非カノニカル生物学的活性を有する単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼスプライスバリアントポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにそれに関連する組成物および方法が提供される。一局面において、本発明は、非カノニカル活性を有する単離ＨＲＳスプライスバリアントポリペプチド；ＨＲＳスプライスバリアントポリペプチドをエンコードするＨＲＳスプライスバリアントポリヌクレオチド；ＨＲＳポリペプチドを結合する結合剤；ＨＲＳポリペプチドおよびポリヌクレオチドの類似体、変異体およびフラグメント、ならびに上述のいずれかを作製および使用する組成物および方法に関する。本発明のＨＲＳポリペプチドによって、サイトカイン産生の調節、細胞増殖の調節、アポトーシスの調節、細胞シグナル伝達の調節、血管新生の調節、細胞移動の調節、細胞結合の調節、細胞代謝の調節などを行うことが可能である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
非カノニカル生物学的活性を有する単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）スプライスバリアントポリペプチド、またはその活性フラグメントもしくは活性変異体。
【請求項２】
前記ポリペプチドが少なくともＨＲＳのＷＨＥＰドメインを含む、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項３】
前記ポリペプチドが少なくともＨＲＳのアンチコドン結合ドメインを含む、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項４】
前記ポリペプチドが機能性アミノアシル化ドメインを欠失している、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項５】
前記ポリペプチドが少なくともＨＲＳのＷＨＥＰドメインおよびＨＲＳのアンチコドン結合ドメインを含むが、機能性アミノアシル化ドメインを欠失している、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項６】
前記ポリペプチドが配列番号６または配列番号９または配列番号１１で示す配列を含む、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項７】
前記その活性変異体が配列番号６または配列番号９または配列番号１１で示す配列に少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドである、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項８】
前記その活性フラグメントが配列番号６または配列番号９または配列番号１１で示す配列の少なくとも２０隣接アミノ酸残基を含む、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項９】
前記非カノニカル生物学的活性が、ＲＮＡ結合、アミノ酸結合、細胞増殖の調節、細胞移動の調節、細胞分化の調節、アポトーシスまたは細胞死の調節、細胞シグナル伝達の調節、血管新生の調節、細胞結合の調節、細胞代謝の調節、サイトカイン産生または活性の調節、サイトカイン受容体活性の調節、炎症の調節からなる群より選択される、請求項１に記載の単離ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドおよび異種融合パートナーを含む、融合ポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１に記載の少なくとも１つの単離ポリペプチドを含む、ダイマー複合体またはマルチマー複合体。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドをエンコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドが配列番号５、８もしくは１０で示す配列、またはその相補体を含む、請求項１２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単離ポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
配列番号５、８または１０のポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
プライマー、プローブ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドから選択される、請求項１６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１に記載の単離ＨＲＳポリペプチド、該ＨＲＳポリペプチドの細胞結合パートナー、またはそれらの両方に結合特異性を示す結合剤。
【請求項１９】
抗体、その抗原結合フラグメント、ペプチド、ペプチドミメティック、小型分子、およびアプタマーから選択される、請求項１８に記載の結合剤。
【請求項２０】
前記結合剤が前記ＨＲＳポリペプチドの非カノニカル活性と拮抗する、請求項１８に記載の結合剤。
【請求項２１】
前記結合剤が前記ＨＲＳポリペプチドの非カノニカル活性を作動させる、請求項１８に記載の結合剤。
【請求項２２】
試料中のヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）スプライスバリアントのポリヌクレオチド配列の存在またはレベルを決定する方法であって、該方法は、該試料と、配列番号５、８、または１０で示すＨＲＳスプライスバリアントに特異的にハイブリダイズする１つ以上のオリゴヌクレオチドとを接触させる工程と、該試料での該オリゴヌクレオチドの存在または非存在を検出する工程と、これにより該ＨＲＳスプライスバリアントのポリヌクレオチド配列の存在またはレベルを決定する工程とを含む、方法。
【請求項２３】
試料中のヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）スプライスバリアントのポリヌクレオチド配列の存在またはレベルを決定する方法であって、該方法は、該試料と、配列番号５、８、または１０で示すＨＲＳスプライスバリアントを特異的に増幅する少なくとも２つのオリゴヌクレオチドとを接触させる工程と、増幅反応を行う工程と、増幅された生成物の存在または非存在を検出する工程と、これにより該ＨＲＳスプライスバリアントのポリヌクレオチド配列の存在またはレベルを決定する工程とを含む、方法。
【請求項２４】
前記オリゴヌクレオチド（複数可）が、前記ＨＲＳスプライスバリアントに固有であるスプライス部位に特異的にハイブリダイズする、または該スプライス部位を特異的に増幅する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＨＲＳスプライスバリアントの存在またはレベルを対照試料または所定の値と比較する工程を含む、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記試料を対照と区別するために該試料の状態を特徴づけする工程を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記試料および対照が細胞または組織を含み、前記方法が異なる種の細胞もしくは組織、異なる組織もしくは臓器の細胞、異なる細胞発生状態にある細胞、異なる細胞分化状態にある細胞、または健常および罹患細胞の間で区別する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
配列番号６、９、もしくは１１で示すヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）スプライスバリアントポリペプチド、またはその細胞結合パートナーの１つ以上に特異的に結合する化合物を同定する方法であって、該方法は、ａ）該ＨＲＳポリペプチドもしくはその細胞結合パートナーまたはそれらの両方を少なくとも１つの試験化合物と好適な条件下で組合せる工程と、ｂ）該ＨＲＳポリペプチドもしくはその細胞結合パートナーまたはそれらの両方の該試験化合物に対する結合を検出して、これにより該ＨＲＳポリペプチドもしくはその細胞結合パートナーまたはそれらの両方に特異的に結合する化合物を同定する工程とを含む、方法。
【請求項２９】
前記試験化合物がポリペプチドもしくはペプチド、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ペプチドミメティック、または小型分子である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記試験化合物が、前記ＨＲＳポリペプチドまたはその細胞結合パートナーの非カノニカル生物学的活性を作動させる、請求項２８に記載の方法。

【請求項３１】
前記試験化合物が、前記ＨＲＳポリペプチドまたはその細胞結合パートナーの非カノニカル生物学的活性と拮抗する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の方法によって同定される化合物。
【請求項３３】
生理学的に許容され得る担体、ならびに（ｉ）請求項１に記載の単離ポリペプチド；（ｉｉ）請求項１０に記載の融合タンパク質；（ｉｉｉ）請求項１１に記載のダイマー複合体またはマルチマー複合体；（ｉｖ）請求項１２に記載の単離ポリヌクレオチド；（ｖ）請求項１３に記載の発現ベクター；（ｖｉ）請求項１６に記載のオリゴヌクレオチド；（ｖｉｉ）請求項１８に記載の結合剤；および（ｖｉｉｉ）請求項３２に記載の化合物；からなる群より選択される少なくとも１つの構成要素を含む、製薬組成物。
【請求項３４】
細胞または組織と、請求項３３に記載の組成物とを接触させる工程を含む、細胞活性を調節するための方法。
【請求項３５】
前記細胞活性が細胞増殖、細胞移動、細胞分化、アポトーシスまたは細胞死、細胞シグナル伝達、血管新生、細胞結合、代謝、サイトカイン産生または活性、サイトカイン受容体活性、および炎症からなる群より選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞活性がサイトカイン産生または分泌である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３７】
前記サイトカインがＩＬ−２、ＴＮＦ−α、またはＭＩＰ１−αのいずれか１つ以上である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞活性がサイトカイン受容体活性である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記サイトカイン受容体はＣＣＲ１である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞活性が細胞移動である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
単球の細胞移動を減少させる工程を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞活性がトル様受容体（ＴＬＲ）を通じた細胞シグナル伝達である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記細胞が被験体内にある、請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
状態を処置するための方法であって、該方法は、処置を必要とする被験体に請求項３３に記載の製薬組成物を投与することを含み、該状態は、炎症性疾患、自己免疫疾患、新生物性疾患、代謝病、神経疾患、感染、心血管疾患、異常な血管新生に関係する疾患、および異常な細胞生存に関係する疾患からなる群より選択される、状態を処置する方法。
【請求項４５】
前記状態が神経疾患である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記神経疾患が６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）誘発ニューロン死に関係する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記状態が炎症性疾患である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記炎症性疾患が痛風性関節炎または炎症性腸疾患である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
細胞活性のモジュレータを同定するためのスクリーニング方法であって、該方法は：
（ａ）以下：
（ｉ）請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド；請求項１０に記載の融合ポリペプチド；請求項１２に記載のポリヌクレオチド；および請求項１３に記載の発現ベクター；からなる群より選択される構成要素と；
（ｉｉ）該構成要素に結合および／または調節される、結合パートナー、細胞エフェクタおよび／または細胞型と；
（ｉｉｉ）試験化合物と；
を含む反応混合物を形成する工程と；
（ｂ）該構成要素と該結合パートナー、細胞エフェクタおよび／または細胞型との相互作用を検出する工程であって、試験化合物の非存在下での該相互作用に対する該試験化合物の存在下での該相互作用の変化によって、細胞シグナル伝達のモジュレータを同定する、工程と；
を含む、方法。

【図３−１】

【図３−２】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０−１】

【図１０−２】

【図１０−３】

【図１１−１】

【図１１−２】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１４−１】

【図１４−２】

【図１５−１】

【図１５−２】

【図１６Ａ】

【図１６Ｄ】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図１】

【図２】

【図６】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１７】

【図１８】

【公表番号】特表２０１２−５２０６８１（Ｐ２０１２−５２０６８１Ａ）
【公表日】平成２４年９月１０日（２０１２．９．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５００８９９（Ｐ２０１２−５００８９９）
【出願日】平成２２年３月１６日（２０１０．３．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２７５２５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０７８２５
【国際公開日】平成２２年９月２３日（２０１０．９．２３）
【出願人】（５１１２２５５９４）パング　バイオファーマ　リミテッド (1)
【出願人】（５１２１０５２２２）エイティア　ファーマ，　インコーポレイテッド (1)
【Ｆターム（参考）】