抗菌剤組成物
【課題】安全性が高く、且つ優れた抗菌作用を示す抗菌剤組成物を提供すること。
【解決手段】次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物。
【解決手段】次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品、洗浄剤等に有用な抗菌剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗菌性物質は、微生物による製品の汚染や変質の防止又は感染症の予防等のため、化粧品、医薬品、食品、日用品等の製品に広く配合されており、品質管理や公衆衛生の面から非常に有用である。この抗菌性物質を使用する場合には、抗菌作用を発現又は維持させるため、一定濃度以上製品に含有させる又は微生物に接触させる必要がある。
このような抗菌性物質には、銅、銀及び亜鉛等の金属イオン化させた無機系物質、第四級アンモニウム塩、プロピオン酸及び安息香酸等の有機合成系物質、カテキン等のポリフェノール、ペクチン酸やキトサン（特許文献１）等の酸性・塩基性多糖、プロタミン（特許文献２）やナイシン等の塩基性ペプチド・タンパク質等の天然系物質が挙げられる。
【０００３】
天然系物質は、他の無機系物質や有機合成系物質よりも安全性が高いものの、抗菌スペクトラムが狭かったり、抗菌作用を発現するため使用量が多くなる傾向にある。このため、天然系同士又は天然系と無機系若しくは有機合成系の組み合わせにより、より少ない使用量で高い抗菌作用を発現する抗菌剤の開発が望まれている。
例えば、キトサンと銀等の金属イオンを含有させた抗菌剤組成物（特許文献３）、特定の酸性糖質とキトサン含有の食品用保存剤（特許文献４）、プロタミンとリゾチームや重合リン酸塩等を組み合わせた食品保存料（特許文献５）、イカ肝臓抽出物とプロタミンを含有する抗菌剤（特許文献６）、キトサン、プロタミン又はナイシンとシュウ酸や酢酸ナトリウム等の有機酸を混合してなる固体組成物（特許文献７）、フィンガールトール抽出物とキトサン、プロタミン又はナイシンを配合する食品用保存剤（特許文献８）が報告されている。
【０００４】
一方、カテキン類は、茶葉から抽出することのできるポリフェノールの一種であり、黄色ブドウ球菌や腸炎ビブリオ等の食中毒細菌、薬剤耐性細菌や植物病原菌に有効であることが報告されている（特許文献９〜１３、非特許文献１）。
【０００５】
しかしながら、カテキン類と他の塩基性化合物であるキトサン又はプロタミンを併用した場合に、それらの作用がどのようになるかについては知られていない。
【特許文献１】特開昭６２−８３８７７号公報
【特許文献２】特開昭６３−３０１９００号公報
【特許文献３】特開平８−２６８８２１号公報
【特許文献４】特開２０００−２４５４１８号公報
【特許文献５】特開平５−２７６９１０号公報
【特許文献６】特開平６−３４５６１２号公報
【特許文献７】特開平９−２３５２０９号公報
【特許文献８】特開２００５−２７５８８号公報
【特許文献９】特開平２−２７６５６２号公報
【特許文献１０】特開平２−１１７６０８号公報
【特許文献１１】特開平３−２４６２２７号公報
【特許文献１２】特開平８−３８１３３号公報
【特許文献１３】特開２０００−３２８４４３号公報
【非特許文献１】FFI Reports、Technical Reports「カテキン」 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社、ホームページ（http://www.saneigenffi.co.jp/foods/index.html）、平成１８年９月１２日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、安全性が高く、且つ優れた抗菌作用を示す抗菌剤組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、カテキン類の抗菌性向上について検討した結果、驚くべきことにカテキン類とキトサン又はプロタミンの天然系塩基性化合物を併用することによって、それらを各々単独で使用した場合に比べて相乗的に抗菌作用が増強し、それらの使用量を低減できることから安全性の面でも有用な抗菌剤組成物が得られることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、化粧品組成物、医薬部外品組成物、医薬品組成物及びハウスホールド用品組成物から選ばれる組成物に、（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、及び（Ｂ）カテキン類、を配合することを特徴とする、前記組成物に抗菌性を付与する方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、キトサン又はプロタミンとカテキン類の相乗効果により抗菌作用の高い抗菌剤組成物を提供することができる。これらの使用量を低減することができ、また天然系抗菌性物質の併用であるため安全性の点からも有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に用いられる成分（Ａ）のキトサン及びプロタミンは、天然物由来の窒素含有の塩基性化合物である。
当該塩基性化合物は、これらを含有する天然物から、分液、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の公知の抽出方法で抽出したものでもよく、市販のものでもよい。さらに、不活性な不純物を除去するため、抽出物や市販品を、固液分液、濾過膜、活性炭、吸着樹脂、イオン交換樹脂等の公知の分離・精製法で精製してもよい。
当該塩基性化合物は、遊離状態のものでもよく、塩状態のものでもよい。当該塩基性化合物の塩類としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩等の鉱酸の酸付加塩：又は安息香酸、スルホン酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、酢酸等の有機酸の酸付加塩：グルタミン酸等のアミノ酸塩等が挙げられる。
【００１２】
本発明に用いられる成分（Ａ）のキトサンは、アミノ糖の一種であるグルコサミンを主として含有する２〜１０００糖残基のオリゴ糖又は多糖であれば、特に限定されないが、水溶性のものが好ましい。また、当該キトサンの粘度は、特に限定されないが、５〜２０ｃｐｓが好ましい（キトサン０．５％、溶媒０．５％酢酸溶液、２０℃でのＥ型粘度計にて測定）。
当該キトサンは、キチンをアルカリ・酸処理、酵素処理等による公知の方法（例えば、内田泰著，“キチン，キトサンの抗菌性”，フードケミカル, No.2, p22（1988））にて脱Ｎアセチル化したもの、さらに低分子化したもの又は市販品でもよい。このとき、完全に脱Ｎアセチル化されていなくともよいが、少なくとも脱Ｎアセチル化度は５０％以上が好ましく、７０％以上がより好ましい。
キトサンの原料であるキチンは、カニやエビの甲殻類、昆虫等の外骨格、イカや貝類等の有機骨格、キノコ類やカビ等の細胞壁等から酸・アルカリ処理等の公知の方法（例えば、宮尾茂雄著，“キトサンによる浅漬の保存性向上”，New Food Industry,No.10, p33 (1991)）にて抽出したものでもよく、市販のものでもよい。また、当該キチンは、脱Ｎアセチル化後のキトサンの抗菌作用を損なわない範囲でキチンの他タンパク質や炭酸カルシウム等を含んでいてもよい。
【００１３】
本発明に用いられる成分（Ａ）のプロタミンは、サケ、マス、ニシン、サバ等種々の魚の精巣に多く存在する約７０〜９０％の高アルギニン含有の分子量４０００〜６０００の強塩基性タンパク質であり、デオキシリボ核酸と結合したヌクレオプロタミンの形で存在しているものである（例えば、松田敏生著，“食品微生物制御の化学”, ｐ.255,幸書房（1993））が、この形に限定されるものではない。当該プロタミンは、公知の方法（特開昭６３−３０１９００号公報等）にて魚類の精巣から鉱酸抽出したものでもよく、市販のものでもよい。
【００１４】
本発明における成分（Ｂ）のカテキン類とは、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類、並びにエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類の総称であり、これらの一種以上を含有するのが好ましい。また、カテキン類は、非重合体であるのが好ましい。
【００１５】
本発明に使用するカテキン類は、一般的には茶葉から直接抽出すること、又はその茶抽出物を濃縮若しくは精製することにより得ることができるが、他の原料由来のもの、カラム精製品及び化学合成品でもあってもよい。
【００１６】
当該茶葉抽出は、Ｃａｍｅｌｌｉａ属、例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃ．ａｓｓａｍｉｃａ、またはそれらの雑種から得られる茶葉より製茶された茶葉に、水や熱水、場合によってはこれらに抽出助剤を添加して抽出することにより行うことができる。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
当該製茶された茶葉には、（１）煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜煎り茶などの緑茶類；（２）総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶などの半発酵茶；（３）紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマンなどの発酵茶が含まれる。
抽出助剤としては、アスコルビン酸ナトリウム等の有機酸又はこれら有機酸塩類が挙げられる
【００１７】
当該茶抽出物の濃縮は、上記抽出物を濃縮することにより行うことができ、当該茶抽出物の精製は、溶剤やカラムを用いて精製することにより行うことができる。茶抽出物の濃縮物や精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等種々のものが挙げられる。
例えば、当該茶抽出物（茶カテキンともいう。）は、特開昭59-219384号、特開平4-20589号、特開平5-260907号、特開平5-306279号等に詳細に例示されている方法で調製することができる。また、市販品を用いることもでき、斯かる市販品としては、三井農林（株）「ポリフェノン」、（株）伊藤園「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」、ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ「テアビゴ」、サントリー（株）「サンウーロン」等が挙げられる。
【００１８】
当該茶抽出物中のカテキン類は、非重合体若しくは重合体で存在し、かつ液に溶解しているもの又は茶の微細粉末の懸濁物に吸着若しくは包含された固形状のものとして存在する。
また、茶葉中のカテキン類の大部分はエピ体カテキン類として存在しており、このエピ体カテキン類を用いて熱や酸やアルカリ等の処理により立体異性体である非エピ体に変化させることができる。従って、非エピ体カテキン類を使用する場合には、緑茶類、半発酵茶類又は発酵茶類からの抽出液や茶抽出液の濃縮物を水溶液にして、例えば４０〜１４０℃、０．１分〜１２０時間加熱処理して得ることができる。また非エピカテキン類含有量の高い茶抽出液の濃縮物を使用してもよい。それらは単独又は併用してもよい。
【００１９】
後記実施例に示すとおり、これら天然系の塩基性化合物であるキトサン又はプロタミンとカテキン類を併用すると、それぞれ単独では有効でなかった濃度で抗菌作用が認められたことから、これらの成分の併用により相乗効果が認められる。
従って、これらを配合してなる組成物は、抗菌剤組成物として有用である。また、これらを配合してなる組成物を化粧品、医薬部外品、医薬品、又はハウスホールド用品（以下、単に製品ということがある。）に配合又は使用することにより抗菌性を付与することができる。
【００２０】
本発明において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ｂ）のカテキン類の配合量は、乾燥質量として、０．００５〜０．５％（Ｗ／Ｖ）、さらに、０．０１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、特に、０．０１２５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
【００２１】
本発明において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ａ）のキトサンの配合量は、乾燥質量として０．００００１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、更に０．００００５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、特に０．０００１〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
このとき、成分（Ａ）のキトサン：成分（Ｂ）カテキン類の配合質量比は、抗菌効果の点から、０．００００１〜０．２：０．５〜０．００５が好ましく、０．００００５〜０．１：０．２〜０．０１がより好ましく、０．０００１〜０．０５：０．１〜０．０１２５が更に好ましい。
【００２２】
また、本発明の抗において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ａ）のプロタミンの配合量は、乾燥質量として０．０００５〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、更に０．００１〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、特に０．００５〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
このとき、成分（Ａ）のプロタミン：成分（Ｂ）カテキン類の配合質量比は、抗菌効果の点から、０．０００５〜０．２：０．５〜０．００５が好ましく、０．００１〜０．１：０．２〜０．０１がより好ましく、０．００５〜０．０５：０．１〜０．０１２５が更に好ましい。
【００２３】
本発明の組成物又は製品のｐＨは、本発明の効果を阻害しない範囲であれば特に限定されないが、抗菌効果の点から、具体的には組成物又は製品を水溶液（２０℃）としたときのｐＨを４〜９とするのが好ましく、５〜８とするのがより好ましい。
【００２４】
本発明の抗菌組成物は、微生物である細菌及び真菌の何れでも有効であるが、好ましくは細菌に有効であり、これら菌の状態が芽細胞及び／又は栄養細胞であっても有効である。
本発明の組成物が有効な細菌としては、グラム陽性菌又はグラム陰性菌に限定されない。
例えば、グラム陰性菌としては、S. dysenteria（赤痢菌Ａ亜群），S. flexneri（赤痢菌Ｂ亜群），S. boydii（赤痢菌Ｃ亜群），S. sonnei（赤痢菌Ｄ亜群）等の赤痢属（Shigella）細菌：ブルセラ属（Brucella）細菌：E. coli.O157等の大腸菌群（Escherichia coli）：S. typhi（チフス菌），S. paratyphi A（パラチフスＡ菌），S. paratyphi B（パラチフスＢ菌），S. Typhimurium （ネズミチフス菌）S. Enteritidis（ゲルトネル菌）等のサルモネラ属（Salmonella）細菌：V. cholerae（コレラ菌），V. parahaemolyticus（腸炎ビブリオ）等のビブリオ属（Vibrio）細菌：緑膿菌（P. aeruginosa）等のシュードモナス属（Pseudomonas）細菌等が挙げられる。
また、例えば、グラム陽性菌としては、枯草菌(B. subtilis)、炭疽菌(B. anthracis)、セレウス菌(B. cereus)等のバシラス属（Bacillus）細菌：リステリア・モノサイトゲネス菌（L. monocytogenes）リステリア・イバノヴィ菌（L. ivanovii）、リステリア・シーリゲリー菌（L. seeligeri）等のリステリア属（Listeria）細菌：Al. acidoterrestris（旧B. acidoterrestris）等のアリシクロバチルス属（Alicyclobacillus）細菌：S. aureus（黄色ブドウ球菌），S. pyogenes等のブドウ球菌属（Staphylococcus）細菌：C. botulinum（ボツリヌス菌），C. perfringens（ウェルシュ菌），C. difficile, C. sporogens等のクロストリジウム属（Clostridium）細菌：Leuconostoc mesenteroides等のリューコノストック属(Leuconostoc)細菌：Desulfotomaculum nigrificans等のデスルフォマクルム属（Desulfotomaculum）細菌：Enterococcus faecalis等のエンテロコッカス属（Enterococcus）細菌等が挙げられる。
【００２５】
カテキン類と併用する成分（Ａ）がキトサンの場合に有効な細菌としては、特に大腸菌及びリステリア菌が挙げられる。
カテキン類と併用する成分（Ａ）がプロタミンの場合に有効な細菌としては、特に大腸菌及びリステリア菌が挙げられる。
【００２６】
本発明の抗菌剤組成物には、その形態及び用途に応じて、本発明の効果を阻害しない範囲内で上記必須成分以外の成分、例えば、キレート剤、香料、冷感剤、色素、酸化防止剤、安定剤、無機塩、ｐＨ調整剤、植物エキス等を適宜配合することができる。
【００２７】
ｐＨ調整剤としては、酢酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸等の有機酸塩、リン酸、塩酸、硫酸等の無機塩、水酸化ナトリウム等の水酸化物、アンモニア又はアンモニア水、エタノールアミン類、低級アルカノールアミン類、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸等が挙げられ、これらを単独又は２種以上組み合わせて用いてもよく、さらに他のｐＨ調整剤と適宜組み合わせてもよい。
【００２８】
本発明の組成物は、成分（Ａ）の天然系塩基性化合物と成分（Ｂ）を一つの製剤とすることでもよく、また別々の製剤とし使用時に混合することでもよい。
【００２９】
本発明の当該組成物は、常法に従って、例えば水やアルコール等公知の溶剤を適宜用いて製造できる。また、その形態は、特に制限されず、溶液、固形物、乳化物、可溶化物、分散物、ジェル等の形態で使用することができる。
斯くして製造された本発明の組成物は、化粧品、医薬部外品、医薬品、又はハウスホールド製品の何れにも配合又は使用することができ、例えば、口紅、乳液、保湿パック、美容液、化粧水等の化粧品：液剤、ゲル剤、クリーム剤、パップ剤、エアゾール剤、ローション剤等の皮膚外用剤：洗顔料、メイク落とし、ボディシャンプー、ハンドソープ等の皮膚洗浄剤、シェービングフォーム、シャンプー等の毛髪洗浄剤、デオドラント剤等のトイレタリー用品：歯磨剤、洗口剤、口中清涼剤、義歯用品等のオーラルケア用品：台所用洗剤、衣類洗浄剤や柔軟剤、トイレ洗浄剤等の洗浄剤：殺虫剤、防虫剤、除湿剤、除菌剤、抗菌剤、消臭剤、芳香剤等の家庭用化学製品に配合することができる。また、紙製品、生理用品、紙おむつ、医療品等の衛生用品等には、例えば紙おむつ等に本発明の組成物を吹き付けることやシート状の紙・不職布製品に本発明の組成物を含む洗浄剤等を含浸することで使用できる。また、コンタクトレンズ洗浄・保存剤等に配合できる。
ここで、ハウスホールド製品とは、衣料・台所・住居用洗剤、柔軟仕上剤、掃除用紙製品、トイレタリー製品及びペット用品等広く一般家庭において使用される製品をいう。
また、上記化粧品等の他、保存剤、防腐剤、抗菌剤や抗菌剤等として飲食品に配合することができる。
【００３０】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。
【実施例】
【００３１】
（１）試験菌：
試験菌として、大腸菌：Escherichia coli O157：H7株、リステリア菌：Listeria monocytogenes No.21株を用いた。
（２）試験用溶液調製
ａ）５０％ＬＢ培地：組成：0.5％トリプトン、０．25％酵母エキス、ｐＨ６．５に調製後、オートクレーブ滅菌し、５０％ＬＢ液体培地を作製した。
ｂ）カテキン類溶液：カテキン類（「POLYPHENON 70A」カテキン製剤、三井農林（株）製）を1.0%(W/V)となるように純水に溶解し、更に10000, 5000, 2500, 1250, 625, 312.5, 156, 78，0ppmになるように各溶液を調製後、濾過滅菌（孔径0.2μｍ、関東化学社製）した。
ｃ）各天然系塩基性化合物溶液：各化合物を純水に溶解し、下記の濃度になるように調製後、濾過滅菌（孔径0.2μｍ、関東化学社製）した。
キトサン（粘度5〜20cps(キトサン0.5%、溶媒0.5%酢酸溶液、20℃でのＥ型粘度計による回転粘度)、脱アセチル化度80％）（商品名：Chitosan 10、和光工業会社製）溶液：0.50, 0.01, 0.001, 0.0001％(W/V)。純水に溶解時、希塩酸溶液を添加して溶解した。
【００３２】
プロタミン（アマサ化成（株））溶液：0.1, 0.05, 0.01, 0.005％(W/V)
ｄ）培地や各溶液のｐＨは、０．１Ｎ塩酸または0.1Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて５．０、６．５、８．０に調整した。
【００３３】
（２）接触試験
上記のＬＢ培地（８ｍＬ）、カテキン類溶液（１ｍＬ）及び各抗菌性物質溶液（１ｍＬ）を混合した試料用溶液（１０ｍＬ）に、１０5〜１０6ＣＦＵ／ｍＬに調製した菌液１００μＬを添加（終菌数１０3〜１０5ＣＦＵ／ｍＬ）し、表１〜４に示す各抗菌性物質及びカテキン類の最終濃度及びｐＨに調製した。この菌を接種した試料用溶液を、３７℃で４８時間静置（時々ボルテックス）した。静置後の生菌数を平板塗抹法により求めた。TSA培地上のコロニー数から生菌濃度を算出した。
TSA(Tryptic Soy Agar)寒天培地(Becton Dickinson 社):1.7%カゼイン分解物、0.3%大豆酵素分解物、0.25%デキストロース、0.5%塩化ナトリウム、1.5%寒天、ｐＨ７。
【００３４】
（３）結果
下記の表１〜４に示すように、カテキン類とキトサン又はプロタミンとの併用によって、カテキン類及びこれら塩基性化合物の使用量を低減しつつ、抗菌効果が相乗的に高まった。すなわち、これらの成分を併用した場合には、これらをそれぞれ単独で使用した場合に抗菌効果を示さない濃度において抗菌作用を示した。
【００３５】
試験例１：キトサン及びカテキン類（大腸菌O157：H7株）
【００３６】
【表１】
【００３７】
試験例２：キトサン及びカテキン類（リステリア菌）
【００３８】
【表２】
【００３９】
試験例３：プロタミン及びカテキン類（大腸菌O157：H7株）
【００４０】
【表３】
【００４１】
試験例４：プロタミン及びカテキン類（リステリア菌）
【００４２】
【表４】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品、洗浄剤等に有用な抗菌剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗菌性物質は、微生物による製品の汚染や変質の防止又は感染症の予防等のため、化粧品、医薬品、食品、日用品等の製品に広く配合されており、品質管理や公衆衛生の面から非常に有用である。この抗菌性物質を使用する場合には、抗菌作用を発現又は維持させるため、一定濃度以上製品に含有させる又は微生物に接触させる必要がある。
このような抗菌性物質には、銅、銀及び亜鉛等の金属イオン化させた無機系物質、第四級アンモニウム塩、プロピオン酸及び安息香酸等の有機合成系物質、カテキン等のポリフェノール、ペクチン酸やキトサン（特許文献１）等の酸性・塩基性多糖、プロタミン（特許文献２）やナイシン等の塩基性ペプチド・タンパク質等の天然系物質が挙げられる。
【０００３】
天然系物質は、他の無機系物質や有機合成系物質よりも安全性が高いものの、抗菌スペクトラムが狭かったり、抗菌作用を発現するため使用量が多くなる傾向にある。このため、天然系同士又は天然系と無機系若しくは有機合成系の組み合わせにより、より少ない使用量で高い抗菌作用を発現する抗菌剤の開発が望まれている。
例えば、キトサンと銀等の金属イオンを含有させた抗菌剤組成物（特許文献３）、特定の酸性糖質とキトサン含有の食品用保存剤（特許文献４）、プロタミンとリゾチームや重合リン酸塩等を組み合わせた食品保存料（特許文献５）、イカ肝臓抽出物とプロタミンを含有する抗菌剤（特許文献６）、キトサン、プロタミン又はナイシンとシュウ酸や酢酸ナトリウム等の有機酸を混合してなる固体組成物（特許文献７）、フィンガールトール抽出物とキトサン、プロタミン又はナイシンを配合する食品用保存剤（特許文献８）が報告されている。
【０００４】
一方、カテキン類は、茶葉から抽出することのできるポリフェノールの一種であり、黄色ブドウ球菌や腸炎ビブリオ等の食中毒細菌、薬剤耐性細菌や植物病原菌に有効であることが報告されている（特許文献９〜１３、非特許文献１）。
【０００５】
しかしながら、カテキン類と他の塩基性化合物であるキトサン又はプロタミンを併用した場合に、それらの作用がどのようになるかについては知られていない。
【特許文献１】特開昭６２−８３８７７号公報
【特許文献２】特開昭６３−３０１９００号公報
【特許文献３】特開平８−２６８８２１号公報
【特許文献４】特開２０００−２４５４１８号公報
【特許文献５】特開平５−２７６９１０号公報
【特許文献６】特開平６−３４５６１２号公報
【特許文献７】特開平９−２３５２０９号公報
【特許文献８】特開２００５−２７５８８号公報
【特許文献９】特開平２−２７６５６２号公報
【特許文献１０】特開平２−１１７６０８号公報
【特許文献１１】特開平３−２４６２２７号公報
【特許文献１２】特開平８−３８１３３号公報
【特許文献１３】特開２０００−３２８４４３号公報
【非特許文献１】FFI Reports、Technical Reports「カテキン」 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社、ホームページ（http://www.saneigenffi.co.jp/foods/index.html）、平成１８年９月１２日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、安全性が高く、且つ優れた抗菌作用を示す抗菌剤組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、カテキン類の抗菌性向上について検討した結果、驚くべきことにカテキン類とキトサン又はプロタミンの天然系塩基性化合物を併用することによって、それらを各々単独で使用した場合に比べて相乗的に抗菌作用が増強し、それらの使用量を低減できることから安全性の面でも有用な抗菌剤組成物が得られることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、化粧品組成物、医薬部外品組成物、医薬品組成物及びハウスホールド用品組成物から選ばれる組成物に、（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、及び（Ｂ）カテキン類、を配合することを特徴とする、前記組成物に抗菌性を付与する方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、キトサン又はプロタミンとカテキン類の相乗効果により抗菌作用の高い抗菌剤組成物を提供することができる。これらの使用量を低減することができ、また天然系抗菌性物質の併用であるため安全性の点からも有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に用いられる成分（Ａ）のキトサン及びプロタミンは、天然物由来の窒素含有の塩基性化合物である。
当該塩基性化合物は、これらを含有する天然物から、分液、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の公知の抽出方法で抽出したものでもよく、市販のものでもよい。さらに、不活性な不純物を除去するため、抽出物や市販品を、固液分液、濾過膜、活性炭、吸着樹脂、イオン交換樹脂等の公知の分離・精製法で精製してもよい。
当該塩基性化合物は、遊離状態のものでもよく、塩状態のものでもよい。当該塩基性化合物の塩類としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩等の鉱酸の酸付加塩：又は安息香酸、スルホン酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、酢酸等の有機酸の酸付加塩：グルタミン酸等のアミノ酸塩等が挙げられる。
【００１２】
本発明に用いられる成分（Ａ）のキトサンは、アミノ糖の一種であるグルコサミンを主として含有する２〜１０００糖残基のオリゴ糖又は多糖であれば、特に限定されないが、水溶性のものが好ましい。また、当該キトサンの粘度は、特に限定されないが、５〜２０ｃｐｓが好ましい（キトサン０．５％、溶媒０．５％酢酸溶液、２０℃でのＥ型粘度計にて測定）。
当該キトサンは、キチンをアルカリ・酸処理、酵素処理等による公知の方法（例えば、内田泰著，“キチン，キトサンの抗菌性”，フードケミカル, No.2, p22（1988））にて脱Ｎアセチル化したもの、さらに低分子化したもの又は市販品でもよい。このとき、完全に脱Ｎアセチル化されていなくともよいが、少なくとも脱Ｎアセチル化度は５０％以上が好ましく、７０％以上がより好ましい。
キトサンの原料であるキチンは、カニやエビの甲殻類、昆虫等の外骨格、イカや貝類等の有機骨格、キノコ類やカビ等の細胞壁等から酸・アルカリ処理等の公知の方法（例えば、宮尾茂雄著，“キトサンによる浅漬の保存性向上”，New Food Industry,No.10, p33 (1991)）にて抽出したものでもよく、市販のものでもよい。また、当該キチンは、脱Ｎアセチル化後のキトサンの抗菌作用を損なわない範囲でキチンの他タンパク質や炭酸カルシウム等を含んでいてもよい。
【００１３】
本発明に用いられる成分（Ａ）のプロタミンは、サケ、マス、ニシン、サバ等種々の魚の精巣に多く存在する約７０〜９０％の高アルギニン含有の分子量４０００〜６０００の強塩基性タンパク質であり、デオキシリボ核酸と結合したヌクレオプロタミンの形で存在しているものである（例えば、松田敏生著，“食品微生物制御の化学”, ｐ.255,幸書房（1993））が、この形に限定されるものではない。当該プロタミンは、公知の方法（特開昭６３−３０１９００号公報等）にて魚類の精巣から鉱酸抽出したものでもよく、市販のものでもよい。
【００１４】
本発明における成分（Ｂ）のカテキン類とは、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類、並びにエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類の総称であり、これらの一種以上を含有するのが好ましい。また、カテキン類は、非重合体であるのが好ましい。
【００１５】
本発明に使用するカテキン類は、一般的には茶葉から直接抽出すること、又はその茶抽出物を濃縮若しくは精製することにより得ることができるが、他の原料由来のもの、カラム精製品及び化学合成品でもあってもよい。
【００１６】
当該茶葉抽出は、Ｃａｍｅｌｌｉａ属、例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃ．ａｓｓａｍｉｃａ、またはそれらの雑種から得られる茶葉より製茶された茶葉に、水や熱水、場合によってはこれらに抽出助剤を添加して抽出することにより行うことができる。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
当該製茶された茶葉には、（１）煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜煎り茶などの緑茶類；（２）総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶などの半発酵茶；（３）紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマンなどの発酵茶が含まれる。
抽出助剤としては、アスコルビン酸ナトリウム等の有機酸又はこれら有機酸塩類が挙げられる
【００１７】
当該茶抽出物の濃縮は、上記抽出物を濃縮することにより行うことができ、当該茶抽出物の精製は、溶剤やカラムを用いて精製することにより行うことができる。茶抽出物の濃縮物や精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等種々のものが挙げられる。
例えば、当該茶抽出物（茶カテキンともいう。）は、特開昭59-219384号、特開平4-20589号、特開平5-260907号、特開平5-306279号等に詳細に例示されている方法で調製することができる。また、市販品を用いることもでき、斯かる市販品としては、三井農林（株）「ポリフェノン」、（株）伊藤園「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」、ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ「テアビゴ」、サントリー（株）「サンウーロン」等が挙げられる。
【００１８】
当該茶抽出物中のカテキン類は、非重合体若しくは重合体で存在し、かつ液に溶解しているもの又は茶の微細粉末の懸濁物に吸着若しくは包含された固形状のものとして存在する。
また、茶葉中のカテキン類の大部分はエピ体カテキン類として存在しており、このエピ体カテキン類を用いて熱や酸やアルカリ等の処理により立体異性体である非エピ体に変化させることができる。従って、非エピ体カテキン類を使用する場合には、緑茶類、半発酵茶類又は発酵茶類からの抽出液や茶抽出液の濃縮物を水溶液にして、例えば４０〜１４０℃、０．１分〜１２０時間加熱処理して得ることができる。また非エピカテキン類含有量の高い茶抽出液の濃縮物を使用してもよい。それらは単独又は併用してもよい。
【００１９】
後記実施例に示すとおり、これら天然系の塩基性化合物であるキトサン又はプロタミンとカテキン類を併用すると、それぞれ単独では有効でなかった濃度で抗菌作用が認められたことから、これらの成分の併用により相乗効果が認められる。
従って、これらを配合してなる組成物は、抗菌剤組成物として有用である。また、これらを配合してなる組成物を化粧品、医薬部外品、医薬品、又はハウスホールド用品（以下、単に製品ということがある。）に配合又は使用することにより抗菌性を付与することができる。
【００２０】
本発明において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ｂ）のカテキン類の配合量は、乾燥質量として、０．００５〜０．５％（Ｗ／Ｖ）、さらに、０．０１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、特に、０．０１２５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
【００２１】
本発明において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ａ）のキトサンの配合量は、乾燥質量として０．００００１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、更に０．００００５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、特に０．０００１〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
このとき、成分（Ａ）のキトサン：成分（Ｂ）カテキン類の配合質量比は、抗菌効果の点から、０．００００１〜０．２：０．５〜０．００５が好ましく、０．００００５〜０．１：０．２〜０．０１がより好ましく、０．０００１〜０．０５：０．１〜０．０１２５が更に好ましい。
【００２２】
また、本発明の抗において、上記組成物又は製品に配合した場合、組成物又は製品中、成分（Ａ）のプロタミンの配合量は、乾燥質量として０．０００５〜０．２％（Ｗ／Ｖ）、更に０．００１〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、特に０．００５〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
このとき、成分（Ａ）のプロタミン：成分（Ｂ）カテキン類の配合質量比は、抗菌効果の点から、０．０００５〜０．２：０．５〜０．００５が好ましく、０．００１〜０．１：０．２〜０．０１がより好ましく、０．００５〜０．０５：０．１〜０．０１２５が更に好ましい。
【００２３】
本発明の組成物又は製品のｐＨは、本発明の効果を阻害しない範囲であれば特に限定されないが、抗菌効果の点から、具体的には組成物又は製品を水溶液（２０℃）としたときのｐＨを４〜９とするのが好ましく、５〜８とするのがより好ましい。
【００２４】
本発明の抗菌組成物は、微生物である細菌及び真菌の何れでも有効であるが、好ましくは細菌に有効であり、これら菌の状態が芽細胞及び／又は栄養細胞であっても有効である。
本発明の組成物が有効な細菌としては、グラム陽性菌又はグラム陰性菌に限定されない。
例えば、グラム陰性菌としては、S. dysenteria（赤痢菌Ａ亜群），S. flexneri（赤痢菌Ｂ亜群），S. boydii（赤痢菌Ｃ亜群），S. sonnei（赤痢菌Ｄ亜群）等の赤痢属（Shigella）細菌：ブルセラ属（Brucella）細菌：E. coli.O157等の大腸菌群（Escherichia coli）：S. typhi（チフス菌），S. paratyphi A（パラチフスＡ菌），S. paratyphi B（パラチフスＢ菌），S. Typhimurium （ネズミチフス菌）S. Enteritidis（ゲルトネル菌）等のサルモネラ属（Salmonella）細菌：V. cholerae（コレラ菌），V. parahaemolyticus（腸炎ビブリオ）等のビブリオ属（Vibrio）細菌：緑膿菌（P. aeruginosa）等のシュードモナス属（Pseudomonas）細菌等が挙げられる。
また、例えば、グラム陽性菌としては、枯草菌(B. subtilis)、炭疽菌(B. anthracis)、セレウス菌(B. cereus)等のバシラス属（Bacillus）細菌：リステリア・モノサイトゲネス菌（L. monocytogenes）リステリア・イバノヴィ菌（L. ivanovii）、リステリア・シーリゲリー菌（L. seeligeri）等のリステリア属（Listeria）細菌：Al. acidoterrestris（旧B. acidoterrestris）等のアリシクロバチルス属（Alicyclobacillus）細菌：S. aureus（黄色ブドウ球菌），S. pyogenes等のブドウ球菌属（Staphylococcus）細菌：C. botulinum（ボツリヌス菌），C. perfringens（ウェルシュ菌），C. difficile, C. sporogens等のクロストリジウム属（Clostridium）細菌：Leuconostoc mesenteroides等のリューコノストック属(Leuconostoc)細菌：Desulfotomaculum nigrificans等のデスルフォマクルム属（Desulfotomaculum）細菌：Enterococcus faecalis等のエンテロコッカス属（Enterococcus）細菌等が挙げられる。
【００２５】
カテキン類と併用する成分（Ａ）がキトサンの場合に有効な細菌としては、特に大腸菌及びリステリア菌が挙げられる。
カテキン類と併用する成分（Ａ）がプロタミンの場合に有効な細菌としては、特に大腸菌及びリステリア菌が挙げられる。
【００２６】
本発明の抗菌剤組成物には、その形態及び用途に応じて、本発明の効果を阻害しない範囲内で上記必須成分以外の成分、例えば、キレート剤、香料、冷感剤、色素、酸化防止剤、安定剤、無機塩、ｐＨ調整剤、植物エキス等を適宜配合することができる。
【００２７】
ｐＨ調整剤としては、酢酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸等の有機酸塩、リン酸、塩酸、硫酸等の無機塩、水酸化ナトリウム等の水酸化物、アンモニア又はアンモニア水、エタノールアミン類、低級アルカノールアミン類、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸等が挙げられ、これらを単独又は２種以上組み合わせて用いてもよく、さらに他のｐＨ調整剤と適宜組み合わせてもよい。
【００２８】
本発明の組成物は、成分（Ａ）の天然系塩基性化合物と成分（Ｂ）を一つの製剤とすることでもよく、また別々の製剤とし使用時に混合することでもよい。
【００２９】
本発明の当該組成物は、常法に従って、例えば水やアルコール等公知の溶剤を適宜用いて製造できる。また、その形態は、特に制限されず、溶液、固形物、乳化物、可溶化物、分散物、ジェル等の形態で使用することができる。
斯くして製造された本発明の組成物は、化粧品、医薬部外品、医薬品、又はハウスホールド製品の何れにも配合又は使用することができ、例えば、口紅、乳液、保湿パック、美容液、化粧水等の化粧品：液剤、ゲル剤、クリーム剤、パップ剤、エアゾール剤、ローション剤等の皮膚外用剤：洗顔料、メイク落とし、ボディシャンプー、ハンドソープ等の皮膚洗浄剤、シェービングフォーム、シャンプー等の毛髪洗浄剤、デオドラント剤等のトイレタリー用品：歯磨剤、洗口剤、口中清涼剤、義歯用品等のオーラルケア用品：台所用洗剤、衣類洗浄剤や柔軟剤、トイレ洗浄剤等の洗浄剤：殺虫剤、防虫剤、除湿剤、除菌剤、抗菌剤、消臭剤、芳香剤等の家庭用化学製品に配合することができる。また、紙製品、生理用品、紙おむつ、医療品等の衛生用品等には、例えば紙おむつ等に本発明の組成物を吹き付けることやシート状の紙・不職布製品に本発明の組成物を含む洗浄剤等を含浸することで使用できる。また、コンタクトレンズ洗浄・保存剤等に配合できる。
ここで、ハウスホールド製品とは、衣料・台所・住居用洗剤、柔軟仕上剤、掃除用紙製品、トイレタリー製品及びペット用品等広く一般家庭において使用される製品をいう。
また、上記化粧品等の他、保存剤、防腐剤、抗菌剤や抗菌剤等として飲食品に配合することができる。
【００３０】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。
【実施例】
【００３１】
（１）試験菌：
試験菌として、大腸菌：Escherichia coli O157：H7株、リステリア菌：Listeria monocytogenes No.21株を用いた。
（２）試験用溶液調製
ａ）５０％ＬＢ培地：組成：0.5％トリプトン、０．25％酵母エキス、ｐＨ６．５に調製後、オートクレーブ滅菌し、５０％ＬＢ液体培地を作製した。
ｂ）カテキン類溶液：カテキン類（「POLYPHENON 70A」カテキン製剤、三井農林（株）製）を1.0%(W/V)となるように純水に溶解し、更に10000, 5000, 2500, 1250, 625, 312.5, 156, 78，0ppmになるように各溶液を調製後、濾過滅菌（孔径0.2μｍ、関東化学社製）した。
ｃ）各天然系塩基性化合物溶液：各化合物を純水に溶解し、下記の濃度になるように調製後、濾過滅菌（孔径0.2μｍ、関東化学社製）した。
キトサン（粘度5〜20cps(キトサン0.5%、溶媒0.5%酢酸溶液、20℃でのＥ型粘度計による回転粘度)、脱アセチル化度80％）（商品名：Chitosan 10、和光工業会社製）溶液：0.50, 0.01, 0.001, 0.0001％(W/V)。純水に溶解時、希塩酸溶液を添加して溶解した。
【００３２】
プロタミン（アマサ化成（株））溶液：0.1, 0.05, 0.01, 0.005％(W/V)
ｄ）培地や各溶液のｐＨは、０．１Ｎ塩酸または0.1Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて５．０、６．５、８．０に調整した。
【００３３】
（２）接触試験
上記のＬＢ培地（８ｍＬ）、カテキン類溶液（１ｍＬ）及び各抗菌性物質溶液（１ｍＬ）を混合した試料用溶液（１０ｍＬ）に、１０5〜１０6ＣＦＵ／ｍＬに調製した菌液１００μＬを添加（終菌数１０3〜１０5ＣＦＵ／ｍＬ）し、表１〜４に示す各抗菌性物質及びカテキン類の最終濃度及びｐＨに調製した。この菌を接種した試料用溶液を、３７℃で４８時間静置（時々ボルテックス）した。静置後の生菌数を平板塗抹法により求めた。TSA培地上のコロニー数から生菌濃度を算出した。
TSA(Tryptic Soy Agar)寒天培地(Becton Dickinson 社):1.7%カゼイン分解物、0.3%大豆酵素分解物、0.25%デキストロース、0.5%塩化ナトリウム、1.5%寒天、ｐＨ７。
【００３４】
（３）結果
下記の表１〜４に示すように、カテキン類とキトサン又はプロタミンとの併用によって、カテキン類及びこれら塩基性化合物の使用量を低減しつつ、抗菌効果が相乗的に高まった。すなわち、これらの成分を併用した場合には、これらをそれぞれ単独で使用した場合に抗菌効果を示さない濃度において抗菌作用を示した。
【００３５】
試験例１：キトサン及びカテキン類（大腸菌O157：H7株）
【００３６】
【表１】
【００３７】
試験例２：キトサン及びカテキン類（リステリア菌）
【００３８】
【表２】
【００３９】
試験例３：プロタミン及びカテキン類（大腸菌O157：H7株）
【００４０】
【表３】
【００４１】
試験例４：プロタミン及びカテキン類（リステリア菌）
【００４２】
【表４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物。
【請求項２】
化粧品組成物、医薬部外品組成物、医薬品組成物及びハウスホールド用品組成物から選ばれる組成物に、（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、及び（Ｂ）カテキン類、を配合することを特徴とする、前記組成物に抗菌性を付与する方法。
【請求項１】
次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、
（Ｂ）カテキン類、
を含有する抗菌剤組成物。
【請求項２】
化粧品組成物、医薬部外品組成物、医薬品組成物及びハウスホールド用品組成物から選ばれる組成物に、（Ａ）キトサン及びプロタミンから選ばれる１種以上、及び（Ｂ）カテキン類、を配合することを特徴とする、前記組成物に抗菌性を付与する方法。
【公開番号】特開２００９−９１３２２（Ｐ２００９−９１３２２Ａ）
【公開日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２６５１１２（Ｐ２００７−２６５１１２）
【出願日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
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