化粧品原料用イカ軟骨精製物
【課題】増粘性と保湿性を兼ね備えた化粧品原料の提供。
【解決手段】イカ頭部軟骨から得られる、分子量が４０万以上であるコンドロイチン硫酸を含むイカ軟骨精製物。該イカ軟骨精製物は、増粘性と保湿性を兼ね備えた化粧品材料として期待できる。
【解決手段】イカ頭部軟骨から得られる、分子量が４０万以上であるコンドロイチン硫酸を含むイカ軟骨精製物。該イカ軟骨精製物は、増粘性と保湿性を兼ね備えた化粧品材料として期待できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品材料に適したイカ軟骨精製物に関し、特に増粘性と保湿性を兼ね備えたイカ軟骨精製物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在市販のコンドロイチン硫酸は、主にサメ、豚や牛軟骨から得ている。しかし、年々需要が増加している一方で、サメがワシントン条約により捕獲規制を受けつつ、豚や牛が感染症の疑いで使用が懸念されるため、今後の安定した供給は期待できない。イカは世界中で捕獲され、捕獲制限や感染症の心配はない。総水揚げは約３６０万トンあり、全魚介類の中でもトップクラスである。
【０００３】
コンドロイチン硫酸はＤ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）の２糖が反復する糖鎖に、硫酸が結合した構造を持つ。硫酸基の結合位置と数から単硫酸化コンドロイチン硫酸Ａ，Ｂ，Ｃと多硫酸化コンドロイチン硫酸Ｄ，Ｅなどに分類される。
【０００４】
イカ軟骨から単離されたコンドロイチン硫酸はＧａｌＮＡｃの４および６位に硫酸基を持つコンドロイチン硫酸Ｅをメインとしている。コンドロイチン硫酸Ｅはｉｎ ｖｉｔｒｏで種々の活性が示されている。例えば、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｂ、Ｃより強い神経突起伸長促進活性（非特許文献１）、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｄに観測されなかったヘルペス単純ウイルス感染の阻害作用（非特許文献２）が認められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｖｅｒｓｕｌｆａｔｅｄ Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｖａｒｉａｎｔｓ：Ｕｎｉｑｕｅ Ｓｕｌｆａｔｉｏｎ Ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｓｕｇａｈａｒａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０００），Ｖｏｌ．１２ Ｎｏ．６７ ３２１−４９．
【非特許文献２】Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｅ−ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｕｎｉｔ Ｉｓ ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｔｈｅ Ｖｉｒｕｓ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅｓ ｏｎ ｇｒｏ２Ｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｂｅｒｇｅｆａｌｌ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．（２００５），２８０，３２１９３−９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、化粧品材料に適したイカ軟骨精製物に関し、特に増粘性と保湿性を兼ね備えたイカ軟骨精製物に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
コンドロイチンの原料としては、本発明のイカ以外にサメ、サケ、豚、牛などが知られているが、本発明のイカ由来のコンドロイチン硫酸は分子量が極めて大きいことから、従って化粧品用の増粘剤として好適である。
【０００８】
化粧品の材料として必要な特性は数々あるが、保湿性は必要特性であり、サメ由来コンドロイチン硫酸より優れている。
【０００９】
また臭いがないことは必須条件である。本発明のイカ軟骨精製物は、８０％以上の高純度品であり、実質的に臭いがない優れた材料である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】は、美容液使用前後の肌水分の変化を示す図である。
【００１１】
【図２】は、美容液使用前後の肌油分の変化を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のコンドロイチン硫酸は、これまで資源としてほとんど用いられてこなかったアメリカオオアカイカの頭部に存在している軟骨から、多量に取れる。
【００１３】
このアメリカオオアカイカの頭部軟骨を水で洗浄し、タンパク分解酵素で分解することにより、コンドロイチン硫酸を溶解させる。
【００１４】
溶解したコンドロイチン硫酸と低分子化されたタンパク質は限外ろ過膜で分子ふるいにかけることによって、分離することができ、高純度のコンドロイチン硫酸を得ることができる。
【実施例】
【００１５】
これより本発明を以下の実施例で詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。
【実施例１】
【００１６】
アメリカオオアカイカ頭部からイカ軟骨精製物の抽出
（１）解凍、殺菌
１）アメリカオオアカイカ頭部から取り出した冷凍軟骨３４ｋｇに、水を３４Ｌ加え、９０℃に加熱し解凍、殺菌した。
２）解凍した軟骨はナイロンメッシュで分離した。
（２）プロテアーゼ消化
１）解凍した軟骨に、水を３０Ｌ加え、５０℃に加熱し、アロアーゼを３４ｇ加え、５時間攪拌した。
２）酵素反応後、いったん９０℃まで加熱し、プロテアーゼを失活させた。
３）冷却し、珪藻土を加え、加圧ろ過機を用いてろ過した。
（３）コンドロイチン硫酸の精製
１）ろ過液約８０Ｌに水を等量加え、旭化成ケミカルズ社製マイクローザＵＦ（分画分子量：１３，０００）に通液させた。ろ過液の量が約８０Ｌに濃縮されたら、また水を加え通液させた。これを２回行った。
２）０．４５μｍメンブレンフィルターによりろ過した。
３）減圧濃縮機で約２０Ｌまで濃縮した。
４）これを噴霧乾燥機で乾燥した。乾燥物として４３１ｇ得られた（冷凍軟骨からの歩留：１．２７％）
【００１７】
イカ軟骨精製物に含まれているコンドロイチン硫酸の分子量測定：
ゲルろ過クロマトグラフィーによりイカ軟骨精製物に含まれているコンドロイチン硫酸の分子量を測定した。分析条件は以下の通りである。
ＨＰＬＣ条件
分離カラム：Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＦ５１０ＨＱ（７．６ｍｍ ｉ．ｄ．×３００ｍｍ）
溶離液：１００ｍＭ炭酸アンモニウム
ポンプ流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２１０ｎｍ（ＵＶ検出）
市販のコンドロイチン硫酸ナトリウム標準品（ウシ軟骨由来分子量１５，０００、サメ軟骨由来分子量３１，０００、クジラ軟骨由来分子量４６，０００）も用いた検量線から、イカ軟骨生成物には分子量が１，０１１，０００と４００，０００の二種類のコンドロイチン硫酸が含まれていることが明らかになった。
【００１８】
イオウ含量測定：
純度の目安となるイオウ含量については医薬部外品原料規格コンドロイチン硫酸ナトリウム定量法（２）イオウの試験方法を用いて測定した。イオウ含量は５．１４％という値であった。
【００１９】
粘度測定：
粘度はブルックフィールド粘度計（東京計器製）を用い、温度２０℃、ロータＮｏ．２、回転数１２ｒｐｍの条件で測定した。イカ軟骨精製物の５％水溶液における粘度は１５００ｍＰａ・ｓであった。また同条件で鮫軟骨由来のコンドロイチン硫酸ナトリウムと比較した結果、約８０倍高い粘度を示した。
実施例２
【００２０】
実施例１のイカ軟骨精製物を用い、下記の処方で美容液を調製した。
（Ａ相） 重量％
エチルアルコール（９５％） １０．０
ポリオキシエチレン（２０モル）オクチルドデカノール １．０
パントテニールエチルエーテル ０．１
メチルパラベン ０．１５
（Ｂ相）
水酸化カリウム ０．１
（Ｃ相）
グリセリン ５．０
ジプロピレングリコール １０．０
亜硫酸水素ナトリウム ０．０３
カルボキシビニルポリマー ０．２
イカ軟骨精製物（２％溶液） ２５．０
精製水 残余
（製法）Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００２１】
３０歳後半〜５０代半ばの女性１０名の被験者を対象に、８週間毎日イカ軟骨精製物含有美容液を右半顔に塗布し、左半顔はイカ軟骨精製物を含有しない対照美容液を塗布し、使用前後の肌状態の検査を行った。
【００２２】
対照美容液を使用した場合、水分が使用前より１．６％減少したが、イカ軟骨精製物含有美容液を使用した場合は水分が１６％増加した（図１）。
また油分については、対照美容液が１５％減少したと比べ、イカ軟骨精製物含有美容液を使用した場合は１０９％増加した（図２）。
【００２３】
実施例１のイカ軟骨精製物を用い、下記の処方でパックを調製した。
（Ａ相） 重量％
ジプロピレングリコール ５．０
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 ５．０
（Ｂ相）
ホホバ油 ５．０
酢酸トコフェロール ０．２
エチルパラベン ０．２
香料 ０．２
（Ｃ相）
亜硫酸水素ナトリウム ０．０３
ポリビニルアルコール １３．０
（ケン化度９０、重合度２，０００）
イカ軟骨精製物（２％溶液） ２５．０
エタノール ７．０
精製水 残余
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明のイカ軟骨精製物は、優れた化粧品原料である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品材料に適したイカ軟骨精製物に関し、特に増粘性と保湿性を兼ね備えたイカ軟骨精製物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在市販のコンドロイチン硫酸は、主にサメ、豚や牛軟骨から得ている。しかし、年々需要が増加している一方で、サメがワシントン条約により捕獲規制を受けつつ、豚や牛が感染症の疑いで使用が懸念されるため、今後の安定した供給は期待できない。イカは世界中で捕獲され、捕獲制限や感染症の心配はない。総水揚げは約３６０万トンあり、全魚介類の中でもトップクラスである。
【０００３】
コンドロイチン硫酸はＤ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）の２糖が反復する糖鎖に、硫酸が結合した構造を持つ。硫酸基の結合位置と数から単硫酸化コンドロイチン硫酸Ａ，Ｂ，Ｃと多硫酸化コンドロイチン硫酸Ｄ，Ｅなどに分類される。
【０００４】
イカ軟骨から単離されたコンドロイチン硫酸はＧａｌＮＡｃの４および６位に硫酸基を持つコンドロイチン硫酸Ｅをメインとしている。コンドロイチン硫酸Ｅはｉｎ ｖｉｔｒｏで種々の活性が示されている。例えば、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｂ、Ｃより強い神経突起伸長促進活性（非特許文献１）、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｄに観測されなかったヘルペス単純ウイルス感染の阻害作用（非特許文献２）が認められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｖｅｒｓｕｌｆａｔｅｄ Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｖａｒｉａｎｔｓ：Ｕｎｉｑｕｅ Ｓｕｌｆａｔｉｏｎ Ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｓｕｇａｈａｒａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０００），Ｖｏｌ．１２ Ｎｏ．６７ ３２１−４９．
【非特許文献２】Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｅ−ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｕｎｉｔ Ｉｓ ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｔｈｅ Ｖｉｒｕｓ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅｓ ｏｎ ｇｒｏ２Ｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｂｅｒｇｅｆａｌｌ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．（２００５），２８０，３２１９３−９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、化粧品材料に適したイカ軟骨精製物に関し、特に増粘性と保湿性を兼ね備えたイカ軟骨精製物に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
コンドロイチンの原料としては、本発明のイカ以外にサメ、サケ、豚、牛などが知られているが、本発明のイカ由来のコンドロイチン硫酸は分子量が極めて大きいことから、従って化粧品用の増粘剤として好適である。
【０００８】
化粧品の材料として必要な特性は数々あるが、保湿性は必要特性であり、サメ由来コンドロイチン硫酸より優れている。
【０００９】
また臭いがないことは必須条件である。本発明のイカ軟骨精製物は、８０％以上の高純度品であり、実質的に臭いがない優れた材料である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】は、美容液使用前後の肌水分の変化を示す図である。
【００１１】
【図２】は、美容液使用前後の肌油分の変化を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のコンドロイチン硫酸は、これまで資源としてほとんど用いられてこなかったアメリカオオアカイカの頭部に存在している軟骨から、多量に取れる。
【００１３】
このアメリカオオアカイカの頭部軟骨を水で洗浄し、タンパク分解酵素で分解することにより、コンドロイチン硫酸を溶解させる。
【００１４】
溶解したコンドロイチン硫酸と低分子化されたタンパク質は限外ろ過膜で分子ふるいにかけることによって、分離することができ、高純度のコンドロイチン硫酸を得ることができる。
【実施例】
【００１５】
これより本発明を以下の実施例で詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。
【実施例１】
【００１６】
アメリカオオアカイカ頭部からイカ軟骨精製物の抽出
（１）解凍、殺菌
１）アメリカオオアカイカ頭部から取り出した冷凍軟骨３４ｋｇに、水を３４Ｌ加え、９０℃に加熱し解凍、殺菌した。
２）解凍した軟骨はナイロンメッシュで分離した。
（２）プロテアーゼ消化
１）解凍した軟骨に、水を３０Ｌ加え、５０℃に加熱し、アロアーゼを３４ｇ加え、５時間攪拌した。
２）酵素反応後、いったん９０℃まで加熱し、プロテアーゼを失活させた。
３）冷却し、珪藻土を加え、加圧ろ過機を用いてろ過した。
（３）コンドロイチン硫酸の精製
１）ろ過液約８０Ｌに水を等量加え、旭化成ケミカルズ社製マイクローザＵＦ（分画分子量：１３，０００）に通液させた。ろ過液の量が約８０Ｌに濃縮されたら、また水を加え通液させた。これを２回行った。
２）０．４５μｍメンブレンフィルターによりろ過した。
３）減圧濃縮機で約２０Ｌまで濃縮した。
４）これを噴霧乾燥機で乾燥した。乾燥物として４３１ｇ得られた（冷凍軟骨からの歩留：１．２７％）
【００１７】
イカ軟骨精製物に含まれているコンドロイチン硫酸の分子量測定：
ゲルろ過クロマトグラフィーによりイカ軟骨精製物に含まれているコンドロイチン硫酸の分子量を測定した。分析条件は以下の通りである。
ＨＰＬＣ条件
分離カラム：Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＦ５１０ＨＱ（７．６ｍｍ ｉ．ｄ．×３００ｍｍ）
溶離液：１００ｍＭ炭酸アンモニウム
ポンプ流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２１０ｎｍ（ＵＶ検出）
市販のコンドロイチン硫酸ナトリウム標準品（ウシ軟骨由来分子量１５，０００、サメ軟骨由来分子量３１，０００、クジラ軟骨由来分子量４６，０００）も用いた検量線から、イカ軟骨生成物には分子量が１，０１１，０００と４００，０００の二種類のコンドロイチン硫酸が含まれていることが明らかになった。
【００１８】
イオウ含量測定：
純度の目安となるイオウ含量については医薬部外品原料規格コンドロイチン硫酸ナトリウム定量法（２）イオウの試験方法を用いて測定した。イオウ含量は５．１４％という値であった。
【００１９】
粘度測定：
粘度はブルックフィールド粘度計（東京計器製）を用い、温度２０℃、ロータＮｏ．２、回転数１２ｒｐｍの条件で測定した。イカ軟骨精製物の５％水溶液における粘度は１５００ｍＰａ・ｓであった。また同条件で鮫軟骨由来のコンドロイチン硫酸ナトリウムと比較した結果、約８０倍高い粘度を示した。
実施例２
【００２０】
実施例１のイカ軟骨精製物を用い、下記の処方で美容液を調製した。
（Ａ相） 重量％
エチルアルコール（９５％） １０．０
ポリオキシエチレン（２０モル）オクチルドデカノール １．０
パントテニールエチルエーテル ０．１
メチルパラベン ０．１５
（Ｂ相）
水酸化カリウム ０．１
（Ｃ相）
グリセリン ５．０
ジプロピレングリコール １０．０
亜硫酸水素ナトリウム ０．０３
カルボキシビニルポリマー ０．２
イカ軟骨精製物（２％溶液） ２５．０
精製水 残余
（製法）Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００２１】
３０歳後半〜５０代半ばの女性１０名の被験者を対象に、８週間毎日イカ軟骨精製物含有美容液を右半顔に塗布し、左半顔はイカ軟骨精製物を含有しない対照美容液を塗布し、使用前後の肌状態の検査を行った。
【００２２】
対照美容液を使用した場合、水分が使用前より１．６％減少したが、イカ軟骨精製物含有美容液を使用した場合は水分が１６％増加した（図１）。
また油分については、対照美容液が１５％減少したと比べ、イカ軟骨精製物含有美容液を使用した場合は１０９％増加した（図２）。
【００２３】
実施例１のイカ軟骨精製物を用い、下記の処方でパックを調製した。
（Ａ相） 重量％
ジプロピレングリコール ５．０
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 ５．０
（Ｂ相）
ホホバ油 ５．０
酢酸トコフェロール ０．２
エチルパラベン ０．２
香料 ０．２
（Ｃ相）
亜硫酸水素ナトリウム ０．０３
ポリビニルアルコール １３．０
（ケン化度９０、重合度２，０００）
イカ軟骨精製物（２％溶液） ２５．０
エタノール ７．０
精製水 残余
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明のイカ軟骨精製物は、優れた化粧品原料である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イカの頭部軟骨から得られる分子量４０万以上であるコンドロイチン硫酸を含むイカ軟骨精製物。
【請求項２】
増粘特性と保湿特性を兼ね備えた請求項１に記載するイカ軟骨精製物。
【請求項３】
請求項１に記載するイカ軟骨精製物を含む化粧品原料。
【請求項１】
イカの頭部軟骨から得られる分子量４０万以上であるコンドロイチン硫酸を含むイカ軟骨精製物。
【請求項２】
増粘特性と保湿特性を兼ね備えた請求項１に記載するイカ軟骨精製物。
【請求項３】
請求項１に記載するイカ軟骨精製物を含む化粧品原料。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−８２１８４（Ｐ２０１２−８２１８４Ａ）
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２４１４３７（Ｐ２０１０−２４１４３７）
【出願日】平成２２年１０月１２日（２０１０．１０．１２）
【出願人】（５９５１３２３６０）株式会社常磐植物化学研究所 (10)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月１２日（２０１０．１０．１２）
【出願人】（５９５１３２３６０）株式会社常磐植物化学研究所 (10)
【Ｆターム（参考）】
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