胞の総数及び生細胞の数をトリパンブルー色素排除法により計数した。各試料の細胞増殖速度及び死細胞の比率を分析した。この実験の結果を図１、図２及び表６〜１２に示す。
【０１２５】
図１は、Ｃ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞の処置について、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの漸増濃度に対してプロットした処置細胞数／未処置細胞数の比をグラフで示したものである。図２は、２種の癌細胞ライン、即ち培養物中のＣ−３３Ａ及びＨｅＬａ細胞の処置について、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの漸増濃度に対してプロットした死細胞の比率をグラフで示したものである。
【０１２６】
結果は、未処置対照と比較した場合に、試験した腫瘍細胞ラインの両方に対して、死細胞の％で測定した場合、Ｍ４Ｎ非存在下のＤＭＳＯ単独が顕著な抗増殖作用及びある程度の毒性作用を有していることを示している。これとは対照的に、未処置対照と比較した場合に２種の腫瘍細胞ラインに対してＣＰＥ製剤単独は抗増殖作用及び極めて僅かな毒性作用を有している。
【０１２７】
細胞増殖速度は、同製剤における非Ｍ４Ｎ処置の対照（すなわち０μｇ／ｍＬまたはＭ４Ｎの０μｇ）と比較した場合に、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤の何れかにおけるＭ４Ｎの処置後、両方の細胞ラインにおいて低減していた。実際、抗増殖作用はＣＰＥ製剤中ではＭ４Ｎの用量依存性であるように思われた。ＣＰＥ製剤においては、例えば、約２０μＭ又は７．２μｇ／ｍＬのＭ４Ｎが両方の腫瘍細胞タイプに対して細胞増殖の約５０％抑制をもたらすのに十分であることがわかった。ＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの濃度を更に増大させると、両方の細胞タイプに対して抗増殖作用が更に増大した。
【０１２８】
一般的に、ＤＭＳＯ製剤又はＣＰＥ製剤のいずれかにおけるより高用量のＭ４Ｎは、Ｃ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞の両方に対して細胞死のより高い比率を誘導した。しかしながら、ＤＭＳＯ製剤中のＭ４ＮはＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの相当する濃度よりも細胞に対してより高毒性であった。ＤＭＳＯ製剤中で試験したＭ４Ｎの最高濃度（８０μＭ又は２８．７μｇ／ｍＬ）は、細胞集団の約４０％において細胞死を促進したが、ＣＰＥ製剤中のＭ４Ｎの同濃度は、本実験においては細胞集団の僅か約２０％のみにおいて細胞死を促進した。
【０１２９】
これらの結果は両方の細胞ラインにおいて再現性があるとわかった。本試験のデータはＣＰＥ製剤中のＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中のＭ４Ｎと同様に細胞の増殖を停止させる能力を有している一方、ＤＭＳＯ製剤よりも低い細胞毒性を誘発することを示している。
【０１３０】
経時的なＣＰＥ製剤の有効性を試験するために連続した時点からデータを収集した。データによれば、２〜８℃で保存した１２ヶ月の期間の後、ＣＥＰ製剤は新規製造時と同様に有効であることを示していた。細胞の生存率はＣＰＥ製剤を保存した１２ヶ月にわたって同様に留まった。細胞死及び増殖速度は同じ範囲内に留まった。
【０１３１】
元のＣＰＥ製剤を新規ＣＰＥ２５／３０製剤と比較するためにデータを収集した。経時的な製剤の有効性を試験するため、並びに、新しい製剤が過古いものと比較してどの程度良好に機能するかを試験するために、０及び３ヶ月において試験を実施した。データはＣＰＥ２５／３０製剤は元のＣＰＥ製剤と同様に腫瘍細胞の増殖の抑制において有効であることを示している。細胞生存率は、ＣＰＥ製剤又はＣＰＥ２５／３０製剤の何れかを用いて薬剤の種々の濃度で処置したＨｅＬａ細胞の間で同様であった。細胞死及び増殖は経時的に見た場合でさえも同じ範囲内に留まった。
【０１３２】
ＨｅＬａ細胞に対してゼロ時点において、元のＣＰＥ製剤をＣＰＥ３３／２７製剤と比較しながら情報を収集した。データは、ＣＰＥ３３／２７がＨｅＬａ細胞に対し、細胞生存率、死細胞の比率及び増殖速度において、ある程度の影響を有していることを示していた。
【０１３３】
【表６】
【０１３４】
【表７】
【０１３５】
【表８】
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
【表１０】
【０１３８】
【表１１】
【０１３９】
【表１２】
【０１４０】
実施例３．Ｍ４Ｎの複数のロットを使用して同じ結果を得ることができる。
【０１４１】
種々のロットの薬剤の有効性を示すためにＭ４Ｎの種々のロットを試験した。ＨｅＬａ細胞を漸増量のＭ４Ｎ：０μＭ、２０μＭ、４０μＭ、６０μＭ及び８０μＭで、ＣＰＥ製剤と共に７２時間処置した。各製剤は総量１％の増殖培地（１０％ウシ胎児血清、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×非必須アミノ酸溶液及び１０００ＩＵ／ｍＬペニシリン／１０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン溶液を添加したＬ−グルタミン含有最小必須培地）に添加した。対照細胞を同じ条件下で増殖させ、未処置のまま放置した。処置又は未処置の７２時間後、各試料中の細胞の総数及び生細胞の数をトリパンブルー色素排除法により計数した。各試料中の細胞増殖速度及び死細胞の比率を分析した。この実験の結果を表１３及び１４に示す。これらの結果は使用したＭ４Ｎのロットに関わらず、薬剤の有効性が同様に留まっていることを示している。
【０１４２】
【表１３】
【０１４３】
【表１４】
【０１４４】
実施例４．静脈内注入毒性試験
【０１４５】
本試験の目的は、Convince Research Products（Cumberland，Virginia，USA）より供給された雄性及び雌性のビーグル犬への静脈内注射により投与した場合のテトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）の最大耐容用量を測定することであった。初回投与時、約６〜９ヶ月齢の雄１匹及び雌１匹の計２匹のビーグル犬に２０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び５０％ＰＥＧ ３００を含有するシクロデキストリン溶媒を試験日（「ＳＤ」）第１日目に、その後、シクロデキストリン溶媒中で調製したＭ４Ｎ（即ち被験品）の漸増濃度を投与した。予め処方した（preformed）シクロデキストリン溶媒及び被験品は室温で保存した。希釈剤として使用した滅菌水は、Baxter Health Care Corp．（Deerfield, Michigan, USA）又はAbbott Laboratories（North Chicago, Illinois, USA）より入手し、室温で保存した。
【０１４６】
被験品、シクロデキストリン溶媒及び希釈剤は、製剤目的のための１００％純度とみなした。投薬用製剤（dose formation）は、被験品又はシクロデキストリン溶媒の適切な量を、滅菌シリンジを用いてガラス容器に添加することにより、各投薬日に調製した。各用量につき、等量の滅菌水をＭ４Ｎ製剤又はシクロデキストリン溶媒に添加することにより、５０：５０（ｖ／ｖ）希釈物を形成した。２００ｍｇ／ｋｇ用量に対しては、希釈は必要としなかった。全製剤は、穏やかに反転することにより混合し、適切な溶液が形成されるようにした。製剤は薬物適用カセット（medication cassette）に搭載し、必要時まで室温で保存した。
【０１４７】
Ｍ４Ｎは、ＳＤ３に２５ｍｇ／ｋｇ、ＳＤ５に５０ｍｇ／ｋｇ、そしてＳＤ８に１００ｍｇ／ｋｇを投与した。雌のみが全量１００ｍｇ／ｋｇ用量を投与され、それは注入ラインにおける沈殿により生じた機械的不具合のためであり、雄イヌは意図した用量の約７２ｍｇ／ｋｇ（即ち７２％）を投与された。２匹の別のビーグル犬に２００ｍｇ／ｋｇを投与したが、機械的困難が生じ、雄には意図した量の約１８０ｍｇ／ｋｇ（９０％）が投与され、雌に投与した量は測定されなかった。
【０１４８】
ＳＤ１３において、１２．５ｍｇ／ｍＬの製剤の粘度に関連すると考えられるポンプの機械的故障により投薬が完了できなかった。未使用の製剤は褐色ガラスバイアルに移し、室温で保存した後、ＳＤ１５に滅菌水で５０：５０（ｖ／ｖ）希釈することにより再調製した。次に、６．２５ｍｇ／ｍＬ希釈液を薬物適用カセットに搭載した。
【０１４９】
使用動物は、初回投薬の前に少なくとも７日間実験室の条件に順化させ、担当獣医師による検疫を通過させた。その間、各動物は耳部入墨及び各ケージラベルに記録した一次的番号により識別した。動物は従来通り、そして、ＵＳＤＡ動物福祉法（USDA Animal Welfare Act）、実験動物の人道的管理と使用に関するＰＨＳ指針（PHS Policy on Humane Care and Use of Laboratory Animals）及び実験動物の利用及び管理に関する米国動物実験関連省庁連絡委員会原則（US Interagency Research Animal Committee Principles for the Utilization and Care of Research Animals）に従って管理した。
【０１５０】
飼料及び飲料水は、特段の記載が無い限り任意に摂取させた。食餌又は水中には、試験の目的の達成を妨害すると考えられる濃度では、汚染物質は存在していなかった。投薬中及び理化学的検査時には、動物に、愛玩行動、掻毟行動及び話し掛けのような積極的な人的関わりを与えた。頸静脈カテーテル処置のため、イヌは手術後にケージ外で運動をさせることは無かった。ゴム製コング玩具又はナイロン製玩具をケージ内に入れた。
【０１５１】
無菌的外科的手法を用いて、動物の頸静脈に留置カテーテルを挿管し、鎮痛剤及び抗生物質を手術当日に予防的に、そして抗生物質及び／又は鎮痛剤を手術後８日間、投与した。試験の概要は表１５、１６及び１７に示す。
【０１５２】
【表１５】
【０１５３】
【表１６】
【０１５４】
【表１７】
【０１５５】
用量１、２及び３は偶発事象を伴うことなく送達された。ＳＤ８において、１００ｍｇ／ｋｇの投薬中に、シリンジのポンプが早期に停止し、意図した１２３．２ｍＬ用量のうち僅か８８．６ｍＬのみが雄イヌ（Ｎｏ．１０５２９）に送達された。ポンプは必要に応じて手動で再開したが、全用量を投与されたのは雌イヌ（Ｎｏ．１０５３０）のみであった。
【０１５６】
ＳＤ１５において、希釈した被験品製剤を、及び８時間の目標注入持続時間で、２００ｍｇ／ｋｇ用量をイヌＮｏ．１０５６７及びＮｏ．１０５６８に投与しようと試みた。投薬７時間４５分後、雄イヌ用ポンプが停止した。従って、雄イヌ（Ｎｏ．１０５６７）には、意図した３２０ｍＬ用量のうち僅か２８９ｍＬのみが投与された。投薬２時間１２分後、注入針が雌イヌ（Ｎｏ．１０５６８）の注入ラインから脱落していたことが判明し、投薬を中止した。雌イヌに静脈内送達されたＭ４Ｎの量は測定されなかった。
【０１５７】
各静脈内注入終了後、滅菌食塩水１ｍＬを緩徐な大量瞬時注射として投与することにより、被験物質を注入ラインから動物内に注入した後、ヘパリン食塩水溶液を注射して注入ラインを充填することにより開存性を維持した。動物を観察した。ケージサイドの観察では、死亡、瀕死性、全身状態及び毒性の兆候が観察された。臨床観察では、皮膚及び体毛の特性の評価、手術部位、眼及び粘膜、呼吸、循環、自律神経及び中枢神経系、及び、身体運動性および挙動様式を観察した。血液を採取し、２．５ｍＬ容の血清分離用試験管にいれ、血清中Ｍ４Ｎ濃度分析に付した。試験管は数回反転させ、氷水上に保存し、約３０００ｒｐｍにより約１０分間４℃で遠心分離した。血清を微量遠心管に移し、−７５±１０℃で保存した。
【０１５８】
試料は、ドライアイス上でGeneLogicのAnalytical Chemistry Laboratory（Gaithersburg, Maryland, USA）に発送して被験品分析に付した。イヌ血清少量、少なくとも０．５ｍＬをアセトニトリルで処理し、濾過し、そして濾液を、タンデム型質量分析検出を伴ったＨＰＬＣカラムに注入（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）する方法が含まれた。分析対象は内標準としてトリアゾラムを用いた外標準曲線を用いて定量した。
【０１５９】
雄性イヌＮｏ．１０５２９及び雌性イヌＮｏ．１０５３０をそれぞれＳＤ９及び１７に試験から除外し、安楽死させて失血させた。雄性イヌ１０５６７及び雌性イヌＮｏ．１０５６８は、ＳＤ１７に安楽死させ、失血させた。全動物とも、Ｎｅｍｂｕｔａｌ（登録商標）の静脈内注射により安楽死させた。
【０１６０】
全てのイヌは、死亡時後、可能な限り早期に剖検に付した。身体外表面、手術部位、全ての開口部、頭部、胸部及び腹部の体腔部とその内容物の観察を含む肉眼的剖検を実施した。骨髄スメアは、大腿骨髄から調製した。スライドを風乾し、メタノール中に固定し、後日評価するために保存した。組織は、１０％中性緩衝ホルマリン（「ＮＢＦ」）中に保存した。更に、血管アクセスポート（「ＶＡＰ」）に連結した注入ラインを収集し、両端で結び、ＮＢＦ中に保存した。腎臓、肺、膀胱及び何れかの肉眼的病変部を包埋し、切片化し、染色し、そして認定病理専門獣医が検査した。検査した組織中には被験品に関連する病理学的所見は存在しなかった。
【０１６１】
結果として、Ｍ４Ｎの投与は死亡率に影響しなかった。明らかな投与関連の臨床観察事項又は体重への影響はなかった。被験品関連の肉眼的病理所見又は顕微鏡的変化は観察されなかった。Ｍ４Ｎの血清中濃度は、注入期の直後に最高であり、そして、Ｍ４Ｎ濃度は全ての測定時点において雄イヌよりも雌イヌで高値であった。Ｍ４Ｎは注入期間後１６時間にもなお検出可能であり、検出量は投与量の増大に従って増大した。
【０１６２】
結論として、投与関連の有害作用は約２００ｍｇ／ｋｇの用量まで観察されなかった。
【０１６３】
実施例５．追加の静脈内注入毒性試験
【０１６４】
Ａ．ビーグル犬におけるＭ４Ｎ（ＣＰＥ）の７日間静脈内注入毒性試験
【０１６５】
本試験は、ビーグル犬において連続７日間の単回静脈内注入として投与した場合の３０％ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％ＰＥＧ中に製剤されたＭ４Ｎの毒性薬物動態プロファイルを評価するために実施した。本試験は、イヌにおけるＭ４Ｎのこの特定の製剤の第１の試験を構成し、毒性を評価し、希釈された製剤（１０ｍｇ／ｍ対５ｍｇ／ｍＬ）の耐容性を比較するために実施した。
【０１６６】
合計１２匹のビーグル犬（雄８匹／雌４匹）に５４分（群２）又は１０８分（群１、３及び４）の静脈内注入を介して、Ｍ４Ｎを投薬した。全動物に対し、連続７日間にわたり、一日１回の７投薬を行った。
【０１６７】
以下のパラメーター、即ち臨床観察項目及び体重を評価した。被験品の分析は試験第１日目及び７日目に実施し、血液試料（目標容量２．０ｍＬ）は以下の時点において適切な容器に各動物から採取した。
【０１６８】
【表１８】
【０１６９】
肉眼的剖検は、群１及び３の動物に対して実施し、全ての注射部位を組織学的検討の為に処理した。詳細な臨床観察によれば、以下の所見、即ち一過性の可逆的な後肢の協調性不良が群２、３及び４において観察された。これらの観察事項の大部分は、群３及び４で観察された。変色した尿が群１及び３で生じた。この所見は溶媒群で観察されたため、溶媒関連と考えられる。３例の前肢領域の腫脹は、群１、２及び３で観察され、第３日に開始し、第４日に終了した。所見は、同じ投薬領域（橈側皮静脈）における複数回の針の挿入に起因する刺激を示すと思われる。速い呼吸の単一の観察事例は、群３の雌について単発的に偶発したものとして観察され、再度観察されることは無かった。最後に、下痢、嘔吐、粘液様糞便及び軟便が散発的に観察された。これらの観察事例はビーグル犬で一般的であり、ストレス誘導性であり、被験品関連ではないと考えられた。
【０１７０】
血清分析によれば、最低ピーク被験品濃度（名目上１８７５９ｎｇ／ｍＬ）が、４５ｍｇ／ｋｇ（５ｍｇ／ｍＬ）を投与した群４の動物において観察された。より高いピーク濃度（名目３３４２０ｎｇ／ｍＬ）は、４５ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した群２の動物で観察された。予測された通り、最高濃度（名目４６７０４ｎｇ／ｍＬ）は、９０ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した群３の動物で観察された。全群について最大濃度時間は、注入終了時であった（群２では０．９時間、群３及び４では１．８時間）。溶媒を投与した群１の動物の何れかの試料においても被験品は観察されなかった。１回投与後の濃度曲線を図３Ａ（非対数目盛）及び図３Ｂ（対数目盛）に示す。
【０１７１】
肉眼的剖検を、群１及び３の動物に対して実施した。注射部位を採取して組織学的検討の為に処理した。組織学的検討によれば、対照の注射部位は、処置動物のものよりも影響が少ないように観察され、対照と比較して、処置動物の注射部位はより肥厚化し、変色していた。このことは、被験品は溶媒よりも刺激性が強いことを示唆している。剖検に付した動物にその他の肉眼的所見は観察されなかった。
【０１７２】
Ｂ．２８日間回復期間を設けたビーグル犬におけるＭ４Ｎ（ＣＰＥ）の１４日間反復静脈内注入毒性試験
【０１７３】
雄性及び雌性のビーグル犬に、１４日間の静脈内注入を介してＣＰＥ（５０％ＰＥＧ ３００中の２０％ＨＰ−β−ＣＤ中における１２．５ｍｇ／ｍＬ）を投与し、２８日間回復期間を設けて、何れかの処置関連毒性の可逆性を調べた。最初は、３２匹（雌雄各１６匹）を無作為に４群（群１及び４は雌雄各５匹、群２及び３は雌雄各３匹）のうちの１つに割付け、５０％ＰＥＧ ３００中の２０％ＨＰ−β−ＣＤ（プラセボ）又は被験品（ＣＰＥ）を２２．５、４５又は９０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。全動物に、静脈内注入により合計１４回の一日当たりの用量を投与した。投薬後、群当たり雌雄各３匹のイヌをＳＤ１６に安楽死させ、群１及び４の残りの雌雄各２匹を２８日間の回復期間を通して維持した。
【０１７４】
試験中に評価したパラメーターは死亡、臨床観察事項、体重及び体重変化、摂餌量、眼科的、心臓学的、臨床病理、臓器重量及び巨視的な及び微視的な病理の項目を包含した。
【０１７５】
ＣＰＥ投与は死亡率には影響せず、全動物とも予定終了時まで生存した。体重、体重変化又は摂餌量には影響は無かった。投与関連の眼科的作用は、観察されなかった。可逆的なＣＮＳ活性（運動失調）の一過性の兆候が、２回９０ｍｇ／ｋｇにおける１匹に観察された。全ての他の臨床観察事例は投与に無関係の単発的発生と考えられた。
【０１７６】
心臓学的には、被験品関連の作用は観察されなかった。投与前及びＳＤ１３において、プラセボ投与の雄１匹が、心室性期外拍動を示し、ＳＤ１において、４５ｍｇ／ｋｇＣＰＥを投与した雌１匹が心室に伝導しない１心房性の拍動を示したが、これらの所見の何れも投与関連とはみなされなかった。
【０１７７】
臨床病理パラメーターには、被験品関連作用は観察されなかった。有意に低値の絶対網状赤血球数が、ＳＤ１５に２２．５ｍｇ／ｋｇＣＰＥ投与の雄において観察されたが、変化は最小限であり、投与前の数値と同様であり、生物学的または毒性学的に有意とはみなされなかった。
【０１７８】
ＳＤ１６において、２２．５及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＰＥを投与した雄の絶対脾臓重量における統計学的有意差は、対照群（プラセボ）における動物個体変動に関連するものであった。相対臓器重量には有意差は無かった。
【０１７９】
ＳＤ１６の剖検において全動物の注入部位で観察された病変部は、静脈内注入処置の二次的なものと考えられ、投与関連ではなかった。注入部位の赤色化が４５ｍｇ／ｋｇＣＰＥ群の雌１匹で観察され、微視的には多病巣性、軽度、内膜の血管肥厚化、平滑筋細胞の多病巣性、軽度の血管過形成、及び、多病巣性、軽度、亜急性、皮下の周囲血管炎と相関付けられ、投薬技法により誘発された刺激を示していた。プラセボ及び９０ｍｇ／ｋｇＣＰＥ群の一部の雄性及び雌性の動物は、広汎性の軽度〜中等度の脾臓のうっ血を示しており、安楽死状態に起因するものであった。ＳＤ１６、４２及び４３の剖検時に観察された他の全ての巨視的及び微視的な所見は偶発的と考えられ、投与関連性ではなかった。
【０１８０】
結論として、ビーグル犬では最大９０ｍｇ／ｋｇ用量においてＣＰＥの静脈内注入の１４日間後に投与関連の有害作用は観察されなかった。
【０１８１】
Ｃ．ビーグル犬におけるＩＶ用量変動試験
【０１８２】
２０％のＨＰ−β−ＣＤ／５０％ＰＥＧ ３００中のＭ４Ｎ（１２．５ｍｇ／ｍＬ）を雄イヌ１匹にＩＶ注入により投与した（１０ｍＬ／ｋｇ／時）。注入ライン内の圧力増大及びシリンジからの被験製剤の漏出が起こった。投薬により唾液分泌、散瞳、赤色化尿、重度の運動失調、振戦及び痙攣が起こった。観察事例が重度であると考えられたため、動物は瀕死とみなされ、安楽死が予定された。安楽死の前に、イヌは回復しているように見えた。：全ての以前に観察された臨床観察事例は重症度が顕著に低下した。
【０１８３】
同一の投薬を、５ｍＬ／ｋｇ／時の注入速度で雌イヌ１匹に対して試みたが、非協調／不均衡性の運動及び頻尿が投薬後に生じた。イヌは投薬１時間及び１５分以内で回復し、継続的又は追加的な有害臨床兆候は示さなかった。
【０１８４】
別の雄及び雌に、１５０ｍｇ／ｋｇ次いで１２５ｍｇ／ｋｇで投薬した。重度の運動失調、眼振、赤色尿又は糞、頻尿、投薬中の啼鳴、呼吸困難、嘔吐及び／又は唾液分泌が、これらの用量レベルで生じた。両方の動物とも投薬１時間内に回復し、その後は追加的な重要な臨床兆候は観察されなかった。
【０１８５】
２００、１５０及び１２５ｍｇ／ｋｇで観察された偶発的な臨床、ケージサイド、投薬後、又は予定外の観察事例は、最小限〜軽度の鼻及び／又は耳の紅潮、排泄の変化（軟質及び／又は粘液性の糞）及び透明な鼻分泌物及び赤色膣分泌物の各１例を包含していた。これらの所見は頻繁に生じ、投与とは無関係の一般的な臨床検査上の所見と考えられた。１２５ｍｇ／ｋｇ投与の雌のＳＤ４３における、投薬中のパドリング挙動の１例が生じたが、それは投薬用スリングの使用に起因するものであり、やはり投与とは無関係とみなされた。
【０１８６】
２匹の余分（未処置）のイヌを試験計画に追加し、１３日間隔での１２回の総投薬につき、５ｍＬ／ｋｇ／時の注入速度で７５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した。唯一観察された投薬後の観察事例は、ＳＤ７における雌の赤茶色尿の単回の観察であり、この事象の有意性は不明である。臨床観察事例には、雄の軟便及び雌の泡のような白色吐瀉物が包含されたが、これらの所見は頻繁又は単発的な偶発例であり、投与とは無関係とみなされた。脆弱化四肢の投薬後観察事例がＳＤ２において雄で観察され、スリング拘束材の使用に起因していた。両方のイヌは何れかの観察臨床兆候からも投薬１時間以内に回復した。Ｍ４Ｎ投与は体重に影響せず、肉眼的病変部は剖検時には観察されなかった。その他の投与関連観察事例はなかった。
【０１８７】
Ｄ．スプラーグドーリー（Sprague Dawley）ラットにおける８日間ＩＶ注入毒性試験
【０１８８】
ＰＥＧ ３００中の１０％ＨＰ−β−ＣＤ中におけるＭ４Ｎ（６．２５ｍｇ／ｍＬ）の漸増用量、０、１００、１５０又は２００ｍｇ／ｍＬを、８ｍＬ／ｋｇ／時で雄性及び雌性のスプラーグドーリーラット（雌雄各３匹）に、４日毎に一回ＩＶ注入により投与した。最初の４回の注入後、試験を延長して、最大１４日までの４時間の毎日の注入も行った。Ｍ４Ｎに関連する顕著な死亡例は生じなかった。雄性ラット１匹が溶媒投与中に第１日目投薬時に死亡し、雌性ラット１匹が試験第５日目において被験物質１００ｍｇ／ｋｇの注入終了時に死亡していた。一匹が被験品を投与されておらず（溶媒のみ）、また、もう一方のラットでは単発例であり他のラットは２００ｍｇ／ｋｇ／日の投薬で複数日間生存していたことから、これらの死亡は被験品関連とはみなされなかった。
【０１８９】
発生した臨床及び剖検の観察事例は、注入口と注入ラインに対し二次的なものであった。これらの観察事例は、頚部又は腋窩における浮腫及び後肢の限定された使用を包含していた。試験の連続毎日投薬期間は、雄１匹及び雌１匹のラットにおいて振戦が生じた。又、雄１匹及び雌１匹のラットで眼瞼下垂及び活動亢進が生じた。これらのみが、被験品２００ｍｇ／ｋｇ／日投薬に関連していた臨床観察事例であった。
【０１９０】
試験期間を通じて、雌雄ラット共に体重増加した。最高体重増加は、溶媒投与後に生じた。摂餌量値は溶媒と被験品の投与後で同様であった。
【０１９１】
本試験で評価したラットの限定数に基づいて、最大連続８日間までの溶媒又は２００ｍｇ／ｋｇ／日もの高用量における被験品の投与は、ラットによる耐容性を示し、毎日投与後に一部有害臨床観察事例を誘発していた。発生した大部分の臨床観察事例及び全ての剖検所見は、ラットへの投薬の為に使用した注入口と注入ラインに関連しているとみなされた。屠殺時において、全ての注入ラインは頸静脈の外部に移動及び／又はもはや開存しておらず、塊状物（おそらくは被験品）が注入口／ラインの位置に存在していた。
【０１９２】
実施例６．修飾セルロース中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０１９３】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するための５０％ＨＰ−β−ＣＤ（ｗ／ｖ）及び０．５％ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）（ｗ／ｖ）の１０ｍＬの溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中に５．９ｍＬの動物への注射に適した水（ＷＦＩ）を投入した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。５グラムのＨＰ−β−ＣＤを攪拌中のＷＦＩにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＨＰ−β−ＣＤを指向させた。ＨＰ−β−ＣＤ溶液を約２４時間、又は、ＨＰ−β−ＣＤが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。得られた溶液は約９．４ｍＬであった。この溶液に約０．６ｍＬのＷＦＩを添加して１０ｍＬとし、５０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液（ｗ／ｖ）を調製した。５０ミリグラムのＨＰＭＣを５０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液に添加し、約１時間、又はＨＰＭＣが溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。最終溶液を約１時間攪拌し、次に遮光下に室温で保存した。修飾セルロースを含有する修飾シクロデキストリンを調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることによりＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ溶液の所望の容量又は濃度を得てよい。他の修飾シクロデキストリン／修飾セルロース溶液は、例えば上述の方法において、ＨＰ−β−ＣＤを他の修飾シクロデキストリンと、又は、ＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１９４】
５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ中約１０ｍｇ／ｍＬで濃度の１０ｍＬのＭ４Ｎ溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣにゆっくり添加した。Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物を２４時間、又は全てのＭ４Ｎが均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物は約９０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物については９０℃にて１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうか、Ｍ４Ｎ／５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ混合物を観察した。最終Ｍ４Ｎ５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液は遮光下に室温で保存した。Ｍ４Ｎは９０℃で加熱した場合には１ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度でこの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ製剤中で溶解しており、冷却後も溶液として留まり、室温における安定性は7日間より長期間であった。Ｍ４Ｎはこの同じ製剤中５０ｍｇ／ｍＬ濃度においては９０℃でさえも溶解しなかった。
【０１９５】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン／セルロース溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより、又はＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより同様に調製してよい。
【０１９６】
可溶化剤及び／又は賦形剤として使用するためのエタノール（ｗ／ｖ）中５％エチルセルロース（「ＥＣ」）の１０ｍＬの溶液の調製に際して、攪拌棒の入ったガラスビーカー中に１０ｍＬの１００％エチルアルコール（「ＥｔＯＨ」）を投入し、円形Ｔｅｆｒｏｎ（登録商標：以下、省略するが「Ｔｅｆｒｏｎ」は登録商標である。）カバーにより被覆した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。５００ミリグラムのＥＣを攪拌中のエタノールにゆっくり添加し、その際、スパーテルを用いてビーカーの中央部にＥＣを指向させることにより、ＥＣ粉末がビーカー壁面に固着するのを防止した。ＥＣ溶液を約２時間、又は、ＥＣが完全に溶解したことが目視により判明するまで攪拌した。最終溶液は遮光下に室温で保存した。
【０１９７】
修飾セルロース溶液を調製するこの方法をスケールアップ又はダウンすることにより所望の容量又は濃度を得てよい。他の修飾セルロース溶液は、例えば上記した方法において、ＥＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。
【０１９８】
５％ＥＣ（ｗ／ｖ）中の約２０ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ）の濃度のＭ４Ｎの溶液（「ＥＣ製剤」）１０ｍＬを以下の通り調製した。上述の通り調製した約１０ｍＬの５％ＥＣ溶液を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定し、円形Ｔｅｆｒｏｎカバーで被覆した。約２００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部における５％ＥＣ製剤にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば５００ｍＬのＭ４Ｎ／ＥＣ混合物については６０℃にて１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ＥＣ混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ＥＣ溶液は遮光下に室温で保存した。
【０１９９】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の修飾セルロース、例えばＨＰＭＣ、ＭＣ及びＣＭＣの溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤も同様に調製してよい。修飾セルロース中のＭ４Ｎの溶解性の結果を表１９に示す。
【０２００】
結果によれば、熱を適用することなくＥＣ製剤中において１ｍｇ／ｍＬでＭ４Ｎが可溶であり、室温で３日間を超えて安定であったことを示している。Ｍ４Ｎは４０℃において１０ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、そして冷却後も溶液状態に留まり、この溶液は３日間を超えて室温で安定であった。Ｍ４Ｎは６０℃において２０ｍｇ／ｍＬの濃度でＥＣ製剤中に可溶であり、そして冷却後も溶液状態に留まり、この溶液は３日間を超えて室温で安定であった。３０ｍｇ／ｍＬ濃度のＭ４Ｎは６０℃でＥＣ製剤中において可溶であったが、冷却により溶液状態に留まることはできなかった。５０ｍｇ／ｍＬ又は１００ｍｇ／ｍＬレベルのようなより高濃度のＭ４Ｎは９０℃でＥＣ製剤中において可溶であったが、冷却により溶液状態に留まることはできなかった。
【０２０１】
【表１９】
【０２０２】
実施例７．水不溶性脂質及び水溶性有機溶媒中のＭ４Ｎの溶解性
【０２０３】
ゴマ油中約５０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの１０ｍＬの溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬのゴマ油を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約５００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるゴマ油にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物を約２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／ゴマ油混合物については６０℃で１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油混合物又は溶液を観察した。結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、Ｍ４Ｎ／ゴマ油溶液を高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃で１時間加熱した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油溶液は遮光下に室温で保存した。
【０２０４】
上述の方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の水不溶性脂質中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述した方法においてゴマ油をコーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。結果を表１９に示す。
【０２０５】
表２０は、例えば、Ｍ４Ｎが１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬまでの濃度範囲における６０℃でのコーン油中で可溶であり、そして、１００ｍｇ／ｍＬのレベルを除き、Ｍ４Ｎは冷却後に溶液状態に留まり、溶液は、１及び１０ｍｇ／ｍＬ濃度において３日間を超えて安定であり、２０、４０及び５０ｍｇ／ｍＬのレベルにおいて３日間未満、そして６０ｍｇ／ｍＬのレベルでは１日間未満、安定であることを示している。更に、Ｍ４Ｎは、３０ｍｇ／ｍＬのレベルでは６０℃においてオリーブ油中で可溶であったが、冷却後は溶液状態に留まることはできなかった。
【０２０６】
ゴマ油中において、Ｍ４Ｎは１０ｍｇ／ｍＬのレベルでは室温で、そして２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ及び５０ｍｇ／ｍＬの濃度では６０℃で可溶であり、冷却後も溶液状態に留まった。１０ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で３日間を超えて安定であり、３０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で３日間未満安定であり、そして５０ｍｇ／ｍＬ溶液は室温で１日間未満安定であった。
【０２０７】
８５％ゴマ油及び１５％Ｔｗｅｅｎ ２０中、約６０ｍｇ／ｍＬの濃度の１０ｍＬのＭ４Ｎの溶液を以下の通り調製した。約８．５ｍＬのゴマ油を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約１．５ｍＬのＴｗｅｅｎ ２０をビーカーの中央部にゆっくり添加した。約６００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが付着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は、約２時間、或いはすべてのＭ４Ｎが溶解、または均一に懸濁し、塊状物がなくなるまで、撹拌した。Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば、５００ｍＬのＭ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物については６０℃で１時間）又は、必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は遮光下に室温で保存した。保存中結晶が形成した場合は、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃に加熱できる。
【０２０８】
この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして加熱温度はＭ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、水溶性有機溶媒と組み合わされた他の水不溶性脂質中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるゴマ油又はＴｗｅｅｎ ２０をコーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油、Ｔｗｅｅｎ ８０、コハク酸ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００「（ＴＰＧＳ）」、レシチン、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、ポリエチレングリコール（「ＰＧ」）又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。水不溶性脂質中のＭ４Ｎの溶解性の結果を表２０に示す。
【０２０９】
表２０は、例えば、６０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは、５５℃において８５％ゴマ油及び１５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する製剤中で可溶であり、そして、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは４５℃の同じ製剤中で可溶であったが、Ｍ４Ｎは冷却時にはこれらの製剤中では溶液状態に留まらなかった。一方、２９ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎは、６０℃において８９％ゴマ油及び１１％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する僅かに異なる製剤中で可溶であり、冷却時も溶液状態に留まり、そして７日間超室温で安定であった。
【０２１０】
食塩水中約２．９ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの乳剤１ｍＬを以下の通り調製した。約０．９ｍｌの０．９％食塩溶液を１．５ｍＬ容のポリプロピレン試験管に入れた。８９％のゴマ油及、１１％のＴｗｅｅｎ ２０中において２９ｍｇ／ｍＬの濃度で約０．１ｍｌのＭ４Ｎ溶液をポリプロピレン試験管に添加した。食塩水中のＭ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液又は混合物を１分間激しく回転混合した。６０％最大プローブ振幅の振幅に調節したミクロチッププローブを用いて５分間Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液を超音波処理することにより乳剤を調製した。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０乳剤を観察した。最終Ｍ４Ｎ／ゴマ油／Ｔｗｅｅｎ ２０乳剤は室温で遮光下に室温で保存した。
【０２１１】
この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他の界面活性剤と組み合わせた他の脂質又は水溶性有機溶媒中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるゴマ油又はＴｗｅｅｎ ２０を、コーン油、オリーブ油、ダイズ油、ペパーミント油、Ｔｗｅｅｎ ８０、ＴＰＧＳ、レシチン、ＰＧ、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより、同様に作成してよい。
【０２１２】
【表２０−１】
【表２０−２】
【表２０−３】
【０２１３】
表２１は、水溶性有機溶媒ＥｔＯＨ、ＰＧ、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸、グリセロール、ＰＶＰ及びこれらの特定の組合せ中における、Ｍ４Ｎの溶解性に関して得られた結果を示す。
【０２１４】
【表２１】
【０２１５】
実施例８．非イオン性界面活性剤中のＭ４Ｎの溶解性
【０２１６】
Ｔｗｅｅｎ ２０中、約６０ｍｇ／ｍＬの濃度のＭ４Ｎの１０ｍＬの溶液を以下の通り調製した。約１０ｍＬのＴｗｅｅｎ ２０を攪拌棒の入ったガラスビーカーに添加した。ビーカーを磁気プレート上に置き、攪拌棒を中速で攪拌するように設定した。約６００ｍｇのＭ４Ｎを、スパーテルを用いてビーカーの中央部におけるＴｗｅｅｎ ２０にゆっくり添加することによりビーカー壁面にＭ４Ｎが固着するのを防止した。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物を２時間、又は全てのＭ４Ｎが溶解又は均一に懸濁し、塊状物が存在しなくなるまで攪拌した。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物は約６０℃で約３０分間（又はより大容量の溶液が所望の場合はより長時間、例えば５００ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物については６０℃１時間）又は必要に応じてより長時間加熱することによりＭ４Ｎが完全に溶解するようにした。白色の背景、次いで暗色の背景に対向させてビーカーを保持し、次に粒状物の存在を探査することにより、未溶解のＭ４Ｎが存在しているかどうかについて、Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０混合物又は溶液を観察した。最終Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は遮光下に室温で保存した。保存中に結晶が形成した場合は、全てのＭ４Ｎが溶解して溶液に戻るまで、Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液を高温磁気プレート上で攪拌しながら再度６０℃にて約１時間加熱した。
【０２１７】
この方法をスケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよく、そして、加熱温度は、Ｍ４Ｎの溶解を達成するために上昇又は低下させてよい。他の非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤又は両親媒性界面活性剤中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＴｗｅｅｎ ２０をＴｗｅｅｎ ８０又は他の可溶化剤及びこれらの組合せと置き換えることにより同様に調製してよい。Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｗｅｅｎ ８０及びＴｗｅｅｎ ２０とＰＥＧ ４００との組合せにおけるＭ４Ｎの溶解性の結果を表２２に示す。
【０２１８】
表２２は、Ｍ４Ｎが室温において１ｍｇ／ｍＬの濃度でＴｗｅｅｎ ２０及びＴｗｅｅｎ ８０に可溶であることを示している。Ｔｗｅｅｎ ２０溶液中のＭ４Ｎ（以下、「Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０」称する）は７日間を超えて室温で安定であり、Ｔｗｅｅｎ ８０溶液中のＭ４Ｎ（以下、「Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ８０」と称する）は観察３日間を超えて安定であった。より高濃度のＭ４Ｎも、５０℃でＴｗｅｅｎ ２０又はＴｗｅｅｎ ８０に可溶であった。更に又、Ｍ４ＮはＴｗｅｅｎ ２０中で６０ｍｇ／ｍＬまで、及び、Ｔｗｅｅｎ ８０中で５０ｍｇ／ｍＬまでの濃度において冷却後も溶液状態に留まったが、Ｔｗｅｅｎ ２０中での８０ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬのレベルでは冷却時に不溶性となった。１０ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は７日間を超えて室温で安定であると観察された。４０ｍｇ／ｍＬ及び８０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ２０溶液は３日間未満室温で安定であると観察された。Ｍ４Ｎ／Ｔｗｅｅｎ ８０溶液については、１０ｍｇ／ｍＬ溶液は３日間を超えて室温で安定であるように観察されたが、５０ｍｇ／ｍＬ溶液は１日間未満の室温で安定であった。
【０２１９】
結果は又、Ｍ４Ｎは５０％Ｔｗｅｅｎ ２０と５０％ＰＥＧ ４００の組合せにおいては６５℃での加熱時に試験したＭ４Ｎの６０ｍｇ／ｍＬ濃度まで安定であったことを示している。Ｍ４Ｎは冷却によっても、これらの製剤中で溶液状態に留まり、溶液は３日間を超えて室温で安定であった。
【０２２０】
表２３は、μｇ／ｍＬにおけるＭ４Ｎの濃度及びμＭ量におけるその相当する濃度を示す。
【０２２１】
【表２２】
【０２２２】
【表２３】
【０２２３】
実施例９．ＨＰ−β−ＣＤ中にＭ４Ｎを含有する凍結乾燥製剤
【０２２４】
ＨＰ−β−ＣＤ中の、約１８５ｍｇ／ｇ（ｗ／ｗ）の濃度の１２０ｍｇのＭ４Ｎ凍結乾燥粉末を以下の通り調製した。等モル量のＨＰ−β−ＣＤ及びＭ４Ｎを使用してＨＰ−β−ＣＤとＭ４Ｎの間の複合体形成比率を増大させた。約９８ｍｇのＨＰ−β−ＣＤ及び約２２．２ｍｇのＭ４Ｎを、１．５ｍＬ容量のポリプロピレン試験管中で混合した。約０．２ｍＬのＷＦＩを、ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ粉末混合物の入ったポリプロピレン試験管内の混合物に添加し、１分間、回転混合することにより水中のＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎの懸濁液を形成した。ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液を２４時間−２０℃で凍結した。次に、ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液を６０℃にて約２時間、真空下に、１４００ｒｐｍで遠心分離し、懸濁液から水を全て除去した。ＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ複合体の乾燥粉末は約１２０ｍｇの重量であった。このＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ粉末複合体を次に水又は他の可溶化剤に溶解又は再懸濁した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ粉末複合体を遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることによりＭ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリンにＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより同様に調製してよい。表１に示す結果は、約８１．５％のＨＰ−β−ＣＤ及び１８．５％のＭ４ＮからなるＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎ懸濁液の凍結乾燥後にＨＰ−β−ＣＤ／Ｍ４Ｎの粉末複合体が得られたことを示している。
【０２２５】
ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ中、約１５０ｍｇ／ｇ（ｗ／ｗ）の濃度のＭ４Ｎの凍結乾燥粉末４００ｍｇを以下の通り調製した。上述の通り調製した、約１ｍＬの５０％ＨＰ−β−ＣＤ／０．５％ＨＰＭＣ溶液を、１．５ｍＬ容量のポリプロピレン試験管に添加した。約６０ｍｇのＭ４Ｎを、ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ懸濁液の入ったポリプロピレン試験管に添加し、１分間回転混合することによりＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を調製した。ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を、２４時間−２０℃で凍結した。次にＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液を約５時間６０℃の真空下に１４００ｒｐｍで遠心分離し、懸濁液から水を全て除去した。ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ複合体の乾燥粉末は約４００ｍｇの重量であった。このＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ粉末複合体を、次に水又は他の可溶化剤に溶解又は再懸濁した。最終Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ粉末複合体を遮光下に室温で保存した。この方法をスケールアップ又はダウンすることにより、Ｍ４Ｎの所望の容量又は濃度を得てよい。他のシクロデキストリン／セルロース溶液中にＭ４Ｎを含有する製剤は、例えば、上述の方法におけるＨＰ−β−ＣＤを他のシクロデキストリンと置き換えることにより、又は、ＨＰＭＣを他の修飾セルロースと置き換えることにより、同様に調製してよい。表１９に示す結果は、約８４％のＨＰ−β−ＣＤ、１％のＨＰＭＣ及び１５％のＭ４ＮからなるＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎ懸濁液の凍結乾燥後にＨＰ−β−ＣＤ／ＨＰＭＣ／Ｍ４Ｎの粉末複合体が得られたことを示している。
【０２２６】
実施例１０．Ｍ４Ｎの送達のためのＩＶ管材の試験
【０２２７】
本実験において、適合性及びＭ４Ｎの静脈内送達の最適化について種々の管材を試験した。適合性に関する試験は、目視による検査及びＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析に基づいた。
【０２２８】
目視による検査は、以下の通り行った。試験すべき製剤（「製剤材料」）約５ｍＬを長さ約２０ｃｍの管材に通した。製剤材料を室温（２５℃）で約２４時間管材内部に保持した。次に、製剤材料を、数回（例えば、約５回）管材を循環させ、そしてビーカー又は採取試験管内に収集した。製剤材料は沈殿又は粒子が存在しないか慎重に検査し、その際例えばビーカー又は採取試験管を白色の背景、次いで暗色の背景に対向させて保持した。
【０２２９】
ＨＰＬＣ分析を用いた適合性の試験は、試験すべき管材、時間の長さ及び管材の目的に応じて方法が変動した。本試験では異なる管材を通過する循環の前後における溶液中のＭ４Ｎの量を測定した。
【０２３０】
適合性を測定するための閾値は、９０％試験純度、即ち、管材との相互作用の後、及び試験の終了の後に、溶液中にＭ４Ｎの約９０％が残存していた場合に材料は適合性とみなした。９０％閾値未満の何れの量も不適合な管材とみなした。結果は表２４に示す。
【０２３１】
本試験はＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）及びフルオロエラストマー（Barnant Company, Barrington, IL, USA）、ポリプロピレン（Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA）、ＦＥＰ（フッ化エチレンプロピレン）（Saint-Gobain, Mickleton, NJ, USA）、ＰＴＦＥ（Cole-Parmer）、ポリエチレン（Intramedic, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA）及び白金硬化シリコーン（小型）（Cole-Parmer）が、全て本明細書に記載した製剤中のＭ４Ｎの送達に適合していることを示している。
【０２３２】
【表２４】
【０２３３】
実施例１１．医薬組成物の膀胱内投与
【０２３４】
上記した医薬組成物の１つ以上を例えば６週間毎週８００ｍｇの用量において例えば膀胱のインサイチュの癌治療の為に、膀胱内に投与することができる。組成物はＡＰＩ、例えばＮＤＧＡ化合物、例えばＭ４Ｎを含有する。ＡＰＩ、例えばＭ４Ｎは、５ｍＬバイアル当たり２００ｍｇで組成物中に存在し、そして、２℃〜−８℃（３６°Ｆ〜４６°Ｆ）で冷蔵庫内に保存される。組成物の対象への投与の前に、バイアルを冷蔵庫から取り出し、加熱することなく室温に戻す。組成物は、０．９％規定濃度食塩水注射用（Normal Saline Injection）ＵＳＰ ５５ｍＬに８００ｍｇ（２０ｍＬ）を添加することにより希釈してよい。膀胱の洗浄はＡＰＩの膀胱内投与（上述の通り希釈した場合には総容量７５ｍＬ）により実施し、ＡＰＩを２時間貯留させ、次に排出（void out）する。適切な適合性のある管材を上述の通り使用する。
【０２３５】
医師又は患者は、膀胱が傷害、炎症又は穿孔を有する場合には、粘膜の一体性の消失により全身吸収が起こる場合があるため、ＡＰＩを含有する組成物を投与しないように指導される。重度の過敏性膀胱症状を有する患者においては、ＡＰＩが導入及び貯留の時間中に過敏性膀胱の症状を誘発する場合があるため、化合物を慎重に使用しなければならない。患者は、２４時間は尿が赤又はピンクの色を帯びる場合があることを通知される。
【０２３６】
実施例１２．健康男性被験者８人における１４Ｃ−標識Ｍ４Ｎのヒト第０相３元クロスオーバーマイクロドース薬物動態試験
【０２３７】
本試験は摂食及び絶食条件下における単回経口投薬又は単回静脈内投薬（表２５においてそれぞれ用法Ａ−Ｃ）の何れかとしての治療量未満の用量としてヒトに投与された場合のＭ４Ｎの吸収量を評価するために設計された。試験は健康男性被験者の目標集団における３期クロスオーバー試験設計とし、投薬の間の少なくとも7日間の最小期間により各々が分離された約３５時間よりなる３つの試験期間で構成されていた。各試験期間の過程の間、薬物動態用の血液試料を投薬後の特定の時点において採取し、尿は所定の時間間隔で採取した。被験者は投薬後２４時間において試験の特定の処置を完了した後に、退院させた。
【０２３８】
本試験においてＭ４Ｎは１００μｇの量でヒトに投与した。Ｍ４Ｎは１４Ｃ（１００μｇ当たり３．３ｋＢｑ）で僅かに標識し、健康ボランティアに投与した。Ｍ４Ｎの各経口用量はサイズ０のゼラチンカプセル中、０．１ｍｇの１４Ｃ標識したＭ４Ｎ及び３７６．８ｍｇのグリセロールモノオレイン酸からなるものとした。Ｍ４Ｎの単回静脈内注入は瞬時大量注入法の為に１ｍＬに水で希釈した０．１ｍｇ／ｍＬの１４Ｃ標識したＭ４Ｎ、３０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧからなるものとした。各被験者から血液及び尿を採取した後、試料は１４Ｃ含有量について加速器質量分析装置（ＡＭＳ）を用いて分析することによりＴｍａｘにおけるＭ４Ｎの最高濃度（Ｃｍａｘ）、試験の採血時点まで（ＡＵＣ０−ｔ）及び全て（ＡＵＣ０−∞）におけるＭ４Ｎの全ての吸収を表す全曲線下面積（ＡＵＣ）、各試料の終末相半減期（Ｔ１／２）、及び、Ｍ４ＮのＩＶ投薬と比較した場合のＭ４Ｎの経口投与の相対的及び全ての生体利用能（Ｆｒｅｌ及びＦ）を求めた。１４Ｃに関する薬物動態パラメーターの平均±ＳＤ値を表２５に示す。Ｍ４Ｎのベースライン水準は投薬間の期間後に対象に残存するＭ４Ｎに関して補正することにより、何れかの後の投薬に対してＭ４Ｎの水準が誇張されないようにした。
【０２３９】
【表２５】
【０２４０】
経口用量に関しては、総１４Ｃに関するＣｍａｘ値は高脂肪朝食後の１４Ｃ標識Ｍ４Ｎ１００μｇ経口投与後（Ｃｍａｘ＝５．９４±１．３３ｐｍｏｌ／Ｌ）のほうが一夜絶食後の経口投与後（Ｃｍａｘ＝９．２９±１．４０ｐｍｏｌ／Ｌ）よりも低値であった。Ｔｍａｘは絶食よりも摂食においてより遅延した。摂食投与被験者においては、Ｔｍａｘ、即ちＣｍａｘの時間は高度に変動性であり、投薬後１．５〜２４時間の範囲であり、そして絶食被験者においては、Ｔｍａｘは一般的に投薬後１時間に起こっていた（範囲０．５０〜２．００時間）。ＡＵＣ０−ｔ値は絶食被験者よりも摂食投与被験者において一般的に低値であった。
【０２４１】
静脈内投薬後には、最高濃度（Ｃｍａｘ＝１０．３１±１．７７ｐｍｏｌ／Ｌ）が１０被験者中８例において初回サンプリング時（投薬後０．０８時間）に予測どおり観察された。２被験者においては、Ｔｍａｘは投薬後０．１７時間であった。総１４Ｃ血漿中濃度に関するＡＵＣ０−ｔ値は、摂食投与被験者における単回経口投薬後のほうが静脈内投薬後よりも僅かに低値であった。逆に、相当するＡＵＣ０−ｔ値は絶食被験者における単回経口投薬後のほうが静脈内投与後よりも僅かに高値であった。
【０２４２】
試験製剤は経口及び静脈内投与の両方において十分耐容性が示された。重篤又は重度な有害事象は観察されず、そして何れの対象も試験投与に関連する有害事象による中断はなかった。生命徴候又はＥＣＧにおいて臨床上有意な変化は観察されなかった。
【０２４３】
本試験に関する結論において、Ｍ４Ｎの見かけの吸収は摂食及び絶食状態において経口投与後に極めて高値であった。摂食の存在下においては、吸収の速度及び程度は絶食状態と比較して低値であり、Ｃｍａｘ時の時間は、摂食時の投与において延長された。これらの結論は１４Ｃ標識Ｍ４Ｎの経口投与用量が吸収前に分解されないという推定に基づいて行われている。
【０２４４】
実施例１３．水溶性有機溶媒中のＭ４Ｎの溶解性に関する追加試験
【０２４５】
表２６に示した水溶性有機溶媒の組合せ中のＭ４Ｎの溶解性を４８時間評価した。室温での２、２４及び４８時間のインキュベーション後、逆相ＨＰＬＣ（「ＲＰ−ＨＰＬＣ」）により試料を分析することによりＭ４Ｎの溶解性を定量した。Ｍ４Ｎ試料を調製するために、アセトンに溶解した２００μＬの１００ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎを１．５ｍＬのポリプロピレンマイクロ試験管に投入した。試料が完全に乾燥するまで４８時間溶媒を室温で蒸発させた。
【０２４６】
水混和性の有機溶媒の製剤を１５ｍＬのポリプロピレン遠心管中に調製した。各製剤１０ｍＬを調整した。各溶媒は２５℃におけるその対応する密度を用いた重量に基づいて添加した。短時間混合後、各製剤を０．４５μｍ界面活性剤非含有酢酸セルロース（「ＳＦＣＡ」）フィルターを介して濾過し、新しい１５ｍＬ試験管内に回収した。製剤は使用時まで室温で保存した。
【０２４７】
各製剤の組合せ（表２６、Ｂｅｎｚ＝ベンジルアルコール；Ｃｒｅｍ＝Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ；ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド；Ｔ８０＝Ｔｗｅｅｎ ８０）４００μＬをマイクロ試験管に添加し、５０ｍｇ／ＭＬＭ４Ｎの最高溶解性とした。Ｍ４Ｎ溶解性は室温での２、２４および４８時間インキュベーション時にＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した。各時点において、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離することにより存在する固体のＭ４Ｎをペレット化した。表２６に示す通り、試験した製剤条件の半分超が１０ｍｇ／ＭＬ超の濃度までＭ４Ｎを可溶化することができた。２及び４８時間におけるグリセロール中のＭ４Ｎの溶解性は検出不可能であった。
【０２４８】
【表２６】
【０２４９】
実施例１４．水性溶液中のＭ４Ｎの溶解性
【０２５０】
ヒドロキシプロピルＨＰ−β−ＣＤ又はスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（ＳＥ−β−ＣＤ）（Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標：以下、省略するが「Ｃａｐｔｉｓｏｌ」は登録商標である。）、CyDex, Inc., Lenexa, KS, USA）の何れかを含有する水溶液中のＭ４Ｎの溶解の溶解性を実施例１４における上述した室温において最大４８時間評価した。１０検体のＨＰ−β−ＣＤ及びＳＥ−β−ＣＤの５０％溶液を容積に対する重量基準（weight to volume basis）で調製した。試料中で使用するＭ４Ｎは、実施例１４に記載する通り調製した。１．０ｇ〜５．０ｇの各化合物を、分析用天秤（OHAUS Analytical Plus Balance）上の１０ｍＬのメスフラスコに計量投入した。各試料を注射用水（ＷＦＩ）で１０ｍＬに定容（q.s.）した。４０℃で１時間インキュベートした後、調製物を０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターで濾過して新しい１５ｍＬ試験管に採取した。調製物は使用時まで室温で保存した。
【０２５１】
表２７に示す通り、ＷＦＩ、０．９％の食塩水、５％のブドウ糖（ＤＳＷ）中のＭ４Ｎの溶解性は、本試験の過程を通して、ＲＰ−ＨＰＬＣの定量限界未満であった。ＨＰ−β−ＣＤ及びＣａｐｔｉｓｏｌの濃度及び時間の関数として増大したＭ４Ｎ溶解性が注目される。
【０２５２】
【表２７】
【０２５３】
水混和性溶媒を用いた２０種超の製剤条件は、１０ｍｇ／ｍＬを超える（greater than 10mg/mL）濃度にまでＭ４Ｎを可溶化することができた。ＷＦＩ、０．９％食塩水、Ｄ５Ｗ中のＭ４Ｎの溶解性は、ＲＰ−ＨＰＬＣ法の検出限界未満であった。Ｍ４Ｎの溶解性はＨＰ−β−ＣＤ及びＣａｐｔｉｓｏｌの濃度及び時間の関数として増大する。
【０２５４】
実施例１５．ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０２５５】
ＨＰ−β−ＣＤの種々の濃度におけるＭ４Ｎの水溶解性をＨｉｇｕｃｈｉ及びＣｏｎｎｏｒｓ（１９６５年）により報告された方法により評価した。つまり、Ｍ４Ｎを正確に計量し、その水溶性を超過した量において添加し、４８時間漸増濃度（０〜３５０ｍｍｏｌ／Ｌ）のＨＰ−β−ＣＤの水溶液と共に室温で穏やかに回転（〜１２ｒｐｍ）させた。次にＭ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ溶液を０．４５μｍＳＦＣＡフィルターで濾過し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した。
【０２５６】
大部分の薬剤／シクロデキストリン複合体は包接複合体であると考えられたが、シクロデキストリンは、非包接複合体及びミセル様構造を介して薬剤を溶解できる複合体凝集塊を形成することも知られている。位相−溶解性のプロファイルは、包接複合体の形成を確認するものではなく、シクロデキストリンの漸増濃度が薬剤の溶解性にどのように影響するかを説明するのみであった。Ｍ４Ｎ／ＨＰ−β−ＣＤ複合体の形成は、非直線的であったが、化学量論的な（並びに安定性定数の）厳密な測定は、本実施例の実験では検討しなかったものの、ＮＭＲ又は電位差測定のような他の手段により測定可能である。
【０２５７】
実施例１６．ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ ３００緩衝溶液中におけるＭ４Ｎの溶解性
【０２５８】
１５ｍＭ緩衝溶液中における１０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ（７５：２５の、４０％のＨＰ−β−ＣＤ：４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ ＰＥＧ ３００の比で調製）の安定性を６０℃でのインキュベートの後に評価した。
【０２５９】
ＨＰ−β−ＣＤの緩衝４０％溶液を、容積に対する重量基準で調製した。試料中で使用するＭ４Ｎは実施例１４に記載する通り調製した。２．０ｇのＨＰ−β−ＣＤを、分析用天秤（OHAUS Analytical Plus Balance）上の５ｍＬのメスフラスコに計量投入した。１００ｍＭの緩衝溶液の１ｍＬを、各フラスコに添加した。各試料を、ＷＦＩで５ｍＬに定容した。４０℃で１時間インキュベートした後、調製物を、０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターで濾過して新しい１５ｍＬの試験管に採取した。調製物は使用時まで室温で保存した。
【０２６０】
７５０μＬの４０％ＨＰ−β−ＣＤ緩衝溶液を、１．５ｍＬのポリプロピレン マイクロチューブに投入した。２５０μＬの４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ ＰＥＧ ３００を、各マイクロチューブに添加することにより、Ｍ４Ｎの１０ｍｇ／ｍＬの溶解性を可能とした。試料チューブを穏やかに反転させた後、各溶液のｐＨをＯｒｉｏｎ、４２０Ａ型ｐＨメーター（Model 420A pH meter）を用いて測定した。最初のアリコットを、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析用に採取した。次に、被験試料を、Precision ６０℃ インキュベーター内に投入した。Ｍ４Ｎ安定性は、ＲＰ−ＨＰＬＣで評価した。各時点において、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離することにより、固体Ｍ４Ｎをペレット化した。
【０２６１】
表２８に示す通り、種々のＭ４Ｎ溶液の濃度の僅かな低下が、６０℃での１４日インキュベーション後に観察された。ＲＰ−ＨＰＬＣデータは、Ｍ４Ｎの濃度の低下の程度に相応する試料不純物の増大を明らかにしなかった。しかしながら、ｐＨ依存性の変化が、Ｍ４Ｎ不純物で観察されたが、これらの不純物は総ピーク面積の０．１％未満を構成するのみであった。インキュベーション期間中の見かけの試料のｐＨの変化が観察された場合でもそれは僅かであった（表２８）。
【０２６２】
【表２８】
【０２６３】
Ｍ４Ｎの回収量の損失によって示される、見かけの試料ｐＨ又は緩衝液とは無関係の均一な安定性低下が６０℃での１４日インキュベーション後に観察された。
【０２６４】
実施例１７．１１〜１４ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤ溶液中におけるＭ４Ｎの安定性
【０２６５】
製造仕様書を裏付けるために、本試験では、種々のＭ４Ｎの標的濃度におけるＰＥＧ ３００／ＨＰ−β−ＣＤの組み合わせの２４時間室温安定性を調べた。Ｍ４Ｎ保存液の保存液試料を、以下の通り６０℃で３３〜５６ｍｇ／ｍＬの薬剤濃度において、１００％ＰＥＧ ３００中に調製した。
【０２６６】
６０℃で少なくとも２時間インキュベートした後、Ｍ４Ｎ大量（bulk）製剤を、実施例１４及び１７に記載の手順を用いてＰＥＧ ３００中に、３３、４４、４８、５２、５５及び５６ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｗ）の濃度に可溶化した。４４ｍｇ／ｍＬ超（above 44 mg/mL）のＭ４Ｎの完全な可溶化のためには激しく回転混合することが必要であった。Ｍ４Ｎ保存液を０．４５μｍのＳＦＣＡフィルターを通して濾過し、調製３０分以内に使用した。別個に、４０％（ｗ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤの溶液を滅菌ＷＦＩ中で調整し、濾過した。４０％ＨＰ−β−ＣＤ保存液及びＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００保存液の組合せを、１．５ｍＬのポリプロピレンマイクロチューブ内で混合した。Ｍ４Ｎの安定性は、室温での２及び２４時間のインキュベート時にＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した。
【０２６７】
Ｍ４Ｎ保存液の必要量を４０％ＨＰ−β−ＣＤに添加することにより表２９に示す薬剤及び賦形剤の最終濃度とした。試料を室温で穏やかに（〜１２ｒｐｍ）回転させた。インキュベートの２及び２４時間時に、試料を１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、５０μＬのアプリコットをＲＰ−ＨＰＬＣ分析用に取り除いた。標的Ｍ４Ｎ又は製剤とは関係なく、２４時間インキュベーション後は溶解性における変化が観察された場合でもそれは僅かであった（表２９）。
【０２６８】
【表２９】
【０２６９】
２５％のＰＥＧ ３００及び３０％のＨＰ−β−ＣＤの最終濃度に製剤された１１〜１４ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎを含有する被験試料は、室温で２４時間のインキュベーション後、安定であった。
【０２７０】
実施例１８．４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の安定性
【０２７１】
１００％のＰＥＧ ３００に溶解した４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの安定性を、３０℃、４５℃及び６０℃における２４時間までのインキュベーションで評価した。ＰＥＧ ３００中の４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎの保存液は、実施例１８に記載の手順に従って６０℃で調製した。その後、アプリコットを取り除いて適温でインキュベートした。インキュベーションの全過程中、４５０ｒｐｍで試料を回転させた。全体を通じて目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣデータの収集を行った。表３０に示す通り、３０℃で６時間のインキュベーション後、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００製剤において微小な結晶が観察され、２４時間後にはより顕著となった。結晶の形成には、可溶性Ｍ４Ｎの消失が伴っていた（表３１）。４５℃及び６０℃でインキュベートした４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００の試料は、目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣ分析で試験したところ２４時間インキュベートベーション後に安定であった（表３０及び３１）。何れのインキュベーション温度においても不純物ピークの量又はタイプで変化は観察されなかった。
【０２７２】
【表３０】
【０２７３】
【表３１】
【０２７４】
３０℃で６時間のインキュベーション後、４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００製剤において微小結晶が観察された。２４時間後、より多くの結晶が観察され、そして、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析により測定した場合に、＞５％の可溶性Ｍ４Ｎが消失していた。
【０２７５】
４５℃及び６０℃でインキュベートした４０ｍｇ／ｍＬのＭ４Ｎ／ＰＥＧ ３００試料は目視観察及びＲＰ−ＨＰＬＣにより評価した場合、２４時間のインキュベーション後に安定であった。
【０２７６】
上記した実施形態はその広範な発明上の概念から逸脱することなく変更できることは当業者の知る通りである。従って、本発明は開示した特定の実施形態に限定されず、添付する請求項により定義される本発明の精神及び範囲内の変更を包含することを意図している。
【０２７７】
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【図面の簡単な説明】
【０２７８】
【図１Ａ】Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果を示し、Ｍ４Ｎ処置の非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比を示すグラフであり、ここでＭ４ＮはＤＭＳＯ製剤中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供された。
【図１Ｂ】Ｍ４Ｎ処置の後にＣ−３３Ａ細胞ライン及びＨｅＬａ細胞ラインについて実施した細胞増殖試験の結果を示し、Ｍ４Ｎ処置非存在下において存在した細胞の数を超えたＭ４Ｎ処置後に存在した細胞の数の比を示すグラフであり、ここでＭ４Ｎは、ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤（「ＣＰＥ」製剤）中０μＭ〜８０μＭの範囲の量で提供した。
【図２Ａ】ＤＭＳＯ製剤中におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定を示すグラフであり、Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【図２Ｂ】ＨＰ−β−ＣＤ／ＰＥＧ製剤中におけるＭ４Ｎの種々の濃度の非存在下又は存在下におけるＣ−３３Ａ細胞及びＨｅＬａ細胞に関する死細胞の比率に基づいた細胞死の測定を示すグラフであり、Ｍ４Ｎ濃度は０μＭ〜８０μＭの範囲とした。
【図３Ａ】３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用を示すグラフであり、非対数目盛を用いて濃度を示す。
【図３Ｂ】３０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（以下「ＨＰ−β−ＣＤ」と称する）及び２５％（ｖ／ｖ）ＰＥＧ ３００を包含する製剤中のＭ４Ｎ、のイヌへの単回ＩＶ投与後の第１日目中の経時的なイヌ血清中濃度の作用を示すグラフであり、対数目盛を用いて濃度を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性な薬学的成分及び製薬上許容しうる担体を含む動物への経口投与のための組成物であって、活性な薬学的成分がカテコールブタンを含み、そして担体が（ａ）水溶性有機溶媒、ただし水溶性有機溶媒がプロピレングリコールである場合は、プロピレングリコールは白色ワセリン非存在下、キサンタンガム非存在下、及び、グリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下のものであり、水溶性有機溶媒がポリエチレングリコールである場合は、ポリエチレングリコールはアスコルビン酸又はブチル化ヒドロキシトルエンの非存在下に存在し、そして、ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール４００である場合は、ポリエチレングリコール４００はポリエチレングリコール８０００の非存在下に存在するもの；（ｂ）シクロデキストリン；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、ただし界面活性剤が非イオン性界面活性剤の場合は非イオン性界面活性剤がキサンタンガムの非存在下に存在するもの；（ｄ）変性セルロース；（ｅ）ヒマシ油以外の水不溶性脂質、及び担体（ａ）〜（ｅ）の何れかの組合せ、からなる群から選択される可溶化剤及び賦形剤の少なくとも１つを含む、組成物。
【請求項２】
動物に静脈内注射される請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
約０．１ｍｇ〜約２００ｍｇの前記活性な薬学的成分を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ又は約２００ｍｇの前記活性な薬学的薬剤を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記活性な薬学的成分が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記カテコールブタンが、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ又は約１７５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性有機溶媒が、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチルアルコール、ベンジルアルコール及びジメチルアセトアミドからなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記担体が、ポリエチレングリコールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸である請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ポリエチレングリコールが、約５％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ３００である請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＰＥＧ ３００が、約１０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）又は約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ４００である請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＰＥＧ ４００が、約１０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）又は約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸である請求項８に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＰＥＧ ４００モノラウリン酸が、約２０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記担体が、未修飾シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリンを含む請求項１又は８に記載の組成物。
【請求項１８】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群から選択される請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記修飾シクロデキストリンが、約５％（ｗ／ｖ）〜約８０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記修飾シクロデキストリンが、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、約３５％（ｗ／ｖ）、約４０％（ｗ／ｖ）又は約５０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記担体が、プロピレングリコールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記担体が、グリセロールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記担体が、ポリソルベート、コハク酸ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００、エチレンオキシドとヒマシ油の３５：１モル比の反応生成物からなる群から選択される界面活性剤を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記界面活性剤が、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０からなる群から選択される請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記界面活性剤が、約５％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記担体が、修飾されたセルロースを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記修飾されたセルロースが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースからなる群から選択される請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記修飾されたセルロースが、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
前記担体が、水不溶性脂質を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記水不溶性脂質が、脂肪乳液を含む請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記脂肪乳液が、約１０％（ｗ／ｖ）〜約３０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記脂肪乳液が、約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記水不溶性脂質が、油である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
前記油が、コーン油、オリーブ油、ペパーミント油、ダイズ油、ゴマ油、ミネラルオイル及びグリセロールからなる群から選択される少なくとも１つの油である請求項２８に記載の組成物。
【請求項３５】
前記水不溶性脂質が、エステル化脂肪酸である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記カテコールブタンが、下記式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して−Ｈ、低級アルキル、低級アシル、アルキレンを示すか；又は、−Ｒ１Ｏ及び−Ｒ２Ｏは各々独立して未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し；そしてＲ７、Ｒ８及びＲ９は、各々独立して−Ｈ、−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示すか、又は何れかの２つの隣接する基は共にアルキレンジオキシであってよい］、
に示す構造を有する請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記カテコールブタンが、ＮＤＧＡ化合物である請求項１に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ＮＤＧＡ化合物が、下記式（ＩＩ）：
【化２】
［式中、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、各々独立して−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ又は未置換又は置換されたアミノ酸残基又は製薬上許容しうるその塩を示し；そして、Ｒ１８及びＲ１９は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示す］、
に示す構造を有する請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アルコキシを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−ＯＣＨ３を示す請求項３８記載の組成物。
【請求項４１】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アシルオキシを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ３を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４３】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４４】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立してＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸残基を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４５】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基の塩を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４６】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基の塩化物塩を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４７】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し、そして、置換されたアミノ酸残基又は塩が、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−である請求項３８に記載の組成物。
【請求項４８】
前記Ｒ１８及びＲ１９が、各々独立して低級アルキルを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４９】
前記Ｒ１８及びＲ１９が、各々独立して−ＣＨ３を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々同時に−ＯＨでない請求項３８に記載の組成物。
【請求項５１】
前記ＮＤＧＡ化合物がＮＤＧＡのメチル化誘導体である請求項３７に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ＮＤＧＡ化合物が、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）、トリ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ３Ｎ）、ジ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ２Ｎ）及びモノ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ１Ｎ）からなる群から選択される請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記活性な薬学的成分が、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡである請求項１に記載の組成物。
【請求項５４】
室温又は４℃において、１日より長く安定である請求項１に記載の組成物。
【請求項５５】
室温又は４℃において、３日より長く安定である請求項１に記載の組成物。
【請求項５６】
室温又は４℃において、７日より長く安定である請求項１記載の組成物。
【請求項５７】
（ａ）請求項１に記載の組成物を準備すること、及び（ｂ）前記組成物を対象に注射することにより組成物を投与することを含む前記対象における疾患の治療方法であって、前記組成物が活性な薬学的成分の有効量を含む、方法。
【請求項５８】
前記組成物を非経口投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
静脈内、動脈内、及び腹腔内からなる群から選択される経路により前記組成物を投与する請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物を静脈内投与する請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記疾患が、増殖性疾患である請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記増殖性疾患が、癌である請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記増殖性疾患が、乾癬である請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記疾患が、高血圧である請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
前記疾患が、肥満である請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
前記疾患が、糖尿病である請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
前記疾患が、中枢神経系疾患及び神経変性疾患からなる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項６８】
前記疾患が、疼痛である請求項５７に記載の方法。
【請求項６９】
前記疾患が、アルツハイマー病、認知症、筋萎縮性側索硬化症、及びパーキンソン病なる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項７０】
前記疾患が、卒中である請求項５７に記載の方法。
【請求項７１】
前記疾患が、炎症性疾患である請求項５７に記載の方法。
【請求項７２】
前記炎症性疾患が、慢性関節リューマチ、骨関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患及び多発性硬化症からなる群から選択される請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記疾患が、前悪性新生物形成、及び形成異常からなる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項７４】
前記疾患が、上皮内新生物形成である請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記疾患が、感染症である請求項５７に記載の方法。
【請求項７６】
前記感染症が、ウイルス感染症である請求項５７に記載の方法。
【請求項７７】
前記ウイルスが、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＢＶ、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス又はＪＣウイルスからなる群から選択される請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記組成物を、前記対象のｋｇ体重当たりの前記活性な薬学的成分を約１０ｍｇから、前記対象のｋｇ体重当たりの前記活性な薬学的成分を約６００ｍｇの用量で投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項７９】
前記組成物を週当たり一回以上投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項８０】
前記組成物を月当たり一回以上投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項８１】
請求項１に記載の組成物及びその使用のための説明書を含む疾患の治療のためのキット。
【請求項１】
活性な薬学的成分及び製薬上許容しうる担体を含む動物への経口投与のための組成物であって、活性な薬学的成分がカテコールブタンを含み、そして担体が（ａ）水溶性有機溶媒、ただし水溶性有機溶媒がプロピレングリコールである場合は、プロピレングリコールは白色ワセリン非存在下、キサンタンガム非存在下、及び、グリセリン又はグリシンの少なくとも１つの非存在下のものであり、水溶性有機溶媒がポリエチレングリコールである場合は、ポリエチレングリコールはアスコルビン酸又はブチル化ヒドロキシトルエンの非存在下に存在し、そして、ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール４００である場合は、ポリエチレングリコール４００はポリエチレングリコール８０００の非存在下に存在するもの；（ｂ）シクロデキストリン；（ｃ）イオン性、非イオン性又は両親媒性の界面活性剤、ただし界面活性剤が非イオン性界面活性剤の場合は非イオン性界面活性剤がキサンタンガムの非存在下に存在するもの；（ｄ）変性セルロース；（ｅ）ヒマシ油以外の水不溶性脂質、及び担体（ａ）〜（ｅ）の何れかの組合せ、からなる群から選択される可溶化剤及び賦形剤の少なくとも１つを含む、組成物。
【請求項２】
動物に静脈内注射される請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
約０．１ｍｇ〜約２００ｍｇの前記活性な薬学的成分を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ又は約２００ｍｇの前記活性な薬学的薬剤を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記活性な薬学的成分が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記カテコールブタンが、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ又は約１７５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性有機溶媒が、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチルアルコール、ベンジルアルコール及びジメチルアセトアミドからなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記担体が、ポリエチレングリコールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００又はＰＥＧ ４００モノラウリン酸である請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ポリエチレングリコールが、約５％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ３００である請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＰＥＧ ３００が、約１０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）又は約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ４００である請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＰＥＧ ４００が、約１０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）又は約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリエチレングリコールが、ＰＥＧ ４００モノラウリン酸である請求項８に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＰＥＧ ４００モノラウリン酸が、約２０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記担体が、未修飾シクロデキストリン又は修飾シクロデキストリンを含む請求項１又は８に記載の組成物。
【請求項１８】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群から選択される請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記修飾シクロデキストリンが、約５％（ｗ／ｖ）〜約８０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記修飾シクロデキストリンが、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、約３５％（ｗ／ｖ）、約４０％（ｗ／ｖ）又は約５０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記担体が、プロピレングリコールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記担体が、グリセロールを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記担体が、ポリソルベート、コハク酸ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００、エチレンオキシドとヒマシ油の３５：１モル比の反応生成物からなる群から選択される界面活性剤を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記界面活性剤が、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０からなる群から選択される請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記界面活性剤が、約５％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記担体が、修飾されたセルロースを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記修飾されたセルロースが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースからなる群から選択される請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記修飾されたセルロースが、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
前記担体が、水不溶性脂質を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記水不溶性脂質が、脂肪乳液を含む請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記脂肪乳液が、約１０％（ｗ／ｖ）〜約３０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記脂肪乳液が、約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記水不溶性脂質が、油である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
前記油が、コーン油、オリーブ油、ペパーミント油、ダイズ油、ゴマ油、ミネラルオイル及びグリセロールからなる群から選択される少なくとも１つの油である請求項２８に記載の組成物。
【請求項３５】
前記水不溶性脂質が、エステル化脂肪酸である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記カテコールブタンが、下記式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して−Ｈ、低級アルキル、低級アシル、アルキレンを示すか；又は、−Ｒ１Ｏ及び−Ｒ２Ｏは各々独立して未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示し；そしてＲ７、Ｒ８及びＲ９は、各々独立して−Ｈ、−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、未置換又は置換されたアミノ酸残基又はその塩を示すか、又は何れかの２つの隣接する基は共にアルキレンジオキシであってよい］、
に示す構造を有する請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記カテコールブタンが、ＮＤＧＡ化合物である請求項１に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ＮＤＧＡ化合物が、下記式（ＩＩ）：
【化２】
［式中、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、各々独立して−ＯＨ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ又は未置換又は置換されたアミノ酸残基又は製薬上許容しうるその塩を示し；そして、Ｒ１８及びＲ１９は、各々独立して−Ｈ又は低級アルキルを示す］、
に示す構造を有する請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アルコキシを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−ＯＣＨ３を示す請求項３８記載の組成物。
【請求項４１】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して低級アシルオキシを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ３を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４３】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４４】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立してＮ，Ｎ−ジメチル置換アミノ酸残基を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４５】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基の塩を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４６】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基の塩化物塩を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４７】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々独立して置換されたアミノ酸残基又はその塩を示し、そして、置換されたアミノ酸残基又は塩が、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２・Ｃｌ−である請求項３８に記載の組成物。
【請求項４８】
前記Ｒ１８及びＲ１９が、各々独立して低級アルキルを示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項４９】
前記Ｒ１８及びＲ１９が、各々独立して−ＣＨ３を示す請求項３８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７が、各々同時に−ＯＨでない請求項３８に記載の組成物。
【請求項５１】
前記ＮＤＧＡ化合物がＮＤＧＡのメチル化誘導体である請求項３７に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ＮＤＧＡ化合物が、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ４Ｎ）、トリ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ３Ｎ）、ジ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ２Ｎ）及びモノ−Ｏ−メチルＮＤＧＡ（Ｍ１Ｎ）からなる群から選択される請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記活性な薬学的成分が、テトラ−Ｏ−メチルＮＤＧＡである請求項１に記載の組成物。
【請求項５４】
室温又は４℃において、１日より長く安定である請求項１に記載の組成物。
【請求項５５】
室温又は４℃において、３日より長く安定である請求項１に記載の組成物。
【請求項５６】
室温又は４℃において、７日より長く安定である請求項１記載の組成物。
【請求項５７】
（ａ）請求項１に記載の組成物を準備すること、及び（ｂ）前記組成物を対象に注射することにより組成物を投与することを含む前記対象における疾患の治療方法であって、前記組成物が活性な薬学的成分の有効量を含む、方法。
【請求項５８】
前記組成物を非経口投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
静脈内、動脈内、及び腹腔内からなる群から選択される経路により前記組成物を投与する請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物を静脈内投与する請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記疾患が、増殖性疾患である請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記増殖性疾患が、癌である請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記増殖性疾患が、乾癬である請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記疾患が、高血圧である請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
前記疾患が、肥満である請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
前記疾患が、糖尿病である請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
前記疾患が、中枢神経系疾患及び神経変性疾患からなる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項６８】
前記疾患が、疼痛である請求項５７に記載の方法。
【請求項６９】
前記疾患が、アルツハイマー病、認知症、筋萎縮性側索硬化症、及びパーキンソン病なる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項７０】
前記疾患が、卒中である請求項５７に記載の方法。
【請求項７１】
前記疾患が、炎症性疾患である請求項５７に記載の方法。
【請求項７２】
前記炎症性疾患が、慢性関節リューマチ、骨関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患及び多発性硬化症からなる群から選択される請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記疾患が、前悪性新生物形成、及び形成異常からなる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項７４】
前記疾患が、上皮内新生物形成である請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記疾患が、感染症である請求項５７に記載の方法。
【請求項７６】
前記感染症が、ウイルス感染症である請求項５７に記載の方法。
【請求項７７】
前記ウイルスが、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＢＶ、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス又はＪＣウイルスからなる群から選択される請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記組成物を、前記対象のｋｇ体重当たりの前記活性な薬学的成分を約１０ｍｇから、前記対象のｋｇ体重当たりの前記活性な薬学的成分を約６００ｍｇの用量で投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項７９】
前記組成物を週当たり一回以上投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項８０】
前記組成物を月当たり一回以上投与する請求項５７に記載の方法。
【請求項８１】
請求項１に記載の組成物及びその使用のための説明書を含む疾患の治療のためのキット。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【公表番号】特表２００８−５２８６１１（Ｐ２００８−５２８６１１Ａ）
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５３２３５（Ｐ２００７−５５３２３５）
【出願日】平成１８年１月２７日（２００６．１．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００２８０７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８１３６４
【国際公開日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【出願人】（５０５４３１０６４）エリモス・ファーマスーティカルズ・エルエルシー (6)
【住所又は居所原語表記】９３０ ＭＡＩＮ ＣＡＭＰＵＳ ＤＲＩＶＥ， ＳＵＩＴＥ １００， ＲＡＬＥＩＧＨ， ＮＯＲＴＨ ＣＡＲＯＬＩＮＡ ２７６０６， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１月２７日（２００６．１．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００２８０７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８１３６４
【国際公開日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【出願人】（５０５４３１０６４）エリモス・ファーマスーティカルズ・エルエルシー (6)
【住所又は居所原語表記】９３０ ＭＡＩＮ ＣＡＭＰＵＳ ＤＲＩＶＥ， ＳＵＩＴＥ １００， ＲＡＬＥＩＧＨ， ＮＯＲＴＨ ＣＡＲＯＬＩＮＡ ２７６０６， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
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