脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤
【課題】本発明は、新規な脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、並びにＣＤ３６結合剤を提供する。
【解決手段】本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及び（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤を提供する。
【解決手段】本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及び（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及びＣＤ３６の結合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脊柱管狭窄症は、高齢男性に多くみられる。原因は、脊柱管が腫瘍以外の原因で構造的に狭くなり、脊柱管内の馬尾や神経根を圧迫して症状をおこすものであり、腰部に多く発症し、生まれつきのものは少ないが、頸椎の部分の病変では３０〜４０歳代に多発し、一度発症すると症状が急速に進行する。その結果、下肢の痙性、歩行障害、上肢のしびれ感などを引起す。原因疾患としては、変形性脊椎症、分離すべり症、偽性すべり症、椎間板ヘルニアなどがあり、脊柱管が先天的に狭いところに、これらの病気が重なると、脊柱管を一層狭くして症状がおこりやすくなる。これらの病気でおきた骨棘形成、椎間関節の肥大、椎間板の膨隆、黄色靱帯肥厚などが、脊柱管を前後、左右方向から狭くして、馬尾神経根を圧迫して症状をおこし、狭窄は、多くは第４、第５腰椎の部位に強くおこる。症状は、動作時に痛み、安静により軽快する腰痛がつづき、この腰痛が主症状であるが、脊柱管が左右から狭窄される外側型の狭窄症では、下肢のしびれ感や痛みなど坐骨神経痛症状がみられ、前後から狭窄される中心型の狭窄症では、神経性間欠跛行がみられる。また、しばしば坐骨神経痛症状と神経性間欠跛行との混合型もみられます。神経性間欠跛行は、この狭窄症のもっとも特徴的な症状の1つであるが、一定の距離を歩くと、下肢の痛み、しびれ感、脱力感などが生じて、歩けなくなる症状で、この距離はさまざまだが、一般に病状が進んでいるものほど、この距離は短くなる。
類似した疾患に下肢閉塞性動脈硬化症に伴う末梢循環不全症があり、中等度の患者では間歇性跛行を、重度の患者では末端から大腿部にかけての疼痛・潰瘍・壊死などが知られているが、閉塞性動脈硬化症は発症原因が動脈硬化に基づくものであり、血管性の間欠跛行と脊柱管狭窄症による神経性間欠跛行とは発症原因が異なるため治療方法も違ってくることから、その区別が必要である。閉塞性動脈硬化症による血管性間欠跛行では、どんな姿勢でも歩行を休めばしびれや痛みなどの症状が取れるのに対し、腰部脊柱管狭窄症の馬尾神経性間欠跛行では、上半身を前方に折り曲げて数分間しゃがみこんだ姿勢で休まないと症状が取れない。
脊柱管狭窄症の治療法は、変形性脊椎症の治療法とほとんど同じで、肥満をさけ、腰椎前弯を除去する姿勢を保つことにあるが、それはこの腰椎前弯を強くした姿勢は、馬尾をたわめ、神経組織の血流を障害するからである。そのために保存療法として、腰椎前弯を矯正するための装具を装着すること及び、鎮痛消炎薬や血液の流れをよくする薬などの使用や、入院、安静臥床しての神経ブロック、硬膜外ブロックがあり、さらに症状が悪化した場合には、排尿障害、肛門周囲の灼熱感などが強くなり、このような場合には脊柱管を広げる手術が必要となる（非特許文献１、非特許文献２参照）。 従って、重症例では手術適応が必要となり、それ以外の場合にも有効な治療法が少なく、薬物による虚血状態の改善が望まれており、プロスタグランジンＥ１活性を有する化合物を有効成分とするもの（特許文献１参照）、４−ブロモ−６−〔３−（４−クロロフェニル）プロポキシ〕−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−３（２Ｈ）−ピリダジノンなどのピリダジノン系化合物を有効成分とするもの（特許文献２参照）、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、又はＥＰ４アゴニストから選択される内因性修復因子産生促進剤を虚血性臓器障害の一種としての脊柱管狭窄症の用いるもの（特許文献３参照）、リマプロスト アルファデクス及びグルカン類を末梢循環障害の改善剤として用いるもの（特許文献４参照）などが報告されている。
【０００３】
ＣＤ３６は、糖タンパク質IIIb（ＧＰIIIb）または糖タンパク質ＩＶ（ＧＢＩＶ）とも呼ばれており、血小板、内皮細胞、単核白血球、赤芽細胞、上皮細胞、及びいくつかの腫瘍細胞系、例えば、黒色腫細胞および骨肉腫細胞の主要な糖タンパク質である（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５参照）。
さらにＣＤ３６は、トロンボスポンジン（ＴＳＰ）との結合を介して血管新生抑制をもたらす（非特許文献６、非特許文献７参照）ことから抗血管新生因子として知られており、ＣＤ３６を構成するアミノ酸配列のうちＣ４６４（４６４番目のシステイン）、Ｒ４６７（４６７番目のアルギニン）及びＫ４６９（４６９番目のリジン）が、ＴＳＰを介した血管新生抑制作用に必須であることが示されている（非特許文献８参照）。また、ＣＤ３６に結合する低分子リガンドＥＰ８０３１７は、ＣＤ３６を介した障害の進展を防止する（非特許文献９参照）ことも報告されている。これらのことから、特定の結合性化学物質がＣＤ３６に結合することによりＣＤ３６の血管新生抑制機能が解除され、血管新生がもたらされることが想定される。
【０００４】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン（特許文献５の実施例９記載化合物）は、ＰＤＥ３阻害剤であり、血栓性疾患や動脈硬化性疾患の治療、予防に有用であることが知られている（特許文献５参照）。しかしながら、ＰＤＥ３阻害剤が脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤としての適用やＣＤ３６への結合能を有することは全く知られていない。
【０００５】
【特許文献１】特開平７−２７７９８４号公報
【特許文献２】ＷＯ ２０００／１２０９１号公報
【特許文献３】ＷＯ ２００４／０３２９６５号公報
【特許文献４】特開２００５−２７２４５８号公報
【特許文献５】特許２９６４０２９号公報
【非特許文献１】H. Verbiest et al.:J.Bone Joint Surg. 36-B:230(1987).
【非特許文献２】R. Porter et al.:Spine 17:9-15(1992).
【非特許文献３】Asch et al:J. Clin. Invest. 79:1054-1061 (1987)
【非特許文献４】Knowles et al.: J. Immunol. 132, 2170-2173 (1984)
【非特許文献５】Kieffer et al.:Biochem. J. 262:835-842 (1989)
【非特許文献６】柏木浩和ほか：血栓止血誌１４(４)，２９５−３０３（２００３）．
【非特許文献７】R Simantov et al.:Frontiers in Bioscience 8,s874-882(2003).
【非特許文献８】L Primo et al.:FASEB J. Express Article 10.1096/fj.05-3697fje(2005).
【非特許文献９】S Marleau et al.:FASEB J. Express Article 10.1096/fj.04-3253fje(2005).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、本発明は、新規な脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及びＣＤ３６の結合剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、斯かる実状に鑑み鋭意研究した結果、ＰＤＥ３阻害剤として知られている次式、
【０００８】
【化１】
【０００９】
で表される（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンが、ＣＤ３６に対し結合能を有することを見出し、以下の本発明を完成した。
即ち、本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤に関する。
また、本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６に対する結合剤に関する。
本発明の態様をさらに具体的に説明すれば、以下の（１）〜（６）のとおりとなる。
（１）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
（２）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤。
（３）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンがＣＤ３６とトロンボスポンジンの結合を阻害することによりトロンボスポンジンの血管新生抑制作用を解除することをによる脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
（４）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６活性阻害剤。
（５）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６の他のタンパク質に対する結合阻害剤。
（６）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合阻害剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤は、脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療に有用である。本発明の（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンは、ＣＤ３６とトロンボスポンジン（ＴＳＰ）との結合を阻害し、両者の結合による血管新生抑制機能が解除され、血管新生がもたらされることになり、末梢循環が改善される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンは、ＰＤＥ３阻害剤として公知の化合物であり、その製造は公知の技術、例えば特許文献５に記載の製造方法等により行うことができる。
【００１２】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤は通常、一般的な医薬製剤の形態で用いられる。製剤は通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、潤沢剤等の稀釈剤或いは賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等が挙げられる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等が例示できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠或いは二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナランカンテン等の崩壊剤等が例示できる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げられる。注射剤として調製される場合には液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、丸剤及び懸濁剤の形態に成形するのに際しては、稀釈剤としてこの分野において慣用されているものを使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げられる。尚、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖或いはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を該製剤中に含有せしめてもよい。
【００１３】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤に含有される（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンの量は特に限定されず広範囲に選択されるが、通常全組成物中１〜７０重量％、好ましくは１〜３０重量％である。
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤の投与方法には特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じた方法で投与される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与される。また注射剤の場合には単独で或いはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更には必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与される。
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適宜選択されるが、通常有効成分である（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンの量は１日当り体重１ｋｇ当り約０．１〜１０ｍｇとするのがよい。また、投与単位形態中に有効成分を１〜２００ｍｇ含有するのがよい。
【００１４】
本発明のＣＤ３６結合剤は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６の生理学的意義を解明するためのツールとして使用することができる。例えば本発明のＣＤ３６結合剤をプローブとして使用する場合には、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン（以下、単に「薬物」という。）を適当なリンカー基を介して標識可能な物質と結合させた標識体を用いて、細胞・組織表面等への結合を確認することにより、生体局所でのＣＤ３６の発現確認を行うことが出来る。標識可能な物質としては、ビオチン、蛍光錯体などが挙げられる。リンカー基としては、本発明の薬物と標識可能な物質を結合させることができ、かつ両者の距離を適度に離せることができることができ、生理的に不活性であるものであれば特に制限はないが、例えば標識可能な物質としてビオチンを使用する場合には、薬物のシクロヘキシル基に結合している水酸基を３−アミノプロピル基でアルコキシ化できる基が挙げられる。このようなリンカー基が導入された化合物としては、例えば、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−（３’−アミノプロポキシ）−シクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン等が挙げられる。そして、当該３’−アミノ基においてビオチンのカルボキシル基とアミド結合させることにより、ビオチン化薬物とすることができる。
本発明のＣＤ３６結合剤は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、赤血球の分化の初期のマーカーとして使用することができるだけでなく、ＣＤ３６の機能解析におけるリサーチツールとして有用である。
また、本発明の薬物は、血小板のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）に結合するヒトＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合を阻害するものであり、ＣＤ３６結合剤やＣＤ３６活性阻害剤として有用なだけでなく、ＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合による血管新生抑制作用を阻害し、血管新生を亢進することから末梢循環を改善し、脊柱管狭窄症の予防剤又は治療剤として有用となる。
【００１５】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
以下の実施例において使用した試薬類はつぎのとおりである。
ＣＤ３６：組み替えヒトＣＤ３６／Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ社製、カタログ番号１９５５−ＣＤ）。
ＨＲＰ標識抗Ｆｃタグ抗体： ICN Pharmaceuticals社製，カタログ番号５５２４６。
ＨＲＰ標識アビジン抗体： PIERCE社製，カタログ番号３１００１。
ｏ−フェニレンジアミン： Sigma Aldrich社製， カタログ番号Ｐ２３９３８。
薬物の調製法：薬物はＤＭＳＯに溶かして１０ｍｍｏｌ／Ｌに調製し、−３０℃で保存した。
【実施例１】
【００１６】
ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６の結合
以下の実験ではビオチン化薬物プローブとして、次式、
【００１７】
【化２】
【００１８】
で表されるビオチン化薬物プローブを使用した。
ＣＤ３６を１０ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＴ入りの炭酸緩衝液（０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ９．６）に溶解し、３７℃で、１時間インキュベーションした。９６穴マイクロプレートに１ウェルあたり１５０μＬのＣＤ３６／ＤＴＴ溶液を加え、４℃で終夜コーティングした。ＰＢＳ ２００μＬで３回ウェルを洗った後、１％スキムミルク／ＰＢＳ溶液を加えて１時間、３７℃で静置することによりブロッキングした。ウェルをＰＢＳで洗った後、ＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０）で希釈したビオチン化薬物プローブを種々の薬物濃度（０μｍｏｌ／Ｌ、０．０３μｍｏｌ／Ｌ、０．１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、又は１０μｍｏｌ／Ｌ）で加えて３７℃で、４時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴで３回洗った後、ＨＲＰ標識アビジン抗体を加え、３７℃で３時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴで４回洗った後、２８．４ｍｍｏｌ／Ｌのｏ−フェニレンジアミン／０．０２５％Ｈ２Ｏ２溶液を１００μＬ加え、室温で４５分間反応させた。Ｈ２ＳＯ４（１ｍｏｌ／Ｌ）を２５μＬ加えることで反応を停止させ、４５０ｎｍでの吸光度（対照波長は６２０ｎｍ）をプレートリーダーで測定した。
結果を図１に示す。図１の横軸はビオチン化薬物の薬物濃度（μＭ）を示す。縦軸は吸光度を示す。各々の濃度で３回の実験を行い、その平均値をグラフにして図１に示している。グラフ中の線は３回の実験における標準偏差を示している。
この結果、ＣＤ３６をコーティングしたマイクロプレートにビオチン化薬物プローブを加えることにより、薬物の濃度依存的に吸光度の増加が認められ、ビオチン化薬物プローブはＣＤ３６と濃度依存的に結合することが示された。
【実施例２】
【００１９】
ビオチン化薬物プローブ（３μｍｏｌ／Ｌ）の薬物濃度を一定にし、さらに種々の濃度（０μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、３０μｍｏｌ／Ｌ、１００μｍｏｌ／Ｌ、又は３００μｍｏｌ／Ｌ）の非標識の薬物を加えた以外は、実施例１と同様にして４５０ｎｍでの吸光度 をプレートリーダーで測定した。
結果を図２に示す。図２の横軸は非標識の薬物の濃度（μＭ）を示す。縦軸は非標識の薬物の非存在下での吸光度を１００％とした時の非標識の薬物の存在下における吸光度の割合（％）を示す。各々の濃度で３回の実験を行い、その平均値をグラフにして図２に示している。グラフ中の線は、３回の実験における標準偏差を示している。
この競合アッセイの結果、非標識の薬物の濃度依存的に吸光度の減少が認められ、このことはビオチン化薬物プローブのＣＤ３６に対する結合量が、非標識の薬物の濃度依存的に減少したことを示し、この結果から、ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６との結合がビオチンではなく、薬物を介した結合であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明の薬物は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６の生理活性を解明するためのツールとして有用なだけでなく、ＣＤ３６と血小板のトロンボスポンジンとの結合を阻害し、血管新生抑制作用を阻害することにより末梢循環を改善し脊柱管狭窄症の予防剤及び／又は治療剤として有用であり、リサーチツール産業や医薬品産業において利用可能性を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６との結合を４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーで測定した結果をグラフにして示したものである。グラフの横軸はビオチン化薬物プローブの薬物濃度（μＭ）を示し、縦軸は吸光度を示す。
【図２】図２は、３μｍｏｌ／Ｌのビオチン化薬物プローブの存在下における、各濃度の非標識化薬物との競合アッセイを、４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーで測定した結果を示すグラフである。横軸は薬物の濃度（μＭ）を示し、縦軸は薬物非存在下での吸光度を１００％とした時の薬物存在下における割合（％）を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及びＣＤ３６の結合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脊柱管狭窄症は、高齢男性に多くみられる。原因は、脊柱管が腫瘍以外の原因で構造的に狭くなり、脊柱管内の馬尾や神経根を圧迫して症状をおこすものであり、腰部に多く発症し、生まれつきのものは少ないが、頸椎の部分の病変では３０〜４０歳代に多発し、一度発症すると症状が急速に進行する。その結果、下肢の痙性、歩行障害、上肢のしびれ感などを引起す。原因疾患としては、変形性脊椎症、分離すべり症、偽性すべり症、椎間板ヘルニアなどがあり、脊柱管が先天的に狭いところに、これらの病気が重なると、脊柱管を一層狭くして症状がおこりやすくなる。これらの病気でおきた骨棘形成、椎間関節の肥大、椎間板の膨隆、黄色靱帯肥厚などが、脊柱管を前後、左右方向から狭くして、馬尾神経根を圧迫して症状をおこし、狭窄は、多くは第４、第５腰椎の部位に強くおこる。症状は、動作時に痛み、安静により軽快する腰痛がつづき、この腰痛が主症状であるが、脊柱管が左右から狭窄される外側型の狭窄症では、下肢のしびれ感や痛みなど坐骨神経痛症状がみられ、前後から狭窄される中心型の狭窄症では、神経性間欠跛行がみられる。また、しばしば坐骨神経痛症状と神経性間欠跛行との混合型もみられます。神経性間欠跛行は、この狭窄症のもっとも特徴的な症状の1つであるが、一定の距離を歩くと、下肢の痛み、しびれ感、脱力感などが生じて、歩けなくなる症状で、この距離はさまざまだが、一般に病状が進んでいるものほど、この距離は短くなる。
類似した疾患に下肢閉塞性動脈硬化症に伴う末梢循環不全症があり、中等度の患者では間歇性跛行を、重度の患者では末端から大腿部にかけての疼痛・潰瘍・壊死などが知られているが、閉塞性動脈硬化症は発症原因が動脈硬化に基づくものであり、血管性の間欠跛行と脊柱管狭窄症による神経性間欠跛行とは発症原因が異なるため治療方法も違ってくることから、その区別が必要である。閉塞性動脈硬化症による血管性間欠跛行では、どんな姿勢でも歩行を休めばしびれや痛みなどの症状が取れるのに対し、腰部脊柱管狭窄症の馬尾神経性間欠跛行では、上半身を前方に折り曲げて数分間しゃがみこんだ姿勢で休まないと症状が取れない。
脊柱管狭窄症の治療法は、変形性脊椎症の治療法とほとんど同じで、肥満をさけ、腰椎前弯を除去する姿勢を保つことにあるが、それはこの腰椎前弯を強くした姿勢は、馬尾をたわめ、神経組織の血流を障害するからである。そのために保存療法として、腰椎前弯を矯正するための装具を装着すること及び、鎮痛消炎薬や血液の流れをよくする薬などの使用や、入院、安静臥床しての神経ブロック、硬膜外ブロックがあり、さらに症状が悪化した場合には、排尿障害、肛門周囲の灼熱感などが強くなり、このような場合には脊柱管を広げる手術が必要となる（非特許文献１、非特許文献２参照）。 従って、重症例では手術適応が必要となり、それ以外の場合にも有効な治療法が少なく、薬物による虚血状態の改善が望まれており、プロスタグランジンＥ１活性を有する化合物を有効成分とするもの（特許文献１参照）、４−ブロモ−６−〔３−（４−クロロフェニル）プロポキシ〕−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−３（２Ｈ）−ピリダジノンなどのピリダジノン系化合物を有効成分とするもの（特許文献２参照）、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、又はＥＰ４アゴニストから選択される内因性修復因子産生促進剤を虚血性臓器障害の一種としての脊柱管狭窄症の用いるもの（特許文献３参照）、リマプロスト アルファデクス及びグルカン類を末梢循環障害の改善剤として用いるもの（特許文献４参照）などが報告されている。
【０００３】
ＣＤ３６は、糖タンパク質IIIb（ＧＰIIIb）または糖タンパク質ＩＶ（ＧＢＩＶ）とも呼ばれており、血小板、内皮細胞、単核白血球、赤芽細胞、上皮細胞、及びいくつかの腫瘍細胞系、例えば、黒色腫細胞および骨肉腫細胞の主要な糖タンパク質である（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５参照）。
さらにＣＤ３６は、トロンボスポンジン（ＴＳＰ）との結合を介して血管新生抑制をもたらす（非特許文献６、非特許文献７参照）ことから抗血管新生因子として知られており、ＣＤ３６を構成するアミノ酸配列のうちＣ４６４（４６４番目のシステイン）、Ｒ４６７（４６７番目のアルギニン）及びＫ４６９（４６９番目のリジン）が、ＴＳＰを介した血管新生抑制作用に必須であることが示されている（非特許文献８参照）。また、ＣＤ３６に結合する低分子リガンドＥＰ８０３１７は、ＣＤ３６を介した障害の進展を防止する（非特許文献９参照）ことも報告されている。これらのことから、特定の結合性化学物質がＣＤ３６に結合することによりＣＤ３６の血管新生抑制機能が解除され、血管新生がもたらされることが想定される。
【０００４】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン（特許文献５の実施例９記載化合物）は、ＰＤＥ３阻害剤であり、血栓性疾患や動脈硬化性疾患の治療、予防に有用であることが知られている（特許文献５参照）。しかしながら、ＰＤＥ３阻害剤が脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤としての適用やＣＤ３６への結合能を有することは全く知られていない。
【０００５】
【特許文献１】特開平７−２７７９８４号公報
【特許文献２】ＷＯ ２０００／１２０９１号公報
【特許文献３】ＷＯ ２００４／０３２９６５号公報
【特許文献４】特開２００５−２７２４５８号公報
【特許文献５】特許２９６４０２９号公報
【非特許文献１】H. Verbiest et al.:J.Bone Joint Surg. 36-B:230(1987).
【非特許文献２】R. Porter et al.:Spine 17:9-15(1992).
【非特許文献３】Asch et al:J. Clin. Invest. 79:1054-1061 (1987)
【非特許文献４】Knowles et al.: J. Immunol. 132, 2170-2173 (1984)
【非特許文献５】Kieffer et al.:Biochem. J. 262:835-842 (1989)
【非特許文献６】柏木浩和ほか：血栓止血誌１４(４)，２９５−３０３（２００３）．
【非特許文献７】R Simantov et al.:Frontiers in Bioscience 8,s874-882(2003).
【非特許文献８】L Primo et al.:FASEB J. Express Article 10.1096/fj.05-3697fje(2005).
【非特許文献９】S Marleau et al.:FASEB J. Express Article 10.1096/fj.04-3253fje(2005).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、本発明は、新規な脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤、及びＣＤ３６の結合剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、斯かる実状に鑑み鋭意研究した結果、ＰＤＥ３阻害剤として知られている次式、
【０００８】
【化１】
【０００９】
で表される（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンが、ＣＤ３６に対し結合能を有することを見出し、以下の本発明を完成した。
即ち、本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤に関する。
また、本発明は、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６に対する結合剤に関する。
本発明の態様をさらに具体的に説明すれば、以下の（１）〜（６）のとおりとなる。
（１）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
（２）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤。
（３）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンがＣＤ３６とトロンボスポンジンの結合を阻害することによりトロンボスポンジンの血管新生抑制作用を解除することをによる脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
（４）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６活性阻害剤。
（５）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６の他のタンパク質に対する結合阻害剤。
（６）（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合阻害剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤は、脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療に有用である。本発明の（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンは、ＣＤ３６とトロンボスポンジン（ＴＳＰ）との結合を阻害し、両者の結合による血管新生抑制機能が解除され、血管新生がもたらされることになり、末梢循環が改善される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンは、ＰＤＥ３阻害剤として公知の化合物であり、その製造は公知の技術、例えば特許文献５に記載の製造方法等により行うことができる。
【００１２】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤は通常、一般的な医薬製剤の形態で用いられる。製剤は通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、潤沢剤等の稀釈剤或いは賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等が挙げられる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等が例示できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠或いは二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナランカンテン等の崩壊剤等が例示できる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げられる。注射剤として調製される場合には液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、丸剤及び懸濁剤の形態に成形するのに際しては、稀釈剤としてこの分野において慣用されているものを使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げられる。尚、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖或いはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を該製剤中に含有せしめてもよい。
【００１３】
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤に含有される（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンの量は特に限定されず広範囲に選択されるが、通常全組成物中１〜７０重量％、好ましくは１〜３０重量％である。
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤の投与方法には特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じた方法で投与される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与される。また注射剤の場合には単独で或いはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更には必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与される。
本発明の脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適宜選択されるが、通常有効成分である（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンの量は１日当り体重１ｋｇ当り約０．１〜１０ｍｇとするのがよい。また、投与単位形態中に有効成分を１〜２００ｍｇ含有するのがよい。
【００１４】
本発明のＣＤ３６結合剤は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６の生理学的意義を解明するためのツールとして使用することができる。例えば本発明のＣＤ３６結合剤をプローブとして使用する場合には、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン（以下、単に「薬物」という。）を適当なリンカー基を介して標識可能な物質と結合させた標識体を用いて、細胞・組織表面等への結合を確認することにより、生体局所でのＣＤ３６の発現確認を行うことが出来る。標識可能な物質としては、ビオチン、蛍光錯体などが挙げられる。リンカー基としては、本発明の薬物と標識可能な物質を結合させることができ、かつ両者の距離を適度に離せることができることができ、生理的に不活性であるものであれば特に制限はないが、例えば標識可能な物質としてビオチンを使用する場合には、薬物のシクロヘキシル基に結合している水酸基を３−アミノプロピル基でアルコキシ化できる基が挙げられる。このようなリンカー基が導入された化合物としては、例えば、（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−（３’−アミノプロポキシ）−シクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノン等が挙げられる。そして、当該３’−アミノ基においてビオチンのカルボキシル基とアミド結合させることにより、ビオチン化薬物とすることができる。
本発明のＣＤ３６結合剤は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、赤血球の分化の初期のマーカーとして使用することができるだけでなく、ＣＤ３６の機能解析におけるリサーチツールとして有用である。
また、本発明の薬物は、血小板のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）に結合するヒトＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合を阻害するものであり、ＣＤ３６結合剤やＣＤ３６活性阻害剤として有用なだけでなく、ＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合による血管新生抑制作用を阻害し、血管新生を亢進することから末梢循環を改善し、脊柱管狭窄症の予防剤又は治療剤として有用となる。
【００１５】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
以下の実施例において使用した試薬類はつぎのとおりである。
ＣＤ３６：組み替えヒトＣＤ３６／Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ社製、カタログ番号１９５５−ＣＤ）。
ＨＲＰ標識抗Ｆｃタグ抗体： ICN Pharmaceuticals社製，カタログ番号５５２４６。
ＨＲＰ標識アビジン抗体： PIERCE社製，カタログ番号３１００１。
ｏ−フェニレンジアミン： Sigma Aldrich社製， カタログ番号Ｐ２３９３８。
薬物の調製法：薬物はＤＭＳＯに溶かして１０ｍｍｏｌ／Ｌに調製し、−３０℃で保存した。
【実施例１】
【００１６】
ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６の結合
以下の実験ではビオチン化薬物プローブとして、次式、
【００１７】
【化２】
【００１８】
で表されるビオチン化薬物プローブを使用した。
ＣＤ３６を１０ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＴ入りの炭酸緩衝液（０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ９．６）に溶解し、３７℃で、１時間インキュベーションした。９６穴マイクロプレートに１ウェルあたり１５０μＬのＣＤ３６／ＤＴＴ溶液を加え、４℃で終夜コーティングした。ＰＢＳ ２００μＬで３回ウェルを洗った後、１％スキムミルク／ＰＢＳ溶液を加えて１時間、３７℃で静置することによりブロッキングした。ウェルをＰＢＳで洗った後、ＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０）で希釈したビオチン化薬物プローブを種々の薬物濃度（０μｍｏｌ／Ｌ、０．０３μｍｏｌ／Ｌ、０．１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、又は１０μｍｏｌ／Ｌ）で加えて３７℃で、４時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴで３回洗った後、ＨＲＰ標識アビジン抗体を加え、３７℃で３時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴで４回洗った後、２８．４ｍｍｏｌ／Ｌのｏ−フェニレンジアミン／０．０２５％Ｈ２Ｏ２溶液を１００μＬ加え、室温で４５分間反応させた。Ｈ２ＳＯ４（１ｍｏｌ／Ｌ）を２５μＬ加えることで反応を停止させ、４５０ｎｍでの吸光度（対照波長は６２０ｎｍ）をプレートリーダーで測定した。
結果を図１に示す。図１の横軸はビオチン化薬物の薬物濃度（μＭ）を示す。縦軸は吸光度を示す。各々の濃度で３回の実験を行い、その平均値をグラフにして図１に示している。グラフ中の線は３回の実験における標準偏差を示している。
この結果、ＣＤ３６をコーティングしたマイクロプレートにビオチン化薬物プローブを加えることにより、薬物の濃度依存的に吸光度の増加が認められ、ビオチン化薬物プローブはＣＤ３６と濃度依存的に結合することが示された。
【実施例２】
【００１９】
ビオチン化薬物プローブ（３μｍｏｌ／Ｌ）の薬物濃度を一定にし、さらに種々の濃度（０μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、３０μｍｏｌ／Ｌ、１００μｍｏｌ／Ｌ、又は３００μｍｏｌ／Ｌ）の非標識の薬物を加えた以外は、実施例１と同様にして４５０ｎｍでの吸光度 をプレートリーダーで測定した。
結果を図２に示す。図２の横軸は非標識の薬物の濃度（μＭ）を示す。縦軸は非標識の薬物の非存在下での吸光度を１００％とした時の非標識の薬物の存在下における吸光度の割合（％）を示す。各々の濃度で３回の実験を行い、その平均値をグラフにして図２に示している。グラフ中の線は、３回の実験における標準偏差を示している。
この競合アッセイの結果、非標識の薬物の濃度依存的に吸光度の減少が認められ、このことはビオチン化薬物プローブのＣＤ３６に対する結合量が、非標識の薬物の濃度依存的に減少したことを示し、この結果から、ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６との結合がビオチンではなく、薬物を介した結合であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明の薬物は、ＣＤ３６に対する結合能を有し、ＣＤ３６の生理活性を解明するためのツールとして有用なだけでなく、ＣＤ３６と血小板のトロンボスポンジンとの結合を阻害し、血管新生抑制作用を阻害することにより末梢循環を改善し脊柱管狭窄症の予防剤及び／又は治療剤として有用であり、リサーチツール産業や医薬品産業において利用可能性を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ビオチン化薬物プローブとＣＤ３６との結合を４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーで測定した結果をグラフにして示したものである。グラフの横軸はビオチン化薬物プローブの薬物濃度（μＭ）を示し、縦軸は吸光度を示す。
【図２】図２は、３μｍｏｌ／Ｌのビオチン化薬物プローブの存在下における、各濃度の非標識化薬物との競合アッセイを、４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーで測定した結果を示すグラフである。横軸は薬物の濃度（μＭ）を示し、縦軸は薬物非存在下での吸光度を１００％とした時の薬物存在下における割合（％）を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
【請求項２】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤。
【請求項３】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンがＣＤ３６とトロンボスポンジンの結合を阻害することによりトロンボスポンジンの血管新生抑制作用を解除することによる脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合阻害剤。
【請求項１】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とする脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
【請求項２】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを有効成分とするＣＤ３６結合剤。
【請求項３】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンがＣＤ３６とトロンボスポンジンの結合を阻害することによりトロンボスポンジンの血管新生抑制作用を解除することによる脊柱管狭窄症の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
（−）−６−［３−［３−シクロプロピル−３−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］ウレイド］プロポキシ］−２−（１Ｈ）−キノリノンを含有してなるＣＤ３６とトロンボスポンジンとの結合阻害剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００７−２３０８８４（Ｐ２００７−２３０８８４Ａ）
【公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１６２５（Ｐ２００６−５１６２５）
【出願日】平成１８年２月２８日（２００６．２．２８）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【出願人】（５９９１１８５３９）株式会社デ・ウエスタン・セラピテクス研究所 (8)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２８日（２００６．２．２８）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【出願人】（５９９１１８５３９）株式会社デ・ウエスタン・セラピテクス研究所 (8)
【Ｆターム（参考）】
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