細胞外マトリックス分解酵素阻害剤
【課題】大麦若葉の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな用途を提供すること、並びに、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな再利用方法を提供すること。
【解決手段】大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤を提供する。
【解決手段】大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞外マトリックス分解酵素阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
大麦及び米は、古くから広く栽培されている穀物であり、安全な自然食品素材である。また、大麦ぬか及びモルトフィードはビール製造の際に、米ぬかは玄米精製の際に生じる副生成物である。従来、大麦若葉の抗酸化作用（特許文献１）や、大麦グルカンの保湿作用（特許文献２）、大麦種子のチロシナーゼ生成抑制作用（特許文献３）、モルトフィードの再生紙への利用（特許文献４）等が知られている。また、米ぬかについては、コラーゲン合成促進作用、過酸化脂質生成抑制作用、ＳＯＤ様活性作用、紫外線損傷回復作用等に関して報告がある（特許文献５及び６）。
【特許文献１】特開平６−１２２６１９号公報
【特許文献２】特開２００３−１９２５６１号公報
【特許文献３】特開２０００−２５６１３１号公報
【特許文献４】特開２０００−８０５８７号公報
【特許文献５】特開平０５−２２１８４４号公報
【特許文献６】特開平０９−０８７１３３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、安全で容易に入手可能な自然食品素材である大麦又は米を由来とする大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかには、更なる有用な用途が見出されることが期待されている。特に、ビール製造の際に生じる大麦ぬか及びモルトフィード並びに玄米精製の際に生じる米ぬかについては、更なる有用な再利用方法が求められている。
【０００４】
そこで、本発明の目的は、大麦若葉の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな用途を提供すること、並びに、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな再利用方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明らは、これらの自然食品素材について、更なる有用な用途又は再利用方法に関する検討を行なった結果、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの抽出物が細胞外マトリックス分解酵素活性阻害作用を有することを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤を提供するものである。
【０００７】
上記穀物の抽出物は、上記穀物を炭素数４以下の低級アルコールによって抽出して得られる抽出物であることが好ましい。炭素数４以下の低級アルコールを用いることにより、上記穀物中のポリフェノール等が効率的に抽出され、得られるマトリックス分解酵素阻害剤の阻害活性が向上する。
【０００８】
本発明の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、特にゼラチナーゼＡ阻害活性又はコラゲナーゼ阻害活性を有することにより、優れた抗シワ効果を発揮する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、大麦若葉の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな用途を提供できる。また、本発明によれば、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな再利用方法を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる。
【００１２】
本発明において、「大麦」とは、イネ科オオムギ属の穀物（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）をいう。大麦はバーレー（Ｂａｒｌｅｙ）とも呼ばれ、大麦を発芽させたもの（麦芽）はビールの原料になる。「大麦若葉」とは、大麦の若葉であり、葉緑素のほか、各種ビタミン、ミネラル、タンパク質、酵素等を豊富に含む。「大麦ぬか」とは、大麦を精製（精白又はとう精）する際に生じる種皮や胚芽等の部分をいう。大麦ぬかはバーレーブラン（Ｂａｒｌｙ Ｂｒａｎ）とも呼ばれ、食物繊維の一種であるβ−グルカンを豊富に含む。「モルトフィード」とは、ビール製造の際に大量に排出される副生成物である。モルトフィードはビール粕又は仕込み麦芽粕とも呼ばれ、大麦から麦芽を取り出した後の殻等を含む。
【００１３】
本発明において、「穀物の抽出物」は、上記のような穀物を、炭素数４以下の低級アルコール、特にメタノールによって抽出して得られるものであることが好ましい。更に、抽出上清を減圧乾固し、蒸留水に再溶解したものを「穀物の抽出物」としてもよい。炭素数４以下の低級アルコールを用いることにより、上記穀物中のポリフェノール等が効率的に抽出され、得られるマトリックス分解酵素阻害剤の阻害活性が向上する。
【００１４】
細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、細胞外マトリックス分解酵素活性阻害作用を有する物質である。細胞外マトリックス分解酵素は、マトリックスメタロプロテアーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ：Ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）等とも呼ばれる、細胞外マトリックスの代謝に関わる酵素である。
【００１５】
一般に、動物の結合組織は、コラーゲンやプロテオグリカンを主成分とする細胞外マトリックスにより構成されている。細胞外マトリックスの代謝は、細胞外マトリックス分解酵素（以下、ＭＭＰという。）と生体内阻害因子（ＴＩＭＰ：Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）とのバランスにより調節されているが、このうち、ＭＭＰは、細胞外マトリックスを分解又は変性することにより、皮膚の弾力性の低下、及びそれに伴うシワやタルミの発生の原因となると考えられている。
【００１６】
ＭＭＰのうち、ＭＭＰ１（コラゲナーゼ）は、真皮に分布する膠原繊維であるＩ型コラーゲン等を基質とし、ＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）は、基底膜に分布するＩＶ型コラーゲンや変性コラーゲンであるゼラチン、真皮に分布するＶ型コラーゲンや弾性繊維であるエラスチン、軟結合組織及び基底膜に分布する糖タンパク質であるフィブロネクチン等を基質とする。
【００１７】
ＭＭＰ１及びＭＭＰ２は、このように、皮膚のハリを保つ上で重要な基質を分解又は変性するため、皮膚のシワやタルミの発生と特に関わりがあると考えられている。また、ＭＭＰ１及びＭＭＰ２は、皮膚に紫外線が当たると活性化されるため、紫外線による皮膚マトリックスの損傷にも関わっていると考えられている。
【００１８】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、これらＭＭＰのうち特にＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）又はＭＭＰ１（コラゲナーゼ）の活性を阻害することにより、優れた抗シワ効果を発揮する。すなわち、本発明のＭＭＰ阻害剤は、皮膚シワ防止剤、皮膚タルミ防止剤、皮膚ハリ改善剤等として機能する。特に、本発明のＭＭＰ阻害剤は、炭素数４以下の低級アルコールで上記の穀物（大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか）からＭＭＰ１及びＭＭＰ２活性阻害物質を抽出するので、当該ＭＭＰ１及びＭＭＰ２活性阻害物質と共にビタミンＥを抽出し、抗シワ効果を相乗的に向上させることができる。
【００１９】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、皮膚外用剤として用いることができる。その場合、直接塗布することもできるし、他の物質と混合して用いることもできる。
【００２０】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、化粧品、トイレタリー、オーラルケア製品、食品、飲料又は医薬品に含ませて用いることができる。本発明のＭＭＰ阻害剤を含む化粧品、食品、飲料又は医薬品は、有効成分である有機酸の他、浸潤剤、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、分散助剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、賦形剤、防菌防黴剤、消臭・脱臭剤、酵素、歯磨粉、精製水、アルコールを含んでもよい。また、他のＭＭＰ阻害剤を添加してもよい。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。また、特に明記しない限り、「％」は「質量％」を表す。
【００２２】
（実施例１）
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性
〈試料の調製〉
オリヒロ社製の大麦若葉、永倉製麦の仕上げとう精工程で生じたファイバースノー種の大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。なお、モルトフィードとしては、サッポロビール社千葉工場で入手したものを用いた。
【００２３】
〈ＭＭＰ２阻害活性試験〉
反応容器に、５８ｍＵ／μＬのＥ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ（大腸菌組み換えヒト）ＭＭＰ−２酵素液と、緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、 ０．０５％Ｂｒｉｊ−３５、 １ｍＭ ＤＴＮＢ、ｐＨ７．５）と、試料を添加し、反応液を調製した。３７℃にて６０分間インキュベートした後、細胞外マトリックス模擬基質溶液として１ｍＭ Ｔｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅ溶液（主成分はオリゴタンパク質Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−Ｏｅｔ）を反応液に加えた。ＭＭＰ−２がＴｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅを切断して生じるｓｕｌｆｈｙｄｒｙ（スルフヒドリル）基がＤＴＮＢ（５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｖ ａｃｉｄ）のジスルフィド結合を切断して生じるチオールを、４１２ｎｍの吸光度で検出した。
【００２４】
インキュベート後に細胞外マトリックス模擬溶液を加えた時点から４１２ｎｍにおける吸光度を６０分間測定した。測定開始から６０分間の経時的な吸光度の上昇を一次式で近似し、その傾きを吸光度変化量（ΔＡＢＳ）とした。コントロールには、試料の代わりに緩衝液を加えたものを用いた。この吸光度変化量を用いて下記式より阻害率を求めた。
阻害率（％）＝（ΔＡＢＳコントロール）−（ΔＡＢＳ試料））／（ΔＡＢＳコントロール）×１００
【００２５】
（比較例１）
ウコン及びレモンのメタノール抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性
〈試料の調製〉
山本漢方製薬社製の「紫ウコン」（商品名）及び市販のレモンの果皮０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加えて、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。
【００２６】
〈ＭＭＰ２阻害活性試験〉
実施例１と同様の方法でＩＣ５０値を算出した。
【００２７】
表１は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの抽出物並びにウコン及びレモンの抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性を、実施例１及び比較例１で算出したＩＣ５０値により評価した結果を示すものである。
【００２８】
【表１】
【００２９】
表１に示されるように、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物は、従来からＭＭＰ２活性阻害作用を有することが知られているウコン及びレモンのメタノール抽出物と比較して、同等以上のＭＭＰ２阻害活性を示すことが明らかになった。
【００３０】
（実施例２）
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性
〈試料の調製〉
オリヒロ社製の大麦若葉、永倉製麦の仕上げとう精工程で生じたファイバースノー種の大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。なお、モルトフィードとしては、サッポロビール社千葉工場で入手したものを用いた。
【００３１】
〈ＭＭＰ１阻害活性試験〉
反応容器に、７６５ｍＵ／μＬのＥ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ（大腸菌組み換えヒト）ＭＭＰ１酵素液と、緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、 ０．０５％Ｂｒｉｊ−３５、 １ｍＭ ＤＴＮＢ、ｐＨ７．５）と、試料を添加し、反応液を調製した。３７℃にて６０分間インキュベートした後、細胞外マトリックス模擬基質溶液として１ｍＭ Ｔｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅ溶液（主成分はオリゴタンパク質Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−ＯＣ２Ｈ５）を反応液に加えた。ＭＭＰ１がＴｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅを切断して生じるｓｕｌｆｈｙｄｒｙ（スルフヒドリル）基がＤＴＮＢ（５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｖ ａｃｉｄ）のジスルフィド結合を切断して生じるチオールを、４１２ｎｍの吸光度で検出した。
【００３２】
インキュベート後に細胞外マトリックス模擬溶液を加えた時点から４１２ｎｍにおける吸光度を６０分間測定した。測定開始から６０分間の経時的な吸光度の上昇を一次式で近似し、その傾きを吸光度変化量（ΔＡＢＳ）とした。コントロールには、試料の代わりに緩衝液を加えたものを用いた。この吸光度変化量を用いて下記式より阻害率を求めた。
阻害率（％）＝（ΔＡＢＳコントロール）−（ΔＡＢＳ試料））／（ΔＡＢＳコントロール）×１００
【００３３】
更に、上記阻害率をもとに、ＭＭＰ１活性を５０％阻害するときの濃度（ＩＣ５０値：５０％阻害濃度）を算出した。
【００３４】
（比較例２）
ウコン及びレモンのメタノール抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性
〈試料の調製〉
山本漢方製薬社製の「紫ウコン」（商品名）、リアルネット社製の「ウコン」（商品名）及び市販のレモンの果皮０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。
【００３５】
〈ＭＭＰ１阻害活性試験〉
実施例２と同様の方法で、ＩＣ５０値を算出した。
【００３６】
表２は、大麦若葉及び大麦ぬかの抽出物並びに紫ウコン、ウコン及びレモンの抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性を、実施例２及び比較例２で算出したＩＣ５０値により評価した結果を示すものである。
【００３７】
【表２】
【００３８】
表２に示されるように、大麦若葉及び大麦ぬかのメタノール抽出物は、従来からＭＭＰ１活性阻害作用を有することが知られているウコン及びレモンのメタノール抽出物と比較して、同等以上のＭＭＰ１阻害活性を示すことが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明により提供されるＭＭＰ阻害剤は、化粧品、トイレタリー、オーラルケア製品、食品、飲料又は医薬品として好適に用いられる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞外マトリックス分解酵素阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
大麦及び米は、古くから広く栽培されている穀物であり、安全な自然食品素材である。また、大麦ぬか及びモルトフィードはビール製造の際に、米ぬかは玄米精製の際に生じる副生成物である。従来、大麦若葉の抗酸化作用（特許文献１）や、大麦グルカンの保湿作用（特許文献２）、大麦種子のチロシナーゼ生成抑制作用（特許文献３）、モルトフィードの再生紙への利用（特許文献４）等が知られている。また、米ぬかについては、コラーゲン合成促進作用、過酸化脂質生成抑制作用、ＳＯＤ様活性作用、紫外線損傷回復作用等に関して報告がある（特許文献５及び６）。
【特許文献１】特開平６−１２２６１９号公報
【特許文献２】特開２００３−１９２５６１号公報
【特許文献３】特開２０００−２５６１３１号公報
【特許文献４】特開２０００−８０５８７号公報
【特許文献５】特開平０５−２２１８４４号公報
【特許文献６】特開平０９−０８７１３３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、安全で容易に入手可能な自然食品素材である大麦又は米を由来とする大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかには、更なる有用な用途が見出されることが期待されている。特に、ビール製造の際に生じる大麦ぬか及びモルトフィード並びに玄米精製の際に生じる米ぬかについては、更なる有用な再利用方法が求められている。
【０００４】
そこで、本発明の目的は、大麦若葉の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな用途を提供すること、並びに、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな再利用方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明らは、これらの自然食品素材について、更なる有用な用途又は再利用方法に関する検討を行なった結果、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの抽出物が細胞外マトリックス分解酵素活性阻害作用を有することを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤を提供するものである。
【０００７】
上記穀物の抽出物は、上記穀物を炭素数４以下の低級アルコールによって抽出して得られる抽出物であることが好ましい。炭素数４以下の低級アルコールを用いることにより、上記穀物中のポリフェノール等が効率的に抽出され、得られるマトリックス分解酵素阻害剤の阻害活性が向上する。
【０００８】
本発明の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、特にゼラチナーゼＡ阻害活性又はコラゲナーゼ阻害活性を有することにより、優れた抗シワ効果を発揮する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、大麦若葉の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな用途を提供できる。また、本発明によれば、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの細胞外マトリックス分解酵素阻害剤としての新たな再利用方法を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる。
【００１２】
本発明において、「大麦」とは、イネ科オオムギ属の穀物（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）をいう。大麦はバーレー（Ｂａｒｌｅｙ）とも呼ばれ、大麦を発芽させたもの（麦芽）はビールの原料になる。「大麦若葉」とは、大麦の若葉であり、葉緑素のほか、各種ビタミン、ミネラル、タンパク質、酵素等を豊富に含む。「大麦ぬか」とは、大麦を精製（精白又はとう精）する際に生じる種皮や胚芽等の部分をいう。大麦ぬかはバーレーブラン（Ｂａｒｌｙ Ｂｒａｎ）とも呼ばれ、食物繊維の一種であるβ−グルカンを豊富に含む。「モルトフィード」とは、ビール製造の際に大量に排出される副生成物である。モルトフィードはビール粕又は仕込み麦芽粕とも呼ばれ、大麦から麦芽を取り出した後の殻等を含む。
【００１３】
本発明において、「穀物の抽出物」は、上記のような穀物を、炭素数４以下の低級アルコール、特にメタノールによって抽出して得られるものであることが好ましい。更に、抽出上清を減圧乾固し、蒸留水に再溶解したものを「穀物の抽出物」としてもよい。炭素数４以下の低級アルコールを用いることにより、上記穀物中のポリフェノール等が効率的に抽出され、得られるマトリックス分解酵素阻害剤の阻害活性が向上する。
【００１４】
細胞外マトリックス分解酵素阻害剤は、細胞外マトリックス分解酵素活性阻害作用を有する物質である。細胞外マトリックス分解酵素は、マトリックスメタロプロテアーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ：Ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）等とも呼ばれる、細胞外マトリックスの代謝に関わる酵素である。
【００１５】
一般に、動物の結合組織は、コラーゲンやプロテオグリカンを主成分とする細胞外マトリックスにより構成されている。細胞外マトリックスの代謝は、細胞外マトリックス分解酵素（以下、ＭＭＰという。）と生体内阻害因子（ＴＩＭＰ：Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）とのバランスにより調節されているが、このうち、ＭＭＰは、細胞外マトリックスを分解又は変性することにより、皮膚の弾力性の低下、及びそれに伴うシワやタルミの発生の原因となると考えられている。
【００１６】
ＭＭＰのうち、ＭＭＰ１（コラゲナーゼ）は、真皮に分布する膠原繊維であるＩ型コラーゲン等を基質とし、ＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）は、基底膜に分布するＩＶ型コラーゲンや変性コラーゲンであるゼラチン、真皮に分布するＶ型コラーゲンや弾性繊維であるエラスチン、軟結合組織及び基底膜に分布する糖タンパク質であるフィブロネクチン等を基質とする。
【００１７】
ＭＭＰ１及びＭＭＰ２は、このように、皮膚のハリを保つ上で重要な基質を分解又は変性するため、皮膚のシワやタルミの発生と特に関わりがあると考えられている。また、ＭＭＰ１及びＭＭＰ２は、皮膚に紫外線が当たると活性化されるため、紫外線による皮膚マトリックスの損傷にも関わっていると考えられている。
【００１８】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、これらＭＭＰのうち特にＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）又はＭＭＰ１（コラゲナーゼ）の活性を阻害することにより、優れた抗シワ効果を発揮する。すなわち、本発明のＭＭＰ阻害剤は、皮膚シワ防止剤、皮膚タルミ防止剤、皮膚ハリ改善剤等として機能する。特に、本発明のＭＭＰ阻害剤は、炭素数４以下の低級アルコールで上記の穀物（大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか）からＭＭＰ１及びＭＭＰ２活性阻害物質を抽出するので、当該ＭＭＰ１及びＭＭＰ２活性阻害物質と共にビタミンＥを抽出し、抗シワ効果を相乗的に向上させることができる。
【００１９】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、皮膚外用剤として用いることができる。その場合、直接塗布することもできるし、他の物質と混合して用いることもできる。
【００２０】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、化粧品、トイレタリー、オーラルケア製品、食品、飲料又は医薬品に含ませて用いることができる。本発明のＭＭＰ阻害剤を含む化粧品、食品、飲料又は医薬品は、有効成分である有機酸の他、浸潤剤、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、分散助剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、賦形剤、防菌防黴剤、消臭・脱臭剤、酵素、歯磨粉、精製水、アルコールを含んでもよい。また、他のＭＭＰ阻害剤を添加してもよい。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。また、特に明記しない限り、「％」は「質量％」を表す。
【００２２】
（実施例１）
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性
〈試料の調製〉
オリヒロ社製の大麦若葉、永倉製麦の仕上げとう精工程で生じたファイバースノー種の大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。なお、モルトフィードとしては、サッポロビール社千葉工場で入手したものを用いた。
【００２３】
〈ＭＭＰ２阻害活性試験〉
反応容器に、５８ｍＵ／μＬのＥ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ（大腸菌組み換えヒト）ＭＭＰ−２酵素液と、緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、 ０．０５％Ｂｒｉｊ−３５、 １ｍＭ ＤＴＮＢ、ｐＨ７．５）と、試料を添加し、反応液を調製した。３７℃にて６０分間インキュベートした後、細胞外マトリックス模擬基質溶液として１ｍＭ Ｔｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅ溶液（主成分はオリゴタンパク質Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−Ｏｅｔ）を反応液に加えた。ＭＭＰ−２がＴｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅを切断して生じるｓｕｌｆｈｙｄｒｙ（スルフヒドリル）基がＤＴＮＢ（５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｖ ａｃｉｄ）のジスルフィド結合を切断して生じるチオールを、４１２ｎｍの吸光度で検出した。
【００２４】
インキュベート後に細胞外マトリックス模擬溶液を加えた時点から４１２ｎｍにおける吸光度を６０分間測定した。測定開始から６０分間の経時的な吸光度の上昇を一次式で近似し、その傾きを吸光度変化量（ΔＡＢＳ）とした。コントロールには、試料の代わりに緩衝液を加えたものを用いた。この吸光度変化量を用いて下記式より阻害率を求めた。
阻害率（％）＝（ΔＡＢＳコントロール）−（ΔＡＢＳ試料））／（ΔＡＢＳコントロール）×１００
【００２５】
（比較例１）
ウコン及びレモンのメタノール抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性
〈試料の調製〉
山本漢方製薬社製の「紫ウコン」（商品名）及び市販のレモンの果皮０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加えて、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。
【００２６】
〈ＭＭＰ２阻害活性試験〉
実施例１と同様の方法でＩＣ５０値を算出した。
【００２７】
表１は、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかの抽出物並びにウコン及びレモンの抽出物におけるＭＭＰ２阻害活性を、実施例１及び比較例１で算出したＩＣ５０値により評価した結果を示すものである。
【００２８】
【表１】
【００２９】
表１に示されるように、大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物は、従来からＭＭＰ２活性阻害作用を有することが知られているウコン及びレモンのメタノール抽出物と比較して、同等以上のＭＭＰ２阻害活性を示すことが明らかになった。
【００３０】
（実施例２）
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかのメタノール抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性
〈試料の調製〉
オリヒロ社製の大麦若葉、永倉製麦の仕上げとう精工程で生じたファイバースノー種の大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬか０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。なお、モルトフィードとしては、サッポロビール社千葉工場で入手したものを用いた。
【００３１】
〈ＭＭＰ１阻害活性試験〉
反応容器に、７６５ｍＵ／μＬのＥ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ（大腸菌組み換えヒト）ＭＭＰ１酵素液と、緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、 ０．０５％Ｂｒｉｊ−３５、 １ｍＭ ＤＴＮＢ、ｐＨ７．５）と、試料を添加し、反応液を調製した。３７℃にて６０分間インキュベートした後、細胞外マトリックス模擬基質溶液として１ｍＭ Ｔｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅ溶液（主成分はオリゴタンパク質Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−ＯＣ２Ｈ５）を反応液に加えた。ＭＭＰ１がＴｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅを切断して生じるｓｕｌｆｈｙｄｒｙ（スルフヒドリル）基がＤＴＮＢ（５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｖ ａｃｉｄ）のジスルフィド結合を切断して生じるチオールを、４１２ｎｍの吸光度で検出した。
【００３２】
インキュベート後に細胞外マトリックス模擬溶液を加えた時点から４１２ｎｍにおける吸光度を６０分間測定した。測定開始から６０分間の経時的な吸光度の上昇を一次式で近似し、その傾きを吸光度変化量（ΔＡＢＳ）とした。コントロールには、試料の代わりに緩衝液を加えたものを用いた。この吸光度変化量を用いて下記式より阻害率を求めた。
阻害率（％）＝（ΔＡＢＳコントロール）−（ΔＡＢＳ試料））／（ΔＡＢＳコントロール）×１００
【００３３】
更に、上記阻害率をもとに、ＭＭＰ１活性を５０％阻害するときの濃度（ＩＣ５０値：５０％阻害濃度）を算出した。
【００３４】
（比較例２）
ウコン及びレモンのメタノール抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性
〈試料の調製〉
山本漢方製薬社製の「紫ウコン」（商品名）、リアルネット社製の「ウコン」（商品名）及び市販のレモンの果皮０．１ｇにそれぞれメタノール１ｍＬを加え、３０分間振とうした。遠心後、上清５００μＬをとり、減圧乾固し、蒸留水１００μＬに再溶解したものを試料とした。
【００３５】
〈ＭＭＰ１阻害活性試験〉
実施例２と同様の方法で、ＩＣ５０値を算出した。
【００３６】
表２は、大麦若葉及び大麦ぬかの抽出物並びに紫ウコン、ウコン及びレモンの抽出物におけるＭＭＰ１阻害活性を、実施例２及び比較例２で算出したＩＣ５０値により評価した結果を示すものである。
【００３７】
【表２】
【００３８】
表２に示されるように、大麦若葉及び大麦ぬかのメタノール抽出物は、従来からＭＭＰ１活性阻害作用を有することが知られているウコン及びレモンのメタノール抽出物と比較して、同等以上のＭＭＰ１阻害活性を示すことが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明により提供されるＭＭＰ阻害剤は、化粧品、トイレタリー、オーラルケア製品、食品、飲料又は医薬品として好適に用いられる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項２】
前記穀物の抽出物が、前記穀物を炭素数４以下の低級アルコールによって抽出して得られる抽出物である、請求項１に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項３】
ゼラチナーゼＡ阻害剤である、請求項１又は２に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項４】
コラゲナーゼ阻害剤である、請求項１又は２に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項１】
大麦若葉、大麦ぬか、モルトフィード及び米ぬかからなる群より選ばれる少なくとも１種の穀物の抽出物からなる細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項２】
前記穀物の抽出物が、前記穀物を炭素数４以下の低級アルコールによって抽出して得られる抽出物である、請求項１に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項３】
ゼラチナーゼＡ阻害剤である、請求項１又は２に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【請求項４】
コラゲナーゼ阻害剤である、請求項１又は２に記載の細胞外マトリックス分解酵素阻害剤。
【公開番号】特開２００８−２６６１４７（Ｐ２００８−２６６１４７Ａ）
【公開日】平成２０年１１月６日（２００８．１１．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１０７３４４（Ｐ２００７−１０７３４４）
【出願日】平成１９年４月１６日（２００７．４．１６）
【出願人】（３０３０４０１８３）サッポロビール株式会社 (150)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１１月６日（２００８．１１．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月１６日（２００７．４．１６）
【出願人】（３０３０４０１８３）サッポロビール株式会社 (150)
【Ｆターム（参考）】
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