Ｎ−（５−クロロ−２−ピリジニル）−２−［［４−［（ジメチルアミノ）イミノメチル］ベンゾイル］アミノ］−５−メトキシ−ベンズアミド、第Ｘａ因子阻害剤の薬学的な塩および多形体
【課題】 新規な第Ｘａ因子阻害剤の薬学的な塩および多形体を提供すること
【解決手段】本発明は、式Ｉの化合物、及び哺乳動物第Ｘａ因子に対して活性を有する酸を含む塩を提供する。本発明は又、以下の式Ｉの化合物を製造する方法も対象とする。一実施形態において、この酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群より選択される。
【解決手段】本発明は、式Ｉの化合物、及び哺乳動物第Ｘａ因子に対して活性を有する酸を含む塩を提供する。本発明は又、以下の式Ｉの化合物を製造する方法も対象とする。一実施形態において、この酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群より選択される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００５年１１月８日に出願された米国仮出願第６０／７３５，２２４号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、第Ｘａ因子阻害剤の新規塩、その多形体、及び第Ｘａ因子阻害剤を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血流遮断、即ち出血の抑制は、外科的手段によって、又は血管収縮及び凝固の生理的特性によって行われる。本発明は具体的に、血液凝固、並びに外傷、炎症、疾患、先天的欠陥、機能不全又は他の破損後に哺乳動物の血液循環の完全性を維持する上で血液凝固が役立つ方法に関する。血小板及び血液凝固は何れも血流遮断の回復及び血栓性疾患に関係しているが、凝固カスケードの特定成分は、血栓症及び血流遮断における主要な事象である血小板凝集及びフィブリン堆積に関与するプロセスの増幅及び促進に主に寄与している。
【０００４】
血餅形成は、フィブリノゲンからフィブリンへの変換に関係しており、フィブリンは網状構造に重合して、外傷後の血流遮断を回復する。類似のプロセスによって、血栓性疾患における血管閉塞が生じる。フィブリノゲンからフィブリンへの変換は、血液凝固カスケードにおける一連の反応の最終生成物であるトロンビンによって触媒される。トロンビンは又、血小板の活性化において主要な役割を担う物質でもあることから、動脈及び静脈血流の両条件下における血栓症に関与している。これらの理由から、トロンビンを効果的に調節することで、血栓症を効果的に調節できる可能性があるとの仮説が立てられている。現在使用されている幾つかの種類の抗凝血剤（即ち、未分別ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパリン様化合物、五糖及びワルファリン）は、直接的又は間接的にトロンビンに作用する。トロンビンの活性の直接的又は間接的な阻害は、臨床開発における種々の抗凝血剤の中心課題にもなっている（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ ａｎｄ Ｑｕｉｎｌａｎ， Ｄｒｕｇｓ １１：１４１１−１４２９， ２００６に概説）。
【０００５】
トロンビンの前駆物質であるプロトロンビンは、第Ｘａ因子によって活性酵素に変換される。組織因子／第ＶＩＩａ因子に媒介される第Ｘａ因子生成の局所活性化は、第ＩＸａ因子／第ＶＩＩＩａ因子複合体によって増幅され、活性化血小板におけるプロトロンビナーゼの集合を生じる。プロトロンビナーゼ複合体の一部である第Ｘａ因子は、血管系における持続的なトロンビン形成に寄与する唯一の酵素である。第Ｘａ因子は、その前駆物質第Ｘ因子の活性化形態であるセリンプロテアーゼであり、カルシウムイオンに結合し、γカルボキシグルタミン酸（ＧＬＡ）を含有し、ビタミンＫに依存する血液凝固因子のメンバーである。フィブリノゲン及びＰＡＲ受容体（プロテアーゼ活性化受容体；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ ３：１８００−１８１４， ２００５）を含めた種々のタンパク質基質に作用するトロンビンとは異なり、第Ｘａ因子は、単一の生理的基質、即ちプロトロンビンを有すると考えられている。第Ｘａ因子は、１つの分子につき１０００個を超える分子のトロンビンを生成することができることから（Ｍａｎｎら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ １：１５０４−１５１４， ２００３）、トロンビンの形成を間接的に阻害する方法となる、第Ｘａ因子の直接的な阻害が効果的な抗凝血法となる場合がある。この主張は、トロンビンの合成におけるプロトロンビナーゼの重要な役割に基づいているほか、プロトロンビナーゼの阻害が全体的な血小板の凝集及び凝固経路に顕著な作用を及ぼすという事実にも基づいている。
【０００６】
第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子又は第Ｘａ因子等の活性化プロテアーゼは、それら自体では低いタンパク質分解活性を有する。しかし、補助因子依存性膜結合複合体に集合すると、これらの触媒効率が有意に増加する。この作用は、第Ｘａ因子で最も顕著であり、効率は１０５倍に増加する（Ｍａｎｎら、Ｂｌｏｏｄ ７６（１）：１−１６，１９９０）。血中に存在する酵素原の濃度が高いこと（プロトロンビンが１．４μＭであるのに対し、第Ｘａ因子は１５０ｎＭ）と、活性化の動態から、抗凝血作用を得るには、トロンビンよりも少ない量の第Ｘａ因子が阻害される必要がある。トロンビンよりも治療標的として第Ｘａ因子の方が優れているという仮説の間接的な証拠は、深部静脈血栓症の予防に関する臨床試験に見出すこともできる。整形外科の４つの試験では、アンチトロンビンＩＩＩ依存性第Ｘａ因子阻害剤であるフォンダパリナックスが、エノキサパリン（トロンビン及び第Ｘａ因子の両方を阻害する低分子量ヘパリン）よりも優れていることが示されている（Ｔｕｒｐｉｅら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６２（１６）：１８３３−１８４０， ２００２）。従って、第Ｘａ因子を選択的に阻害する化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断薬として、又は特定の血栓性疾患における治療的投与に有用な場合があることが示唆されている（例えば、特許文献１を参照）。
【０００７】
吸血生物に由来するポリペプチドとして、並びに大ポリペプチド型阻害剤でない化合物として報告されている第Ｘａ因子阻害剤は幾つかある。他の第Ｘａ因子阻害剤には、アミジノ置換基を有する窒素含有複素環式化合物等の小分子有機化合物が含まれ、前記化合物の２個の官能基は、その活性部位の２つにおいて第Ｘａ因子に結合することができる。例えば、特許文献２には、末端アミジノ（−Ｃ（＝ＣＨ）−ＮＨ２）基を有するピラゾール化合物が記載されており；特許文献３には、直鎖又は分岐鎖アルキレン、−Ｃ（＝Ｏ）−又は−Ｓ（＝Ｏ）２架橋基を介したナフチル基に結合する塩基性基で置換されるベンズイミダゾール化合物が記載されており；特許文献４には、カルボキサミドアルキレンアミノ架橋を介して３−アミジノフェニル基に結合する４−フェニル−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン及び４−フェノキシ−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン基を有する化合物が記載されており；特許文献５には、置換又は非置換スルホンアミド又はカルボキサミド架橋基を介してアミジノナフチル基に結合する４−フェノキシ−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン基を有する化合物が記載されている。
【０００８】
報告されている他の第Ｘａ因子阻害剤には、アミド結合を介して結合するフェニル−アミジノ、フェニル及びハロ−フェニルを含む構造を有する阻害剤が含まれる（特許文献６）。他の第Ｘａ因子阻害剤は、ハロ−フェニルがハロ−ピリジルで置き換えられている（特許文献７及び特許文献８を参照）。特許文献７には、実施例２０６で同定する特定の第Ｘａ因子阻害化合物が開示されており、本化合物は、特許文献８においても実施例２０６として開示され、本明細書において式Ｉの化合物として識別されている。式Ｉの化合物は、以下の構造によって表される。
【０００９】
【化５】
第Ｘａ因子の選択的阻害剤の開発における更なる研究により、本化合物の特定の塩が、遊離塩基化合物自体又は他の塩よりも優れた熱安定度及び加水分解安定度を示し、マレイン酸塩が、測定される最も高い安定度を有するという驚くべき発見が導き出された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第９４／１３６９３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９８／２８２６９号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９２／２１４３７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第９９／１０３１６号パンフレット
【特許文献５】欧州特許第７９８２９５号明細書
【特許文献６】米国特許第６，８４４，３６７号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３７６，５１５号明細書
【特許文献８】米国特許第６，８３５，７３９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、先行技術では解決されなかった課題を解決する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
第Ｘａ因子の選択的阻害剤の開発における更なる研究により、本化合物の特定の塩が、遊離塩基化合物自体又は他の塩よりも優れた熱安定度及び加水分解安定度を示し、マレイン酸塩が、測定される最も高い安定度を有するという驚くべき発見が導き出された。
（要旨）
一実施形態において、本発明は、以下の式Ｉの化合物：
【００１３】
【化６】
並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩を対象とする。
【００１４】
好ましい実施形態において、酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸及びメタンスルホン酸からなる群から選択される。
【００１５】
別の好ましい実施形態において、酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸及びコハク酸からなる群から選択される。一実施形態において、塩は、マレイン酸塩又はプロピオン酸塩である。式Ｉの化合物のマレイン酸塩は、式Ｉの化合物の１つ以上の窒素原子をプロトン化することにより形成できる可能性があると企図される。一実施形態において、式Ｉのアミジノ窒素（＝ＮＨ）は、プロトン化して（＝ＮＨ２＋）塩を形成する。
【００１６】
好ましい一実施形態において、式Ｉの化合物のマレイン酸塩は、以下の式ＩＩにより表される：
【００１７】
【化７】
別の実施形態において、本発明は、結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を提供する。好ましい実施形態において、結晶多形形態は、以下の近似固有ピーク位置の少なくとも４つ以上、好ましくは８つを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す：４．９、９．７、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２６．３、２６．８度２θ。更に別の実施形態において、粉末Ｘ線回折パターンは、以下の近似固有ピーク位置を有する：４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θ。本発明は、近似固有ピークが、約±０．２度２θまでの偏差を有することを企図する。更に別の実施形態において、粉末Ｘ線回折パターンは、図１に示す粉末Ｘ線回折パターンに近似している。他の実施形態において、本発明は、図２に示す示差走査熱量測定パターンに近似した示差走査熱量測定パターンを有する結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を提供する。式ＩＩの塩のこの結晶多形は、臨床試験に好適な本化合物の再現可能形態を与える。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、並びに式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療有効量の塩を含む、薬学的組成物を提供する。別の実施形態において、薬学的組成物は錠剤形態である。更に別の実施形態において、薬学的組成物はカプセル剤形態である。尚別の実施形態において、薬学的組成物はロゼンジ剤形態である。他の実施形態において、薬学的組成物は、輸液、注射又は経皮送達に好適な形態である。
【００１９】
幾つかの実施形態において、本発明は、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療する方法であって、式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療有効量の塩を哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態において、状態は、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択される。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、血液試料の凝固を阻害する方法であって、前記試料を、式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む塩と接触させる手順を含む、方法を提供する。
【００２１】
更なる実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、以下の式ＩＩＩの化合物：
【００２２】
【化８】
又はその塩と、式Ｉの化合物を生成する条件下において、接触させることを含む、方法を提供する。
【００２３】
幾つかの実施形態において、条件は、求核付加条件であり、非極性非プロトン溶媒の使用を含む。その他幾つかの実施形態において、溶媒は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択される。幾つかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物の塩は、ＨＣｌ塩である。
【００２４】
幾つかの実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、前記方法が１０℃未満の温度にて行われる、方法を提供する。
【００２５】
更なる実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、式Ｉを有する化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、方法を提供する。別の実施形態において、式Ｉを有する化合物は、少なくとも６５％の収率で得られる。更に別の実施形態において、式Ｉを有する化合物は、少なくとも７５％の収率で得られる。
【００２６】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物をグラム規模又はキログラム規模で製造する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、式ＩＩの形態（マレイン酸塩）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を示す。図１Ａは測定した回折パターンを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、式ＩＩの形態（マレイン酸塩）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を示す。図１Ｂは計算上の回折パターンを示す。
【図２Ａ】図２Ａはそれぞれ、式ＩＩのマレイン酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）データを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂはそれぞれ、式ＩＩのマレイン酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）データを示す。
【図３】図３は、式ＩＩのマレイン酸塩の重量測定水収着（ＧＶＳ）データを示す。
【図４】図４は、使用した番号付与方式を示す結晶構造データから得た、式ＩＩのマレイン酸塩の分子の２つの図である。非水素原子の異方性原子置換楕円体は、５０％確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示される。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
（発明の詳細な説明）
米国特許第６，３７６，５１５ Ｂ２号で考察する通り、式Ｉの化合物は、強力な第Ｘａ因子阻害剤である。しかし、式Ｉの化合物は、最適な溶解度も結晶度も示さなかった。式Ｉの化合物の酢酸塩の調製物は、優れた結晶度を有することが見出されたが、優れた熱安定度及び加水分解安定度を有していなかった。驚き且つ予期外なことに、特定の塩が優れた結晶度並びに熱安定度及び加水分解安定度を有することが見出されており、これらの塩には、一例として、ＨＣｌ塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フェノキシ酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、樟脳酸塩、グルコン酸塩、燐酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メシレート、フマル酸塩、グリコール酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、ゲンチジン酸塩及びベンゼンスルホン酸塩が含まれる。
【００２９】
具体的に、式ＩＩのマレイン酸塩は、優れた結晶度、熱安定度及び加水分解安定度、並びに純度を示す。本発明の式ＩＩのマレイン酸塩は、哺乳動物における望ましくない血栓症の治療に有用である。
【００３０】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「多形」という用語は、別の結晶形とは異なるが、同じ式を有する物質の結晶形を指す。
【００３１】
「治療」又は「治療する」という用語は、被験体、例えば哺乳動物における疾患又は障害の何らかの治療を意味し、以下の処置を包含する：
・ 疾患又は障害を予防又は保護する、即ち、臨床症候が発現しないようにする；
・ 疾患又は障害を阻害する、即ち、臨床徴候の発現を阻止又は抑制する；及び／又は
・ 疾患又は障害を緩和する、即ち、臨床症候を退行させる。
【００３２】
本明細書で使用される「予防する」という用語は、治療を必要とする罹患体の予防的治療を意味する。予防的治療は、疾患に罹患する危険性を有する被験体に適切な用量の治療薬を提供し、それによって疾患の発症を実質的に防ぐことによって達成することができる。
【００３３】
ヒトの医療においては、「予防」と「抑制」という用語を必ずしも区別できるわけではないことを、当業者は理解するであろう。何故なら、１つ以上の最終誘導事象が認識されず潜在する場合もあれば、或いはその事象の出現からかなり後になるまで被験体において確認されないためである。従って、本明細書で使用される「予防」という用語は、本明細書で定義される「予防」及び「抑制」の両方を包含する「治療」の一要素として意図される。本明細書で使用される「保護」という用語は、「予防」を包含するものとして意図される。
【００３４】
「治療有効量」という用語は、薬学的組成物として一般的に送達される本発明の塩の量であって、治療を必要とする被験体に投与した場合に、本明細書で定義される治療を達成するのに十分な量を指す。治療有効量は、治療中の被験体及び状態、被験体の体重及び年齢、状態の重症度、選択した特定の化合物、準拠する投薬計画、投与時期、投与法等により変動し、これらは全て当業者により容易に決定することができる。
【００３５】
本明細書で使用される「状態」という用語は、本発明の化合物、塩、組成物及び方法が使用されている疾患状態を指す。
【００３６】
本明細書で使用される「血液試料」という用語は、被験体から採取した全血、又は血漿若しくは血清を含めた血液の任意の部分を指す。
【００３７】
ＩＩ．多形化合物
本発明の一実施形態は、式Ｉの化合物を含む塩である。当業者は、式Ｉの遊離塩基の他の塩も本発明に有用であることを理解するであろう。これらの他の塩は、必要な熱安定度及び加水分解安定度を提供する無機及び有機酸を使用して調製すりことができ、このような酸には、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、式ＩＩのマレイン酸塩は、以下の式として表される：
【００３８】
【化９】
本発明の塩、例えば式ＩＩの塩は、幾つかの異なる結晶形をとることができる。多くの結晶形の１つをとる単一の化合物の能力は、多形と呼ばれる。所定化合物の結晶多形は、互いに同様に結合する同じ原子を含有するという点でその化合物のその他何れかの結晶多形と化学的に同じであるが、その結晶形は異なる。同じ化合物の異なる結晶形は、１つ以上の物理的特性、例えば、安定度、溶解度、融点、かさ密度、流動性、生物学的利用能等に影響を及ぼす可能性がある。
【００３９】
多形は、結晶構造（Ｘ線回折パターン）、熱的特性（ＤＳＣ及びＴＧＡにより測定）、安定度、溶解度等によって特性付けられる。Ｘ線回折パターンは、固有ピーク±０．２度２θとして表される。式ＩＩの塩の１つの多形は、図１Ａ及び１Ｂに示すＸ線回折パターン、図２Ａ及び２Ｂに示すＤＳＣ／ＴＧＡデータ、及び図３に示す水収着データ、又はこれらの特徴の２つの組み合わせ、又はこれらの特徴の全てによって特徴付けられる。
【００４０】
ＩＩＩ．薬学的組成物
本発明の薬学的組成物は、望ましくない血栓症を特徴とする状態の予防、又は前記病体に罹患した被験体の治療に使用することができる。本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される担体、並びに式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療許容量の塩から構成される。
【００４１】
Ａ．薬学的に許容される担体
本発明の塩の診断用途は、液剤又は懸濁剤等の配合物を一般的に使用する。
【００４２】
血栓性障害の管理において、本発明の塩は、経口投与用の錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤若しくはエリキシル剤、坐剤、滅菌液剤若しくは懸濁剤、又は注射投与剤等の組成物で使用される場合もあれば、或いは造形物品に組み込まれる場合もある。治療を必要とする被験体（一般的に哺乳動物被験体）には、最適な有効性を与える本発明の化合物の適切な用量を投与することができる。投与量及び投与法は、被験体毎に異なり、治療中の哺乳動物の種類、その性別、体重、食餌、並行薬物治療、全体的な臨床状態、使用する特定の塩、これらの塩が使用される特定用途等の因子、及び医療業界の当業者が認識する他の因子に依存する。
【００４３】
本発明に有用なカプセル剤は、従来の既知のカプセル封入法、例えばＳｔｒｏｕｄ等の米国特許第５，７３５，１０５号に記載の技法を使用して調製することができる。カプセル剤は一般的に、適切な用量の活性剤を含有する薬学的溶液組成物がカプセル内に収まるのに適した直径及び長さを有するほぼ円筒形の中空シェルである。カプセル剤の外側は、可塑剤、水、ゼラチン、化工デンプン、ガム、カラゲナン及びこれらの混合物を含有してよい。当業者は、どの組成物が好適であるかを理解するであろう。
【００４４】
本発明に有用な錠剤は、活性剤に加えて、充填剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、水、タルク、及び当業者が認識する他の成分を含んでもよい。錠剤は、コアが単層で均質であってもよければ、或いは好ましい放出特性を実現するように多層を有してもよい。場合により本発明の錠剤は、腸溶コーティング等によって被覆される場合がある。当業者は、他の賦形剤が本発明の錠剤に有用であることを理解するであろう。
【００４５】
本発明に有用なロゼンジ剤は、適量の活性剤、並びに何れかの充填剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、可溶化剤、甘味剤、着色剤、及び当業者が必要と認識するその他何れかの成分を含有する。本発明のロゼンジ剤は、被験体の口に接触すると、溶解して活性成分を放出するように設計されている。当業者は、他の送達方法が本発明に有用であることを認識するであろう。
【００４６】
本発明の塩の配合物は、所望の純度を有する塩を、生理学的に許容される担体、賦形剤、安定剤等と混合することによって、保存又は投与用に調製され、持続放出性又は徐放性配合物として提供される場合がある。治療用途に許容される担体又は希釈剤は、医薬分野において周知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， （Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．１９８５）に記載されている。このような物質は、使用する投与量及び濃度において受容者に非毒性であり、これには以下の物質が含まれる：緩衝剤（燐酸塩、クエン酸塩、酢酸塩及び他の有機酸塩等）、酸化防止剤（アスコルビン酸等）、低分子量（約１０残基未満）ペプチド（ポリアルギニン）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリジノン等）、アミノ酸（グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸又はアルギニン等）、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物（セルロース又はその誘導体、グルコース、マンノース又はデキストリン等）、キレート化剤（ＥＤＴＡ等）、糖アルコール（マンニトール又はソルビトール等）、対イオン（ナトリウム等）、及び／又は非イオン界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ又はポリエチレングリコール等）。
【００４７】
治療投与に使用する本発明の塩の投与配合物は、滅菌されていなければならない。滅菌は、０．２ミクロン膜等の滅菌膜で濾過するか、又は他の常套法によって容易に行うことができる。配合物は一般的に、凍結乾燥形態で、又は水溶液として保存される。本発明の調製物のｐＨは、一般的に３〜１１であり、より好ましくは５〜９であり、最も好ましくは７〜８である。特定の前記賦形剤、担体又は安定剤を使用することで環状ポリペプチド塩が形成されることを理解されたい。好ましい投与経路は注射であるが、以下のような他の投与方法も考えられる：坐剤、植込みペレット剤又は小型シリンダー錠、エアロゾル剤、経口投与配合物（錠剤、カプセル剤及びロゼンジ剤等）並びに局所配合物（軟膏剤、滴剤及び貼付剤等）のような種々の投与形態を使用した静脈内投与（ボーラス及び／又は輸液）、皮下投与、筋肉内投与、結腸内投与、直腸内投与、経鼻投与又は腹膜内投与。本発明の塩は、生分解性ポリマー又は合成シリコン等の不活性材料、例えば、シラスチック、シリコンゴム又は他の市販されるポリマーを使用する場合があるインプラントのような造形物品に組み込むのが望ましい。
【００４８】
本発明の塩は、小単層ベシクル、大単層ベシクル及び多層ベシクル等のリポソーム送達系の形態で投与される場合もある。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリン等の種々の脂質から形成してもよい。
【００４９】
本発明の塩は、塩分子が結合する抗体、抗体フラグメント、成長因子、ホルモン又は他の標的成分を使用しても送達される場合がある。本発明の塩は、標的にできる薬剤担体等の好適なポリマーにも結合される場合がある。このようなポリマーには、ポリビニルピロリジノン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール、又はパルミトイル残基で置換されるポリエチレンオキシド−ポリリジンが含まれてもよい。更に、本発明の塩は、薬剤の制御放出を達成するのに有用なある種の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロックコポリマーに結合する場合もある。ポリマー及び半透性ポリマーマトリクスは、弁、ステント、管、プロテーゼ等の造形物品に形成される場合がある。
【００５０】
Ｂ．投薬
一般的に、約０．５〜５００ｍｇの本発明の塩又は塩混合物は、容認される製薬慣行によって必要とされる生理学的に許容されるビヒクル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、着色剤、香味剤等と配合される。これらの組成物における活性成分の量は、指示された範囲の好適投与量が得られる量である。
【００５１】
一般的な投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇであることが企図される。本発明の化合物は、１日１回又は数回投与される場合があり、他の投薬計画も有用な場合がある。
【００５２】
ＩＶ．方法
Ａ．望ましくない血栓症を特徴とする疾患状態の予防及び治療
本発明の塩は、哺乳動物における望ましくない血栓症を特徴とする状態を予防又は治療するのに使用でき、これは、式Ｉの化合物の塩、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を治療有効量哺乳動物に投与することによって行われる。前記塩は、単独で使用するか、又は薬学的に許容される賦形剤と共に使用して、望ましくない血栓症を特徴とする状態の発現を予防することができる。予防的治療は、医療及びそれに関連した精神的且つ身体的な犠牲を減らし、並びに罹患体の長期の治療を回避することによって直接的に経費が節減されることから、疾患に罹患する危険性がある被験体に実質的な利益をもたらすことができる。発現を予防できるほど早期に状態が検出されない被験体の場合には、本発明の塩を単独で使用するか、又は薬学的に許容される賦形剤と共に使用して、状態を治療することができる。
【００５３】
本発明の好ましい塩は、好適な安定度を示しつつ、凝固パラメータ、血小板及び血小板機能の古典的な尺度に対して許容される作用、並びに前記塩の使用に関連した出血性合併症の許容されるレベルにおいて、血栓症を阻止する能力により特徴付けられる。望ましくない血栓症を特徴とする状態には、動脈及び静脈血管系に関係する状態が含まれる。
【００５４】
冠動脈血管系における異常な血栓症は、急性心筋梗塞及び不安定狭心症の主要原因である定着したアテローム斑の破裂の特徴であり、更に、血栓溶解療法又は経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）によって生じる閉塞性冠動脈血栓症の特徴でもある。
【００５５】
静脈血管系における異常な血栓症は、下肢又は腹部領域の大手術を受ける被験体において観察される状態の特徴であり、前記被験体は、多くの場合、静脈血管系の血栓症に罹患しており、それによって罹患下肢への血流減少及び肺動脈塞栓の素因を生じている。異常な血栓症は更に、敗血症性ショック、特定のウイルス感染及び癌の際に両血管系で一般的に生じる播種性血管内凝固障害、即ち、凝固因子の急速な消費及び全身性凝固が存在し、それによって微小血管全体にわたり生命にかかわる血栓が生じ、その結果、広汎性器官不全を生じる状態の特徴でもある。
【００５６】
本明細書に開示する通りに選択及び使用される本発明の塩は、以下のような望ましくない血栓症を特徴とする状態の予防又は治療に有用であると考えられる：（ａ） 心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓を含めた任意の血栓媒介急性冠動脈症候群の治療；（ｂ） 塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中及び一過性虚血発作を含めた任意の血栓媒介性脳血管症候群の治療；（ｃ） 自然に発症する、又は悪性疾患、手術若しくは外傷の状況下で発生する深部静脈血栓症及び肺塞栓を含めた、静脈系に発生する任意の血栓性症候群の治療；（ｄ） 播種性血管内凝固（敗血症性ショック又は他の感染、手術、妊娠、外傷及び悪性腫瘍の状況を含み、多器官不全に関連するかを問わない）、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、又はヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患を含めた、任意の凝固障害の治療；（ｅ） 体外循環（例えば、腎臓透析、心肺バイパス又は他の酸素添加手順、プラズマフェレーシス）に関連した血栓性合併症の治療；（ｆ） 器械使用（心臓又は他の血管内カテーテル処置、大動脈内バルーンポンプ、冠動脈ステント又は心臓弁）に関連した血栓性合併症の治療；及び（ｇ） 補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症の治療。
【００５７】
従って、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態の治療法は、哺乳動物に、治療有効量の本発明の塩を投与することを含む。本発明の塩を使用して治療できると考えられる疾患状態には、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症、血栓溶解療法又は経皮経管冠動脈形成術によって生じる閉塞性冠動脈血栓症、静脈血管系における血栓症、播種性血管内凝固障害；凝固因子の急速な消費及び全身性凝固が存在し、それによって微小血管全体にわたり生命にかかわる血栓症を生じ、その結果、広汎性器官不全を生じる状態；出血性脳卒中、腎臓透析、血液酸素添加、及び心臓カテーテル法が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
式Ｉの化合物のマレイン酸塩、又は式ＩＩの塩は、保存全血の凝固の防止や、試験又は保存のための他の生物試料における凝固の防止等に血液凝固の阻害が必要とされる場合にも使用することができる。従って、本発明の凝固阻害剤は、保存全血、及び血漿凝固因子を含有するか又は含有すると考えられ、血液凝固の阻害が所望される任意の媒体に添加するか又は接触させることができる（例えば、哺乳動物の血液を、人工血管、ステント、整形外科プロテーゼ、及び体外循環システムからなる群から選択される材料と接触させる場合）。
【００５９】
ヒト治療に有用であることに加えて、これらの塩は、愛玩動物、外来動物及び家畜（哺乳動物、げっ歯類等を含む）の獣医学治療にも有用であることが企図される。より好ましい動物には、ウマ、イヌ及びネコが含まれる。
【００６０】
Ｂ．投与
治療用液体配合物は一般的に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針による突き刺し可能なストッパーを有する静脈注射液バッグ又はバイアルに入れられる。
【００６１】
治療有効投与量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ法の何れかによって決定される場合がある。本発明の各特定塩において、それぞれの測定を行って、必要とされる最適な投与量を決定する場合がある。治療有効投与量の範囲は、投与経路、治療目的、及び被験体の状態によって左右される。皮下注射針による注射の場合、投与量は体液中に送達されると考えられる。他の投与経路の場合、薬理学に周知の方法によって、吸収効率を各化合物について個々に決定しなければならない。従って、治療者は、最適な治療効果を得るために、必要に応じて投与量を調整し、投与経路を変更することが必要な場合もある。有効投与量レベル、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量レベルは、当業者によって容易に決定される。一般的に、塩の適用は、より低い投与量レベルで開始し、所望の効果が得られるまで投与量レベルを増加させる。
【００６２】
錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤等に組み込まれる場合がある一般的な補助剤は、結合剤（アカシア、コーンスターチ又はゼラチン等）、及び賦形剤（微結晶性セルロース、崩壊剤、例えばコーンスターチ又はアルギン酸等）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、甘味剤（スクロース又はラクトース等）、又は香味剤がある。投与形態がカプセル剤である場合は、前記の物質に加えて、水、生理食塩水又は脂肪油等の液体担体も含有する場合がある。種々の種類の他の物質が、投与単位の物理的形態の被覆剤又は改質剤として使用される場合もある。注射用の滅菌組成物は、従来の製薬慣行に従って配合することができる。例えば、油等のビヒクル又はオレイン酸エチル等の合成脂肪ビヒクル、又はリポソームへの活性化合物の溶解又は懸濁が所望される場合もある。緩衝剤、防腐剤、酸化防止剤等を、容認される医薬慣行に従って組み込んでもよい。
【００６３】
Ｃ．併用療法
本発明の塩は、他の治療薬又は診断薬と組み合わせて使用される場合もある。特定の好ましい実施形態において、一般的に承認されている医療慣行に従ってこれらの状態に一般的に処方される他の化合物（例えば、抗凝固剤、血栓溶解剤、又は他の抗血栓剤であって、血小板凝集阻害剤、組織プロスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヘパリン、アスピリン及びワルファリンを包含する）と共に、本発明の塩を同時投与する場合がある。本発明の塩は、相乗的に作用して、成功した血栓溶解療法後の再閉塞を防止し、及び／又は再灌流の時間を短縮する場合がある。これらの塩は、減少した用量の血栓溶解剤を使用することを可能にし、従って、潜在的な出血性副作用を最小限にする場合がある。本発明の塩は、ｉｎ ｖｉｖｏで、通例は、霊長類、ヒト、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ラット及びマウス等の哺乳動物において、又はｉｎ ｖｉｔｒｏで使用することができる。
【００６４】
Ｄ．化合物の製造
１．式Ｉの化合物のマレイン酸塩
式Ｉの化合物は、種々の無機及び有機酸の塩に変換でき、これには、ＨＣｌ塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フェノキシ酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、樟脳酸塩、グルコン酸塩、燐酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メシレート、フマル酸塩、グリコール酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、ゲンチジン酸塩及びベンゼンスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、他の酸を使用して、本発明に有用な式Ｉの化合物を含む塩を製造できることを理解するであろう。本発明の塩を本発明の他の塩に容易に変換できることも企図される。
【００６５】
塩の熱安定度及び加水分解安定度を評価するために、当業者に既知の試験が行われる。これらの試験は、以下の実施例４に詳細に説明される。
【００６６】
幾つかの方法が、前記の塩の製造に有用であり、当業者に既知である。例えば、式Ｉの化合物と１以上のモル当量の所望の酸とを、塩がそれに不溶性の溶媒又は溶媒混合物中か、又は水のような溶媒中で反応させた後、溶媒を蒸発、蒸留又は凍結乾燥によって除去する。或いは、式Ｉの化合物を、イオン交換樹脂に通して、所望の塩を形成する場合もあれば、或いは生成物の１つの塩形態を、同じ一般的方法によって別の塩に変換する場合がある。
【００６７】
式Ｉの化合物を、以下に示す手順によって調製した。式Ｉの化合物のマレイン酸塩を、その優れた結晶度、熱安定度及び加水分解安定度及び高純度により選択した。
【００６８】
２．配合物Ｉ
式Ｉの化合物は、数種の方法の何れかによって、グラム規模（１ｋｇ未満）又はキログラム規模（１ｋｇ超）で製造できる。１つのグラム規模方法は、実施例２に記載されている。別のグラム規模方法については、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，８４４，３６７ Ｂ１号の実施例２６６に記載されている。
【００６９】
或いは、式Ｉの化合物を、実施例２に記載の手順によって、キログラム規模で製造することもできる。式Ｉのジメチルアミジンの形成は、脱プロトン化アミンによるシアノ基上での求核攻撃を含み、脱プロトン化アミンは第二級アミン及びアルキルリチウムから形成される。本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有するヒドロカルビル基を指す。当業者は、脱プロトン化アミンを他の方法によって形成することができ、式Ｉのアミジン官能性の形成を他の種々の方法によって行うことができることを認識するであろう。
【００７０】
前記の本発明の方法に有用な溶媒は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサン等の非極性非プロトン溶媒である。更に、脱プロトン化アミンの形成は、１０℃未満の温度にて行うことができる。式Ｉの化合物を形成するためのアミンの求核付加も、１０℃未満の温度にて行うことができる。本発明の方法は、他の種々の溶媒、試薬及び反応温度を使用して実施できることを、当業者は認識するであろう。
【００７１】
式Ｉの化合物は、本発明の方法を使用して５０％より高い収率で調製することができる。場合によっては、式Ｉの化合物を６５％より高い収率で調製することもできる。或いは、式Ｉの化合物を７５％より高い収率で調製することもできる。
【００７２】
更に、式Ｉの化合物をグラム規模で製造する本発明の方法は、キログラム規模で使用される手順に類似しているが、３４００％を超える反応の規模の増加がある。更に、幾つかの手順において、減少した過剰試薬量を使用して、増加した収率が得られる。当業者は、式Ｉの化合物を、グラム及びキログラム規模の両方において、他の化学方法によって製造できることを認識するであろう。
【実施例】
【００７３】
特に記載がない限り、本明細書全体にわたって使用される略語は、以下の意味を有する：
Å ＝ オングストローム
Ａ％ ＝ 全面積パーセント
ａｑ．＝ 水性
ｃｍ ＝ センチメートル
ｄ ＝ 二重項
ＤＳＣ ＝ 示差走査熱量測定
ＥＤＴＡ ＝ エチレンジアミンテトラ酢酸
ｅｑ．＝ 当量
ＥｔＯＨ ＝ エタノール
ｇ ＝ グラム
ＨＰＬＣ ＝ 高性能液体クロマトグラフィー
ｈｒ ＝ 時間
Ｈｚ ＝ ヘルツ
ＩＲ ＝ 赤外線
Ｊ ＝ 結合定数
ｋｇ ＝ キログラム
ｋＶ ＝ キロボルト
Ｌ ＝ リットル
ＬＯＤ ＝ 検出限界
Ｍ ＝ モル
ｍ ＝ 多重項
ｍＡ ＝ ミリアンペア
Ｍｅ ＝ メチル
ＭｅＯ ＝ メトキシ
ＭｅＯＨ ＝ メタノール
ｍｇ ＝ ミリグラム
ｍｉｎ．＝ 分
ｍＬ ＝ ミリリットル
ｍｍ ＝ ミリメートル
ＭＴＢＥ ＝ メチルｔ−ブチルエーテル
Ｎ ＝ 規定の
ｎＭ ＝ ナノモル
ＮＭＲ ＝ 核磁気共鳴
ｓ ＝ 一重項
ＴＤＳ ＝ 全溶解固形分
ＴＧＡ ＝ 熱重量分析
ＴＨＦ ＝ テトラヒドロフラン
μＭ ＝ マイクロモル
（実施例１ 式ＩＩの結晶多形塩の調製）
グラム規模の調製
冷却器を取り付けた１５００ｍＬの三つ口丸底フラスコに、式Ｉの遊離塩基化合物（２５ｇ、１当量）を充填し、９：１のＥｔＯＨ／水（５００ｍＬ）を攪拌しながら添加した。得られたスラリーを７０℃に加熱した。マレイン酸（１２．７７ｇ、２当量）を溶液（１００ｍＬ、９：１のＥｔＯＨ／水）として滴下し、５０ｍＬを添加した後に、溶液が顕著により清澄になった。マレイン酸溶液の添加が終了したら、温度を８０℃に５分間維持した。容器を４５℃に緩徐に冷却した後、ＭＴＢＥ ４００ｍＬを添加した。溶液を１２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、真空乾燥させた。式ＩＩの塩を収率４５％（１４．２ｇ）で回収した。
【００７４】
キログラム規模の調製
式Ｉの化合物（２４．６ｋｇ）を７６０Ｌ ＧＬＭＳ反応器（反応器Ａ）に充填した。マレイン酸（１２．７ｋｇ、２．０当量）、エタノール（４４５ｋｇ、１８．１部）及び高純度の水（１４０ｋｇ、５．７部）を添加した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、その温度にて約１時間攪拌した後、ポリッシングフィルターを介して、状態調節した７８０Ｌ ハステロイ反応器（反応器Ｂ）に移した。追加のエタノール（約４５ｋｇ）を使用して、反応器Ａのポンプ及びラインを、ポリッシングフィルターを介して反応器Ｂに向かって濯いだ。濾液を、４５℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、約１４０Ｌ（５．７容量部）が残るまで真空濃縮した。反応器Ｂの含有物を、工程間のＮＭＲのために採取し、この工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩのモル比が２６であることを示した。高純度の水（４９ｋｇ、２．０部）を反応器Ｂに充填し、約１４０Ｌ（５．７容量部）のポット容量が得られるまで真空濃縮を再び行った。工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩの塩のモル比が１４であることを示した。高純度の水（４９ｋｇ、２．０部）を再び充填し、約１４０Ｌのポット容量が得られるまで真空濃縮を再び行った。工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩの塩のモル比が５であることを示した。反応器Ｂの含有物の温後を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、スラリーの形成を目視確認した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）で約２時間攪拌した後、Ｆ−５３濾布を取り付けた３０インチの遠心機で濾過した。高純度の水を２回使用して（それぞれ約３０ｋｇ）、反応器Ｂのポンプ及びラインを、ポリッシングフィルターを介して３０インチの遠心機に向かって濯いだ。濾過ケーキを工程間のＨＰＬＣのために採取し、この工程間のＨＰＬＣは、生成物の純度が９９．１Ａ％であることを示し、最大不純度は０．２６Ａ％であり、従って再結晶は必要なかった。濾過ケーキ（３３．１ｋｇ）を、４０℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、真空乾燥させた。約３０．５時間後、工程間のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０％を示した。乾燥生成物（２６．４ｋｇ）を排出し、２〜８℃にて保存した。最終生成物の収率は、予想より少し高い８５％であった（予想５０〜８０％）。
【００７５】
実施例４に記載の技法を使用して、式ＩＩの塩を特性決定した。式ＩＩの塩のＸ線回折パターンが図１Ａに示され、以下の近似ピーク位置によって特徴付けられる：４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θ。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ、図２Ａの図形を参照）を使用して、１９７〜２０１℃の融点を測定した。更に、熱重量分析（ＴＧＡ、図２Ｂの図形を参照）によって、式ＩＩの塩の１００℃における損失重量０．６２％を測定した。式ＩＩの塩の水収着は可逆性であり、０．１〜３％の水吸収量を示した（図３）。式ＩＩの塩の純度を、ＨＰＬＣによって測定される加水分解アミジン分の存在によって測定し、純度は９９％超であった。
【００７６】
１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．８２ （ｓ， ３Ｈ）， ７．２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０
Ｈｚ）， ７．４２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．０
Ｈｚ）， ７．９５ − ８．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１２ （ｍ）， ８．１８（ｍ， １Ｈ）， ８．４２ （ｓ， １Ｈ）， ９．０ （ｓ， １Ｈ）， １１．０ （ｓ， １Ｈ）， １１．２ （ｓ， １Ｈ）； ＩＲ （ＫＢｒ， ｃｍ−１）：
３３００， １６８５， １６００， １５１５， １３８０， １２７０， １２００， １１００， １０５０， ８８０， ８００， ７１０。
【００７７】
（実施例２ 式Ｉの化合物の調製）
【００７８】
【化１０】
グラム規模の調製
ＴＨＦ（４．６７ｋｇ、１０．３部）中の式Ｆの化合物（４５５ｇ、１．０当量）のスラリーを調製し、１０℃未満に調節した。リチウムジメチルアミドを以下のように調製した：ヘキシルリチウム（２．３Ｎ／ヘキサン、２．４５Ｌ、５．５当量）をジメチルアミン溶液（２Ｎ／ＴＨＦ、２．８Ｌ、５．５当量）に添加し、１０℃未満に維持した。式Ｆの化合物を含有するスラリーに、リチウムジメチルアミド溶液を充填し、１０℃未満のポット温度を維持した。反応の進行を工程間のＨＰＬＣによって監視し、式Ｆの化合物の量が１．０Ａ％未満であることを確認した。脱イオン水（６．６ｋｇ、１４．５１部）中のＮａＨＣＯ３（４９０ｇ、１．１部、５．７当量）及びＮａ２ＣＯ３（４９０ｇ、１．１部、４．５当量）の緩衝液を調製し、この水溶液に前記の反応混合物を移し、５℃未満に維持した。生成物が沈殿し、得られたスラリーを１２時間にわたり２０℃に調節した。この固形物を濾過し、得られた湿ったケーキを脱イオン水３．５ｋｇ（７．７部）で洗浄した。固形物を粗いフリットガラスベンチフィルターで濾過し、冷たい（０〜５℃）無水エタノール（６２８ｇ、１．４部）で前方へ濯いだ。生成物を３０〜３５℃にて乾燥させた。乾燥生成物を４５８ｇ（収率７３％）で得た。
【００７９】
キログラム規模の調製
ＴＨＦ（２５１ｋｇ、８．０部）中の式Ｆの化合物（３１．５ｋｇ、１．０当量）のスラリーを、７８０Ｌ ハステロイ反応器（反応器Ａ）において調製し、０℃（−３〜３℃）に調節した。ＴＨＦ（１６１．０ｋｇ、５．０当量）中の２Ｍ ジメチルアミン、及びＴＨＦ（６３ｋｇ、２部）を、１９００Ｌ ＧＬＭＳ反応器（反応器Ｂ）に充填し、最大攪拌下に０℃（−３〜３℃）に調節した。ヘキシルリチウム（２．３Ｍ、９７．２ｋｇ、４．５当量）を、最大温度１０℃に維持しながら反応器Ｂに緩徐に充填した。ＴＨＦ（３．２ｋｇ）を使用して、ポンプ及びラインを反応器Ｂに向かって濯いだ。反応器Ｂの含有物を、０℃（−３〜３℃）に調節した後、反応器Ａに移し、その間、反応器Ａの温度を１０℃以下に維持した。ＴＨＦ（３１．４ｋｇ、１．０部）を使用して、反応器Ｂのポンプ及びラインを前方へ濯いだ。反応器Ａの含有物を０℃（−３〜３℃）に調節し、ＨＰＬＣによって反応の終了が確認されるまで（１〜２時間）、この温度にて攪拌した。約１時間の攪拌後に、工程間のＨＰＬＣ分析が、０ Ａ％の出発物質残留を示した（工程間の基準：最大１Ａ％）。反応器Ａの含有物を、−５℃（−８〜−３℃）に調節した。水を使用して反応器の工程間の洗浄を行った。前もって調製した２つの水溶液［水（２３６ｋｇ、７．５部）中のＮａＨＣＯ３（３５．０ｋｇ、１．１部）、及び水（２３６ｋｇ、７．５部）中のＮａ２ＣＯ３（３５．０ｋｇ、１．１部）］を反応器Ｂに充填し、−３℃（０〜６℃）に調節した。反応器Ａの含有物を、絶縁ラインを介して反応器Ｂに移し、反応器Ｂの温度を−８℃〜最大５℃に維持した。反応器Ａのポンプ及びラインを、冷たい［−５℃（−８〜−３℃）］ＴＨＦ（３１．４ｋｇ、１．０部）で前方へ濯いだ。反応器Ｂの含有物を、２２℃（１９〜２５℃）に調節し、約３時間攪拌した。スラリー形成を目視確認し、Ｆ−１６濾布を取り付けた３０インチの遠心機で、反応器Ｂの含有物を濾過した。飲料水（６３ｋｇ、２部）を使用して、Ｆ−１６濾布を取り付けた３０インチの遠心機で、反応器Ｂのポンプ及びラインを前方へ濯いだ。湿った濾過ケーキ（６６．５ｋｇ）を反応器Ｂに戻し、飲料水（１００５ｋｇ、３２部）中で２２℃（１９〜２５℃）にて約１時間にわたりスラリー洗浄に付した。生成物を３０インチの遠心機で濾過し（工程間の洗浄及びＦ−５３濾布の取り付け後）、反応器Ｂのライン及びポンプを、飲料水（６３ｋｇ、２部）で前方へ濯いだ。濯ぎ水をＴＤＳによる試験のために採取し、それは０．４６％であることがわかった。反応器Ｂのポンプ、ライン及び湿った濾過ケーキを、冷たい［０℃（−３〜３℃）］エタノール（４４ｋｇ、１．３９部）で更に濯いだ。湿った濾過ケーキを、３５℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて真空乾燥させた。工程間のＬＯＤは、約２４時間の乾燥後に０％であり、生成物（２４．８ｋｇ）を収率７６．７％で排出した。ＨＰＬＣは、９８％純度を示し、脱塩素不純物は１．１４％であった。
【００８０】
（実施例３ 式Ｆの化合物の調製）
手順１．２−ニトロ−Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−５−メトキシ−ベンズアミド（Ｃ）の合成
【００８１】
【化１１】
５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（Ａ）（２５．０ｋｇ、１．０当量）、２−アミノ−５−クロロピリジン（Ｂ）（１６．３ｋｇ、１．０当量）、及びアセトニトリル（８７．５ｋｇ、３．５部）を、３８０Ｌ ＧＬＭＳ反応器に充填した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、無水ピリジン（３０．０ｋｇ、３．０当量）を添加した。ポンプ及びラインをアセトニトリル（２２．５ｋｇ、０．９部）で前方へ濯ぎ、反応器の含有物を１９〜２２℃の温度に調節した。２５℃（２２〜２８℃）の温度を維持しながら、オキシ塩化燐（２３．３ｋｇ、１．２０当量）を、計量型ポンプを介して反応器の含有物に添加した。温度を２５℃（２２〜２８℃）に維持しながら、計量型ポンプ及びラインを、アセトニトリル（１２．５ｋｇ、０．５部）で前方へ濯いだ。約１／３のＰＯＣｌ３の添加後に、反応混合物は一般的に、スラリーから透明溶液になった。添加の終了時に、それは濁った。添加の終了後に、反応混合物を２５℃（２２〜２８℃）で約１時間攪拌し、その際に、ＨＰＬＣ分析は反応の終了を確認した。溶液を１５℃（１２〜１８℃）に冷却し、反応温度を１２〜３０℃に維持しながら、飲料水（１５６．３ｋｇ、６．２５部）を緩徐に充填した。次に、反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、発熱が止むまで約５時間攪拌した。スラリーの形成を目視確認し、反応器の含有物を、Ｆ−１９濾布を取り付けた圧力ヌッツェで濾過した。反応器、ポンプ及びラインを、飲料水で２回（それぞれ６２．５ｋｇ、２．５部）、圧力ヌッツェ上で前方へ洗浄した。濾液はｐＨ値７を有していた。５０℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、生成物（４１．８ｋｇ）を真空乾燥させた。約１２時間後に、工程間のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０．７２％を示した。乾燥生成物（Ｃ）（３４．４ｋｇ）を、ＨＰＬＣにより８８．２％収率及び９９．１％純度で排出した。
【００８２】
手順２．２−アミノ−Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−５−メトキシ−ベンズアミド（Ｄ）の合成
【００８３】
【化１２】
７８０Ｌ ハステロイ反応器に、化合物Ｃ（３３ｋｇ、１．０当量）、５％白金炭素（硫化、０．３３ｋｇ、０．０１０部）及びジクロロメタン（５７８ｋｇ、１７．５部）を充填した。攪拌を開始し、反応器含有物を２２℃（１９〜２５℃）に調節した。反応器を約３０ｐｓｉの水素で加圧し、反応混合物を２８℃（２５〜３１℃）に徐々に加熱した。ＨＰＬＣにより反応が終了するまで、反応器含有物の水素化を約３０ｐｓｉで２８℃（２５〜３１℃；最大３１℃）において行った。１６．５時間後、出発物質の消失（０．４７２ Ａ％）を確認した後に、反応が終了したと考えられた。反応器の含有物を、８インチのスパークラーフィルター中に準備した状態調節したセライトパッド（２０〜５５ｋｇのジクロロメタンで状態調節した０．２〜０．５ｋｇのセライト）を通って循環させて、白金触媒を除去した。反応器及びセライト床を、ジクロロメタンで２回（それぞれ８３ｋｇ、２．５部）前方へ濯いだ。濾液を、５７０Ｌ ＧＬＭＳ反応器に移し、大気圧下に約１３２Ｌ（４容量部）に濃縮した。エタノール（６９ｋｇ、２１．部）を充填し、濃縮を大気圧下に継続して、約９９Ｌ（３容量部）にした。工程間のＮＭＲは、ジクロロメタン含有量が３９％であることを示した。エタノール（６９ｋｇ、２．１部）を再び充填し、再び濃縮を継続して、約９９Ｌ（３容量部）にした。工程間のＮＭＲは、ジクロロメタン含有量が５％であることを示した。次に、反応混合物を３℃（０〜６℃）に調節し、約１時間攪拌し、得られたスラリーを、Ｆ−１９濾布を取り付けたジャケット付き圧力ヌッツェで濾過した。反応器、ポンプ及びラインを、冷たい［３℃（０〜６℃）］エタノール（２６ｋｇ、０．８部）で前方へ濯いだ。湿った濾過ケーキ（３６．６ｋｇ）を、５０℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、４０〜５０℃において真空乾燥させた。１２．５時間後のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０．１％を示した。乾燥生成物（Ｄ）（２６．４ｋｇ）を収率８９．５％で排出した。ＨＰＬＣは、９８．４ Ａ％純度、脱塩素不純物０．０８３％を示した。
【００８４】
手順３．Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−シアノ−ベンゾイル−アミノ）−５−メトキシ−ベンズアミドヒドロクロリド（Ｆ）の合成
【００８５】
【化１３】
７８０Ｌ ハステロイ反応器に、４−シアノベンゾイルクロリド（Ｅ）（１７．２ｋｇ、１．１当量）及びＴＨＦ（９２ｋｇ、３．５部）を充填した。反応器の含有物を２２℃（１９〜２５℃）で、全固形物が溶解するまで攪拌した。得られた溶液を、下部受け器に移し、反応器をＴＨＦ（２６ｋｇ、１部）で前方へ濯いだ。化合物Ｄ（２６．４ｋｇ、１当量）、ＴＨＦ（３９６ｋｇ、１５部）及びピリジン（２．９０ｋｇ、０．４当量）を、清浄反応器に充填した。ポンプ及びラインをＴＨＦ（３４ｋｇ、１．３部）で前方へ濯いだ。計量型ポンプを介して、４−シアノベンゾイルクロリド／ＴＨＦ溶液を反応器に充填し、温度を３０℃以下に維持し、ＴＨＦ（約１０ｋｇ）で前方へ濯いだ。得られた黄色スラリーを、２２℃（１９〜２５℃）で約２時間攪拌した。２時間後に行った工程間のＨＰＬＣは、式Ｄの化合物の含有量０％を示し、反応の終了を示した。Ｆ−１９濾布を取り付けた圧力ヌッツェでスラリーを濾過した。反応器、ポンプ、ライン及び湿ったケーキを、エタノールで３回（それぞれ約１５ｋｇ）濯いだ。湿った濾過ケーキ（６５．４ｋｇ）を排出し、反応器に戻して、エタノール（３１７ｋｇ、１２部）中において２２℃（１９〜２５℃）で約１時間にわたりスラリー洗浄した。スラリーを圧力ヌッツェで濾過し、反応器、ポンプ、ライン及び湿った濾過ケーキを、エタノールで２回（それぞれ約１５ｋｇ）及びＴＨＦで２回（それぞれ約１５ｋｇ）濯いだ。湿った濾過ケーキを、４０℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて真空乾燥させた。１４．５時間乾燥させた後に、ＬＯＤは０．７５％であった。乾燥物質を粉砕して（スクリーン０．１２５インチ）、生成物３１．８ｋｇを得て、これを更に１０．５時間真空乾燥させた。乾燥後のＬＯＤは１．８％であり、生成物（３１．５ｋｇ）を収率７４．８％（予想６０〜９０％）で排出した。ＨＰＬＣは１００％純度を示した。
【００８６】
（実施例４ 塩の選別）
一次選別
３ｍＬの１０％（水性）ＴＨＦ混合物中の遊離塩基２０ｍｇに、エタノール１ｍＬ中の酸１．１当量を添加した。混合物を２時間振とうした後、ｔ−ブチルメチルエーテル２ｍＬを添加して、沈殿を誘発し、更に２時間振とうした。次に、試料を濾過し、乾燥させた後、分析して、これらの純度、結晶度及び安定度を評価した。以下の表１に結果を示し、試験した酸を列記する。
【００８７】
【表１】
＋＋＋：結晶形態、相転移なし、高純度；＋＋：非晶質、幾らかの相転移、中〜高純度；
＋：殆ど又は全く結晶性なし、より低い結晶形態への相転移、低純度；−：沈殿なし。
【００８８】
二次選別
幾つかの塩形態の二次評価を、以下に記載の方法によって行い、結果を、表５及び図１Ａ、１Ｂ、２Ａ、２Ｂ及び３に要約する。
【００８９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
５０位自動試料採取器を取り付けたＴＡ計測器Ｑ１０００によって、ＤＳＣデータを収集した。エネルギー及び温度校正標準はインジウムであった。試料を、１０℃／分の速度で２５〜３５０℃に加熱した。３０ｍＬ／分での窒素パージを、試料上に維持した。特に記載がない限り、１〜３ｍｇの試料を使用し、全ての試料を密閉アルミニウムパンにおいてクリンピングした。
【００９０】
熱重量分析（ＴＧＡ）
ニッケル／アルメルで校正され、１０℃／分の走査速度で操作されるＴＡ計測器Ｑ５００ ＴＧＡによって、ＴＧＡデータを収集した。６０ｍＬ／分での窒素パージを、試料上に維持した。一般的に１０〜２０ｍｇの試料を、前もって風袋計量した白金るつぼに装填した。
【００９１】
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
ＣｕＫα放射線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメータ、自動発散及び受取りスリット、グラファイト二次モノクロメータ及びシンチレーションカウンターを使用してＳｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００回折計によって、Ｘ線粉末回折パターンを収集した。計測器は、認定コランダム標準（ＮＩＳＴ １９７６）を使用して性能検査する。
【００９２】
周囲条件下で試験される試料を、粉末を使用して平板試料として調製した。研磨ゼロバックグラウンド（５１０）シリコンウエハに切り込んだ空洞に、約３５ｍｇの試料を緩く詰める。分析の間に、試料をそれ自身の面内で回転させた。データ収集の詳細は、以下の表２における方法に関して示されている。
【００９３】
【表２】
ＥＶＡ（評価ソフトウェア）を使用してＫα２成分を除去した後に、Ｃｕ Ｋα１（λ＝１．５４０６Å）を使用して回折データを記録し、ＷＩＮ−ＩＮＤＥＸを使用してＩＴＯ法によって粉末図形を表示し、ＷＩＮ−ＭＥＴＲＩＣを使用して原格子定数を精密化した。
【００９４】
単結晶ＸＲＤ（Ｘ線回折）
Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却装置を備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ １Ｋ ＳＭＡＲＴ ＣＣＤ回折計によって、データを収集した。ＳＨＥＬＸＳ又はＳＨＥＬＸＤプログラムを使用して構造を解析し、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ ＳＨＥＬＸＴＬスイートの一部としてのＳＨＥＬＸＬプログラムで精密化した。特に記載がない限り、炭素に結合する水素原子は、幾何学的に配置され、ライディング等方性置換パラメータで精密化することが可能にされた。ヘテロ原子に結合する水素原子は、差分フーリエ合成において位置決定され、等方性置換パラメータで自由に精密化することが可能にされた。
【００９５】
重量測定水蒸気収着（ＧＶＳ）試験
全ての試料を、Ｈｉｄｅｎ ＩＧＡＳｏｒｐ水分収着分析器作動ＣＦＲＳｏｒｐソフトウェアで処理した。試料の大きさは一般的に１０ｍｇであった。水分吸着脱着等温線を以下に概説するように行った（２走査が１全サイクルを与える）。全ての試料を、典型的な室湿度及び温度（４０％ＲＨ、２５℃）で充填／取出した。全ての試料を、ＧＶＳ後のＸＲＰＤ分析によって分析した。標準等温線を、２５℃、０〜９０％ＲＨ範囲おいて１０％ＲＨ間隔で得た。式ＩＩの塩は、優れた水分安定度を示した。
【００９６】
溶解度
これは、溶媒（水）０．２５ｍＬに充分な塩を懸濁させて、塩の親遊離形態の最大最終濃度（１０ｍｇ／ｍＬ以上）を得ることによって測定した。懸濁液を２５℃にて２４時間平衡化した後、ｐＨ検査し、ガラス繊維Ｃ９６ウェルプレートで濾過した。次に、濾液を１０１倍に希釈した。約０．１ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解した標準を基準にして、ＨＰＬＣによって定量化した。種々の容量の、標準、希釈及び非希釈試料を注入した。溶解度を、標準導入におけるピーク最大と同じ保持時間において見出されたピーク面積の積分によって算出した。濾板に充分な固形物が存在する場合、ＸＲＰＤを、相転移、水化物形成、非晶質化、結晶化等について一般的に検査した。
【００９７】
酢酸塩は１０ｍｇ／ｍＬ以上の溶解度を生じ、マレイン酸塩は約２．０５ｍｇ／ｍＬ〜約２．２７ｍｇ／ｍＬの溶解度を生じた。
【００９８】
ｐＫａ測定
これは、Ｄ−ＰＡＳ付属装置を有するＳｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ計測器で行った。測定は、水中でＵＶによって、及びメタノールと水との混合物中で２５℃において電位差測定によって、行った。滴定媒質は、０．１５Ｍ ＫＣｌで調節されたイオン濃度であった。メタノールと水との混合物において見出された数値を、Ｙａｓｕｄａ−Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙ外挿法によって０％補助溶媒に補正した。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェア、Ｖｅｒ．１．０を使用して、データを精密化した。ＡＣＤ ｐＫａ予測ソフトウェア、Ｖｅｒ．８．０８を使用して、ｐＫａ値の予測を行った。式ＩＩの塩のデータを以下の表３に示す。
【００９９】
【表３】
ＬｏｇＰ測定
これは、オクタノール対ＩＳＡ水の３つの比率を使用してＳｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ計測器での電位差滴定によって行って、Ｌｏｇ Ｐ、Ｌｏｇ Ｐｉｏｎ、及びＬｏｇ Ｄ値を得た。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェア、Ｖｅｒ．１．０を使用して、データを精密化した。ＬｏｇＰの予測は、ＡＣＤ Ｖｅｒ．８．０８及びＳｙｒａｃｕｓｅ ＫＮＯＷＷＩＮ Ｖｅｒ．１．６７ソフトウェアを使用して行った。マレイン酸塩のデータを以下の表４に示す。
【０１００】
【表４】
カールフィッシャー水測定
Ｈｙｄｒａｎａｌ Ｃｏｕｌｏｍａｔ ＡＧ試薬及びアルゴンパージを使用して、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＬ３９電量計によって、水分を測定した。水の浸入を防ぐためにスバシールに連接された白金ＴＧＡパン上に秤量された固形物として、試料を容器に導入した。１滴定につき約１０ｍｇの試料を使用し、各分析を二重に行った。
【０１０１】
安定度
試料を５７℃の温度及び７％室湿度に暴露した後に、安定度の測度として、加水分解アミジン分を、ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００）（保持時間３４分）によって測定した。試料溶媒はメタノールであり、０．１％トリフルオロ酢酸の移動相調節剤を使用した。データを３、６及び１０日後に収集し、但し、プロピオン酸塩に関するデータは０、３及び８日目に収集した。結果を表５に、酸加水分解生成物の割合として示し、主ピークのパーセンテージとして表す。全ての他の不純物ピークは、計算において無視した。
【０１０２】
【表５】
式ＩＩの塩に関する結晶データ
全ての実験を、Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ 冷却装置を備えたＢｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ Ｋａｐｐａ ＣＣＤ回折計で行う。構造を一般的に、ＳＩＲ−９７又はＳＨＥＬＸＳ−９７で解析し、ＳＨＥＬＸＬ−９７で精密化する。特に記載がない限り、水素原子は、幾何学的に配置され、等方性置換パラメータで精密化することが可能にされる。以下の表（表６及び表７）には、式ＩＩの塩についての結晶データ及び構造精密化を示す。
【０１０３】
【表６】
【０１０４】
【表７】
以上において前記の発明を、理解を明確にするために、図示及び実施例により幾分詳細に説明してきたが、当業者は、特許請求の範囲内で特定の変更及び改変が行われる場合があることを認識するであろう。更に、本明細書に示した各文献は、それぞれの文献が個別に参考として援用されるのと同様に、全体が参考として援用される。
【０１０５】
好ましい実施形態において、本発明は、例えば、以下を提供する。
（項１）
式Ｉ：
【化１】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩。
（項２）
前記酸が、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸及びメタンスルホン酸からなる群から選択される、上記項１に記載の塩。
（項３）
前記酸が、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸及びコハク酸からなる群から選択される、上記項１に記載の塩。
（項４）
前記酸がマレイン酸である、上記項１に記載の塩。
（項５）
前記酸がプロピオン酸である、上記項１に記載の塩。
（項６）
前記塩が式ＩＩ：
【化２】
により表わされる、上記項４に記載の塩。
（項７）
結晶多形形態を有する、上記項６に記載の塩。
（項８）
４．９、９．７、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２６．３、２６．８度２θから選択される少なくとも４つの近似固有ピーク位置を有する粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項９）
４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θから選択される少なくとも８つの近似固有ピーク位置を有する粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項１０）
図１に示す粉末Ｘ線回折パターンに近似した粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項１１）
図２に示す示差走査熱量測定パターンに近似した示差走査熱量測定を有する、上記項７に記載の塩。
（項１２）
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、及び治療有効量の上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩を含む、薬学的組成物。
（項１３）
錠剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１４）
カプセル剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１５）
ロゼンジ剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１６）
輸液、注射又は経皮送達に好適な形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１７）
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための方法であって、治療有効量の上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩を、該哺乳動物に投与することを含む、方法。
（項１８）
前記状態が、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択されるメンバーである、上記項１７に記載の方法。
（項１９）
血液試料の凝固を阻害するための方法であって、該試料を、上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩と接触させる工程を含む、方法。
（項２０）
式Ｉ：
【化３】
の化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、式ＩＩＩ：
【化４】
の化合物又はその塩と、式Ｉの化合物を形成する条件下において、接触させる工程を含む、方法。
（項２１）
式ＩＩＩの化合物の前記塩がＨＣｌ塩である、上記項２０に記載の方法。
（項２２）
前記条件が、非極性非プロトン溶媒を使用することを含む、上記項２０に記載の方法。
（項２３）
前記溶媒が、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択されるメンバーである、上記項２２に記載の方法。
（項２４）
前記条件が、前記方法を１０℃未満の温度にて行うことを含む、上記項２０に記載の方法。
（項２５）
式Ｉの化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２６）
式Ｉの化合物が少なくとも６５％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２７）
式Ｉの化合物が少なくとも７５％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２８）
式Ｉの化合物がグラム規模又はキログラム規模で調製される、上記項２０に記載の方法。
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００５年１１月８日に出願された米国仮出願第６０／７３５，２２４号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、第Ｘａ因子阻害剤の新規塩、その多形体、及び第Ｘａ因子阻害剤を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血流遮断、即ち出血の抑制は、外科的手段によって、又は血管収縮及び凝固の生理的特性によって行われる。本発明は具体的に、血液凝固、並びに外傷、炎症、疾患、先天的欠陥、機能不全又は他の破損後に哺乳動物の血液循環の完全性を維持する上で血液凝固が役立つ方法に関する。血小板及び血液凝固は何れも血流遮断の回復及び血栓性疾患に関係しているが、凝固カスケードの特定成分は、血栓症及び血流遮断における主要な事象である血小板凝集及びフィブリン堆積に関与するプロセスの増幅及び促進に主に寄与している。
【０００４】
血餅形成は、フィブリノゲンからフィブリンへの変換に関係しており、フィブリンは網状構造に重合して、外傷後の血流遮断を回復する。類似のプロセスによって、血栓性疾患における血管閉塞が生じる。フィブリノゲンからフィブリンへの変換は、血液凝固カスケードにおける一連の反応の最終生成物であるトロンビンによって触媒される。トロンビンは又、血小板の活性化において主要な役割を担う物質でもあることから、動脈及び静脈血流の両条件下における血栓症に関与している。これらの理由から、トロンビンを効果的に調節することで、血栓症を効果的に調節できる可能性があるとの仮説が立てられている。現在使用されている幾つかの種類の抗凝血剤（即ち、未分別ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパリン様化合物、五糖及びワルファリン）は、直接的又は間接的にトロンビンに作用する。トロンビンの活性の直接的又は間接的な阻害は、臨床開発における種々の抗凝血剤の中心課題にもなっている（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ ａｎｄ Ｑｕｉｎｌａｎ， Ｄｒｕｇｓ １１：１４１１−１４２９， ２００６に概説）。
【０００５】
トロンビンの前駆物質であるプロトロンビンは、第Ｘａ因子によって活性酵素に変換される。組織因子／第ＶＩＩａ因子に媒介される第Ｘａ因子生成の局所活性化は、第ＩＸａ因子／第ＶＩＩＩａ因子複合体によって増幅され、活性化血小板におけるプロトロンビナーゼの集合を生じる。プロトロンビナーゼ複合体の一部である第Ｘａ因子は、血管系における持続的なトロンビン形成に寄与する唯一の酵素である。第Ｘａ因子は、その前駆物質第Ｘ因子の活性化形態であるセリンプロテアーゼであり、カルシウムイオンに結合し、γカルボキシグルタミン酸（ＧＬＡ）を含有し、ビタミンＫに依存する血液凝固因子のメンバーである。フィブリノゲン及びＰＡＲ受容体（プロテアーゼ活性化受容体；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ ３：１８００−１８１４， ２００５）を含めた種々のタンパク質基質に作用するトロンビンとは異なり、第Ｘａ因子は、単一の生理的基質、即ちプロトロンビンを有すると考えられている。第Ｘａ因子は、１つの分子につき１０００個を超える分子のトロンビンを生成することができることから（Ｍａｎｎら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ １：１５０４−１５１４， ２００３）、トロンビンの形成を間接的に阻害する方法となる、第Ｘａ因子の直接的な阻害が効果的な抗凝血法となる場合がある。この主張は、トロンビンの合成におけるプロトロンビナーゼの重要な役割に基づいているほか、プロトロンビナーゼの阻害が全体的な血小板の凝集及び凝固経路に顕著な作用を及ぼすという事実にも基づいている。
【０００６】
第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子又は第Ｘａ因子等の活性化プロテアーゼは、それら自体では低いタンパク質分解活性を有する。しかし、補助因子依存性膜結合複合体に集合すると、これらの触媒効率が有意に増加する。この作用は、第Ｘａ因子で最も顕著であり、効率は１０５倍に増加する（Ｍａｎｎら、Ｂｌｏｏｄ ７６（１）：１−１６，１９９０）。血中に存在する酵素原の濃度が高いこと（プロトロンビンが１．４μＭであるのに対し、第Ｘａ因子は１５０ｎＭ）と、活性化の動態から、抗凝血作用を得るには、トロンビンよりも少ない量の第Ｘａ因子が阻害される必要がある。トロンビンよりも治療標的として第Ｘａ因子の方が優れているという仮説の間接的な証拠は、深部静脈血栓症の予防に関する臨床試験に見出すこともできる。整形外科の４つの試験では、アンチトロンビンＩＩＩ依存性第Ｘａ因子阻害剤であるフォンダパリナックスが、エノキサパリン（トロンビン及び第Ｘａ因子の両方を阻害する低分子量ヘパリン）よりも優れていることが示されている（Ｔｕｒｐｉｅら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６２（１６）：１８３３−１８４０， ２００２）。従って、第Ｘａ因子を選択的に阻害する化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断薬として、又は特定の血栓性疾患における治療的投与に有用な場合があることが示唆されている（例えば、特許文献１を参照）。
【０００７】
吸血生物に由来するポリペプチドとして、並びに大ポリペプチド型阻害剤でない化合物として報告されている第Ｘａ因子阻害剤は幾つかある。他の第Ｘａ因子阻害剤には、アミジノ置換基を有する窒素含有複素環式化合物等の小分子有機化合物が含まれ、前記化合物の２個の官能基は、その活性部位の２つにおいて第Ｘａ因子に結合することができる。例えば、特許文献２には、末端アミジノ（−Ｃ（＝ＣＨ）−ＮＨ２）基を有するピラゾール化合物が記載されており；特許文献３には、直鎖又は分岐鎖アルキレン、−Ｃ（＝Ｏ）−又は−Ｓ（＝Ｏ）２架橋基を介したナフチル基に結合する塩基性基で置換されるベンズイミダゾール化合物が記載されており；特許文献４には、カルボキサミドアルキレンアミノ架橋を介して３−アミジノフェニル基に結合する４−フェニル−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン及び４−フェノキシ−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン基を有する化合物が記載されており；特許文献５には、置換又は非置換スルホンアミド又はカルボキサミド架橋基を介してアミジノナフチル基に結合する４−フェノキシ−Ｎ−アルキルアミジノ−ピペリジン基を有する化合物が記載されている。
【０００８】
報告されている他の第Ｘａ因子阻害剤には、アミド結合を介して結合するフェニル−アミジノ、フェニル及びハロ−フェニルを含む構造を有する阻害剤が含まれる（特許文献６）。他の第Ｘａ因子阻害剤は、ハロ−フェニルがハロ−ピリジルで置き換えられている（特許文献７及び特許文献８を参照）。特許文献７には、実施例２０６で同定する特定の第Ｘａ因子阻害化合物が開示されており、本化合物は、特許文献８においても実施例２０６として開示され、本明細書において式Ｉの化合物として識別されている。式Ｉの化合物は、以下の構造によって表される。
【０００９】
【化５】
第Ｘａ因子の選択的阻害剤の開発における更なる研究により、本化合物の特定の塩が、遊離塩基化合物自体又は他の塩よりも優れた熱安定度及び加水分解安定度を示し、マレイン酸塩が、測定される最も高い安定度を有するという驚くべき発見が導き出された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第９４／１３６９３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９８／２８２６９号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９２／２１４３７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第９９／１０３１６号パンフレット
【特許文献５】欧州特許第７９８２９５号明細書
【特許文献６】米国特許第６，８４４，３６７号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３７６，５１５号明細書
【特許文献８】米国特許第６，８３５，７３９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、先行技術では解決されなかった課題を解決する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
第Ｘａ因子の選択的阻害剤の開発における更なる研究により、本化合物の特定の塩が、遊離塩基化合物自体又は他の塩よりも優れた熱安定度及び加水分解安定度を示し、マレイン酸塩が、測定される最も高い安定度を有するという驚くべき発見が導き出された。
（要旨）
一実施形態において、本発明は、以下の式Ｉの化合物：
【００１３】
【化６】
並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩を対象とする。
【００１４】
好ましい実施形態において、酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸及びメタンスルホン酸からなる群から選択される。
【００１５】
別の好ましい実施形態において、酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸及びコハク酸からなる群から選択される。一実施形態において、塩は、マレイン酸塩又はプロピオン酸塩である。式Ｉの化合物のマレイン酸塩は、式Ｉの化合物の１つ以上の窒素原子をプロトン化することにより形成できる可能性があると企図される。一実施形態において、式Ｉのアミジノ窒素（＝ＮＨ）は、プロトン化して（＝ＮＨ２＋）塩を形成する。
【００１６】
好ましい一実施形態において、式Ｉの化合物のマレイン酸塩は、以下の式ＩＩにより表される：
【００１７】
【化７】
別の実施形態において、本発明は、結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を提供する。好ましい実施形態において、結晶多形形態は、以下の近似固有ピーク位置の少なくとも４つ以上、好ましくは８つを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す：４．９、９．７、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２６．３、２６．８度２θ。更に別の実施形態において、粉末Ｘ線回折パターンは、以下の近似固有ピーク位置を有する：４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θ。本発明は、近似固有ピークが、約±０．２度２θまでの偏差を有することを企図する。更に別の実施形態において、粉末Ｘ線回折パターンは、図１に示す粉末Ｘ線回折パターンに近似している。他の実施形態において、本発明は、図２に示す示差走査熱量測定パターンに近似した示差走査熱量測定パターンを有する結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を提供する。式ＩＩの塩のこの結晶多形は、臨床試験に好適な本化合物の再現可能形態を与える。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、並びに式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療有効量の塩を含む、薬学的組成物を提供する。別の実施形態において、薬学的組成物は錠剤形態である。更に別の実施形態において、薬学的組成物はカプセル剤形態である。尚別の実施形態において、薬学的組成物はロゼンジ剤形態である。他の実施形態において、薬学的組成物は、輸液、注射又は経皮送達に好適な形態である。
【００１９】
幾つかの実施形態において、本発明は、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療する方法であって、式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療有効量の塩を哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態において、状態は、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択される。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、血液試料の凝固を阻害する方法であって、前記試料を、式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む塩と接触させる手順を含む、方法を提供する。
【００２１】
更なる実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、以下の式ＩＩＩの化合物：
【００２２】
【化８】
又はその塩と、式Ｉの化合物を生成する条件下において、接触させることを含む、方法を提供する。
【００２３】
幾つかの実施形態において、条件は、求核付加条件であり、非極性非プロトン溶媒の使用を含む。その他幾つかの実施形態において、溶媒は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択される。幾つかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物の塩は、ＨＣｌ塩である。
【００２４】
幾つかの実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、前記方法が１０℃未満の温度にて行われる、方法を提供する。
【００２５】
更なる実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法であって、式Ｉを有する化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、方法を提供する。別の実施形態において、式Ｉを有する化合物は、少なくとも６５％の収率で得られる。更に別の実施形態において、式Ｉを有する化合物は、少なくとも７５％の収率で得られる。
【００２６】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物をグラム規模又はキログラム規模で製造する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、式ＩＩの形態（マレイン酸塩）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を示す。図１Ａは測定した回折パターンを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、式ＩＩの形態（マレイン酸塩）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を示す。図１Ｂは計算上の回折パターンを示す。
【図２Ａ】図２Ａはそれぞれ、式ＩＩのマレイン酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）データを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂはそれぞれ、式ＩＩのマレイン酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）データを示す。
【図３】図３は、式ＩＩのマレイン酸塩の重量測定水収着（ＧＶＳ）データを示す。
【図４】図４は、使用した番号付与方式を示す結晶構造データから得た、式ＩＩのマレイン酸塩の分子の２つの図である。非水素原子の異方性原子置換楕円体は、５０％確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示される。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
（発明の詳細な説明）
米国特許第６，３７６，５１５ Ｂ２号で考察する通り、式Ｉの化合物は、強力な第Ｘａ因子阻害剤である。しかし、式Ｉの化合物は、最適な溶解度も結晶度も示さなかった。式Ｉの化合物の酢酸塩の調製物は、優れた結晶度を有することが見出されたが、優れた熱安定度及び加水分解安定度を有していなかった。驚き且つ予期外なことに、特定の塩が優れた結晶度並びに熱安定度及び加水分解安定度を有することが見出されており、これらの塩には、一例として、ＨＣｌ塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フェノキシ酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、樟脳酸塩、グルコン酸塩、燐酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メシレート、フマル酸塩、グリコール酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、ゲンチジン酸塩及びベンゼンスルホン酸塩が含まれる。
【００２９】
具体的に、式ＩＩのマレイン酸塩は、優れた結晶度、熱安定度及び加水分解安定度、並びに純度を示す。本発明の式ＩＩのマレイン酸塩は、哺乳動物における望ましくない血栓症の治療に有用である。
【００３０】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「多形」という用語は、別の結晶形とは異なるが、同じ式を有する物質の結晶形を指す。
【００３１】
「治療」又は「治療する」という用語は、被験体、例えば哺乳動物における疾患又は障害の何らかの治療を意味し、以下の処置を包含する：
・ 疾患又は障害を予防又は保護する、即ち、臨床症候が発現しないようにする；
・ 疾患又は障害を阻害する、即ち、臨床徴候の発現を阻止又は抑制する；及び／又は
・ 疾患又は障害を緩和する、即ち、臨床症候を退行させる。
【００３２】
本明細書で使用される「予防する」という用語は、治療を必要とする罹患体の予防的治療を意味する。予防的治療は、疾患に罹患する危険性を有する被験体に適切な用量の治療薬を提供し、それによって疾患の発症を実質的に防ぐことによって達成することができる。
【００３３】
ヒトの医療においては、「予防」と「抑制」という用語を必ずしも区別できるわけではないことを、当業者は理解するであろう。何故なら、１つ以上の最終誘導事象が認識されず潜在する場合もあれば、或いはその事象の出現からかなり後になるまで被験体において確認されないためである。従って、本明細書で使用される「予防」という用語は、本明細書で定義される「予防」及び「抑制」の両方を包含する「治療」の一要素として意図される。本明細書で使用される「保護」という用語は、「予防」を包含するものとして意図される。
【００３４】
「治療有効量」という用語は、薬学的組成物として一般的に送達される本発明の塩の量であって、治療を必要とする被験体に投与した場合に、本明細書で定義される治療を達成するのに十分な量を指す。治療有効量は、治療中の被験体及び状態、被験体の体重及び年齢、状態の重症度、選択した特定の化合物、準拠する投薬計画、投与時期、投与法等により変動し、これらは全て当業者により容易に決定することができる。
【００３５】
本明細書で使用される「状態」という用語は、本発明の化合物、塩、組成物及び方法が使用されている疾患状態を指す。
【００３６】
本明細書で使用される「血液試料」という用語は、被験体から採取した全血、又は血漿若しくは血清を含めた血液の任意の部分を指す。
【００３７】
ＩＩ．多形化合物
本発明の一実施形態は、式Ｉの化合物を含む塩である。当業者は、式Ｉの遊離塩基の他の塩も本発明に有用であることを理解するであろう。これらの他の塩は、必要な熱安定度及び加水分解安定度を提供する無機及び有機酸を使用して調製すりことができ、このような酸には、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、式ＩＩのマレイン酸塩は、以下の式として表される：
【００３８】
【化９】
本発明の塩、例えば式ＩＩの塩は、幾つかの異なる結晶形をとることができる。多くの結晶形の１つをとる単一の化合物の能力は、多形と呼ばれる。所定化合物の結晶多形は、互いに同様に結合する同じ原子を含有するという点でその化合物のその他何れかの結晶多形と化学的に同じであるが、その結晶形は異なる。同じ化合物の異なる結晶形は、１つ以上の物理的特性、例えば、安定度、溶解度、融点、かさ密度、流動性、生物学的利用能等に影響を及ぼす可能性がある。
【００３９】
多形は、結晶構造（Ｘ線回折パターン）、熱的特性（ＤＳＣ及びＴＧＡにより測定）、安定度、溶解度等によって特性付けられる。Ｘ線回折パターンは、固有ピーク±０．２度２θとして表される。式ＩＩの塩の１つの多形は、図１Ａ及び１Ｂに示すＸ線回折パターン、図２Ａ及び２Ｂに示すＤＳＣ／ＴＧＡデータ、及び図３に示す水収着データ、又はこれらの特徴の２つの組み合わせ、又はこれらの特徴の全てによって特徴付けられる。
【００４０】
ＩＩＩ．薬学的組成物
本発明の薬学的組成物は、望ましくない血栓症を特徴とする状態の予防、又は前記病体に罹患した被験体の治療に使用することができる。本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される担体、並びに式Ｉの化合物、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を含む治療許容量の塩から構成される。
【００４１】
Ａ．薬学的に許容される担体
本発明の塩の診断用途は、液剤又は懸濁剤等の配合物を一般的に使用する。
【００４２】
血栓性障害の管理において、本発明の塩は、経口投与用の錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤若しくはエリキシル剤、坐剤、滅菌液剤若しくは懸濁剤、又は注射投与剤等の組成物で使用される場合もあれば、或いは造形物品に組み込まれる場合もある。治療を必要とする被験体（一般的に哺乳動物被験体）には、最適な有効性を与える本発明の化合物の適切な用量を投与することができる。投与量及び投与法は、被験体毎に異なり、治療中の哺乳動物の種類、その性別、体重、食餌、並行薬物治療、全体的な臨床状態、使用する特定の塩、これらの塩が使用される特定用途等の因子、及び医療業界の当業者が認識する他の因子に依存する。
【００４３】
本発明に有用なカプセル剤は、従来の既知のカプセル封入法、例えばＳｔｒｏｕｄ等の米国特許第５，７３５，１０５号に記載の技法を使用して調製することができる。カプセル剤は一般的に、適切な用量の活性剤を含有する薬学的溶液組成物がカプセル内に収まるのに適した直径及び長さを有するほぼ円筒形の中空シェルである。カプセル剤の外側は、可塑剤、水、ゼラチン、化工デンプン、ガム、カラゲナン及びこれらの混合物を含有してよい。当業者は、どの組成物が好適であるかを理解するであろう。
【００４４】
本発明に有用な錠剤は、活性剤に加えて、充填剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、水、タルク、及び当業者が認識する他の成分を含んでもよい。錠剤は、コアが単層で均質であってもよければ、或いは好ましい放出特性を実現するように多層を有してもよい。場合により本発明の錠剤は、腸溶コーティング等によって被覆される場合がある。当業者は、他の賦形剤が本発明の錠剤に有用であることを理解するであろう。
【００４５】
本発明に有用なロゼンジ剤は、適量の活性剤、並びに何れかの充填剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、可溶化剤、甘味剤、着色剤、及び当業者が必要と認識するその他何れかの成分を含有する。本発明のロゼンジ剤は、被験体の口に接触すると、溶解して活性成分を放出するように設計されている。当業者は、他の送達方法が本発明に有用であることを認識するであろう。
【００４６】
本発明の塩の配合物は、所望の純度を有する塩を、生理学的に許容される担体、賦形剤、安定剤等と混合することによって、保存又は投与用に調製され、持続放出性又は徐放性配合物として提供される場合がある。治療用途に許容される担体又は希釈剤は、医薬分野において周知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， （Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．１９８５）に記載されている。このような物質は、使用する投与量及び濃度において受容者に非毒性であり、これには以下の物質が含まれる：緩衝剤（燐酸塩、クエン酸塩、酢酸塩及び他の有機酸塩等）、酸化防止剤（アスコルビン酸等）、低分子量（約１０残基未満）ペプチド（ポリアルギニン）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリジノン等）、アミノ酸（グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸又はアルギニン等）、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物（セルロース又はその誘導体、グルコース、マンノース又はデキストリン等）、キレート化剤（ＥＤＴＡ等）、糖アルコール（マンニトール又はソルビトール等）、対イオン（ナトリウム等）、及び／又は非イオン界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ又はポリエチレングリコール等）。
【００４７】
治療投与に使用する本発明の塩の投与配合物は、滅菌されていなければならない。滅菌は、０．２ミクロン膜等の滅菌膜で濾過するか、又は他の常套法によって容易に行うことができる。配合物は一般的に、凍結乾燥形態で、又は水溶液として保存される。本発明の調製物のｐＨは、一般的に３〜１１であり、より好ましくは５〜９であり、最も好ましくは７〜８である。特定の前記賦形剤、担体又は安定剤を使用することで環状ポリペプチド塩が形成されることを理解されたい。好ましい投与経路は注射であるが、以下のような他の投与方法も考えられる：坐剤、植込みペレット剤又は小型シリンダー錠、エアロゾル剤、経口投与配合物（錠剤、カプセル剤及びロゼンジ剤等）並びに局所配合物（軟膏剤、滴剤及び貼付剤等）のような種々の投与形態を使用した静脈内投与（ボーラス及び／又は輸液）、皮下投与、筋肉内投与、結腸内投与、直腸内投与、経鼻投与又は腹膜内投与。本発明の塩は、生分解性ポリマー又は合成シリコン等の不活性材料、例えば、シラスチック、シリコンゴム又は他の市販されるポリマーを使用する場合があるインプラントのような造形物品に組み込むのが望ましい。
【００４８】
本発明の塩は、小単層ベシクル、大単層ベシクル及び多層ベシクル等のリポソーム送達系の形態で投与される場合もある。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリン等の種々の脂質から形成してもよい。
【００４９】
本発明の塩は、塩分子が結合する抗体、抗体フラグメント、成長因子、ホルモン又は他の標的成分を使用しても送達される場合がある。本発明の塩は、標的にできる薬剤担体等の好適なポリマーにも結合される場合がある。このようなポリマーには、ポリビニルピロリジノン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール、又はパルミトイル残基で置換されるポリエチレンオキシド−ポリリジンが含まれてもよい。更に、本発明の塩は、薬剤の制御放出を達成するのに有用なある種の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロックコポリマーに結合する場合もある。ポリマー及び半透性ポリマーマトリクスは、弁、ステント、管、プロテーゼ等の造形物品に形成される場合がある。
【００５０】
Ｂ．投薬
一般的に、約０．５〜５００ｍｇの本発明の塩又は塩混合物は、容認される製薬慣行によって必要とされる生理学的に許容されるビヒクル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、着色剤、香味剤等と配合される。これらの組成物における活性成分の量は、指示された範囲の好適投与量が得られる量である。
【００５１】
一般的な投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇであることが企図される。本発明の化合物は、１日１回又は数回投与される場合があり、他の投薬計画も有用な場合がある。
【００５２】
ＩＶ．方法
Ａ．望ましくない血栓症を特徴とする疾患状態の予防及び治療
本発明の塩は、哺乳動物における望ましくない血栓症を特徴とする状態を予防又は治療するのに使用でき、これは、式Ｉの化合物の塩、式Ｉの化合物のマレイン酸塩、式ＩＩの塩、又は結晶多形形態を有する式ＩＩの塩を治療有効量哺乳動物に投与することによって行われる。前記塩は、単独で使用するか、又は薬学的に許容される賦形剤と共に使用して、望ましくない血栓症を特徴とする状態の発現を予防することができる。予防的治療は、医療及びそれに関連した精神的且つ身体的な犠牲を減らし、並びに罹患体の長期の治療を回避することによって直接的に経費が節減されることから、疾患に罹患する危険性がある被験体に実質的な利益をもたらすことができる。発現を予防できるほど早期に状態が検出されない被験体の場合には、本発明の塩を単独で使用するか、又は薬学的に許容される賦形剤と共に使用して、状態を治療することができる。
【００５３】
本発明の好ましい塩は、好適な安定度を示しつつ、凝固パラメータ、血小板及び血小板機能の古典的な尺度に対して許容される作用、並びに前記塩の使用に関連した出血性合併症の許容されるレベルにおいて、血栓症を阻止する能力により特徴付けられる。望ましくない血栓症を特徴とする状態には、動脈及び静脈血管系に関係する状態が含まれる。
【００５４】
冠動脈血管系における異常な血栓症は、急性心筋梗塞及び不安定狭心症の主要原因である定着したアテローム斑の破裂の特徴であり、更に、血栓溶解療法又は経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）によって生じる閉塞性冠動脈血栓症の特徴でもある。
【００５５】
静脈血管系における異常な血栓症は、下肢又は腹部領域の大手術を受ける被験体において観察される状態の特徴であり、前記被験体は、多くの場合、静脈血管系の血栓症に罹患しており、それによって罹患下肢への血流減少及び肺動脈塞栓の素因を生じている。異常な血栓症は更に、敗血症性ショック、特定のウイルス感染及び癌の際に両血管系で一般的に生じる播種性血管内凝固障害、即ち、凝固因子の急速な消費及び全身性凝固が存在し、それによって微小血管全体にわたり生命にかかわる血栓が生じ、その結果、広汎性器官不全を生じる状態の特徴でもある。
【００５６】
本明細書に開示する通りに選択及び使用される本発明の塩は、以下のような望ましくない血栓症を特徴とする状態の予防又は治療に有用であると考えられる：（ａ） 心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓を含めた任意の血栓媒介急性冠動脈症候群の治療；（ｂ） 塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中及び一過性虚血発作を含めた任意の血栓媒介性脳血管症候群の治療；（ｃ） 自然に発症する、又は悪性疾患、手術若しくは外傷の状況下で発生する深部静脈血栓症及び肺塞栓を含めた、静脈系に発生する任意の血栓性症候群の治療；（ｄ） 播種性血管内凝固（敗血症性ショック又は他の感染、手術、妊娠、外傷及び悪性腫瘍の状況を含み、多器官不全に関連するかを問わない）、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、又はヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患を含めた、任意の凝固障害の治療；（ｅ） 体外循環（例えば、腎臓透析、心肺バイパス又は他の酸素添加手順、プラズマフェレーシス）に関連した血栓性合併症の治療；（ｆ） 器械使用（心臓又は他の血管内カテーテル処置、大動脈内バルーンポンプ、冠動脈ステント又は心臓弁）に関連した血栓性合併症の治療；及び（ｇ） 補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症の治療。
【００５７】
従って、望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態の治療法は、哺乳動物に、治療有効量の本発明の塩を投与することを含む。本発明の塩を使用して治療できると考えられる疾患状態には、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症、血栓溶解療法又は経皮経管冠動脈形成術によって生じる閉塞性冠動脈血栓症、静脈血管系における血栓症、播種性血管内凝固障害；凝固因子の急速な消費及び全身性凝固が存在し、それによって微小血管全体にわたり生命にかかわる血栓症を生じ、その結果、広汎性器官不全を生じる状態；出血性脳卒中、腎臓透析、血液酸素添加、及び心臓カテーテル法が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
式Ｉの化合物のマレイン酸塩、又は式ＩＩの塩は、保存全血の凝固の防止や、試験又は保存のための他の生物試料における凝固の防止等に血液凝固の阻害が必要とされる場合にも使用することができる。従って、本発明の凝固阻害剤は、保存全血、及び血漿凝固因子を含有するか又は含有すると考えられ、血液凝固の阻害が所望される任意の媒体に添加するか又は接触させることができる（例えば、哺乳動物の血液を、人工血管、ステント、整形外科プロテーゼ、及び体外循環システムからなる群から選択される材料と接触させる場合）。
【００５９】
ヒト治療に有用であることに加えて、これらの塩は、愛玩動物、外来動物及び家畜（哺乳動物、げっ歯類等を含む）の獣医学治療にも有用であることが企図される。より好ましい動物には、ウマ、イヌ及びネコが含まれる。
【００６０】
Ｂ．投与
治療用液体配合物は一般的に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針による突き刺し可能なストッパーを有する静脈注射液バッグ又はバイアルに入れられる。
【００６１】
治療有効投与量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ法の何れかによって決定される場合がある。本発明の各特定塩において、それぞれの測定を行って、必要とされる最適な投与量を決定する場合がある。治療有効投与量の範囲は、投与経路、治療目的、及び被験体の状態によって左右される。皮下注射針による注射の場合、投与量は体液中に送達されると考えられる。他の投与経路の場合、薬理学に周知の方法によって、吸収効率を各化合物について個々に決定しなければならない。従って、治療者は、最適な治療効果を得るために、必要に応じて投与量を調整し、投与経路を変更することが必要な場合もある。有効投与量レベル、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量レベルは、当業者によって容易に決定される。一般的に、塩の適用は、より低い投与量レベルで開始し、所望の効果が得られるまで投与量レベルを増加させる。
【００６２】
錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤等に組み込まれる場合がある一般的な補助剤は、結合剤（アカシア、コーンスターチ又はゼラチン等）、及び賦形剤（微結晶性セルロース、崩壊剤、例えばコーンスターチ又はアルギン酸等）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、甘味剤（スクロース又はラクトース等）、又は香味剤がある。投与形態がカプセル剤である場合は、前記の物質に加えて、水、生理食塩水又は脂肪油等の液体担体も含有する場合がある。種々の種類の他の物質が、投与単位の物理的形態の被覆剤又は改質剤として使用される場合もある。注射用の滅菌組成物は、従来の製薬慣行に従って配合することができる。例えば、油等のビヒクル又はオレイン酸エチル等の合成脂肪ビヒクル、又はリポソームへの活性化合物の溶解又は懸濁が所望される場合もある。緩衝剤、防腐剤、酸化防止剤等を、容認される医薬慣行に従って組み込んでもよい。
【００６３】
Ｃ．併用療法
本発明の塩は、他の治療薬又は診断薬と組み合わせて使用される場合もある。特定の好ましい実施形態において、一般的に承認されている医療慣行に従ってこれらの状態に一般的に処方される他の化合物（例えば、抗凝固剤、血栓溶解剤、又は他の抗血栓剤であって、血小板凝集阻害剤、組織プロスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヘパリン、アスピリン及びワルファリンを包含する）と共に、本発明の塩を同時投与する場合がある。本発明の塩は、相乗的に作用して、成功した血栓溶解療法後の再閉塞を防止し、及び／又は再灌流の時間を短縮する場合がある。これらの塩は、減少した用量の血栓溶解剤を使用することを可能にし、従って、潜在的な出血性副作用を最小限にする場合がある。本発明の塩は、ｉｎ ｖｉｖｏで、通例は、霊長類、ヒト、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ラット及びマウス等の哺乳動物において、又はｉｎ ｖｉｔｒｏで使用することができる。
【００６４】
Ｄ．化合物の製造
１．式Ｉの化合物のマレイン酸塩
式Ｉの化合物は、種々の無機及び有機酸の塩に変換でき、これには、ＨＣｌ塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フェノキシ酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、樟脳酸塩、グルコン酸塩、燐酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メシレート、フマル酸塩、グリコール酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、ゲンチジン酸塩及びベンゼンスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、他の酸を使用して、本発明に有用な式Ｉの化合物を含む塩を製造できることを理解するであろう。本発明の塩を本発明の他の塩に容易に変換できることも企図される。
【００６５】
塩の熱安定度及び加水分解安定度を評価するために、当業者に既知の試験が行われる。これらの試験は、以下の実施例４に詳細に説明される。
【００６６】
幾つかの方法が、前記の塩の製造に有用であり、当業者に既知である。例えば、式Ｉの化合物と１以上のモル当量の所望の酸とを、塩がそれに不溶性の溶媒又は溶媒混合物中か、又は水のような溶媒中で反応させた後、溶媒を蒸発、蒸留又は凍結乾燥によって除去する。或いは、式Ｉの化合物を、イオン交換樹脂に通して、所望の塩を形成する場合もあれば、或いは生成物の１つの塩形態を、同じ一般的方法によって別の塩に変換する場合がある。
【００６７】
式Ｉの化合物を、以下に示す手順によって調製した。式Ｉの化合物のマレイン酸塩を、その優れた結晶度、熱安定度及び加水分解安定度及び高純度により選択した。
【００６８】
２．配合物Ｉ
式Ｉの化合物は、数種の方法の何れかによって、グラム規模（１ｋｇ未満）又はキログラム規模（１ｋｇ超）で製造できる。１つのグラム規模方法は、実施例２に記載されている。別のグラム規模方法については、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，８４４，３６７ Ｂ１号の実施例２６６に記載されている。
【００６９】
或いは、式Ｉの化合物を、実施例２に記載の手順によって、キログラム規模で製造することもできる。式Ｉのジメチルアミジンの形成は、脱プロトン化アミンによるシアノ基上での求核攻撃を含み、脱プロトン化アミンは第二級アミン及びアルキルリチウムから形成される。本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有するヒドロカルビル基を指す。当業者は、脱プロトン化アミンを他の方法によって形成することができ、式Ｉのアミジン官能性の形成を他の種々の方法によって行うことができることを認識するであろう。
【００７０】
前記の本発明の方法に有用な溶媒は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサン等の非極性非プロトン溶媒である。更に、脱プロトン化アミンの形成は、１０℃未満の温度にて行うことができる。式Ｉの化合物を形成するためのアミンの求核付加も、１０℃未満の温度にて行うことができる。本発明の方法は、他の種々の溶媒、試薬及び反応温度を使用して実施できることを、当業者は認識するであろう。
【００７１】
式Ｉの化合物は、本発明の方法を使用して５０％より高い収率で調製することができる。場合によっては、式Ｉの化合物を６５％より高い収率で調製することもできる。或いは、式Ｉの化合物を７５％より高い収率で調製することもできる。
【００７２】
更に、式Ｉの化合物をグラム規模で製造する本発明の方法は、キログラム規模で使用される手順に類似しているが、３４００％を超える反応の規模の増加がある。更に、幾つかの手順において、減少した過剰試薬量を使用して、増加した収率が得られる。当業者は、式Ｉの化合物を、グラム及びキログラム規模の両方において、他の化学方法によって製造できることを認識するであろう。
【実施例】
【００７３】
特に記載がない限り、本明細書全体にわたって使用される略語は、以下の意味を有する：
Å ＝ オングストローム
Ａ％ ＝ 全面積パーセント
ａｑ．＝ 水性
ｃｍ ＝ センチメートル
ｄ ＝ 二重項
ＤＳＣ ＝ 示差走査熱量測定
ＥＤＴＡ ＝ エチレンジアミンテトラ酢酸
ｅｑ．＝ 当量
ＥｔＯＨ ＝ エタノール
ｇ ＝ グラム
ＨＰＬＣ ＝ 高性能液体クロマトグラフィー
ｈｒ ＝ 時間
Ｈｚ ＝ ヘルツ
ＩＲ ＝ 赤外線
Ｊ ＝ 結合定数
ｋｇ ＝ キログラム
ｋＶ ＝ キロボルト
Ｌ ＝ リットル
ＬＯＤ ＝ 検出限界
Ｍ ＝ モル
ｍ ＝ 多重項
ｍＡ ＝ ミリアンペア
Ｍｅ ＝ メチル
ＭｅＯ ＝ メトキシ
ＭｅＯＨ ＝ メタノール
ｍｇ ＝ ミリグラム
ｍｉｎ．＝ 分
ｍＬ ＝ ミリリットル
ｍｍ ＝ ミリメートル
ＭＴＢＥ ＝ メチルｔ−ブチルエーテル
Ｎ ＝ 規定の
ｎＭ ＝ ナノモル
ＮＭＲ ＝ 核磁気共鳴
ｓ ＝ 一重項
ＴＤＳ ＝ 全溶解固形分
ＴＧＡ ＝ 熱重量分析
ＴＨＦ ＝ テトラヒドロフラン
μＭ ＝ マイクロモル
（実施例１ 式ＩＩの結晶多形塩の調製）
グラム規模の調製
冷却器を取り付けた１５００ｍＬの三つ口丸底フラスコに、式Ｉの遊離塩基化合物（２５ｇ、１当量）を充填し、９：１のＥｔＯＨ／水（５００ｍＬ）を攪拌しながら添加した。得られたスラリーを７０℃に加熱した。マレイン酸（１２．７７ｇ、２当量）を溶液（１００ｍＬ、９：１のＥｔＯＨ／水）として滴下し、５０ｍＬを添加した後に、溶液が顕著により清澄になった。マレイン酸溶液の添加が終了したら、温度を８０℃に５分間維持した。容器を４５℃に緩徐に冷却した後、ＭＴＢＥ ４００ｍＬを添加した。溶液を１２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、真空乾燥させた。式ＩＩの塩を収率４５％（１４．２ｇ）で回収した。
【００７４】
キログラム規模の調製
式Ｉの化合物（２４．６ｋｇ）を７６０Ｌ ＧＬＭＳ反応器（反応器Ａ）に充填した。マレイン酸（１２．７ｋｇ、２．０当量）、エタノール（４４５ｋｇ、１８．１部）及び高純度の水（１４０ｋｇ、５．７部）を添加した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、その温度にて約１時間攪拌した後、ポリッシングフィルターを介して、状態調節した７８０Ｌ ハステロイ反応器（反応器Ｂ）に移した。追加のエタノール（約４５ｋｇ）を使用して、反応器Ａのポンプ及びラインを、ポリッシングフィルターを介して反応器Ｂに向かって濯いだ。濾液を、４５℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、約１４０Ｌ（５．７容量部）が残るまで真空濃縮した。反応器Ｂの含有物を、工程間のＮＭＲのために採取し、この工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩのモル比が２６であることを示した。高純度の水（４９ｋｇ、２．０部）を反応器Ｂに充填し、約１４０Ｌ（５．７容量部）のポット容量が得られるまで真空濃縮を再び行った。工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩの塩のモル比が１４であることを示した。高純度の水（４９ｋｇ、２．０部）を再び充填し、約１４０Ｌのポット容量が得られるまで真空濃縮を再び行った。工程間のＮＭＲは、エタノールと式ＩＩの塩のモル比が５であることを示した。反応器Ｂの含有物の温後を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、スラリーの形成を目視確認した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）で約２時間攪拌した後、Ｆ−５３濾布を取り付けた３０インチの遠心機で濾過した。高純度の水を２回使用して（それぞれ約３０ｋｇ）、反応器Ｂのポンプ及びラインを、ポリッシングフィルターを介して３０インチの遠心機に向かって濯いだ。濾過ケーキを工程間のＨＰＬＣのために採取し、この工程間のＨＰＬＣは、生成物の純度が９９．１Ａ％であることを示し、最大不純度は０．２６Ａ％であり、従って再結晶は必要なかった。濾過ケーキ（３３．１ｋｇ）を、４０℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、真空乾燥させた。約３０．５時間後、工程間のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０％を示した。乾燥生成物（２６．４ｋｇ）を排出し、２〜８℃にて保存した。最終生成物の収率は、予想より少し高い８５％であった（予想５０〜８０％）。
【００７５】
実施例４に記載の技法を使用して、式ＩＩの塩を特性決定した。式ＩＩの塩のＸ線回折パターンが図１Ａに示され、以下の近似ピーク位置によって特徴付けられる：４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θ。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ、図２Ａの図形を参照）を使用して、１９７〜２０１℃の融点を測定した。更に、熱重量分析（ＴＧＡ、図２Ｂの図形を参照）によって、式ＩＩの塩の１００℃における損失重量０．６２％を測定した。式ＩＩの塩の水収着は可逆性であり、０．１〜３％の水吸収量を示した（図３）。式ＩＩの塩の純度を、ＨＰＬＣによって測定される加水分解アミジン分の存在によって測定し、純度は９９％超であった。
【００７６】
１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．８２ （ｓ， ３Ｈ）， ７．２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０
Ｈｚ）， ７．４２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．０
Ｈｚ）， ７．９５ − ８．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１２ （ｍ）， ８．１８（ｍ， １Ｈ）， ８．４２ （ｓ， １Ｈ）， ９．０ （ｓ， １Ｈ）， １１．０ （ｓ， １Ｈ）， １１．２ （ｓ， １Ｈ）； ＩＲ （ＫＢｒ， ｃｍ−１）：
３３００， １６８５， １６００， １５１５， １３８０， １２７０， １２００， １１００， １０５０， ８８０， ８００， ７１０。
【００７７】
（実施例２ 式Ｉの化合物の調製）
【００７８】
【化１０】
グラム規模の調製
ＴＨＦ（４．６７ｋｇ、１０．３部）中の式Ｆの化合物（４５５ｇ、１．０当量）のスラリーを調製し、１０℃未満に調節した。リチウムジメチルアミドを以下のように調製した：ヘキシルリチウム（２．３Ｎ／ヘキサン、２．４５Ｌ、５．５当量）をジメチルアミン溶液（２Ｎ／ＴＨＦ、２．８Ｌ、５．５当量）に添加し、１０℃未満に維持した。式Ｆの化合物を含有するスラリーに、リチウムジメチルアミド溶液を充填し、１０℃未満のポット温度を維持した。反応の進行を工程間のＨＰＬＣによって監視し、式Ｆの化合物の量が１．０Ａ％未満であることを確認した。脱イオン水（６．６ｋｇ、１４．５１部）中のＮａＨＣＯ３（４９０ｇ、１．１部、５．７当量）及びＮａ２ＣＯ３（４９０ｇ、１．１部、４．５当量）の緩衝液を調製し、この水溶液に前記の反応混合物を移し、５℃未満に維持した。生成物が沈殿し、得られたスラリーを１２時間にわたり２０℃に調節した。この固形物を濾過し、得られた湿ったケーキを脱イオン水３．５ｋｇ（７．７部）で洗浄した。固形物を粗いフリットガラスベンチフィルターで濾過し、冷たい（０〜５℃）無水エタノール（６２８ｇ、１．４部）で前方へ濯いだ。生成物を３０〜３５℃にて乾燥させた。乾燥生成物を４５８ｇ（収率７３％）で得た。
【００７９】
キログラム規模の調製
ＴＨＦ（２５１ｋｇ、８．０部）中の式Ｆの化合物（３１．５ｋｇ、１．０当量）のスラリーを、７８０Ｌ ハステロイ反応器（反応器Ａ）において調製し、０℃（−３〜３℃）に調節した。ＴＨＦ（１６１．０ｋｇ、５．０当量）中の２Ｍ ジメチルアミン、及びＴＨＦ（６３ｋｇ、２部）を、１９００Ｌ ＧＬＭＳ反応器（反応器Ｂ）に充填し、最大攪拌下に０℃（−３〜３℃）に調節した。ヘキシルリチウム（２．３Ｍ、９７．２ｋｇ、４．５当量）を、最大温度１０℃に維持しながら反応器Ｂに緩徐に充填した。ＴＨＦ（３．２ｋｇ）を使用して、ポンプ及びラインを反応器Ｂに向かって濯いだ。反応器Ｂの含有物を、０℃（−３〜３℃）に調節した後、反応器Ａに移し、その間、反応器Ａの温度を１０℃以下に維持した。ＴＨＦ（３１．４ｋｇ、１．０部）を使用して、反応器Ｂのポンプ及びラインを前方へ濯いだ。反応器Ａの含有物を０℃（−３〜３℃）に調節し、ＨＰＬＣによって反応の終了が確認されるまで（１〜２時間）、この温度にて攪拌した。約１時間の攪拌後に、工程間のＨＰＬＣ分析が、０ Ａ％の出発物質残留を示した（工程間の基準：最大１Ａ％）。反応器Ａの含有物を、−５℃（−８〜−３℃）に調節した。水を使用して反応器の工程間の洗浄を行った。前もって調製した２つの水溶液［水（２３６ｋｇ、７．５部）中のＮａＨＣＯ３（３５．０ｋｇ、１．１部）、及び水（２３６ｋｇ、７．５部）中のＮａ２ＣＯ３（３５．０ｋｇ、１．１部）］を反応器Ｂに充填し、−３℃（０〜６℃）に調節した。反応器Ａの含有物を、絶縁ラインを介して反応器Ｂに移し、反応器Ｂの温度を−８℃〜最大５℃に維持した。反応器Ａのポンプ及びラインを、冷たい［−５℃（−８〜−３℃）］ＴＨＦ（３１．４ｋｇ、１．０部）で前方へ濯いだ。反応器Ｂの含有物を、２２℃（１９〜２５℃）に調節し、約３時間攪拌した。スラリー形成を目視確認し、Ｆ−１６濾布を取り付けた３０インチの遠心機で、反応器Ｂの含有物を濾過した。飲料水（６３ｋｇ、２部）を使用して、Ｆ−１６濾布を取り付けた３０インチの遠心機で、反応器Ｂのポンプ及びラインを前方へ濯いだ。湿った濾過ケーキ（６６．５ｋｇ）を反応器Ｂに戻し、飲料水（１００５ｋｇ、３２部）中で２２℃（１９〜２５℃）にて約１時間にわたりスラリー洗浄に付した。生成物を３０インチの遠心機で濾過し（工程間の洗浄及びＦ−５３濾布の取り付け後）、反応器Ｂのライン及びポンプを、飲料水（６３ｋｇ、２部）で前方へ濯いだ。濯ぎ水をＴＤＳによる試験のために採取し、それは０．４６％であることがわかった。反応器Ｂのポンプ、ライン及び湿った濾過ケーキを、冷たい［０℃（−３〜３℃）］エタノール（４４ｋｇ、１．３９部）で更に濯いだ。湿った濾過ケーキを、３５℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて真空乾燥させた。工程間のＬＯＤは、約２４時間の乾燥後に０％であり、生成物（２４．８ｋｇ）を収率７６．７％で排出した。ＨＰＬＣは、９８％純度を示し、脱塩素不純物は１．１４％であった。
【００８０】
（実施例３ 式Ｆの化合物の調製）
手順１．２−ニトロ−Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−５−メトキシ−ベンズアミド（Ｃ）の合成
【００８１】
【化１１】
５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（Ａ）（２５．０ｋｇ、１．０当量）、２−アミノ−５−クロロピリジン（Ｂ）（１６．３ｋｇ、１．０当量）、及びアセトニトリル（８７．５ｋｇ、３．５部）を、３８０Ｌ ＧＬＭＳ反応器に充填した。反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、無水ピリジン（３０．０ｋｇ、３．０当量）を添加した。ポンプ及びラインをアセトニトリル（２２．５ｋｇ、０．９部）で前方へ濯ぎ、反応器の含有物を１９〜２２℃の温度に調節した。２５℃（２２〜２８℃）の温度を維持しながら、オキシ塩化燐（２３．３ｋｇ、１．２０当量）を、計量型ポンプを介して反応器の含有物に添加した。温度を２５℃（２２〜２８℃）に維持しながら、計量型ポンプ及びラインを、アセトニトリル（１２．５ｋｇ、０．５部）で前方へ濯いだ。約１／３のＰＯＣｌ３の添加後に、反応混合物は一般的に、スラリーから透明溶液になった。添加の終了時に、それは濁った。添加の終了後に、反応混合物を２５℃（２２〜２８℃）で約１時間攪拌し、その際に、ＨＰＬＣ分析は反応の終了を確認した。溶液を１５℃（１２〜１８℃）に冷却し、反応温度を１２〜３０℃に維持しながら、飲料水（１５６．３ｋｇ、６．２５部）を緩徐に充填した。次に、反応混合物を２２℃（１９〜２５℃）に調節し、発熱が止むまで約５時間攪拌した。スラリーの形成を目視確認し、反応器の含有物を、Ｆ−１９濾布を取り付けた圧力ヌッツェで濾過した。反応器、ポンプ及びラインを、飲料水で２回（それぞれ６２．５ｋｇ、２．５部）、圧力ヌッツェ上で前方へ洗浄した。濾液はｐＨ値７を有していた。５０℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、生成物（４１．８ｋｇ）を真空乾燥させた。約１２時間後に、工程間のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０．７２％を示した。乾燥生成物（Ｃ）（３４．４ｋｇ）を、ＨＰＬＣにより８８．２％収率及び９９．１％純度で排出した。
【００８２】
手順２．２−アミノ−Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−５−メトキシ−ベンズアミド（Ｄ）の合成
【００８３】
【化１２】
７８０Ｌ ハステロイ反応器に、化合物Ｃ（３３ｋｇ、１．０当量）、５％白金炭素（硫化、０．３３ｋｇ、０．０１０部）及びジクロロメタン（５７８ｋｇ、１７．５部）を充填した。攪拌を開始し、反応器含有物を２２℃（１９〜２５℃）に調節した。反応器を約３０ｐｓｉの水素で加圧し、反応混合物を２８℃（２５〜３１℃）に徐々に加熱した。ＨＰＬＣにより反応が終了するまで、反応器含有物の水素化を約３０ｐｓｉで２８℃（２５〜３１℃；最大３１℃）において行った。１６．５時間後、出発物質の消失（０．４７２ Ａ％）を確認した後に、反応が終了したと考えられた。反応器の含有物を、８インチのスパークラーフィルター中に準備した状態調節したセライトパッド（２０〜５５ｋｇのジクロロメタンで状態調節した０．２〜０．５ｋｇのセライト）を通って循環させて、白金触媒を除去した。反応器及びセライト床を、ジクロロメタンで２回（それぞれ８３ｋｇ、２．５部）前方へ濯いだ。濾液を、５７０Ｌ ＧＬＭＳ反応器に移し、大気圧下に約１３２Ｌ（４容量部）に濃縮した。エタノール（６９ｋｇ、２１．部）を充填し、濃縮を大気圧下に継続して、約９９Ｌ（３容量部）にした。工程間のＮＭＲは、ジクロロメタン含有量が３９％であることを示した。エタノール（６９ｋｇ、２．１部）を再び充填し、再び濃縮を継続して、約９９Ｌ（３容量部）にした。工程間のＮＭＲは、ジクロロメタン含有量が５％であることを示した。次に、反応混合物を３℃（０〜６℃）に調節し、約１時間攪拌し、得られたスラリーを、Ｆ−１９濾布を取り付けたジャケット付き圧力ヌッツェで濾過した。反応器、ポンプ及びラインを、冷たい［３℃（０〜６℃）］エタノール（２６ｋｇ、０．８部）で前方へ濯いだ。湿った濾過ケーキ（３６．６ｋｇ）を、５０℃の水浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて、４０〜５０℃において真空乾燥させた。１２．５時間後のＬＯＤ分析は、溶媒含有量０．１％を示した。乾燥生成物（Ｄ）（２６．４ｋｇ）を収率８９．５％で排出した。ＨＰＬＣは、９８．４ Ａ％純度、脱塩素不純物０．０８３％を示した。
【００８４】
手順３．Ｎ−（５−クロロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−シアノ−ベンゾイル−アミノ）−５−メトキシ−ベンズアミドヒドロクロリド（Ｆ）の合成
【００８５】
【化１３】
７８０Ｌ ハステロイ反応器に、４−シアノベンゾイルクロリド（Ｅ）（１７．２ｋｇ、１．１当量）及びＴＨＦ（９２ｋｇ、３．５部）を充填した。反応器の含有物を２２℃（１９〜２５℃）で、全固形物が溶解するまで攪拌した。得られた溶液を、下部受け器に移し、反応器をＴＨＦ（２６ｋｇ、１部）で前方へ濯いだ。化合物Ｄ（２６．４ｋｇ、１当量）、ＴＨＦ（３９６ｋｇ、１５部）及びピリジン（２．９０ｋｇ、０．４当量）を、清浄反応器に充填した。ポンプ及びラインをＴＨＦ（３４ｋｇ、１．３部）で前方へ濯いだ。計量型ポンプを介して、４−シアノベンゾイルクロリド／ＴＨＦ溶液を反応器に充填し、温度を３０℃以下に維持し、ＴＨＦ（約１０ｋｇ）で前方へ濯いだ。得られた黄色スラリーを、２２℃（１９〜２５℃）で約２時間攪拌した。２時間後に行った工程間のＨＰＬＣは、式Ｄの化合物の含有量０％を示し、反応の終了を示した。Ｆ−１９濾布を取り付けた圧力ヌッツェでスラリーを濾過した。反応器、ポンプ、ライン及び湿ったケーキを、エタノールで３回（それぞれ約１５ｋｇ）濯いだ。湿った濾過ケーキ（６５．４ｋｇ）を排出し、反応器に戻して、エタノール（３１７ｋｇ、１２部）中において２２℃（１９〜２５℃）で約１時間にわたりスラリー洗浄した。スラリーを圧力ヌッツェで濾過し、反応器、ポンプ、ライン及び湿った濾過ケーキを、エタノールで２回（それぞれ約１５ｋｇ）及びＴＨＦで２回（それぞれ約１５ｋｇ）濯いだ。湿った濾過ケーキを、４０℃の温グリコール浴（反応器ジャケットの加熱用）の最大温度にて真空乾燥させた。１４．５時間乾燥させた後に、ＬＯＤは０．７５％であった。乾燥物質を粉砕して（スクリーン０．１２５インチ）、生成物３１．８ｋｇを得て、これを更に１０．５時間真空乾燥させた。乾燥後のＬＯＤは１．８％であり、生成物（３１．５ｋｇ）を収率７４．８％（予想６０〜９０％）で排出した。ＨＰＬＣは１００％純度を示した。
【００８６】
（実施例４ 塩の選別）
一次選別
３ｍＬの１０％（水性）ＴＨＦ混合物中の遊離塩基２０ｍｇに、エタノール１ｍＬ中の酸１．１当量を添加した。混合物を２時間振とうした後、ｔ−ブチルメチルエーテル２ｍＬを添加して、沈殿を誘発し、更に２時間振とうした。次に、試料を濾過し、乾燥させた後、分析して、これらの純度、結晶度及び安定度を評価した。以下の表１に結果を示し、試験した酸を列記する。
【００８７】
【表１】
＋＋＋：結晶形態、相転移なし、高純度；＋＋：非晶質、幾らかの相転移、中〜高純度；
＋：殆ど又は全く結晶性なし、より低い結晶形態への相転移、低純度；−：沈殿なし。
【００８８】
二次選別
幾つかの塩形態の二次評価を、以下に記載の方法によって行い、結果を、表５及び図１Ａ、１Ｂ、２Ａ、２Ｂ及び３に要約する。
【００８９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
５０位自動試料採取器を取り付けたＴＡ計測器Ｑ１０００によって、ＤＳＣデータを収集した。エネルギー及び温度校正標準はインジウムであった。試料を、１０℃／分の速度で２５〜３５０℃に加熱した。３０ｍＬ／分での窒素パージを、試料上に維持した。特に記載がない限り、１〜３ｍｇの試料を使用し、全ての試料を密閉アルミニウムパンにおいてクリンピングした。
【００９０】
熱重量分析（ＴＧＡ）
ニッケル／アルメルで校正され、１０℃／分の走査速度で操作されるＴＡ計測器Ｑ５００ ＴＧＡによって、ＴＧＡデータを収集した。６０ｍＬ／分での窒素パージを、試料上に維持した。一般的に１０〜２０ｍｇの試料を、前もって風袋計量した白金るつぼに装填した。
【００９１】
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
ＣｕＫα放射線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメータ、自動発散及び受取りスリット、グラファイト二次モノクロメータ及びシンチレーションカウンターを使用してＳｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００回折計によって、Ｘ線粉末回折パターンを収集した。計測器は、認定コランダム標準（ＮＩＳＴ １９７６）を使用して性能検査する。
【００９２】
周囲条件下で試験される試料を、粉末を使用して平板試料として調製した。研磨ゼロバックグラウンド（５１０）シリコンウエハに切り込んだ空洞に、約３５ｍｇの試料を緩く詰める。分析の間に、試料をそれ自身の面内で回転させた。データ収集の詳細は、以下の表２における方法に関して示されている。
【００９３】
【表２】
ＥＶＡ（評価ソフトウェア）を使用してＫα２成分を除去した後に、Ｃｕ Ｋα１（λ＝１．５４０６Å）を使用して回折データを記録し、ＷＩＮ−ＩＮＤＥＸを使用してＩＴＯ法によって粉末図形を表示し、ＷＩＮ−ＭＥＴＲＩＣを使用して原格子定数を精密化した。
【００９４】
単結晶ＸＲＤ（Ｘ線回折）
Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却装置を備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ １Ｋ ＳＭＡＲＴ ＣＣＤ回折計によって、データを収集した。ＳＨＥＬＸＳ又はＳＨＥＬＸＤプログラムを使用して構造を解析し、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ ＳＨＥＬＸＴＬスイートの一部としてのＳＨＥＬＸＬプログラムで精密化した。特に記載がない限り、炭素に結合する水素原子は、幾何学的に配置され、ライディング等方性置換パラメータで精密化することが可能にされた。ヘテロ原子に結合する水素原子は、差分フーリエ合成において位置決定され、等方性置換パラメータで自由に精密化することが可能にされた。
【００９５】
重量測定水蒸気収着（ＧＶＳ）試験
全ての試料を、Ｈｉｄｅｎ ＩＧＡＳｏｒｐ水分収着分析器作動ＣＦＲＳｏｒｐソフトウェアで処理した。試料の大きさは一般的に１０ｍｇであった。水分吸着脱着等温線を以下に概説するように行った（２走査が１全サイクルを与える）。全ての試料を、典型的な室湿度及び温度（４０％ＲＨ、２５℃）で充填／取出した。全ての試料を、ＧＶＳ後のＸＲＰＤ分析によって分析した。標準等温線を、２５℃、０〜９０％ＲＨ範囲おいて１０％ＲＨ間隔で得た。式ＩＩの塩は、優れた水分安定度を示した。
【００９６】
溶解度
これは、溶媒（水）０．２５ｍＬに充分な塩を懸濁させて、塩の親遊離形態の最大最終濃度（１０ｍｇ／ｍＬ以上）を得ることによって測定した。懸濁液を２５℃にて２４時間平衡化した後、ｐＨ検査し、ガラス繊維Ｃ９６ウェルプレートで濾過した。次に、濾液を１０１倍に希釈した。約０．１ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解した標準を基準にして、ＨＰＬＣによって定量化した。種々の容量の、標準、希釈及び非希釈試料を注入した。溶解度を、標準導入におけるピーク最大と同じ保持時間において見出されたピーク面積の積分によって算出した。濾板に充分な固形物が存在する場合、ＸＲＰＤを、相転移、水化物形成、非晶質化、結晶化等について一般的に検査した。
【００９７】
酢酸塩は１０ｍｇ／ｍＬ以上の溶解度を生じ、マレイン酸塩は約２．０５ｍｇ／ｍＬ〜約２．２７ｍｇ／ｍＬの溶解度を生じた。
【００９８】
ｐＫａ測定
これは、Ｄ−ＰＡＳ付属装置を有するＳｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ計測器で行った。測定は、水中でＵＶによって、及びメタノールと水との混合物中で２５℃において電位差測定によって、行った。滴定媒質は、０．１５Ｍ ＫＣｌで調節されたイオン濃度であった。メタノールと水との混合物において見出された数値を、Ｙａｓｕｄａ−Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙ外挿法によって０％補助溶媒に補正した。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェア、Ｖｅｒ．１．０を使用して、データを精密化した。ＡＣＤ ｐＫａ予測ソフトウェア、Ｖｅｒ．８．０８を使用して、ｐＫａ値の予測を行った。式ＩＩの塩のデータを以下の表３に示す。
【００９９】
【表３】
ＬｏｇＰ測定
これは、オクタノール対ＩＳＡ水の３つの比率を使用してＳｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ計測器での電位差滴定によって行って、Ｌｏｇ Ｐ、Ｌｏｇ Ｐｉｏｎ、及びＬｏｇ Ｄ値を得た。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェア、Ｖｅｒ．１．０を使用して、データを精密化した。ＬｏｇＰの予測は、ＡＣＤ Ｖｅｒ．８．０８及びＳｙｒａｃｕｓｅ ＫＮＯＷＷＩＮ Ｖｅｒ．１．６７ソフトウェアを使用して行った。マレイン酸塩のデータを以下の表４に示す。
【０１００】
【表４】
カールフィッシャー水測定
Ｈｙｄｒａｎａｌ Ｃｏｕｌｏｍａｔ ＡＧ試薬及びアルゴンパージを使用して、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＬ３９電量計によって、水分を測定した。水の浸入を防ぐためにスバシールに連接された白金ＴＧＡパン上に秤量された固形物として、試料を容器に導入した。１滴定につき約１０ｍｇの試料を使用し、各分析を二重に行った。
【０１０１】
安定度
試料を５７℃の温度及び７％室湿度に暴露した後に、安定度の測度として、加水分解アミジン分を、ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００）（保持時間３４分）によって測定した。試料溶媒はメタノールであり、０．１％トリフルオロ酢酸の移動相調節剤を使用した。データを３、６及び１０日後に収集し、但し、プロピオン酸塩に関するデータは０、３及び８日目に収集した。結果を表５に、酸加水分解生成物の割合として示し、主ピークのパーセンテージとして表す。全ての他の不純物ピークは、計算において無視した。
【０１０２】
【表５】
式ＩＩの塩に関する結晶データ
全ての実験を、Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ 冷却装置を備えたＢｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ Ｋａｐｐａ ＣＣＤ回折計で行う。構造を一般的に、ＳＩＲ−９７又はＳＨＥＬＸＳ−９７で解析し、ＳＨＥＬＸＬ−９７で精密化する。特に記載がない限り、水素原子は、幾何学的に配置され、等方性置換パラメータで精密化することが可能にされる。以下の表（表６及び表７）には、式ＩＩの塩についての結晶データ及び構造精密化を示す。
【０１０３】
【表６】
【０１０４】
【表７】
以上において前記の発明を、理解を明確にするために、図示及び実施例により幾分詳細に説明してきたが、当業者は、特許請求の範囲内で特定の変更及び改変が行われる場合があることを認識するであろう。更に、本明細書に示した各文献は、それぞれの文献が個別に参考として援用されるのと同様に、全体が参考として援用される。
【０１０５】
好ましい実施形態において、本発明は、例えば、以下を提供する。
（項１）
式Ｉ：
【化１】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩。
（項２）
前記酸が、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸及びメタンスルホン酸からなる群から選択される、上記項１に記載の塩。
（項３）
前記酸が、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸及びコハク酸からなる群から選択される、上記項１に記載の塩。
（項４）
前記酸がマレイン酸である、上記項１に記載の塩。
（項５）
前記酸がプロピオン酸である、上記項１に記載の塩。
（項６）
前記塩が式ＩＩ：
【化２】
により表わされる、上記項４に記載の塩。
（項７）
結晶多形形態を有する、上記項６に記載の塩。
（項８）
４．９、９．７、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２６．３、２６．８度２θから選択される少なくとも４つの近似固有ピーク位置を有する粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項９）
４．９、９．７、１１．８、１３．８、１４．１、１５．２、１７．６、１８．５、１９．９、２０．８、２１．６、２２．７、２４．１、２５．０、２６．３、２６．８度２θから選択される少なくとも８つの近似固有ピーク位置を有する粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項１０）
図１に示す粉末Ｘ線回折パターンに近似した粉末Ｘ線回折パターンを有する、上記項７に記載の塩。
（項１１）
図２に示す示差走査熱量測定パターンに近似した示差走査熱量測定を有する、上記項７に記載の塩。
（項１２）
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、及び治療有効量の上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩を含む、薬学的組成物。
（項１３）
錠剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１４）
カプセル剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１５）
ロゼンジ剤形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１６）
輸液、注射又は経皮送達に好適な形態の、上記項１２に記載の薬学的組成物。
（項１７）
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための方法であって、治療有効量の上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩を、該哺乳動物に投与することを含む、方法。
（項１８）
前記状態が、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択されるメンバーである、上記項１７に記載の方法。
（項１９）
血液試料の凝固を阻害するための方法であって、該試料を、上記項１〜１１の何れか１項に記載の塩と接触させる工程を含む、方法。
（項２０）
式Ｉ：
【化３】
の化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、式ＩＩＩ：
【化４】
の化合物又はその塩と、式Ｉの化合物を形成する条件下において、接触させる工程を含む、方法。
（項２１）
式ＩＩＩの化合物の前記塩がＨＣｌ塩である、上記項２０に記載の方法。
（項２２）
前記条件が、非極性非プロトン溶媒を使用することを含む、上記項２０に記載の方法。
（項２３）
前記溶媒が、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択されるメンバーである、上記項２２に記載の方法。
（項２４）
前記条件が、前記方法を１０℃未満の温度にて行うことを含む、上記項２０に記載の方法。
（項２５）
式Ｉの化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２６）
式Ｉの化合物が少なくとも６５％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２７）
式Ｉの化合物が少なくとも７５％の収率で得られる、上記項２０に記載の方法。
（項２８）
式Ｉの化合物がグラム規模又はキログラム規模で調製される、上記項２０に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化３】
の化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、式ＩＩＩ：
【化４】
の化合物又はその塩と、式Ｉの化合物を形成する条件下において、接触させる工程を含む、方法。
【請求項２】
式ＩＩＩの化合物の前記塩がＨＣｌ塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記条件が、非極性非プロトン溶媒を使用することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記溶媒が、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択されるメンバーである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記条件が、前記方法を１０℃未満の温度にて行うことを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
式Ｉの化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
式Ｉの化合物が少なくとも６５％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
式Ｉの化合物が少なくとも７５％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
式Ｉの化合物がグラム規模又はキログラム規模で調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、及び治療有効量の
式Ｉ：
【化３Ａ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
錠剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
カプセル剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
ロゼンジ剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
輸液、注射又は経皮送達に好適な形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための組成物であって、
式Ｉ：
【化３Ｂ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
を含む、組成物。
【請求項１６】
前記状態が、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択されるメンバーである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
血液試料の凝固を阻害するための方法であって、該試料を、
式Ｉ：
【化３Ｃ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
と接触させる工程を含む、方法。
【請求項１】
式Ｉ：
【化３】
の化合物を調製する方法であって、ＬｉＮ（ＣＨ３）２を、式ＩＩＩ：
【化４】
の化合物又はその塩と、式Ｉの化合物を形成する条件下において、接触させる工程を含む、方法。
【請求項２】
式ＩＩＩの化合物の前記塩がＨＣｌ塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記条件が、非極性非プロトン溶媒を使用することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記溶媒が、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシメタン、ジオキサン、ヘキサン、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタン及びシクロヘキサンからなる群から選択されるメンバーである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記条件が、前記方法を１０℃未満の温度にて行うことを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
式Ｉの化合物が少なくとも５０％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
式Ｉの化合物が少なくとも６５％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
式Ｉの化合物が少なくとも７５％の収率で得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
式Ｉの化合物がグラム規模又はキログラム規模で調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体、及び治療有効量の
式Ｉ：
【化３Ａ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
錠剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
カプセル剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
ロゼンジ剤形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
輸液、注射又は経皮送達に好適な形態の、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
望ましくない血栓症を特徴とする哺乳動物における状態を予防又は治療するための組成物であって、
式Ｉ：
【化３Ｂ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
を含む、組成物。
【請求項１６】
前記状態が、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、不安定狭心症、不応性狭心症、血栓溶解療法後又は冠動脈形成術後に発生する閉塞性冠動脈血栓、血栓媒介性脳血管症候群、塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、一過性虚血発作、静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、凝固障害、播種性血管内凝固、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性血栓性血管炎、ヘパリン誘発血小板減少に関連した血栓性疾患、体外循環に関連した血栓性合併症、器械使用に関連した血栓症合併症、及び補てつ具の取付けに関連した血栓性合併症からなる群から選択されるメンバーである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
血液試料の凝固を阻害するための方法であって、該試料を、
式Ｉ：
【化３Ｃ】
の化合物並びに塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、樟脳酸、グルコン酸、燐酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸及びベンゼンスルホン酸からなる群から選択される酸を含む塩
と接触させる工程を含む、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１２−２４６３２３（Ｐ２０１２−２４６３２３Ａ）
【公開日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２０４７５７（Ｐ２０１２−２０４７５７）
【出願日】平成２４年９月１８日（２０１２．９．１８）
【分割の表示】特願２００８−５４０１９０（Ｐ２００８−５４０１９０）の分割
【原出願日】平成１８年１１月７日（２００６．１１．７）
【出願人】（５００２８７６３９）ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (98)
【氏名又は名称原語表記】ＭＩＬＬＥＮＮＩＵＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２０４７５７（Ｐ２０１２−２０４７５７）
【出願日】平成２４年９月１８日（２０１２．９．１８）
【分割の表示】特願２００８−５４０１９０（Ｐ２００８−５４０１９０）の分割
【原出願日】平成１８年１１月７日（２００６．１１．７）
【出願人】（５００２８７６３９）ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (98)
【氏名又は名称原語表記】ＭＩＬＬＥＮＮＩＵＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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