疎水性基で官能化されたテレケリックホモポリアミノ酸、およびその用途、特に治療用途
本発明は、活性成分（ＡＰ）の担持に使用することができる生分解性ホモポリアミノ酸に基づく新規物質に関する。本発明は、また、このホモポリアミノ酸に基づく薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物に関する。本発明の目的は、ＡＰの担持に使用することができ、全ての仕様：生体適合性、生分解性、多数の活性成分と容易に会合する、またはそれらを可溶化し、インビボで放出する能力を最適な様式で満たす新規なポリマー原料を提供することである。本発明によると、本発明は、主として、アスパラギン酸またはグルタミン酸単位を有し、その両端に８〜３０個の炭素原子を有する疎水性基を含む線状ホモポリアミノ酸に関する。このポリマーは、両親媒性で、アニオン性であり、活性成分の担持のために低コストで容易に粒子に変換され得る。この粒子は、安定な水性コロイド懸濁物を形成し得る。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、活性成分（ＡＰ）の担持（vectorization）に特に有用な、生分解性ホモポリアミノ酸に基づく新規な物質に関する。
【０００２】
本発明は、さらに、これらのホモポリアミノ酸に基づく新規な薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物に関する。これらの組成物は、ＡＰの担持を可能とするタイプのものであり得、好ましくはエマルジョン、ミセル、粒子、ゲル、移植片またはフィルムの形態を取る。
【０００３】
当該ＡＰは、有利には、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内、経頬または他のルートにより動物またはヒトの器官に投与し得る生物学的に活性な化合物である。
本発明がより具体的に関係するＡＰは、タンパク、糖タンパク、ペプチド、多糖、リポ多糖、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドおよび有機分子であるが、限定を意図するものではない。しかしながら、それらは、また、化粧料製品または除草剤、殺虫剤、防カビ剤等のような植物衛生製品であり得る。
【０００４】
活性成分、特に医薬活性成分の担持の分野において、多くの場合に、
活性成分を、作用の部位に到達するまで分解（加水分解、当該部位での析出、酵素分解等）から保護すること
および／または所定の期間にわたって治療レベルを維持するように、活性成分の放出速度を制御すること、
および／または活性成分を作用部位まで輸送（保護を伴って）すること
の必要性がある。
【０００５】
これらの目的のために、いくつかのタイプのポリマーが研究されてきており、そのいくつかは、市販さえされている。挙げることのできる例は、ポリ乳酸、ポリ乳酸−グリコール酸、ポリオキシエチレン−オキシプロピレン、ポリアミノ酸または多糖タイプのポリマーである。これらのポリマーは、例えばマス移植片（mass implant）、ミクロ粒子、ナノ粒子、ベシクル、ミセルまたはゲルの製造のための出発物質を構成する。これらのポリマーがそのような系の製造のために好適でなければならないことに加えて、それらは、また、生体適合性であり、非毒性であり、非免疫原性であり、経済的でなければならず、また体内から容易に除去できるか、および／または生分解性でなければならない。この最後の点に関し、さらに、器官内での生分解は非毒性生成物を生成させることが必須である。
【０００６】
ＡＰ担持システムの製造のための出発物質として使用されるポリマーに関する先行技術を例示するために、以下、種々の特許、特許出願または科学論文に言及する。
【０００７】
特許ＵＳ−Ｂ−４，６５２，４４１は、ホルモンＬＨ−ＲＨを封入するポリラクチドマイクロカプセルを記載している。これらのマイクロカプセルは、水中油中水型エマルジョンを調製することにより製造され、ホルモンを含有する水性内層、ホルモンを固定するための物質（ゼラチン）、油性ポリラクチド層および水性外層（ポリビニルアルコール）を含む。ＡＰは、皮下注射後２週間以上の期間にわたって放出され得る。
【０００８】
特許ＵＳ−Ｂ−６，１５３，１９３は、アドリアマイシンのような抗癌剤の担持のための両親媒性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ミセルに基づく組成物を記載している。
【０００９】
アキヨシら（J. Controlled Release 1998, 54, 313-320）は、コレステロールのグラフト化により疎水性化され、水中でナノ粒子を形成するプルランを記載している。これらのナノ粒子は、可逆的にインスリンと錯化し得るものであり、安定なコロイド分散物を形成する。
【００１０】
特許ＵＳ−Ｂ−４，３５１，３３７は、活性成分の制御放出のために移植片またはミクロ粒子の形態で用いることができる、ロイシンとグルタメートに基づく両親媒性コポリアミノ酸を記載している。活性成分は、該ポリマーの分解速度に依存して非常に長期間にわたって放出され得る。
【００１１】
特許ＵＳ−Ｂ−４，８８８，３９８は、ポリグルタメートまたはポリアスパルテートおよび任意にポリロイシンに基づき、ポリアミノ酸鎖に沿ってランダムに位置するアルコキシカルボニルメチルタイプの懸垂基を有するポリマーを記載している。側基、例えばメトキシカルボニルメチル基でグラフト化されたこれらのポリアミノ酸は、ＡＰを含有する長期放出性生分解性移植片の形態で使用することができる。
【００１２】
特許ＵＳ−Ｂ−５，９０４，９３６は、安定なコロイド懸濁物を形成し得、生物学的に活性なタンパクと、それを変性させることなく自発的に会合し得るポリロイシン−ポリグルタメートブロックポリマーから得られるナノ粒子を記載している。タンパクは、長期に渡って制御された様式で、インビボ中で放出され得る。
【００１３】
特許ＵＳ−Ｂ−５，４４９，５１３は、ポリオキシエチレンブロックとポリアミノ酸ブロック、例えばポリ（ベータ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート）とを含む両親媒性ブロックコポリマーを記載している。これらのポリオキシエチレン−ポリベンジルアスパルテートポリマーは、アドリアマイシンまたはインドメタシンのような疎水性活性分子を封入し得るミセルを形成する。
【００１４】
特許出願ＷＯ−Ａ−９９／６１５１２は、ポリリジンおよびポリオルニチンであって、疎水性基（ポリリジンまたはポリオルニチンに結合したパルミチン酸）および親水性基（ポリオキシエチレン）により官能化されたものを記載している。コレステロールの存在下で、これらのポリマー、例えばポリオキシエチレンとパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、ドキソルビシンまたはＤＮＡを封入し得るベシクルを形成する。ポリリジンに基づくこれらのポリマーは、生理学的媒体中でカチオン性である。
【００１５】
本出願人の名義に係る特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８は、安定なコロイド懸濁物を形成し、および生物学的に活性なタンパクと、それを変性させることなく、自発的に会合し得るポリ（グルタミン酸ナトリウム）−ポリ（グルタミン酸メチル、エチル、ヘキサデシルもしくはドデシル）ブロックまたはランダムポリマーを記載している。タンパクは、長期に渡って制御された様式でインビボ中で放出され得る。これらの両親媒性コポリアミノ酸は、疎水性アルキル側鎖の存在により修飾されている。これらのアルキル基は、エステル基を介してポリマー上に共有的にグラフト化される。これらのポリマーは、生理的媒体中でアニオン性である。
【００１６】
担持システムに関するこの先行技術は、鎖の末端に疎水性基を含有する親水性ポリマーに関する複数の文献を含んでいる。
【００１７】
特許ＦＲ２５３３２０９は、８〜２４個の炭素原子を含有する疎水性鎖と、親水性または親水性化ペプチド鎖からなるポリペプチドを記載している。これらの生成物は、特に、乳化剤または液晶として有用である。
【００１８】
同じ精神内で、リポソームの技術分野において、以下のものを挙げることができる。
【００１９】
特許出願ＷＯ−Ａ−０２／０９８９５１は、両鎖末端の一方に脂質基を有するポリアミノ酸またはそのある種の誘導体を記載している。これらは、例えば、ヘプタデシルオクタデシルアミン末端基を有するポリ（ガンマ−Ｌ−ベンジル−Ｌ−グルタメート）またはポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミン）であり得る。これらのポリマーは、リポソームの調製に有用である。
【００２０】
特許ＵＳ−Ｂ−５，５３４，２４１は、鎖中においてジエチレントリアミンペンタ酢酸タイプのキレート基により置換され、鎖の一端においてＮ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧＰＥ）で形成された親油性基により置換されたポリリジン残基からなる両親媒性化合物を開示している。これらの化合物は、リポソームの２分子膜中に組み込むことが意図されている。
【００２１】
同じことが、特許ＵＳ−Ｂ１−６，２８４，２６７に記載された両親媒性ポリマーにも当てはまる。これらの両親媒性ポリマーは、それらの末端に結合した少なくとも２つの疎水性基を有する線状、分枝または星型の親水性ポリマーである。この特許は、その全ての実施例により証拠付けられるように、実質的に、ポリエチレングリコールに基づく中性の親水性ポリマーに関するものである。さて、このタイプのポリマーは、生分解性でなく、大きな不利点を構成する。したがって、この特許は、ポリグルタメートまたはポリアスパルテートのようなアニオン性線状ポリアミノ酸をテレケリック両親媒性ポリマーの親水性ポリマー部分として用いることを記述しておらず、示唆すらしていない。
【００２２】
すなわち、先行技術には、これまで開発され、医薬活性成分の担持のために提案された非常に多数の解決策があるが、全ての要求に対する答えを見いだすことは困難であり、状況は依然不満足のままである。より具体的には、活性成分の担持のための粒子を製造するための生分解性物質であって、活性成分と可逆的に会合するのに好適なナノ粒子またはミクロ粒子を担持する水性懸濁物を形成し得るものについての満たされていない必要性を同定することが可能であった。
【００２３】
このコンテキストにおいて、本発明の本質的な目的の１つは、動物の生理学的ｐＨ（例えば、７．４のオーダー）でアニオン性であり、特許ＦＲ−Ａ−２５３３２０９または特許ＵＳ−Ｂ１−６，２８４，２６７に記載されたものと比較して、特にタンパク会合能と生分解性の点で改善を示す、新規な線状両親媒性ポリアミノ酸を提供することにある。
【００２４】
本発明の他の本質的な目的は、これらのポリマーが、ＡＰの担持のために使用され得、仕様書の全ての仕様、すなわち、特に、
(1)
容易かつ経済的に安定な水性コロイド懸濁物を形成し、
容易かつ経済的に多くの活性成分と会合し、および
インビボでこれらの活性成分を放出する
能力
(1)生体適合性、
(1)生分解性、
(1)加水分解に対する安定性
の全てを最適に満足することを可能とすることである。
【００２５】
この目的および他の目的は、まず第１に、両端が互いに同じもしくは異なる疎水性基を担持し、以下の一般式：
ＨＧ−Ｘ−ＰＡＡ−Ｙ−ＨＧ
（ここで、
ＨＧは、疎水性基であり、
ＸおよびＹは、独立に、共有結合またはＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価基に相当する結合であり、
ＰＡＡは、アニオン性の親水性ホモポリアミノ酸鎖である）
により表され得ることを特徴とするアニオン性の線状両親媒性ホモポリアミノ酸に関するものである本発明により達成される。
【００２６】
完全に賢明で有利な様式で、特定のアニオン性生分解性線状（linear）ホモポリアミノ酸（例えば、ポリＡｓｐまたはポリＧｌｕ）をＰＡＡ鎖の末端に位置する疎水性基と組み合わせるという思想を持ったということは、本出願人の功績である。
【００２７】
これらの新規な両親媒性ホモポリマーは、タンパクの担持に特に好適であることが立証されている。
【００２８】
本発明で定義される通り、
用語「ホモポリアミノ酸」は、一方で、単一種の「アミノ酸」単位（例えば、グルタミン酸もしくはグルタメート単位またはアスパラギン酸もしくはアスパルテート単位）を含有するＰＡＡを、他方で、２〜２０の「アミノ酸」単位を含有するオリゴアミノ酸のみならず、２０を超える「アミノ酸」単位を含有するホモポリアミノ酸を包含し、
用語「アミノ酸単位」とは、当該アミノ酸の性質を変性しないという条件で置換基と関係なく、ある与えられたアミノ酸の骨格から形成されるモノマーもしくは非モノマー単位をいう。
【００２９】
これらのホモポリマーは、類似の生成物と比較して、１またはそれ以上の活性成分との会合および／またはその封入という驚くべき性質を有する。
さらに、それらは、酵素の存在下で、非毒性の異化生成物／代謝生成物（アミノ酸）へと容易に分解する。
【００３０】
本発明において、また本開示に渡って定義される通り、１またはそれ以上の活性成分とホモポリアミノ酸との間の関係を規定するために使用されている用語「会合」または「会合する」は、特に、活性成分が、特に、弱い結合により、例えばイオン結合および／または疎水性接触によりホモポリアミノ酸に結合し、および／またはホモポリアミノ酸により封入されることを意味する。
【００３１】
好ましくは、本発明によるホモポリアミノ酸は、アルファ−Ｌ−グルタメートおよび／またはアルファ−Ｌ−グルタミン酸単位、またはアルファ−Ｌ−アスパルテートおよび／またはアルファ−Ｌ−アスパラギン酸単位を含むホモオリゴマーまたはホモポリマーである。
【００３２】
疎水性基ＨＧは、有利かつ賢明には、
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、および
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよいＣ8〜Ｃ30（ポリ）環式基
からなる群から選ばれる。
【００３３】
結合ＸおよびＹが直接共有結合である場合、ＨＧの前駆体は、実際には、限定を意味せずに、アルコール、カルボン酸およびアミンからなる群から選ばれ、これらの化合物は、当業者により容易に官能化することが可能である。
その場合、ＨＧはアミド、エステル、カーボネート、カルバメートまたは尿素結合によりＰＡＡの両末端に結合される。
【００３４】
結合ＸおよびＹがＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価（例えば、二価）基である場合、ＨＧの前駆体は、好ましくは、ＸおよびＹが直接共有結合である場合と同じ種から選ばれる。
しかしながら、このとき、ＨＧは、結合（またはスペーサ基）Ｘ、Ｙと共有結合を形成し、ＰＡＡ末端に直接結合しない。
すなわち、Ｘ、Ｙは一方でＨＧを他方でＰＡＡ末端に結合する橋である。
【００３５】
ＸおよびＹは、独立に、ＨＧの官能基およびＰＡＡ部分のＮ−末端およびＣ−末端基と反応し得る官能性化合物から誘導される基から選ばれる。これらの官能性化合物は、有利には、ＰＡＡホモポリマー部分の構成モノマー単位と異なる「アミノ酸」単位、アミノアルコール、ジアミン、二酸、ジオールおよびヒドロキシ酸からなる群に属し得る。
いずれにしても、化学結合ＰＡＡ−（ＸまたはＹ）および（ＸまたはＹ）−ＨＧは、また、好ましくはアミド、エステル、カーボネート、カルバメートまたは尿素結合である。
【００３６】
本発明の１つの好ましい態様において、ホモポリアミノ酸は、以下の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化５】
【化６】
【化７】
【００３７】
｛ここで、
Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、Ｃ8〜Ｃ30の疎水性基であり、
Ｒ3は、線状Ｃ2〜Ｃ6アルキル基であり、
Ｒ4は、Ｈであるか、または、好ましくは
有利にはナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムからなる亜群から選ばれる、金属カチオンと、
有利には
アミンに基づくカチオン、
オリゴアミンに基づくカチオン、
ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づくカチオン、および
アミノ酸に基づき、有利にはリジンまたはアルギニンに基づくカチオンからなるクラスから選ばれるカチオン
からなる亜群から選ばれる、有機カチオンと、
有利にはポリリジンおよびオリゴリジンからなる亜群から選ばれる、カチオン性ポリアミノ酸と
からなる群から選ばれる、カチオン性基であり、
Ｒ5は、Ｃ2〜Ｃ6アルキル、ジアルコキシまたはジアミン基であり、
Ａは、独立に、−ＣＨ2−（アスパラギン酸単位）または−ＣＨ2−ＣＨ2−（グルタミン酸単位）であり、
Ｂは、直接共有結合、または下記式：
【化８】
【００３８】
（ここで、Ｒ5は、天然アミノ酸に特徴的な基であり、好ましくは、Ｈ（その場合、Ｂは、グリシン残基）、メチル（その場合、Ｂは、アラニン残基）、イソブチル（その場合、Ｂは、ロイシン残基）、イソプロピル（その場合、Ｂは、バリン残基）およびＣＨ2Ｐｈ（その場合、Ｂは、フェニルアラニン残基）からなる群から選ばれる）のアミノ酸残基からなる結合であり、
ｎ＋ｍは、重合度であり、３〜１０００、好ましくは２０〜３００である｝
のうちの１つを有する。
【００３９】
特に好ましくは、Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、または
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環式基
である。
【００４０】
実際、疎水性基ＨＧは、例えば、次の種：パルミテート、ステアレート、コレステリルおよびトコフェリルからなる群から選ばれる基である。
【００４１】
他の定義によると、本発明によるホモポリアミノ酸は、２０００〜１００，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、５０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００４２】
注目すべきことに、本発明のホモポリアミノ酸は、疎水性基の性質およびホモポリアミノ酸の重合度に依存して、様々の様態で使用することができる。本発明で想定されている種々の形態の活性成分を封入するためのポリマーを生成する方法は、当業者に知られている。さらなる詳細については、以下の特に関連のある数件の文献を参照することができる：
"Microspheres, Microcapsules and Liposomes; vol 1. Preparation and chemical applications" Ed. R. Arshady, Citus Books 1999. ISBN: 0-9532187-1-6.
"Sustained-Release Injectable Products" Ed. J. Senior and M. Radomsky, Interpharm Press 2000. ISBN: 1-57491-101-5.
"Colloidal Drug Delivery Systems" Ed. J. Kreuter, Marcel Dekker, Inc. 1994. ISBN: 0-8247-9214-9.
"Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology" Ed. D.L. Wise, Marcel Dekker, Inc. 2000. ISBN: 0-8247-0369-3。
【００４３】
これらのホモポリアミノ酸は、また、ホモポリマーの長さ（重合度）および疎水性基の性質に依存して、ｐＨ７．４の水（例えば、リン酸緩衝液を有する）に分散し、ホモポリマーの濃度に依存してコロイド溶液または懸濁液または構造化もしくは非構造化ゲルを与えるという点で極めて価値のあるものである。さらに、ポリアミノ酸（粒状または非粒状形態）は、タンパク、ペプチド、または小さな分子のような活性成分を封入し、またはそれと容易に会合し得る。好ましい生成方法は、本出願人の名義に係る特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８に記載された方法であり、これは、ホモポリマーを水中に分散させ、その溶液をＡＰの存在下でインキュベートすることからなる。ついで、本発明によるホモポリアミノ酸からなる担持粒子のこのコロイド溶液を０．２μｍフィルタで濾過した後、患者に直接注射することができる。
【００４４】
親水性／疎水性比が減少すると、ホモポリマーは、ＡＰと会合することができる、またはＡＰを封入することができるミクロ粒子を形成し得る。このコンテキストにおいて、ミクロ粒子は、ＡＰとホモポリマーを適切な有機溶媒中に共可溶化させたのち、その混合物を水中での析出に供することによって形成することができる。ついで、粒子を、濾過により回収した後、経口投与のために（ゼラチンカプセルの形態、圧縮および／または塗布形態、あるいはオイル中の分散物の形態）または水中に再分散させた後腸管外投与のために用いることができる。
【００４５】
１つの変形例において、ホモポリマーは、Ｎ−メチルピロリドンのような生体適合性溶媒、またはミグリオール（Mygliol）（登録商標）のような適切なオイル中に溶解させた後、筋肉内または皮下ルートによりまたは腫瘍中に注射することができる。溶媒またはオイルの拡散は、注射部位においてホモポリマーの析出をもたらし、かくして貯蔵物（depot）を形成する。そこで、これらの貯蔵物は、ホモポリマーの拡散によるおよび／またはエロージョンによるおよび／または加水分解もしくは酵素分解による制御放出を確保する。
【００４６】
マイクロ粒子の形態の本発明によるホモポリアミノ酸が好ましいということとは独立に、中性またはイオン化形態にある本発明のホモポリマーは、より一般的に、それ自体で、または液体、固体またはゲル組成物として、および水性媒体もしくは有機媒体中で用いることができる。
【００４７】
ポリアミノ酸に基づくホモポリマーは、ｐＨおよび組成に依存して、中性（ＣＯＯＨの形態）か、またはイオン化されている（ＣＯＯ-アニオン）かのいずれかであるカルボキシル基を含有することを理解すべきである。そのために、水相中の溶解性は、ホモポリマー（疎水性単位でグラフト化されていない）中の遊離ＣＯＯＨの比率とｐＨの直接関数である。水溶液中で、対カチオンは、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムのような金属カチオン、またはトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたはポリアミン様のポリエチレンイミンのような有機カチオンであり得る。
【００４８】
本発明のホモポリマーは、例えば、当業者に知られている方法により得られる。第１に、アルファタイプのポリアミノ酸を得るために、最も普通の技術は、アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の重合に基づくものであり、これは、例えば、論文"Biopolymers"、1976、15、1869、およびH.R. Kricheldorfによる"Alpha-amino acid N-carboxy anhydride and related heterocycles"と題する研究（Springer Verlag （1987））に記載されていることを指摘しておく。ＮＣＡ誘導体は、好ましくは、ＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚ（Ｂｚ＝ベンジル）である。ベンジル基は、ホモポリマーまたは疎水性基の他の化学的官能基に影響を及ぼすことなく、選択的に加水分解され得るからである。
【００４９】
例として、一般構造（Ｉ）のホモポリマーは、特に、以下のスキームにしたがって得ることができる（ここで、Ｒ1＝Ｒ2＝ステアレート基、Ｒ3＝−（ＣＨ3）2−、ポリアミノ酸は、ポリグルタメート）：
【化９】
【００５０】
構造（ＩＩ）のホモポリマーは、特に、次の反応シーケンスにより得ることができる：アミン基を担持する疎水性基によるＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚの重合を開始して、１の末端アミン基を有する中間体（ＩＩ−Ａ）を得た後、中間体（ＩＩ−Ａ）を酸二塩化物、ジイソシアネートまたはジクロロホルメートのような適切な二官能性化合物とカップリングさせる。
【００５１】
構造（ＩＩＩ）のホモポリマーは、次に、中間体（ＩＩ−Ａ）を酸塩化物またはクロロホルメートのような官能化疎水性基と反応させることにより得ることができる．
例として、タイプ（ＩＩ−Ａ）の中間体化合物は、特に、次のスキームに従って得ることができる（Ｒ1'は、ドデカノール、Ｂは、ロイシン）：
【化１０】
【００５２】
重合度は、モノマーに対する開始剤のモル比により定義されることに注意すべきである。
【００５３】
他の特徴によると、本発明は、上記定義の少なくとも１種のホモポリアミノ酸と、任意に治療活性成分、化粧料活性成分、ダイエットまたは植物衛生活性成分であり得る少なくとも１種の活性成分を含む薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物に関する。
【００５４】
本発明の１つの価値のある提供によると、活性成分は、共有化学結合以外の１またはそれ以上の結合によりホモポリアミノ酸と会合する。
【００５５】
１またはそれ以上のＡＰを本発明によるグラフト化ホモポリアミノ酸と会合させる技術は、特に、特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８に記載されている。これは、少なくとも１種の活性成分を、粒子ＶＰを含有する液体媒体中に含め入れて、ＶＰ担持、または１種またはそれ以上の活性成分ＡＰと会合したＶＰのコロイド分散物を与えることからなる。ＡＰがＶＰによりトラップされることをもたらすこの含め入れは、以下の方法により行うことができる：
水溶液中へのＡＰの導入、その後の、コロイド分散物の形態にあるか、単離ＶＰ（凍結乾燥物または析出物）の形態にあるＶＰの添加、または
溶液または純粋もしくは予備配合状態にあるＡＰの、水のような適切な溶媒中の乾燥ＶＰの分散によりすぐさまの使用のために任意に調製された、粒子ＶＰのコロイド懸濁物への添加。
【００５６】
好ましくは、活性成分は、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖：「ＰＥＧ化タンパク」）に結合したタンパク、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである。
【００５７】
１つの変形例において、活性成分は、「小さな」疎水性、親水性または両親媒性有機分子である。
本開示において定義する通り、「小さな」分子は、特に、小さな非タンパク分子である。
【００５８】
本発明によるホモポリアミノ酸と会合し得るＡＰの例として、それらがナノ粒子またはミクロ粒子の形態にあってもなくても、以下のものを挙げることができる：
(1)インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エイリスロポエチン、またはサイトカインのようなタンパク；
(1)ロイプロリドまたはシクロスポリンのようなペプチド；
(1)アントラサイクリン、タキソイドまたはカンプトセシン族に属するもののような小さな分子；および
(1)それらの混合物。
【００５９】
１つの態様において、本発明の組成物は、ゲル、溶液懸濁物、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、移植片、粉末またはフィルムの形態にある。
その特に好ましい形態の１つにおいて、本組成物は、活性成分を負荷されていてもいなくても、水相中のホモポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルのコロイド懸濁物である。
【００６０】
他の態様において、本発明の組成物は、生体適合性溶媒中の溶液の形態にあり、皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射することができる。
【００６１】
本発明による組成物が薬剤組成物である場合、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与することができる。
【００６２】
皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射できる、生体適合性溶媒中の溶液の形態にある組成物も想定され得る。
【００６３】
他の変形例において、本発明による組成物は、それが、注射部位において貯蔵物（depot）を形成し得るように調製される。
【００６４】
本発明は、さらに、本発明によるホモポリアミノ酸および活性成分を含み、
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬（これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得る）；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の調製に用いることのできる組成物に関する。
【００６５】
さらに他の特徴によると、本発明は、
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬（これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得る）；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の製造方法に関し、この方法は、上記定義の少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または上に記載した組成物を用いることから実質的になる。
【００６６】
本発明は、さらに、本開示において記載する組成物を、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与することから実質的になる治療処置に関する。
【００６７】
本発明の具体的な変形例において、この治療処置方法は、上記組成物を生体適合性溶媒中の溶液に変換した後、これを、皮下または筋肉内ルートにより、または腫瘍中に、好ましくは組成物が注射部位に貯蔵物（depot）を形成するように、注射することから実質的になる。
【００６８】
テレケリックホモポリアミノ酸の合成、そのＡＰ担持システム（安定な水性コロイド懸濁物）への変換、およびかかるシステムがタンパクを会合して薬剤組成物を形成する能力の立証を記述する以下の例から、本発明は、よりよく理解され、その利点および変形例が明らかとなるであろう。
【００６９】
例１：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ Ｃ１８／Ｃ１８の合成
【化１１】
【００７０】
工程１：重合
窒素気流下の１Ｌ反応器中で、３９．５ｇのＮＣＡ ＧｌｕＯＢｚを４０℃の４９５ｍｌのＮＭＰに溶解させる。０．３３ｇの１，４−ブタンジアミンを５ｍｌのＮＭＰに溶かした後、この反応媒体に加える。９０％のＮＣＡ変換率で、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、５．０ｍｌ）を添加することにより重合を停止させる。メタノール／ジイソプロピルエーテル混合物（７００／２８００ｍｌ）中でポリマーを析出させ、濾別した後メタノール（２×１ｌ）およびジイソプロピルエーテル（２×１ｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃のオーブン中で乾燥させて、１０．８ｇのテレケリックポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ・２ＨＣｌを得る。
数平均分子量（Ｍｎ）（ＧＰＣにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、４．５ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７１】
工程２：末端アミンのグラフト化
ついで、６ｇの上記ポリマーを、室温で、３００ｍｌのＴＨＦに溶解させる。この溶液を０℃に冷却してから、塩化パルミトイル（０．８９ｇ）を添加する。最後に、０．４７ｇのトリエチルアミンを加える。ついで、この媒体を１時間で室温に戻す。反応が終了したとき、反応媒体を２．１ｌのジイソプロピルエーテルに注ぐ。析出物を濾別し、９６％エタノール（３×３００ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（３×３００ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃のオーブン中で乾燥させて、６．３ｇのポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ−Ｃ１８を得る。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、６．１ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７２】
工程３：ベンジルエステルの加水分解
６ｇの上記ポリマーを、室温で、４６ｍｌのＴＦＡに溶解する。ついで、この溶液を０℃に冷却してから、ＨＢｒ（酢酸中３０重量、２０．６ｍｌ、すなわち、４当量）を滴下する。この添加が終了したとき、媒体を室温で４時間攪拌する。反応の終了をＴＦＡ−ｄ中、反応媒体の1Ｈ ＮＭＲによりチェックする。ついで、反応媒体を水／ジイソプロピルエーテル混合物（５０／５０、合計体積３２４ｍｌ）に注ぐ。ついで、ポリマーをフリット上で濾別し、ジイソプロピルエーテル（３×１００ｍｌ）で洗浄する。このポリマーを、真空下、４０℃で４８時間乾燥させて、３．３ｇのポリマーを得る。
ポリマーの両末端にグラフト化した疎水性基の存在は、ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより確認され、重合度は、３０である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、６．１ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７３】
工程４：ポリマーの水中への懸濁
２．７ｇの上記ポリマーを、１００ｍｌの脱塩水中に懸濁させる。２１ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ溶液をゆっくり加える。全てのポリマーが溶解し、ｐＨが７．４付近であるとき、中和は終了する。得られた溶液は、目で見て透明であり、室温で経時的に安定である。
【００７４】
例２：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１２／Ｃ１２の合成
【化１２】
【００７５】
工程１：重合
１９２ｍｌのＮＭＰを、窒素下、５００ｍｌの反応器中で、４０℃に加熱する。ついで、この溶媒中に６０ｇのＮＣＡ ＧｌｕＯＢｚを溶解させる。混合物が均質になったとき、ＮＭＰ中の開始剤の溶液（４０℃の２５ｍｌ中の２．２８ｇのＰｈｅＯＣ１２）を反応媒体中に導入する。ＮＣＡ変換率を見積もるために、反応をＩＲにより追跡する。９０％で、過剰のＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、４．２７ｍｌ）の添加により反応を停止させる。ついで、反応媒体を４．５ｌの水にゆっくり注ぐ。ついで、析出したポリマーを濾別し、酸性メタノール（２×３１０ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×３１０ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃で乾燥させて、３９．９ｇのポリマーｐＧｌｕＯＢｚ−ＰｈｅＯＣ１２を得る（すなわち、収率８８％）。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１２．５ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７６】
工程２：末端アミンのグラフト化
ついで、１０ｇのポリマーを、室温で、３６１ｍｌのＴＨＦに溶解させる。この溶液を０℃に冷却してから、ＴＨＦ中に希釈した塩化ラウロイル（７ｍｌのＴＨＦ中０．６６ｇ）を添加する。最後に、０．５ｍｌのトリエチルアミンを添加する。ついで、この媒体を１時間の反応時間で室温に戻す。トリエチルアミン塩酸塩の析出物のすばやい形成が観察される。反応が終了したとき、反応媒体を１．４ｌのジイソプロピルエーテルに注ぐ。析出物を濾別し、９６％エタノール（２×３６０ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×３６０ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下４０℃のオーブン中で乾燥させて、９．５ｇのポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ−ＰｈｅＯＣ１２／C１２を得る。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１１．９ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７７】
工程３：ベンジルエステルの加水分解
８．９ｇの上記ポリマーを室温で６８ｍｌのＴＦＡに溶解させる。ついで、この溶液を０℃に冷却してから、ＨＢｒ（酢酸中３０重量％、３０ｍｌ、すなわち４当量）を滴下する。この添加が終了したとき、媒体を室温で４時間攪拌する。反応の終了をＴＦＡ−ｄ中、反応媒体の1Ｈ ＮＭＲによりチェックする。ついで、反応媒体を水／ジイソプロピルエーテル混合物（５０／５０、合計体積４８０ｍｌ）中に注ぐ。ついで、ポリマーをフリット上で濾別し、エタノールエタノール（２×１００ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×１３５ｍｌ）で洗浄する。ポリマーを、真空下、４０℃で４８時間乾燥させ、４．９３ｇのｔ−ｐＧｌｕＯＨ−ＰｈｅＯＣ１２／Ｃ１２（すなわち、収率９０％）を得る。
ポリマーの両末端にグラフト化した疎水性基の存在は、ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより確認され、重合度は、３６である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１０．０ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７８】
工程４：ポリマーの水中への懸濁
４．４ｇの上記ポリマーを１５０ｍｌの脱塩水に懸濁させる。３１ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ溶液を徐々に加える。中和は、全てのポリマーが溶解し、ｐＨが７．４付近にあるとき終了する。得られた溶液は、見た目に透明であり、室温で経時的に安定である。
【００７９】
例３：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１８／Ｃ１８の合成
【化１３】
【００８０】
このポリマーは、例２に記載した方法と同じ方法により合成した。ＴＦＡ−ｄ中で1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３８である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、７．０ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８１】
例４：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１８／Ｔの合成
【化１４】
【００８２】
このポリマーは、例２に記載したプロセスと同じプロセスにより合成した。Ｄ，Ｌ−アルファ−トコフェロール基のグラフト化は、対応するクロロホルメート誘導体との反応により行った。ＴＦＡ−ｄ中1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３６である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、７．６ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８３】
例５：比較化合物Ｃ１, ｐＧｌｕＯＮａ Ｃ１８の合成
【化１５】
【００８４】
このポリマーは、例２に報告したものと同様の合成法により得る。この場合に用いる開始剤は、ステアリルアミンであり、ポリマーの他端ではグラフト反応を行わない。合成の終わりに、ポリマーは以下の特性を有する：
ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３２である（公称値は、３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、８．３００ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８５】
例６：インスリンとの会合の研究
１ｍｌ当たり１０ｍｇのポリマーと２００ＩＵのインスリン（７．４ｍｇ）を含有するｐＨ７．４の水溶液を調製する。この溶液を室温で２時間インキュベートし、会合したインスリンから遊離インスリンを限外濾過（１００ｋＤａでカットオフ、１８℃において１０，０００ｇ下で１５分）により分離する。ついで、濾液から回収したインスリンをＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）により定量的に測定し、会合したインスリンの量を推定する。結果を以下の表１に記載する。
【表１】
【００８６】
この結果は、本発明のポリマーがインスリンと会合し得、１００ｋＤａよりも大きなサイズを有するコロイド懸濁物を与えること、およびインスリンとの会合能が非常に高いことを立証している。
【００８７】
これらのポリマーの会合能は、これらポリマーを担持材として好適なものとさせている。
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、活性成分（ＡＰ）の担持（vectorization）に特に有用な、生分解性ホモポリアミノ酸に基づく新規な物質に関する。
【０００２】
本発明は、さらに、これらのホモポリアミノ酸に基づく新規な薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物に関する。これらの組成物は、ＡＰの担持を可能とするタイプのものであり得、好ましくはエマルジョン、ミセル、粒子、ゲル、移植片またはフィルムの形態を取る。
【０００３】
当該ＡＰは、有利には、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内、経頬または他のルートにより動物またはヒトの器官に投与し得る生物学的に活性な化合物である。
本発明がより具体的に関係するＡＰは、タンパク、糖タンパク、ペプチド、多糖、リポ多糖、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドおよび有機分子であるが、限定を意図するものではない。しかしながら、それらは、また、化粧料製品または除草剤、殺虫剤、防カビ剤等のような植物衛生製品であり得る。
【０００４】
活性成分、特に医薬活性成分の担持の分野において、多くの場合に、
活性成分を、作用の部位に到達するまで分解（加水分解、当該部位での析出、酵素分解等）から保護すること
および／または所定の期間にわたって治療レベルを維持するように、活性成分の放出速度を制御すること、
および／または活性成分を作用部位まで輸送（保護を伴って）すること
の必要性がある。
【０００５】
これらの目的のために、いくつかのタイプのポリマーが研究されてきており、そのいくつかは、市販さえされている。挙げることのできる例は、ポリ乳酸、ポリ乳酸−グリコール酸、ポリオキシエチレン−オキシプロピレン、ポリアミノ酸または多糖タイプのポリマーである。これらのポリマーは、例えばマス移植片（mass implant）、ミクロ粒子、ナノ粒子、ベシクル、ミセルまたはゲルの製造のための出発物質を構成する。これらのポリマーがそのような系の製造のために好適でなければならないことに加えて、それらは、また、生体適合性であり、非毒性であり、非免疫原性であり、経済的でなければならず、また体内から容易に除去できるか、および／または生分解性でなければならない。この最後の点に関し、さらに、器官内での生分解は非毒性生成物を生成させることが必須である。
【０００６】
ＡＰ担持システムの製造のための出発物質として使用されるポリマーに関する先行技術を例示するために、以下、種々の特許、特許出願または科学論文に言及する。
【０００７】
特許ＵＳ−Ｂ−４，６５２，４４１は、ホルモンＬＨ−ＲＨを封入するポリラクチドマイクロカプセルを記載している。これらのマイクロカプセルは、水中油中水型エマルジョンを調製することにより製造され、ホルモンを含有する水性内層、ホルモンを固定するための物質（ゼラチン）、油性ポリラクチド層および水性外層（ポリビニルアルコール）を含む。ＡＰは、皮下注射後２週間以上の期間にわたって放出され得る。
【０００８】
特許ＵＳ−Ｂ−６，１５３，１９３は、アドリアマイシンのような抗癌剤の担持のための両親媒性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ミセルに基づく組成物を記載している。
【０００９】
アキヨシら（J. Controlled Release 1998, 54, 313-320）は、コレステロールのグラフト化により疎水性化され、水中でナノ粒子を形成するプルランを記載している。これらのナノ粒子は、可逆的にインスリンと錯化し得るものであり、安定なコロイド分散物を形成する。
【００１０】
特許ＵＳ−Ｂ−４，３５１，３３７は、活性成分の制御放出のために移植片またはミクロ粒子の形態で用いることができる、ロイシンとグルタメートに基づく両親媒性コポリアミノ酸を記載している。活性成分は、該ポリマーの分解速度に依存して非常に長期間にわたって放出され得る。
【００１１】
特許ＵＳ−Ｂ−４，８８８，３９８は、ポリグルタメートまたはポリアスパルテートおよび任意にポリロイシンに基づき、ポリアミノ酸鎖に沿ってランダムに位置するアルコキシカルボニルメチルタイプの懸垂基を有するポリマーを記載している。側基、例えばメトキシカルボニルメチル基でグラフト化されたこれらのポリアミノ酸は、ＡＰを含有する長期放出性生分解性移植片の形態で使用することができる。
【００１２】
特許ＵＳ−Ｂ−５，９０４，９３６は、安定なコロイド懸濁物を形成し得、生物学的に活性なタンパクと、それを変性させることなく自発的に会合し得るポリロイシン−ポリグルタメートブロックポリマーから得られるナノ粒子を記載している。タンパクは、長期に渡って制御された様式で、インビボ中で放出され得る。
【００１３】
特許ＵＳ−Ｂ−５，４４９，５１３は、ポリオキシエチレンブロックとポリアミノ酸ブロック、例えばポリ（ベータ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート）とを含む両親媒性ブロックコポリマーを記載している。これらのポリオキシエチレン−ポリベンジルアスパルテートポリマーは、アドリアマイシンまたはインドメタシンのような疎水性活性分子を封入し得るミセルを形成する。
【００１４】
特許出願ＷＯ−Ａ−９９／６１５１２は、ポリリジンおよびポリオルニチンであって、疎水性基（ポリリジンまたはポリオルニチンに結合したパルミチン酸）および親水性基（ポリオキシエチレン）により官能化されたものを記載している。コレステロールの存在下で、これらのポリマー、例えばポリオキシエチレンとパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、ドキソルビシンまたはＤＮＡを封入し得るベシクルを形成する。ポリリジンに基づくこれらのポリマーは、生理学的媒体中でカチオン性である。
【００１５】
本出願人の名義に係る特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８は、安定なコロイド懸濁物を形成し、および生物学的に活性なタンパクと、それを変性させることなく、自発的に会合し得るポリ（グルタミン酸ナトリウム）−ポリ（グルタミン酸メチル、エチル、ヘキサデシルもしくはドデシル）ブロックまたはランダムポリマーを記載している。タンパクは、長期に渡って制御された様式でインビボ中で放出され得る。これらの両親媒性コポリアミノ酸は、疎水性アルキル側鎖の存在により修飾されている。これらのアルキル基は、エステル基を介してポリマー上に共有的にグラフト化される。これらのポリマーは、生理的媒体中でアニオン性である。
【００１６】
担持システムに関するこの先行技術は、鎖の末端に疎水性基を含有する親水性ポリマーに関する複数の文献を含んでいる。
【００１７】
特許ＦＲ２５３３２０９は、８〜２４個の炭素原子を含有する疎水性鎖と、親水性または親水性化ペプチド鎖からなるポリペプチドを記載している。これらの生成物は、特に、乳化剤または液晶として有用である。
【００１８】
同じ精神内で、リポソームの技術分野において、以下のものを挙げることができる。
【００１９】
特許出願ＷＯ−Ａ−０２／０９８９５１は、両鎖末端の一方に脂質基を有するポリアミノ酸またはそのある種の誘導体を記載している。これらは、例えば、ヘプタデシルオクタデシルアミン末端基を有するポリ（ガンマ−Ｌ−ベンジル−Ｌ−グルタメート）またはポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミン）であり得る。これらのポリマーは、リポソームの調製に有用である。
【００２０】
特許ＵＳ−Ｂ−５，５３４，２４１は、鎖中においてジエチレントリアミンペンタ酢酸タイプのキレート基により置換され、鎖の一端においてＮ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧＰＥ）で形成された親油性基により置換されたポリリジン残基からなる両親媒性化合物を開示している。これらの化合物は、リポソームの２分子膜中に組み込むことが意図されている。
【００２１】
同じことが、特許ＵＳ−Ｂ１−６，２８４，２６７に記載された両親媒性ポリマーにも当てはまる。これらの両親媒性ポリマーは、それらの末端に結合した少なくとも２つの疎水性基を有する線状、分枝または星型の親水性ポリマーである。この特許は、その全ての実施例により証拠付けられるように、実質的に、ポリエチレングリコールに基づく中性の親水性ポリマーに関するものである。さて、このタイプのポリマーは、生分解性でなく、大きな不利点を構成する。したがって、この特許は、ポリグルタメートまたはポリアスパルテートのようなアニオン性線状ポリアミノ酸をテレケリック両親媒性ポリマーの親水性ポリマー部分として用いることを記述しておらず、示唆すらしていない。
【００２２】
すなわち、先行技術には、これまで開発され、医薬活性成分の担持のために提案された非常に多数の解決策があるが、全ての要求に対する答えを見いだすことは困難であり、状況は依然不満足のままである。より具体的には、活性成分の担持のための粒子を製造するための生分解性物質であって、活性成分と可逆的に会合するのに好適なナノ粒子またはミクロ粒子を担持する水性懸濁物を形成し得るものについての満たされていない必要性を同定することが可能であった。
【００２３】
このコンテキストにおいて、本発明の本質的な目的の１つは、動物の生理学的ｐＨ（例えば、７．４のオーダー）でアニオン性であり、特許ＦＲ−Ａ−２５３３２０９または特許ＵＳ−Ｂ１−６，２８４，２６７に記載されたものと比較して、特にタンパク会合能と生分解性の点で改善を示す、新規な線状両親媒性ポリアミノ酸を提供することにある。
【００２４】
本発明の他の本質的な目的は、これらのポリマーが、ＡＰの担持のために使用され得、仕様書の全ての仕様、すなわち、特に、
(1)
容易かつ経済的に安定な水性コロイド懸濁物を形成し、
容易かつ経済的に多くの活性成分と会合し、および
インビボでこれらの活性成分を放出する
能力
(1)生体適合性、
(1)生分解性、
(1)加水分解に対する安定性
の全てを最適に満足することを可能とすることである。
【００２５】
この目的および他の目的は、まず第１に、両端が互いに同じもしくは異なる疎水性基を担持し、以下の一般式：
ＨＧ−Ｘ−ＰＡＡ−Ｙ−ＨＧ
（ここで、
ＨＧは、疎水性基であり、
ＸおよびＹは、独立に、共有結合またはＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価基に相当する結合であり、
ＰＡＡは、アニオン性の親水性ホモポリアミノ酸鎖である）
により表され得ることを特徴とするアニオン性の線状両親媒性ホモポリアミノ酸に関するものである本発明により達成される。
【００２６】
完全に賢明で有利な様式で、特定のアニオン性生分解性線状（linear）ホモポリアミノ酸（例えば、ポリＡｓｐまたはポリＧｌｕ）をＰＡＡ鎖の末端に位置する疎水性基と組み合わせるという思想を持ったということは、本出願人の功績である。
【００２７】
これらの新規な両親媒性ホモポリマーは、タンパクの担持に特に好適であることが立証されている。
【００２８】
本発明で定義される通り、
用語「ホモポリアミノ酸」は、一方で、単一種の「アミノ酸」単位（例えば、グルタミン酸もしくはグルタメート単位またはアスパラギン酸もしくはアスパルテート単位）を含有するＰＡＡを、他方で、２〜２０の「アミノ酸」単位を含有するオリゴアミノ酸のみならず、２０を超える「アミノ酸」単位を含有するホモポリアミノ酸を包含し、
用語「アミノ酸単位」とは、当該アミノ酸の性質を変性しないという条件で置換基と関係なく、ある与えられたアミノ酸の骨格から形成されるモノマーもしくは非モノマー単位をいう。
【００２９】
これらのホモポリマーは、類似の生成物と比較して、１またはそれ以上の活性成分との会合および／またはその封入という驚くべき性質を有する。
さらに、それらは、酵素の存在下で、非毒性の異化生成物／代謝生成物（アミノ酸）へと容易に分解する。
【００３０】
本発明において、また本開示に渡って定義される通り、１またはそれ以上の活性成分とホモポリアミノ酸との間の関係を規定するために使用されている用語「会合」または「会合する」は、特に、活性成分が、特に、弱い結合により、例えばイオン結合および／または疎水性接触によりホモポリアミノ酸に結合し、および／またはホモポリアミノ酸により封入されることを意味する。
【００３１】
好ましくは、本発明によるホモポリアミノ酸は、アルファ−Ｌ−グルタメートおよび／またはアルファ−Ｌ−グルタミン酸単位、またはアルファ−Ｌ−アスパルテートおよび／またはアルファ−Ｌ−アスパラギン酸単位を含むホモオリゴマーまたはホモポリマーである。
【００３２】
疎水性基ＨＧは、有利かつ賢明には、
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、および
任意に少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を含有していてもよいＣ8〜Ｃ30（ポリ）環式基
からなる群から選ばれる。
【００３３】
結合ＸおよびＹが直接共有結合である場合、ＨＧの前駆体は、実際には、限定を意味せずに、アルコール、カルボン酸およびアミンからなる群から選ばれ、これらの化合物は、当業者により容易に官能化することが可能である。
その場合、ＨＧはアミド、エステル、カーボネート、カルバメートまたは尿素結合によりＰＡＡの両末端に結合される。
【００３４】
結合ＸおよびＹがＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価（例えば、二価）基である場合、ＨＧの前駆体は、好ましくは、ＸおよびＹが直接共有結合である場合と同じ種から選ばれる。
しかしながら、このとき、ＨＧは、結合（またはスペーサ基）Ｘ、Ｙと共有結合を形成し、ＰＡＡ末端に直接結合しない。
すなわち、Ｘ、Ｙは一方でＨＧを他方でＰＡＡ末端に結合する橋である。
【００３５】
ＸおよびＹは、独立に、ＨＧの官能基およびＰＡＡ部分のＮ−末端およびＣ−末端基と反応し得る官能性化合物から誘導される基から選ばれる。これらの官能性化合物は、有利には、ＰＡＡホモポリマー部分の構成モノマー単位と異なる「アミノ酸」単位、アミノアルコール、ジアミン、二酸、ジオールおよびヒドロキシ酸からなる群に属し得る。
いずれにしても、化学結合ＰＡＡ−（ＸまたはＹ）および（ＸまたはＹ）−ＨＧは、また、好ましくはアミド、エステル、カーボネート、カルバメートまたは尿素結合である。
【００３６】
本発明の１つの好ましい態様において、ホモポリアミノ酸は、以下の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化５】
【化６】
【化７】
【００３７】
｛ここで、
Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、Ｃ8〜Ｃ30の疎水性基であり、
Ｒ3は、線状Ｃ2〜Ｃ6アルキル基であり、
Ｒ4は、Ｈであるか、または、好ましくは
有利にはナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムからなる亜群から選ばれる、金属カチオンと、
有利には
アミンに基づくカチオン、
オリゴアミンに基づくカチオン、
ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づくカチオン、および
アミノ酸に基づき、有利にはリジンまたはアルギニンに基づくカチオンからなるクラスから選ばれるカチオン
からなる亜群から選ばれる、有機カチオンと、
有利にはポリリジンおよびオリゴリジンからなる亜群から選ばれる、カチオン性ポリアミノ酸と
からなる群から選ばれる、カチオン性基であり、
Ｒ5は、Ｃ2〜Ｃ6アルキル、ジアルコキシまたはジアミン基であり、
Ａは、独立に、−ＣＨ2−（アスパラギン酸単位）または−ＣＨ2−ＣＨ2−（グルタミン酸単位）であり、
Ｂは、直接共有結合、または下記式：
【化８】
【００３８】
（ここで、Ｒ5は、天然アミノ酸に特徴的な基であり、好ましくは、Ｈ（その場合、Ｂは、グリシン残基）、メチル（その場合、Ｂは、アラニン残基）、イソブチル（その場合、Ｂは、ロイシン残基）、イソプロピル（その場合、Ｂは、バリン残基）およびＣＨ2Ｐｈ（その場合、Ｂは、フェニルアラニン残基）からなる群から選ばれる）のアミノ酸残基からなる結合であり、
ｎ＋ｍは、重合度であり、３〜１０００、好ましくは２０〜３００である｝
のうちの１つを有する。
【００３９】
特に好ましくは、Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、または
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環式基
である。
【００４０】
実際、疎水性基ＨＧは、例えば、次の種：パルミテート、ステアレート、コレステリルおよびトコフェリルからなる群から選ばれる基である。
【００４１】
他の定義によると、本発明によるホモポリアミノ酸は、２０００〜１００，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、５０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００４２】
注目すべきことに、本発明のホモポリアミノ酸は、疎水性基の性質およびホモポリアミノ酸の重合度に依存して、様々の様態で使用することができる。本発明で想定されている種々の形態の活性成分を封入するためのポリマーを生成する方法は、当業者に知られている。さらなる詳細については、以下の特に関連のある数件の文献を参照することができる：
"Microspheres, Microcapsules and Liposomes; vol 1. Preparation and chemical applications" Ed. R. Arshady, Citus Books 1999. ISBN: 0-9532187-1-6.
"Sustained-Release Injectable Products" Ed. J. Senior and M. Radomsky, Interpharm Press 2000. ISBN: 1-57491-101-5.
"Colloidal Drug Delivery Systems" Ed. J. Kreuter, Marcel Dekker, Inc. 1994. ISBN: 0-8247-9214-9.
"Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology" Ed. D.L. Wise, Marcel Dekker, Inc. 2000. ISBN: 0-8247-0369-3。
【００４３】
これらのホモポリアミノ酸は、また、ホモポリマーの長さ（重合度）および疎水性基の性質に依存して、ｐＨ７．４の水（例えば、リン酸緩衝液を有する）に分散し、ホモポリマーの濃度に依存してコロイド溶液または懸濁液または構造化もしくは非構造化ゲルを与えるという点で極めて価値のあるものである。さらに、ポリアミノ酸（粒状または非粒状形態）は、タンパク、ペプチド、または小さな分子のような活性成分を封入し、またはそれと容易に会合し得る。好ましい生成方法は、本出願人の名義に係る特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８に記載された方法であり、これは、ホモポリマーを水中に分散させ、その溶液をＡＰの存在下でインキュベートすることからなる。ついで、本発明によるホモポリアミノ酸からなる担持粒子のこのコロイド溶液を０．２μｍフィルタで濾過した後、患者に直接注射することができる。
【００４４】
親水性／疎水性比が減少すると、ホモポリマーは、ＡＰと会合することができる、またはＡＰを封入することができるミクロ粒子を形成し得る。このコンテキストにおいて、ミクロ粒子は、ＡＰとホモポリマーを適切な有機溶媒中に共可溶化させたのち、その混合物を水中での析出に供することによって形成することができる。ついで、粒子を、濾過により回収した後、経口投与のために（ゼラチンカプセルの形態、圧縮および／または塗布形態、あるいはオイル中の分散物の形態）または水中に再分散させた後腸管外投与のために用いることができる。
【００４５】
１つの変形例において、ホモポリマーは、Ｎ−メチルピロリドンのような生体適合性溶媒、またはミグリオール（Mygliol）（登録商標）のような適切なオイル中に溶解させた後、筋肉内または皮下ルートによりまたは腫瘍中に注射することができる。溶媒またはオイルの拡散は、注射部位においてホモポリマーの析出をもたらし、かくして貯蔵物（depot）を形成する。そこで、これらの貯蔵物は、ホモポリマーの拡散によるおよび／またはエロージョンによるおよび／または加水分解もしくは酵素分解による制御放出を確保する。
【００４６】
マイクロ粒子の形態の本発明によるホモポリアミノ酸が好ましいということとは独立に、中性またはイオン化形態にある本発明のホモポリマーは、より一般的に、それ自体で、または液体、固体またはゲル組成物として、および水性媒体もしくは有機媒体中で用いることができる。
【００４７】
ポリアミノ酸に基づくホモポリマーは、ｐＨおよび組成に依存して、中性（ＣＯＯＨの形態）か、またはイオン化されている（ＣＯＯ-アニオン）かのいずれかであるカルボキシル基を含有することを理解すべきである。そのために、水相中の溶解性は、ホモポリマー（疎水性単位でグラフト化されていない）中の遊離ＣＯＯＨの比率とｐＨの直接関数である。水溶液中で、対カチオンは、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムのような金属カチオン、またはトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたはポリアミン様のポリエチレンイミンのような有機カチオンであり得る。
【００４８】
本発明のホモポリマーは、例えば、当業者に知られている方法により得られる。第１に、アルファタイプのポリアミノ酸を得るために、最も普通の技術は、アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の重合に基づくものであり、これは、例えば、論文"Biopolymers"、1976、15、1869、およびH.R. Kricheldorfによる"Alpha-amino acid N-carboxy anhydride and related heterocycles"と題する研究（Springer Verlag （1987））に記載されていることを指摘しておく。ＮＣＡ誘導体は、好ましくは、ＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚ（Ｂｚ＝ベンジル）である。ベンジル基は、ホモポリマーまたは疎水性基の他の化学的官能基に影響を及ぼすことなく、選択的に加水分解され得るからである。
【００４９】
例として、一般構造（Ｉ）のホモポリマーは、特に、以下のスキームにしたがって得ることができる（ここで、Ｒ1＝Ｒ2＝ステアレート基、Ｒ3＝−（ＣＨ3）2−、ポリアミノ酸は、ポリグルタメート）：
【化９】
【００５０】
構造（ＩＩ）のホモポリマーは、特に、次の反応シーケンスにより得ることができる：アミン基を担持する疎水性基によるＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚの重合を開始して、１の末端アミン基を有する中間体（ＩＩ−Ａ）を得た後、中間体（ＩＩ−Ａ）を酸二塩化物、ジイソシアネートまたはジクロロホルメートのような適切な二官能性化合物とカップリングさせる。
【００５１】
構造（ＩＩＩ）のホモポリマーは、次に、中間体（ＩＩ−Ａ）を酸塩化物またはクロロホルメートのような官能化疎水性基と反応させることにより得ることができる．
例として、タイプ（ＩＩ−Ａ）の中間体化合物は、特に、次のスキームに従って得ることができる（Ｒ1'は、ドデカノール、Ｂは、ロイシン）：
【化１０】
【００５２】
重合度は、モノマーに対する開始剤のモル比により定義されることに注意すべきである。
【００５３】
他の特徴によると、本発明は、上記定義の少なくとも１種のホモポリアミノ酸と、任意に治療活性成分、化粧料活性成分、ダイエットまたは植物衛生活性成分であり得る少なくとも１種の活性成分を含む薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物に関する。
【００５４】
本発明の１つの価値のある提供によると、活性成分は、共有化学結合以外の１またはそれ以上の結合によりホモポリアミノ酸と会合する。
【００５５】
１またはそれ以上のＡＰを本発明によるグラフト化ホモポリアミノ酸と会合させる技術は、特に、特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８に記載されている。これは、少なくとも１種の活性成分を、粒子ＶＰを含有する液体媒体中に含め入れて、ＶＰ担持、または１種またはそれ以上の活性成分ＡＰと会合したＶＰのコロイド分散物を与えることからなる。ＡＰがＶＰによりトラップされることをもたらすこの含め入れは、以下の方法により行うことができる：
水溶液中へのＡＰの導入、その後の、コロイド分散物の形態にあるか、単離ＶＰ（凍結乾燥物または析出物）の形態にあるＶＰの添加、または
溶液または純粋もしくは予備配合状態にあるＡＰの、水のような適切な溶媒中の乾燥ＶＰの分散によりすぐさまの使用のために任意に調製された、粒子ＶＰのコロイド懸濁物への添加。
【００５６】
好ましくは、活性成分は、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖：「ＰＥＧ化タンパク」）に結合したタンパク、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである。
【００５７】
１つの変形例において、活性成分は、「小さな」疎水性、親水性または両親媒性有機分子である。
本開示において定義する通り、「小さな」分子は、特に、小さな非タンパク分子である。
【００５８】
本発明によるホモポリアミノ酸と会合し得るＡＰの例として、それらがナノ粒子またはミクロ粒子の形態にあってもなくても、以下のものを挙げることができる：
(1)インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エイリスロポエチン、またはサイトカインのようなタンパク；
(1)ロイプロリドまたはシクロスポリンのようなペプチド；
(1)アントラサイクリン、タキソイドまたはカンプトセシン族に属するもののような小さな分子；および
(1)それらの混合物。
【００５９】
１つの態様において、本発明の組成物は、ゲル、溶液懸濁物、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、移植片、粉末またはフィルムの形態にある。
その特に好ましい形態の１つにおいて、本組成物は、活性成分を負荷されていてもいなくても、水相中のホモポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルのコロイド懸濁物である。
【００６０】
他の態様において、本発明の組成物は、生体適合性溶媒中の溶液の形態にあり、皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射することができる。
【００６１】
本発明による組成物が薬剤組成物である場合、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与することができる。
【００６２】
皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射できる、生体適合性溶媒中の溶液の形態にある組成物も想定され得る。
【００６３】
他の変形例において、本発明による組成物は、それが、注射部位において貯蔵物（depot）を形成し得るように調製される。
【００６４】
本発明は、さらに、本発明によるホモポリアミノ酸および活性成分を含み、
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬（これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得る）；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の調製に用いることのできる組成物に関する。
【００６５】
さらに他の特徴によると、本発明は、
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬（これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得る）；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の製造方法に関し、この方法は、上記定義の少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または上に記載した組成物を用いることから実質的になる。
【００６６】
本発明は、さらに、本開示において記載する組成物を、経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与することから実質的になる治療処置に関する。
【００６７】
本発明の具体的な変形例において、この治療処置方法は、上記組成物を生体適合性溶媒中の溶液に変換した後、これを、皮下または筋肉内ルートにより、または腫瘍中に、好ましくは組成物が注射部位に貯蔵物（depot）を形成するように、注射することから実質的になる。
【００６８】
テレケリックホモポリアミノ酸の合成、そのＡＰ担持システム（安定な水性コロイド懸濁物）への変換、およびかかるシステムがタンパクを会合して薬剤組成物を形成する能力の立証を記述する以下の例から、本発明は、よりよく理解され、その利点および変形例が明らかとなるであろう。
【００６９】
例１：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ Ｃ１８／Ｃ１８の合成
【化１１】
【００７０】
工程１：重合
窒素気流下の１Ｌ反応器中で、３９．５ｇのＮＣＡ ＧｌｕＯＢｚを４０℃の４９５ｍｌのＮＭＰに溶解させる。０．３３ｇの１，４−ブタンジアミンを５ｍｌのＮＭＰに溶かした後、この反応媒体に加える。９０％のＮＣＡ変換率で、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、５．０ｍｌ）を添加することにより重合を停止させる。メタノール／ジイソプロピルエーテル混合物（７００／２８００ｍｌ）中でポリマーを析出させ、濾別した後メタノール（２×１ｌ）およびジイソプロピルエーテル（２×１ｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃のオーブン中で乾燥させて、１０．８ｇのテレケリックポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ・２ＨＣｌを得る。
数平均分子量（Ｍｎ）（ＧＰＣにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、４．５ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７１】
工程２：末端アミンのグラフト化
ついで、６ｇの上記ポリマーを、室温で、３００ｍｌのＴＨＦに溶解させる。この溶液を０℃に冷却してから、塩化パルミトイル（０．８９ｇ）を添加する。最後に、０．４７ｇのトリエチルアミンを加える。ついで、この媒体を１時間で室温に戻す。反応が終了したとき、反応媒体を２．１ｌのジイソプロピルエーテルに注ぐ。析出物を濾別し、９６％エタノール（３×３００ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（３×３００ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃のオーブン中で乾燥させて、６．３ｇのポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ−Ｃ１８を得る。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、６．１ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７２】
工程３：ベンジルエステルの加水分解
６ｇの上記ポリマーを、室温で、４６ｍｌのＴＦＡに溶解する。ついで、この溶液を０℃に冷却してから、ＨＢｒ（酢酸中３０重量、２０．６ｍｌ、すなわち、４当量）を滴下する。この添加が終了したとき、媒体を室温で４時間攪拌する。反応の終了をＴＦＡ−ｄ中、反応媒体の1Ｈ ＮＭＲによりチェックする。ついで、反応媒体を水／ジイソプロピルエーテル混合物（５０／５０、合計体積３２４ｍｌ）に注ぐ。ついで、ポリマーをフリット上で濾別し、ジイソプロピルエーテル（３×１００ｍｌ）で洗浄する。このポリマーを、真空下、４０℃で４８時間乾燥させて、３．３ｇのポリマーを得る。
ポリマーの両末端にグラフト化した疎水性基の存在は、ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより確認され、重合度は、３０である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、６．１ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７３】
工程４：ポリマーの水中への懸濁
２．７ｇの上記ポリマーを、１００ｍｌの脱塩水中に懸濁させる。２１ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ溶液をゆっくり加える。全てのポリマーが溶解し、ｐＨが７．４付近であるとき、中和は終了する。得られた溶液は、目で見て透明であり、室温で経時的に安定である。
【００７４】
例２：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１２／Ｃ１２の合成
【化１２】
【００７５】
工程１：重合
１９２ｍｌのＮＭＰを、窒素下、５００ｍｌの反応器中で、４０℃に加熱する。ついで、この溶媒中に６０ｇのＮＣＡ ＧｌｕＯＢｚを溶解させる。混合物が均質になったとき、ＮＭＰ中の開始剤の溶液（４０℃の２５ｍｌ中の２．２８ｇのＰｈｅＯＣ１２）を反応媒体中に導入する。ＮＣＡ変換率を見積もるために、反応をＩＲにより追跡する。９０％で、過剰のＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、４．２７ｍｌ）の添加により反応を停止させる。ついで、反応媒体を４．５ｌの水にゆっくり注ぐ。ついで、析出したポリマーを濾別し、酸性メタノール（２×３１０ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×３１０ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下、４０℃で乾燥させて、３９．９ｇのポリマーｐＧｌｕＯＢｚ−ＰｈｅＯＣ１２を得る（すなわち、収率８８％）。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１２．５ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７６】
工程２：末端アミンのグラフト化
ついで、１０ｇのポリマーを、室温で、３６１ｍｌのＴＨＦに溶解させる。この溶液を０℃に冷却してから、ＴＨＦ中に希釈した塩化ラウロイル（７ｍｌのＴＨＦ中０．６６ｇ）を添加する。最後に、０．５ｍｌのトリエチルアミンを添加する。ついで、この媒体を１時間の反応時間で室温に戻す。トリエチルアミン塩酸塩の析出物のすばやい形成が観察される。反応が終了したとき、反応媒体を１．４ｌのジイソプロピルエーテルに注ぐ。析出物を濾別し、９６％エタノール（２×３６０ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×３６０ｍｌ）で洗浄する。最後に、生成物を、真空下４０℃のオーブン中で乾燥させて、９．５ｇのポリマーｔ−ｐＧｌｕＯＢｚ−ＰｈｅＯＣ１２／C１２を得る。
Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１１．９ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７７】
工程３：ベンジルエステルの加水分解
８．９ｇの上記ポリマーを室温で６８ｍｌのＴＦＡに溶解させる。ついで、この溶液を０℃に冷却してから、ＨＢｒ（酢酸中３０重量％、３０ｍｌ、すなわち４当量）を滴下する。この添加が終了したとき、媒体を室温で４時間攪拌する。反応の終了をＴＦＡ−ｄ中、反応媒体の1Ｈ ＮＭＲによりチェックする。ついで、反応媒体を水／ジイソプロピルエーテル混合物（５０／５０、合計体積４８０ｍｌ）中に注ぐ。ついで、ポリマーをフリット上で濾別し、エタノールエタノール（２×１００ｍｌ）で、ついでジイソプロピルエーテル（２×１３５ｍｌ）で洗浄する。ポリマーを、真空下、４０℃で４８時間乾燥させ、４．９３ｇのｔ−ｐＧｌｕＯＨ−ＰｈｅＯＣ１２／Ｃ１２（すなわち、収率９０％）を得る。
ポリマーの両末端にグラフト化した疎水性基の存在は、ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより確認され、重合度は、３６である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、１０．０ｋｇ／ｍｏｌである。
【００７８】
工程４：ポリマーの水中への懸濁
４．４ｇの上記ポリマーを１５０ｍｌの脱塩水に懸濁させる。３１ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ溶液を徐々に加える。中和は、全てのポリマーが溶解し、ｐＨが７．４付近にあるとき終了する。得られた溶液は、見た目に透明であり、室温で経時的に安定である。
【００７９】
例３：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１８／Ｃ１８の合成
【化１３】
【００８０】
このポリマーは、例２に記載した方法と同じ方法により合成した。ＴＦＡ−ｄ中で1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３８である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、７．０ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８１】
例４：ｔ−ｐＧｌｕＯＮａ ＰｈｅＯＣ１８／Ｔの合成
【化１４】
【００８２】
このポリマーは、例２に記載したプロセスと同じプロセスにより合成した。Ｄ，Ｌ−アルファ−トコフェロール基のグラフト化は、対応するクロロホルメート誘導体との反応により行った。ＴＦＡ−ｄ中1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３６である（公称値は３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、７．６ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８３】
例５：比較化合物Ｃ１, ｐＧｌｕＯＮａ Ｃ１８の合成
【化１５】
【００８４】
このポリマーは、例２に報告したものと同様の合成法により得る。この場合に用いる開始剤は、ステアリルアミンであり、ポリマーの他端ではグラフト反応を行わない。合成の終わりに、ポリマーは以下の特性を有する：
ＴＦＡ−ｄ中、1Ｈ ＮＭＲにより測定した重合度は、３２である（公称値は、３０）。Ｍｎ（ＧＰＣ ＮＭＰにより測定）は、ＰＭＭＡ当量において、８．３００ｋｇ／ｍｏｌである。
【００８５】
例６：インスリンとの会合の研究
１ｍｌ当たり１０ｍｇのポリマーと２００ＩＵのインスリン（７．４ｍｇ）を含有するｐＨ７．４の水溶液を調製する。この溶液を室温で２時間インキュベートし、会合したインスリンから遊離インスリンを限外濾過（１００ｋＤａでカットオフ、１８℃において１０，０００ｇ下で１５分）により分離する。ついで、濾液から回収したインスリンをＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）により定量的に測定し、会合したインスリンの量を推定する。結果を以下の表１に記載する。
【表１】
【００８６】
この結果は、本発明のポリマーがインスリンと会合し得、１００ｋＤａよりも大きなサイズを有するコロイド懸濁物を与えること、およびインスリンとの会合能が非常に高いことを立証している。
【００８７】
これらのポリマーの会合能は、これらポリマーを担持材として好適なものとさせている。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
両端が互いに同じもしくは異なる疎水性基を担持し、以下の一般式：
ＨＧ−Ｘ−ＰＡＡ−Ｙ−ＨＧ
（ここで、
ＨＧは、疎水性基であり、
ＸおよびＹは、独立に、共有結合またはＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価基に相当する結合であり、
ＰＡＡは、アニオン性の親水性ホモポリアミノ酸鎖である）
により表され得ることを特徴とするアニオン性の線状両親媒性ホモポリアミノ酸。
【請求項２】
アルファ−Ｌ−グルタメートおよび／またはアルファ−Ｌ−グルタミン酸単位、またはアルファ−Ｌ−アスパルテートおよび／またはアルファ−Ｌ−アスパラギン酸単位を含むことを特徴とする請求項１に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項３】
前記疎水性基が、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、および
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環式基
からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１または２に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項４】
以下の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化１】
【化２】
【化３】
｛ここで、
Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、Ｃ8〜Ｃ30の疎水性基であり、
Ｒ3は、線状Ｃ2〜Ｃ6アルキル基であり、
Ｒ4は、Ｈであるか、または、好ましくは
有利にはナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムからなる亜群から選ばれる、金属カチオンと、
有利には、
アミンに基づくカチオン、
オリゴアミンに基づくカチオン、
ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づくカチオン、および
アミノ酸に基づき、有利にはリジンまたはアルギニンに基づくカチオンからなるクラスから選ばれるカチオン
からなる亜群から選ばれる、有機カチオンと、
有利にはポリリジンおよびオリゴリジンからなる亜群から選ばれる、カチオン性ポリアミノ酸と
からなる群から選ばれる、カチオン性基であり、
Ｒ5は、Ｃ2〜Ｃ6アルキル、ジアルコキシまたはジアミン基であり、
Ａは、独立に、−ＣＨ2−（アスパラギン酸単位）または−ＣＨ2−ＣＨ2−（グルタミン酸単位）であり、
Ｂは、直接共有結合、または下記式：
【化４】
（ここで、Ｒ5は、天然アミノ酸に特徴的な基であり、好ましくは、Ｈ（その場合、Ｂは、グリシン残基）、メチル（その場合、Ｂは、アラニン残基）、イソブチル（その場合、Ｂは、ロイシン残基）、イソプロピル（その場合、Ｂは、バリン残基）およびＣＨ2Ｐｈ（その場合、Ｂは、フェニルアラニン残基）からなる群から選ばれる）のアミノ酸残基からなる結合であり、
ｎ＋ｍは、重合度であり、３〜１０００、好ましくは２０〜３００である｝
のうちの１つを有することを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項５】
前記疎水性基ＨＧが、以下の種：パルミテート、ステアレート、コレステリルおよびトコフェリルからなる群から選ばれる基であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項６】
分子量が、２０００〜１００，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは５０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌであることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の少なくとも１種のホモポリアミノ酸を含む薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物。
【請求項８】
少なくとも１種の活性成分を含むことを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記活性成分が、共有化学結合以外の１またはそれ以上の結合により前記ポリアミノ酸に会合していることを特徴とする特に請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記活性成分が、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖：「ＰＥＧ化タンパク」｝に結合したタンパク、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドであることを特徴とする請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記活性成分が、小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であることを特徴とする請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１２】
経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与できることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１３】
ゲル、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、粉末またはフィルムの形態にあることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１４】
ポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水性相中のコロイド懸濁物であることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１５】
生体適合性溶媒中の溶液の形態にあり、皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射し得ることを特徴とする項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１６】
注射部位に貯蔵物を形成し得ることを特徴とする項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１７】
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬であって、これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得るところの薬；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の製造方法であって、請求項１に記載の少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または請求項７、８または９に記載の組成物を用いることから実質的になることを特徴とする該方法。
【請求項１】
両端が互いに同じもしくは異なる疎水性基を担持し、以下の一般式：
ＨＧ−Ｘ−ＰＡＡ−Ｙ−ＨＧ
（ここで、
ＨＧは、疎水性基であり、
ＸおよびＹは、独立に、共有結合またはＨＧの前駆体とは異なる化学物質から誘導された多価基に相当する結合であり、
ＰＡＡは、アニオン性の親水性ホモポリアミノ酸鎖である）
により表され得ることを特徴とするアニオン性の線状両親媒性ホモポリアミノ酸。
【請求項２】
アルファ−Ｌ−グルタメートおよび／またはアルファ−Ｌ−グルタミン酸単位、またはアルファ−Ｌ−アスパルテートおよび／またはアルファ−Ｌ−アスパラギン酸単位を含むことを特徴とする請求項１に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項３】
前記疎水性基が、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよい線状または分枝Ｃ8〜Ｃ30アルキル、
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30アルキルアリールまたはアリールアルキル、および
少なくとも１単位の不飽和および／または少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含有していてもよいＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環式基
からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１または２に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項４】
以下の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化１】
【化２】
【化３】
｛ここで、
Ｒ1ＣＯ−、Ｒ2ＣＯ−、Ｒ1'、Ｒ2'、Ｒ1"およびＲ2"は、Ｃ8〜Ｃ30の疎水性基であり、
Ｒ3は、線状Ｃ2〜Ｃ6アルキル基であり、
Ｒ4は、Ｈであるか、または、好ましくは
有利にはナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムからなる亜群から選ばれる、金属カチオンと、
有利には、
アミンに基づくカチオン、
オリゴアミンに基づくカチオン、
ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づくカチオン、および
アミノ酸に基づき、有利にはリジンまたはアルギニンに基づくカチオンからなるクラスから選ばれるカチオン
からなる亜群から選ばれる、有機カチオンと、
有利にはポリリジンおよびオリゴリジンからなる亜群から選ばれる、カチオン性ポリアミノ酸と
からなる群から選ばれる、カチオン性基であり、
Ｒ5は、Ｃ2〜Ｃ6アルキル、ジアルコキシまたはジアミン基であり、
Ａは、独立に、−ＣＨ2−（アスパラギン酸単位）または−ＣＨ2−ＣＨ2−（グルタミン酸単位）であり、
Ｂは、直接共有結合、または下記式：
【化４】
（ここで、Ｒ5は、天然アミノ酸に特徴的な基であり、好ましくは、Ｈ（その場合、Ｂは、グリシン残基）、メチル（その場合、Ｂは、アラニン残基）、イソブチル（その場合、Ｂは、ロイシン残基）、イソプロピル（その場合、Ｂは、バリン残基）およびＣＨ2Ｐｈ（その場合、Ｂは、フェニルアラニン残基）からなる群から選ばれる）のアミノ酸残基からなる結合であり、
ｎ＋ｍは、重合度であり、３〜１０００、好ましくは２０〜３００である｝
のうちの１つを有することを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項５】
前記疎水性基ＨＧが、以下の種：パルミテート、ステアレート、コレステリルおよびトコフェリルからなる群から選ばれる基であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項６】
分子量が、２０００〜１００，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは５０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌであることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載のホモポリアミノ酸。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の少なくとも１種のホモポリアミノ酸を含む薬剤、化粧料、ダイエットまたは植物衛生組成物。
【請求項８】
少なくとも１種の活性成分を含むことを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記活性成分が、共有化学結合以外の１またはそれ以上の結合により前記ポリアミノ酸に会合していることを特徴とする特に請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記活性成分が、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖：「ＰＥＧ化タンパク」｝に結合したタンパク、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドであることを特徴とする請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記活性成分が、小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であることを特徴とする請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１２】
経口、腸管外、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または経頬ルートにより投与できることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１３】
ゲル、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、粉末またはフィルムの形態にあることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１４】
ポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水性相中のコロイド懸濁物であることを特徴とする請求項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１５】
生体適合性溶媒中の溶液の形態にあり、皮下または筋肉内ルートによりまたは腫瘍中に注射し得ることを特徴とする項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１６】
注射部位に貯蔵物を形成し得ることを特徴とする項７、８または９に記載の組成物。
【請求項１７】
特に経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内ルートによる投与のための、薬であって、これらの薬の活性成分は、特に、タンパク、糖タンパク、１またはそれ以上のポリアルキレングリコール鎖｛例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、この場合用語「ＰＥＧ化」タンパを用いる｝に結合したタンパク、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび小さな疎水性、親水性または両親媒性有機分子であり得るところの薬；
および／または栄養物；
および／または化粧料または植物衛生製品
の製造方法であって、請求項１に記載の少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または請求項７、８または９に記載の組成物を用いることから実質的になることを特徴とする該方法。
【公表番号】特表２００７−５１０００５（Ｐ２００７−５１０００５Ａ）
【公表日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３０４５０（Ｐ２００６−５３０４５０）
【出願日】平成１６年９月２８日（２００４．９．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０５０４６５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３３１８１
【国際公開日】平成１７年４月１４日（２００５．４．１４）
【出願人】（５９３１２５１６０）フラメル・テクノロジー (22)
【氏名又は名称原語表記】ＦＬＡＭＥＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２８日（２００４．９．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０５０４６５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３３１８１
【国際公開日】平成１７年４月１４日（２００５．４．１４）
【出願人】（５９３１２５１６０）フラメル・テクノロジー (22)
【氏名又は名称原語表記】ＦＬＡＭＥＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】
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