酸化的ストレス関連疾患の治療または予防方法
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式(I)（式中、Ｒ１〜Ｒ４およびＸ１〜Ｘ３は、本明細書に記載の通りである）の化合物の有効量を投与することを包含する方法を開示する。酸化的ストレス関連疾患の例は、神経障害、心血管障害、および創傷である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連技術の相互参照
本特許出願は、米国仮特許出願第６０／８３９，８００号（２００６年８月２３日出願）の利益を主張し、これは参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
世界中で罹患および死亡の第２の主な原因である虚血性脳卒中の危険性は、食事や生活様式の変更、および降圧剤の使用により低減され得る（非特許文献１）。しかしながら、脳卒中の発生率は依然として高く、脳細胞への損傷を減少して脳卒中を患った者の機能転帰を改善することができる治療が必要とされている。
【０００３】
脳卒中に起因する神経細胞死に関与する機序としては、代謝障害、酸化的ストレス、グルタミン酸受容体の過活動および細胞内カルシウムの過負荷が挙げられると考えられる（非特許文献２）。スーパーオキシドアニオンラジカル、過酸化水素、ヒドロキシルラジカルおよび一酸化窒素などのいくつかの異なった活性酸素種（reactive oxygen species）（ＲＯＳ）が、脳卒中後の神経細胞中に発生する（非特許文献３および４）。ＲＯＳは、細胞膜、タンパク質および核酸への損傷を増幅するような方法で、それ自身で相互作用し、かつ、触媒金属と共に作用して、結果として細胞損傷および細胞死をもたらす。例えば、過酸化水素は、Ｆｅ２＋と相互作用してヒドロキシルラジカルを発生させ、一方、スーパーオキシドアニオンラジカルは、一酸化窒素と相互作用して過酸化亜硝酸を発生させる。ヒドロキシルラジカルおよび過酸化亜硝酸は、虚血性脳障害に関与する膜脂質過酸化の自己触媒的過程の非常に強力な誘導因子である（非特許文献５〜８）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｉｎｇａｌｌ，Ｔ．，Ｊ．Ｉｎｓｕｒ．Ｍｅｄ．，３６，１４３−１５２（２００４）
【非特許文献２】Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，３，３６１−３７２（２００３）
【非特許文献３】Ｌｉｐｔｏｎ，Ｐ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，７９，１４３１−５６８（１９９９）
【非特許文献４】Ｃｈａｎ，Ｐ．Ｈ．，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．，２１，２−１４（２００１)
【非特許文献５】Ｅｌｉａｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１９，５９１０−５９１８（１９９９）
【非特許文献６】Ｈａｌｌ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．，８，１９５−２０６（１９９７）
【非特許文献７】Ｋｅｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４，１７９−１９１（２００４）
【非特許文献８】Ｓｅｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｇｅｉｎｇ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，３，３４５−３５３（２００４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、ＲＯＳに起因する酸化ストレスの治療方法が依然として必要とされている。本発明は、このような方法を提供する。このおよび他の目的および利点、ならびにさらなる発明の特徴は、本明細書で提供される本発明の記載から明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の要旨
本発明は、神経障害、心血管障害、または創傷などの酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量を投与することを包含する方法を提供する。式（Ｉ）の化合物は、それらの水溶性が尿酸と比較して改善されているので、酸化的ストレス関連疾患の治療において特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１Ａは、尿酸の構造および式（Ｉ）の例示的な化合物を図示する。図１Ｂは、本発明の実施態様において、シナプトソームアッセイを用いて定量化した尿酸および式（Ｉ）の化合物の抗酸化活性を示す。活性酸素種（ＲＯＳ）のレベルを測定し、値は、Ｆｅ２＋で処理した対照シナプトソーム中に存在するＲＯＳの百分率として表される（平均値およびＳＥＭ，ｎ＝４例）。対照値と比較して＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１。
【図２】図２は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が、虚血様症状に対し培養海馬神経を保護することを示す。神経細胞生存を定量し、値は、平均およびＳＥＭである（ｎ＝８〜１０培地）。ビークル／ＯＧＤ培養液と比較して＊ｐ＜０．０５。
【図３】図３は、本発明の実施態様において、尿酸および式（Ｉ）の化合物が酸化的および興奮毒性損傷に対して培養神経細胞を保護することを示す。培養ＰＣ１２細胞は、尿酸（図３Ａ）またはｍＵＡ３（図３Ｂ）で前処理される。培養海馬神経は、尿酸（図３Ｃ）またはｍＵＡ３（図３Ｄ）で前処理される。細胞生存は、定量され、値は、４〜８培養液の平均およびＳＥＭである。０の尿酸またはｍＵＡ３濃度と比較して＊ｐ＜０．０５。
【図４】図４は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が局所虚血性脳卒中のマウスモデルでの機能転帰（例、歩行）を改善し、かつ脳損傷を減弱することを示す。図４Ａにおいて、神経学的機能は、脳卒中後２４、４８および７２時間で採点される。図４Ｂにおいて、梗塞量は、脳卒中後７２時間で定量される。値は、平均およびＳＥＭ（ｎ＝８〜１２匹のマウス）である。偽病と比較して＊ｐ＜０．００１。ビークルと比較して＋ｐ＜０．０１。
【図５】図５は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が局所虚血性脳卒中のマウスモデルでの機能転帰を改善し、かつ脳損傷を減弱することを示す。図５Ａにおいて、神経学的機能は、脳卒中後２４、４８および７２時間で採点される。図５Ｂにおいて、梗塞量は、脳卒中後７２時間で定量される。値は、平均およびＳＥＭである（ｎ＝８〜１２匹のマウス）。偽病と比較して＊ｐ＜０．００１。ビークルと比較して＋ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
活性酸素種（ＲＯＳ）は、脳卒中、虚血再潅流、関節炎、呼吸困難、心血管疾患（例、心筋梗塞）、発癌（例、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性前骨髄球性白血病、皮膚の扁平上皮細胞癌、および基底細胞癌）、およびパーキンソン病、認知症、ハンチントン病、ホジキン病等の神経系疾患、および創傷の回復遅延のような多くの疾患または状態に関連してきた。本発明は、ＲＯＳから細胞を保護し、かつ機能転帰を改善する化合物を提供する。
【０００９】
即ち、本発明は、酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量、またはその組成物を投与することを包含する方法を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１０】
【化１】
【００１１】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。
【００１２】
酸化的ストレス関連疾患としては、例えば、神経障害、心血管障害、および創傷が挙げられる。心血管障害は、例えば、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、高脂質血症、糖尿病、高血圧症、および虚血性心疾患であり得る。
【００１３】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防の範囲内において、本発明は、神経障害の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物、またはその組成物の有効量を投与することを包含する方法を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１４】
【化２】
【００１５】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれ、ＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。神経障害は、例えば、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、別名、ルー・ゲーリック病）、網膜変性（網膜色素変性症、黄斑変性症、およびアッシャー症候群等）、タウオパシー（アルツハイマー病、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、および前頭側頭葉変性症（ピック病）等）、ならびに認知症（アルツハイマー病、多発性梗塞性認知症（ＭＩＤ）、ダウン症候群に関連する認知症、および後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）認知症等）であり得る。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物にイン・ビボで投与した場合、酸化的および虚血様損傷に対するシナプトソームおよび培養ニューロンの保護に効果的であることが示される濃度で脳に蓄積する。従って、式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物における虚血性脳障害の治療において特に有用である。本発明の虚血性脳障害は、例えば、（ｉ）例えば、心不全、出産合併症（胎児脳）、および大量出血の場合の脳への血液供給不足、（ｉｉ）例えば、大気の酸素供給不足、ＣＯ中毒、窒息、または肺不全／閉塞に起因する血液酸素化不足、並びに（ｉｉｉ）例えば、脳卒中または頭部外傷に起因する脳またはその部位の出血に起因する脳への酸素供給不足に起因し得る。
【００１７】
本発明は、創傷治癒の増進をそれを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量、またはその組成物を投与することを包含する方法をさらに提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１８】
【化３】
【００１９】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。
【００２０】
創傷治癒の増進としては、式（Ｉ）の化合物の投与の際に、酸化的ストレスを対照と比較して減少することによる創傷治癒過程の促進方法が挙げられるが、これに限定されない。創傷治癒の他の機序もまた意図される。本方法の実施態様において、式（Ｉ）の化合物、またはその組成物は、好ましくは創傷に局所的に投与される。創傷としては、切り傷、擦り傷、染み、潰瘍、および火傷が挙げられる。
【００２１】
本発明の実施態様のいずれかにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ水素またはＣ１−６アルキルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がすべて酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、Ｃ１−６アルキルである）。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素またはメチルであるが、但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がすべて酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、メチルである。本発明の他の実施態様において、１つ、２つ、または３つ全てのＸ１、Ｘ２、およびＸ３は、硫黄である。本発明の方法のいずれかにおいて、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、全て水素であるかまたは全てメチルである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施態様は、
【００２２】
【化４】
【００２３】
である。
【００２４】
式（Ｉ）の種々の基において示す用語「置換された」については、置換され得る基のいずれか一つ（例、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル）が、可能な限り、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシから成る群より独立して選ばれる１ないし１０個の置換基（例、１ないし８個、１ないし６個、１ないし４個、１ないし３個の置換基）を一般的に有しうる。
【００２５】
用語「アルキル」は、好ましくは１ないし３個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖のアルキル置換基を示す。そのような置換基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル等が挙げられる。
【００２６】
本明細書中で用いる用語「アルケニル」は、好ましくは２ないし４個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖のアルケニル置換基を意味する。そのような置換基の例としては、プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、ｓｅｃ−ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、イソペンテニル、ヘキセニル等が挙げられれる。
【００２７】
本明細書中で用いる用語「シクロアルキル」は、３ないし１０個の炭素原子、好ましくは３ないし８個の炭素原子、好ましくは５ないし８個の炭素原子、より好ましくは５ないし６個の炭素原子を有する環状アルキル置換基を意味する。そのような置換基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられれる。
【００２８】
用語「アリール」は、当該分野で一般的に理解されているように、非置換または置換の芳香族炭素環置換基を示し、例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル等のような単環および多環芳香族が挙げられる。アリール置換基は、６ないし３０個の炭素原子、好ましくは６ないし１８個の炭素原子、より好ましくは６ないし１４個の炭素原子、およびさらに好ましくは６ないし１０個の炭素原子を一般的に含む。用語アリールは、ヒュッケル則によれば、平面的でかつ４ｎ＋２のπ電子を包含する環状置換基に当てはまると理解される。
【００２９】
用語「アリールアルキル」は、基−Ｒ−Ａｒ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基であり、かつＡｒは、本明細書に記載のアリール基である）を示す。アリールアルキルの例は、ベンジルである。用語「カルボキシアルキル」は、基−ＲＣＯＯＨ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基である）を示す。用語「ヒドロキシアルキル」は、基−ＲＯＨ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基である）を示す。
【００３０】
用語「アルコキシ」は、エーテル酸素に結合した直鎖または分岐鎖のアルキル基を包含する。アルキル基は、本明細書中に記載したものと同様である。そのような置換基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００３１】
本明細書で用いる用語「ハロ」は、例えば、フッ素、臭素、塩素、およびヨウ素のような、ＶＩＩＡ族から選ばれる置換基を意味する。好ましくは、ハロは、臭素または塩素である。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物は、任意の適切な方法によって、例えば、尿酸を出発物質として利用することによって、調製することができる。例えば、式（Ｉ）の化合物上の１つ以上のカルボニル基は、ローソン試薬の使用によってまたは硫化リンとの加熱によって、チオカルボニルへ変換され得る。式（Ｉ）の化合物上の置換基Ｒ１〜Ｒ４は、当該分野で公知の任意の方法によって変更され得る（例、求核置換による）。例えば、式（Ｉ）の化合物上の１つ以上の窒素は、アルキルハライドおよび塩基の存在下でアルキル化され得る。適切な反応および反応パラメーターは、当業者に周知である。例えば、Ｂｅａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，９８６−９９０（１９６２）およびＭａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１９，１１９３−１２０３（２０００）を参照のこと（これらは、本明細書中に参考として援用される）。
【００３３】
本発明の実施態様に用いられている化合物の利点は、それらが増大した水溶性を有することである。式（Ｉ）の化合物の水溶性は、加熱されていない水の中で測定して、一般的に、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（例、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ）である。従って、水溶性は、０．２ないし５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ないし５ｍｇ／ｍｌ、代表的には２〜３ｍｇ／ｍｌである。水溶性は、例えば、細胞膜に浸透する能力およびバイオアベイラビリティを増加させる。水溶性は、温水中で増大され得る。従って、加熱された水の中での式（Ｉ）の化合物の水溶性は、一般的に、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ（例、少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ）である。
【００３４】
哺乳動物は、神経障害または創傷などの酸化的ストレス関連疾患を有するかまたはそのリスクを有する任意の適切な対象であり得る（例、人類、イヌ科動物、ネコ科動物または類人猿）。好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、酸化的ストレス関連疾患が哺乳動物において有害な影響を有する前に、または酸化的ストレス関連疾患（例、虚血性脳障害）の有害な影響の判定直後に投与され、必要に応じて継続的に投与される。
【００３５】
「有効量」は、個体において有意義な利点（例、酸化的ストレス関連疾患の阻害の少なくとも１つの態様の促進、あるいは、特定の酸化的ストレス関連疾患と関係のある他の関連する病状の、治療、治癒、予防、発病の遅延、または改善）を示すために十分な量を意味する。有効量は、個体において所望される生物学的効果、治療される症状、および／または式（Ｉ）の化合物の特定の性質、ならびに個体によって変化してもよい。この点において、式（Ｉ）の化合物の任意の適切な用量が、治療される酸化的ストレス関連疾患のタイプに従って、哺乳動物に投与され得る。創傷治癒の増進に関しては、創傷組織（例、皮膚）を治療するために必要となる式（Ｉ）の化合物の量は、それ自体定まったものではなく、組成物において用いられる任意の添加成分の量およびタイプ、哺乳動物の皮膚のタイプ、ならびに治療される創傷の、重症度、範囲、および性質に依存する。
【００３６】
「有効量」の決定において考慮される種々の一般的な考慮事項は、当業者に公知であり、例えば、Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｏｏｄｍａｎ Ａｎｄ ＧｉｌｍａｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ ｅｄ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９９０、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０（それぞれ参考として本明細書に援用される）に記載される。式（Ｉ）の化合物の用量は、望ましくは、哺乳動物の体重１キログラム（ｋｇ）当たり約０．１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）ないし約４００ｍｇ／ｋｇ（例、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、または約３００ｍｇ／ｋｇ）を含む。その他の具体的態様において、式（Ｉ）の化合物の用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇないし約３００ｍｇ／ｋｇ（例、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、または約２００ｍｇ／ｋｇ）、約１０ｍｇ／ｋｇないし約２００ｍｇ／ｋｇ（例、約２５ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、または約１５０ｍｇ／ｋｇ）、または約５０ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ（例、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、または約９０ｍｇ／ｋｇ）を含む。
【００３７】
本発明の方法は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および医薬上許容され得る担体を含む医薬組成物を投与することによっても実施され得る。組成物は、アジュバントおよび他の抗酸化物質のような、他の活性薬剤をさらに含み得る。抗酸化物質は、例えば、ビタミン類（例、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＡ、および他のレチノイド）、グルタチオン、スーパーオキシド・ジスムターゼ模倣薬、窒素酸化物、およびベータカロテンであり得る。
【００３８】
任意の適切な医薬上許容され得る担体は、本発明の範囲内で用いられ得、かかる担体は、当該分野で周知である。例えば、担体は、水性または非水性の溶液、緩衝剤および塩を含む液体、滅菌粉末、顆粒、および錠剤、半透過性マトリックス、非経口ビークル、または静脈内ビークルを含む。担体の選択は、、医薬組成物が投与される個々の部位および医薬組成物を投与するために用いられる個々の方法によって、ある程度決定されるであろう。
【００３９】
適切な製剤としては、水性および非水性溶液、抗酸化物質、緩衝剤、静菌剤、および当該製剤を意図する受容者の血液または他の体液と等張にする溶質を含み得る滅菌等張液、、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および防腐剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。一つの具体的態様において、医薬上許容され得る担体は、緩衝剤および塩を包含する液体である。製剤は、アンプルおよびバイアルのような単位用量または複数回用量を封入した容器中に存在し得、使用直前に、例えば、水のような滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存され得る。即時溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。
【００４０】
さらなる担体としては、活性薬剤を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスであって、当該マトリックスが成形品（例、フィルム、リポソーム、または微粒子）の形状である徐放性製剤が挙げられる。
【００４１】
医薬組成物としては、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、防腐剤、界面活性剤等が挙げられ得る。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、局所または全身治療のいずれが所望されるか、および治療される範囲に応じて、任意の適切な投与経路のために製剤され得る。望ましくは、医薬組成物は、静脈内、腹腔内、動脈内、口内、皮下、または筋肉内注射のような非経口投与用に製剤される。注射物質は、液体溶液または懸濁液、注射前の液体中の懸濁液に適した固形として、あるいは乳濁液としてのいずれかで、従来の形式で調製され得る。さらに、非経口投与は、一定の用量が保たれるような持続性放出または徐放性放出のシステムの調製を伴い得る。非経口投与用の製剤としては、滅菌の水性または非水性溶液、懸濁液、および乳濁液が挙げられる。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルが挙げられる。水性担体としては、水、生理食塩水および緩衝化媒体などのアルコール性／水性の溶液、乳濁液または懸濁液が挙げられる。非経口ビークルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル、または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビークルとしては、流動物および栄養補給物、電解質補給物（例えば、リンゲルデキストロースに基づいたもの）等が挙げられる。防腐剤および他の添加物もまた存在し得る（例えば、抗菌剤、抗酸化物質、キレート剤、および不活性ガス等）。
【００４３】
医薬組成物は、経口でも投与され得る。経口組成物は、粉末または顆粒、水または非水性媒体中の懸濁液または溶液、カプセル、サシェ剤、あるいは錠剤の製剤の状態であり得る。増粘剤、香料、賦形剤、乳化剤、分散剤、または結合剤が望ましくあり得る。
【００４４】
直腸投与に適した製剤は、例えば、ココアバターまたはサリチル酸塩を含む適切な基剤を有する坐薬として提供され得る。膣内投与に適した製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡、またはスプレー処方物として提供され得る。同様に、活性成分は、コンドーム上のコーティングとして潤滑剤と組み合わされ得る。実際、好ましくは、活性成分は、コンドーム、ペッサリー、子宮頸管キャップ、膣リング、およびスポンジなどの任意の避妊具に塗布されるが、これらに限定されない。
【００４５】
適切な担体およびそれらの製剤は、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ ｅｄ．），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）にさらに記載されている。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物またはその組成物は、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸のような無機酸、並びに、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グルコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸のような有機酸との反応によって形成される医薬上許容され得る酸付加塩として投与される可能性があり得る。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物を含む化合物または医薬組成物は、スポンジ、生体適合性網、機械的リザーバー、または機械的インプラントのような、式（Ｉ）の化合物の制御されたまたは持続性の放出を可能にするデバイス中または上で投与され得る。植え込み可能なデバイス（例、高分子組成物から成る機械的リザーバーインプラント（implant）またはデバイス）のような、インプラント（例、米国特許５，４４３，５０５参照）、デバイス（例、米国特許４，８６３，４５７参照）は、活性薬剤の投与に特に有用である。本発明の方法に係る医薬組成物はまた、例えば、ゲル泡、ヒアルロン酸、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、ビス−２−ヒドロキシエチル−テレフタラート（ＢＨＥＴ）のような、ポリホスホエステル、および／またはポリ乳酸−グリコール酸を含む徐放性製剤（例、米国特許５，３７８，４７５参照）の製剤の形態でも投与され得る。もちろん、化合物または医薬組成物の投与は、目的の組織に活性薬剤を効率的に送達する任意の経路によって成し得る。
【実施例】
【００４８】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものであるが、もちろん、その範囲を限定するいかなるようにも解釈されるべきではない。
【００４９】
実施例１
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の尿酸類縁体の合成を例示する。
市販で入手可能な誘導体は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手する。尿酸のメチル誘導体およびサルファー誘導体の合成に用いる方法は、以前に記載したものと同様であり（Ｂｅａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，９８６−９９０（１９６２）ａｎｄ Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１９，１１９３−１２０３（２０００））、構造は、１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）および紫外（ＵＶ）スペクトル分析によって確認する。尿酸類縁体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりアッセイし、９７％を超える純度であると判明する。冷水中の尿酸および式（Ｉ）の化合物の溶解度（ｍｇ／ｍｌ）を測定し、表１中に記載する。
【００５０】
【表１】
【００５１】
従って、式（Ｉ）の化合物の水溶性は、尿酸のそれより１０ないし３０倍大きい。
【００５２】
実施例２
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の化合物の薬物動態を決定する方法を例示する。
マウスに対照化合物として１０ｍｇ／ｋｇ（５．９５ｍｍｏｌｓ）の尿酸およびその類縁体の等モルの用量（ｓＵＡ４−２，６，８トリチオ尿酸、１２．９ｍｇ／ｋｇ；ｍＵＡ２−１，７ジメチル尿酸、１１．７ｍｇ／ｋｇ；ｓＵＡ２−６，８ジチオ尿酸、１１．９ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与する。３ヶ月齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに化合物を注射し、１５、３０、６０または１２０分後に安楽死させる（１マウス／時点／化合物）。尿酸類縁体の定量の前に、血液および脳組織を速やかに除去し、ドライアイスで凍結し、−８０℃で維持する。血漿および大脳皮質組織を、１０倍量の０．５Ｍ過塩素酸および１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）中で抽出する。抽出物中の尿酸類縁体のレベルを流速１ｍｌ／ｍｉｎおよびＵＶダイオードアレイ検出での、２５ｃｍ ＲＰ １８カラム、２５ｍＭ Ｈ２ＰＯ４緩衝剤（ｐＨ＝４．６）を用いるＨＰＬＣ法によって測定する。
【００５３】
ｍＵＡ２、ｓＵＡ２またはｓＵＡ４を静脈内投与したマウスを、増大する時点（１５、３０、６０および１２０分）で安楽死させて、血漿および脳組織中の化合物のレベルを測定する。３つの全ての類縁体（ｍＵＡ２、ｓＵＡ２またはｓＵＡ４）は、試験された全ての時点で脳内に検出される。脳組織内のそれらの濃度（０．５〜１μＭ）は、早い時点（１５〜３０分）でおおよそ１０％のプラズマ濃度であるが、上昇し続け、一方、血漿濃度は、１２０分の時点をすぎて次第に減少する。
【００５４】
実施例３
本実施例は、本発明の実施態様におけるシナプトソームの調製方法および抗酸化活性を決定するアッセイを例示する。
先に記載されている方法（Ｂｅｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｐｒｏｔｏｃ．，３，７６−８２（１９９８））を用いて、シナプトソームを２〜３ヶ月齢の成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの大脳皮質から調製し、低温保存する。解凍後、低温保存したシナプトソームをロック緩衝剤で２回洗浄し、１穴当たり２５０μｇのタンパク質濃度で２４穴プレートに蒔く。シナプトソームの基質への付着が可能になってから３０分後、シナプトソームを式（Ｉ）の化合物（１〜１０μＭ）と共に１時間培養し、次いで、新たに調製した５０μＭ Ｆｅ２＋（ＦｅＳＯ４）に４時間曝露する。酸化されたときに蛍光を発するＲＯＳのプローブである１０μＭ ジヒドロローダミン１２３（ＤＨＲ）（Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，６９，２７３−２８４（１９９７））の存在下でのさらなる３０分の培養後、シナプトソームをロック緩衝剤で２回洗浄し、蛍光のレベルを蛍光プレートリーダーを用いて計測する（４８８ｎｍ励起および５１０放出波長）。試験的処理に付された穴の蛍光の値は、未処理の対照穴に対する平均値の百分率として表される。蛍光プローブであるジヒドロローダミンを用いて測定したシナプトソームにおけるＲＯＳのレベルは、尿酸、およびｓＵＡ３を除くすべての式（Ｉ）の化合物によって著しく減少する（図１Ｂ）。ｓＵＡ２、ｓＵＡ４、およびｍＵＡ２で処理された海馬神経は、対照培地の神経細胞と比較して、酸素およびグルコースの欠乏（ＯＧＤ）によって引き起こされる死に対し著しくより抵抗性である（図２）。
【００５５】
実施例４
本実施例は、本発明の実施態様における細胞培地の調製方法および神経保護作用を測定するアッセイを例示する。
ＰＣ１２細胞および初期胚ラット海馬神経の培地の調製および保存方法は、先に記載されている（Ｆｕｒｕｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１７，８１７８−８１８６（１９９７） ａｎｄ Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９，２８７３３−２８７４３（２００４））。細胞を、Ｂ２７サプリメントと共にＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を含む、ポリエチレンイミンでコートされたプラスチック９６穴培養プレートに蒔く。実験を、１０％ウシ胎仔血清（ＰＣ１２細胞）を有する７〜８日経過の培地（海馬神経）またはダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で行う。海馬神経およびＰＣ１２細胞を、それぞれ、実験の７日および３日前に培養する。実験時に、細胞密度は、１穴あたりおよそ１００，０００（ＰＣ１２細胞）および５０，０００（海馬神経）細胞である。実験処理直前に、培地を、ロック緩衝剤で置換する。細胞の生存は、治療の前後に予め印が付けられた顕微鏡視野での生存神経細胞を計数し、次いで生存率を計算することにより定量する。
【００５６】
細胞死は、ＭＰＰ＋またはＦｅ２＋のいずれかへのＰＣ１２細胞の曝露によって引き起こされる。ＭＰＰ＋は、ミトコンドリア複合体Ｉの阻害により神経細胞を殺すパーキンソン病毒素ＭＰＴＰの神経毒性代謝物であるが（Ｄａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，３９，８８９−９０９（２００３））、一方、Ｆｅ２＋は、ヒドロキシルラジカルの産生および膜脂質の過酸化を引き起こす（Ｋｅｌｌｅｒ，Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１８，６８７−６９７（１９９８） ａｎｄ Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，６９，２７３−２８４（１９９７））。０．１ないし１０μＭの濃度の尿酸およびｍＵＡ３は、ＭＰＰ＋およびＦｅ２＋からＰＣ１２細胞を保護した（図３Ａおよび３Ｂ）。尿酸およびｍＵＡ３はまた、主に海馬神経を、Ｆｅ２＋およびグルタミン酸興奮毒性によって引き起こされる死から保護した（図３Ｃおよび３Ｄ）。
【００５７】
実施例５
本実施例は、本発明の実施態様における、マウスおよび局所脳虚血−再潅流モデルを例示する。
３ヶ月齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、持続的に食餌および水を与えて１２時間明所／１２時間暗所サイクルに保つ。マウスを中大脳動脈閉塞−再潅流に付する方法は、先に記載されている（Ａｒｕｍｕｇａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８７，Ｈ２５５５−２５６０（２００４））。マウスを、イソフルオランで麻酔し、正中切開を頸部で行い、左外頸動脈および翼口蓋動脈を分離して、５−０蚕糸で結紮する。内頸動脈（ＩＣＡ）を、小さなクリップを用いて内頸動脈および翼口蓋動脈の分岐点の末梢部位でふさぎ、総頸動脈は、５−０蚕糸で結紮する。外頸動脈を切断し、凝固剤で先を丸めた（blunted）先端（０．２−０．２２ｍｍ）を有する６−０ナイロン単繊維を外頸動脈に挿入する。ＩＣＡのクリップを除去後、ナイロン糸を軽い抵抗が感じられるまで中大脳動脈中に進入させる。ナイロン糸および総頸動脈帯を閉塞後１時間で取り除いて、再潅流を開始する。偽病群において、それらの動脈は視覚化されているが妨げられていない。マウスに、式（Ｉ）の尿酸類縁体またはビークル（ジメチルスルホキシド）のいずれかを、中大脳動脈（ＭＣＡ）閉塞の発現の３０分前または６０分後のいずれかに大腿静脈（２分で１０μｌ注入）に注入することによって投与する。別の一式の実験においては、全てのグループからの麻酔された動物（１群あたり４〜６匹のマウス）をレーザードップラー潅流モニターを用いて脳血流（ＣＢＦ）測定に付す。全ての血流測定を、中大脳動脈により潅流される大脳皮質の領域に位置するプローブを用いて、プラスチックフレームに固定したマウスで実施する。これらの手順は、加齢動物保護および使用委員会に関する国立研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されている。
【００５８】
ｍＵＡ３は、中大脳動脈閉塞の発現の６０分後、２０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈投与した場合、ビークル処理の対照マウスと比較して、脳損傷を著しく減少し、かつ機能転帰を改善する（図４Ａおよび４Ｂ）。梗塞量は、ＵＡ３処理のマウスでは、ビークル処理の対照マウスと比較して４０〜６０％低い。その他のメチル類縁体（ｍＵＡ２）および２つの硫黄類縁体（ｓＵＡ２およびｓＵＡ４）もまた、虚血発現の１時間後に投与した場合、著しく機能転帰を改善し、かつ脳損傷を減少させる（図５Ａおよび５Ｂ）。ビークルと式（Ｉ）の化合物でＭＣＡ閉塞の前、最中または後に処理されたマウスとの間でＣＢＦの著しい相違はなく（データは示さず）、このことは、類縁体の神経保護効果は、脳血管系での作用の結果ではないことを示唆する。
【００５９】
実施例６
本実施例は、本発明の実施態様における神経学的欠損および脳損傷の評価を例示する。
局所脳虚血−再潅流損傷の機能的な結果は、５点の神経学的欠損スコア（０，欠損なし、１，右足を伸ばすことができない、２，右への旋回、３，右へ倒れる、および４，自発歩行不可能）を用いて評価し、さらに盲検法的な方法によって評価する。７２時間再潅流し、マウスを致死量のイソフルオランで殺す。脳を速やかに取り出し、１５分間ＰＢＳ（４℃）中に置いて、２ｍｍの冠状断面を組織カッターを用いて切り出す。脳切片を３７℃で１５分、リン酸緩衝剤中の２％２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロライドで染色する。染色切片を写真撮影し、デジタル化画像を分析に用いる。それぞれの脳切片における梗塞の境界線の輪郭をとり、その領域をＮＩＨ ｉｍａｇｅ ６．１ソフトウェアを用いて測定する。脳腫脹を補正するため、梗塞領域を、脳左半球における無損傷の組織の領域を無処置の反対側の半球の領域から減じることにより決定する。梗塞量は、それぞれの脳のすべての切片についての梗塞領域の総和により算出する。
【００６０】
実施例７
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の化合物を用いた創傷治癒の評価を例示する。
定義した創傷を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて４ ｍｍ Ａｃｃｕｄｅｒｍ ｈｕｍａｎ ｐｕｎｃｈ ｂｉｏｐｓｙ ｋｉｔ（Ａｃｃｕｄｅｒｍ，Ｆｔ Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ，ＦＬ）を用いて作製する。具体的には、マウスの背の緩んだ皮膚を寄せ集め、麻酔下で、一回の穿孔をいずれかの側から行うことにより、下層組織に影響を与えることなく、皮膚のみを貫通する２つの創傷を作製した。創傷直後、創傷を、標準生理食塩水（非処理の対照群としての役割のため）または式（Ｉ）の化合物のいずれかで局所的に処理する。
【００６１】
毎日、創傷をデジタル写真撮影し、創傷領域を写真のコンピューター積分によって決定する。創傷時点（第０日）における創傷領域は、すべての創傷に対して１の相対値に任意に設定する；即ち、その後の創傷領域は、第ｎ日での創傷領域を第０日での創傷領域で割ることにより、相対的創傷領域に変換される。
式（Ｉ）の化合物の単回用量の適用（創傷時点、第０日）は、マウスモデルでの完全な創傷閉鎖の時間を加速する。生理食塩水で処理された対照での１３日超と比較して、６，８−ジチオ尿酸（ｓＵＡ２）で処理された創傷は、平均して創傷後８日で閉鎖した。
【００６２】
本明細書で引用する、刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は、あたかもそれぞれの参考文献が参照として援用されることが個別におよび特別に示され、かつその全体が本明細書に記載されているかのように同程度に本明細書に参考として援用される。
【００６３】
本発明の記載中(特に、以下の特許請求の範囲中)の文脈での、用語「一つの（a）」および「一つの（an）」ならびに「当該（the）」および同様の指示語の使用は、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈される。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」および「含む（containing）」は、別に記さない限り、オープン・エンドな用語(即ち、「含むが、それらに限定されない」ことを意味する) として解釈される。本明細書中での数値の範囲の列挙は、別に本明細書中で示さない限り、単に、範囲内にあるそれぞれの個別の値について個々に言及する簡便な方法としての役を果たすことを意図し、それぞれの個別の値は、あたかもそれが本明細書中で個々に列挙されているかのように、本明細書中に援用される。本明細書中に記載された全ての方法は、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行われ得る。本明細書中で提供される任意のおよび全ての実施例、または例示的言語(例、「のような（such as）」)の使用は、別に言及しない限り、本発明をより明解にすることのみを意図し、本発明の範囲についての制限を課さない。本明細書中のいかなる言語も、本発明の実施に必須であるとして、任意の特許請求されていない要素を示すとして解釈されるべきではない。
【００６４】
本発明の好ましい実施態様は、本明細書中に記載され、本発明を実施するために本発明者に知られた最良の態様を含む。それらの好ましい実施態様のバリエーションは、前述の記載を読めば、当業者に明らかとなり得る。本発明者は、当業者が必要に応じてそのようなバリエーションを用いると予測し、かつ、本発明者は、本発明が具体的に本明細書に記載したのとは別のやり方で実施されることを意図する。それ故、本発明は、適切な法により許容されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙された主題のすべての変更および均等物を含む。さらに、すべての可能なそのバリエーションにおける上記の要素の任意の組み合わせは、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、本発明に包含される。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【技術分野】
【０００１】
関連技術の相互参照
本特許出願は、米国仮特許出願第６０／８３９，８００号（２００６年８月２３日出願）の利益を主張し、これは参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
世界中で罹患および死亡の第２の主な原因である虚血性脳卒中の危険性は、食事や生活様式の変更、および降圧剤の使用により低減され得る（非特許文献１）。しかしながら、脳卒中の発生率は依然として高く、脳細胞への損傷を減少して脳卒中を患った者の機能転帰を改善することができる治療が必要とされている。
【０００３】
脳卒中に起因する神経細胞死に関与する機序としては、代謝障害、酸化的ストレス、グルタミン酸受容体の過活動および細胞内カルシウムの過負荷が挙げられると考えられる（非特許文献２）。スーパーオキシドアニオンラジカル、過酸化水素、ヒドロキシルラジカルおよび一酸化窒素などのいくつかの異なった活性酸素種（reactive oxygen species）（ＲＯＳ）が、脳卒中後の神経細胞中に発生する（非特許文献３および４）。ＲＯＳは、細胞膜、タンパク質および核酸への損傷を増幅するような方法で、それ自身で相互作用し、かつ、触媒金属と共に作用して、結果として細胞損傷および細胞死をもたらす。例えば、過酸化水素は、Ｆｅ２＋と相互作用してヒドロキシルラジカルを発生させ、一方、スーパーオキシドアニオンラジカルは、一酸化窒素と相互作用して過酸化亜硝酸を発生させる。ヒドロキシルラジカルおよび過酸化亜硝酸は、虚血性脳障害に関与する膜脂質過酸化の自己触媒的過程の非常に強力な誘導因子である（非特許文献５〜８）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｉｎｇａｌｌ，Ｔ．，Ｊ．Ｉｎｓｕｒ．Ｍｅｄ．，３６，１４３−１５２（２００４）
【非特許文献２】Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，３，３６１−３７２（２００３）
【非特許文献３】Ｌｉｐｔｏｎ，Ｐ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，７９，１４３１−５６８（１９９９）
【非特許文献４】Ｃｈａｎ，Ｐ．Ｈ．，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．，２１，２−１４（２００１)
【非特許文献５】Ｅｌｉａｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１９，５９１０−５９１８（１９９９）
【非特許文献６】Ｈａｌｌ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．，８，１９５−２０６（１９９７）
【非特許文献７】Ｋｅｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４，１７９−１９１（２００４）
【非特許文献８】Ｓｅｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｇｅｉｎｇ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，３，３４５−３５３（２００４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、ＲＯＳに起因する酸化ストレスの治療方法が依然として必要とされている。本発明は、このような方法を提供する。このおよび他の目的および利点、ならびにさらなる発明の特徴は、本明細書で提供される本発明の記載から明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の要旨
本発明は、神経障害、心血管障害、または創傷などの酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量を投与することを包含する方法を提供する。式（Ｉ）の化合物は、それらの水溶性が尿酸と比較して改善されているので、酸化的ストレス関連疾患の治療において特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１Ａは、尿酸の構造および式（Ｉ）の例示的な化合物を図示する。図１Ｂは、本発明の実施態様において、シナプトソームアッセイを用いて定量化した尿酸および式（Ｉ）の化合物の抗酸化活性を示す。活性酸素種（ＲＯＳ）のレベルを測定し、値は、Ｆｅ２＋で処理した対照シナプトソーム中に存在するＲＯＳの百分率として表される（平均値およびＳＥＭ，ｎ＝４例）。対照値と比較して＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１。
【図２】図２は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が、虚血様症状に対し培養海馬神経を保護することを示す。神経細胞生存を定量し、値は、平均およびＳＥＭである（ｎ＝８〜１０培地）。ビークル／ＯＧＤ培養液と比較して＊ｐ＜０．０５。
【図３】図３は、本発明の実施態様において、尿酸および式（Ｉ）の化合物が酸化的および興奮毒性損傷に対して培養神経細胞を保護することを示す。培養ＰＣ１２細胞は、尿酸（図３Ａ）またはｍＵＡ３（図３Ｂ）で前処理される。培養海馬神経は、尿酸（図３Ｃ）またはｍＵＡ３（図３Ｄ）で前処理される。細胞生存は、定量され、値は、４〜８培養液の平均およびＳＥＭである。０の尿酸またはｍＵＡ３濃度と比較して＊ｐ＜０．０５。
【図４】図４は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が局所虚血性脳卒中のマウスモデルでの機能転帰（例、歩行）を改善し、かつ脳損傷を減弱することを示す。図４Ａにおいて、神経学的機能は、脳卒中後２４、４８および７２時間で採点される。図４Ｂにおいて、梗塞量は、脳卒中後７２時間で定量される。値は、平均およびＳＥＭ（ｎ＝８〜１２匹のマウス）である。偽病と比較して＊ｐ＜０．００１。ビークルと比較して＋ｐ＜０．０１。
【図５】図５は、本発明の実施態様において、式（Ｉ）の化合物が局所虚血性脳卒中のマウスモデルでの機能転帰を改善し、かつ脳損傷を減弱することを示す。図５Ａにおいて、神経学的機能は、脳卒中後２４、４８および７２時間で採点される。図５Ｂにおいて、梗塞量は、脳卒中後７２時間で定量される。値は、平均およびＳＥＭである（ｎ＝８〜１２匹のマウス）。偽病と比較して＊ｐ＜０．００１。ビークルと比較して＋ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
活性酸素種（ＲＯＳ）は、脳卒中、虚血再潅流、関節炎、呼吸困難、心血管疾患（例、心筋梗塞）、発癌（例、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性前骨髄球性白血病、皮膚の扁平上皮細胞癌、および基底細胞癌）、およびパーキンソン病、認知症、ハンチントン病、ホジキン病等の神経系疾患、および創傷の回復遅延のような多くの疾患または状態に関連してきた。本発明は、ＲＯＳから細胞を保護し、かつ機能転帰を改善する化合物を提供する。
【０００９】
即ち、本発明は、酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量、またはその組成物を投与することを包含する方法を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１０】
【化１】
【００１１】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。
【００１２】
酸化的ストレス関連疾患としては、例えば、神経障害、心血管障害、および創傷が挙げられる。心血管障害は、例えば、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、高脂質血症、糖尿病、高血圧症、および虚血性心疾患であり得る。
【００１３】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防の範囲内において、本発明は、神経障害の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物、またはその組成物の有効量を投与することを包含する方法を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１４】
【化２】
【００１５】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれ、ＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。神経障害は、例えば、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、別名、ルー・ゲーリック病）、網膜変性（網膜色素変性症、黄斑変性症、およびアッシャー症候群等）、タウオパシー（アルツハイマー病、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、および前頭側頭葉変性症（ピック病）等）、ならびに認知症（アルツハイマー病、多発性梗塞性認知症（ＭＩＤ）、ダウン症候群に関連する認知症、および後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）認知症等）であり得る。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物にイン・ビボで投与した場合、酸化的および虚血様損傷に対するシナプトソームおよび培養ニューロンの保護に効果的であることが示される濃度で脳に蓄積する。従って、式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物における虚血性脳障害の治療において特に有用である。本発明の虚血性脳障害は、例えば、（ｉ）例えば、心不全、出産合併症（胎児脳）、および大量出血の場合の脳への血液供給不足、（ｉｉ）例えば、大気の酸素供給不足、ＣＯ中毒、窒息、または肺不全／閉塞に起因する血液酸素化不足、並びに（ｉｉｉ）例えば、脳卒中または頭部外傷に起因する脳またはその部位の出血に起因する脳への酸素供給不足に起因し得る。
【００１７】
本発明は、創傷治癒の増進をそれを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量、またはその組成物を投与することを包含する方法をさらに提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【００１８】
【化３】
【００１９】
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない。］である。
【００２０】
創傷治癒の増進としては、式（Ｉ）の化合物の投与の際に、酸化的ストレスを対照と比較して減少することによる創傷治癒過程の促進方法が挙げられるが、これに限定されない。創傷治癒の他の機序もまた意図される。本方法の実施態様において、式（Ｉ）の化合物、またはその組成物は、好ましくは創傷に局所的に投与される。創傷としては、切り傷、擦り傷、染み、潰瘍、および火傷が挙げられる。
【００２１】
本発明の実施態様のいずれかにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ水素またはＣ１−６アルキルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がすべて酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、Ｃ１−６アルキルである）。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素またはメチルであるが、但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がすべて酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、メチルである。本発明の他の実施態様において、１つ、２つ、または３つ全てのＸ１、Ｘ２、およびＸ３は、硫黄である。本発明の方法のいずれかにおいて、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、全て水素であるかまたは全てメチルである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施態様は、
【００２２】
【化４】
【００２３】
である。
【００２４】
式（Ｉ）の種々の基において示す用語「置換された」については、置換され得る基のいずれか一つ（例、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル）が、可能な限り、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシから成る群より独立して選ばれる１ないし１０個の置換基（例、１ないし８個、１ないし６個、１ないし４個、１ないし３個の置換基）を一般的に有しうる。
【００２５】
用語「アルキル」は、好ましくは１ないし３個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖のアルキル置換基を示す。そのような置換基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル等が挙げられる。
【００２６】
本明細書中で用いる用語「アルケニル」は、好ましくは２ないし４個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖のアルケニル置換基を意味する。そのような置換基の例としては、プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、ｓｅｃ−ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、イソペンテニル、ヘキセニル等が挙げられれる。
【００２７】
本明細書中で用いる用語「シクロアルキル」は、３ないし１０個の炭素原子、好ましくは３ないし８個の炭素原子、好ましくは５ないし８個の炭素原子、より好ましくは５ないし６個の炭素原子を有する環状アルキル置換基を意味する。そのような置換基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられれる。
【００２８】
用語「アリール」は、当該分野で一般的に理解されているように、非置換または置換の芳香族炭素環置換基を示し、例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル等のような単環および多環芳香族が挙げられる。アリール置換基は、６ないし３０個の炭素原子、好ましくは６ないし１８個の炭素原子、より好ましくは６ないし１４個の炭素原子、およびさらに好ましくは６ないし１０個の炭素原子を一般的に含む。用語アリールは、ヒュッケル則によれば、平面的でかつ４ｎ＋２のπ電子を包含する環状置換基に当てはまると理解される。
【００２９】
用語「アリールアルキル」は、基−Ｒ−Ａｒ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基であり、かつＡｒは、本明細書に記載のアリール基である）を示す。アリールアルキルの例は、ベンジルである。用語「カルボキシアルキル」は、基−ＲＣＯＯＨ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基である）を示す。用語「ヒドロキシアルキル」は、基−ＲＯＨ（式中、Ｒは、１ないし６個の炭素原子を有するアルキレン基である）を示す。
【００３０】
用語「アルコキシ」は、エーテル酸素に結合した直鎖または分岐鎖のアルキル基を包含する。アルキル基は、本明細書中に記載したものと同様である。そのような置換基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００３１】
本明細書で用いる用語「ハロ」は、例えば、フッ素、臭素、塩素、およびヨウ素のような、ＶＩＩＡ族から選ばれる置換基を意味する。好ましくは、ハロは、臭素または塩素である。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物は、任意の適切な方法によって、例えば、尿酸を出発物質として利用することによって、調製することができる。例えば、式（Ｉ）の化合物上の１つ以上のカルボニル基は、ローソン試薬の使用によってまたは硫化リンとの加熱によって、チオカルボニルへ変換され得る。式（Ｉ）の化合物上の置換基Ｒ１〜Ｒ４は、当該分野で公知の任意の方法によって変更され得る（例、求核置換による）。例えば、式（Ｉ）の化合物上の１つ以上の窒素は、アルキルハライドおよび塩基の存在下でアルキル化され得る。適切な反応および反応パラメーターは、当業者に周知である。例えば、Ｂｅａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，９８６−９９０（１９６２）およびＭａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１９，１１９３−１２０３（２０００）を参照のこと（これらは、本明細書中に参考として援用される）。
【００３３】
本発明の実施態様に用いられている化合物の利点は、それらが増大した水溶性を有することである。式（Ｉ）の化合物の水溶性は、加熱されていない水の中で測定して、一般的に、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（例、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ）である。従って、水溶性は、０．２ないし５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ないし５ｍｇ／ｍｌ、代表的には２〜３ｍｇ／ｍｌである。水溶性は、例えば、細胞膜に浸透する能力およびバイオアベイラビリティを増加させる。水溶性は、温水中で増大され得る。従って、加熱された水の中での式（Ｉ）の化合物の水溶性は、一般的に、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ（例、少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ）である。
【００３４】
哺乳動物は、神経障害または創傷などの酸化的ストレス関連疾患を有するかまたはそのリスクを有する任意の適切な対象であり得る（例、人類、イヌ科動物、ネコ科動物または類人猿）。好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、酸化的ストレス関連疾患が哺乳動物において有害な影響を有する前に、または酸化的ストレス関連疾患（例、虚血性脳障害）の有害な影響の判定直後に投与され、必要に応じて継続的に投与される。
【００３５】
「有効量」は、個体において有意義な利点（例、酸化的ストレス関連疾患の阻害の少なくとも１つの態様の促進、あるいは、特定の酸化的ストレス関連疾患と関係のある他の関連する病状の、治療、治癒、予防、発病の遅延、または改善）を示すために十分な量を意味する。有効量は、個体において所望される生物学的効果、治療される症状、および／または式（Ｉ）の化合物の特定の性質、ならびに個体によって変化してもよい。この点において、式（Ｉ）の化合物の任意の適切な用量が、治療される酸化的ストレス関連疾患のタイプに従って、哺乳動物に投与され得る。創傷治癒の増進に関しては、創傷組織（例、皮膚）を治療するために必要となる式（Ｉ）の化合物の量は、それ自体定まったものではなく、組成物において用いられる任意の添加成分の量およびタイプ、哺乳動物の皮膚のタイプ、ならびに治療される創傷の、重症度、範囲、および性質に依存する。
【００３６】
「有効量」の決定において考慮される種々の一般的な考慮事項は、当業者に公知であり、例えば、Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｏｏｄｍａｎ Ａｎｄ ＧｉｌｍａｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ ｅｄ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９９０、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０（それぞれ参考として本明細書に援用される）に記載される。式（Ｉ）の化合物の用量は、望ましくは、哺乳動物の体重１キログラム（ｋｇ）当たり約０．１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）ないし約４００ｍｇ／ｋｇ（例、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、または約３００ｍｇ／ｋｇ）を含む。その他の具体的態様において、式（Ｉ）の化合物の用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇないし約３００ｍｇ／ｋｇ（例、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、または約２００ｍｇ／ｋｇ）、約１０ｍｇ／ｋｇないし約２００ｍｇ／ｋｇ（例、約２５ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、または約１５０ｍｇ／ｋｇ）、または約５０ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ（例、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、または約９０ｍｇ／ｋｇ）を含む。
【００３７】
本発明の方法は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および医薬上許容され得る担体を含む医薬組成物を投与することによっても実施され得る。組成物は、アジュバントおよび他の抗酸化物質のような、他の活性薬剤をさらに含み得る。抗酸化物質は、例えば、ビタミン類（例、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＡ、および他のレチノイド）、グルタチオン、スーパーオキシド・ジスムターゼ模倣薬、窒素酸化物、およびベータカロテンであり得る。
【００３８】
任意の適切な医薬上許容され得る担体は、本発明の範囲内で用いられ得、かかる担体は、当該分野で周知である。例えば、担体は、水性または非水性の溶液、緩衝剤および塩を含む液体、滅菌粉末、顆粒、および錠剤、半透過性マトリックス、非経口ビークル、または静脈内ビークルを含む。担体の選択は、、医薬組成物が投与される個々の部位および医薬組成物を投与するために用いられる個々の方法によって、ある程度決定されるであろう。
【００３９】
適切な製剤としては、水性および非水性溶液、抗酸化物質、緩衝剤、静菌剤、および当該製剤を意図する受容者の血液または他の体液と等張にする溶質を含み得る滅菌等張液、、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および防腐剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。一つの具体的態様において、医薬上許容され得る担体は、緩衝剤および塩を包含する液体である。製剤は、アンプルおよびバイアルのような単位用量または複数回用量を封入した容器中に存在し得、使用直前に、例えば、水のような滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存され得る。即時溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。
【００４０】
さらなる担体としては、活性薬剤を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスであって、当該マトリックスが成形品（例、フィルム、リポソーム、または微粒子）の形状である徐放性製剤が挙げられる。
【００４１】
医薬組成物としては、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、防腐剤、界面活性剤等が挙げられ得る。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、局所または全身治療のいずれが所望されるか、および治療される範囲に応じて、任意の適切な投与経路のために製剤され得る。望ましくは、医薬組成物は、静脈内、腹腔内、動脈内、口内、皮下、または筋肉内注射のような非経口投与用に製剤される。注射物質は、液体溶液または懸濁液、注射前の液体中の懸濁液に適した固形として、あるいは乳濁液としてのいずれかで、従来の形式で調製され得る。さらに、非経口投与は、一定の用量が保たれるような持続性放出または徐放性放出のシステムの調製を伴い得る。非経口投与用の製剤としては、滅菌の水性または非水性溶液、懸濁液、および乳濁液が挙げられる。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルが挙げられる。水性担体としては、水、生理食塩水および緩衝化媒体などのアルコール性／水性の溶液、乳濁液または懸濁液が挙げられる。非経口ビークルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル、または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビークルとしては、流動物および栄養補給物、電解質補給物（例えば、リンゲルデキストロースに基づいたもの）等が挙げられる。防腐剤および他の添加物もまた存在し得る（例えば、抗菌剤、抗酸化物質、キレート剤、および不活性ガス等）。
【００４３】
医薬組成物は、経口でも投与され得る。経口組成物は、粉末または顆粒、水または非水性媒体中の懸濁液または溶液、カプセル、サシェ剤、あるいは錠剤の製剤の状態であり得る。増粘剤、香料、賦形剤、乳化剤、分散剤、または結合剤が望ましくあり得る。
【００４４】
直腸投与に適した製剤は、例えば、ココアバターまたはサリチル酸塩を含む適切な基剤を有する坐薬として提供され得る。膣内投与に適した製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡、またはスプレー処方物として提供され得る。同様に、活性成分は、コンドーム上のコーティングとして潤滑剤と組み合わされ得る。実際、好ましくは、活性成分は、コンドーム、ペッサリー、子宮頸管キャップ、膣リング、およびスポンジなどの任意の避妊具に塗布されるが、これらに限定されない。
【００４５】
適切な担体およびそれらの製剤は、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ ｅｄ．），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）にさらに記載されている。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物またはその組成物は、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸のような無機酸、並びに、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グルコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸のような有機酸との反応によって形成される医薬上許容され得る酸付加塩として投与される可能性があり得る。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物を含む化合物または医薬組成物は、スポンジ、生体適合性網、機械的リザーバー、または機械的インプラントのような、式（Ｉ）の化合物の制御されたまたは持続性の放出を可能にするデバイス中または上で投与され得る。植え込み可能なデバイス（例、高分子組成物から成る機械的リザーバーインプラント（implant）またはデバイス）のような、インプラント（例、米国特許５，４４３，５０５参照）、デバイス（例、米国特許４，８６３，４５７参照）は、活性薬剤の投与に特に有用である。本発明の方法に係る医薬組成物はまた、例えば、ゲル泡、ヒアルロン酸、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、ビス−２−ヒドロキシエチル−テレフタラート（ＢＨＥＴ）のような、ポリホスホエステル、および／またはポリ乳酸−グリコール酸を含む徐放性製剤（例、米国特許５，３７８，４７５参照）の製剤の形態でも投与され得る。もちろん、化合物または医薬組成物の投与は、目的の組織に活性薬剤を効率的に送達する任意の経路によって成し得る。
【実施例】
【００４８】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものであるが、もちろん、その範囲を限定するいかなるようにも解釈されるべきではない。
【００４９】
実施例１
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の尿酸類縁体の合成を例示する。
市販で入手可能な誘導体は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手する。尿酸のメチル誘導体およびサルファー誘導体の合成に用いる方法は、以前に記載したものと同様であり（Ｂｅａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，９８６−９９０（１９６２）ａｎｄ Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１９，１１９３−１２０３（２０００））、構造は、１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）および紫外（ＵＶ）スペクトル分析によって確認する。尿酸類縁体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりアッセイし、９７％を超える純度であると判明する。冷水中の尿酸および式（Ｉ）の化合物の溶解度（ｍｇ／ｍｌ）を測定し、表１中に記載する。
【００５０】
【表１】
【００５１】
従って、式（Ｉ）の化合物の水溶性は、尿酸のそれより１０ないし３０倍大きい。
【００５２】
実施例２
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の化合物の薬物動態を決定する方法を例示する。
マウスに対照化合物として１０ｍｇ／ｋｇ（５．９５ｍｍｏｌｓ）の尿酸およびその類縁体の等モルの用量（ｓＵＡ４−２，６，８トリチオ尿酸、１２．９ｍｇ／ｋｇ；ｍＵＡ２−１，７ジメチル尿酸、１１．７ｍｇ／ｋｇ；ｓＵＡ２−６，８ジチオ尿酸、１１．９ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与する。３ヶ月齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに化合物を注射し、１５、３０、６０または１２０分後に安楽死させる（１マウス／時点／化合物）。尿酸類縁体の定量の前に、血液および脳組織を速やかに除去し、ドライアイスで凍結し、−８０℃で維持する。血漿および大脳皮質組織を、１０倍量の０．５Ｍ過塩素酸および１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）中で抽出する。抽出物中の尿酸類縁体のレベルを流速１ｍｌ／ｍｉｎおよびＵＶダイオードアレイ検出での、２５ｃｍ ＲＰ １８カラム、２５ｍＭ Ｈ２ＰＯ４緩衝剤（ｐＨ＝４．６）を用いるＨＰＬＣ法によって測定する。
【００５３】
ｍＵＡ２、ｓＵＡ２またはｓＵＡ４を静脈内投与したマウスを、増大する時点（１５、３０、６０および１２０分）で安楽死させて、血漿および脳組織中の化合物のレベルを測定する。３つの全ての類縁体（ｍＵＡ２、ｓＵＡ２またはｓＵＡ４）は、試験された全ての時点で脳内に検出される。脳組織内のそれらの濃度（０．５〜１μＭ）は、早い時点（１５〜３０分）でおおよそ１０％のプラズマ濃度であるが、上昇し続け、一方、血漿濃度は、１２０分の時点をすぎて次第に減少する。
【００５４】
実施例３
本実施例は、本発明の実施態様におけるシナプトソームの調製方法および抗酸化活性を決定するアッセイを例示する。
先に記載されている方法（Ｂｅｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｐｒｏｔｏｃ．，３，７６−８２（１９９８））を用いて、シナプトソームを２〜３ヶ月齢の成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの大脳皮質から調製し、低温保存する。解凍後、低温保存したシナプトソームをロック緩衝剤で２回洗浄し、１穴当たり２５０μｇのタンパク質濃度で２４穴プレートに蒔く。シナプトソームの基質への付着が可能になってから３０分後、シナプトソームを式（Ｉ）の化合物（１〜１０μＭ）と共に１時間培養し、次いで、新たに調製した５０μＭ Ｆｅ２＋（ＦｅＳＯ４）に４時間曝露する。酸化されたときに蛍光を発するＲＯＳのプローブである１０μＭ ジヒドロローダミン１２３（ＤＨＲ）（Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，６９，２７３−２８４（１９９７））の存在下でのさらなる３０分の培養後、シナプトソームをロック緩衝剤で２回洗浄し、蛍光のレベルを蛍光プレートリーダーを用いて計測する（４８８ｎｍ励起および５１０放出波長）。試験的処理に付された穴の蛍光の値は、未処理の対照穴に対する平均値の百分率として表される。蛍光プローブであるジヒドロローダミンを用いて測定したシナプトソームにおけるＲＯＳのレベルは、尿酸、およびｓＵＡ３を除くすべての式（Ｉ）の化合物によって著しく減少する（図１Ｂ）。ｓＵＡ２、ｓＵＡ４、およびｍＵＡ２で処理された海馬神経は、対照培地の神経細胞と比較して、酸素およびグルコースの欠乏（ＯＧＤ）によって引き起こされる死に対し著しくより抵抗性である（図２）。
【００５５】
実施例４
本実施例は、本発明の実施態様における細胞培地の調製方法および神経保護作用を測定するアッセイを例示する。
ＰＣ１２細胞および初期胚ラット海馬神経の培地の調製および保存方法は、先に記載されている（Ｆｕｒｕｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１７，８１７８−８１８６（１９９７） ａｎｄ Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９，２８７３３−２８７４３（２００４））。細胞を、Ｂ２７サプリメントと共にＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を含む、ポリエチレンイミンでコートされたプラスチック９６穴培養プレートに蒔く。実験を、１０％ウシ胎仔血清（ＰＣ１２細胞）を有する７〜８日経過の培地（海馬神経）またはダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で行う。海馬神経およびＰＣ１２細胞を、それぞれ、実験の７日および３日前に培養する。実験時に、細胞密度は、１穴あたりおよそ１００，０００（ＰＣ１２細胞）および５０，０００（海馬神経）細胞である。実験処理直前に、培地を、ロック緩衝剤で置換する。細胞の生存は、治療の前後に予め印が付けられた顕微鏡視野での生存神経細胞を計数し、次いで生存率を計算することにより定量する。
【００５６】
細胞死は、ＭＰＰ＋またはＦｅ２＋のいずれかへのＰＣ１２細胞の曝露によって引き起こされる。ＭＰＰ＋は、ミトコンドリア複合体Ｉの阻害により神経細胞を殺すパーキンソン病毒素ＭＰＴＰの神経毒性代謝物であるが（Ｄａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，３９，８８９−９０９（２００３））、一方、Ｆｅ２＋は、ヒドロキシルラジカルの産生および膜脂質の過酸化を引き起こす（Ｋｅｌｌｅｒ，Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１８，６８７−６９７（１９９８） ａｎｄ Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，６９，２７３−２８４（１９９７））。０．１ないし１０μＭの濃度の尿酸およびｍＵＡ３は、ＭＰＰ＋およびＦｅ２＋からＰＣ１２細胞を保護した（図３Ａおよび３Ｂ）。尿酸およびｍＵＡ３はまた、主に海馬神経を、Ｆｅ２＋およびグルタミン酸興奮毒性によって引き起こされる死から保護した（図３Ｃおよび３Ｄ）。
【００５７】
実施例５
本実施例は、本発明の実施態様における、マウスおよび局所脳虚血−再潅流モデルを例示する。
３ヶ月齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、持続的に食餌および水を与えて１２時間明所／１２時間暗所サイクルに保つ。マウスを中大脳動脈閉塞−再潅流に付する方法は、先に記載されている（Ａｒｕｍｕｇａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８７，Ｈ２５５５−２５６０（２００４））。マウスを、イソフルオランで麻酔し、正中切開を頸部で行い、左外頸動脈および翼口蓋動脈を分離して、５−０蚕糸で結紮する。内頸動脈（ＩＣＡ）を、小さなクリップを用いて内頸動脈および翼口蓋動脈の分岐点の末梢部位でふさぎ、総頸動脈は、５−０蚕糸で結紮する。外頸動脈を切断し、凝固剤で先を丸めた（blunted）先端（０．２−０．２２ｍｍ）を有する６−０ナイロン単繊維を外頸動脈に挿入する。ＩＣＡのクリップを除去後、ナイロン糸を軽い抵抗が感じられるまで中大脳動脈中に進入させる。ナイロン糸および総頸動脈帯を閉塞後１時間で取り除いて、再潅流を開始する。偽病群において、それらの動脈は視覚化されているが妨げられていない。マウスに、式（Ｉ）の尿酸類縁体またはビークル（ジメチルスルホキシド）のいずれかを、中大脳動脈（ＭＣＡ）閉塞の発現の３０分前または６０分後のいずれかに大腿静脈（２分で１０μｌ注入）に注入することによって投与する。別の一式の実験においては、全てのグループからの麻酔された動物（１群あたり４〜６匹のマウス）をレーザードップラー潅流モニターを用いて脳血流（ＣＢＦ）測定に付す。全ての血流測定を、中大脳動脈により潅流される大脳皮質の領域に位置するプローブを用いて、プラスチックフレームに固定したマウスで実施する。これらの手順は、加齢動物保護および使用委員会に関する国立研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されている。
【００５８】
ｍＵＡ３は、中大脳動脈閉塞の発現の６０分後、２０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈投与した場合、ビークル処理の対照マウスと比較して、脳損傷を著しく減少し、かつ機能転帰を改善する（図４Ａおよび４Ｂ）。梗塞量は、ＵＡ３処理のマウスでは、ビークル処理の対照マウスと比較して４０〜６０％低い。その他のメチル類縁体（ｍＵＡ２）および２つの硫黄類縁体（ｓＵＡ２およびｓＵＡ４）もまた、虚血発現の１時間後に投与した場合、著しく機能転帰を改善し、かつ脳損傷を減少させる（図５Ａおよび５Ｂ）。ビークルと式（Ｉ）の化合物でＭＣＡ閉塞の前、最中または後に処理されたマウスとの間でＣＢＦの著しい相違はなく（データは示さず）、このことは、類縁体の神経保護効果は、脳血管系での作用の結果ではないことを示唆する。
【００５９】
実施例６
本実施例は、本発明の実施態様における神経学的欠損および脳損傷の評価を例示する。
局所脳虚血−再潅流損傷の機能的な結果は、５点の神経学的欠損スコア（０，欠損なし、１，右足を伸ばすことができない、２，右への旋回、３，右へ倒れる、および４，自発歩行不可能）を用いて評価し、さらに盲検法的な方法によって評価する。７２時間再潅流し、マウスを致死量のイソフルオランで殺す。脳を速やかに取り出し、１５分間ＰＢＳ（４℃）中に置いて、２ｍｍの冠状断面を組織カッターを用いて切り出す。脳切片を３７℃で１５分、リン酸緩衝剤中の２％２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロライドで染色する。染色切片を写真撮影し、デジタル化画像を分析に用いる。それぞれの脳切片における梗塞の境界線の輪郭をとり、その領域をＮＩＨ ｉｍａｇｅ ６．１ソフトウェアを用いて測定する。脳腫脹を補正するため、梗塞領域を、脳左半球における無損傷の組織の領域を無処置の反対側の半球の領域から減じることにより決定する。梗塞量は、それぞれの脳のすべての切片についての梗塞領域の総和により算出する。
【００６０】
実施例７
本実施例は、本発明の実施態様における式（Ｉ）の化合物を用いた創傷治癒の評価を例示する。
定義した創傷を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて４ ｍｍ Ａｃｃｕｄｅｒｍ ｈｕｍａｎ ｐｕｎｃｈ ｂｉｏｐｓｙ ｋｉｔ（Ａｃｃｕｄｅｒｍ，Ｆｔ Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ，ＦＬ）を用いて作製する。具体的には、マウスの背の緩んだ皮膚を寄せ集め、麻酔下で、一回の穿孔をいずれかの側から行うことにより、下層組織に影響を与えることなく、皮膚のみを貫通する２つの創傷を作製した。創傷直後、創傷を、標準生理食塩水（非処理の対照群としての役割のため）または式（Ｉ）の化合物のいずれかで局所的に処理する。
【００６１】
毎日、創傷をデジタル写真撮影し、創傷領域を写真のコンピューター積分によって決定する。創傷時点（第０日）における創傷領域は、すべての創傷に対して１の相対値に任意に設定する；即ち、その後の創傷領域は、第ｎ日での創傷領域を第０日での創傷領域で割ることにより、相対的創傷領域に変換される。
式（Ｉ）の化合物の単回用量の適用（創傷時点、第０日）は、マウスモデルでの完全な創傷閉鎖の時間を加速する。生理食塩水で処理された対照での１３日超と比較して、６，８−ジチオ尿酸（ｓＵＡ２）で処理された創傷は、平均して創傷後８日で閉鎖した。
【００６２】
本明細書で引用する、刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は、あたかもそれぞれの参考文献が参照として援用されることが個別におよび特別に示され、かつその全体が本明細書に記載されているかのように同程度に本明細書に参考として援用される。
【００６３】
本発明の記載中(特に、以下の特許請求の範囲中)の文脈での、用語「一つの（a）」および「一つの（an）」ならびに「当該（the）」および同様の指示語の使用は、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈される。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」および「含む（containing）」は、別に記さない限り、オープン・エンドな用語(即ち、「含むが、それらに限定されない」ことを意味する) として解釈される。本明細書中での数値の範囲の列挙は、別に本明細書中で示さない限り、単に、範囲内にあるそれぞれの個別の値について個々に言及する簡便な方法としての役を果たすことを意図し、それぞれの個別の値は、あたかもそれが本明細書中で個々に列挙されているかのように、本明細書中に援用される。本明細書中に記載された全ての方法は、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行われ得る。本明細書中で提供される任意のおよび全ての実施例、または例示的言語(例、「のような（such as）」)の使用は、別に言及しない限り、本発明をより明解にすることのみを意図し、本発明の範囲についての制限を課さない。本明細書中のいかなる言語も、本発明の実施に必須であるとして、任意の特許請求されていない要素を示すとして解釈されるべきではない。
【００６４】
本発明の好ましい実施態様は、本明細書中に記載され、本発明を実施するために本発明者に知られた最良の態様を含む。それらの好ましい実施態様のバリエーションは、前述の記載を読めば、当業者に明らかとなり得る。本発明者は、当業者が必要に応じてそのようなバリエーションを用いると予測し、かつ、本発明者は、本発明が具体的に本明細書に記載したのとは別のやり方で実施されることを意図する。それ故、本発明は、適切な法により許容されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙された主題のすべての変更および均等物を含む。さらに、すべての可能なそのバリエーションにおける上記の要素の任意の組み合わせは、本明細書中に別に示さない限り、または文脈中で明らかに矛盾しない限り、本発明に包含される。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化１】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］
の有効量を投与することを包含する、方法。
【請求項２】
酸化的ストレス関連疾患が神経障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
神経障害が、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜変性、タウオパシー、および認知症から成る群より選ばれる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
神経障害が、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、および認知症から成る群より選ばれる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
認知症が、アルツハイマー病、多発性梗塞性認知症（ＭＩＤ）、ダウン症候群、または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
神経障害が虚血性脳障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
酸化的ストレス関連疾患が創傷である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
神経障害の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化２】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の有効量を投与することを包含する、方法。
【請求項９】
創傷治癒の増進を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化３】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の有効量、またはその組成物を投与することを包含する、方法。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれが、水素またはＣ１−６アルキルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が全て酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、Ｃ１−６アルキルである）、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれが、水素またはメチルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が全て酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、メチルである）、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
１つ、２つ、または３つ全てのＸ１、Ｘ２、およびＸ３が硫黄である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が水素である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がメチルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の化合物が、
【化４】
から成る群より選ばれる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化５】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の使用。
【請求項１】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化１】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］
の有効量を投与することを包含する、方法。
【請求項２】
酸化的ストレス関連疾患が神経障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
神経障害が、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜変性、タウオパシー、および認知症から成る群より選ばれる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
神経障害が、虚血性脳障害、外傷、てんかん、関節炎、呼吸困難、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、および認知症から成る群より選ばれる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
認知症が、アルツハイマー病、多発性梗塞性認知症（ＭＩＤ）、ダウン症候群、または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
神経障害が虚血性脳障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
酸化的ストレス関連疾患が創傷である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
神経障害の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化２】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の有効量を投与することを包含する、方法。
【請求項９】
創傷治癒の増進を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、当該哺乳動物に、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化３】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の有効量、またはその組成物を投与することを包含する、方法。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれが、水素またはＣ１−６アルキルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が全て酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、Ｃ１−６アルキルである）、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれが、水素またはメチルである（但し、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が全て酸素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の少なくとも１つは、メチルである）、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
１つ、２つ、または３つ全てのＸ１、Ｘ２、およびＸ３が硫黄である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が水素である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がメチルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の化合物が、
【化４】
から成る群より選ばれる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
酸化的ストレス関連疾患の治療または予防のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物［ここで、式（Ｉ）の化合物は：
【化５】
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、同一または異なっており、それぞれＯまたはＳであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ６−３０アリール、およびＣ６−３０アリール−Ｃ１−６アルキルである（ここで、当該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基は、ハロ、アミノ、ヒドロキシル、アシル、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシで任意に置換されている）；
但し、式（Ｉ）の化合物は、尿酸ではない）である］の使用。
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【公表番号】特表２０１０−５０１５９０（Ｐ２０１０−５０１５９０Ａ）
【公表日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２５７７４（Ｐ２００９−５２５７７４）
【出願日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７６５９７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２４８９３
【国際公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【出願人】（３０４０４８２９６）アメリカ合衆国 (18)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７６５９７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２４８９３
【国際公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【出願人】（３０４０４８２９６）アメリカ合衆国 (18)
【Ｆターム（参考）】
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