美白剤、抗アレルギー剤及び食料品
【課題】イネ植物中に含まれる美白作用及び／又は抗アレルギー作用を有する物質を精製し、その成分を特定化し、安全性が高く、且つ美白作用を有する美白剤、抗アレルギー作用を有する抗アレルギー剤、並びに、これらのいずれかを用いた食料品を提供する。
【解決手段】イネ由来ポリフェノールを有効成分として含有する美白剤及び抗アレルギー剤である。副作用等の心配のない古くから用いられている天然物であるイネ由来のポリフェノールは、メラニン生成を強く抑制する効果があり、また、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制し、結果としてヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン等の化学物質の遊離を抑制する効果がある。
【解決手段】イネ由来ポリフェノールを有効成分として含有する美白剤及び抗アレルギー剤である。副作用等の心配のない古くから用いられている天然物であるイネ由来のポリフェノールは、メラニン生成を強く抑制する効果があり、また、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制し、結果としてヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン等の化学物質の遊離を抑制する効果がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イネに含まれる特定の成分を有効成分として含有する美白剤及び抗アレルギー剤、並びにこれらのいずれかを用いた食料品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、シミ、ソバカス及び日焼け後の肌への色素沈着の予防と解消のために、種々の美白化粧料や皮膚外用剤等が知られている。例えば、欧米において、ハイドロキノンを配合した化粧料が市販されている。このハイドロキノンは、シミの原因であるメラニン色素の合成を阻止する働きのある成分であり、シミの治療効果や黒人の皮膚を白くする効果があることが知られている。しかしながら、ハイドロキノンは効果が高い反面、人によっては刺激やアレルギーが出る場合があり物質自体の安全性に問題あった。
【０００３】
また、化粧料等における皮膚障害の主なものとして、皮膚に付けたことにより刺激を受けて起こる刺激性接触皮膚炎、アレルギー物質を含む化粧料等を皮膚に付けたことにより体内に抗体がつくられ、その後に再び原因物質と接触して発症するアレルギー性接触皮膚炎、皮膚に接触した物質が日光により刺激物質やアレルギー性物質に変化し、それにより引き起こされる光接触皮膚炎などが報告されている。また、皮膚炎が原因で皮膚に色素が沈着し長い間消えないシミになるなどの問題があった。従って、化粧料等は長期に渡って使用されるものであるため、美白作用のみならず、皮膚に対して安全性を有するものが望まれていた。
【０００４】
このような状況下で、美白効果に優れ、皮膚に対する安全性が高い植物由来の天然成分を配合したものが提案されている。例えば、特許文献１には、イネを粉砕又は破砕して得た粉末と、オリーブ油又は椿油又は米油からなる油脂とを含有し、前記油脂を２０〜９０重量％含有することを特徴とする美白化粧料が開示されている。
【特許文献１】特許第３５５７６１６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、未だ充分な色素沈着予防・改善効果と抗アレルギー効果とを有する物質は知られていないのが現状である。
【０００６】
また、上記特許文献１には、美白効果があると思われるイネの成分としてポリフェノール等が挙げられているが、イネ植物中のどのような成分が美白作用を有するのか、その特定には至っていない。
【０００７】
そこで、本発明は、イネ植物中に含まれる美白作用及び／又は抗アレルギー作用を有する物質を精製し、その成分を特定化し、安全性が高く、且つ美白作用を有する美白剤、抗アレルギー作用を有する抗アレルギー剤、並びに、これらのいずれかを用いた食料品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を鑑みて鋭意検討した結果、イネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物が、メラニン生成を強く抑制する効果があること、また、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制し、結果としてヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン等の化学物質の遊離を抑制する効果があることを見出し、本発明に想到した。
【０００９】
本発明における請求項１の美白剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明における請求項２の美白剤は、請求項１において、前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明における請求項３の抗アレルギー剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする。
【００１２】
本発明における請求項４の抗アレルギー剤は、請求項３において、前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする。
【００１３】
本発明における請求項５の食料品は、請求項１又は２記載の美白剤、請求項３又は４記載の抗アレルギー剤の少なくとも１種を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明における請求項１の美白剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、メラニン生成抑制作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１５】
本発明における請求項２の美白剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、メラニン生成抑制作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１６】
本発明における請求項３の抗アレルギー剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、抗アレルギー作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１７】
本発明における請求項４の抗アレルギー剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、抗アレルギー作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１８】
本発明における請求項５の食料品によれば、美白作用及び／又は抗アレルギー作用を有する食料品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤の有効成分の原料として使用するイネは、イネ苗、青刈りイネ等の青色（緑色）状態のものであり、特に田植え後約６週間、約６０ｃｍに生育したものが好ましい。本発明では該イネの若葉及び茎を粉砕又は破砕して得た粉末物を利用するものである。ここで、田植え時に発生する余剰のイネ苗、減反による青刈りイネ、イネ刈り時に脱落米から発生する発芽苗、イネ刈り後にイネ株から発生する再生イネ等の利用価値のないイネを用いることにより、極めて安価に原料であるイネの粉末物を得ることができる。また、田植え後約６週間で好ましい原料のイネを入手できるため生産性が高く、原料として非常に有用である。
【００２１】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含む。本発明で使用するイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物の抽出方法は、イネの葉及び茎を必要に応じ、生又は乾燥したものを粉砕又は破砕し、葉及び茎を混合したものから抽出するが、その混合比率は特に限定されるものではなく、種々の適当な溶媒を用いて、室温又は加温下において抽出する方法が挙げられる。具体的に抽出溶媒としては、例えば、水、或いはメタノール、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコールの他、アセトン、酢酸等の水と互いに溶解する親水性有機溶媒等が挙げられ、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００２２】
さらに、本発明に用いるイネ由来ポリフェノールは、上記のようにして得られたイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物を濃縮した濃縮物として用いてもよく、また、スプレードライや凍結乾燥等の操作により抽出粉末として用いてもよい。さらに、逆相ＨＰＬＣやカラムクロマトグラフィーなどにより精製したものが好ましく、抽出物の分画・精製処理法は特に限定されない。
【００２３】
前記イネ由来ポリフェノールは、フラボン類及び／又はその配糖体等を含み、ポリフェノール含有量として少なくとも１０％以上含むように抽出・精製することが好ましい。
【００２４】
本発明のイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物は、単独で美白剤又は抗アレルギー剤として単独で使用されるのみならず、必要に応じて、他の物質、例えば、抗酸化剤、安定剤、呈味剤、着色剤、着香剤、増量剤等を任意に併用して用いてもよく、イネ由来ポリフェノールを含有する美白剤又は抗アレルギー剤の作用、効果を高めることも、安定性を向上させることも、更には取り扱いを容易にすることも可能である。
【００２５】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤において、有効成分であるイネ由来ポリフェノールの使用量は、使用形態により適宜選択することができる。また、本発明の美白剤及び抗アレルギー剤にはイネ由来ポリフェノールの効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、pH調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美容成分、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００２６】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、ローション、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。
【００２７】
また、本発明の有効成分であるイネ由来ポリフェノールは、美白作用及び／又は抗アレルギー作用を目的として、食料品、保健用食品等、例えば、米菓、和菓子、洋菓子、氷菓、調味料、畜肉加工品、魚肉・水産加工品、乳・卵加工品、野菜加工品、果実加工品、穀類加工品等に添加し摂取することができる。
【００２８】
以下に、実施例及び試験例に基づいて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
イネ由来ポリフェノールの精製。イネ若葉乾燥粉末１２５ｇに蒸留水１．２５Ｌを加え、攪拌しながら１時間抽出し、その後、遠心分離によって抽出液を得た。抽出及び遠心分離操作を３回繰り返し、イネ若葉水抽出液４．８Ｌを得た。抽出液の一部は凍結乾燥しイネ若葉水抽出物とした。残りの抽出液はＳｅｐＰａｋ(登録商標)Ｃ１８樹脂５０ｇを詰めたカラムに投入し、疎水性成分（ポリフェノール成分を含む）を吸着後、５０％エタノールによってポリフェノール成分を溶出した。５０％エタノール溶出液を濃縮後、凍結乾燥することでイネ由来ポリフェノールを得た。なお、イネ若葉粉末、イネ若葉水抽出物及びイネ由来ポリフェノールに含まれるポリフェノールの含有率は、それぞれ、０．９％、２．５％及び１８．８％であった。
【００３０】
なお、本実施例および後述する試験例及び実施例におけるポリフェノールの定量は、Ｆｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により行った。すなわち、試験試料５０μＬに、蒸留水４ｍＬ、フェノール試薬（Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｕｓ（Sigma社製）を蒸留水で５倍に希釈したもの）１ｍＬ、及び１０％（ｗ／ｖ）炭酸ナトリウム溶液１ｍＬを加え暗所で１時間反応させ、その後ただちに７６０ｎｍの吸光度を測定した。試験試料のポリフェノール濃度は、没食子酸（６２．５〜１０００μｇ／ｍＬ）を用いて作成した検量線から算出した。
【実施例２】
【００３１】
イネ由来ポリフェノールのＨＰＬＣによる分析及び分取。上記実施例１で得られたイネ由来ポリフェノールを逆相ＨＰＬＣカラム（ＳＨＩＭ−ＰＡＣＫ ＰＲＣ−ＯＤＳ、２０ｍｍ×２５０ｍｍ、（株）島津製作所社製）（ＨＰＬＣの条件；Ａ：０．１％ＴＦＡ／ＤＷ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ、％Ｂ：４０％。２０分、流量：５ｍＬ／ｍｉｎ、検出：３２０ｎｍ）を用い、ポリフェノール成分の分析を行った。結果を図１に示す。図１に示すように１〜５のポリフェノール成分が含有することが判明した。
【００３２】
さらに、図１の１〜５の各ポリフェノール成分の機能性および構造を明らかにするため、逆相ＨＰＬＣカラムを用い各成分の分取を行った。また、１〜５の各成分を質量分析、ＮＭＲで分析を行った。
【００３３】
ＬＣ／ＭＳ分析およびＭＳ／ＭＳ分析の結果、１〜５の各ポリフェノール成分は、フラグメントイオン、フラグメントパターンが類似しており、同じ母骨格を有する類縁化合物であることが推定された。また、ＰＤＡのＵＶ−ＶＩＳスペクトルで２５０，２８０，３５０ｎｍ付近に吸収極大が観測されたことから、１〜５の各成分は、フラボン配糖体であると考えられた。以下の化１に推測された１〜５の構造を示す。
【００３４】
【化１】
【００３５】
さらに、１〜５の各成分をＮＭＲスペクトル解析した結果、２，３，４の各成分はそれぞれ、Neocarlinoside (6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-L-arabinopyranosylluteolin)（以下、化２），Carlinoside (6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranosylluteolin) （以下、化３），Isoorientin-2"-O-β-glucopyranoside（以下、化４）であると同定された。
【００３６】
【化２】
【００３７】
【化３】
【００３８】
【化４】
【００３９】
次に、本発明の有効成分であるイネ由来ポリフェノールが、メラニン生成抑制作用を有すること、及び、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制する作用を有することについて試験例を挙げて説明する。
（試験例１）イネ由来ポリフェノールのメラニン生成抑制試験。
【００４０】
メラニン生成抑制試験は、マウスメラノーマＢ１６細胞を用い、メラニン生成に対する抑制作用を測定した。Ｂ１６細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＭＥＭ、Sigma社製）に１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加した培地で継代培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。直径６ｃｍの細胞培養シャーレに２．５×１０５の細胞を播種し、２４時間培養した。その後、培地を新鮮培地に交換し、上記実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを試験試料として添加し（終濃度１００μｇ／ｍＬ）４８時間培養した。再度、培地交換および試験試料の添加を行い、さらに４８時間培養した。なお、無添加の培地をコントロールとして、美白作用が知られるアルブチン添加（１００μＭ（２７μｇ／ｍＬ））の培地をポジティブコントロールとして使用し、同様の試験を行った。
【００４１】
細胞数及びメラニン生成量は、以下のようにして求めた。細胞数は、シャーレの培地を取り除きＰＢＳで洗浄後、トリプシン処理によって細胞を回収し、測定した。メラニン生成量は、回収した細胞に１ＮＮａＯＨ溶液を添加して超音波処理することで溶解し、４７５ｎｍの吸光度により測定した。測定したメラニン量（４７５ｎｍの吸光度）を細胞数で除し、細胞当りのメラニン生成量（＝吸光度４７５ｎｍ／細胞数）を算出し、メラニン生成量（％）＝（試験試料のメラニン生成量／コントロールのメラニン生成量）×１００を算出した。結果を図２に示す。
【００４２】
図２に示したように、メラニン生成は、美白作用の知られるアルブチンで５８％まで減少し、イネ由来ポリフェノールでも６２％程度まで減少している。この結果より、イネ由来ポリフェノールはアルブチンと同程度の強い美白作用を有することが判明した。
（試験例２）イネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験。
【００４３】
脱顆粒阻害試験は、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）を用い、抗原特異的な脱顆粒の阻害を測定した。脱顆粒阻害活性は、顆粒中の酵素β―ヘキソサミニダーゼの放出率を求め、放出率に対する阻害活性（β―ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性）を指標とした。ＲＢＬ−２Ｈ３細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＭＥＭ、Sigma社製）に１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加した培地で継代培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。２４ウェル培養プレートに２．５×１０５cells／wellで播種し、一晩培養した後、抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（Sigma社製）を終濃度５０ｎｇ／ｍＬで加え、２時間培養した。その後、細胞を１．５ｍＬの改変タイロード（Modified Tyrode’s：ＭＴ）緩衝液（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、５．６ｍＭ ｇｌｕｃｏｓｅ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ６．８）で２回洗浄し、試験試料を溶解したＭＴ緩衝液又はコントロールとしてＭＴ緩衝液のみを添加し、１０分間反応（５％ＣＯ２、３７℃）後、ＤＮＰ−ＨＡＳ抗原を終濃度５０ｎｇ／ｍＬで加え、さらに３０分間反応させた。プレートを氷上に静置して反応停止後、培養上清を回収した。残った細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００／ＭＴ緩衝液を５００μＬ／ｗｅｌｌで添加し細胞溶解液を得た。
【００４４】
培養上清及び細胞溶解液それぞれ５０μＬを９６ウェルプレートに移し３７℃で５分間予備加温後、β−ヘキソサミニダーゼの基質溶液１００μＬ（０．１Ｍ citrate buffer、ｐＨ４．５に溶解した３．３ｍＭ ｐ−nitrophenyl−２−acetoamido−２−deoxy−β―Ｄ−glucopyranoside）を加え、３７℃で２５分間反応させた。反応溶液に１００μＬのstop buffer（２Ｍ Glycine buffer、ｐＨ１０．４）を加えて反応を停止後、プレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定し、細胞内および細胞外に放出されたβ−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定した。
【００４５】
以下の数１により算出されるβ−ヘキソサミニダーゼの放出率（％）を求めた。
【数１】
【００４６】
また、β−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性（％）は以下の数２により算出した。
【数２】
【００４７】
これらの結果を図３に示す。図３に示したように、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）の脱顆粒阻害試験の結果、イネ由来ポリフェノールは用量依存的にβ−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を示し、脱顆粒阻害活性が強いことが判明した。このことは、脱顆粒によって遊離されるヒスタミン、セロトニン等、炎症起因物質の遊離を抑制することを意味しており、従って本発明で得られるイネ由来ポリフェノールは抗アレルギー剤及び抗炎症剤としてきわめて有効である。
（試験例３）ＨＰＬＣで分取したイネ由来ポリフェノール成分１〜５の脱顆粒阻害試験。
【００４８】
上記試験例２と同様の方法で、β−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を測定した。結果を図４に示す。
【００４９】
図４に示したように、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）の脱顆粒阻害試験の結果、イネ由来ポリフェノール成分１〜５は全てβ−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を示し、さらにその活性もイネ由来ポリフェノール成分１〜５すべてが同程度の強い阻害活性を示すことが判明した。このことは、イネ由来ポリフェノール成分１〜５の全てが、脱顆粒によって遊離されるヒスタミン、セロトニン等、炎症起因物質の遊離を抑制することを意味しており、従って本発明で得られるフラボンを基本骨格としたイネ由来ポリフェノールは抗アレルギー剤及び抗炎症剤として極めて有効である。
【００５０】
上記の結果に示すように、本発明に用いる有効成分であるイネ由来ポリフェノールは、美白作用及び抗アレルギー作用を有し、効果の優れた美白剤及び抗アレルギー剤の提供が可能である。
【実施例３】
【００５１】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、化粧水を調製した。精製水７９．８重量％、グリセリン５重量％、プロピレングリコール５重量％、エタノール１０重量％、イネ由来ポリフェノール０．１重量％、香料０．１重量％を均一に攪拌し、化粧水を得た。
【実施例４】
【００５２】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、錠剤又は顆粒剤を調製した。実施例１で得たイネ由来ポリフェノール１５０ｍｇを精製でんぷん末１５０ｍｇ及び乳糖７００ｍｇと混合して錠剤又は顆粒剤を得た。
【実施例５】
【００５３】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、飲料を調製した。イネ由来ポリフェノール０．１ｇをオレンジ果汁１００％の飲料１リットルに添加・混合して、飲料を得た。
【実施例６】
【００５４】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、キャンディーを調製した。
砂糖５０．０ｇ、水飴５０．０ｇ、イネ由来ポリフェノール０．５ｇ、クエン酸０．３ｇ、香料０．２ｇ、色素 適量を加熱混合し、型に入れ冷却し、キャンディーを得た。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】実施例２で行ったイネ由来ポリフェノールのＨＰＬＣの結果を示すグラフである。
【図２】試験例１で行ったイネ由来ポリフェノールのメラニン生成抑制試験の結果を示すグラフである。
【図３】試験例２で行ったイネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験の結果を示すグラフである。
【図４】試験例３で行ったイネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験の結果を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イネに含まれる特定の成分を有効成分として含有する美白剤及び抗アレルギー剤、並びにこれらのいずれかを用いた食料品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、シミ、ソバカス及び日焼け後の肌への色素沈着の予防と解消のために、種々の美白化粧料や皮膚外用剤等が知られている。例えば、欧米において、ハイドロキノンを配合した化粧料が市販されている。このハイドロキノンは、シミの原因であるメラニン色素の合成を阻止する働きのある成分であり、シミの治療効果や黒人の皮膚を白くする効果があることが知られている。しかしながら、ハイドロキノンは効果が高い反面、人によっては刺激やアレルギーが出る場合があり物質自体の安全性に問題あった。
【０００３】
また、化粧料等における皮膚障害の主なものとして、皮膚に付けたことにより刺激を受けて起こる刺激性接触皮膚炎、アレルギー物質を含む化粧料等を皮膚に付けたことにより体内に抗体がつくられ、その後に再び原因物質と接触して発症するアレルギー性接触皮膚炎、皮膚に接触した物質が日光により刺激物質やアレルギー性物質に変化し、それにより引き起こされる光接触皮膚炎などが報告されている。また、皮膚炎が原因で皮膚に色素が沈着し長い間消えないシミになるなどの問題があった。従って、化粧料等は長期に渡って使用されるものであるため、美白作用のみならず、皮膚に対して安全性を有するものが望まれていた。
【０００４】
このような状況下で、美白効果に優れ、皮膚に対する安全性が高い植物由来の天然成分を配合したものが提案されている。例えば、特許文献１には、イネを粉砕又は破砕して得た粉末と、オリーブ油又は椿油又は米油からなる油脂とを含有し、前記油脂を２０〜９０重量％含有することを特徴とする美白化粧料が開示されている。
【特許文献１】特許第３５５７６１６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、未だ充分な色素沈着予防・改善効果と抗アレルギー効果とを有する物質は知られていないのが現状である。
【０００６】
また、上記特許文献１には、美白効果があると思われるイネの成分としてポリフェノール等が挙げられているが、イネ植物中のどのような成分が美白作用を有するのか、その特定には至っていない。
【０００７】
そこで、本発明は、イネ植物中に含まれる美白作用及び／又は抗アレルギー作用を有する物質を精製し、その成分を特定化し、安全性が高く、且つ美白作用を有する美白剤、抗アレルギー作用を有する抗アレルギー剤、並びに、これらのいずれかを用いた食料品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を鑑みて鋭意検討した結果、イネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物が、メラニン生成を強く抑制する効果があること、また、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制し、結果としてヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン等の化学物質の遊離を抑制する効果があることを見出し、本発明に想到した。
【０００９】
本発明における請求項１の美白剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明における請求項２の美白剤は、請求項１において、前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明における請求項３の抗アレルギー剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする。
【００１２】
本発明における請求項４の抗アレルギー剤は、請求項３において、前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする。
【００１３】
本発明における請求項５の食料品は、請求項１又は２記載の美白剤、請求項３又は４記載の抗アレルギー剤の少なくとも１種を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明における請求項１の美白剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、メラニン生成抑制作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１５】
本発明における請求項２の美白剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、メラニン生成抑制作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１６】
本発明における請求項３の抗アレルギー剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、抗アレルギー作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１７】
本発明における請求項４の抗アレルギー剤によれば、イネ由来ポリフェノールを有効成分とするので、抗アレルギー作用を示すとともに安全性にも優れる。
【００１８】
本発明における請求項５の食料品によれば、美白作用及び／又は抗アレルギー作用を有する食料品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤の有効成分の原料として使用するイネは、イネ苗、青刈りイネ等の青色（緑色）状態のものであり、特に田植え後約６週間、約６０ｃｍに生育したものが好ましい。本発明では該イネの若葉及び茎を粉砕又は破砕して得た粉末物を利用するものである。ここで、田植え時に発生する余剰のイネ苗、減反による青刈りイネ、イネ刈り時に脱落米から発生する発芽苗、イネ刈り後にイネ株から発生する再生イネ等の利用価値のないイネを用いることにより、極めて安価に原料であるイネの粉末物を得ることができる。また、田植え後約６週間で好ましい原料のイネを入手できるため生産性が高く、原料として非常に有用である。
【００２１】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤は、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含む。本発明で使用するイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物の抽出方法は、イネの葉及び茎を必要に応じ、生又は乾燥したものを粉砕又は破砕し、葉及び茎を混合したものから抽出するが、その混合比率は特に限定されるものではなく、種々の適当な溶媒を用いて、室温又は加温下において抽出する方法が挙げられる。具体的に抽出溶媒としては、例えば、水、或いはメタノール、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコールの他、アセトン、酢酸等の水と互いに溶解する親水性有機溶媒等が挙げられ、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００２２】
さらに、本発明に用いるイネ由来ポリフェノールは、上記のようにして得られたイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物を濃縮した濃縮物として用いてもよく、また、スプレードライや凍結乾燥等の操作により抽出粉末として用いてもよい。さらに、逆相ＨＰＬＣやカラムクロマトグラフィーなどにより精製したものが好ましく、抽出物の分画・精製処理法は特に限定されない。
【００２３】
前記イネ由来ポリフェノールは、フラボン類及び／又はその配糖体等を含み、ポリフェノール含有量として少なくとも１０％以上含むように抽出・精製することが好ましい。
【００２４】
本発明のイネ由来ポリフェノールを含有するイネ抽出物は、単独で美白剤又は抗アレルギー剤として単独で使用されるのみならず、必要に応じて、他の物質、例えば、抗酸化剤、安定剤、呈味剤、着色剤、着香剤、増量剤等を任意に併用して用いてもよく、イネ由来ポリフェノールを含有する美白剤又は抗アレルギー剤の作用、効果を高めることも、安定性を向上させることも、更には取り扱いを容易にすることも可能である。
【００２５】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤において、有効成分であるイネ由来ポリフェノールの使用量は、使用形態により適宜選択することができる。また、本発明の美白剤及び抗アレルギー剤にはイネ由来ポリフェノールの効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、pH調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美容成分、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００２６】
本発明の美白剤及び抗アレルギー剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、ローション、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。
【００２７】
また、本発明の有効成分であるイネ由来ポリフェノールは、美白作用及び／又は抗アレルギー作用を目的として、食料品、保健用食品等、例えば、米菓、和菓子、洋菓子、氷菓、調味料、畜肉加工品、魚肉・水産加工品、乳・卵加工品、野菜加工品、果実加工品、穀類加工品等に添加し摂取することができる。
【００２８】
以下に、実施例及び試験例に基づいて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
イネ由来ポリフェノールの精製。イネ若葉乾燥粉末１２５ｇに蒸留水１．２５Ｌを加え、攪拌しながら１時間抽出し、その後、遠心分離によって抽出液を得た。抽出及び遠心分離操作を３回繰り返し、イネ若葉水抽出液４．８Ｌを得た。抽出液の一部は凍結乾燥しイネ若葉水抽出物とした。残りの抽出液はＳｅｐＰａｋ(登録商標)Ｃ１８樹脂５０ｇを詰めたカラムに投入し、疎水性成分（ポリフェノール成分を含む）を吸着後、５０％エタノールによってポリフェノール成分を溶出した。５０％エタノール溶出液を濃縮後、凍結乾燥することでイネ由来ポリフェノールを得た。なお、イネ若葉粉末、イネ若葉水抽出物及びイネ由来ポリフェノールに含まれるポリフェノールの含有率は、それぞれ、０．９％、２．５％及び１８．８％であった。
【００３０】
なお、本実施例および後述する試験例及び実施例におけるポリフェノールの定量は、Ｆｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により行った。すなわち、試験試料５０μＬに、蒸留水４ｍＬ、フェノール試薬（Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｕｓ（Sigma社製）を蒸留水で５倍に希釈したもの）１ｍＬ、及び１０％（ｗ／ｖ）炭酸ナトリウム溶液１ｍＬを加え暗所で１時間反応させ、その後ただちに７６０ｎｍの吸光度を測定した。試験試料のポリフェノール濃度は、没食子酸（６２．５〜１０００μｇ／ｍＬ）を用いて作成した検量線から算出した。
【実施例２】
【００３１】
イネ由来ポリフェノールのＨＰＬＣによる分析及び分取。上記実施例１で得られたイネ由来ポリフェノールを逆相ＨＰＬＣカラム（ＳＨＩＭ−ＰＡＣＫ ＰＲＣ−ＯＤＳ、２０ｍｍ×２５０ｍｍ、（株）島津製作所社製）（ＨＰＬＣの条件；Ａ：０．１％ＴＦＡ／ＤＷ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ、％Ｂ：４０％。２０分、流量：５ｍＬ／ｍｉｎ、検出：３２０ｎｍ）を用い、ポリフェノール成分の分析を行った。結果を図１に示す。図１に示すように１〜５のポリフェノール成分が含有することが判明した。
【００３２】
さらに、図１の１〜５の各ポリフェノール成分の機能性および構造を明らかにするため、逆相ＨＰＬＣカラムを用い各成分の分取を行った。また、１〜５の各成分を質量分析、ＮＭＲで分析を行った。
【００３３】
ＬＣ／ＭＳ分析およびＭＳ／ＭＳ分析の結果、１〜５の各ポリフェノール成分は、フラグメントイオン、フラグメントパターンが類似しており、同じ母骨格を有する類縁化合物であることが推定された。また、ＰＤＡのＵＶ−ＶＩＳスペクトルで２５０，２８０，３５０ｎｍ付近に吸収極大が観測されたことから、１〜５の各成分は、フラボン配糖体であると考えられた。以下の化１に推測された１〜５の構造を示す。
【００３４】
【化１】
【００３５】
さらに、１〜５の各成分をＮＭＲスペクトル解析した結果、２，３，４の各成分はそれぞれ、Neocarlinoside (6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-L-arabinopyranosylluteolin)（以下、化２），Carlinoside (6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranosylluteolin) （以下、化３），Isoorientin-2"-O-β-glucopyranoside（以下、化４）であると同定された。
【００３６】
【化２】
【００３７】
【化３】
【００３８】
【化４】
【００３９】
次に、本発明の有効成分であるイネ由来ポリフェノールが、メラニン生成抑制作用を有すること、及び、肥満細胞及び／又は好塩基球の脱顆粒を抑制する作用を有することについて試験例を挙げて説明する。
（試験例１）イネ由来ポリフェノールのメラニン生成抑制試験。
【００４０】
メラニン生成抑制試験は、マウスメラノーマＢ１６細胞を用い、メラニン生成に対する抑制作用を測定した。Ｂ１６細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＭＥＭ、Sigma社製）に１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加した培地で継代培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。直径６ｃｍの細胞培養シャーレに２．５×１０５の細胞を播種し、２４時間培養した。その後、培地を新鮮培地に交換し、上記実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを試験試料として添加し（終濃度１００μｇ／ｍＬ）４８時間培養した。再度、培地交換および試験試料の添加を行い、さらに４８時間培養した。なお、無添加の培地をコントロールとして、美白作用が知られるアルブチン添加（１００μＭ（２７μｇ／ｍＬ））の培地をポジティブコントロールとして使用し、同様の試験を行った。
【００４１】
細胞数及びメラニン生成量は、以下のようにして求めた。細胞数は、シャーレの培地を取り除きＰＢＳで洗浄後、トリプシン処理によって細胞を回収し、測定した。メラニン生成量は、回収した細胞に１ＮＮａＯＨ溶液を添加して超音波処理することで溶解し、４７５ｎｍの吸光度により測定した。測定したメラニン量（４７５ｎｍの吸光度）を細胞数で除し、細胞当りのメラニン生成量（＝吸光度４７５ｎｍ／細胞数）を算出し、メラニン生成量（％）＝（試験試料のメラニン生成量／コントロールのメラニン生成量）×１００を算出した。結果を図２に示す。
【００４２】
図２に示したように、メラニン生成は、美白作用の知られるアルブチンで５８％まで減少し、イネ由来ポリフェノールでも６２％程度まで減少している。この結果より、イネ由来ポリフェノールはアルブチンと同程度の強い美白作用を有することが判明した。
（試験例２）イネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験。
【００４３】
脱顆粒阻害試験は、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）を用い、抗原特異的な脱顆粒の阻害を測定した。脱顆粒阻害活性は、顆粒中の酵素β―ヘキソサミニダーゼの放出率を求め、放出率に対する阻害活性（β―ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性）を指標とした。ＲＢＬ−２Ｈ３細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＭＥＭ、Sigma社製）に１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加した培地で継代培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。２４ウェル培養プレートに２．５×１０５cells／wellで播種し、一晩培養した後、抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（Sigma社製）を終濃度５０ｎｇ／ｍＬで加え、２時間培養した。その後、細胞を１．５ｍＬの改変タイロード（Modified Tyrode’s：ＭＴ）緩衝液（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、５．６ｍＭ ｇｌｕｃｏｓｅ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ６．８）で２回洗浄し、試験試料を溶解したＭＴ緩衝液又はコントロールとしてＭＴ緩衝液のみを添加し、１０分間反応（５％ＣＯ２、３７℃）後、ＤＮＰ−ＨＡＳ抗原を終濃度５０ｎｇ／ｍＬで加え、さらに３０分間反応させた。プレートを氷上に静置して反応停止後、培養上清を回収した。残った細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００／ＭＴ緩衝液を５００μＬ／ｗｅｌｌで添加し細胞溶解液を得た。
【００４４】
培養上清及び細胞溶解液それぞれ５０μＬを９６ウェルプレートに移し３７℃で５分間予備加温後、β−ヘキソサミニダーゼの基質溶液１００μＬ（０．１Ｍ citrate buffer、ｐＨ４．５に溶解した３．３ｍＭ ｐ−nitrophenyl−２−acetoamido−２−deoxy−β―Ｄ−glucopyranoside）を加え、３７℃で２５分間反応させた。反応溶液に１００μＬのstop buffer（２Ｍ Glycine buffer、ｐＨ１０．４）を加えて反応を停止後、プレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定し、細胞内および細胞外に放出されたβ−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定した。
【００４５】
以下の数１により算出されるβ−ヘキソサミニダーゼの放出率（％）を求めた。
【数１】
【００４６】
また、β−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性（％）は以下の数２により算出した。
【数２】
【００４７】
これらの結果を図３に示す。図３に示したように、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）の脱顆粒阻害試験の結果、イネ由来ポリフェノールは用量依存的にβ−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を示し、脱顆粒阻害活性が強いことが判明した。このことは、脱顆粒によって遊離されるヒスタミン、セロトニン等、炎症起因物質の遊離を抑制することを意味しており、従って本発明で得られるイネ由来ポリフェノールは抗アレルギー剤及び抗炎症剤としてきわめて有効である。
（試験例３）ＨＰＬＣで分取したイネ由来ポリフェノール成分１〜５の脱顆粒阻害試験。
【００４８】
上記試験例２と同様の方法で、β−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を測定した。結果を図４に示す。
【００４９】
図４に示したように、ラット好塩基球性細胞株（ＲＢＬ−２Ｈ３）の脱顆粒阻害試験の結果、イネ由来ポリフェノール成分１〜５は全てβ−ヘキソサミニダーゼの放出阻害活性を示し、さらにその活性もイネ由来ポリフェノール成分１〜５すべてが同程度の強い阻害活性を示すことが判明した。このことは、イネ由来ポリフェノール成分１〜５の全てが、脱顆粒によって遊離されるヒスタミン、セロトニン等、炎症起因物質の遊離を抑制することを意味しており、従って本発明で得られるフラボンを基本骨格としたイネ由来ポリフェノールは抗アレルギー剤及び抗炎症剤として極めて有効である。
【００５０】
上記の結果に示すように、本発明に用いる有効成分であるイネ由来ポリフェノールは、美白作用及び抗アレルギー作用を有し、効果の優れた美白剤及び抗アレルギー剤の提供が可能である。
【実施例３】
【００５１】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、化粧水を調製した。精製水７９．８重量％、グリセリン５重量％、プロピレングリコール５重量％、エタノール１０重量％、イネ由来ポリフェノール０．１重量％、香料０．１重量％を均一に攪拌し、化粧水を得た。
【実施例４】
【００５２】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、錠剤又は顆粒剤を調製した。実施例１で得たイネ由来ポリフェノール１５０ｍｇを精製でんぷん末１５０ｍｇ及び乳糖７００ｍｇと混合して錠剤又は顆粒剤を得た。
【実施例５】
【００５３】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、飲料を調製した。イネ由来ポリフェノール０．１ｇをオレンジ果汁１００％の飲料１リットルに添加・混合して、飲料を得た。
【実施例６】
【００５４】
実施例１で得たイネ由来ポリフェノールを用い、キャンディーを調製した。
砂糖５０．０ｇ、水飴５０．０ｇ、イネ由来ポリフェノール０．５ｇ、クエン酸０．３ｇ、香料０．２ｇ、色素 適量を加熱混合し、型に入れ冷却し、キャンディーを得た。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】実施例２で行ったイネ由来ポリフェノールのＨＰＬＣの結果を示すグラフである。
【図２】試験例１で行ったイネ由来ポリフェノールのメラニン生成抑制試験の結果を示すグラフである。
【図３】試験例２で行ったイネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験の結果を示すグラフである。
【図４】試験例３で行ったイネ由来ポリフェノールの脱顆粒阻害試験の結果を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする美白剤。
【請求項２】
前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする請求項３記載の抗アレルギー剤。
【請求項５】
請求項１又は２記載の美白剤、請求項３又は４記載の抗アレルギー剤の少なくとも１種を含むことを特徴とする食料品。
【請求項１】
イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする美白剤。
【請求項２】
前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
前記イネ由来ポリフェノールが、フラボン類及び／又はその配糖体を含むことを特徴とする請求項３記載の抗アレルギー剤。
【請求項５】
請求項１又は２記載の美白剤、請求項３又は４記載の抗アレルギー剤の少なくとも１種を含むことを特徴とする食料品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００７−４５７５５（Ｐ２００７−４５７５５Ａ）
【公開日】平成１９年２月２２日（２００７．２．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２３２４３２（Ｐ２００５−２３２４３２）
【出願日】平成１７年８月１０日（２００５．８．１０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年３月３０日 社団法人日本農芸化学会主催の「日本農芸化学会２００５年度（平成１７年度）大会」において文書をもって発表
【出願人】（３９００１９９８７）亀田製菓株式会社 (18)
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年２月２２日（２００７．２．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月１０日（２００５．８．１０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年３月３０日 社団法人日本農芸化学会主催の「日本農芸化学会２００５年度（平成１７年度）大会」において文書をもって発表
【出願人】（３９００１９９８７）亀田製菓株式会社 (18)
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
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