薬効性組成物
【課題】 タデの持つ特性を有効に活用するために、タデにおける有効成分を抽出し、健康食品や医薬の原料として用い、より効率的にタデをしようできる薬効性の高い組成物を提供することを目的とする。
【解決手段】 タデ科タデ属の植物、特には、ヤナギタデの栽培品種である、紅タデの若芽からの抽出物で、水及び酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であるもの、さらには、イデイン又はケルシトリンを主たる成分とするものは、薬効性が高く、当該組成物は、タデの特性を有する健康食品や医薬の原料となるものである。
【解決手段】 タデ科タデ属の植物、特には、ヤナギタデの栽培品種である、紅タデの若芽からの抽出物で、水及び酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であるもの、さらには、イデイン又はケルシトリンを主たる成分とするものは、薬効性が高く、当該組成物は、タデの特性を有する健康食品や医薬の原料となるものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、タデ科植物からの抽出によって得られる薬効性を有する組成物に関するものであって、健康食品の原料として、さらには、各種疾病の予防又は治療用の医薬として使用される可能性の高いもので、それらの健康食品調製、医薬調製技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タデ科タデ属の植物は、北海道から沖縄にわたる日本全土、台湾や中国を含む北半球の温帯から熱帯にかけて広く分布する、河川、沼地などの水辺に生える一年草で、特に、ヤナギダテは、栽培品種も開発され、発芽した子葉は「芽ダテ」と称され、刺身のつまやタデ酢として使用されている。
【０００３】
また、タデは、秋に全草を採取して民間薬、すなわち、利尿、解熱、虫刺され、食あたり、暑気あたりなどの治療薬として用いられているもので、タデには、血液凝固促進作用や血圧下降作用があるとされている。
【０００４】
一方、生体内で生成される活性酸素やフリーラジカルが、生体組織の酸化を促し、生活習慣病の発症や進行に関与していることが明らかにされ、抗酸化活性を有する植物ポリフェノールやフラボノイド類に関心が寄せられている。
特に、フラボノイドの摂取が冠動脈心疾患を予防する可能性が疫学調査により明らかにされ、特表２００１−５１１５３号公報（特許文献１）には、水溶性で生体吸収性の高いプロアントシアニジンを主体とするブドウ種子抽出物を血管治療薬の成分として利用することが示されている。
【０００５】
さらに、福岡県朝倉地区で多量に栽培されている紅タデには、アントシアニン系の紅色の色素が４１．５μｇ／１００ｇ、ポリフェノール類が２３０ｍｇ／１００ｇ含まれ、それらは抗酸化活性の高いものであるから、生活習慣病の発症や進行を抑える働きが期待されているものである。
【０００６】
また、本出願人は、先に、特許第３１０８０５９号公報（特許文献２）に示したように、精白ハトムギ粉末を高濃度酢酸処理後プロテアーゼ分解することにより、生理活性ペプチド組成物が得られることを見出している。
【特許文献１】特表２００１−５１１５３号公報（特許請求の範囲）
【特許文献２】特許第３１０８０５９号公報（特許請求の範囲）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明者等は、タデの持つ特性をより深く追求し、それらの特性を有効に活用するために、タデにおける有効成分を探索し、また、健康食品や医薬の原料として用い、より効率的にタデを使用することについて検討した。
【０００８】
その結果、発明者は、タデからの酢酸抽出、特に、精白ハトムギ粉末から生理活性ペプチド組成物を作出する際に用いた、高濃度酢酸処理後のタデからの酢酸による抽出が、殺菌、脂溶成分の溶出、抗酸化成分に有効であることを見出し、この発明を完成したのである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
タデ科タデ属の植物からの抽出物からなるもので、
酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であること
を特徴とする薬効性組成物である。
【００１０】
また、この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載の薬効性組成物において、
前記酢酸可溶性の抽出物が、
水にも可溶性であること
を特徴とするものである。
【００１１】
また、この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１又は２に記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物が、
ヤナギタデ又はその栽培品種であること
を特徴とするものである。
【００１２】
また、この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物が、
紅タデであること
を特徴とするものである。
【００１３】
また、この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項１〜４のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記抽出物が、
酢酸による抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１４】
また、この発明の請求項６に記載の発明は、
請求項１〜５のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記抽出物が、
高濃度酢酸処理が施されたタデ科タデ属の植物からの酢酸抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１５】
また、この発明の請求項７に記載の発明は、
請求項６に記載の薬効性組成物において、
前記高濃度酢酸処理における酢酸濃度が、
２０〜３０質量％で、抽出時の酢酸濃度が４質量％以下であること
を特徴とするものである。
【００１６】
また、この発明の請求項８に記載の発明は、
請求項１に記載の薬効性組成物において、
前記エタノール濃度が、
５０〜８０質量％であること
を特徴とするものである。
【００１７】
また、この発明の請求項９に記載の発明は、
請求項１〜８のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物からの抽出物が、
前記植物の若芽又は生育葉からの抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１８】
さらに、この発明の請求項１０に記載の発明は、
イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものであること
を特徴とする薬効性組成物である。
【００１９】
また、この発明の請求項１１に記載の発明は、
請求項１０に記載の薬効性組成物において、
前記イデイン、ケルシトリンまたはポリフェノール類を主たる成分とするものが、
タデ科タデ属の植物からの抽出物であること
を特徴とするものである。
【００２０】
さらにまた、この発明の請求項１２に記載の発明は、
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする医薬である。
【００２１】
さらにまた、この発明の請求項１３に記載の発明は、
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする健康食品である。
【発明の効果】
【００２２】
この発明の薬効性組成物は、以下のような優れた医学的効果を奏するもので、健康食品の素材として、また医薬の原料として、有効に利用されるものである。
１．赤血球変形能の改善（いわゆる血液さらさら状態への改善）
２．軽症糖尿病の治療効果
３．肝機能の改善
４．免疫機能の活性化
５．血小板、白血球の増大
【００２３】
また、この発明の薬効性組成物は、粉末状態でも、酢酸あるいは水又はエタノール溶液としても使用することができるため、上記のような効果を発現させるために、健康食品や医薬として利用する際に、効率的に又効果的に活用することを可能とするものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
この発明は、タデ科タデ属の植物からの抽出物からなるもので、タデ科タデ属の植物としては、通常、マタデ、ホンタデとも呼ばれるヤナギタデ、好ましくは、その栽培品種である紅タデ（ムラサキタデ）、アザブタデ、ホソバタデ等が用いられ、特に好ましいものは紅タデである。
【００２５】
抽出に際しては、前記タデの葉が用いられ、好ましいのは発芽した子葉、すなわち「芽ダテ」であるが、生育した葉、すなわち「生育タデ」も十分に使用可能である。
【００２６】
それら「芽ダテ」や「生育タデ」は、凍結乾燥または通風乾燥して粉末としたものが、抽出するには好適であるが、粉末とせず、葉そのものを用いることも可能で、それら生葉は、水道水、脱イオン水で洗浄した上で、特に高濃度酢酸処理が施された後に抽出、通常酢酸抽出処理される。
【００２７】
高濃度酢酸処理は、合成酢酸や醸造酢を濃縮した濃厚酢酸など９０％濃度の酢酸から始めて、水により３〜４倍に希釈して１〜２時間処理することであり、高濃度酢酸処理後は、多量の水を加えて、希酢酸とし、その状態で抽出するのが好ましく、その際の酢酸濃度としては４％以下、特に２〜３％とするのが好ましい。
【００２８】
このようにして抽出されたものは、種々の成分からなる組成物であるが、希酢酸、特に２〜３％濃度の希酢酸に溶解するものである。また、後述する種々の特性を有するものであるので、健康食品の素材として、また、医薬の原料として、有効に利用されるものである。
【００２９】
また、酢酸による抽出後に残存する残渣物を、５０〜８０％エタノールで抽出処理することによって、希酢酸に難溶でエタノール可溶性である抽出物が得られる。この組成物も後述するように、上記組成物とは若干異なるが、それなりの特性を有するものである。
【００３０】
酢酸およびエタノールによる抽出は、室温で０．５〜２時間、攪拌しながら行うことが好ましく、それにより、目的とする抽出物が得られる。
【００３１】
上記したように、この発明における抽出物は、酢酸抽出を主に、エタノールを従にして得られたものである。その際、エタノールを主に、酢酸を従にする抽出物とすることも可能である。しかしながら、その場合は、異なる成分が構成成分となり、特性に異なるところがあるので、使用に際しては、十分に検討を加えてから行うのが望ましい。
【実施例】
【００３２】
＜組成物の調製＞
紅タデの芽タデおよび生長タデの、それぞれの凍結乾燥粉末１００ｇに９０％酢酸１２５ｍｌ加え、ついで２５０ｍｌの脱イオン水を加えて掻き混ぜ、室温で２時間インキュベート処理した。
その後、さらに２．５ｌの脱イオン水を加えて約１時間攪拌後、８０メッシュの濾布を用いて遠心濾過し、残渣に再び２ｌの脱イオン水を加えて攪拌後、遠心濾過した。得られた濾液を併せて、遠心分離（１０，０００回転で１０分間）して、上清と沈殿に分け、得られた上清液を、減圧濃縮後凍結乾燥して組成物Ａを得た。
組成物Ａは、水、希酢酸、エタノール（８０％）のいずれにも可溶で、芽タデからは３６．５ｇ、生長タデからは３３．７ｇ得られた。
一方、遠心濾過における残渣物と遠心分離における沈殿物は併せて、凍結乾燥した後、８０％エタノールを６００ｍｌ加え、室温で１時間攪拌した。
遠心分離して得られた上清液を、減圧濃縮後凍結乾燥して組成物Ｂを得た。
組成物Ｂは、希酢酸に難溶で、エタノール（８０％）に可溶で、一部水（ｐＨ７）にも可溶なもので、芽タデからは９．０ｇ、生長タデからは８．３ｇ得られた。
【００３３】
＜組成物Ａの分析＞
芽タデから抽出した組成物Ａ５００ｍｇを用いて、以下の条件によるゲル濾過法により構成成分の検出と分取を行い、得られたゲル濾過の溶出パターンを図１に、１９の画分に分けて分取した結果を、表１に示す。
【００３４】
＜ゲル濾過条件＞
凍結乾燥した組成物Ａを１％酢酸溶液に溶解し、遠心分離して得られた上清液を、予め１％酢酸溶液で洗浄したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−１０（４×４５ｃｍ）カラムに供し、１％酢酸溶液で展開した。溶出液はドロップカウンターを用いて一定量ずつ分取し、成分の検出は２３０ｎｍと２８０ｎｍにおける吸光度を測定して行った。
【００３５】
【表１】
【００３６】
＜抗酸化活性の測定１＞
上記で得られた各画分の抗酸化活性を、リノ−ル酸の酸化物がβ−カロチンを退色させる作用を利用したＭｉｌｌｅｒらの方法に準じ、以下の方法で測定した結果を図２に示した。図から明らかなように多くの画分に抗酸化活性が認められた。
【００３７】
＜抗酸化活性の測定方法＞
試料液０．１ｍｌを分注した分光光度計用試験管セルに、リノ−ル酸−β−カロチン溶液４．９ｍｌを加えて攪拌し、温度５０℃の恒温槽で、一定時間インキュベ−トした場合のβ−カロチンの退色度を４７０ｎｍの吸光度によって求め、試料を加えない場合の酸化度を１００として酸化度を求めた。
【００３８】
＜免疫機能測定＞
芽タデから抽出された組成物Ａによる免疫機能の活性化を判断するために、組成物ＡのＴＮＦ（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）−αの産生量を測定した。
図３に示される結果から明らかなように、組成物Ａにより免疫機能の活性化が図れることが認められる。なお、ＴＮＦ−αの産生量の測定は、以下のようにして行った。
【００３９】
＜ＴＮＦ−αの産生量測定方法＞
ヒト末梢血より分離した好中球の浮遊液（１．０×１０６ 細胞／ｍｌ）５００μｌに、芽タデから得た組成物Ａの、希釈度の異なる溶液１０μｌを加え、５％ＣＯ２ を含むインキュベータ中で、温度３７℃で、６時間インキュベータ処理をした後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、得られた上清液４００μｌ中のＴＮＦ−α量を、ＥＬＩＳＡ法により定量した。なお、添加した試料の濃度は、希釈度によって表した。
【００４０】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定１＞
赤血球変形能は、酸化剤（ＡＡＰＨ：２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩）の影響で低下するが、上記組成物Ａによる低下抑制機能を、以下に示す方法で測定した。
図４はその結果で、上記組成物Ａによる抑制効果が顕著に認められた。
【００４１】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定方法＞
３．８％クエン酸ソーダ溶液１．０ｍｌを含む採血管に、採血した血液１０．０ｍｌを２５００ｒｐｍ×１０分遠心分離して赤血球を沈殿させた後、洗浄し、ＨＥＰＥＳを加え、６．０％赤血球浮遊液を調製した。
この６．０％赤血球浮遊液３ｍｌにＨＥＰＥＳを（ａ３．０ｍｌ、ｂ２．４０ｍｌ、ｃ２．３４ｍｌ）加え、温度３７．０℃で予備インキュベートしたのち、ｂとｃには５００ｍＭのＡＡＰＨ溶液０．６ｍｌ、ｃには組成物Ａの酢酸溶液０．０６ｍｌ（１０．０ｍｇ／ｍｌ）を添加し、温度３７．０℃で４５分インキュベートした。
その後、測定するまで氷冷し、測定は、温度２５．０℃で７分、再度インキュベートしてから行った。なお、ａはコントロールである。
【００４２】
なお、赤血球変形能は、従来の定量性と再現性に難点のある微細孔（ｎｕｃｌｅｉｐｏｒｅ）フィルターを用いた方法に代わるものとして、発明者が開発したフィルター特性が顕著に改善された、ニッケルメッシュ（ｎｉｃｋｅｌ ｍｅｓｈ）フィルターを用いる、以下の方法で測定した。
ニッケルメッシュは、フォトレジスト法と特殊メッキ法を組み合わせて作成されたニッケル薄膜フィルターで、微小孔の数、形状、分布が正確に一定であるばかりでなく、数秒間の超音波洗浄によって１００回以上の再使用が可能である。
加えて、ニッケルメッシュの微小孔の辺縁は滑らかでテーパを持ち、これにより混入白血球が機械的影響を受けることはなく、微小孔には融合や分枝がまったくない。これらの特徴により、以下の方法は、高い定量性と再現性を保持するものである。
【００４３】
＜赤血球変形能測定法（Ｎｉｃｋｅｌ ｍｅｓｈ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ法）＞
試験は、垂直に立てたガラス管（ｖｅｒｔｉｃａｌ ｔｕｂｅ）に、タイゴンチューブを介してニッケルメッシュホルダーを接続し、通常１５ｃｍの高さ（ｈｅｉｇｈｔ：ｈ）より、ＨＥＰＥＳバッファーで調整した生理食塩水を用いて作成した赤血球浮遊液を濾過させて行う。
ガラス管の周囲は恒温水を還流させて、試料を定温に保っている。
ガラス管のゼロレベルに設置した圧力（ｐｒｅｓｓｕｒｅ：Ｐ）トランスデューサーで、試料を濾過中の圧力降下を連続的に検出し、これを増幅器とＡＤ変換器を介してパソコンに取り込み、流量（ｆｌｏｗｒａｔｅ：Ｑ）を計算する。
流量は、圧力を高さに変換し（Ｐ＝ρｇｈ）、高さ‐時間（ｈ−ｔ）曲線の微分値（ｄｈ／ｄｔ）を取って、これにガラス管の断面積（ａ）を乗じて得られる（Ｑ＝ｄｈ／ｄｔ・ａ）。
血球を含まないコントロール溶液（ＨＥＰＥＳバッファー調整生食水：ニュートン流体）の圧‐流量曲線を対照として、赤血球浮遊液の圧‐流量曲線を検討し、ある一定圧（通常１００ｍｍ・Ｈ２Ｏ）での、対照液の流量に対する赤血球浮遊液の流量(％)をもって赤血球変形能を評価する。
【００４４】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定２＞
図１に示されるように、組成物Ａは、大きく分けて、前半に溶出される抗酸化性フェノール酸含有画分と、後半に溶出される赤紅色のフラボノイド含有画分とに分けることができるので、それぞれの画分をプールして、赤血球変形能低下抑制機能を測定した。
なお、ここで使用した試料は、組成物Ａの７０％エタノール可溶画分である。
図５に示されるように、赤血球変形能低下抑制機能はフラボノイド含有画分に顕著に認められた。なお、ａはコントロールで、ｂはＡＡＰＨのみ添加、ｃはＡＡＰＨとフェノール酸含有画分添加、ｄはＡＡＰＨとフラボノイド含有画分を添加した試料である。
【００４５】
＜抗酸化活性の測定２＞
上記で得られた二つの画分の抗酸化活性を、前記した方法に準じ、測定し、合成抗酸化剤ＢＨＡ（ｔ−ブチルヒドロキシアニソール）換算量として示した結果を図６に示す。
図から明らかなように、フェノール酸含有画分の抗酸化活性は小さいものであった。なお、ａは組成物Ａそのもので、ｂはフェノール酸含有画分、ｃはフラボノイド含有画分である。
【００４６】
＜ラジカル捕捉活性の測定＞
上記で得られた二つの画分と組成物Ａのラジカル捕捉活性を、以下の方法で測定した。その結果を図７に示す。図７から明らかなように、フラボノイド含有画分は顕著なラジカル捕捉活性を示した。
【００４７】
＜ラジカル捕捉活性測定法＞
ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）溶液（ＤＰＰＨ４００μＭ：ＭＥＳ２００μＭ：２０％エタノール＝１：１：１）９００μｌに、８０％エタノール（３００−ａ）μｌと試料ａμｌを加え、室温で２０分間反応させた後、５２０ｎｍでの吸光度の減少を測定する。
アスコルビン酸（ＡｓＡ）でＤＰＰＨラジカル捕捉活性の検量線を作成し、試料ｇ当たりのラジカル捕捉活性をＡｓＡ当量（μｍｏｌ）で表した。
【００４８】
＜フラボノイド含有画分の再分画＞
上記の顕著な特性を示すフラボノイド含有画分を、逆相ＨＰＬＣで再分画を行い、図８の結果が得られた。
３つのピークａ１ 、ａ２ およびｂについて、吸収スペクトルを測定した結果は図９のとおりである。
ピークａ１ の成分はイデイン、ピークｂの成分はケルシトリンと推定された。
【００４９】
＜再分画条件＞
フラボノイド含有画分５．７ｍｇを２３０μｌの０．１％ＴＦＡ溶液に溶解した後、２００μｌを逆相ＨＰＬＣ（２１．５×３００ｍｍ）に供した。温度４０℃、５ｍｌ／ｍｉｎの流速で溶出し、２８０ｎｍで検出を行った。
１回の逆相ＨＰＬＣで、ピークａ１ で示される成分２．８ｍｇ、ピークａ２ で示される成分１．８ｍｇ、ピークｂで示される成分２．０ｍｇ得られた。
【００５０】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定３＞
フラボノイド含有画分の再分画で得られた、ピークａ１ の成分、すなわちイデイン、ピークｂの成分、すなわちケルシトリンの赤血球変形能低下抑制機能を測定し、その結果を図１０に示す。
図１０に示されるように、両者に赤血球変形能低下抑制機能が認められたが、ピークａ２ の成分には抑制機能は認められなかった。
なお、ａはコントロールで、ｂはＡＡＰＨのみ添加、ｃはＡＡＰＨとピークａ１ 成分添加、ｄはＡＡＰＨとピークｂ成分を添加した試料である。
【００５１】
＜生体での機能測定＞
この発明の薬効性組成物の生体に与える影響について、ラットを用いて検討した。
ラットとしては、９〜１０週齢雄Ｗｉｓｔａｒ系ＳＰＦラットを用い、糖尿病での影響をみるために、糖尿病を誘発するＳＴＺ（ストレプトゾトシン）の投与したラットについても検討した。
この発明の薬効性組成物としては、芽タデから抽出した組成物Ａと、生長タデから抽出した組成物Ｂを選択し、その０．５％と０．１％をオリエンタル酵母（株）の飼料ＭＦに混入してラットに与えた。
検討項目は、以下のとおりである。
１．体重
２．血糖値（尾静脈：グルテストエースＲ（三和化学研究所）使用）
３．血液検査（腹大動脈から採血：血液一般、生化学検査（血漿）、赤血球変形能）
４．組織観察（顕微鏡）
【００５２】
表２は、ＳＴＺを投与し、糖尿病などの異常を起こさせたラットにおける、この発明の薬効性組成物の影響を調べた結果を示すものである。
この発明の薬効性組成物の投与によって、ＡＳＴ、ＡＬＴの数値が著しく改善されており、肝機能の改善に効果のあることが認められ、また、ＬＤＬコレステロールの減少にも機能していることが認められた。
【００５３】
【表２】
【００５４】
表３は、表１と同様に試験したものであるが、より多くの検査を行ったものである。
この表からは、この発明の薬効性組成物の投与により赤血球変形能が著しく改善され、血液をさらさらにする効果が認められた。また、生長タデ群はＳＴＺ投与による血小板減少を防止する効果が見られた。
【００５５】
【表３】
【００５６】
表４および表５は、正常のラットにこの発明の薬効性組成物を投与することによる影響を調べたもので、正常なラットについては、血小板増加効果が認められたが肝機能その他悪影響は全く見られなかった。
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】
免疫機能検査としては、ＴＮＦ−αと膵臓ランゲルハンス島の免疫染色による組織観察によって行った。
タデを投与することによって、ＴＮＦ−αは増大し、免疫機能促進効果が見られた。
【００６０】
組織観察は、ＷｉｓｔａｒラットにＳＴＺ４５ｍｇ／Ｋｇを腹腔内に注射し、糖尿病モデル動物を作成して行った。
それらモデル動物を、体重の減少と血糖値を指標にして、重症糖尿病モデル群と軽症糖尿病モデル群の２群に分けた。
各群に０．５％組成物Ａ（芽タデ）含有食餌を与えて、糖尿病モデル動物の膵臓ランゲルハウス島（ラ氏島）を顕微鏡で観察し、この発明にかかる薬効性組成物の糖尿病の膵臓に及ぼす影響を調査した。
顕微鏡観察は、各動物を、エーテル麻酔下で屠殺後、膵臓を摘出し、クリオスタット切片を作製、Ｈ・Ｅ染色と抗インシュリン抗体を用いた免疫染色を施し、一次抗体は、マウス抗インシュリンモノクローナル抗体（Ｌａｂ Ｖｉｓｉｏｎ．、Ｃｏ．、ＣＡ、ＵＳＡ）、二次抗体は、ウマ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用い蛍光抗体法によって染色したのち行った。
【００６１】
図１１は、正常対照ラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１２は、正常対照ラットの膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
図１３は、重症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１４は、重症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
図１５は、芽タデ投与後における軽症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１６は、芽タデ投与後の軽症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
【００６２】
これらの図から明らかなように、体重減と高血糖値を示した重症糖尿病モデル群は、ラ氏島の顕著な萎縮、内分泌細胞の変形・変性とアポトーシスによる、細胞死が惹起されていた。
免疫染色の結果、インシュリン産生Ｂ細胞は、数の著減とともに変形・変性像が観察された。
残存している変形・変性Ｂ細胞の核は、偏在しており、細胞質のインシュリンは、弱陽性な免疫染色反応を示した。重症糖尿モデル群に対して芽タデ投与の効果は、特に観察されなかった。
一方、芽タデを投与した軽症糖尿病モデル群では、ラ氏島の大きさに特に変化は認められなかった。免疫染色の結果も、ラ氏島周辺部に微弱な免疫陽性反応を示す細胞が少数局在していたが、これ以外はほぼ正常に類似の形態と免疫染色反応で示された。
以上の結果から芽タデの投与は、軽症糖尿病モデル群に対して有効に働き、軽症糖尿病から重症糖尿病への移行を抑制するか、あるいは遅延させる可能性が示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
この発明の薬効性組成物は、上記のような優れた特性を有し、かつ粉末ないし水、酢酸またはエタノールの無毒の溶媒溶液として供給可能なため、健康食品産業や医薬業界で広く利用される可能性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】この発明の薬効性組成物のゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図２】この発明の薬効性組成物を分画して得た各画分の抗酸化活性を示す図である。
【図３】この発明の薬効性組成物の添加によるＴＮＦ−αの産生量の変化を示した図である。
【図４】この発明の薬効性組成物の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図５】この発明の薬効性組成物の分画分の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図６】この発明の薬効性組成物の分画分の抗酸化活性を示した図である。
【図７】この発明の薬効性組成物と分画分のラジカル捕捉活性を示した図である。
【図８】この発明の薬効性組成物のフラボノイド含有画分の逆相ＨＰＬＣチャートである。
【図９】フラボノイド含有画分の逆相ＨＰＬＣで再分画された成分の吸収スペクトルである。
【図１０】再分画分の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図１１】正常対照ラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１２】正常対照ラットの膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１３】重症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１４】重症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１５】この発明の薬効性組成物投与後の軽症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１６】この発明の薬効性組成物投与後の軽症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【符号の説明】
【００６５】
なし
【技術分野】
【０００１】
この発明は、タデ科植物からの抽出によって得られる薬効性を有する組成物に関するものであって、健康食品の原料として、さらには、各種疾病の予防又は治療用の医薬として使用される可能性の高いもので、それらの健康食品調製、医薬調製技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タデ科タデ属の植物は、北海道から沖縄にわたる日本全土、台湾や中国を含む北半球の温帯から熱帯にかけて広く分布する、河川、沼地などの水辺に生える一年草で、特に、ヤナギダテは、栽培品種も開発され、発芽した子葉は「芽ダテ」と称され、刺身のつまやタデ酢として使用されている。
【０００３】
また、タデは、秋に全草を採取して民間薬、すなわち、利尿、解熱、虫刺され、食あたり、暑気あたりなどの治療薬として用いられているもので、タデには、血液凝固促進作用や血圧下降作用があるとされている。
【０００４】
一方、生体内で生成される活性酸素やフリーラジカルが、生体組織の酸化を促し、生活習慣病の発症や進行に関与していることが明らかにされ、抗酸化活性を有する植物ポリフェノールやフラボノイド類に関心が寄せられている。
特に、フラボノイドの摂取が冠動脈心疾患を予防する可能性が疫学調査により明らかにされ、特表２００１−５１１５３号公報（特許文献１）には、水溶性で生体吸収性の高いプロアントシアニジンを主体とするブドウ種子抽出物を血管治療薬の成分として利用することが示されている。
【０００５】
さらに、福岡県朝倉地区で多量に栽培されている紅タデには、アントシアニン系の紅色の色素が４１．５μｇ／１００ｇ、ポリフェノール類が２３０ｍｇ／１００ｇ含まれ、それらは抗酸化活性の高いものであるから、生活習慣病の発症や進行を抑える働きが期待されているものである。
【０００６】
また、本出願人は、先に、特許第３１０８０５９号公報（特許文献２）に示したように、精白ハトムギ粉末を高濃度酢酸処理後プロテアーゼ分解することにより、生理活性ペプチド組成物が得られることを見出している。
【特許文献１】特表２００１−５１１５３号公報（特許請求の範囲）
【特許文献２】特許第３１０８０５９号公報（特許請求の範囲）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明者等は、タデの持つ特性をより深く追求し、それらの特性を有効に活用するために、タデにおける有効成分を探索し、また、健康食品や医薬の原料として用い、より効率的にタデを使用することについて検討した。
【０００８】
その結果、発明者は、タデからの酢酸抽出、特に、精白ハトムギ粉末から生理活性ペプチド組成物を作出する際に用いた、高濃度酢酸処理後のタデからの酢酸による抽出が、殺菌、脂溶成分の溶出、抗酸化成分に有効であることを見出し、この発明を完成したのである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
タデ科タデ属の植物からの抽出物からなるもので、
酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であること
を特徴とする薬効性組成物である。
【００１０】
また、この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載の薬効性組成物において、
前記酢酸可溶性の抽出物が、
水にも可溶性であること
を特徴とするものである。
【００１１】
また、この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１又は２に記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物が、
ヤナギタデ又はその栽培品種であること
を特徴とするものである。
【００１２】
また、この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物が、
紅タデであること
を特徴とするものである。
【００１３】
また、この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項１〜４のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記抽出物が、
酢酸による抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１４】
また、この発明の請求項６に記載の発明は、
請求項１〜５のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記抽出物が、
高濃度酢酸処理が施されたタデ科タデ属の植物からの酢酸抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１５】
また、この発明の請求項７に記載の発明は、
請求項６に記載の薬効性組成物において、
前記高濃度酢酸処理における酢酸濃度が、
２０〜３０質量％で、抽出時の酢酸濃度が４質量％以下であること
を特徴とするものである。
【００１６】
また、この発明の請求項８に記載の発明は、
請求項１に記載の薬効性組成物において、
前記エタノール濃度が、
５０〜８０質量％であること
を特徴とするものである。
【００１７】
また、この発明の請求項９に記載の発明は、
請求項１〜８のいずれかに記載の薬効性組成物において、
前記タデ科タデ属の植物からの抽出物が、
前記植物の若芽又は生育葉からの抽出物であること
を特徴とするものである。
【００１８】
さらに、この発明の請求項１０に記載の発明は、
イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものであること
を特徴とする薬効性組成物である。
【００１９】
また、この発明の請求項１１に記載の発明は、
請求項１０に記載の薬効性組成物において、
前記イデイン、ケルシトリンまたはポリフェノール類を主たる成分とするものが、
タデ科タデ属の植物からの抽出物であること
を特徴とするものである。
【００２０】
さらにまた、この発明の請求項１２に記載の発明は、
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする医薬である。
【００２１】
さらにまた、この発明の請求項１３に記載の発明は、
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする健康食品である。
【発明の効果】
【００２２】
この発明の薬効性組成物は、以下のような優れた医学的効果を奏するもので、健康食品の素材として、また医薬の原料として、有効に利用されるものである。
１．赤血球変形能の改善（いわゆる血液さらさら状態への改善）
２．軽症糖尿病の治療効果
３．肝機能の改善
４．免疫機能の活性化
５．血小板、白血球の増大
【００２３】
また、この発明の薬効性組成物は、粉末状態でも、酢酸あるいは水又はエタノール溶液としても使用することができるため、上記のような効果を発現させるために、健康食品や医薬として利用する際に、効率的に又効果的に活用することを可能とするものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
この発明は、タデ科タデ属の植物からの抽出物からなるもので、タデ科タデ属の植物としては、通常、マタデ、ホンタデとも呼ばれるヤナギタデ、好ましくは、その栽培品種である紅タデ（ムラサキタデ）、アザブタデ、ホソバタデ等が用いられ、特に好ましいものは紅タデである。
【００２５】
抽出に際しては、前記タデの葉が用いられ、好ましいのは発芽した子葉、すなわち「芽ダテ」であるが、生育した葉、すなわち「生育タデ」も十分に使用可能である。
【００２６】
それら「芽ダテ」や「生育タデ」は、凍結乾燥または通風乾燥して粉末としたものが、抽出するには好適であるが、粉末とせず、葉そのものを用いることも可能で、それら生葉は、水道水、脱イオン水で洗浄した上で、特に高濃度酢酸処理が施された後に抽出、通常酢酸抽出処理される。
【００２７】
高濃度酢酸処理は、合成酢酸や醸造酢を濃縮した濃厚酢酸など９０％濃度の酢酸から始めて、水により３〜４倍に希釈して１〜２時間処理することであり、高濃度酢酸処理後は、多量の水を加えて、希酢酸とし、その状態で抽出するのが好ましく、その際の酢酸濃度としては４％以下、特に２〜３％とするのが好ましい。
【００２８】
このようにして抽出されたものは、種々の成分からなる組成物であるが、希酢酸、特に２〜３％濃度の希酢酸に溶解するものである。また、後述する種々の特性を有するものであるので、健康食品の素材として、また、医薬の原料として、有効に利用されるものである。
【００２９】
また、酢酸による抽出後に残存する残渣物を、５０〜８０％エタノールで抽出処理することによって、希酢酸に難溶でエタノール可溶性である抽出物が得られる。この組成物も後述するように、上記組成物とは若干異なるが、それなりの特性を有するものである。
【００３０】
酢酸およびエタノールによる抽出は、室温で０．５〜２時間、攪拌しながら行うことが好ましく、それにより、目的とする抽出物が得られる。
【００３１】
上記したように、この発明における抽出物は、酢酸抽出を主に、エタノールを従にして得られたものである。その際、エタノールを主に、酢酸を従にする抽出物とすることも可能である。しかしながら、その場合は、異なる成分が構成成分となり、特性に異なるところがあるので、使用に際しては、十分に検討を加えてから行うのが望ましい。
【実施例】
【００３２】
＜組成物の調製＞
紅タデの芽タデおよび生長タデの、それぞれの凍結乾燥粉末１００ｇに９０％酢酸１２５ｍｌ加え、ついで２５０ｍｌの脱イオン水を加えて掻き混ぜ、室温で２時間インキュベート処理した。
その後、さらに２．５ｌの脱イオン水を加えて約１時間攪拌後、８０メッシュの濾布を用いて遠心濾過し、残渣に再び２ｌの脱イオン水を加えて攪拌後、遠心濾過した。得られた濾液を併せて、遠心分離（１０，０００回転で１０分間）して、上清と沈殿に分け、得られた上清液を、減圧濃縮後凍結乾燥して組成物Ａを得た。
組成物Ａは、水、希酢酸、エタノール（８０％）のいずれにも可溶で、芽タデからは３６．５ｇ、生長タデからは３３．７ｇ得られた。
一方、遠心濾過における残渣物と遠心分離における沈殿物は併せて、凍結乾燥した後、８０％エタノールを６００ｍｌ加え、室温で１時間攪拌した。
遠心分離して得られた上清液を、減圧濃縮後凍結乾燥して組成物Ｂを得た。
組成物Ｂは、希酢酸に難溶で、エタノール（８０％）に可溶で、一部水（ｐＨ７）にも可溶なもので、芽タデからは９．０ｇ、生長タデからは８．３ｇ得られた。
【００３３】
＜組成物Ａの分析＞
芽タデから抽出した組成物Ａ５００ｍｇを用いて、以下の条件によるゲル濾過法により構成成分の検出と分取を行い、得られたゲル濾過の溶出パターンを図１に、１９の画分に分けて分取した結果を、表１に示す。
【００３４】
＜ゲル濾過条件＞
凍結乾燥した組成物Ａを１％酢酸溶液に溶解し、遠心分離して得られた上清液を、予め１％酢酸溶液で洗浄したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−１０（４×４５ｃｍ）カラムに供し、１％酢酸溶液で展開した。溶出液はドロップカウンターを用いて一定量ずつ分取し、成分の検出は２３０ｎｍと２８０ｎｍにおける吸光度を測定して行った。
【００３５】
【表１】
【００３６】
＜抗酸化活性の測定１＞
上記で得られた各画分の抗酸化活性を、リノ−ル酸の酸化物がβ−カロチンを退色させる作用を利用したＭｉｌｌｅｒらの方法に準じ、以下の方法で測定した結果を図２に示した。図から明らかなように多くの画分に抗酸化活性が認められた。
【００３７】
＜抗酸化活性の測定方法＞
試料液０．１ｍｌを分注した分光光度計用試験管セルに、リノ−ル酸−β−カロチン溶液４．９ｍｌを加えて攪拌し、温度５０℃の恒温槽で、一定時間インキュベ−トした場合のβ−カロチンの退色度を４７０ｎｍの吸光度によって求め、試料を加えない場合の酸化度を１００として酸化度を求めた。
【００３８】
＜免疫機能測定＞
芽タデから抽出された組成物Ａによる免疫機能の活性化を判断するために、組成物ＡのＴＮＦ（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）−αの産生量を測定した。
図３に示される結果から明らかなように、組成物Ａにより免疫機能の活性化が図れることが認められる。なお、ＴＮＦ−αの産生量の測定は、以下のようにして行った。
【００３９】
＜ＴＮＦ−αの産生量測定方法＞
ヒト末梢血より分離した好中球の浮遊液（１．０×１０６ 細胞／ｍｌ）５００μｌに、芽タデから得た組成物Ａの、希釈度の異なる溶液１０μｌを加え、５％ＣＯ２ を含むインキュベータ中で、温度３７℃で、６時間インキュベータ処理をした後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、得られた上清液４００μｌ中のＴＮＦ−α量を、ＥＬＩＳＡ法により定量した。なお、添加した試料の濃度は、希釈度によって表した。
【００４０】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定１＞
赤血球変形能は、酸化剤（ＡＡＰＨ：２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩）の影響で低下するが、上記組成物Ａによる低下抑制機能を、以下に示す方法で測定した。
図４はその結果で、上記組成物Ａによる抑制効果が顕著に認められた。
【００４１】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定方法＞
３．８％クエン酸ソーダ溶液１．０ｍｌを含む採血管に、採血した血液１０．０ｍｌを２５００ｒｐｍ×１０分遠心分離して赤血球を沈殿させた後、洗浄し、ＨＥＰＥＳを加え、６．０％赤血球浮遊液を調製した。
この６．０％赤血球浮遊液３ｍｌにＨＥＰＥＳを（ａ３．０ｍｌ、ｂ２．４０ｍｌ、ｃ２．３４ｍｌ）加え、温度３７．０℃で予備インキュベートしたのち、ｂとｃには５００ｍＭのＡＡＰＨ溶液０．６ｍｌ、ｃには組成物Ａの酢酸溶液０．０６ｍｌ（１０．０ｍｇ／ｍｌ）を添加し、温度３７．０℃で４５分インキュベートした。
その後、測定するまで氷冷し、測定は、温度２５．０℃で７分、再度インキュベートしてから行った。なお、ａはコントロールである。
【００４２】
なお、赤血球変形能は、従来の定量性と再現性に難点のある微細孔（ｎｕｃｌｅｉｐｏｒｅ）フィルターを用いた方法に代わるものとして、発明者が開発したフィルター特性が顕著に改善された、ニッケルメッシュ（ｎｉｃｋｅｌ ｍｅｓｈ）フィルターを用いる、以下の方法で測定した。
ニッケルメッシュは、フォトレジスト法と特殊メッキ法を組み合わせて作成されたニッケル薄膜フィルターで、微小孔の数、形状、分布が正確に一定であるばかりでなく、数秒間の超音波洗浄によって１００回以上の再使用が可能である。
加えて、ニッケルメッシュの微小孔の辺縁は滑らかでテーパを持ち、これにより混入白血球が機械的影響を受けることはなく、微小孔には融合や分枝がまったくない。これらの特徴により、以下の方法は、高い定量性と再現性を保持するものである。
【００４３】
＜赤血球変形能測定法（Ｎｉｃｋｅｌ ｍｅｓｈ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ法）＞
試験は、垂直に立てたガラス管（ｖｅｒｔｉｃａｌ ｔｕｂｅ）に、タイゴンチューブを介してニッケルメッシュホルダーを接続し、通常１５ｃｍの高さ（ｈｅｉｇｈｔ：ｈ）より、ＨＥＰＥＳバッファーで調整した生理食塩水を用いて作成した赤血球浮遊液を濾過させて行う。
ガラス管の周囲は恒温水を還流させて、試料を定温に保っている。
ガラス管のゼロレベルに設置した圧力（ｐｒｅｓｓｕｒｅ：Ｐ）トランスデューサーで、試料を濾過中の圧力降下を連続的に検出し、これを増幅器とＡＤ変換器を介してパソコンに取り込み、流量（ｆｌｏｗｒａｔｅ：Ｑ）を計算する。
流量は、圧力を高さに変換し（Ｐ＝ρｇｈ）、高さ‐時間（ｈ−ｔ）曲線の微分値（ｄｈ／ｄｔ）を取って、これにガラス管の断面積（ａ）を乗じて得られる（Ｑ＝ｄｈ／ｄｔ・ａ）。
血球を含まないコントロール溶液（ＨＥＰＥＳバッファー調整生食水：ニュートン流体）の圧‐流量曲線を対照として、赤血球浮遊液の圧‐流量曲線を検討し、ある一定圧（通常１００ｍｍ・Ｈ２Ｏ）での、対照液の流量に対する赤血球浮遊液の流量(％)をもって赤血球変形能を評価する。
【００４４】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定２＞
図１に示されるように、組成物Ａは、大きく分けて、前半に溶出される抗酸化性フェノール酸含有画分と、後半に溶出される赤紅色のフラボノイド含有画分とに分けることができるので、それぞれの画分をプールして、赤血球変形能低下抑制機能を測定した。
なお、ここで使用した試料は、組成物Ａの７０％エタノール可溶画分である。
図５に示されるように、赤血球変形能低下抑制機能はフラボノイド含有画分に顕著に認められた。なお、ａはコントロールで、ｂはＡＡＰＨのみ添加、ｃはＡＡＰＨとフェノール酸含有画分添加、ｄはＡＡＰＨとフラボノイド含有画分を添加した試料である。
【００４５】
＜抗酸化活性の測定２＞
上記で得られた二つの画分の抗酸化活性を、前記した方法に準じ、測定し、合成抗酸化剤ＢＨＡ（ｔ−ブチルヒドロキシアニソール）換算量として示した結果を図６に示す。
図から明らかなように、フェノール酸含有画分の抗酸化活性は小さいものであった。なお、ａは組成物Ａそのもので、ｂはフェノール酸含有画分、ｃはフラボノイド含有画分である。
【００４６】
＜ラジカル捕捉活性の測定＞
上記で得られた二つの画分と組成物Ａのラジカル捕捉活性を、以下の方法で測定した。その結果を図７に示す。図７から明らかなように、フラボノイド含有画分は顕著なラジカル捕捉活性を示した。
【００４７】
＜ラジカル捕捉活性測定法＞
ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）溶液（ＤＰＰＨ４００μＭ：ＭＥＳ２００μＭ：２０％エタノール＝１：１：１）９００μｌに、８０％エタノール（３００−ａ）μｌと試料ａμｌを加え、室温で２０分間反応させた後、５２０ｎｍでの吸光度の減少を測定する。
アスコルビン酸（ＡｓＡ）でＤＰＰＨラジカル捕捉活性の検量線を作成し、試料ｇ当たりのラジカル捕捉活性をＡｓＡ当量（μｍｏｌ）で表した。
【００４８】
＜フラボノイド含有画分の再分画＞
上記の顕著な特性を示すフラボノイド含有画分を、逆相ＨＰＬＣで再分画を行い、図８の結果が得られた。
３つのピークａ１ 、ａ２ およびｂについて、吸収スペクトルを測定した結果は図９のとおりである。
ピークａ１ の成分はイデイン、ピークｂの成分はケルシトリンと推定された。
【００４９】
＜再分画条件＞
フラボノイド含有画分５．７ｍｇを２３０μｌの０．１％ＴＦＡ溶液に溶解した後、２００μｌを逆相ＨＰＬＣ（２１．５×３００ｍｍ）に供した。温度４０℃、５ｍｌ／ｍｉｎの流速で溶出し、２８０ｎｍで検出を行った。
１回の逆相ＨＰＬＣで、ピークａ１ で示される成分２．８ｍｇ、ピークａ２ で示される成分１．８ｍｇ、ピークｂで示される成分２．０ｍｇ得られた。
【００５０】
＜赤血球変形能低下抑制機能測定３＞
フラボノイド含有画分の再分画で得られた、ピークａ１ の成分、すなわちイデイン、ピークｂの成分、すなわちケルシトリンの赤血球変形能低下抑制機能を測定し、その結果を図１０に示す。
図１０に示されるように、両者に赤血球変形能低下抑制機能が認められたが、ピークａ２ の成分には抑制機能は認められなかった。
なお、ａはコントロールで、ｂはＡＡＰＨのみ添加、ｃはＡＡＰＨとピークａ１ 成分添加、ｄはＡＡＰＨとピークｂ成分を添加した試料である。
【００５１】
＜生体での機能測定＞
この発明の薬効性組成物の生体に与える影響について、ラットを用いて検討した。
ラットとしては、９〜１０週齢雄Ｗｉｓｔａｒ系ＳＰＦラットを用い、糖尿病での影響をみるために、糖尿病を誘発するＳＴＺ（ストレプトゾトシン）の投与したラットについても検討した。
この発明の薬効性組成物としては、芽タデから抽出した組成物Ａと、生長タデから抽出した組成物Ｂを選択し、その０．５％と０．１％をオリエンタル酵母（株）の飼料ＭＦに混入してラットに与えた。
検討項目は、以下のとおりである。
１．体重
２．血糖値（尾静脈：グルテストエースＲ（三和化学研究所）使用）
３．血液検査（腹大動脈から採血：血液一般、生化学検査（血漿）、赤血球変形能）
４．組織観察（顕微鏡）
【００５２】
表２は、ＳＴＺを投与し、糖尿病などの異常を起こさせたラットにおける、この発明の薬効性組成物の影響を調べた結果を示すものである。
この発明の薬効性組成物の投与によって、ＡＳＴ、ＡＬＴの数値が著しく改善されており、肝機能の改善に効果のあることが認められ、また、ＬＤＬコレステロールの減少にも機能していることが認められた。
【００５３】
【表２】
【００５４】
表３は、表１と同様に試験したものであるが、より多くの検査を行ったものである。
この表からは、この発明の薬効性組成物の投与により赤血球変形能が著しく改善され、血液をさらさらにする効果が認められた。また、生長タデ群はＳＴＺ投与による血小板減少を防止する効果が見られた。
【００５５】
【表３】
【００５６】
表４および表５は、正常のラットにこの発明の薬効性組成物を投与することによる影響を調べたもので、正常なラットについては、血小板増加効果が認められたが肝機能その他悪影響は全く見られなかった。
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】
免疫機能検査としては、ＴＮＦ−αと膵臓ランゲルハンス島の免疫染色による組織観察によって行った。
タデを投与することによって、ＴＮＦ−αは増大し、免疫機能促進効果が見られた。
【００６０】
組織観察は、ＷｉｓｔａｒラットにＳＴＺ４５ｍｇ／Ｋｇを腹腔内に注射し、糖尿病モデル動物を作成して行った。
それらモデル動物を、体重の減少と血糖値を指標にして、重症糖尿病モデル群と軽症糖尿病モデル群の２群に分けた。
各群に０．５％組成物Ａ（芽タデ）含有食餌を与えて、糖尿病モデル動物の膵臓ランゲルハウス島（ラ氏島）を顕微鏡で観察し、この発明にかかる薬効性組成物の糖尿病の膵臓に及ぼす影響を調査した。
顕微鏡観察は、各動物を、エーテル麻酔下で屠殺後、膵臓を摘出し、クリオスタット切片を作製、Ｈ・Ｅ染色と抗インシュリン抗体を用いた免疫染色を施し、一次抗体は、マウス抗インシュリンモノクローナル抗体（Ｌａｂ Ｖｉｓｉｏｎ．、Ｃｏ．、ＣＡ、ＵＳＡ）、二次抗体は、ウマ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用い蛍光抗体法によって染色したのち行った。
【００６１】
図１１は、正常対照ラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１２は、正常対照ラットの膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
図１３は、重症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１４は、重症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
図１５は、芽タデ投与後における軽症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示し、図１６は、芽タデ投与後の軽症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す。
【００６２】
これらの図から明らかなように、体重減と高血糖値を示した重症糖尿病モデル群は、ラ氏島の顕著な萎縮、内分泌細胞の変形・変性とアポトーシスによる、細胞死が惹起されていた。
免疫染色の結果、インシュリン産生Ｂ細胞は、数の著減とともに変形・変性像が観察された。
残存している変形・変性Ｂ細胞の核は、偏在しており、細胞質のインシュリンは、弱陽性な免疫染色反応を示した。重症糖尿モデル群に対して芽タデ投与の効果は、特に観察されなかった。
一方、芽タデを投与した軽症糖尿病モデル群では、ラ氏島の大きさに特に変化は認められなかった。免疫染色の結果も、ラ氏島周辺部に微弱な免疫陽性反応を示す細胞が少数局在していたが、これ以外はほぼ正常に類似の形態と免疫染色反応で示された。
以上の結果から芽タデの投与は、軽症糖尿病モデル群に対して有効に働き、軽症糖尿病から重症糖尿病への移行を抑制するか、あるいは遅延させる可能性が示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
この発明の薬効性組成物は、上記のような優れた特性を有し、かつ粉末ないし水、酢酸またはエタノールの無毒の溶媒溶液として供給可能なため、健康食品産業や医薬業界で広く利用される可能性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】この発明の薬効性組成物のゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図２】この発明の薬効性組成物を分画して得た各画分の抗酸化活性を示す図である。
【図３】この発明の薬効性組成物の添加によるＴＮＦ−αの産生量の変化を示した図である。
【図４】この発明の薬効性組成物の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図５】この発明の薬効性組成物の分画分の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図６】この発明の薬効性組成物の分画分の抗酸化活性を示した図である。
【図７】この発明の薬効性組成物と分画分のラジカル捕捉活性を示した図である。
【図８】この発明の薬効性組成物のフラボノイド含有画分の逆相ＨＰＬＣチャートである。
【図９】フラボノイド含有画分の逆相ＨＰＬＣで再分画された成分の吸収スペクトルである。
【図１０】再分画分の赤血球変形能低下抑制機能を示した図である。
【図１１】正常対照ラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１２】正常対照ラットの膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１３】重症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１４】重症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１５】この発明の薬効性組成物投与後の軽症糖尿病モデルラットの膵臓ラ氏島のＨ・Ｅ染色像を示す顕微鏡写真である。
【図１６】この発明の薬効性組成物投与後の軽症糖尿病モデルラット膵臓ラ氏島のインシュリン抗体による免疫染色像を示す顕微鏡写真である。
【符号の説明】
【００６５】
なし
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タデ科タデ属の植物からの抽出物からなり、
酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であること
を特徴とする薬効性組成物。
【請求項２】
前記酢酸可溶性の抽出物が、
水にも可溶性であること
を特徴とする請求項１に記載の薬効性組成物。
【請求項３】
前記タデ科タデ属の植物が、
ヤナギタデ又はその栽培品種であること
を特徴とする請求項１又は２に記載の薬効性組成物。
【請求項４】
前記タデ科タデ属の植物が、
紅タデであること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項５】
前記抽出物が、
酢酸による抽出物であること
を特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項６】
前記抽出物が、
高濃度酢酸処理が施されたタデ科タデ属の植物からの酢酸抽出物であること
を特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項７】
前記高濃度酢酸処理における酢酸濃度が、
２０〜３０質量％で、抽出時の酢酸濃度が４質量％以下であること
を特徴とする請求項６に記載の薬効性組成物。
【請求項８】
前記エタノール濃度が、
５０〜８０質量％であること
を特徴とする請求項１に記載の薬効性組成物。
【請求項９】
前記タデ科タデ属の植物からの抽出物が、
前記植物の若芽又は生育葉からの抽出物であること
を特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項１０】
イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものであること
を特徴とする薬効性組成物。
【請求項１１】
前記イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものが、
タデ科タデ属の植物からの抽出物であること
を特徴とする請求項１０に記載の薬効性組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする医薬。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする健康食品。
【請求項１】
タデ科タデ属の植物からの抽出物からなり、
酢酸可溶性又は酢酸難溶性であるが、エタノール可溶性であること
を特徴とする薬効性組成物。
【請求項２】
前記酢酸可溶性の抽出物が、
水にも可溶性であること
を特徴とする請求項１に記載の薬効性組成物。
【請求項３】
前記タデ科タデ属の植物が、
ヤナギタデ又はその栽培品種であること
を特徴とする請求項１又は２に記載の薬効性組成物。
【請求項４】
前記タデ科タデ属の植物が、
紅タデであること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項５】
前記抽出物が、
酢酸による抽出物であること
を特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項６】
前記抽出物が、
高濃度酢酸処理が施されたタデ科タデ属の植物からの酢酸抽出物であること
を特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項７】
前記高濃度酢酸処理における酢酸濃度が、
２０〜３０質量％で、抽出時の酢酸濃度が４質量％以下であること
を特徴とする請求項６に記載の薬効性組成物。
【請求項８】
前記エタノール濃度が、
５０〜８０質量％であること
を特徴とする請求項１に記載の薬効性組成物。
【請求項９】
前記タデ科タデ属の植物からの抽出物が、
前記植物の若芽又は生育葉からの抽出物であること
を特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の薬効性組成物。
【請求項１０】
イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものであること
を特徴とする薬効性組成物。
【請求項１１】
前記イデイン、ケルシトリン又はポリフェノール類を主たる成分とするものが、
タデ科タデ属の植物からの抽出物であること
を特徴とする請求項１０に記載の薬効性組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする医薬。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の薬効性組成物を含有すること
を特徴とする健康食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２００６−２４１１４３（Ｐ２００６−２４１１４３Ａ）
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２２７４７（Ｐ２００６−２２７４７）
【出願日】平成１８年１月３１日（２００６．１．３１）
【出願人】（５９９０３５３３９）株式会社 レオロジー機能食品研究所 (16)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１月３１日（２００６．１．３１）
【出願人】（５９９０３５３３９）株式会社 レオロジー機能食品研究所 (16)
【Ｆターム（参考）】
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