本発明は、脂質製剤中において二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）を含有する組成物と、該組成物を用いて、ヒトキネシンファミリーメンバー１１（Ｅｇ５）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を阻害する方法と、該組成物を用いて、癌など、Ｅｇ５およびＶＥＧＦの発現によって媒介される病理学的過程を治療する方法とに関する。さらに別の実施形態では、本発明が、癌の治療を必要とする哺乳動物において腫瘍の増殖を低減する方法を提供する。該方法は、本発明の組成物を該哺乳動物に投与する工程を包含し、腫瘍の増殖を少なくとも２０％低減する。別の実施形態では、該方法により、ＫＳＰの発現が少なくとも６０％低下する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内におけるヒトキネシンファミリーメンバー１１（Ｅｇ５／ＫＳＰ）遺伝子の発現を阻害する第１の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）と、細胞内におけるヒトＶＥＧＦの発現を阻害する第２のｄｓＲＮＡとを含む核酸脂質粒子を含む組成物であって、
前記核酸脂質粒子が、４５〜６５モル％の陽イオン性脂質、５モル％〜約１０モル％の非陽イオン性脂質、２５〜４０モル％のステロール、および０．５〜５モル％のＰＥＧまたはＰＥＧ改変脂質を含む脂質製剤を含み、
前記第１のｄｓＲＮＡが、第１のセンス鎖と第１のアンチセンス鎖とからなり、前記第１のセンス鎖が、第１の配列を含み、前記第１のアンチセンス鎖が、
配列番号１３１１（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第２の配列を含み、
前記第１の配列が、前記第２の配列と相補的であり、前記第１のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さであり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、第２のセンス鎖と第２のアンチセンス鎖とからなり、前記第２のセンス鎖が、第３の配列を含み、前記第２のアンチセンス鎖が、
配列番号１５３８（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第４の配列を含み、
前記第３の配列が、前記第４の配列と相補的であり、前記第２のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さである組成物。
【請求項２】
前記陽イオン性脂質が、式Ａを含み、
式Ａが、
【化８】

、または
【化９】

［式中、Ｒ１およびＲ２が、独立してアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、各々が、必要に応じて置換されていてもよく、Ｒ３およびＲ４が、独立して低級アルキルであるか、またはＲ３およびＲ４が一緒になって、必要に応じて置換されるヘテロ環式環を形成し得る］である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣ（２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン）を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣを含み、前記非陽イオン性脂質が、ＤＳＰＣを含み、前記ステロールが、コレステロールを含み、前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣを含み、前記製剤が、
【表４２】

からなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記陽イオン性脂質が、ＡＬＮＹ−１００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−アミン））を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記陽イオン性脂質が、ＡＬＮＹ−１００を含み、前記製剤が、
【表４３】

からなる、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３を含み、前記脂質製剤が、
【表４４】

からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第１のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３４（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵＴＴ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３５（５’−ＡＧＵＵＡＧＵＵＵＡＧＡＵＵＣＣＵＧＡＴＴ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなり、前記第２のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３６（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３７（５’−ＡＡＧＣＵＣＡＵＣＵＣＵＣＣＵＡＵＧＵＧＣＵＧ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
小文字の「ｃ」または「ｕ」により示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドと、小文字の「ｓ」により示されるホスホロチオエートとを包含するように、各鎖が、以下：
前記第１のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４０（５’−ｕｃＧＡＧＡＡｕｃｕＡＡＡｃｕＡＡｃｕＴｓＴ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４１（５’−ＡＧＵｕＡＧＵＵｕＡＧＡＵＵＣＵＣＧＡＴｓＴ）
からなるアンチセンス鎖とからなり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４２（５’−ＧｃＡｃＡｕＡＧＧＡＧＡＧＡｕＧＡＧＣＵｓＵ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４３（５’−ＡＡＧＣＵｃＡＵＣＵＣＵＣＣｕＡｕＧｕＧＣｕｓＧ−３’）
からなるアンチセンス鎖とからなる、
ように改変される、
請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、少なくとも１つの改変ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記改変ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記改変ヌクレオチドが、２’−デオキシ−２’−フルオロ改変ヌクレオチド、２’−デオキシ改変ヌクレオチド、ロックトヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ改変ヌクレオチド、２’−アルキル改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデートを含むヌクレオチド、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡの各々が、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル改変リボヌクレオチドと、５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１つのヌクレオチドとを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、１９〜２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、２１〜２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記第１のｄｓＲＮＡの各鎖が、２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記センス鎖が２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、等モル比で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
ソラフェニブをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
リポタンパク質をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
Ｅｇ５を発現する細胞と接触させると、Ｅｇ５の発現を少なくとも４０％阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
ＶＥＧＦを発現する細胞と接触させると、ＶＥＧＦの発現を少なくとも４０％阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞におけるＥｇ５およびＶＥＧＦの発現が低下する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
ｎＭ濃度で投与される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞における単星の形成が増大する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物を哺乳動物に投与すると、前記哺乳動物における腫瘍増殖の防止、腫瘍増殖の低減、または生存の延長からなる群から選択される少なくとも１つの効果がもたらされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記効果が、体重の決定、器官重量の決定、視診、ｍＲＮＡ解析、血清ＡＦＰ解析、および生存のモニタリングからなる群から選択される少なくとも１つのアッセイを用いて測定される、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
細胞内におけるＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害する方法であって、請求項１に記載の組成物を前記細胞に投与する工程を含む方法。
【請求項３１】
癌の治療を必要とする哺乳動物において、腫瘍の増殖を防止するか、腫瘍の増殖を低減するか、または生存を延長させる方法であって、請求項１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項３２】
前記哺乳動物が、肝臓癌を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記哺乳動物が、肝臓癌を有するヒトである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
０．２５ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇのｄｓＲＮＡを含有する用量が前記哺乳動物に投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記ｄｓＲＮＡが、約０．０１、０．１、０．５、１．０、２．５、または５．０ｍｇ／ｋｇでヒトに投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
癌の治療を必要とする哺乳動物において腫瘍の増殖を低減する方法であって、請求項１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含み、腫瘍の増殖を少なくとも２０％低減する方法。
【請求項３７】
ＫＳＰの発現を少なくとも６０％低下させる、請求項３６に記載の方法。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【公表番号】特表２０１２−５２００８２（Ｐ２０１２−５２００８２Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５４２４７（Ｐ２０１１−５５４２４７）
【出願日】平成２２年３月１２日（２０１０．３．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２７２１０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０５２０９
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５０５３６９１５８）アルナイラム　ファーマシューティカルズ，　インコーポレイテッド (51)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，　ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】