美容用スキンケアの方法および組成物
本発明は、局所美容用スキンケアの方法および組成物に関する。この方法および組成物は、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を引き起こす活性剤を用いて皮膚のコラーゲンの収縮を行うことによって、顔の皮膚を治療し、顔の皮膚を収縮させ引き締めるためのものである。好ましい活性剤は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤である。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、美容用（ｃｏｓｍｅｔｉｃ）スキンケアの方法および組成物に関する。
【０００２】
老化のよく認識されている特徴の１つは、皮膚の弛みである。これは、皮膚の弾力性および締まり（ｆｉｒｍｎｅｓｓ）の喪失、重力の影響、顔の骨格支持体の喪失、並びに顔における皮下脂肪組織支持体の喪失など多数の要因によるものである。これらの要因により、垂れ肉（ｊｏｗｌ）形成、目の周りの皮膚の弛み、頬領域のへこみおよび皺を生じる。
【０００３】
本発明の目的は、弛みのある皮膚を美容治療するための方法および組成物を提供することである。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第一の態様は、皮膚の治療、特に皮膚のコラーゲンを収縮させることによって、顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こす美容方法に関する。
【０００５】
皮膚は、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を引き起こし皮膚のコラーゲンを収縮させることによって治療することができる。
【０００６】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択することができる。
【０００７】
本発明の好ましい態様によれば、皮膚のコラーゲンを収縮させるための、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤の投与、典型的には局所投与によって引き起こすことができる。
【０００８】
本発明での使用に好適な選択的β２拮抗薬活性を有する化合物としては、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレン、および種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０００９】
好ましい選択的なβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンであり、最も好ましくは、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である。
【００１０】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、好ましくは局所投与される。
【００１１】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化していてよく、例えばパルミチン酸のような脂肪酸に結合していてよく、例えばパルミチン酸に結合したアミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドであってもよい。
【００１２】
治療は、少なくとも２種類の活性剤の併用を含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との併用を含んでいてもよい。
【００１３】
皮膚は、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を引き起こすことによって治療することができる。
【００１４】
機械的ストレスと関連した遺伝子変化は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）である活性剤またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターによって誘発することができる。
【００１５】
グラウシンのような植物アルカロイドを、同時投与してもよい。
【００１６】
本発明は、生理学的に許容可能な媒質において、詳細には顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とするおける局所スキンケア組成物であって、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤を含んでなる、組成物にも関する。
【００１７】
活性剤は、好ましくは皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞の収縮を誘発して、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる。
【００１８】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの一部
から選択することができる。
【００１９】
好ましくは、活性剤はβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤である。
【００２０】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンおよび種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンであってもよい。
【００２１】
好ましい選択的なβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンであり、最も好ましくは、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である。
【００２２】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化していてよく、例えばパルミチン酸のような脂肪酸に結合していてよく、例えばパルミチン酸に結合したアミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドであってもよい。
【００２３】
組成物は、少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでいてもよい。
【００２４】
組成物は、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することができる活性剤を含んでいてもよい。
【００２５】
活性剤は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターであってもよい。
【００２６】
組成物は、グラウシンのような植物アルカロイドを含んでいてもよい。
【００２７】
活性剤は、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％、好ましくは０．５〜５質量％、最も好ましくは１〜２質量％の量で含まれていてもよい。
【００２８】
好ましくは、スキンケア組成物は、グラウシンのような植物アルカロイドを含んでいる。
【００２９】
本発明は、顔の皮膚を治療し、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすための美容用スキンケア組成物の製造方法において、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる上記の活性剤の使用にも関する。
【００３０】
組成物は、少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでいてもよい。
【００３１】
好ましくは、グラウシンのような植物アルカロイドが、スキンケア組成物の製造方法に用いられる。
【００３２】
本発明は、皮膚の治療方法に使用する、詳細には顔の皮膚を治療して顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすために皮膚のコラーゲンを収縮させることができる上記の活性剤にも関する。
【００３３】
本発明は、上記のような少なくとも２種類の活性剤の組み合わせ物、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との組み合わせ物にも関する。
【発明の具体的説明】
【００３４】
好ましい態様の説明
老化のよく認識されている特徴の１つは、皮膚の弛みである。これは、皮膚の弾力性および締まりの喪失、重力の影響、顔の骨格支持体の喪失、並びに顔における皮下脂肪組織支持体の喪失など多数の要因によるものである。これらの要因により、垂れ肉形成、目の周りの皮膚の弛み、頬領域のへこみおよび皺を生じる。
【００３５】
皮膚の締まりおよび張りのこの喪失により、皮膚の機械的ストレスも減少することは理解できる。繊維芽細胞に対する機械的ストレスは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）産生のための遺伝子にスイッチを入れ、並びにＥＣＭ崩壊のための遺伝子のスイッチを切ることによって繊維芽細胞を「合成的」モードに置く。次いで、これがＥＣＭ喪失の不完全なサイクルを生じ、これが更に繊維芽細胞に対する機械的ストレスの喪失をもたらす。次いで、老化した皮膚の特徴の悪化が続く。
【００３６】
本発明によれば、この過程の介入は、
１） ＥＣＭの繊維芽細胞収縮を増加させることによって、皮膚のコラーゲン収縮を引き起こし皮膚の機械的ストレスを増加させて、皮膚を一層引き締めかつ一層若くし、および／または
２） 機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発する
ことによって達成することができる。
【００３７】
また皮膚でコラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーター、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
であってもよい。
【００３８】
ＥＣＭの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害によって増加することができる。皮膚のコラーゲンを収縮させるための皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤（選択的β２拮抗薬としても知られる）の投与、典型的には局所投与によって誘発することができる。β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、β２−アドレナリン作動性受容体に選択的であるβアドレナリン作動性遮断活性を有する活性剤を意味する。本発明での使用に好適な選択的β２拮抗薬活性を有する化合物としては、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンおよび種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンである。
【００３９】
追加の利益は、β２ＡＲ阻害がまた創傷治癒を向上させ、皮膚バリヤー機能を向上させ、抗炎症性であるという事実によって得ることができる。
【００４０】
活性剤または上記の関連の生物学的物質の断片は、アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチド（ラクトフェリン由来の断片）であってもよい。１μＭの濃度のこのペプチドは、ほぼコントロールの３倍の繊維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮効果を有する。皮膚浸透性を促進するため、前記活性剤をパルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化してもよい。生物メディエーターの断片／部分は生物学的に高度に活性であることを実現することが重要である。従って、全アミノ酸配列内のペプチドを用いて生物活性を得ることができる。
【００４１】
機械的ストレスに関連した遺伝子変化は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）によって誘発させることができる。ＳＳＲＥは、ヌクレオチド配列ＧＡＧＡＣＣによってコードされる。この活性成分は、ＳＳＲＥのベクトル化したヌクレオチド配列またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターであってもよい。
【００４２】
コラーゲンマトリックス収縮は起こりうる繊維芽細胞アポトーシスと関連していることが知られているので、剤を処方物に加えてこの効果を中和すべきである。β２ＡＲ拮抗作用は脂質生成を引き起こすこともあることも知られている。顔の脂肪分解の減少状態は、実際には顔の老化に関して不都合でない可能性があるが、すべての候補において理想的な副作用でないこともある。この作用に対して、グラウシンは前脂肪細胞の繊維芽細胞への分化を引き起こすことによって、その領域における繊維芽細胞の個体数を増加させ、α−１アドレナリン作動性拮抗作用も有し、これが脂質生成を中和するので、グラウシンとの理想的組み合わせ物が考えられる。
【００４３】
本発明の好ましい態様では、ＩＣＩ １１８，５５１（β２ＡＲ拮抗薬）は、生理学的に許容可能な媒質においてパルミチン酸に結合したＹＴＲＶＶＷＸＡ（ラクトフェリンで見出されたペプチド配列）と組み合わせて用いて、スキンケア組成物を調製する。それぞれの活性剤は、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％、好ましくは０．５〜５質量％、最も好ましくは１〜２質量％の量で含まれていてもよい。
【００４４】
本発明による美容用スキンケア生成物の臨床結果は、顔の皮膚の収縮および引き締めである。これは、皮膚の老化作用に直接対抗するものである。この結果は、通常はフェイスリフト外科的処置のみが有効とされていた皺や過剰な顔の皮膚の出現を改善する。コラーゲン収縮は、レーザーによる皮膚の若返りや熱によるコラーゲン収縮のような他の多くの手術以外の美容法によって模索されてきた有益な効果である。皮膚引き締め効果を有するセラムのクリーム、ゲル、ローションなどのスキンケア生成物は、新規で簡単な解決法である。このような生成物は、他の活性成分と組み合わせて処方して、老化防止効果を更に高めることもできる。例としては、レチノイド、ビタミンＣ、カルノシン、レスベラトロール、ナイアシンアミド、ビタミンＥ、Α−リポ酸などのような酸化防止剤が挙げられる。他の例としては、ペプチド、プロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼアクチベーター、分子シャペロン、ＮＦ−κＢ阻害剤などの抗炎症剤が挙げられる。更なる例は、神経ペプチドモジュレーター、皮膚の天然保湿因子（ＮＭＦ）、セラミド、ヒアルロン酸およびアクアポリンを増加させる活性剤などの保湿剤である。このような生成物は、セルライトの出現に対しても有益な効果を有することがある。活性成分は、皮膚浸透性を高める目的でカプセル化し、またはナノ粒子として形成することができる。皮膚浸透性は、電磁電流または場の使用によって高めることもできる。
【００４５】
本発明を、下記の非制限的実施例に関して更に詳細に説明することにする。
【実施例】
【００４６】
例１
材料および方法
初代細胞培養
正常なヒト皮膚繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）は、患者のインフォームド・コンセントに続く環状切除後の組織寄贈によって得た。組織は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）およびＰｅｎ／ＳｔｒｅｐとアンホテリシンＢ（Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ）１０μｇ／ｍｌで洗浄した。次いで、組織を１ｍｍ２の断片に切り分けトリプシン−ＥＤＴＡ １：２５０に室温（ＲＴ）にて１時間懸濁した。次いで、組織を、血清を補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２中で２５００ｇにて３分間２回遠心分離することによって洗浄した。機械的離解を用いて、単一細胞浮遊液を作成した。細胞を血球計算盤を用いて計数し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と１０μｇ／ｍｌのＰｅｎ／ｓｔｒｅｐを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２中で、Ｔ７５組織培養フラスコ当たり１ｘ１０６個で培養した。インキュベーターは、３７°Ｃおよび５％ＣＯ２に保持した。培地は３〜４日毎に交換し、細胞はイン・ビトロで４継代から用いた。
【００４７】
ゲル形成
コラーゲンゲルを形成した。０．５Ｍ酢酸中ウシアキレス腱由来の１型ウシコラーゲン２ｍｇ／ｍｌからなるコラーゲン溶液を作成した。これにより、ゲル８０％を作成した。残りの１０％は、１０ｘＰＢＳから作成し、残りの容積はＦＢＳから作成した。全溶液のｐＨを、ＮａＯＨを用いて７．４に調整した。溶液４００μｌを、２４ウェルプレートのそれぞれのウェルに入れた。ゲルを、３７℃で１時間硬化させた。ゲルが適正に硬化したことを確認した後、ウェルの面から外し、１ｍｌの完全に補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２に一晩暴露して、順化させた。完全なゲルをウェル当たり３．５ｘ１０４個で播種し、試験化合物をこの時点で加えた。試験化合物は、下記のように加えた：０．１ｍｇ／ｍｌラクトフェリン、０．１ｍｇ／ｍｌ ＩＣＩ １１８ ５５１、１．０ｍｇ／ｍｌイソプロテレノール。細胞のみおよび無細胞コントロールも包含された。
【００４８】
ゲル収縮測定
写真は、０、３、６、１２および２４時間の暴露時にＣａｎｏｎ Ｐｏｗｅｒｓｈｏｔ Ａ６４０ １０ＭＰカメラを用いて同じ距離から撮影した。写真をＣｏｒｅｌＤＲＡＷ Ｘ３に移し、ウェルの内径とゲルの外縁を円ツール（ｃｉｒｃｌｅ ｔｏｏｌ）で測定した。これをそれぞれのウェルについて行い、写真の入射角が結果に影響しないようにした。次いで、これら２つの直径を、式：ゲル外側／ウェル内側×１００＝相対ゲルによってウェル直径の割合に転換した。次に、この値を、時間毎にそれぞれのゲルについて同じ方法で算出した。時間０時間をゲルサイズ１００％とし、それ以後の各時間を相対割合としてそれと比較した。標準偏差を、ウェルに対する元の相対割合に基づいて計算した。
【００４９】
細胞毒性
イソプレテレノール、ＩＣＩ １１８ ５５１およびラクトフェリンの細胞毒性を、黄色テラゾール（ｔｅｒａｚｏｌｅ）が生細胞によって紫色フォルマザンに転換されるＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイを使用し、上記で調製したＮＨＤＦを用いて測定した。９６ウェルプレートに５ｘ１０３個／ウェルの細胞を播種し、一晩結合させた。次いで、それらを目視チェックし、様々な濃度の試験化合物に２４時間暴露した。結果を、分光光度計を用いて５７０ｎｍで読み取った。次いで、生存力を、ＩＳＯ １０９９３−１：２００２に記載した標準的方法に準じて計算した。
【００５０】
結果
収縮検討
ゲル収縮を、０時間、３時間、６時間、１２時間および２４時間の間隔で２４時間にわたって検討した。総てのゲルは、時間中収縮した。コントロールゲルの収縮は最小限であり、元のサイズに戻り始めた。しかしながら、試験ゲルの直径は、一様な減少を示した。それらの収縮率には有意差を見出すことかできるが、ゲルの最終直径には有意差はない。ＩＣＩ １１８ ５５１は、ラクトフェリンおよび細胞のみのコントロールより高い割合でゲルを収縮させることが明らかになった。
【００５１】
試験結果の要約を、下記表１に示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】
ＩＣＩ １１８ ５５１に対する用量応答を、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．２ｍｇ／ｍｌで測定した。低めの濃度では、有意な活性を示さないことが分かったが、高めの濃度は収縮率を有意に増加させるとは思われなかった。理想的な濃度は、３．５ｘ１０４個の細胞を含むゲルでは、０．１ｍｇ／ｍｌであった。
【００５４】
細胞毒性
細胞毒性は、ＮＨＤＦでＭＴＴアッセイを用いて測定した。ヒトの皮膚細胞は、所望の用途に近似しているので、使用した。細胞毒性は、見られなかった。結果を、下記のグラフに示す。生存力を６日間目視で観察したが、イソプロテレノールに暴露した時点で細胞は、生存力を喪失し始めた。他の総ての細胞は、６日間の期間を超えてその生存力を保持した。
【００５５】
考察
繊維芽細胞を播種したコラーゲン１型ゲル収縮率は、β遮断薬ＩＣＩ １１８ ５５１の添加によって影響を受ける。ゲルは、ＩＣＩ １１８ ５５１、ラクトフェリンおよび細胞収縮群では、更に３日間観察したが、それらの元の大きさには戻らなかった。
【００５６】
例２−処方物
【表２】
【００５７】
【表３】
【００５８】
【表４】
【００５９】
油相Ｉを８０℃に加熱して、混合する。相ＩＩを８０℃に加熱して、油相に撹拌投与する。撹拌しながら冷却する。相ＩＩＩを４０℃で加える。３０℃まで冷却撹拌する。
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、美容用（ｃｏｓｍｅｔｉｃ）スキンケアの方法および組成物に関する。
【０００２】
老化のよく認識されている特徴の１つは、皮膚の弛みである。これは、皮膚の弾力性および締まり（ｆｉｒｍｎｅｓｓ）の喪失、重力の影響、顔の骨格支持体の喪失、並びに顔における皮下脂肪組織支持体の喪失など多数の要因によるものである。これらの要因により、垂れ肉（ｊｏｗｌ）形成、目の周りの皮膚の弛み、頬領域のへこみおよび皺を生じる。
【０００３】
本発明の目的は、弛みのある皮膚を美容治療するための方法および組成物を提供することである。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第一の態様は、皮膚の治療、特に皮膚のコラーゲンを収縮させることによって、顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こす美容方法に関する。
【０００５】
皮膚は、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を引き起こし皮膚のコラーゲンを収縮させることによって治療することができる。
【０００６】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択することができる。
【０００７】
本発明の好ましい態様によれば、皮膚のコラーゲンを収縮させるための、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤の投与、典型的には局所投与によって引き起こすことができる。
【０００８】
本発明での使用に好適な選択的β２拮抗薬活性を有する化合物としては、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレン、および種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０００９】
好ましい選択的なβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンであり、最も好ましくは、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である。
【００１０】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、好ましくは局所投与される。
【００１１】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化していてよく、例えばパルミチン酸のような脂肪酸に結合していてよく、例えばパルミチン酸に結合したアミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドであってもよい。
【００１２】
治療は、少なくとも２種類の活性剤の併用を含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との併用を含んでいてもよい。
【００１３】
皮膚は、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を引き起こすことによって治療することができる。
【００１４】
機械的ストレスと関連した遺伝子変化は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）である活性剤またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターによって誘発することができる。
【００１５】
グラウシンのような植物アルカロイドを、同時投与してもよい。
【００１６】
本発明は、生理学的に許容可能な媒質において、詳細には顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とするおける局所スキンケア組成物であって、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤を含んでなる、組成物にも関する。
【００１７】
活性剤は、好ましくは皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞の収縮を誘発して、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる。
【００１８】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの一部
から選択することができる。
【００１９】
好ましくは、活性剤はβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤である。
【００２０】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンおよび種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンであってもよい。
【００２１】
好ましい選択的なβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンであり、最も好ましくは、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である。
【００２２】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化していてよく、例えばパルミチン酸のような脂肪酸に結合していてよく、例えばパルミチン酸に結合したアミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドであってもよい。
【００２３】
組成物は、少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでいてもよい。
【００２４】
組成物は、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することができる活性剤を含んでいてもよい。
【００２５】
活性剤は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターであってもよい。
【００２６】
組成物は、グラウシンのような植物アルカロイドを含んでいてもよい。
【００２７】
活性剤は、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％、好ましくは０．５〜５質量％、最も好ましくは１〜２質量％の量で含まれていてもよい。
【００２８】
好ましくは、スキンケア組成物は、グラウシンのような植物アルカロイドを含んでいる。
【００２９】
本発明は、顔の皮膚を治療し、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすための美容用スキンケア組成物の製造方法において、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる上記の活性剤の使用にも関する。
【００３０】
組成物は、少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでいてもよく、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでいてもよい。
【００３１】
好ましくは、グラウシンのような植物アルカロイドが、スキンケア組成物の製造方法に用いられる。
【００３２】
本発明は、皮膚の治療方法に使用する、詳細には顔の皮膚を治療して顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすために皮膚のコラーゲンを収縮させることができる上記の活性剤にも関する。
【００３３】
本発明は、上記のような少なくとも２種類の活性剤の組み合わせ物、例えばβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤とラクトフェリンまたはその一部のようなコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との組み合わせ物にも関する。
【発明の具体的説明】
【００３４】
好ましい態様の説明
老化のよく認識されている特徴の１つは、皮膚の弛みである。これは、皮膚の弾力性および締まりの喪失、重力の影響、顔の骨格支持体の喪失、並びに顔における皮下脂肪組織支持体の喪失など多数の要因によるものである。これらの要因により、垂れ肉形成、目の周りの皮膚の弛み、頬領域のへこみおよび皺を生じる。
【００３５】
皮膚の締まりおよび張りのこの喪失により、皮膚の機械的ストレスも減少することは理解できる。繊維芽細胞に対する機械的ストレスは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）産生のための遺伝子にスイッチを入れ、並びにＥＣＭ崩壊のための遺伝子のスイッチを切ることによって繊維芽細胞を「合成的」モードに置く。次いで、これがＥＣＭ喪失の不完全なサイクルを生じ、これが更に繊維芽細胞に対する機械的ストレスの喪失をもたらす。次いで、老化した皮膚の特徴の悪化が続く。
【００３６】
本発明によれば、この過程の介入は、
１） ＥＣＭの繊維芽細胞収縮を増加させることによって、皮膚のコラーゲン収縮を引き起こし皮膚の機械的ストレスを増加させて、皮膚を一層引き締めかつ一層若くし、および／または
２） 機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発する
ことによって達成することができる。
【００３７】
また皮膚でコラーゲン収縮を引き起こす活性剤は、
サイトカインおよび関連の生物メディエーター、
増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）、
プロスタノイド、例えばトロンボキサンＡ、
トランスフェリン、例えばラクトフェリン、
リン脂質誘導体、例えばリゾフォスファチジン酸、
細胞外マトリックス糖タンパク質、例えばテネイシン−Ｃ、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
であってもよい。
【００３８】
ＥＣＭの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害によって増加することができる。皮膚のコラーゲンを収縮させるための皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮は、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤（選択的β２拮抗薬としても知られる）の投与、典型的には局所投与によって誘発することができる。β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、β２−アドレナリン作動性受容体に選択的であるβアドレナリン作動性遮断活性を有する活性剤を意味する。本発明での使用に好適な選択的β２拮抗薬活性を有する化合物としては、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンおよび種々の２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤は、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）およびブタキサミンである。
【００３９】
追加の利益は、β２ＡＲ阻害がまた創傷治癒を向上させ、皮膚バリヤー機能を向上させ、抗炎症性であるという事実によって得ることができる。
【００４０】
活性剤または上記の関連の生物学的物質の断片は、アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチド（ラクトフェリン由来の断片）であってもよい。１μＭの濃度のこのペプチドは、ほぼコントロールの３倍の繊維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮効果を有する。皮膚浸透性を促進するため、前記活性剤をパルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化してもよい。生物メディエーターの断片／部分は生物学的に高度に活性であることを実現することが重要である。従って、全アミノ酸配列内のペプチドを用いて生物活性を得ることができる。
【００４１】
機械的ストレスに関連した遺伝子変化は、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）によって誘発させることができる。ＳＳＲＥは、ヌクレオチド配列ＧＡＧＡＣＣによってコードされる。この活性成分は、ＳＳＲＥのベクトル化したヌクレオチド配列またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターであってもよい。
【００４２】
コラーゲンマトリックス収縮は起こりうる繊維芽細胞アポトーシスと関連していることが知られているので、剤を処方物に加えてこの効果を中和すべきである。β２ＡＲ拮抗作用は脂質生成を引き起こすこともあることも知られている。顔の脂肪分解の減少状態は、実際には顔の老化に関して不都合でない可能性があるが、すべての候補において理想的な副作用でないこともある。この作用に対して、グラウシンは前脂肪細胞の繊維芽細胞への分化を引き起こすことによって、その領域における繊維芽細胞の個体数を増加させ、α−１アドレナリン作動性拮抗作用も有し、これが脂質生成を中和するので、グラウシンとの理想的組み合わせ物が考えられる。
【００４３】
本発明の好ましい態様では、ＩＣＩ １１８，５５１（β２ＡＲ拮抗薬）は、生理学的に許容可能な媒質においてパルミチン酸に結合したＹＴＲＶＶＷＸＡ（ラクトフェリンで見出されたペプチド配列）と組み合わせて用いて、スキンケア組成物を調製する。それぞれの活性剤は、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％、好ましくは０．５〜５質量％、最も好ましくは１〜２質量％の量で含まれていてもよい。
【００４４】
本発明による美容用スキンケア生成物の臨床結果は、顔の皮膚の収縮および引き締めである。これは、皮膚の老化作用に直接対抗するものである。この結果は、通常はフェイスリフト外科的処置のみが有効とされていた皺や過剰な顔の皮膚の出現を改善する。コラーゲン収縮は、レーザーによる皮膚の若返りや熱によるコラーゲン収縮のような他の多くの手術以外の美容法によって模索されてきた有益な効果である。皮膚引き締め効果を有するセラムのクリーム、ゲル、ローションなどのスキンケア生成物は、新規で簡単な解決法である。このような生成物は、他の活性成分と組み合わせて処方して、老化防止効果を更に高めることもできる。例としては、レチノイド、ビタミンＣ、カルノシン、レスベラトロール、ナイアシンアミド、ビタミンＥ、Α−リポ酸などのような酸化防止剤が挙げられる。他の例としては、ペプチド、プロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼアクチベーター、分子シャペロン、ＮＦ−κＢ阻害剤などの抗炎症剤が挙げられる。更なる例は、神経ペプチドモジュレーター、皮膚の天然保湿因子（ＮＭＦ）、セラミド、ヒアルロン酸およびアクアポリンを増加させる活性剤などの保湿剤である。このような生成物は、セルライトの出現に対しても有益な効果を有することがある。活性成分は、皮膚浸透性を高める目的でカプセル化し、またはナノ粒子として形成することができる。皮膚浸透性は、電磁電流または場の使用によって高めることもできる。
【００４５】
本発明を、下記の非制限的実施例に関して更に詳細に説明することにする。
【実施例】
【００４６】
例１
材料および方法
初代細胞培養
正常なヒト皮膚繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）は、患者のインフォームド・コンセントに続く環状切除後の組織寄贈によって得た。組織は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）およびＰｅｎ／ＳｔｒｅｐとアンホテリシンＢ（Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ）１０μｇ／ｍｌで洗浄した。次いで、組織を１ｍｍ２の断片に切り分けトリプシン−ＥＤＴＡ １：２５０に室温（ＲＴ）にて１時間懸濁した。次いで、組織を、血清を補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２中で２５００ｇにて３分間２回遠心分離することによって洗浄した。機械的離解を用いて、単一細胞浮遊液を作成した。細胞を血球計算盤を用いて計数し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と１０μｇ／ｍｌのＰｅｎ／ｓｔｒｅｐを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２中で、Ｔ７５組織培養フラスコ当たり１ｘ１０６個で培養した。インキュベーターは、３７°Ｃおよび５％ＣＯ２に保持した。培地は３〜４日毎に交換し、細胞はイン・ビトロで４継代から用いた。
【００４７】
ゲル形成
コラーゲンゲルを形成した。０．５Ｍ酢酸中ウシアキレス腱由来の１型ウシコラーゲン２ｍｇ／ｍｌからなるコラーゲン溶液を作成した。これにより、ゲル８０％を作成した。残りの１０％は、１０ｘＰＢＳから作成し、残りの容積はＦＢＳから作成した。全溶液のｐＨを、ＮａＯＨを用いて７．４に調整した。溶液４００μｌを、２４ウェルプレートのそれぞれのウェルに入れた。ゲルを、３７℃で１時間硬化させた。ゲルが適正に硬化したことを確認した後、ウェルの面から外し、１ｍｌの完全に補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２に一晩暴露して、順化させた。完全なゲルをウェル当たり３．５ｘ１０４個で播種し、試験化合物をこの時点で加えた。試験化合物は、下記のように加えた：０．１ｍｇ／ｍｌラクトフェリン、０．１ｍｇ／ｍｌ ＩＣＩ １１８ ５５１、１．０ｍｇ／ｍｌイソプロテレノール。細胞のみおよび無細胞コントロールも包含された。
【００４８】
ゲル収縮測定
写真は、０、３、６、１２および２４時間の暴露時にＣａｎｏｎ Ｐｏｗｅｒｓｈｏｔ Ａ６４０ １０ＭＰカメラを用いて同じ距離から撮影した。写真をＣｏｒｅｌＤＲＡＷ Ｘ３に移し、ウェルの内径とゲルの外縁を円ツール（ｃｉｒｃｌｅ ｔｏｏｌ）で測定した。これをそれぞれのウェルについて行い、写真の入射角が結果に影響しないようにした。次いで、これら２つの直径を、式：ゲル外側／ウェル内側×１００＝相対ゲルによってウェル直径の割合に転換した。次に、この値を、時間毎にそれぞれのゲルについて同じ方法で算出した。時間０時間をゲルサイズ１００％とし、それ以後の各時間を相対割合としてそれと比較した。標準偏差を、ウェルに対する元の相対割合に基づいて計算した。
【００４９】
細胞毒性
イソプレテレノール、ＩＣＩ １１８ ５５１およびラクトフェリンの細胞毒性を、黄色テラゾール（ｔｅｒａｚｏｌｅ）が生細胞によって紫色フォルマザンに転換されるＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイを使用し、上記で調製したＮＨＤＦを用いて測定した。９６ウェルプレートに５ｘ１０３個／ウェルの細胞を播種し、一晩結合させた。次いで、それらを目視チェックし、様々な濃度の試験化合物に２４時間暴露した。結果を、分光光度計を用いて５７０ｎｍで読み取った。次いで、生存力を、ＩＳＯ １０９９３−１：２００２に記載した標準的方法に準じて計算した。
【００５０】
結果
収縮検討
ゲル収縮を、０時間、３時間、６時間、１２時間および２４時間の間隔で２４時間にわたって検討した。総てのゲルは、時間中収縮した。コントロールゲルの収縮は最小限であり、元のサイズに戻り始めた。しかしながら、試験ゲルの直径は、一様な減少を示した。それらの収縮率には有意差を見出すことかできるが、ゲルの最終直径には有意差はない。ＩＣＩ １１８ ５５１は、ラクトフェリンおよび細胞のみのコントロールより高い割合でゲルを収縮させることが明らかになった。
【００５１】
試験結果の要約を、下記表１に示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】
ＩＣＩ １１８ ５５１に対する用量応答を、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．２ｍｇ／ｍｌで測定した。低めの濃度では、有意な活性を示さないことが分かったが、高めの濃度は収縮率を有意に増加させるとは思われなかった。理想的な濃度は、３．５ｘ１０４個の細胞を含むゲルでは、０．１ｍｇ／ｍｌであった。
【００５４】
細胞毒性
細胞毒性は、ＮＨＤＦでＭＴＴアッセイを用いて測定した。ヒトの皮膚細胞は、所望の用途に近似しているので、使用した。細胞毒性は、見られなかった。結果を、下記のグラフに示す。生存力を６日間目視で観察したが、イソプロテレノールに暴露した時点で細胞は、生存力を喪失し始めた。他の総ての細胞は、６日間の期間を超えてその生存力を保持した。
【００５５】
考察
繊維芽細胞を播種したコラーゲン１型ゲル収縮率は、β遮断薬ＩＣＩ １１８ ５５１の添加によって影響を受ける。ゲルは、ＩＣＩ １１８ ５５１、ラクトフェリンおよび細胞収縮群では、更に３日間観察したが、それらの元の大きさには戻らなかった。
【００５６】
例２−処方物
【表２】
【００５７】
【表３】
【００５８】
【表４】
【００５９】
油相Ｉを８０℃に加熱して、混合する。相ＩＩを８０℃に加熱して、油相に撹拌投与する。撹拌しながら冷却する。相ＩＩＩを４０℃で加える。３０℃まで冷却撹拌する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚のコラーゲンを収縮させることによって、皮膚を治療する美容方法。
【請求項２】
顔の皮膚を治療して顔の皮膚を収縮させ引き締めるための、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を引き起こし皮膚のコラーゲンを収縮させることによって皮膚を治療する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
皮膚のコラーゲン収縮が、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、
プロスタノイド、
トランスフェリン、
リン脂質誘導体、
細胞外マトリックス糖タンパク質、
熱ショックタンパク質（類）（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択される活性剤を投与することによって行われる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
増殖因子が上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
プロスタノイドがトロンボキサンＡである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
トランスフェリンがラクトフェリンである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
リン脂質誘導体がリゾフォスファチジン酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
細胞外マトリックス糖タンパク質がテネイシン−Ｃである、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が熱ショックタンパク質２７である、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
コラーゲンを収縮させるための皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮が、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤の投与によって誘発される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンまたは２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンから選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）またはブタキサミンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤を局所投与する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤が、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化されている、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
活性剤がパルミチン酸に結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドがパルミチン酸に結合している、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも２種類の活性剤の併用を含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤と、コラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との併用を含んでなる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することによって皮膚を治療する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
機械的ストレスと関連した遺伝子変化を剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化ヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターである活性剤によって誘発する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
植物アルカロイドを同時投与する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤を含んでなる、生理学的に許容可能な媒質中の局所スキンケア組成物。
【請求項２７】
顔の皮膚を治療して顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こす、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
活性剤が、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を誘発して皮膚のコラーゲンを収縮させることができる、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
活性剤が
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、
プロスタノイド、
トランスフェリン、
リン脂質誘導体、
細胞外マトリックス糖タンパク質、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択される請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
増殖因子が上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
プロスタノイドがトロンボキサンＡである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
トランスフェリンがラクトフェリンである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
リン脂質誘導体がリゾフォスファチジン酸である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
細胞外マトリックス糖タンパク質がテネイシン−Ｃである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３５】
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が熱ショックタンパク質２７である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
活性剤がβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤である、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンまたは２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンから選択される、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）またはブタキサミンである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤が、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化されている、請求項２６〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
活性剤がパルミチン酸に結合している、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドがパルミチン酸に結合している、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでなる、請求項２６〜４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤と、コラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでなる、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
活性剤が、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することができる、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
活性剤が、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
植物アルカロイドを含む、請求項２６〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％の量で含まれている、請求項２６〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の０．５〜５質量％の量で含まれている、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の１〜２質量％の量で含まれている、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
顔の皮膚を治療し、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすための美容用スキンケア組成物の製造方法において、請求項２９〜４２、４６または４７のいずれか一項に記載の、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤の使用。
【請求項５４】
少なくとも２種類の活性剤を併用する、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤およびコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤の、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
組成物が植物アルカロイドを含んでなる、請求項５３〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
皮膚の治療方法において使用するための請求項２９〜４１、４６または４７のいずれか一項に記載の皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤。
【請求項６０】
顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とする方法において使用するための、請求項５９に記載の活性剤。
【請求項６１】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤および皮膚の治療方法において使用するための請求項２９〜３８のいずれか一項に記載のコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤の組み合わせ物。
【請求項６２】
顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とする方法において使用するための、請求項６１に記載の組み合わせ物。
【請求項１】
皮膚のコラーゲンを収縮させることによって、皮膚を治療する美容方法。
【請求項２】
顔の皮膚を治療して顔の皮膚を収縮させ引き締めるための、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を引き起こし皮膚のコラーゲンを収縮させることによって皮膚を治療する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
皮膚のコラーゲン収縮が、
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、
プロスタノイド、
トランスフェリン、
リン脂質誘導体、
細胞外マトリックス糖タンパク質、
熱ショックタンパク質（類）（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択される活性剤を投与することによって行われる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
増殖因子が上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
プロスタノイドがトロンボキサンＡである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
トランスフェリンがラクトフェリンである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
リン脂質誘導体がリゾフォスファチジン酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
細胞外マトリックス糖タンパク質がテネイシン−Ｃである、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が熱ショックタンパク質２７である、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
コラーゲンを収縮させるための皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮が、β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤の投与によって誘発される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンまたは２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンから選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）またはブタキサミンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤を局所投与する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤が、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化されている、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
活性剤がパルミチン酸に結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドがパルミチン酸に結合している、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも２種類の活性剤の併用を含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤と、コラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤との併用を含んでなる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することによって皮膚を治療する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
機械的ストレスと関連した遺伝子変化を剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化ヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターである活性剤によって誘発する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
植物アルカロイドを同時投与する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤を含んでなる、生理学的に許容可能な媒質中の局所スキンケア組成物。
【請求項２７】
顔の皮膚を治療して顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こす、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
活性剤が、皮膚の細胞外マトリックスの繊維芽細胞収縮を誘発して皮膚のコラーゲンを収縮させることができる、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
活性剤が
サイトカインおよび関連の生物メディエーターまたはその部分、
増殖因子、
プロスタノイド、
トランスフェリン、
リン脂質誘導体、
細胞外マトリックス糖タンパク質、
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば熱ショックタンパク質２７、または
それらの部分
から選択される請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
増殖因子が上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）または結合組織増殖因子（ＣＴＦＧ）である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
プロスタノイドがトロンボキサンＡである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
トランスフェリンがラクトフェリンである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
リン脂質誘導体がリゾフォスファチジン酸である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
細胞外マトリックス糖タンパク質がテネイシン−Ｃである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３５】
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が熱ショックタンパク質２７である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
活性剤がβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤である、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、ブタキサミン、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）、Ｈ３５／２５、プレナルテロール、種々の４−および５−［２−ヒドロキシ−３−（イソプロピルアミノ）プロポキシ］ベンズイミダゾール、１−（ｔ−ブチル−アミノ−３−オール−２−プロピル）オキシミノ−９−フルオレンまたは２−（α−ヒドロキシアリールメチル）−３，３−ジメチルアジリジンから選択される、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、化学物質エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）またはブタキサミンである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
選択的β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤が、エリトロ−ｄｌ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−３−イソプロピルアミノブタン−２−オール（ＩＣＩ １１８，５５１）である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
コラーゲン収縮を引き起こす活性剤が、パルミトイル化、ナノカプセル化またはリポソーム化されている、請求項２６〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
活性剤がパルミチン酸に結合している、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
アミノ酸配列ＹＴＲＶＶＷＸＡを有するペプチドがパルミチン酸に結合している、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
少なくとも２種類の活性剤を組み合わせて含んでなる、請求項２６〜４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤と、コラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤とを含んでなる、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
活性剤が、コラーゲン収縮を引き起こす機械的ストレスと関連した遺伝子変化を誘発することができる、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
活性剤が、剪断応力応答要素（ＳＳＲＥ）のベクトル化したヌクレオチド配列（すなわち、ＧＡＧＡＣＣ）またはＳＳＲＥプロモーター配列のアクチベーターである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
植物アルカロイドを含む、請求項２６〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の０．５〜１０質量％の量で含まれている、請求項２６〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の０．５〜５質量％の量で含まれている、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
それぞれの活性剤が、スキンケア組成物の１〜２質量％の量で含まれている、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
顔の皮膚を治療し、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすための美容用スキンケア組成物の製造方法において、請求項２９〜４２、４６または４７のいずれか一項に記載の、皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤の使用。
【請求項５４】
少なくとも２種類の活性剤を併用する、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のβ−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤およびコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤の、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
コラーゲン収縮を引き起こす他の活性剤が、ラクトフェリンまたはその一部である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
組成物が植物アルカロイドを含んでなる、請求項５３〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
植物アルカロイドがグラウシンである、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
皮膚の治療方法において使用するための請求項２９〜４１、４６または４７のいずれか一項に記載の皮膚のコラーゲンを収縮させることができる活性剤。
【請求項６０】
顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とする方法において使用するための、請求項５９に記載の活性剤。
【請求項６１】
β−２−アドレナリン作動性受容体（β２ＡＲ）阻害剤および皮膚の治療方法において使用するための請求項２９〜３８のいずれか一項に記載のコラーゲン収縮を引き起こす別の活性剤の組み合わせ物。
【請求項６２】
顔の皮膚を治療して、顔の皮膚の収縮および引き締めを引き起こすことを目的とする方法において使用するための、請求項６１に記載の組み合わせ物。
【公表番号】特表２０１３−５０３８５０（Ｐ２０１３−５０３８５０Ａ）
【公表日】平成２５年２月４日（２０１３．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２７４４３（Ｐ２０１２−５２７４４３）
【出願日】平成２２年９月６日（２０１０．９．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０５３９９９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０２７３３１
【国際公開日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【出願人】（５１２０５６１０８）
【氏名又は名称原語表記】ＭＡＬＡＮ ＤＥ ＶＩＬＬＩＥＲＳ
【出願人】（５１２０５６１１９）
【氏名又は名称原語表記】ＨＵＧＯ ＢＡＲＲＩＥ ＮＥＬ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年２月４日（２０１３．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月６日（２０１０．９．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０５３９９９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０２７３３１
【国際公開日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【出願人】（５１２０５６１０８）
【氏名又は名称原語表記】ＭＡＬＡＮ ＤＥ ＶＩＬＬＩＥＲＳ
【出願人】（５１２０５６１１９）
【氏名又は名称原語表記】ＨＵＧＯ ＢＡＲＲＩＥ ＮＥＬ
【Ｆターム（参考）】
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