神経突起伸長剤
【課題】本発明は、上記問題を解決するものであり、その目的とするところは、老年型痴呆症等の原因の一つとして考えられている神経変性疾患の予防および／または治療に利用し得る、天然物由来の神経突起伸長剤を提供することにある。
【解決手段】安全性が高く、かつ神経細胞に対して神経突起を伸長し得る、神経突起伸長剤が開示されている。本発明の第一の神経突起伸長剤はローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する。また、本発明の第二の神経突起伸長剤はカルノシン酸を有効成分として含有する。
【解決手段】安全性が高く、かつ神経細胞に対して神経突起を伸長し得る、神経突起伸長剤が開示されている。本発明の第一の神経突起伸長剤はローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する。また、本発明の第二の神経突起伸長剤はカルノシン酸を有効成分として含有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経細胞に対して神経突起伸長作用を有する神経突起伸長剤に関し、より詳細には、神経突起の伸長を促すことにより、アルツハイマー型痴呆症、脳虚血病態、パーキンソン病、ハンチントン病などの神経変性疾患の予防および／または治療に有用な神経突起伸長剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会への移行に伴って老年型痴呆症が増加する傾向にある。これは非常に大きな社会問題となってきている。老年型痴呆症の原因となる疾患は数多く知られている。これらは、脳器質性障害による痴呆、脳以外の臓器疾患に付随した痴呆およびストレスによる身体疾患に起因する痴呆に大別される。特に、その原因の大半を占める脳器質性障害による痴呆は、原因の違いにより脳血管性痴呆症およびアルツハイマー型痴呆症とに分類される。
【０００３】
現在、脳血管性痴呆症に対しては、脳血管拡張薬などがある程度の効果を示すことが知られている。しかし、一方でアルツハイマー型痴呆症に対しては、その発症原因が今なお不明であり、未だ発症を含めその進行を阻止するのに適切な薬物療法も治療法も知られていない。そのため、脳器質性障害による痴呆、特にアルツハイマー型痴呆症に対して有用な医薬品の開発が所望されている。
【０００４】
近年は、神経細胞から分泌される神経成長因子（以下、ＮＧＦと呼ぶことがある）などの神経栄養因子が神経変性疾患に対して優れた効果を示すことが見出され、注目を集めている。ＮＧＦは、神経組織の成長および機能維持にとって重要かつ必要な因子である。ＮＧＦは、末梢神経における知覚および交感神経、ならびに中枢神経における大細胞性コリン作動性ニューロンの成熟、分化および生命維持に不可欠であり、脳損傷時の神経細胞の変性を防ぐという作用を示す。更に、ＮＧＦは、パーキンソン病やハンチントン病などの神経変性疾患に対しても有効であることが示唆されている。これにより、生体内においてＮＧＦレベルを上昇させることは、アルツハイマー型痴呆症、脳血管性痴呆症、パーキンソン病、ハンチントン病のような中枢機能障害、脊髄損傷、末梢神経損傷、糖尿病性神経障害、ならびに筋萎縮変性側索硬化症のような抹消機能障害の治療にも有用であると考えられている。
【０００５】
しかし、ＮＧＦは、モノマーでは１３０００およびダイマーでは２６０００もの分子量を有するタンパク質であり、血管脳関門を通過することができない。そのため、例えば、中枢機能障害の治療を目的とした場合には、脳室内投与が必要となる。さらに、ＮＧＦの大量調製も困難である。このようにＮＧＦ自体の使用には多くの問題がある。結果として、一般に、ＮＧＦ自体を臨床で用いることは非常に困難である。
【０００６】
一方で、古川らはカテコールアミン（エピネフリン、ノルエピネフリン）をＮＧＦ合成促進剤として使用している（非特許文献１参照。）。また、特許文献１にはテアニンがＮＧＦ合成促進剤として働くことが開示されている。同様に、特許文献２にはエイコサンペンタエン酸（ＥＰＡ）またはドコサエキサエン酸（ＤＨＡ）がＮＧＦ合成促進剤として働くことが開示されている。しかし、例えば、エピネフリンおよびノルエピネフリンはホルモン物質であるため、投与によって生体内におけるホルモンの量的バランスを崩すという問題がある。
【０００７】
また、特許文献３には、薬用ニンジンのアルコール抽出物が神経細胞賦活作用を有していることを開示しているが、神経細胞賦活作用を奏する物質までは具体的に特定されていない。
【０００８】
さらに、特許文献４は、生体に対して安全性を高める観点から、天然物のうち食品一般にも利用される植物由来の抽出物を用いた神経突起伸長剤を開示する。特許文献４に記載の植物由来の抽出物は、ミカン科植物由来のポリアルコキシフラボノイドである。このような抽出物の使用は、生体に対して所望でない副作用を防止し得る点で有用である。しかし、こうした植物単独では、一年を通じての生産量・収穫量の確保等が必ずしも安定していないので、むしろ同等またはそれ以上の神経突起伸長作用を有する他の安全な天然物を用いたバリエーションの拡大が所望されている。
【０００９】
【特許文献１】特開平７−１７３０５９号公報
【特許文献２】特開平８−１４３４５４号公報
【特許文献３】特開平６−３１６２７号公報
【特許文献４】特開２００２−６０３４０号公報
【非特許文献１】古川（Ｙ．Ｆｕｒｕｋａｗａ）ら、フェデレーション・オブ・ヨーロピアン・バイオケミカル・ソシエティー・レターズ（Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ），１９８６年，第２０８巻，第２５８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記問題を解決するものであり、その目的とするところは、老年型痴呆症等の原因の一つとして考えられている神経変性疾患の予防および／または治療に利用し得る、天然物由来の神経突起伸長剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起伸長剤である。
【００１２】
１つの実施形態では、上記抽出物はカルノシン酸を含有する。
【００１３】
１つの実施形態では、さらに以下の式（Ｉ）；
【００１４】
【化１】
【００１５】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有する。
【００１６】
本発明はまた、カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起伸長剤である。
【００１７】
１つの実施形態では、カルノシン酸は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の化合物である。
【００１８】
本発明はまた、上記神経突起伸長剤を含有する、医薬品組成物である。
【００１９】
本発明はまた、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物である。
【００２０】
本発明はまた、カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
まず、本発明の１つの局面である、本発明の第一の神経突起伸長剤について説明する。
【００２２】
本発明の第一の神経突起伸長剤は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する。
【００２３】
本発明に用いられる植物の例としては、ローズマリーおよび／またはセージが挙げられる。
【００２４】
本発明に用いられる植物において、用いられ得る部位は特に限定されず、根、茎、葉、葉柄、枝、花または全草、あるいはこれらの組合せのいずれを用いてもよい。本発明においては、特に限定されないが好ましくは葉を用いる。また、上記植物は生の状態のもの、あるいは当業者に周知の方法で所定に乾燥されたもののいずれを用いてもよい。
【００２５】
本発明に用いられる抽出物とは、上記植物を、水、極性または非極性の溶媒、あるいはこれらの混合物を抽出溶媒として用い適切な条件で抽出された抽出物を意味する。
【００２６】
本発明に用いられるローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、例えば以下のように得ることができる。まず、上記植物の所定部位を抽出溶媒に浸漬する。抽出溶媒の量は、上記植物が浸漬し得る量であれば、特に限定はされないが、上記植物の重量に対して２倍量から１００倍量の割合の抽出溶媒が好ましい。使用され得る抽出溶媒の種類としては、特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノールのような低級アルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類、エーテル類、クロロホルム、およびジクロロメタンのような有機溶媒、ならびに水が挙げられる。これらは単独または組合わせて用いられる。本発明においては、メタノール、エタノール、酢酸エチル、またはこれら溶媒と水との組合わせが好ましく、毒性が低いという安全性を考慮すれば、エタノール、または水とエタノールとの混合溶媒がさらに好ましい。上記植物の浸漬時間もまた、各種条件によって変動し得るため特に限定されず、当業者により適切に設定され得る。また、抽出温度も各種条件により変動し得るため特に限定されず、当業者により適切に設定され得る。
【００２７】
上記浸漬後、得られたローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、そのまま用いられてもよい。また、上記植物由来の抽出物は、必要に応じて水分を蒸発させた乾固物またはペースト状物の形態で用いられてもよい。また、必要に応じては当業者が通常用いる手段（例えば、カラムクロマトグラフィー）で精製して用いてもよい。
【００２８】
このようにして得られたローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、以下の式（ＩＩ）；
【００２９】
【化２】
【００３０】
で表されるカルノシン酸を含有し得る。
【００３１】
本発明の第一の神経突起伸長剤において、上記抽出物を有効成分として含有する限り、その含有量は特に限定されないが、好ましくは神経突起伸長剤の重量を基準として、０．００００１重量％〜３０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜１５重量％の割合である。
【００３２】
上記抽出物がカルノシン酸を含有する場合、その含有量は特に限定されないが、抽出物の重量（乾燥重量）を基準として、好ましくは０．００１重量％〜８０重量％、さらに好ましくは０．５重量％〜５０重量％の割合である。
【００３３】
また、本発明の第一の神経突起伸長剤は以下の式（Ｉ）；
【００３４】
【化３】
【００３５】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１つの化合物をさらに含有し得る。
【００３６】
上記式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体は、特に限定されないが、好ましくはカフェ酸エステルであり、さらに好ましくは、カフェ酸メチルエステル、カフェ酸プロピルエステル、カフェ酸オクチルエステル、カフェ酸ベンジルエステルまたはカフェ酸フェネチルエステルである。
【００３７】
上記カフェ酸ならびにその誘導体としては、市販されているもの、化学合成したもの、または種々の天然物から抽出したものが挙げられる。例えば、カフェ酸エステルを化学合成によって製造する場合、出発原料としてカフェ酸を使用し、所定のアルコールと化学反応させることによって所定のカフェ酸エステルを容易に製造することができる。このような化学合成法自体も当業者に公知であり、例えば、ダ．クーニャ．エフ．エム（ｄａ Ｃｕｎｈａ ＦＭ）ら、フリー・ラジカル・リサーチ（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅｒａｒｃｈ），２００４年，第３８巻，第１１号，ｐ．１２４１−１２５３に記載の方法に準じて製造することができる。また、種々の天然物から抽出したものを用いる場合、例えばカフェ酸フェネチルエステルは、プロポリスから当業者が通常用いる手段によって抽出し用い得る。また、必要に応じては当業者が通常用いる手段（例えば、カラムクロマトグラフィー）で精製して用いてもよい。
【００３８】
本発明の第一の神経突起伸長剤に、上記植物由来の抽出物および式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体を含有する場合、その混合比は、特に限定されないが、式（Ｉ）の化合物と上記植物由来の抽出物との重量比が、好ましくは１：９から９：１、より好ましくは３：７から７：３、さらにより好ましくは４：６から６：４である。
【００３９】
次に、本発明の他の局面である、本発明の第二の神経突起伸長剤について説明する。
【００４０】
本発明の第二の神経突起伸長剤は、カルノシン酸を有効成分として含有する。
【００４１】
本発明の第二の神経突起伸長剤において、カルノシン酸とは、以下の式（ＩＩ）；
【００４２】
【化４】
【００４３】
で表される化合物である。上記式（ＩＩ）で表されるカルノシン酸としては、市販されているもの、化学合成したもの、または種々の天然物から抽出したものが挙げられる。上記カルノシン酸は、特に限定されないが、好ましくはローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物に含有し得る形態で用いる。上記植物由来の抽出物は、本発明の第一の神経突起伸長剤に用いられるローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物と同様の方法にて得ることができる。
【００４４】
本発明の第二の神経突起伸長剤において、上記カルノシン酸を有効成分として含有する限り、その含有量は特に限定されないが、神経突起伸長剤の重量を基準として、好ましくは０．００００１重量％〜５０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜３０重量％の割合である。
【００４５】
また、上記第二の神経突起伸長剤は以下の式（Ｉ）；
【００４６】
【化５】
【００４７】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１つの化合物をさらに含有し得る。
【００４８】
上記式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体は、特に限定されないが、好ましくはカフェ酸エステルである。さらに好ましくは、カフェ酸メチルエステル、カフェ酸プロピルエステル、カフェ酸オクチルエステル、カフェ酸ベンジルエステルまたはカフェ酸フェネチルエステルである。上記カフェ酸またはその誘導体は、第一の神経突起伸長剤に用いられ得るカフェ酸またはその誘導体と同様の方法にて得ることができる。
【００４９】
本発明の第二の神経突起伸長剤に、上記カルノシン酸、および式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体を含有する場合、その混合比は、特に限定はされないが、式（Ｉ）の化合物と上記植物由来の抽出物との重量比が、好ましくは１：９から９：１、より好ましくは３：７から７：３、さらにより好ましくは４：６から６：４である。
【００５０】
本発明の第一および第二の神経突起伸長剤においては、上記カフェ酸またはその誘導体以外に添加剤が含有されてもよい。このような添加剤としては、後述する用途および／またはその形態によって必ずしも限定されないが、例えば、水；アルコール；食肉加工品；米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、スイートポテト、大豆、コンブ、ワカメ、テングサなどの一般食品材料およびそれらの粉末；デンプン、水飴、乳糖、グルコース、果糖、スクロース、マンニトールなどの糖類；香辛料、甘味料、食用油、ビタミン類などの一般的な食品添加物；界面活性剤；賦形剤；着色料；保存剤；コーティング助剤；ラクトース；デキストリン；コーンスターチ；ソルビトール；結晶セルロース；ポリビニルピロリドン；油分；保湿剤；増粘剤；防腐剤；香料；ならびにこれらの組合わせが挙げられる。本発明の神経突起伸長剤はさらに必要に応じて他の薬剤（漢方を包含する）を含有していてもよい。このような他の成分および／または他の薬剤の含有量は特に限定されず、当業者によって適切な量が選択され得る。
【００５１】
本発明の第一および第二の神経突起伸長剤は、非経口組成物または経口組成物のいずれかの形態で用いられてもよく、例えば、医薬品、医薬部外品などの医薬組成物として、そのままあるいは他の医薬品と組合わせて用いられてもよく；家畜または養殖魚などの生産分野に利用される飼料組成物として、そのままあるいは他の飼料用材料と組合わせて用いられてもよく；もしくは化粧品などの化粧組成物として、そのままあるいは他の化粧品材料と組合わせて用いられてもよい。
【００５２】
例えば、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が医薬品組成物として用いられる場合、その投与剤形は特に限定されず、日本薬局方に記載の方法にしたがって適切な剤形に加工される。投与剤形のより具体的な例としては、経口投与を目的とする医薬品組成物の場合、カプセル剤、錠剤、粉剤、顆粒剤、細粒剤、除放剤などの剤形が挙げられ、そして非経口投与を目的とする医薬品組成物の場合、静脈注射、皮下注射などの筋肉注射を目的とした注射剤、輸液剤、軟膏等の塗布剤、直腸投与のための坐剤などの剤形が挙げられる。容量は、対象となる者の体重等の条件によって容易に変動し得るため、当業者によって適宜選択され得る。
【００５３】
この医薬品組成物は、当業者に周知の方法によってその形態に加工され得、第３成分として、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油などの希釈剤が混合されていてもよい。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤などが混合されていてもよい。
【００５４】
また、別の例として、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が、食品組成物として用いられる場合、その形態は固形食品に限定されず、飲料（例えば、液体飲料）のようなものを包含される。より具体的な例としては液状、ペースト状、固形状等の形態でなる、茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、乳飲料、菓子類、シロップ類、果実加工品、野菜加工品、漬物類、蓄肉製品、魚肉製品、珍味類、缶・ビン詰類、即席飲食物、内服役、肝油ドロップ、口中清涼剤、ゼリーなどが挙げられるが特にこれらに限定されない。本発明の神経突起伸長剤を含有するこのような食品組成物は、当業者に周知の方法を用いて製造され得る。
【００５５】
本発明に用いられる第一および第二の神経突起伸長剤は、必要に応じて上記のような食品添加剤として許容され得る添加剤とともに、例えば、神経突起を伸長し得る食品である旨の表示を付した飲食物として用いることができる。このような機能の表示を付した飲食品の例としては、特定保健用食品が挙げられる。なお、上記機能の表示は、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示のみに限定されない。このような表示に付されるべき他の機能の例としては、老年型痴呆症が気になる方の食品である旨；神経疾患でお困りの方の食品である旨；などが挙げられる。表示は、使用者にとって上記のような機能が実質的に理解され得る様式で表されておればよく、例えば、当該食品の外装または内装パッケージ、商品カタログ、ポスターなどに対して行われ得る。
【００５６】
さらに別の例として、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が化粧料組成物として用いられる場合、その形態としては、ローション、乳液、クリーム、パウダーなどが挙げられるが、特にこれらに限定はされない。本発明の第一および／または第二の神経突起伸長剤を含有するこのような化粧料組成物は、当業者に公知の手法を用いて製造され得る。
【００５７】
本発明の第一および／または第二の神経突起伸長剤は、その使用形態に応じて当該分野で通常用いる方法によって製造され、その形態に応じた方法で適宜に適量摂取また適用することができる。
【実施例】
【００５８】
以下、本発明は実施例によって具体的に記述する。しかし、これによって本発明は制限されるものではい。
【００５９】
＜実施例１＞
５ｋｇのローズマリーの全草を２０Ｌのエタノールに浸漬し、４０℃にて７２時間抽出を行った。次いで、得られた抽出液を減圧濃縮し、これに２Ｌの精製水を添加した。次いで、精製水の添加により析出した不溶物をろ過により取り出し、ローズマリー抽出物を得た（１０５ｇ）。次いで、得られたローズマリー抽出物を酢酸エチルに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒；酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）で精製することによって、精製物を得た。次いで、ＨＰＬＣで測定し、得られた精製物が、カルノシン酸であることを確認した。
【００６０】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６１】
次いで、上記で得られたカルノシン酸を被検物質Ａとして、分化培地に対して１０μＭの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に添加し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で２日間培養を行った。培養後、細胞を倒立顕微鏡（ＴＥ２０００Ｅ、ＮＩＫＯＮ社製）にて２００倍の倍率で観察し、次いで、細胞の写真撮影を行った。次いで、ジャグジート．エス．ギル（Ｊａｇｊｉｔ Ｓ．Ｇｉｌｌ）ら、モレキュラー・ブレイン・リサーチ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅｒａｒｃｈ），１９９８年，第５７巻，ｐ．１２３−１３１に記載の方法に準じて、神経突起が伸長している細胞数を目視によりカウントした。次いで、所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表１に示す。また、被検物質Ａ（カルノシン酸）を含有した分化培地を添加した細胞の写真を図１に示す。
【００６２】
＜比較例１＞
上記実施例１と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６３】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記実施例１と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した（小数点以下四捨五入）。この結果をコントロールとした。結果を表１に示す。また、被検物質無添加の分化培地を添加した細胞の写真を図２に示す。
【００６４】
＜比較例２＞
上記実施例１と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６５】
次いで、分化培地に対して１０ｎｇ／ｍｌの濃度になるようにＮＧＦを含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製したそれぞれの分化培地を上記実施例１と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。この結果を陽性対照とした。結果を表１に示す。また、ＮＧＦを含有した分化培地を添加した細胞の写真を図３に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
表１に示されるように、実施例１（被検物質Ａ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例1（被検物質無添加）および比較例２（ＮＧＦ）に比べて高い値であった。また、図１〜３に示されるように、比較例1（被検物質無添加）の神経突起がほとんど伸長していないの対して、実施例１（被検物質Ａ）の神経突起が伸長していることが確認できる。このことから、上記カルノシン酸が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、カルノシン酸が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００６８】
＜実施例２＞
６０ｇのセージの全草を３００ｍｌのエタノールに浸漬し、室温で一晩抽出した。次いで、得られた抽出物を１００ｍｌまで減圧濃縮した。次いで、濃縮した抽出物をろ過し、不溶物を除去した。次いで、ろ液に６００ｍｌの精製水を添加し、４℃にて一晩静置した。次いで、再びろ過を行って、水不溶物としてセージ抽出物（乾燥重量４ｇ）を得た。
【００６９】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。次いで、上記で得られたセージ抽出物を被検物質Ｂとして、分化培地に対して５μｇ／ｍｌの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に添加し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で、２日間培養を行った。次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表２に示す。
【００７０】
＜比較例３＞
上記実施例２と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００７１】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記実施例２と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積の全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。この結果をコントロールとした。結果を表２に示す。
【００７２】
【表２】
【００７３】
表２に示されるように、実施例２（被検物質Ｂ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例３（被検物質無添加）に比べて高い値であった。このことから、上記セージ抽出物が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、セージ抽出物が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００７４】
＜実施例３＞
６０ｇのローズマリーの全草を３００ｍｌの９０％エタノール水溶液に浸漬し、４０℃にて４８時間抽出を行った。得られた抽出物を１００ｍｌまで減圧濃縮した。濃縮後、抽出物をろ過して不溶物を除去した。次いで、ろ液に２００ｍｌの精製水を添加し、４℃にて一晩静置した。次いで、再びろ過を行って、水不溶物としてローズマリー抽出物（乾燥重量３．５ｇ）を得た。
【００７５】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃、５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。次いで、上記で得られたローズマリー抽出物を被検物質Ｃとして、分化培地に対して５μｇ／ｍｌの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に３７℃にて５％のＣＯ２条件下で、２日間培養を行った。次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表３に示す。
【００７６】
＜比較例４＞
上記実施例３と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００７７】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製したそれぞれの分化培地を上記実施例３と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した（小数点以下四捨五入）。この結果をコントロールとした。結果を表３に示す。
【００７８】
【表３】
【００７９】
表３に示されるように、実施例３（被検物質Ｃ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例４（被検物質無添加）に比べて高い値であった。このことから、上記ローズマリー抽出物が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、ローズマリー抽出物が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００８０】
＜実施例４：食品の製造＞
実施例３で得たローズマリー抽出物を用いて、以下の組成を有する食品を調製した。
【００８１】
成分 重量（ｇ）
ローズマリー抽出物 １．０
大豆サポニン ３．０
黒酢エキス ２．０
リンゴファイバー ２．０
レシチン １．０
フラクトオリゴ糖 ２．０
果糖 １．０
粉末酢 ０．１
シクロデキストリン １．０
蜂蜜 １．０
骨粉 １．０
デキストリン ４．９
【００８２】
各成分を混合した後、水を噴霧して造粒を行い、入風温度８０℃で乾燥して、顆粒状食品を得た。
【００８３】
＜実施例５：硬ゼラチンカプセルの製造＞
実施例１で得られたカルノシン酸を用いて、以下の組成を有する硬ゼラチンカプセルを調製した。
【００８４】
成分 重量（ｍｇ／カプセル）
カルノシン酸 ２０
デンプン １００
セルロース １００
【００８５】
各成分を混合し均一に混合した後、ゼラチンカプセルに封入し、硬ゼラチンカプセルを得た。
【００８６】
＜実施例６：錠剤の製造＞
実施例３で得られたセージの抽出物を用いて、以下の組成を有する錠剤を調製した。
【００８７】
成分 重量（ｍｇ／錠剤）
セージ抽出物 ２５０
セルロース ４００
二酸化ケイ素 １０
ステアリン酸 ５
【００８８】
各成分を混合し均一に混合した後、打錠し、錠剤を得た。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明は、安全性が高く、かつ神経細胞の神経突起を伸長し得る神経突起伸長剤を提供する。本発明の神経突起伸長剤は、医薬品、医薬部外品または食品組成物等として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】実施例１で得られた、カルノシン酸を含有した分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【図２】比較例１で得られた、無添加の分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【図３】比較例２で得られた、ＮＧＦを含有した分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経細胞に対して神経突起伸長作用を有する神経突起伸長剤に関し、より詳細には、神経突起の伸長を促すことにより、アルツハイマー型痴呆症、脳虚血病態、パーキンソン病、ハンチントン病などの神経変性疾患の予防および／または治療に有用な神経突起伸長剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会への移行に伴って老年型痴呆症が増加する傾向にある。これは非常に大きな社会問題となってきている。老年型痴呆症の原因となる疾患は数多く知られている。これらは、脳器質性障害による痴呆、脳以外の臓器疾患に付随した痴呆およびストレスによる身体疾患に起因する痴呆に大別される。特に、その原因の大半を占める脳器質性障害による痴呆は、原因の違いにより脳血管性痴呆症およびアルツハイマー型痴呆症とに分類される。
【０００３】
現在、脳血管性痴呆症に対しては、脳血管拡張薬などがある程度の効果を示すことが知られている。しかし、一方でアルツハイマー型痴呆症に対しては、その発症原因が今なお不明であり、未だ発症を含めその進行を阻止するのに適切な薬物療法も治療法も知られていない。そのため、脳器質性障害による痴呆、特にアルツハイマー型痴呆症に対して有用な医薬品の開発が所望されている。
【０００４】
近年は、神経細胞から分泌される神経成長因子（以下、ＮＧＦと呼ぶことがある）などの神経栄養因子が神経変性疾患に対して優れた効果を示すことが見出され、注目を集めている。ＮＧＦは、神経組織の成長および機能維持にとって重要かつ必要な因子である。ＮＧＦは、末梢神経における知覚および交感神経、ならびに中枢神経における大細胞性コリン作動性ニューロンの成熟、分化および生命維持に不可欠であり、脳損傷時の神経細胞の変性を防ぐという作用を示す。更に、ＮＧＦは、パーキンソン病やハンチントン病などの神経変性疾患に対しても有効であることが示唆されている。これにより、生体内においてＮＧＦレベルを上昇させることは、アルツハイマー型痴呆症、脳血管性痴呆症、パーキンソン病、ハンチントン病のような中枢機能障害、脊髄損傷、末梢神経損傷、糖尿病性神経障害、ならびに筋萎縮変性側索硬化症のような抹消機能障害の治療にも有用であると考えられている。
【０００５】
しかし、ＮＧＦは、モノマーでは１３０００およびダイマーでは２６０００もの分子量を有するタンパク質であり、血管脳関門を通過することができない。そのため、例えば、中枢機能障害の治療を目的とした場合には、脳室内投与が必要となる。さらに、ＮＧＦの大量調製も困難である。このようにＮＧＦ自体の使用には多くの問題がある。結果として、一般に、ＮＧＦ自体を臨床で用いることは非常に困難である。
【０００６】
一方で、古川らはカテコールアミン（エピネフリン、ノルエピネフリン）をＮＧＦ合成促進剤として使用している（非特許文献１参照。）。また、特許文献１にはテアニンがＮＧＦ合成促進剤として働くことが開示されている。同様に、特許文献２にはエイコサンペンタエン酸（ＥＰＡ）またはドコサエキサエン酸（ＤＨＡ）がＮＧＦ合成促進剤として働くことが開示されている。しかし、例えば、エピネフリンおよびノルエピネフリンはホルモン物質であるため、投与によって生体内におけるホルモンの量的バランスを崩すという問題がある。
【０００７】
また、特許文献３には、薬用ニンジンのアルコール抽出物が神経細胞賦活作用を有していることを開示しているが、神経細胞賦活作用を奏する物質までは具体的に特定されていない。
【０００８】
さらに、特許文献４は、生体に対して安全性を高める観点から、天然物のうち食品一般にも利用される植物由来の抽出物を用いた神経突起伸長剤を開示する。特許文献４に記載の植物由来の抽出物は、ミカン科植物由来のポリアルコキシフラボノイドである。このような抽出物の使用は、生体に対して所望でない副作用を防止し得る点で有用である。しかし、こうした植物単独では、一年を通じての生産量・収穫量の確保等が必ずしも安定していないので、むしろ同等またはそれ以上の神経突起伸長作用を有する他の安全な天然物を用いたバリエーションの拡大が所望されている。
【０００９】
【特許文献１】特開平７−１７３０５９号公報
【特許文献２】特開平８−１４３４５４号公報
【特許文献３】特開平６−３１６２７号公報
【特許文献４】特開２００２−６０３４０号公報
【非特許文献１】古川（Ｙ．Ｆｕｒｕｋａｗａ）ら、フェデレーション・オブ・ヨーロピアン・バイオケミカル・ソシエティー・レターズ（Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ），１９８６年，第２０８巻，第２５８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記問題を解決するものであり、その目的とするところは、老年型痴呆症等の原因の一つとして考えられている神経変性疾患の予防および／または治療に利用し得る、天然物由来の神経突起伸長剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起伸長剤である。
【００１２】
１つの実施形態では、上記抽出物はカルノシン酸を含有する。
【００１３】
１つの実施形態では、さらに以下の式（Ｉ）；
【００１４】
【化１】
【００１５】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有する。
【００１６】
本発明はまた、カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起伸長剤である。
【００１７】
１つの実施形態では、カルノシン酸は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の化合物である。
【００１８】
本発明はまた、上記神経突起伸長剤を含有する、医薬品組成物である。
【００１９】
本発明はまた、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物である。
【００２０】
本発明はまた、カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
まず、本発明の１つの局面である、本発明の第一の神経突起伸長剤について説明する。
【００２２】
本発明の第一の神経突起伸長剤は、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する。
【００２３】
本発明に用いられる植物の例としては、ローズマリーおよび／またはセージが挙げられる。
【００２４】
本発明に用いられる植物において、用いられ得る部位は特に限定されず、根、茎、葉、葉柄、枝、花または全草、あるいはこれらの組合せのいずれを用いてもよい。本発明においては、特に限定されないが好ましくは葉を用いる。また、上記植物は生の状態のもの、あるいは当業者に周知の方法で所定に乾燥されたもののいずれを用いてもよい。
【００２５】
本発明に用いられる抽出物とは、上記植物を、水、極性または非極性の溶媒、あるいはこれらの混合物を抽出溶媒として用い適切な条件で抽出された抽出物を意味する。
【００２６】
本発明に用いられるローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、例えば以下のように得ることができる。まず、上記植物の所定部位を抽出溶媒に浸漬する。抽出溶媒の量は、上記植物が浸漬し得る量であれば、特に限定はされないが、上記植物の重量に対して２倍量から１００倍量の割合の抽出溶媒が好ましい。使用され得る抽出溶媒の種類としては、特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノールのような低級アルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類、エーテル類、クロロホルム、およびジクロロメタンのような有機溶媒、ならびに水が挙げられる。これらは単独または組合わせて用いられる。本発明においては、メタノール、エタノール、酢酸エチル、またはこれら溶媒と水との組合わせが好ましく、毒性が低いという安全性を考慮すれば、エタノール、または水とエタノールとの混合溶媒がさらに好ましい。上記植物の浸漬時間もまた、各種条件によって変動し得るため特に限定されず、当業者により適切に設定され得る。また、抽出温度も各種条件により変動し得るため特に限定されず、当業者により適切に設定され得る。
【００２７】
上記浸漬後、得られたローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、そのまま用いられてもよい。また、上記植物由来の抽出物は、必要に応じて水分を蒸発させた乾固物またはペースト状物の形態で用いられてもよい。また、必要に応じては当業者が通常用いる手段（例えば、カラムクロマトグラフィー）で精製して用いてもよい。
【００２８】
このようにして得られたローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物は、以下の式（ＩＩ）；
【００２９】
【化２】
【００３０】
で表されるカルノシン酸を含有し得る。
【００３１】
本発明の第一の神経突起伸長剤において、上記抽出物を有効成分として含有する限り、その含有量は特に限定されないが、好ましくは神経突起伸長剤の重量を基準として、０．００００１重量％〜３０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜１５重量％の割合である。
【００３２】
上記抽出物がカルノシン酸を含有する場合、その含有量は特に限定されないが、抽出物の重量（乾燥重量）を基準として、好ましくは０．００１重量％〜８０重量％、さらに好ましくは０．５重量％〜５０重量％の割合である。
【００３３】
また、本発明の第一の神経突起伸長剤は以下の式（Ｉ）；
【００３４】
【化３】
【００３５】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１つの化合物をさらに含有し得る。
【００３６】
上記式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体は、特に限定されないが、好ましくはカフェ酸エステルであり、さらに好ましくは、カフェ酸メチルエステル、カフェ酸プロピルエステル、カフェ酸オクチルエステル、カフェ酸ベンジルエステルまたはカフェ酸フェネチルエステルである。
【００３７】
上記カフェ酸ならびにその誘導体としては、市販されているもの、化学合成したもの、または種々の天然物から抽出したものが挙げられる。例えば、カフェ酸エステルを化学合成によって製造する場合、出発原料としてカフェ酸を使用し、所定のアルコールと化学反応させることによって所定のカフェ酸エステルを容易に製造することができる。このような化学合成法自体も当業者に公知であり、例えば、ダ．クーニャ．エフ．エム（ｄａ Ｃｕｎｈａ ＦＭ）ら、フリー・ラジカル・リサーチ（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅｒａｒｃｈ），２００４年，第３８巻，第１１号，ｐ．１２４１−１２５３に記載の方法に準じて製造することができる。また、種々の天然物から抽出したものを用いる場合、例えばカフェ酸フェネチルエステルは、プロポリスから当業者が通常用いる手段によって抽出し用い得る。また、必要に応じては当業者が通常用いる手段（例えば、カラムクロマトグラフィー）で精製して用いてもよい。
【００３８】
本発明の第一の神経突起伸長剤に、上記植物由来の抽出物および式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体を含有する場合、その混合比は、特に限定されないが、式（Ｉ）の化合物と上記植物由来の抽出物との重量比が、好ましくは１：９から９：１、より好ましくは３：７から７：３、さらにより好ましくは４：６から６：４である。
【００３９】
次に、本発明の他の局面である、本発明の第二の神経突起伸長剤について説明する。
【００４０】
本発明の第二の神経突起伸長剤は、カルノシン酸を有効成分として含有する。
【００４１】
本発明の第二の神経突起伸長剤において、カルノシン酸とは、以下の式（ＩＩ）；
【００４２】
【化４】
【００４３】
で表される化合物である。上記式（ＩＩ）で表されるカルノシン酸としては、市販されているもの、化学合成したもの、または種々の天然物から抽出したものが挙げられる。上記カルノシン酸は、特に限定されないが、好ましくはローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物に含有し得る形態で用いる。上記植物由来の抽出物は、本発明の第一の神経突起伸長剤に用いられるローズマリーおよび／またはセージ由来の抽出物と同様の方法にて得ることができる。
【００４４】
本発明の第二の神経突起伸長剤において、上記カルノシン酸を有効成分として含有する限り、その含有量は特に限定されないが、神経突起伸長剤の重量を基準として、好ましくは０．００００１重量％〜５０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜３０重量％の割合である。
【００４５】
また、上記第二の神経突起伸長剤は以下の式（Ｉ）；
【００４６】
【化５】
【００４７】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１つの化合物をさらに含有し得る。
【００４８】
上記式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体は、特に限定されないが、好ましくはカフェ酸エステルである。さらに好ましくは、カフェ酸メチルエステル、カフェ酸プロピルエステル、カフェ酸オクチルエステル、カフェ酸ベンジルエステルまたはカフェ酸フェネチルエステルである。上記カフェ酸またはその誘導体は、第一の神経突起伸長剤に用いられ得るカフェ酸またはその誘導体と同様の方法にて得ることができる。
【００４９】
本発明の第二の神経突起伸長剤に、上記カルノシン酸、および式（Ｉ）で表されるカフェ酸またはその誘導体を含有する場合、その混合比は、特に限定はされないが、式（Ｉ）の化合物と上記植物由来の抽出物との重量比が、好ましくは１：９から９：１、より好ましくは３：７から７：３、さらにより好ましくは４：６から６：４である。
【００５０】
本発明の第一および第二の神経突起伸長剤においては、上記カフェ酸またはその誘導体以外に添加剤が含有されてもよい。このような添加剤としては、後述する用途および／またはその形態によって必ずしも限定されないが、例えば、水；アルコール；食肉加工品；米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、スイートポテト、大豆、コンブ、ワカメ、テングサなどの一般食品材料およびそれらの粉末；デンプン、水飴、乳糖、グルコース、果糖、スクロース、マンニトールなどの糖類；香辛料、甘味料、食用油、ビタミン類などの一般的な食品添加物；界面活性剤；賦形剤；着色料；保存剤；コーティング助剤；ラクトース；デキストリン；コーンスターチ；ソルビトール；結晶セルロース；ポリビニルピロリドン；油分；保湿剤；増粘剤；防腐剤；香料；ならびにこれらの組合わせが挙げられる。本発明の神経突起伸長剤はさらに必要に応じて他の薬剤（漢方を包含する）を含有していてもよい。このような他の成分および／または他の薬剤の含有量は特に限定されず、当業者によって適切な量が選択され得る。
【００５１】
本発明の第一および第二の神経突起伸長剤は、非経口組成物または経口組成物のいずれかの形態で用いられてもよく、例えば、医薬品、医薬部外品などの医薬組成物として、そのままあるいは他の医薬品と組合わせて用いられてもよく；家畜または養殖魚などの生産分野に利用される飼料組成物として、そのままあるいは他の飼料用材料と組合わせて用いられてもよく；もしくは化粧品などの化粧組成物として、そのままあるいは他の化粧品材料と組合わせて用いられてもよい。
【００５２】
例えば、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が医薬品組成物として用いられる場合、その投与剤形は特に限定されず、日本薬局方に記載の方法にしたがって適切な剤形に加工される。投与剤形のより具体的な例としては、経口投与を目的とする医薬品組成物の場合、カプセル剤、錠剤、粉剤、顆粒剤、細粒剤、除放剤などの剤形が挙げられ、そして非経口投与を目的とする医薬品組成物の場合、静脈注射、皮下注射などの筋肉注射を目的とした注射剤、輸液剤、軟膏等の塗布剤、直腸投与のための坐剤などの剤形が挙げられる。容量は、対象となる者の体重等の条件によって容易に変動し得るため、当業者によって適宜選択され得る。
【００５３】
この医薬品組成物は、当業者に周知の方法によってその形態に加工され得、第３成分として、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油などの希釈剤が混合されていてもよい。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤などが混合されていてもよい。
【００５４】
また、別の例として、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が、食品組成物として用いられる場合、その形態は固形食品に限定されず、飲料（例えば、液体飲料）のようなものを包含される。より具体的な例としては液状、ペースト状、固形状等の形態でなる、茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、乳飲料、菓子類、シロップ類、果実加工品、野菜加工品、漬物類、蓄肉製品、魚肉製品、珍味類、缶・ビン詰類、即席飲食物、内服役、肝油ドロップ、口中清涼剤、ゼリーなどが挙げられるが特にこれらに限定されない。本発明の神経突起伸長剤を含有するこのような食品組成物は、当業者に周知の方法を用いて製造され得る。
【００５５】
本発明に用いられる第一および第二の神経突起伸長剤は、必要に応じて上記のような食品添加剤として許容され得る添加剤とともに、例えば、神経突起を伸長し得る食品である旨の表示を付した飲食物として用いることができる。このような機能の表示を付した飲食品の例としては、特定保健用食品が挙げられる。なお、上記機能の表示は、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示のみに限定されない。このような表示に付されるべき他の機能の例としては、老年型痴呆症が気になる方の食品である旨；神経疾患でお困りの方の食品である旨；などが挙げられる。表示は、使用者にとって上記のような機能が実質的に理解され得る様式で表されておればよく、例えば、当該食品の外装または内装パッケージ、商品カタログ、ポスターなどに対して行われ得る。
【００５６】
さらに別の例として、本発明の第一および第二の神経突起伸長剤が化粧料組成物として用いられる場合、その形態としては、ローション、乳液、クリーム、パウダーなどが挙げられるが、特にこれらに限定はされない。本発明の第一および／または第二の神経突起伸長剤を含有するこのような化粧料組成物は、当業者に公知の手法を用いて製造され得る。
【００５７】
本発明の第一および／または第二の神経突起伸長剤は、その使用形態に応じて当該分野で通常用いる方法によって製造され、その形態に応じた方法で適宜に適量摂取また適用することができる。
【実施例】
【００５８】
以下、本発明は実施例によって具体的に記述する。しかし、これによって本発明は制限されるものではい。
【００５９】
＜実施例１＞
５ｋｇのローズマリーの全草を２０Ｌのエタノールに浸漬し、４０℃にて７２時間抽出を行った。次いで、得られた抽出液を減圧濃縮し、これに２Ｌの精製水を添加した。次いで、精製水の添加により析出した不溶物をろ過により取り出し、ローズマリー抽出物を得た（１０５ｇ）。次いで、得られたローズマリー抽出物を酢酸エチルに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒；酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）で精製することによって、精製物を得た。次いで、ＨＰＬＣで測定し、得られた精製物が、カルノシン酸であることを確認した。
【００６０】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６１】
次いで、上記で得られたカルノシン酸を被検物質Ａとして、分化培地に対して１０μＭの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に添加し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で２日間培養を行った。培養後、細胞を倒立顕微鏡（ＴＥ２０００Ｅ、ＮＩＫＯＮ社製）にて２００倍の倍率で観察し、次いで、細胞の写真撮影を行った。次いで、ジャグジート．エス．ギル（Ｊａｇｊｉｔ Ｓ．Ｇｉｌｌ）ら、モレキュラー・ブレイン・リサーチ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅｒａｒｃｈ），１９９８年，第５７巻，ｐ．１２３−１３１に記載の方法に準じて、神経突起が伸長している細胞数を目視によりカウントした。次いで、所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表１に示す。また、被検物質Ａ（カルノシン酸）を含有した分化培地を添加した細胞の写真を図１に示す。
【００６２】
＜比較例１＞
上記実施例１と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６３】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記実施例１と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した（小数点以下四捨五入）。この結果をコントロールとした。結果を表１に示す。また、被検物質無添加の分化培地を添加した細胞の写真を図２に示す。
【００６４】
＜比較例２＞
上記実施例１と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００６５】
次いで、分化培地に対して１０ｎｇ／ｍｌの濃度になるようにＮＧＦを含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製したそれぞれの分化培地を上記実施例１と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。この結果を陽性対照とした。結果を表１に示す。また、ＮＧＦを含有した分化培地を添加した細胞の写真を図３に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
表１に示されるように、実施例１（被検物質Ａ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例1（被検物質無添加）および比較例２（ＮＧＦ）に比べて高い値であった。また、図１〜３に示されるように、比較例1（被検物質無添加）の神経突起がほとんど伸長していないの対して、実施例１（被検物質Ａ）の神経突起が伸長していることが確認できる。このことから、上記カルノシン酸が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、カルノシン酸が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００６８】
＜実施例２＞
６０ｇのセージの全草を３００ｍｌのエタノールに浸漬し、室温で一晩抽出した。次いで、得られた抽出物を１００ｍｌまで減圧濃縮した。次いで、濃縮した抽出物をろ過し、不溶物を除去した。次いで、ろ液に６００ｍｌの精製水を添加し、４℃にて一晩静置した。次いで、再びろ過を行って、水不溶物としてセージ抽出物（乾燥重量４ｇ）を得た。
【００６９】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。次いで、上記で得られたセージ抽出物を被検物質Ｂとして、分化培地に対して５μｇ／ｍｌの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に添加し、３７℃にて５％のＣＯ２条件下で、２日間培養を行った。次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表２に示す。
【００７０】
＜比較例３＞
上記実施例２と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００７１】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記実施例２と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積の全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。この結果をコントロールとした。結果を表２に示す。
【００７２】
【表２】
【００７３】
表２に示されるように、実施例２（被検物質Ｂ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例３（被検物質無添加）に比べて高い値であった。このことから、上記セージ抽出物が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、セージ抽出物が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００７４】
＜実施例３＞
６０ｇのローズマリーの全草を３００ｍｌの９０％エタノール水溶液に浸漬し、４０℃にて４８時間抽出を行った。得られた抽出物を１００ｍｌまで減圧濃縮した。濃縮後、抽出物をろ過して不溶物を除去した。次いで、ろ液に２００ｍｌの精製水を添加し、４℃にて一晩静置した。次いで、再びろ過を行って、水不溶物としてローズマリー抽出物（乾燥重量３．５ｇ）を得た。
【００７５】
他方、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を、コラーゲンコーティングされた２４ウェル培養プレート（ＩＷＡＫＩ社製）にて牛胎児血清１％、ウマ血清１％の割合で含有するＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製、以後分化培地と省略する）に１０５細胞／穴になるように播種し、３７℃、５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。次いで、上記で得られたローズマリー抽出物を被検物質Ｃとして、分化培地に対して５μｇ／ｍｌの濃度になるように含有する分化培地を調製した。次いで、上記で調製した分化培地を上記で予め培養した細胞に３７℃にて５％のＣＯ２条件下で、２日間培養を行った。次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率（小数点以下四捨五入）を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した。結果を表３に示す。
【００７６】
＜比較例４＞
上記実施例３と同様の条件にて、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２ｈ細胞を３７℃にて５％のＣＯ２条件下で二日間培養した。
【００７７】
次いで、被検物質無添加の分化培地を調製した。次いで、上記で調製したそれぞれの分化培地を上記実施例３と同様の条件で培養し、次いで、上記と同様に所定の面積での全細胞数に対する神経突起が伸長している細胞数の百分率を神経突起の伸長した細胞の割合として算出した（小数点以下四捨五入）。この結果をコントロールとした。結果を表３に示す。
【００７８】
【表３】
【００７９】
表３に示されるように、実施例３（被検物質Ｃ）の神経突起の伸長した細胞の割合（％）は、比較例４（被検物質無添加）に比べて高い値であった。このことから、上記ローズマリー抽出物が細胞での神経突起の伸長作用を有することが分かる。よって、ローズマリー抽出物が神経突起伸長剤として有用であることが分かる。
【００８０】
＜実施例４：食品の製造＞
実施例３で得たローズマリー抽出物を用いて、以下の組成を有する食品を調製した。
【００８１】
成分 重量（ｇ）
ローズマリー抽出物 １．０
大豆サポニン ３．０
黒酢エキス ２．０
リンゴファイバー ２．０
レシチン １．０
フラクトオリゴ糖 ２．０
果糖 １．０
粉末酢 ０．１
シクロデキストリン １．０
蜂蜜 １．０
骨粉 １．０
デキストリン ４．９
【００８２】
各成分を混合した後、水を噴霧して造粒を行い、入風温度８０℃で乾燥して、顆粒状食品を得た。
【００８３】
＜実施例５：硬ゼラチンカプセルの製造＞
実施例１で得られたカルノシン酸を用いて、以下の組成を有する硬ゼラチンカプセルを調製した。
【００８４】
成分 重量（ｍｇ／カプセル）
カルノシン酸 ２０
デンプン １００
セルロース １００
【００８５】
各成分を混合し均一に混合した後、ゼラチンカプセルに封入し、硬ゼラチンカプセルを得た。
【００８６】
＜実施例６：錠剤の製造＞
実施例３で得られたセージの抽出物を用いて、以下の組成を有する錠剤を調製した。
【００８７】
成分 重量（ｍｇ／錠剤）
セージ抽出物 ２５０
セルロース ４００
二酸化ケイ素 １０
ステアリン酸 ５
【００８８】
各成分を混合し均一に混合した後、打錠し、錠剤を得た。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明は、安全性が高く、かつ神経細胞の神経突起を伸長し得る神経突起伸長剤を提供する。本発明の神経突起伸長剤は、医薬品、医薬部外品または食品組成物等として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】実施例１で得られた、カルノシン酸を含有した分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【図２】比較例１で得られた、無添加の分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【図３】比較例２で得られた、ＮＧＦを含有した分化培地を添加した細胞の顕微鏡写真である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起伸長剤。
【請求項２】
前記抽出物がカルノシン酸を含有する、請求項１に記載の神経突起伸長剤。
【請求項３】
さらに以下の式（Ｉ）；
【化１】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有する、請求項１に記載の神経突起伸長剤。
【請求項４】
カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起伸長剤。
【請求項５】
前記カルノシン酸が、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の化合物である、請求項４に記載の神経突起伸長剤。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載の神経突起伸長剤を含有する、医薬品組成物。
【請求項７】
ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物。
【請求項８】
カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物。
【請求項１】
ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起伸長剤。
【請求項２】
前記抽出物がカルノシン酸を含有する、請求項１に記載の神経突起伸長剤。
【請求項３】
さらに以下の式（Ｉ）；
【化１】
（ここで、Ｒ１は水素原子、分岐または環を形成していてもよいＣ１からＣ８のアルキル基、分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアラルキル基、または分岐していてもよいＣ１からＣ４のアルキル基で置換されていてもよいアリール基である）で表されるカフェ酸またはその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有する、請求項１に記載の神経突起伸長剤。
【請求項４】
カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起伸長剤。
【請求項５】
前記カルノシン酸が、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の化合物である、請求項４に記載の神経突起伸長剤。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載の神経突起伸長剤を含有する、医薬品組成物。
【請求項７】
ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物。
【請求項８】
カルノシン酸を有効成分として含有する、神経突起を伸長させ得る食品である旨の表示を付した飲食物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００７−２３０９４５（Ｐ２００７−２３０９４５Ａ）
【公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５６７３３（Ｐ２００６−５６７３３）
【出願日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（０００２１４２７２）長瀬産業株式会社 (137)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（０００２１４２７２）長瀬産業株式会社 (137)
【Ｆターム（参考）】
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