ＲＡＦの阻害剤およびその使用
本発明は、イミダゾオキサゾールおよびイミダゾチアゾール化合物ならびにそれらの合成を提供する。本発明の化合物は、Ｂ−ＲＡＦＶ６００ＥなどのＲＡＦキナーゼの活性を阻害し得る。化合物は、癌などの細胞増殖性障害を治療するために有用である。本発明の化合物は、以下の式Ｉを有し、ここでＸは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；ｍは、１から３の整数であり；ｎは、１から３の整数であり；ｏは、０から２の整数であり；ｐは、０から２の整数であり；Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
この特許出願は、表題が「ＲＡＦ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ」でありかつ発明者としてＪｅａｎ−Ｍａｒｃ Ｌａｐｉｅｒｒｅ、Ｙａｎｂｉｎ Ｌｉｕ、Ｍａｎｉｓｈ Ｔａｎｄｏｎ、およびＭａｒｋ Ａ．Ａｓｈｗｅｌｌがあげられる、２００８年１２月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１２０，１９８号（この開示は、その全体が参考として本明細書に援用される）からの優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般には、薬学的化合物および薬学的組成物に関し、より詳細には、本発明は、ＲＡＦの阻害剤およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトでは３種のＲＡＦアイソフォーム：Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦおよびＣ−ＲＡＦが存在する（非特許文献１）。これらのセリン／トレオニンタンパク質キナーゼは、成長因子、ホルモンおよびサイトカインにより活性化される膜結合型の低分子量Ｇタンパク質ＲＡＳの下流にある保存されたシグナル伝達経路の成分である（非特許文献２）。ＲＡＳはＲＡＦ活性化を刺激し、次いでこれは、ＭＥＫキナーゼ、続いてＥＲＫキナーゼの活性化をもたらす。細胞の状況に応じて、この経路は、転写、代謝および細胞骨格再配置の調節を主に介して細胞増殖、生存および分化などの多様な生物学的機能を媒介する。
【０００４】
ＲＡＳ−ＲＡＦシグナル伝達経路は長い間、ヒト癌と関連付けられている。それというのも、ｒａｓ遺伝子における発癌変異が、ヒト癌全体の少なくとも１５％において生じており（非特許文献３）、下流のキナーゼＥＲＫが、癌の３０％において過剰活性化しているためである（非特許文献４）。しかしながら、１０年を超える期間にわたって、ＲＡＦタンパク質は癌において、ＲＡＳの下流にそれが位置するという理由だけで重要であると考えられていた。Ｂ−ＲＡＦの活性化変異がヒト癌において高い頻度で見出され、Ｂ−ＲＡＦが悪性疾患の重大な初発因子および促進因子として関与していることが判明すると、この見解は根本的に変えられた。（非特許文献３）。
【０００５】
Ｂ−ＲＡＦ癌原遺伝子での活性化変異が、黒色腫の７０％、乳頭状甲状腺癌の５０％および結腸癌の１０％の基礎にある（非特許文献５；および非特許文献６）。これらの変異の約９０％が、単一ヌクレオチド置換として生じており、この置換はＢ−ＲＡＦのキナーゼドメインのアミノ酸６００の所で、バリンをグルタメートに換えている（Ｖ６００Ｅ）。この変異により、Ｂ−ＲＡＦの基礎キナーゼ活性が高まり、ＭＥＫおよびＥＲＫタンパク質の活性化が生じ、最終的には制御されない腫瘍細胞増殖をもたらす。重要なことに、Ｂ−ＲＡＦおよびＲＡＳ変異は通常、同一の腫瘍型では相互に排他的であり、このことは、これらの遺伝子は、同じ発癌シグナル伝達経路上にあり、これらの腫瘍においてＲＡＳはＢ−ＲＡＦを活性化する作用を有することを示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＭａｒａｉｓおよびＭａｒｓｈａｌｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｒｖ．（１９９６年）２７巻：１０１〜１２５頁
【非特許文献２】ＲｏｂｉｎｓｏｎおよびＣｏｂｂ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９７年）９巻：１８０〜１８６頁
【非特許文献３】Ｄａｖｉｅｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（２００２年）４１７号：９４９〜９５４頁
【非特許文献４】Ａｌｌｅｎら、Ｓｅｍｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．（２００３年）３０巻：１０５〜１１６頁
【非特許文献５】Ｔｕｖｅｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００３年）４巻：９５〜９８頁
【非特許文献６】Ｘｉｎｇ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃａｎｃｅｒ（２００５年）：１２巻：２４５〜２６２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
最近の研究により、ヒト黒色腫細胞において低分子干渉ＲＮＡにより変異体Ｂ−ＲＡＦをノックダウンすると、ＭＥＫキナーゼおよびＥＲＫキナーゼの両方が阻害されて、増殖の停止と、最終的にはアポトーシスの促進とが生じることが判明している（Ｓｈａｒｍａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５巻：２４１２〜２４２１頁（２００５年）；およびＷｅｌｌｂｒｏｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４巻：２３３８〜２３４２頁（２００４年））。加えて、変異体Ｂ−ＲＡＦを標的としている短ヘアピン型ＲＮＡ異種移植片モデルから得られたデータにより、Ｂ−ＲＡＦ抑制から生じる腫瘍退縮は、誘導性、可逆性であり、かつ緊密に調節されることが示されている（Ｈｏｅｆｌｉｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６巻：９９９〜１００６頁（２００６年）。まとめると、機能獲得型Ｂ−ＲＡＦシグナル伝達は、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍原性に強く関係しており、このことは、Ｂ−ＲＡＦを癌治療剤のための重要な標的として確認させるものである。
【０００８】
本明細書に挙げられている参考文献は、特許請求されている本発明に対する先行技術であるとは認められない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の実施形態は、式Ｉ：
【００１０】
【化１】
の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供し、ここで式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である。
【００１１】
一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素である。
【００１２】
一実施形態では、Ｒ４は水素である。
【００１３】
一実施形態では、ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくない場合、好ましい立体化学配置はＲである。
【００１４】
一実施形態では、Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６は、アルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである。
【００１５】
一実施形態では、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５である。
【００１６】
一実施形態では、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−シアノフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩がある。
【００１７】
本発明の一実施形態は、化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩を特徴とする。
【００１８】
本発明の一実施形態は、プロドラッグを特徴とし、ここで、プロドラッグはｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されて、請求項１に定義されている式Ｉの化合物をもたらし、Ｒ７は加水分解後にＨまたはＣＨ２ＯＨである。関連する実施形態では、加水分解前に、Ｒ７は、水素または−（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である。
【００１９】
本発明の実施形態はまた、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、薬学的組成物は、第２の化学療法剤をさらに含む。関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される。他の関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル（ｐｏｌｙｃｏｎａｌ）抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬である。さらなる実施形態では、第２の化学療法剤は、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである。
【００２０】
本発明の実施形態はさらに、細胞増殖性障害を治療または予防する方法を提供する。この方法は、それを必要とする被験体に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与することを含み、ここで、前記細胞増殖性障害が治療される。
【００２１】
一実施形態では、増殖性障害を伴う細胞は、ＲＡＦの変異体または野生型をコードするＤＮＡを含有する。さらなる実施形態では、細胞は構成的に高められたＲＡＦ活性を有する。ＲＡＦは、Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦまたはＣ−ＲＡＦであってよい。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦは、変異体である；変異体Ｂ−ＲＡＦは、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅであってよい。
【００２２】
細胞増殖性障害は、前癌性状態または癌であってよい。一実施形態において、細胞増殖性障害は、黒色腫、乳頭状甲状腺癌、結腸癌または先天性母斑である。
【００２３】
細胞増殖性障害は、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍、リンパ系腫瘍、肉腫、癌腫および腺癌を包含する癌であってよい。
【００２４】
本発明はさらに、Ｂ−ＲＡＦ活性を調整する方法を提供する。この方法は、Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を含有する細胞を、有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩、その類似体または誘導体と接触させる工程を含み、ここで、前記接触させる工程は、Ｂ−ＲＡＦ活性の前記阻害をもたらす。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦ活性は、Ｂ−ＲＡＦのキナーゼ活性である。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦは、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅである。
【００２５】
一実施形態では、方法は、式Ｉの化合物を第２の化学療法剤と組み合わせて投与する工程を特徴とする。関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブのうちの１つである。
【００２６】
関連実施形態では、第２の化学療法剤は、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである。この組合せで、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌または膵臓癌を有効に治療することができる。
【００２７】
本発明の一実施形態は、上記で挙げられた癌性および前癌性状態を包含する細胞増殖性障害を治療する際に使用するための式Ｉによる医薬品を製造する方法を特徴とする。
【００２８】
本発明の他の特徴および利点は、様々な実施例を包含する本明細書中で提供される追加の記載から明らかである。提供される実施例は、本発明を実施する際に有用な様々な成分および手法を例示するものである。これらの実施例は、特許請求されている本発明を制限するものではない。本開示をもとにして、当業者であれば、本発明を実施するのに有用な他の成分および手法を特定して、それを用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、式Ｉの化合物を合成するスキームを示す図である。
【図２】図２は、癌細胞におけるホスホ−ＥＲＫに対する式Ｉの化合物の効果を示す図である。
【図３】図３は、異種移植片マウスモデルにおけるヒト腫瘍（Ａ３７５）に対する式Ｉの化合物の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
１．化合物
本発明は、イミダゾオキサゾール化合物および／またはイミダゾチアゾール化合物およびそれらの合成を提供する。
【００３１】
一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物およびそれらの合成を提供する
【００３２】
【化２】
［式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である］。
【００３３】
「アルキル」という用語は、不飽和を伴わずに炭素および水素を含有する基を指す。アルキル基は、直鎖または分枝であってよい。例示的なアルキル基には、限定ではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ヘキシル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルなどが包含される。アルキル基が範囲で示されていることもあり、したがって例えば、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基は、直鎖または分枝アルキル主鎖（ｂａｃｋｂｏｎｅ）中に１から６個の炭素原子を有するアルキル基である。置換および非置換アルキル基は独立に、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキルまたは（Ｃ５〜Ｃ１０）アルキルであってよい。特に述べられていない限り、「アルキル」という用語は、「シクロアルキル」を包含しない。「低級アルキル」という用語は、非分枝または分枝（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを指す。
【００３４】
「シクロアルキル」基は、「環部分」に示されている数の炭素原子を有する環式アルキル基を指し、ここで、「環部分」は、縮合環構造、スピロ環構造または架橋環構造としての１個または複数の環構造からなってもよい。例えば、Ｃ３からＣ６シクロアルキル基（例えば、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル）は、環中に３から６個の間の炭素原子を有する環構造である。範囲が示されていない場合、シクロアルキルは、３から９個の間の炭素原子（（Ｃ３〜Ｃ９）シクロアルキル）を環部分に有する。例示的なシクロアルキル基には、これらに限られないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびアダマンチルが包含される。好ましいシクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９個または３から９個の炭素原子を環構造中に有する。
【００３５】
「アリール」という用語は、１、２または３個の芳香環を有する芳香族炭素環式基を指す。例示的なアリール基には、限定ではないが、フェニル、ナフチルなどが包含される。アリール基には、１個または複数の追加の４〜９員を有する非芳香族炭素環式環または複素環式（ｈｅｔｅｒｃｙｃｌｉｃ）環と縮合している１、２または３個の芳香環構造が包含される。縮合アリール基の例には、ベンゾシクロブタニル、インダニル、テトラヒドロナプチレニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎａｐｔｈｙｌｅｎｙｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレニル、テトラヒドロアントラセニル、１，４−ジヒドロ−１，４−メタノナフタレニル、ベンゾジオキソリルが包含される。
【００３６】
「ヘテロアリール」という用語は、１〜４個のヘテロ原子（窒素、イオウまたは酸素など）を芳香環中に含有する，１、２または３個の芳香環を有するヘテロ芳香族（ヘテロアリール）基を指す。ヘテロアリール基には、４〜９員を有する１個または複数の追加の非芳香環と縮合している、１〜４個のヘテロ原子を含有する１、２または３個の芳香環構造が包含される。芳香環中に単一の種類のヘテロ原子（ｈｅｔｒｏａｔｏｍ）を含有するヘテロアリール基は、それらが含有するヘテロ原子の種類により示され、したがって、窒素含有ヘテロアリール、酸素含有ヘテロアリールおよびイオウ含有ヘテロアリールは、１個または複数の窒素、酸素またはイオウ原子をそれぞれ含有するヘテロ芳香族基を示す。例示的なヘテロアリール基には、限定ではないが、ピリジル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリル、キナゾリニル、チアゾリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、フラニル、イミダゾリル、インドリルなどが包含される。
【００３７】
「ヘテロシクリル」または「複素環」という用語は、縮合、スピロまたは架橋して、追加の環を形成していてもよい飽和または不飽和のいずれかの安定な非芳香環構造を指す。各複素環は、１個または複数の炭素原子ならびに窒素、酸素およびイオウからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子からなる。「ヘテロシクリル」または「複素環」には、安定な非芳香族３〜７員の単環式複素環構造および８〜１１員の二環式複素環構造が包含される。ヘテロシクリル基は、任意の環内炭素または窒素原子の所で結合して、安定な構造を作り出していてもよい。好ましい複素環には、３〜７員の単環式複素環（より好ましくは５〜７員の単環式複素環）および８〜１０員の二環式複素環が包含される。このような基の例には、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソピペリジニル、オキソピロリジニル、オキソアゼピニル、アゼピニル、イソオキソゾリル（ｉｓｏｘｏｚｏｌｙｌ）、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソリル、ジオキシニル、オキサチオリル、ジチオリル、スルホラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、テタヒドロフロジヒドロフラニル（ｔｅｔａｈｙｄｒｏｆｕｒｏｄｉｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｙｌ）、テトラヒドロピラノジヒドロ−フラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロフロフラニル、テトラヒドロピラノフラン、キヌクリジニル（１−アザビシクロ［２．２．２］オクタニル）およびトロパニル（８−メチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタニル）が包含される。
【００３８】
置換アルキル、置換シクロアルキル、置換アリールおよび置換ヘテロシクリルという用語は、フッ素、アリール、ヘテロアリール、─Ｏ─（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび─ＮＲ５Ｒ６からなる群から独立に選択される１個または複数の置換基で置換されている上記で定義された通りのアルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロシクリル基を指し、ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素および─（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルからなる群から独立に選択される。
【００３９】
本発明の化合物の全ての立体異性体は、ラセミ混合物の結晶形態および個々の異性体の結晶形態を包含する混合物で、または純粋な形態もしくは実質的に純粋な形態で企図される。本発明による化合物の定義には、全ての可能な立体異性体（例えば、各不斉中心でのＲおよびＳ配置）およびそれらの混合物が包含される。本発明による化合物の定義には、規定の活性を有するラセミ体および単離された光学異性体が特に包含される。ラセミ体は、例えば、分別結晶化、ジアステレオ異性体誘導体の分離または結晶化、キラルカラムクロマトグラフィーまたは超臨界流体クロマトグラフィーによる分離などの物理的方法により分割することができる。個々の光学異性体は、ラセミ化合物から、例えば光学的に活性な酸での塩形成、それに続く結晶化などの従来の方法により得ることができる。さらに、二重結合の所でのＥおよびＺ配置などの全ての幾何異性体が、別段に述べられていない限り、本発明の範囲内である。本発明のある種の化合物は、互変異性体形態で存在することがある。化合物のこのような互変異性体形態は全て、別段に述べられていない限り、本発明の範囲内であると考えられる。本発明はまた、類似体または誘導体の１種または複数の位置異性体混合物を包含する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「塩」という用語は、薬学的に許容される塩であり、塩酸塩、臭化水素酸塩を包含する酸付加塩、加えて、リン酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、乳酸塩および酒石酸塩などの塩基の付加により形成される塩が包含され得る。塩には、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｌｉ＋などのアルカリ金属カチオン、Ｍｇ２＋もしくはＣａ２＋などのアルカリ土類金属塩または有機アミン塩が包含されてよい。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「代謝産物」という用語は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、類似体もしくは誘導体の代謝による産物を意味し、これは、本発明の前記化合物と同様の活性をｉｎ ｖｉｖｏで示す。
【００４２】
本発明の実施形態では、化合物は、Ｒ２およびＲ３が水素である式Ｉの化合物である。
【００４３】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｒ４が水素である式Ｉの化合物である。
【００４４】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｒ１が水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５である式Ｉの化合物である。
【００４５】
本発明の関連実施形態では、Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５である。
【００４６】
本発明のさらに他の実施形態では、各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよい。
【００４７】
関連実施形態では、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択される。
【００４８】
本発明の他の実施形態では、化合物は、ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくなく、配置がＲである式１の化合物である。本明細書で使用される場合、分子の配置は、その原子の空間配置から生じている永続的な幾何配置（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ｇｅｏｍｅｔｒｙ）である。配置は、ＲまたはＳのいずれかであってよく、ＵＩＰＡＣ規則に従って定義される。１個を超える不斉原子が分子中に存在する場合、それぞれが、配置ＲまたはＳのいずれかとして定義される。
【００４９】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｚが水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６がアルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである式Ｉの化合物である。
【００５０】
本発明の実施形態では、化合物は、表１に列挙されている化合物１〜２４のうちの１つである。
【００５１】
本発明の実施形態では、化合物は、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される。
【００５２】
本発明の他の実施形態では、化合物は、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される。
【００５３】
ある種の実施形態は、Ｒ７がＨである対応する式Ｉの化合物のプロドラッグ形態として役立ち得る式Ｉの化合物を包含する。機械論的な説明に拘束されることは意図していないが、プロドラッグ形態は、加水分解により開裂されて、Ｒ７がＨである対応する化合物を放出することができる。加水分解は、Ｒ７がＨである式Ｉをもたらす酵素によるか、または酵素によらない経路により生じ得る。別法では、加水分解は、対応するヒドロキシメチレン誘導体をもたらすことができ、これは、続く加水分解で、Ｒ７がＨである化合物の放出をもたらし得る。このような一実施形態では、Ｒ７は（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５であり、ここで、ｏは０〜２である。好ましい実施形態では、Ｒ４およびＲ５は水素である。さらなる好ましい実施形態では、ｏは１であり、Ｒ４およびＲ５は水素である。
【００５４】
２．本発明の化合物を調製する方法およびそのための中間体
有機分子の調製ならびに保護基の使用を包含する官能基の変換および操作のための標準的な合成方法および手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な参考の教科書から入手可能である。いずれか１つまたはいくつかの情報源に限定されないが、有機合成で認知されている参考の教科書には：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．；Ｍａｒｃｈ，Ｊ．Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、第５版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年；およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年が包含される。下記の合成方法の記載は、本発明の化合物を調製するための一般手順を説明するために設計したものであって、限定するためのものではない。
【００５５】
本発明の化合物は、様々な方法で調製することができ、そのうちのいくつかは、当技術分野で公知である。一般に、本発明の化合物は、市販の出発物質、文献で公知の化合物または容易に調製される中間体から、当業者に公知か、または本明細書の教示を考慮すれば当業者には明らかである標準的な合成方法および手順を使用することにより調製することができる。有機分子の調製ならびに官能基の変換および操作のための標準的な合成方法および手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な教科書から入手可能である。本発明で使用される中間体を合成するための詳細は、ＰＣＴ特許公開ＷＯ２００４／１１０９９０およびＷＯ２００６／０４４８６９およびＷＯ２００７／１２３８９２で見出すことができる。
【００５６】
本発明のイミダゾオキサゾール化合物およびイミダゾチアゾール化合物を調製する方法は、下記の実施例に記載されており、図１に図説されている。図１では、中間体ＩＩをオキシ塩化リンとピリジン中で反応させ、水でクエンチして、リン酸二水素塩ＩＩＩを得る。別法では、化合物ＩＩを初めに、水素化ナトリウムをＤＭＦ中で使用して脱プロトン化させ、次いで、ヨウ化テトラブチルアンモニウムの存在下に、適切なリン酸クロロメチルで処理して、中間体ＩＶを得る。リン酸二水素塩Ｖへの変換は、ＴＦＡをＤＣＭ中で使用するか、または４０〜５０℃のアセトン中の水などのより穏やかな条件を使用して達成する。リン酸二水素塩を場合によって、水酸化ナトリウムまたは他の塩基の水溶液を使用してナトリウムまたは他の薬学的に許容される塩に変換する。
【００５７】
３．治療方法
本発明の化合物は、癌などの細胞増殖性障害を治療および／または予防するために使用することができる。本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩またはその代謝産物は、１種または複数のＲＡＦタンパク質キナーゼを阻害し得る。したがって、該化合物を、異常なＲＡＳ−ＲＡＦシグナル伝達により特徴付けられる細胞増殖性障害を治療するために使用することができる。一実施形態では、癌などの細胞増殖性障害の細胞は、変異したＢ−ＲＡＦを内包している。さらなる実施形態では、変異しているＢ−ＲＡＦは、Ｖ６００Ｅ変異を有するＢ−ＲＡＦ（Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅ）である。細胞増殖性障害は、黒色腫、乳頭状甲状腺癌、結腸癌であってよい。
【００５８】
本発明はまた、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅにより特徴付けられる任意の他の状態、例えば、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅを有する先天性母斑（あざまたはそばかすとして一般には公知）をイミダゾオキサゾール化合物および／またはイミダゾチアゾール化合物で治療する方法を提供する。さらなる実施形態では、本発明を、このような母斑が悪性黒色腫へと進展することを防ぐために予防的に（例えば、皮膚に局所投与）使用することができる。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「被験体」は、任意の哺乳動物、例えばヒト、霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダであってよい。好ましい態様では、被験体はヒトである。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「それを必要とする被験体」は、細胞増殖性障害を有する被験体、または、全人口（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｔ ｌａｒｇｅ）と比べて細胞増殖性障害を発症する危険性が高い被験体である。一態様では、それを必要とする被験体は前癌性状態を有する。好ましい態様では、それを必要とする被験体は癌を有する。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「細胞増殖性障害」という用語は、細胞の非制御または異常な増殖またはその両方が、癌性であり得るか、または癌性ではあり得ない、望ましくない状態または疾患の発症をもたらし得る状態を指す。一態様では、細胞増殖性障害には、非癌性状態、例えば、関節リウマチ；炎症；自己免疫疾患；リンパ球増殖性状態；先端巨大症；リウマチ様脊椎炎；変形性関節症；通風、他の関節炎状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素性ショック；グラム陰性敗血症；毒性ショック症候群；喘息；成人呼吸窮迫症候群；慢性閉塞性肺疾患；慢性肺炎症；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性大腸炎；膵臓線維症；肝線維症；急性および慢性腎疾患；過敏性腸症候群；発熱（ｐｙｒｅｓｉｓ）；再狭窄；大脳マラリア；発作（ｓｔｒｏｋｅ）および虚血性損傷；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性および慢性疼痛；アレルギー性鼻炎；アレルギー性結膜炎；慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；ハンセン病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液嚢炎；腱炎；腱滑膜炎；ヘルニア様か、破断または脱出した椎間円板症候群；骨化石症；血栓症；再狭窄；珪肺症；肺サルコーシス；骨粗鬆症などの骨吸収疾患；移植片対宿主反応；多発性硬化症；狼瘡；線維筋痛症；ＡＩＤＳおよび帯状ヘルペス、単純ヘルペスＩまたはＩＩ、インフルエンザウイルスおよびサイトメガロウイルスなどの他のウイルス性疾患；ならびに糖尿病が包含される。他の態様では、細胞増殖性障害には、前癌または前癌性状態が包含される。他の態様では、細胞増殖性障害には、癌が包含される。治療される様々な癌には、これらに限られないが、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍およびリンパ系腫瘍が包含され、これには、原発腫瘍部位から離れた他の組織または臓器での転移病変が包含される。治療される癌には、これらに限られないが、肉腫、癌腫および腺癌が包含される。一態様では、「前癌細胞」または「前癌性細胞」は、前癌または前癌性状態である細胞増殖性障害が現れている細胞である。他の態様では、「癌細胞」または「癌性細胞」は、癌である細胞増殖性障害が現れている細胞である。任意の再現性のある測定手段を使用して、癌細胞または前癌性細胞を同定することができる。好ましい態様では、癌細胞または前癌性細胞を、組織試料（例えば、生検試料）の組織学的型別またはグレード評価により同定する。他の態様では、癌細胞または前癌性細胞を、適切な分子マーカーを使用して同定する。
【００６２】
「結腸の細胞増殖性障害」は、結腸の細胞に関する細胞増殖性障害である。好ましい態様では、結腸の細胞増殖性障害は、結腸癌である。好ましい態様では、本発明の組成物を使用して、結腸癌または結腸の細胞増殖性障害を治療することができる。一態様では、結腸癌には、結腸の癌の全ての形態が包含される。他の態様では、結腸癌には、散発性および遺伝性結腸癌が包含される。他の態様では、結腸癌には、悪性結腸新生物、上皮内癌、定型類癌腫および非定型類癌腫が包含される。他の態様では、結腸癌には、腺癌、扁平上皮癌および腺扁平上皮癌が包含される。他の態様では、結腸癌は、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌、家族性腺腫様ポリポーシス、ガードナー症候群、ポイツ−ジェガース症候群、ターコット症候群および若年性ポリポーシスからなる群から選択される遺伝性症候群と関連している。他の態様では、結腸癌は、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌、家族性腺腫様ポリポーシス、ガードナー症候群、ポイツ−ジェガース症候群、ターコット症候群および若年性ポリポーシスからなる群から選択される遺伝性症候群が原因である。
【００６３】
一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、結腸細胞に影響を及ぼす細胞増殖性障害の全ての形態が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、結腸癌、結腸の前癌性状態、結腸の腺腫様ポリープおよび結腸の異時性病変が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、腺腫が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害は、結腸の過形成、化生および異形成により特徴付けられる。他の態様では、個人に結腸の細胞増殖性障害を発症しやすくし得る前結腸疾患には、前結腸癌が包含される。他の態様では、個人に結腸の細胞増殖性障害を発症しやすくし得る現存する疾患には、クローン病および潰瘍性大腸炎が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害は、ｐ５３、ｒａｓ、ＦＡＰおよびＤＣＣからなる群から選択される遺伝子での変異に関連している。他の態様では、ｐ５３、ｒａｓ、ＦＡＰおよびＤＣＣからなる群から選択される遺伝子に変異が存在することにより、個人は、結腸の細胞増殖性障害を発症する危険性が高い。
【００６４】
「皮膚の細胞増殖性障害」は、皮膚の細胞に関する細胞増殖性障害である。一態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚細胞に影響を及ぼす細胞増殖性障害の全ての形態が包含される。一態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の前癌または前癌性状態、皮膚の良性増殖または病変、黒色腫、悪性黒色腫および皮膚の他の悪性増殖または病変ならびに皮膚以外の身体の組織および臓器での転移病変が包含される。他の態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の過形成、化生および異形成が包含される。
【００６５】
一態様では、治療される癌はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）ＴＮＭ分類系に従って病期分類されており、この際、腫瘍（Ｔ）は、ＴＸ、Ｔ１、Ｔ１ｍｉｃ、Ｔ１ａ、Ｔ１ｂ、Ｔ１ｃ、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ４ａ、Ｔ４ｂ、Ｔ４ｃまたはＴ４ｄのステージに指定され；局所リンパ節（Ｎ）は、ＮＸ、Ｎ０、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ２ａ、Ｎ２ｂ、Ｎ３、Ｎ３ａ、Ｎ３ｂまたはＮ３ｃのステージに指定され；遠隔転移（Ｍ）は、ＭＸ、Ｍ０またはＭ１のステージに指定される。他の態様では、治療される癌は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）分類に従って、ステージＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩＡ、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶとして病期分類されている。他の態様では、治療される癌は、ＡＪＣＣ分類に従ったグレードを、グレードＧＸ（例えば、グレードを指定することができない）、グレード１、グレード２、グレード３またはグレード４として指定されている。他の態様では、治療される癌は、ｐＮＸ、ｐＮ０、ＰＮ０（Ｉ−）、ＰＮ０（Ｉ＋）、ＰＮ０（ｍｏｌ−）、ＰＮ０（ｍｏｌ＋）、ＰＮ１、ＰＮ１（ｍｉ）、ＰＮ１ａ、ＰＮ１ｂ、ＰＮ１ｃ、ｐＮ２、ｐＮ２ａ、ｐＮ２ｂ、ｐＮ３、ｐＮ３ａ、ｐＮ３ｂまたはｐＮ３ｃのＡＪＣＣ病理分類（ｐＮ）に従って病期分類されている。
【００６６】
一態様では、治療される癌には、直径約２センチメートル以下であると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径約２から約５センチメートルであると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径約３センチメートル以上であると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径５センチメートルを超えると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、十分に分化、中程度分化、軽度分化（ｐｏｏｒｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）または未分化と分類される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、有糸分裂数（例えば、細胞分裂量）または核多態性（例えば、細胞変化）に関して分類される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、壊死の領域（例えば、死んでいるか、または変性している細胞の領域）と関連していると分類される。一態様では、治療される癌は、異常な核型を有するか、異常な数の染色体を有するか、または外観が異常な１種または複数の染色体を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、異数体、三倍体、四倍体であると、または倍数性の変化を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、染色体転座または染色体全体の欠失もしくは重複または染色体の一部の欠失、重複もしくは増幅の領域を有すると分類される。
【００６７】
一態様では、治療される癌を、ＤＮＡサイトメトリー、フローサイトメトリーまたはイメージサイトメトリーにより評価する。一態様では、治療される癌は、細胞分裂の合成期の（例えば、細胞分裂のＳ期の）細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、低いＳ期の割合または高いＳ期の割合を有すると分類される。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「正常細胞」は、「細胞増殖性障害」の一部として分類され得ない細胞である。一態様では、正常細胞は、望ましくない状態または疾患の発症をもたらし得る非制御もしくは異常な増殖またはその両方を欠いている。好ましくは、正常細胞は、正常に機能している細胞周期チェックポイント制御機構を有する。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「細胞と接触」とは、化合物または他の組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｔｅｒ）が細胞と直接接触しているか、または細胞において所望の生物学的効果を誘導するのに十分に近い状態を指す。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「候補化合物」は、その化合物が、研究者または臨床家が求めている所望の生物学的または医学的応答を細胞、組織、系、動物またはヒトにおいて顕在化できるかどうかを決定するために、１種または複数のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ生物学的アッセイで試験されているか、または試験される予定の本発明の化合物を指す。一態様では、候補化合物は、式Ｉの化合物である。好ましい態様では、生物学的または医学的応答は、癌の治療である。他の態様では、生物学的または医学的応答は、細胞増殖性障害の治療または予防である。一態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ生物学的アッセイには、これらに限られないが、酵素活性アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞生死判別アッセイが包含される。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「単独療法」は、単独の活性化合物または治療化合物をそれを必要とする被験体に投与することを指す。好ましくは、単独療法は、治療有効量の活性化合物を投与することを伴うことになる。例えば、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートでの癌単独療法は、治療有効量の（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体を、癌の治療を必要とする被験体に投与することを含む。単独療法は、複数の活性化合物の組合せを投与し、好ましくは組合せの各成分が治療有効量で存在する併用療法と対比することができる。一態様では、本発明の化合物での単独療法は、所望の生物学的効果をもたらす際に、併用療法よりも有効である。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「治療すること」は、疾患、状態または障害と闘うのを目的とする、患者の管理およびケアを記載するものであり、症状または合併症の発症を阻止するか、症状または合併症を緩和するか、または疾患、状態または障害を排除するために、本発明の化合物を投与することを包含する。
【００７３】
一態様では、癌を治療すると、腫瘍のサイズの縮小が生じる。腫瘍のサイズの縮小は、「腫瘍退縮」と称されることもある。好ましくは、治療後に、腫瘍サイズは、治療前のそのサイズに比較して５％以上縮小し；より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上縮小し；より好ましくは、２０％以上縮小し；より好ましくは、３０％以上縮小し；より好ましくは、４０％以上縮小し；なおより好ましくは、５０％以上縮小し；最も好ましくは、７５％超またはそれ以上縮小する。腫瘍のサイズは、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍のサイズは、腫瘍の直径として測定することができる。
【００７４】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍体積の縮小が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍体積は、治療前のそのサイズに比較して５％以上縮小し；より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上縮小し；より好ましくは、２０％以上縮小し；より好ましくは、３０％以上縮小し；より好ましくは、４０％以上縮小し；なおより好ましくは、５０％以上縮小し；最も好ましくは、７５％超またはそれ以上縮小する。腫瘍の体積は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。
【００７５】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍の数の減少が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍の数は、治療前の数に比較して５％以上減少し；より好ましくは、腫瘍の数は、１０％以上減少し；より好ましくは、２０％以上減少し；より好ましくは、３０％以上減少し；より好ましくは、４０％以上減少し；なおより好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超減少する。腫瘍の数は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍の数は、肉眼か、または規定の倍率で見ることができる腫瘍をカウントすることにより測定することができる。好ましい態様では、規定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×または５０×である。
【００７６】
他の態様では、癌を治療すると、原発腫瘍部位から遠隔の他の組織または臓器における転移病変の数の減少が生じる。好ましくは、治療後に、転移病変の数は、治療前の数に比較して５％以上減少し；より好ましくは、転移病変の数は、１０％以上減少し；より好ましくは、２０％以上減少し；より好ましくは、３０％以上減少し；より好ましくは、４０％以上減少し；なおより好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超減少する。転移病変の数は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、転移病変の数は、肉眼か、または規定の倍率で見ることができる転移病変をカウントすることにより測定することができる。好ましい態様では、規定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×または５０×である。
【００７７】
他の態様では、癌を治療すると、担体だけを与えられた集団と比較して、治療された被験体集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００７８】
他の態様では、癌を治療すると、未治療の被験体の集団と比較して、治療被験体の集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００７９】
他の態様では、癌を治療すると、本発明の化合物ではないまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体ではない薬物での単独療法を受けた集団と比較して、治療被験体の集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００８０】
他の態様では、癌を治療すると、担体のみを与えられた集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。他の態様では、癌を治療すると、未治療の集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。さらなる態様では、癌を治療すると、本発明の化合物ではないまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体ではない薬物での単独療法を受けた集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。好ましくは、死亡率は、２％より大きく；より好ましくは、５％より大きく；より好ましくは、１０％より大きく；最も好ましくは、２５％より大きく低下する。好ましい態様では、治療被験体の集団の死亡率の低下は、任意の再現性のある手段により測定することができる。他の好ましい態様では、集団の死亡率の低下は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の単位期間当たりの疾患関連死の平均数を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の死亡率の低下はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の単位期間当たりの疾患関連死の平均数を算出することにより測定することができる。
【００８１】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍増殖速度の低下が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍増殖速度は、治療前の数値に対して少なくとも５％低下し；より好ましくは、腫瘍増殖速度は、少なくとも１０％低下し；より好ましくは、少なくとも２０％低下し；より好ましくは、少なくとも３０％低下し；より好ましくは、少なくとも４０％低下し；より好ましくは、少なくとも５０％低下し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低下し；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。腫瘍増殖速度は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍増殖速度を、単位期間当たりの腫瘍直径の変化により測定する。
【００８２】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍再増殖の低減が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍再増殖は５％未満であり；より好ましくは、腫瘍再増殖は、１０％未満；より好ましくは、２０％未満；より好ましくは、３０％未満；より好ましくは、４０％未満；より好ましくは、５０％未満；なおより好ましくは、５０％未満；最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再増殖は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍再増殖を、例えば、治療後の先行する腫瘍退縮（ｐｒｉｏｒ ｔｕｍｏｒ ｓｈｉｒｉｎｋａｇｅ）後からの腫瘍の直径の増大を測定することにより測定する。他の好ましい態様では、腫瘍再増殖の低減は、治療を止めた後に腫瘍が再発し得ないことにより示される。
【００８３】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞増殖速度の低下が生じる。好ましくは、治療後には、細胞増殖速度は、少なくとも５％；より好ましくは、少なくとも１０％；より好ましくは、少なくとも２０％；より好ましくは、少なくとも３０％；より好ましくは、少なくとも４０％；より好ましくは、少なくとも５０％；なおより好ましくは、少なくとも５０％；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖速度は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、細胞増殖速度を、例えば、単位期間当たりの組織試料における分裂細胞の数を測定することにより測定する。
【００８４】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、増殖細胞の割合の低下が生じる。好ましくは、治療の後に、増殖細胞の割合は、少なくとも５％；より好ましくは、少なくとも１０％；より好ましくは、少なくとも２０％；より好ましくは、少なくとも３０％；より好ましくは、少なくとも４０％；より好ましくは、少なくとも５０％；なおより好ましくは、少なくとも５０％；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。増殖細胞の割合は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、増殖細胞の割合を、例えば、組織試料中の非分裂細胞の数に対して、分裂細胞の数を定量化することにより測定する。他の好ましい態様では、増殖細胞の割合は、有系分裂指数に等しい。
【００８５】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞増殖の領域または帯のサイズの低減が生じる。好ましくは、治療の後に、細胞増殖の領域または帯のサイズは、治療前のそのサイズに対して少なくとも５％低減し；より好ましくは、少なくとも１０％低減し；より好ましくは、少なくとも２０％低減し；より好ましくは、少なくとも３０％低減し；より好ましくは、少なくとも４０％低減し；より好ましくは、少なくとも５０％低減し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低減し；最も好ましくは、少なくとも７５％低減する。細胞増殖の領域または帯のサイズは、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、細胞増殖の領域または帯のサイズは、細胞増殖の領域または帯の直径または幅として測定することができる。
【００８６】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、異常な外観または形態を有する細胞の数または割合の低減が生じる。好ましくは、治療の後に、異常な形態を有する細胞の数は、治療前のそのサイズに対して少なくとも５％低減し；より好ましくは、少なくとも１０％低減し；より好ましくは、少なくとも２０％低減し；より好ましくは、少なくとも３０％低減し；より好ましくは、少なくとも４０％低減し；より好ましくは、少なくとも５０％低減し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低減し；最も好ましくは、少なくとも７５％低減する。異常な細胞外観または形態は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。一態様では、異常な細胞形態を、顕微鏡により、例えば、倒立組織培養顕微鏡を使用して測定する。一態様では、異常な細胞形態は、核多態性の形態を取る。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「選択的に」という用語は、他の集団においてよりもある集団においてより高い頻度で生じる傾向を意味する。一態様では、比較される集団は、細胞集団である。好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、類似体もしくは誘導体は、癌または前癌性細胞に選択的に作用するが、正常細胞には作用しない。他の好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、類似体もしくは誘導体は、ある分子標的（例えば、Ｂ−ＲＡＦ）を調整するように選択的に作用する。他の好ましい態様では、本発明は、キナーゼなどの酵素の活性を選択的に阻害する方法を提供する。好ましくは、ある事象が、集団Ｂと比較して２倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は、集団Ｂに比べて集団Ａにおいて選択的に生じている。より好ましくは、ある事象が、５倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は選択的に生じる。より好ましくは、ある事象が、集団Ｂと比較して集団Ａにおいて１０倍を超える高い頻度で；より好ましくは、５０倍を超える；なおより好ましくは、１００倍を超える；最も好ましくは、１０００倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は選択的に生じている。例えば、細胞死が、正常細胞と比較して２倍を超える頻度で癌細胞において生じるならば、細胞死が癌細胞において選択的に生じていると言える。
【００８８】
好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、分子標的（例えば、Ｂ−ＲＡＦ）の活性を調整する。一態様では、調整とは、分子標的の活性を刺激または阻害することを指す。好ましくは、本発明の化合物は、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して少なくとも２倍、分子標的の活性を刺激または阻害しているならば、分子標的の活性を調整している。より好ましくは、本発明の化合物は、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、分子標的の活性を刺激または阻害しているならば、分子標的の活性を調整している。分子標的の活性は、任意の再現性のある手段により測定することができる。分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。例えば、分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、酵素活性アッセイまたはＤＮＡ結合アッセイにより測定することができるか、または分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、レポーター遺伝子の発現に関するアッセイにより測定することができる。
【００８９】
一態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、該化合物の添加が、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して１０％を超えて分子標的の活性を刺激または阻害しないならば、分子標的の活性を顕著には調整していない。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「アイソザイム選択的」という用語は、酵素の第２アイソフォームに比較して、酵素の第１アイソフォームの優先的な阻害または刺激を意味する（例えば、キナーゼアイソザイムベータに比較してのキナーゼアイソザイムアルファの優先的な阻害または刺激）。好ましくは、本発明の化合物は、生物学的効果を達成するのに必要な用量において、少なくとも４倍の差、好ましくは１０倍の差、より好ましくは５０倍の差を実証している。好ましくは、本発明の化合物は、阻害の範囲にわたって、この差を実証し、この差は、例えば、ＩＣ５０、即ち、該当する分子標的に対する５０％阻害で示される。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を、それを必要とする細胞または被験体に投与すると、ＲＡＦの活性の調整（即ち、刺激または阻害）が生じる。本明細書で使用される場合、ＲＡＦの活性は、ＲＡＦにより実行される任意の生物学的機能または活性を指す。例えば、ＲＡＦの機能には、下流標的タンパク質のリン酸化が包含される。
【００９２】
好ましい実施形態では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を、それを必要とする細胞または被験体に投与すると、ＥＲＫ１もしくはＥＲＫ２またはその両方の活性の調整（即ち、刺激または阻害）が生じる。本明細書で使用される場合、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２の活性は、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２により行なわれる任意の生物学的機能または活性を指す。例えば、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２の機能には、下流標的タンパク質のリン酸化が包含される。
【００９３】
一態様では、活性化とは、組成物（例えば、タンパク質または核酸）を所望の生物学的機能を行うのに適した状況にすることを指す。一態様では、活性化され得る組成物はまた、非活性化状況も有する。一態様では、活性化された組成物は、阻害または刺激の生物学的機能またはその両方を有することもある。
【００９４】
一態様では、上昇は、組成物（例えば、タンパク質または核酸）の所望の生物学的活性の増大を指す。一態様では、上昇は、組成物の濃度の増大を介して生じ得る。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「細胞周期チェックポイント経路」は、細胞周期チェックポイントを調整することに関与している生化学的経路を指す。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周期チェックポイントを含む１種または複数の機能に対して刺激もしくは阻害作用またはその両方の作用を有し得る。細胞周期チェックポイント経路は、その両方が細胞周期チェックポイントを調整するのに寄与する少なくとも２種の組成物、好ましくはタンパク質からなる。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周期チェックポイント経路の１つまたは複数のメンバーの活性化を介して活性化され得る。好ましくは、細胞周期チェックポイント経路は、生化学的シグナル伝達経路である。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「細胞周期チェックポイント調節因子」は、少なくとも部分的に、細胞周期チェックポイントを調整する際に機能し得る組成物を指す。細胞周期チェックポイント調節因子は、細胞周期チェックポイントを含む１つまたは複数の機能に対して、刺激もしくは阻害作用またはその両方の作用を有してよい。一態様では、細胞周期チェックポイント調節因子は、タンパク質である。他の態様では、細胞周期チェックポイント調節因子は、タンパク質ではない。
【００９７】
一態様では、癌または細胞増殖性障害を治療すると、細胞死が生じ、好ましくは、細胞死は、集団中の細胞の数の少なくとも１０％の低減をもたらす。より好ましくは、細胞死は、少なくとも２０％の低減；より好ましくは、少なくとも３０％の低減；より好ましくは、少なくとも４０％の低減；より好ましくは、少なくとも５０％の低減；最も好ましくは、少なくとも７５％の低減を意味する。集団における細胞の数は、任意の再現性のある手段により測定することができる。一態様では、集団における細胞の数を、蛍光活性化細胞分取器（ＦＡＣＳ）により測定する。他の態様では、集団における細胞の数を、免疫蛍光顕微鏡検査法により測定する。他の態様では、集団における細胞の数を、光学顕微鏡検査法により測定する。他の態様では、細胞死を測定する方法は、Ｌｉら、（２００３年）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １００巻（５号）：２６７４〜８頁に示されている通りである。一態様では、細胞死は、アポトーシスにより生じる。
【００９８】
好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の有効量は、正常細胞に対して重大な細胞傷害性を有さない。化合物の治療有効量は、治療有効量での化合物の投与が、正常細胞の１０％を超える細胞死をもたらさないならば、正常細胞に対して重大な細胞傷害性を有さない。化合物の治療有効量は、治療有効量での化合物の投与が、正常細胞の１０％を超える細胞死をもたらさないならば、正常細胞の生存率に重大な影響を有さない。一態様では、細胞死は、アポトーシスにより生じる。
【００９９】
一態様では、細胞と本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体との接触は、癌細胞において選択的に細胞死を誘発または活性化させる。好ましくは、それを必要とする被験体への本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、癌細胞において選択的に細胞死を誘発または活性化させる。他の態様では、細胞と本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体との接触は、細胞増殖性障害の影響を受けている１種または複数の細胞において選択的に細胞死を誘発する。好ましくは、それを必要とする被験体への本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、細胞増殖性障害の影響を受けている１種または複数の細胞において選択的に細胞死を誘発する。好ましい態様では、本発明は、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体をそれを必要とする被験体に投与することにより癌を治療または予防する方法に関し、ここで、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、下記のうちの１個または複数をもたらす：細胞周期のＧ１および／またはＳ期にある細胞の蓄積、正常細胞において重大な量の細胞死を伴うことのない癌細胞における細胞死を介しての細胞傷害性、少なくとも２の治療指数での動物における抗腫瘍活性および細胞周期チェックポイントの活性化。本明細書で使用される場合、「治療指数」は、有効用量で割った最大許容用量である。
【０１００】
当業者であれば、本明細書で論じている公知の技術または同等の技術の詳細な記載に関して一般的な参考テキストを参照することができる。これらのテキストには、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００５年）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第３版）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０００年）；Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．；Ｅｎｎａら、Ｃｕｒｒｅｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．；Ｆｉｎｇｌら、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１９７５年）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、第１８版（１９９０年）が包含される。勿論これらのテキストはまた、本発明の態様を行うまたは使用する際に参照することもできる。
【０１０１】
追加的な態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を第２の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。第２の化学療法剤は、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬であってよい。好ましい態様では、化学療法剤は、これらに限られないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（イマチニブ）、ＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル）、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ａｒａＣ、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル）、ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標）（ゴセレリン）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシンもしくはイダルビシンまたはオンラインで得られるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ’ｓ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓに列挙されている薬剤（ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｄｏｃｒｏｏｔ／ｃｄｇ／ｃｄｇ＿０．ａｓｐを参照のこと）であってよい。他の態様では、第２の化学療法剤は、Ｇ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）などのサイトカインであってよい。他の態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、放射線療法と組み合わせて投与してもよい。まだ他の態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、これらに限られないが、ＣＭＦ（シクロホスファミド、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル）、ＣＡＦ（シクロホスファミド、アドリアマイシンおよび５−フルオロウラシル）、ＡＣ（アドリアマイシンおよびシクロホスファミド）、ＦＥＣ（５−フルオロウラシル、エピルビシンおよびシクロホスファミド）、ＡＣＴもしくはＡＴＣ（アドリアマイシン、シクロホスファミドおよびパクリタキセル）またはＣＭＦＰ（シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシルおよびプレドニゾン）などの標準的な化学療法剤の組合せと組み合わせて投与してもよい。
【０１０２】
本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、投与に適した薬学的組成物に組み込むことができる。このような組成物は典型的には、化合物（即ち、活性化合物を包含する）および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合する任意のそして全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含することが意図されている。適切な担体は、当分野の標準的な参考テキストである、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。このような担体または希釈剤の好ましい例には、これらに限られないが、水、食塩水、リンガー液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンが包含される。薬学的に許容される担体には、ラクトース、石膏、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などのような固体担体が包含される。例示的な液体担体には、シロップ、落花生油、オリーブ油、水などが包含される。同様に、担体または希釈剤には、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリル（単独か、またはワックスと共に）、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸メチルなどのような当技術分野で公知の時間遅延物質が包含され得る。当技術分野で公知であるような他の充填剤、賦形剤、香味剤および他の添加剤もまた、本発明による薬学的組成物中に包含されていてよい。リポソームおよび不揮発性油などの非水性ビヒクルも使用することができる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。従来の任意の媒体または薬剤が活性化合物と相容性ではない場合を除き、組成物中でそれらを使用することが企図される。補助的な活性化合物もまた、組成物中に組み込むことができる。
【０１０３】
一態様では、治療有効量（例えば、腫瘍増殖の阻害、腫瘍細胞の死滅化、細胞増殖性障害の治療または予防などを介して所望の治療効果を達成するのに十分な有効レベル）の本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体（活性成分として）を標準的な薬学的担体または希釈剤と従来の手順に従って組み合わせることにより（即ち、本発明の薬学的組成物を製造することにより）調製される適切な剤形で、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を投与する。これらの手順は、所望の調製を達成するために適するように成分を混合、顆粒化および圧縮または溶解することを伴い得る。
【０１０４】
４．薬学的組成物および製剤
本発明の薬学的組成物を、その意図する投与経路に適合するように製剤化する。投与経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）および経粘膜投与が包含される。非経口、皮内または皮下用途で使用される液剤または懸濁剤には、次の成分が包含され得る：注射用の水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌の希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調節するための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調節することができる。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量用バイアルに封入することができる。
【０１０５】
本発明の化合物または薬学的組成物は被験体に、化学療法治療のために現在使用されている周知の方法のうちの多くで投与することができる。例えば、癌を治療するためには、本発明の化合物を腫瘍に直接注射するか、血流に注射するか、もしくは体腔に注射するか、または経口摂取するか、またはパッチを用いて皮膚を介して投与することができる。選択される用量は、有効な治療を構成するのに十分であるべきであるが、許容できない副作用をもたらすほど高くあるべきではない。疾患状態（例えば、癌、前癌など）および患者の健康の状況を好ましくは、治療中および治療後の合理的な期間、密に監視すべきである。
【０１０６】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、同定されている疾患または状態を治療、回復または予防するか、または検出可能な治療または阻害効果を示す薬剤の量を指す。効果は、当技術分野で公知の任意のアッセイ方法により検出することができる。被験体のための正確な有効量は、被験体の体重、サイズ、健康；状態の性質および規模；ならびに投与のために選択された治療剤または治療剤の組合せに依存することになる。所与の状況に対する治療有効量は、臨床家の技能および判断の範囲内である日常的な実験により決定することができる。好ましい態様では、治療される疾患または状態は癌である。他の態様では、治療される疾患または状態は、細胞増殖性障害である。
【０１０７】
いずれの化合物でも、治療有効量を初めに、例えば新生物細胞の細胞培養アッセイで、または動物モデル、通常はラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタで推定することができる。動物モデルはまた、適切な濃度範囲および投与経路を決定するために使用することもできる。次いで、このような情報を使用して、ヒトでの投与に有用な用量および経路を決定することができる。治療／予防効力および毒性を、標準的な薬学的手順により、細胞培養物または実験動物で、例えば、ＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に致命的な用量）で決定することができる。毒性作用と治療効果との用量比が、治療指数であり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。投与量は、使用される剤形、患者の感受性および投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。
【０１０８】
投与量および投与を、十分なレベルの活性剤（複数可）を提供するか、または所望の効果を維持するように調節する。考慮され得る要因には、疾患状況の重症度、被験体の全身健康、被験体の年齢、体重および性別、食事、投与時間および頻度、薬物の組合せ（複数可）、治療に対する反応感受性および許容性／応答が包含される。長時間作用性薬学的組成物を、特定の製剤の半減期およびクリアランス速度に応じて３から４日ごとに、毎週、２週ごとに１回投与することができる。
【０１０９】
本発明の活性な化合物を含有する薬学的組成物を、一般に公知である方法で、例えば従来の混合、溶解、顆粒化、糖剤製造、湿式粉砕、乳化、カプセル封入、包埋または凍結乾燥法によって製造することができる。活性化合物を薬学的に使用することができる製剤へと加工することを容易にする賦形剤および／または補助剤を含む１種または複数の薬学的に許容される担体を使用する従来の方法で、薬学的組成物を製剤化することができる。勿論、適切な製剤は、選択された投与経路に依存する。
【０１１０】
注射用の使用に適した薬学的組成物には、無菌の水性液剤（水溶性の場合）または分散剤および無菌の注射用液剤または分散剤を即時調製するための無菌の散剤が包含される。静脈内投与では、適切な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が包含される。いずれの場合も、組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒体であってよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用により、分散剤の場合には、必要な粒径を維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムを包含することが好ましい。注射用組成物の吸収期間の延長は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを包含させることによりもたらされ得る。
【０１１１】
無菌の注射用液剤は、必要量の活性化合物を適切な溶媒中に、上記で列挙された成分の１つまたは組合せと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することにより調製することができる。一般に分散剤は、活性化合物を、基本の分散媒体および上記で列挙された成分から必要とされる他の成分を有する無菌ビヒクル中へ組み込むことにより調製される。無菌の注射用液剤を調製するための無菌散剤の場合、調製方法は、活性成分および任意の追加的な所望の成分の粉末を、予め無菌濾過されたその溶液から得る、真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１１２】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用の薬学的に許容される担体を包含する。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へと圧縮され得る。経口による治療投与の目的では、活性化合物を賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用することができる。経口組成物はまた、うがい薬として使用するために流体担体を使用して調製することもでき、この際、流体担体中の化合物は口中に施与されて、音を立てて吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／またはアジュバント物質が、組成物の一部として包含されてよい。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれかまたは同様の性質を有する化合物を含有することができる：微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）またはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）などの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動化促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバーなどの香味剤。
【０１１３】
吸入による投与では、化合物を、適切な噴射剤、例えば、二酸化炭素などの気体を含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器から、エアロゾル噴霧の形態で送達する。
【０１１４】
全身投与もまた、経粘膜手段または経皮手段によってよい。経粘膜投与または経皮投与では、浸透される障壁に適した浸透剤を、製剤において使用する。このような浸透剤は通常、当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が包含される。経粘膜投与は、鼻噴霧または坐剤の使用を介して達成され得る。経皮投与では、活性化合物を、当技術分野で一般的に公知の軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤中で製剤化する。
【０１１５】
一態様では、活性化合物を、制御放出製剤など、身体からの迅速な排出に対して化合物を保護する薬学的に許容される担体を用いて調製するが、これには、移植片（ｉｍｐｌａｎｔ）およびマイクロカプセル化された送達系が包含される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製する方法は、当業者には明らかである。それらの物質はまた、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞に対して標的化されたリポソームを包含する）もまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載されている通り、当業者に公知の方法に従って調製することができる。
【０１１６】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために、単位剤形（ｄｏｓａｇｅ ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）で、経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療される被験体のための単位投与量として適切な物理的に分離した単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じるように算出された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形についての詳細は、活性化合物の固有の特徴および達成されるべき特定の治療効果によって規定され、それらに直接的に依存する。
【０１１７】
治療用途では、本発明に従って使用される薬学的組成物の投与量は、選択される投与量に影響を及ぼす他の要因の中でも薬剤、受容患者の年齢、体重および臨床状態ならびに治療を与える臨床家または担当医の経験および判断に応じて変動する。一般に、用量は、腫瘍の増殖を遅くし、好ましくは退縮させ、また好ましくは癌を完全に退縮させるのに十分であるべきである。投与量は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１日当たり約３０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。好ましい態様では、投与量は、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから１日当たり約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。一態様では、用量は、約０．１ｍｇ／日から約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日から約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日から約１０ｇ／日；約０．１ｍｇから約３ｇ／日；または約０．１ｍｇから約１ｇ／日の範囲で、単回、分割または連続用量（この用量は、患者のｋｇでの体重、ｍ２での体表面積および年齢で調節することができる）となる。薬剤の有効量は、臨床家または他の有資格観察者により認められるような客観的に同定可能な改善をもたらす量である。例えば、患者における腫瘍の退縮を、腫瘍の直径に関して測定することができる。腫瘍直径の低減は、退縮を示している。退縮はまた、治療を止めた後に腫瘍が再発し得ないことによっても示される。本明細書で使用される場合、「有効な投与量」という用語は、被験体または細胞において所望の生物学的効果を生じる活性化合物の量を指す。
【０１１８】
薬学的組成物は、容器、パックまたはディスペンサーに、投与指示書と共に包含されていてよい。
【０１１９】
本明細書中で挙げられた全ての特許、特許出願および参照文献は、その全体が本明細書に参照により援用される。
【実施例】
【０１２０】
本発明の様々な特徴をさらに説明するために、下記に実施例を提供する。実施例はまた、本発明を実行するための有用な方法を説明している。これらの実施例は、特許請求されている本発明を制限するものではない。
（実施例１）
ビス−ナトリウム（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
ステップ１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルリン酸カリウムの調製
【０１２１】
【化３】
０℃で、激しく撹拌されているホスホン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４０．０ｇ、２０６．２ｍｍｏｌ）およびＫＨＣＯ３（１２．６ｇ）の水（１７８ｍｌ）中の混合物に、微粉末ＫＭｎＯ４を少量ずつ５０分にわたって加えた（注；激しい発熱反応、効果的な冷却が重要である）。添加の後に、混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、６０℃で１５分間加熱した。副生成物ＭｎＯ２を濾別した。濾液を炭（３．２ｇ）と一緒に沸騰させることにより脱色し、濾過した。濾液をさらに精製することなく、次の反応に持ち越した。
【０１２２】
ステップ２：リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
【０１２３】
【化４】
ステップ１から得られた溶液に、濃塩酸（１６ｍｌ）を０℃で撹拌しながら徐々に加えた。生成物を沈殿させ、濾過により集め、真空下で一晩乾燥させると、リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２８．３ｇが白色の針状物として得られた。
【０１２４】
ステップ３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートの調製
【０１２５】
【化５】
リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２４．９ｇ、１３３．３ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（３９．９ｇ、５３３．３ｍｍｏｌ）および硫酸水素テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（４．０ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の水（１０００ｍｌ）中の混合物に、ジクロロメタン（６２３ｍｌ）を加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌し、次いで、クロロ硫酸クロロメチル（２３．５ｇ、１６０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３７０ｍｌ）溶液を激しく撹拌しながら加えた。生じた混合物を室温で一晩（２０時間）撹拌した。有機層を分離し、ブライン（５００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮すると、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート１４．０ｇが無色のオイルとして得られた。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ５．７２（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．１４（ｓ，１８Ｈ）。
【０１２６】
ステップ４：（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）−ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
【０１２７】
【化６】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノール（２．０ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（０．１８５ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（０．４２ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｄｅ）（１５ｍｌ）中の混合物を室温で１０分間撹拌した。この混合物に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート（１．２９ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルミド（５ｍｌ）溶液を加えた。生じた混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣をジクロロメタン（１００ｍｌ）に入れ、水（１００ｍｌ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製すると、（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート１．６０ｇがオレンジ色の固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．１４−８．０５（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．１６−７．０８（ｍ，２Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），４．００−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．７８−３．７０（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．４２（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），１．９８−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．６６−１．５２（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｓ，１８Ｈ），１．３５−１．３０（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７４３。
【０１２８】
ステップ４の代替の方法
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノール（３１．５６ｇ、０．０６０６ｍｏｌ、１．０当量）およびＣｓ２ＣＯ３（３９．４９ｇ、０．１２１ｍｏｌ、２．０当量）をフラスコに投入した。ＤＭＦ（１２６ｍｌ、４体積）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌した。化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートのＤＭＦ（６３ｍｌ、３．７体積）溶液を混合物に１０分で滴加した。生じた混合物を室温で２４時間撹拌した。反応が完了した（ＨＰＬＣ：出発物質のＡＵＣ０．１７％）。ＥｔＯＡｃ（２８５ｍｌ）を加えた。混合物を激しく撹拌しながら１２℃に冷却した。水（３８０ｍｌ）を１０分で加えたが、その間、温度を２２℃未満に維持した。混合物を１０分間撹拌した。２層を分離した。水性相をＥｔＯＡｃ（２８５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１１５ｍｌ）で洗浄した。溶液を乾燥するまで蒸発させると、粗製の明赤色のオイル生成物（５５ｇ、＞１００％）が得られたが、次のステップのためにさらに精製することはなかった。
【０１２９】
ステップ５：（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートの調製
【０１３０】
【化７】
（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート（１．６８ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３４ｍｌ）中の０℃の溶液にトリフルオロ酢酸（２．６１ｍｌ、３４．０ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を室温で４５分間（または出発物質が消失するまで）撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣をエチルエーテル（１００ｍｌ）中で２時間撹拌した。生成物を遠心分離により集め、真空下で一晩乾燥させると、表題化合物１．５０ｇがオレンジ色の固体として得られた。粗製生成物を精製することなく、ステップ６でそのまま使用した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．１３−８．０８（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．２４（ｍ，３Ｈ），７．１７−７．１２（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），４．４０−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．７５−３．６８（ｍ，１Ｈ），３．４８−３．４０（ｍ，１Ｈ），２．６０（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５５−２．４５（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．４６−１．３４（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６３１。
【０１３１】
ステップ５の代替の方法
粗製（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート（２８．１５ｇ、０．０３２６ｍｏｌ）のアセトン（１２０ｍｌ）溶液を５００ｍＬフラスコに投入した。水（１２０ｍｌ）を撹拌しながら加えた。濁った混合物を５０℃に１８時間加熱した。白色の結晶質の生成物が沈殿した。次いで、混合物を５５℃まで２４時間加熱した。反応は完了した（ＨＰＬＣにより監視）。反応混合物を２０℃に冷却し、３時間撹拌し、漏斗で濾過した。ケークを水（３×１２０ｍｌ）で洗浄し、次いで、アセトン（３×１２０ｍｌ）で洗浄した。濾過用漏斗を室内減圧（ｈｏｕｓｅ ｖａｃｕｕｍ）でさらに３時間維持した。緑色がかった固体を真空炉（８０℃／２０トル）で６時間乾燥させると、所望の生成物（１７．２ｇ）が得られた。
【０１３２】
ステップ６：ビス−ナトリウム（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
【０１３３】
【化８】
撹拌棒を備えたフラスコ中の（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（２．９３ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）に、水酸化ナトリウム（５５８ｍｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）の水（３０ｍｌ）溶液を加えた。透明な溶液が生じるまで（３０分）、生じた混合物を撹拌した。透明な溶液を、５００ｍｌフラスコに移した。撹拌している間に、アセトン２００ｍｌを徐々に加えた。生じた懸濁液を１０分間撹拌し、次いで、撹拌することなく１時間放置した。液体をフラスコからデカンテーションして、廃棄した。残渣に、アセトン（２００ｍｌ）を加えた。溶液を２時間激しく撹拌した。固体生成物を遠心分離により集めた。この固体を水３０ｍｌに溶かし、アセトン２００ｍｌを撹拌しながら加えた。１０分間撹拌した後に、懸濁液を撹拌することなく２時間放置し、液体をデカンテーションした。残渣に、アセトン（２００ｍｌ）を加え、生じた混合物を２時間撹拌した。固体を遠心分離により集め、真空下、４５℃で２４時間乾燥させると、２．３０ｇがオレンジ色の固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ） ４００ＭＨｚ δ ７．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．２ ２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｓ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．５９−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｂｒ． ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｂｒ． ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），２．６６−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．７８−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．３８（ｍ，１Ｈ），１．３０−１．１９（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６３１；Ｃ２５Ｈ２４Ｎ８Ｏ８ＰＳ・２．６Ｎａ・０．６ＴＦＡ・０．４アセトンの元素分析、算出値、４２．２３％Ｃ、３．５４％Ｈ、１４．３８％Ｎ、実測値、４２．２２％Ｃ、３．８０％Ｈ、１４．２７％Ｎ。
（実施例２）
（Ｒ）−３−（５−（３−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）フェニル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェートの調製
【０１３４】
【化９】
（Ｒ）−３−（５−（３−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）フェニル）イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノール（０．３２２ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）のピリジン（２．０ｍＬ）中の０℃の溶液に、ＰＯＣｌ３（０．１０４ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えた。添加の後に、混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、水２ｍＬを加えた。生じた混合物を一晩撹拌し、１ＮのＨＣｌ溶液を使用して、ＰＨ＝１〜２まで酸性化した。固体を遠心分離により集め、逆相ＨＰＬＣにより、調節剤としてギ酸を使用して精製した。黄色の固体（１１０ｍｇ）が得られた。融点２３９〜２４５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．７０（ｂｓ，１ Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１ Ｈ），７．７７−７．７５（ｍ，２ Ｈ），７．３８−７．５６（ｍ，２ Ｈ），７．４２（ｍ，３ Ｈ），７．３７−７．３５（ｍ，１ Ｈ），７．２２−７．２１（ｍ． ２ Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１ Ｈ）， ３．９５（ｂｓ，１ Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１ Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１ Ｈ），２．５２（ｍ，１ Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１ Ｈ），１．８７（ｍ，２ Ｈ），１．６０−１．５７（ｍ，１ Ｈ），１．４３−１．３７（ｍ，１ Ｈ）； ； ３１Ｐ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ −５．２０１； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６４７。
（実施例３）
ＲＡＦ活性の測定
材料：ＲＡＦキナーゼおよび抗ホスホＭＥＫ１／２抗体はＵｐｓｔａｔｅ（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、ＶＡ）からのものであった。使用されたＲＡＦ基質は、全長Ｎ末端ＧＳＴ−ＭＥＫ−１であり、これを、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させ、ＨＰＬＣにより自家精製した。全てのタンパク質を等分し、−８０℃で貯蔵した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（商標）遮断試薬はＰｉｅｒｃｅ（ｃａｔ．＃３７５１５）からのものであった。ＡＴＰはＲｏｃｈｅ（ｃａｔ．＃１９０３５７２２）からのものであった。アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ウサギ抗体はＰｉｅｒｃｅ（ｃａｔ．＃３１３４０）からのものであった。
【０１３５】
方法：全てのＲＡＦの生化学的アッセイを、２０ｍＭのＭＯＰＳ、５ｍＭのＥＧＴＡ、３７．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴおよび５０μＭのＡＴＰを含有するアッセイ緩衝液を使用して行った。６．２５ｎｇ／ウェルの変異体Ｂ−ＲＡＦおよび７．５ｎｇ／ウェルのＭＥＫ−１が最終アッセイ条件には存在した。１％のＤＭＳＯおよび最終濃度よりも３倍高い濃度の試験化合物２０μｌを含有するアッセイ緩衝液中で、化合物を連続希釈し、ポリプロピレンＶ−ウェル反応プレートに加えた。ビヒクル対照ウェルには、試験ウェルと同じ濃度のＤＭＳＯのみを有する緩衝液を与えた。迅速に連続して、基質２０μｌ（０．４５ｎｇ／μｌ ＭＥＫ−１）を、続いて、酵素２０μｌ（０．３７５ｎｇ／μｌ 変異体Ｂ−ＲＡＦ）を加えた。これらの反応プレートを室温で３０分間インキュベートした。ＭＥＫ−１の捕捉を、反応混合物５０μｌを非特異的タンパク質捕捉に対して設計されているＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）マイクロプレートに移すことにより開始した。室温でのＭＥＫ−１の３０分捕捉の後に、このプレートをＴＢＳＴ（６×２００μＬ／ウェル）で洗浄して、反応を完全に停止させた。次いで、プレートを、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（商標）遮断試薬１００μｌ／ウェルを加えることにより１時間遮断した。プレートを再び、ＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、続いて、Ｐｉｅｒｃｅ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（ＰＢＳ）中で１：１０００希釈されたＵｐｓｔａｔｅ抗ホスホＭＥＫ１／２ ７０μｌ／ウェルを加えた。６０分のインキュベーションの後に、このプレートをＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中１：４０００で調製された二次抗体（Ｐｉｅｒｃｅ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ標識ヤギ抗ウサギ）７０μｌを加えた。室温で４５分インキュベートした後に、マイクロプレートのウェルをＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、その後、Ａｔｔｏｐｈｏｓ（商標）蛍光アルカリホスファターゼ基質１００μｌ／ウェルを、製造者の指示書（ＪＢＬ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って加えた。蛍光をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで、次のフィルターを使用して読み取った：励起フィルター：ＣＦＰ４３０ｎＭ、放射フィルター：放射フィルター５７９ｎＭ。
【０１３６】
本発明の化合物は、ＲＡＦキナーゼの阻害を介して、ＭＥＫのリン酸化を阻止する。本発明の一定の化合物でのＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害データを表１に示す。
（実施例４）
エレクトロブロッティング読取りを伴う細胞ベースのリン酸化アッセイ
本発明の化合物を、一般には全てのアイソフォーム、野生型および変異体両方のＲＡＦキナーゼ（Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦおよびＣ−ＲＡＦ）ならびに特にはヒト癌細胞における変異体Ｂ−ＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）を阻害するその能力に関してスクリーニングした。Ａ３７５は、ヒト癌で見出される最も共通したＢ−ＲＡＦ変異−Ｖ６００Ｅを内包するヒト黒色腫細胞系である。このアッセイにおけるＲＡＦキナーゼを阻害する化合物の能力は、ＭＥＫおよびＥＲＫリン酸化の低減と相関しており、したがって、潜在的なｉｎ ｖｉｖｏ治療活性の直接的な指標である。
【０１３７】
材料：ＡＴＣＣからのＡ３７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を追加されたＤＭＥＭ培地中で維持した。
【０１３８】
方法：試験化合物をＤＭＳＯ中に溶かし、１：１０００で希釈した。Ａ３７５細胞を６ウェル組織培養プレートに１ウェル当たり５〜８×１０５で播種し、３７℃で２４時間培養した。細胞を化合物と共に１時間インキュベートし、その後、ＥＰａｇｅ（商標）添加バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で溶解した。溶解産物を８％ＥＰａｇｅ（商標）ゲル上で電気泳動させ、ポリビニリデンジフルオリド膜に移した。一次および二次抗体と共にインキュベートした後に、免疫染色されたタンパク質を検出し、Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外イメージャー（ＬＩ−ＣＯＲ）により定量化した。分析を非線形回帰により行い、用量応答曲線を生じさせた。算出されたＩＣ５０値は、ホスホ−ＭＥＫおよびホスホ−ＥＲＫレベルにおいて５０％の低減をもたらす試験化合物の濃度であった。使用された一次抗体は、抗ＭＥＫ（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ）、抗ＥＲＫ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ホスホ−ＥＲＫおよび抗ホスホ−ＭＥＫ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）であった。使用された二次抗体は、ＩＲＤＹＥ８００抗ウサギ、ＩＲＤＹＥ８００抗マウス（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０抗マウスおよびＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６８０抗ウサギ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であった。
【０１３９】
図２は、癌細胞中のホスホ−ＥＲＫに対する式Ｉの化合物の効果を示している。Ａ３７５細胞を０、１２、３７、１１１、３３３および１０００ｎＭの示されている化合物で１時間処理した。ホスホ−ＥＲＫおよび全ＥＲＫのレベルを、免疫ブロット法によりアクセスした（ａｃｃｅｓｓｅｄ）。
【０１４０】
本発明の化合物は、ホスホ−ＭＥＫおよびホスホ−ＥＲＫのレベルを、ＲＡＦキナーゼの阻害を介して低減する。本発明の一定の化合物でのＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害データを、図２および表１に示す。
（実施例５）
細胞増殖阻害アッセイ
本発明の化合物を、様々な癌細胞系に対する活性に関して試験した。このアッセイにおける細胞増殖を阻害する化合物の能力は、代謝活性な細胞において見出されるデヒドロゲナーゼ酵素活性の低減と相関している。
【０１４１】
材料：ＡＴＣＣからの広範に多様な癌細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を追加されたＤＭＥＭ培地中で維持した。ＮＣＭ４６０（Ｉｎｃｅｌｌ）、正常な結腸上皮細胞系およびヒト乳房上皮細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ）を３７℃、５％ＣＯ２で、それぞれＤＭＥＭおよびＨＥＢＭ培地（Ｃａｍｂｒｅｘ）中で維持した。
【０１４２】
方法：試験化合物をＤＭＳＯ中で溶解し３００×まで希釈し、次いで、１：４０にＤＭＥＭ中で希釈した。細胞を９６ウェル組織培養プレートに１ウェル当たり１〜５×１０３で播種し、３７℃で２４時間培養した。細胞を試験化合物と共に７２時間インキュベートし、続いて、テトラゾリウム化合物（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩；ＭＴＳ）および電子結合試薬、フェナジンメトスルフェート（ＰＭＳ）と共に４時間インキュベートした。ＭＴＳが、細胞中のデヒドロゲナーゼにより化学的に還元されてホルマザンになった。ホルマザンの吸光度の測定を、ＥＮＶＩＳＩＯＮ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して４９２ｎｍで評価した。算出ＩＣ５０値は、吸光度の５０％低下をもたらす試験化合物の濃度である。
【０１４３】
本発明の化合物は、様々な癌細胞の増殖を阻害する。本発明の一定の化合物でのデータを表２および表３に示す。
（実施例６）
化合物活性のパターンについての観察
酵素阻害および細胞系阻害の予期せぬパターンにより、式Ｉの一定の化合物は、プロドラッグであると考えられる。さらに、これらの化合物は意外にも、溶解度の劇的な増大を示すので、有効な治療組成物へのその製剤化能力を助長する。
【０１４４】
化合物１５および１６は、化合物１４の共通する親構造を共有するという点で化合物１４の類似体であり、それらは親構造のフェノール系酸素に結合しているホスフェートまたはメチルホスフェートを有する。表Ｉに示されている通り、チアゾール化合物１５および１６は、化合物１４よりも変異体Ｂ−ＲＡＦの阻害においてかなり効力が劣る。詳細には、化合物１５は、化合物１４に対して約４００倍のＩＣ５０の上昇を示し、化合物１６は、約１９３倍の上昇を示す。しかしながら、同様のパターンは、表Ｉにも示されている通り細胞ベースのＥＲＫ阻害データでは現れず、これらは、ＥＣ５０においてそれぞれ約２および４倍離れている。同様の効果が、オキサゾール類似体：化合物１７、１８および１９で見られる。例えば、化合物１９は、化合物１７に対してＢ−ＲＡＦ ＩＣ５０の３６５上昇を示し、ＥＣ５０にはほとんど変化を示さない。
【０１４５】
ｉｎ−ｖｉｖｏ対ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性での上記不一致についての説明は、化合物１５、１６、１８および１９は、Ａ３７５細胞により代謝またはそうでなければ変換されて、それぞれ化合物１４および１７をもたらすプロドラッグとして作用しているということである。
【０１４６】
図３に示されている通り、化合物１７および１９は、異種移植片癌モデルにおいてその抗腫瘍活性を維持する（測定の詳細は実施例７に示されている）。化合物１７を１６０ｍｇ／ｋｇで腹膜内（ＩＰ）注射し、化合物１９を３００ｍｇ／ｋｇ（ｍｍｏｌｅ／ｋｇで表した場合は等用量、塩成分を考慮）でＩＰ注射した。
【０１４７】
化合物１７および１９は、図３の異種移植片モデルにおいて同等に有効であるようであり、化合物１９は、さらに潜在的な利点を有する。表４で分かるように、化合物１９は、生物学的に該当するｐＨで、またはその付近で、水溶液中で劇的により高い溶解度を有する。したがって、化合物１９は、製剤化がより容易である可能性がある（例えば、静脈内溶液を調製するために、または当技術分野で公知の他の送達方法のために）。溶解度測定についての詳細は、実施例８に示す。
（実施例７）
無胸腺マウスにおける異種移植片モデルのプロトコル
マウス異種移植片モデルを、Ｊａｃｏｂら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００４年；８巻：２１３〜２１９頁およびＷｉｌｈｅｌｍら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４年；６４巻：７０９９〜７１０９頁の方法に従って行った。
【０１４８】
動物のケア ６週齢の雌のＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスをＴａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹから購入し、１〜２週間順応させた。マウスを無菌のマイクロアイソレーターケージに１ケージ当たりマウス５匹で収容し、食餌と水を自由に摂らせた。全ての実験手順および外科的処置は、ＡｒＱｕｌｅ’ｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって認められた。
【０１４９】
腫瘍細胞系およびモデル 癌腫細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（ＡＴＣＣ）、（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ）から入手し、推奨される通りに増殖させた。マウスに、無菌のハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）０．１ｍｌ中の２．５〜１０×１０６細胞を右上側腹部に皮下移植した。化合物の投与を、腫瘍サイズが７５から２００ｍｇの間の範囲に及んだときに開始した。腫瘍測定および体重を、電子キャリパーおよび天秤を用いて、週に２から３回集めた。腫瘍重量（ｍｇ）を式：長さ×（幅）２）／２から算出し；この式をまた、単位密度１ｍｇ＝１ｍｍ３と仮定して腫瘍体積を算出するために使用することができる。阻害パーセントまたは腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）パーセントを、次の式：１−［治療されたものの平均腫瘍値／対照の平均腫瘍値］×１００を使用して算出した。＞３０％致死率および／または＞２０％の正味体重低下をもたらした治療は、毒性と考え得る。
（実施例８）
様々なｐＨでの平衡溶解度決定のためのプロトコル
化合物の溶解度を、従来の振盪フラスコ法により決定した。固体化合物の一定部分を所望のｐＨの適切な緩衝液と混合し、室温（約２５℃）で６〜２４時間振盪することにより平衡化させた。下記の水性緩衝液をｐＨ対照のために使用した：０．１ＮのＨＣｌ ｐＨ＝１．２、５０ｍＭの乳酸緩衝液ｐＨ＝３．０、５０ｍＭの酢酸緩衝液ｐＨ＝５．０および１００ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．４。平衡化の後に、試料を０．４５ｕｍフィルターで濾過し、標準溶液の較正曲線に対してＨＰＬＣ／ＵＶにより分析した。
（実施例９）
本発明の例示的な化合物とｃ−Ｍｅｔ阻害剤との組合せ
別段に述べられていない限り、次の材料および方法を、本明細書に記載の生物学的アッセイに適用する。細胞培養物および試薬：癌細胞系を、１０％ウシ胎児血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ培地中で培養した。
【０１５０】
細胞増殖分析。細胞生存をＭＴＳアッセイにより決定した。簡略には、細胞を９６ウェルプレートに１ウェル当たり２０００〜１００００細胞で播種し、完全増殖培地中で２４時間培養し、次いで、様々な薬物および薬物組合せで７２時間処理した。ＭＴＳを加え、４時間インキュベートし、続いて、マイクロプレートリーダーを使用して５７０ｎｍで細胞生存率を評価した。データを未処理の対照に対して正規化し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌで分析した。
【０１５１】
本明細書に記載の研究は、本明細書に示されている式Ｉの化合物、即ち、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート、Ｖ６００Ｅ変異体Ｂ−Ｒａｆ阻害剤を、ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの低分子量阻害剤である（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５，−ジオンと組み合わせて使用した。
【０１５２】
一連の遺伝子型および組織起源を包含する５５種のヒト癌細胞系のパネルを７２時間ＭＴＳ細胞傷害性アッセイで、幅広い範囲の化合物濃度にわたって調べた。化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートおよび（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンは、７２時間ＭＴＳアッセイのためにチェッカーボードの３倍希釈物で構成された。
【０１５３】
本実施例では、２種の独立した実験を並行して行った。Ｃｈｏｕアルゴリズムを使用して、下記に示されている通りの併用指数（ＣＩ）を算出した。
【０１５４】
【数１】
（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートと（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンとの併用データを表５に示す。癌細胞系のアイデンティティおよび組織起源を示す。結果は、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートと（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンとの組合せは、ＮＣＩ−Ｈ５２（ＮＳＣＬＣ）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳房）、ＳＮＵ４７５（肝臓）を包含する多くの細胞系およびＰＣ３（前立腺）細胞系において相乗的細胞傷害性をもたらし、多くの他の細胞系において相加的細胞傷害性を示したことを示している。
【０１５５】
【表１−１】
【０１５６】
【表１−２】
【０１５７】
【表１−３】
【０１５８】
【表１−４】
【０１５９】
【表１−５】
【０１６０】
【表１−６】
【０１６１】
【表１−７】
【０１６２】
【表２】
【０１６３】
【表３−１】
【０１６４】
【表３−２】
【０１６５】
【表３−３】
【０１６６】
【表４】
【０１６７】
【表５−１】
【０１６８】
【表５−２】
上記の論述は、本発明の様々な例示的実施形態を開示しているが、当業者であれば、本発明の真の範囲から逸脱することなく、本発明の利点の一部を達成する様々な変更を成し得ることは明らかなはずである。
【技術分野】
【０００１】
優先権
この特許出願は、表題が「ＲＡＦ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ」でありかつ発明者としてＪｅａｎ−Ｍａｒｃ Ｌａｐｉｅｒｒｅ、Ｙａｎｂｉｎ Ｌｉｕ、Ｍａｎｉｓｈ Ｔａｎｄｏｎ、およびＭａｒｋ Ａ．Ａｓｈｗｅｌｌがあげられる、２００８年１２月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１２０，１９８号（この開示は、その全体が参考として本明細書に援用される）からの優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般には、薬学的化合物および薬学的組成物に関し、より詳細には、本発明は、ＲＡＦの阻害剤およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトでは３種のＲＡＦアイソフォーム：Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦおよびＣ−ＲＡＦが存在する（非特許文献１）。これらのセリン／トレオニンタンパク質キナーゼは、成長因子、ホルモンおよびサイトカインにより活性化される膜結合型の低分子量Ｇタンパク質ＲＡＳの下流にある保存されたシグナル伝達経路の成分である（非特許文献２）。ＲＡＳはＲＡＦ活性化を刺激し、次いでこれは、ＭＥＫキナーゼ、続いてＥＲＫキナーゼの活性化をもたらす。細胞の状況に応じて、この経路は、転写、代謝および細胞骨格再配置の調節を主に介して細胞増殖、生存および分化などの多様な生物学的機能を媒介する。
【０００４】
ＲＡＳ−ＲＡＦシグナル伝達経路は長い間、ヒト癌と関連付けられている。それというのも、ｒａｓ遺伝子における発癌変異が、ヒト癌全体の少なくとも１５％において生じており（非特許文献３）、下流のキナーゼＥＲＫが、癌の３０％において過剰活性化しているためである（非特許文献４）。しかしながら、１０年を超える期間にわたって、ＲＡＦタンパク質は癌において、ＲＡＳの下流にそれが位置するという理由だけで重要であると考えられていた。Ｂ−ＲＡＦの活性化変異がヒト癌において高い頻度で見出され、Ｂ−ＲＡＦが悪性疾患の重大な初発因子および促進因子として関与していることが判明すると、この見解は根本的に変えられた。（非特許文献３）。
【０００５】
Ｂ−ＲＡＦ癌原遺伝子での活性化変異が、黒色腫の７０％、乳頭状甲状腺癌の５０％および結腸癌の１０％の基礎にある（非特許文献５；および非特許文献６）。これらの変異の約９０％が、単一ヌクレオチド置換として生じており、この置換はＢ−ＲＡＦのキナーゼドメインのアミノ酸６００の所で、バリンをグルタメートに換えている（Ｖ６００Ｅ）。この変異により、Ｂ−ＲＡＦの基礎キナーゼ活性が高まり、ＭＥＫおよびＥＲＫタンパク質の活性化が生じ、最終的には制御されない腫瘍細胞増殖をもたらす。重要なことに、Ｂ−ＲＡＦおよびＲＡＳ変異は通常、同一の腫瘍型では相互に排他的であり、このことは、これらの遺伝子は、同じ発癌シグナル伝達経路上にあり、これらの腫瘍においてＲＡＳはＢ−ＲＡＦを活性化する作用を有することを示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＭａｒａｉｓおよびＭａｒｓｈａｌｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｒｖ．（１９９６年）２７巻：１０１〜１２５頁
【非特許文献２】ＲｏｂｉｎｓｏｎおよびＣｏｂｂ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（１９９７年）９巻：１８０〜１８６頁
【非特許文献３】Ｄａｖｉｅｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（２００２年）４１７号：９４９〜９５４頁
【非特許文献４】Ａｌｌｅｎら、Ｓｅｍｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．（２００３年）３０巻：１０５〜１１６頁
【非特許文献５】Ｔｕｖｅｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００３年）４巻：９５〜９８頁
【非特許文献６】Ｘｉｎｇ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃａｎｃｅｒ（２００５年）：１２巻：２４５〜２６２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
最近の研究により、ヒト黒色腫細胞において低分子干渉ＲＮＡにより変異体Ｂ−ＲＡＦをノックダウンすると、ＭＥＫキナーゼおよびＥＲＫキナーゼの両方が阻害されて、増殖の停止と、最終的にはアポトーシスの促進とが生じることが判明している（Ｓｈａｒｍａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５巻：２４１２〜２４２１頁（２００５年）；およびＷｅｌｌｂｒｏｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４巻：２３３８〜２３４２頁（２００４年））。加えて、変異体Ｂ−ＲＡＦを標的としている短ヘアピン型ＲＮＡ異種移植片モデルから得られたデータにより、Ｂ−ＲＡＦ抑制から生じる腫瘍退縮は、誘導性、可逆性であり、かつ緊密に調節されることが示されている（Ｈｏｅｆｌｉｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６巻：９９９〜１００６頁（２００６年）。まとめると、機能獲得型Ｂ−ＲＡＦシグナル伝達は、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍原性に強く関係しており、このことは、Ｂ−ＲＡＦを癌治療剤のための重要な標的として確認させるものである。
【０００８】
本明細書に挙げられている参考文献は、特許請求されている本発明に対する先行技術であるとは認められない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の実施形態は、式Ｉ：
【００１０】
【化１】
の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供し、ここで式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である。
【００１１】
一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素である。
【００１２】
一実施形態では、Ｒ４は水素である。
【００１３】
一実施形態では、ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくない場合、好ましい立体化学配置はＲである。
【００１４】
一実施形態では、Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６は、アルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである。
【００１５】
一実施形態では、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５である。
【００１６】
一実施形態では、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−シアノフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩がある。
【００１７】
本発明の一実施形態は、化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩を特徴とする。
【００１８】
本発明の一実施形態は、プロドラッグを特徴とし、ここで、プロドラッグはｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されて、請求項１に定義されている式Ｉの化合物をもたらし、Ｒ７は加水分解後にＨまたはＣＨ２ＯＨである。関連する実施形態では、加水分解前に、Ｒ７は、水素または−（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である。
【００１９】
本発明の実施形態はまた、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、薬学的組成物は、第２の化学療法剤をさらに含む。関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される。他の関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル（ｐｏｌｙｃｏｎａｌ）抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬である。さらなる実施形態では、第２の化学療法剤は、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである。
【００２０】
本発明の実施形態はさらに、細胞増殖性障害を治療または予防する方法を提供する。この方法は、それを必要とする被験体に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与することを含み、ここで、前記細胞増殖性障害が治療される。
【００２１】
一実施形態では、増殖性障害を伴う細胞は、ＲＡＦの変異体または野生型をコードするＤＮＡを含有する。さらなる実施形態では、細胞は構成的に高められたＲＡＦ活性を有する。ＲＡＦは、Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦまたはＣ−ＲＡＦであってよい。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦは、変異体である；変異体Ｂ−ＲＡＦは、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅであってよい。
【００２２】
細胞増殖性障害は、前癌性状態または癌であってよい。一実施形態において、細胞増殖性障害は、黒色腫、乳頭状甲状腺癌、結腸癌または先天性母斑である。
【００２３】
細胞増殖性障害は、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍、リンパ系腫瘍、肉腫、癌腫および腺癌を包含する癌であってよい。
【００２４】
本発明はさらに、Ｂ−ＲＡＦ活性を調整する方法を提供する。この方法は、Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を含有する細胞を、有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩、その類似体または誘導体と接触させる工程を含み、ここで、前記接触させる工程は、Ｂ−ＲＡＦ活性の前記阻害をもたらす。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦ活性は、Ｂ−ＲＡＦのキナーゼ活性である。一実施形態では、Ｂ−ＲＡＦは、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅである。
【００２５】
一実施形態では、方法は、式Ｉの化合物を第２の化学療法剤と組み合わせて投与する工程を特徴とする。関連実施形態では、第２の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブのうちの１つである。
【００２６】
関連実施形態では、第２の化学療法剤は、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである。この組合せで、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌または膵臓癌を有効に治療することができる。
【００２７】
本発明の一実施形態は、上記で挙げられた癌性および前癌性状態を包含する細胞増殖性障害を治療する際に使用するための式Ｉによる医薬品を製造する方法を特徴とする。
【００２８】
本発明の他の特徴および利点は、様々な実施例を包含する本明細書中で提供される追加の記載から明らかである。提供される実施例は、本発明を実施する際に有用な様々な成分および手法を例示するものである。これらの実施例は、特許請求されている本発明を制限するものではない。本開示をもとにして、当業者であれば、本発明を実施するのに有用な他の成分および手法を特定して、それを用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、式Ｉの化合物を合成するスキームを示す図である。
【図２】図２は、癌細胞におけるホスホ−ＥＲＫに対する式Ｉの化合物の効果を示す図である。
【図３】図３は、異種移植片マウスモデルにおけるヒト腫瘍（Ａ３７５）に対する式Ｉの化合物の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
１．化合物
本発明は、イミダゾオキサゾール化合物および／またはイミダゾチアゾール化合物およびそれらの合成を提供する。
【００３１】
一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物およびそれらの合成を提供する
【００３２】
【化２】
［式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である］。
【００３３】
「アルキル」という用語は、不飽和を伴わずに炭素および水素を含有する基を指す。アルキル基は、直鎖または分枝であってよい。例示的なアルキル基には、限定ではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ヘキシル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルなどが包含される。アルキル基が範囲で示されていることもあり、したがって例えば、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基は、直鎖または分枝アルキル主鎖（ｂａｃｋｂｏｎｅ）中に１から６個の炭素原子を有するアルキル基である。置換および非置換アルキル基は独立に、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキルまたは（Ｃ５〜Ｃ１０）アルキルであってよい。特に述べられていない限り、「アルキル」という用語は、「シクロアルキル」を包含しない。「低級アルキル」という用語は、非分枝または分枝（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを指す。
【００３４】
「シクロアルキル」基は、「環部分」に示されている数の炭素原子を有する環式アルキル基を指し、ここで、「環部分」は、縮合環構造、スピロ環構造または架橋環構造としての１個または複数の環構造からなってもよい。例えば、Ｃ３からＣ６シクロアルキル基（例えば、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル）は、環中に３から６個の間の炭素原子を有する環構造である。範囲が示されていない場合、シクロアルキルは、３から９個の間の炭素原子（（Ｃ３〜Ｃ９）シクロアルキル）を環部分に有する。例示的なシクロアルキル基には、これらに限られないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびアダマンチルが包含される。好ましいシクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９個または３から９個の炭素原子を環構造中に有する。
【００３５】
「アリール」という用語は、１、２または３個の芳香環を有する芳香族炭素環式基を指す。例示的なアリール基には、限定ではないが、フェニル、ナフチルなどが包含される。アリール基には、１個または複数の追加の４〜９員を有する非芳香族炭素環式環または複素環式（ｈｅｔｅｒｃｙｃｌｉｃ）環と縮合している１、２または３個の芳香環構造が包含される。縮合アリール基の例には、ベンゾシクロブタニル、インダニル、テトラヒドロナプチレニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎａｐｔｈｙｌｅｎｙｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレニル、テトラヒドロアントラセニル、１，４−ジヒドロ−１，４−メタノナフタレニル、ベンゾジオキソリルが包含される。
【００３６】
「ヘテロアリール」という用語は、１〜４個のヘテロ原子（窒素、イオウまたは酸素など）を芳香環中に含有する，１、２または３個の芳香環を有するヘテロ芳香族（ヘテロアリール）基を指す。ヘテロアリール基には、４〜９員を有する１個または複数の追加の非芳香環と縮合している、１〜４個のヘテロ原子を含有する１、２または３個の芳香環構造が包含される。芳香環中に単一の種類のヘテロ原子（ｈｅｔｒｏａｔｏｍ）を含有するヘテロアリール基は、それらが含有するヘテロ原子の種類により示され、したがって、窒素含有ヘテロアリール、酸素含有ヘテロアリールおよびイオウ含有ヘテロアリールは、１個または複数の窒素、酸素またはイオウ原子をそれぞれ含有するヘテロ芳香族基を示す。例示的なヘテロアリール基には、限定ではないが、ピリジル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリル、キナゾリニル、チアゾリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、フラニル、イミダゾリル、インドリルなどが包含される。
【００３７】
「ヘテロシクリル」または「複素環」という用語は、縮合、スピロまたは架橋して、追加の環を形成していてもよい飽和または不飽和のいずれかの安定な非芳香環構造を指す。各複素環は、１個または複数の炭素原子ならびに窒素、酸素およびイオウからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子からなる。「ヘテロシクリル」または「複素環」には、安定な非芳香族３〜７員の単環式複素環構造および８〜１１員の二環式複素環構造が包含される。ヘテロシクリル基は、任意の環内炭素または窒素原子の所で結合して、安定な構造を作り出していてもよい。好ましい複素環には、３〜７員の単環式複素環（より好ましくは５〜７員の単環式複素環）および８〜１０員の二環式複素環が包含される。このような基の例には、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソピペリジニル、オキソピロリジニル、オキソアゼピニル、アゼピニル、イソオキソゾリル（ｉｓｏｘｏｚｏｌｙｌ）、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソリル、ジオキシニル、オキサチオリル、ジチオリル、スルホラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、テタヒドロフロジヒドロフラニル（ｔｅｔａｈｙｄｒｏｆｕｒｏｄｉｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｙｌ）、テトラヒドロピラノジヒドロ−フラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロフロフラニル、テトラヒドロピラノフラン、キヌクリジニル（１−アザビシクロ［２．２．２］オクタニル）およびトロパニル（８−メチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタニル）が包含される。
【００３８】
置換アルキル、置換シクロアルキル、置換アリールおよび置換ヘテロシクリルという用語は、フッ素、アリール、ヘテロアリール、─Ｏ─（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび─ＮＲ５Ｒ６からなる群から独立に選択される１個または複数の置換基で置換されている上記で定義された通りのアルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロシクリル基を指し、ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素および─（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルからなる群から独立に選択される。
【００３９】
本発明の化合物の全ての立体異性体は、ラセミ混合物の結晶形態および個々の異性体の結晶形態を包含する混合物で、または純粋な形態もしくは実質的に純粋な形態で企図される。本発明による化合物の定義には、全ての可能な立体異性体（例えば、各不斉中心でのＲおよびＳ配置）およびそれらの混合物が包含される。本発明による化合物の定義には、規定の活性を有するラセミ体および単離された光学異性体が特に包含される。ラセミ体は、例えば、分別結晶化、ジアステレオ異性体誘導体の分離または結晶化、キラルカラムクロマトグラフィーまたは超臨界流体クロマトグラフィーによる分離などの物理的方法により分割することができる。個々の光学異性体は、ラセミ化合物から、例えば光学的に活性な酸での塩形成、それに続く結晶化などの従来の方法により得ることができる。さらに、二重結合の所でのＥおよびＺ配置などの全ての幾何異性体が、別段に述べられていない限り、本発明の範囲内である。本発明のある種の化合物は、互変異性体形態で存在することがある。化合物のこのような互変異性体形態は全て、別段に述べられていない限り、本発明の範囲内であると考えられる。本発明はまた、類似体または誘導体の１種または複数の位置異性体混合物を包含する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「塩」という用語は、薬学的に許容される塩であり、塩酸塩、臭化水素酸塩を包含する酸付加塩、加えて、リン酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、乳酸塩および酒石酸塩などの塩基の付加により形成される塩が包含され得る。塩には、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｌｉ＋などのアルカリ金属カチオン、Ｍｇ２＋もしくはＣａ２＋などのアルカリ土類金属塩または有機アミン塩が包含されてよい。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「代謝産物」という用語は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、類似体もしくは誘導体の代謝による産物を意味し、これは、本発明の前記化合物と同様の活性をｉｎ ｖｉｖｏで示す。
【００４２】
本発明の実施形態では、化合物は、Ｒ２およびＲ３が水素である式Ｉの化合物である。
【００４３】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｒ４が水素である式Ｉの化合物である。
【００４４】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｒ１が水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５である式Ｉの化合物である。
【００４５】
本発明の関連実施形態では、Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５である。
【００４６】
本発明のさらに他の実施形態では、各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよい。
【００４７】
関連実施形態では、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択される。
【００４８】
本発明の他の実施形態では、化合物は、ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくなく、配置がＲである式１の化合物である。本明細書で使用される場合、分子の配置は、その原子の空間配置から生じている永続的な幾何配置（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ｇｅｏｍｅｔｒｙ）である。配置は、ＲまたはＳのいずれかであってよく、ＵＩＰＡＣ規則に従って定義される。１個を超える不斉原子が分子中に存在する場合、それぞれが、配置ＲまたはＳのいずれかとして定義される。
【００４９】
本発明の他の実施形態では、化合物は、Ｚが水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６がアルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである式Ｉの化合物である。
【００５０】
本発明の実施形態では、化合物は、表１に列挙されている化合物１〜２４のうちの１つである。
【００５１】
本発明の実施形態では、化合物は、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される。
【００５２】
本発明の他の実施形態では、化合物は、（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される。
【００５３】
ある種の実施形態は、Ｒ７がＨである対応する式Ｉの化合物のプロドラッグ形態として役立ち得る式Ｉの化合物を包含する。機械論的な説明に拘束されることは意図していないが、プロドラッグ形態は、加水分解により開裂されて、Ｒ７がＨである対応する化合物を放出することができる。加水分解は、Ｒ７がＨである式Ｉをもたらす酵素によるか、または酵素によらない経路により生じ得る。別法では、加水分解は、対応するヒドロキシメチレン誘導体をもたらすことができ、これは、続く加水分解で、Ｒ７がＨである化合物の放出をもたらし得る。このような一実施形態では、Ｒ７は（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５であり、ここで、ｏは０〜２である。好ましい実施形態では、Ｒ４およびＲ５は水素である。さらなる好ましい実施形態では、ｏは１であり、Ｒ４およびＲ５は水素である。
【００５４】
２．本発明の化合物を調製する方法およびそのための中間体
有機分子の調製ならびに保護基の使用を包含する官能基の変換および操作のための標準的な合成方法および手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な参考の教科書から入手可能である。いずれか１つまたはいくつかの情報源に限定されないが、有機合成で認知されている参考の教科書には：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．；Ｍａｒｃｈ，Ｊ．Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、第５版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年；およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年が包含される。下記の合成方法の記載は、本発明の化合物を調製するための一般手順を説明するために設計したものであって、限定するためのものではない。
【００５５】
本発明の化合物は、様々な方法で調製することができ、そのうちのいくつかは、当技術分野で公知である。一般に、本発明の化合物は、市販の出発物質、文献で公知の化合物または容易に調製される中間体から、当業者に公知か、または本明細書の教示を考慮すれば当業者には明らかである標準的な合成方法および手順を使用することにより調製することができる。有機分子の調製ならびに官能基の変換および操作のための標準的な合成方法および手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な教科書から入手可能である。本発明で使用される中間体を合成するための詳細は、ＰＣＴ特許公開ＷＯ２００４／１１０９９０およびＷＯ２００６／０４４８６９およびＷＯ２００７／１２３８９２で見出すことができる。
【００５６】
本発明のイミダゾオキサゾール化合物およびイミダゾチアゾール化合物を調製する方法は、下記の実施例に記載されており、図１に図説されている。図１では、中間体ＩＩをオキシ塩化リンとピリジン中で反応させ、水でクエンチして、リン酸二水素塩ＩＩＩを得る。別法では、化合物ＩＩを初めに、水素化ナトリウムをＤＭＦ中で使用して脱プロトン化させ、次いで、ヨウ化テトラブチルアンモニウムの存在下に、適切なリン酸クロロメチルで処理して、中間体ＩＶを得る。リン酸二水素塩Ｖへの変換は、ＴＦＡをＤＣＭ中で使用するか、または４０〜５０℃のアセトン中の水などのより穏やかな条件を使用して達成する。リン酸二水素塩を場合によって、水酸化ナトリウムまたは他の塩基の水溶液を使用してナトリウムまたは他の薬学的に許容される塩に変換する。
【００５７】
３．治療方法
本発明の化合物は、癌などの細胞増殖性障害を治療および／または予防するために使用することができる。本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩またはその代謝産物は、１種または複数のＲＡＦタンパク質キナーゼを阻害し得る。したがって、該化合物を、異常なＲＡＳ−ＲＡＦシグナル伝達により特徴付けられる細胞増殖性障害を治療するために使用することができる。一実施形態では、癌などの細胞増殖性障害の細胞は、変異したＢ−ＲＡＦを内包している。さらなる実施形態では、変異しているＢ−ＲＡＦは、Ｖ６００Ｅ変異を有するＢ−ＲＡＦ（Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅ）である。細胞増殖性障害は、黒色腫、乳頭状甲状腺癌、結腸癌であってよい。
【００５８】
本発明はまた、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅにより特徴付けられる任意の他の状態、例えば、Ｂ−ＲＡＦＶ６００Ｅを有する先天性母斑（あざまたはそばかすとして一般には公知）をイミダゾオキサゾール化合物および／またはイミダゾチアゾール化合物で治療する方法を提供する。さらなる実施形態では、本発明を、このような母斑が悪性黒色腫へと進展することを防ぐために予防的に（例えば、皮膚に局所投与）使用することができる。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「被験体」は、任意の哺乳動物、例えばヒト、霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダであってよい。好ましい態様では、被験体はヒトである。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「それを必要とする被験体」は、細胞増殖性障害を有する被験体、または、全人口（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｔ ｌａｒｇｅ）と比べて細胞増殖性障害を発症する危険性が高い被験体である。一態様では、それを必要とする被験体は前癌性状態を有する。好ましい態様では、それを必要とする被験体は癌を有する。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「細胞増殖性障害」という用語は、細胞の非制御または異常な増殖またはその両方が、癌性であり得るか、または癌性ではあり得ない、望ましくない状態または疾患の発症をもたらし得る状態を指す。一態様では、細胞増殖性障害には、非癌性状態、例えば、関節リウマチ；炎症；自己免疫疾患；リンパ球増殖性状態；先端巨大症；リウマチ様脊椎炎；変形性関節症；通風、他の関節炎状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素性ショック；グラム陰性敗血症；毒性ショック症候群；喘息；成人呼吸窮迫症候群；慢性閉塞性肺疾患；慢性肺炎症；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性大腸炎；膵臓線維症；肝線維症；急性および慢性腎疾患；過敏性腸症候群；発熱（ｐｙｒｅｓｉｓ）；再狭窄；大脳マラリア；発作（ｓｔｒｏｋｅ）および虚血性損傷；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性および慢性疼痛；アレルギー性鼻炎；アレルギー性結膜炎；慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；ハンセン病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液嚢炎；腱炎；腱滑膜炎；ヘルニア様か、破断または脱出した椎間円板症候群；骨化石症；血栓症；再狭窄；珪肺症；肺サルコーシス；骨粗鬆症などの骨吸収疾患；移植片対宿主反応；多発性硬化症；狼瘡；線維筋痛症；ＡＩＤＳおよび帯状ヘルペス、単純ヘルペスＩまたはＩＩ、インフルエンザウイルスおよびサイトメガロウイルスなどの他のウイルス性疾患；ならびに糖尿病が包含される。他の態様では、細胞増殖性障害には、前癌または前癌性状態が包含される。他の態様では、細胞増殖性障害には、癌が包含される。治療される様々な癌には、これらに限られないが、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍およびリンパ系腫瘍が包含され、これには、原発腫瘍部位から離れた他の組織または臓器での転移病変が包含される。治療される癌には、これらに限られないが、肉腫、癌腫および腺癌が包含される。一態様では、「前癌細胞」または「前癌性細胞」は、前癌または前癌性状態である細胞増殖性障害が現れている細胞である。他の態様では、「癌細胞」または「癌性細胞」は、癌である細胞増殖性障害が現れている細胞である。任意の再現性のある測定手段を使用して、癌細胞または前癌性細胞を同定することができる。好ましい態様では、癌細胞または前癌性細胞を、組織試料（例えば、生検試料）の組織学的型別またはグレード評価により同定する。他の態様では、癌細胞または前癌性細胞を、適切な分子マーカーを使用して同定する。
【００６２】
「結腸の細胞増殖性障害」は、結腸の細胞に関する細胞増殖性障害である。好ましい態様では、結腸の細胞増殖性障害は、結腸癌である。好ましい態様では、本発明の組成物を使用して、結腸癌または結腸の細胞増殖性障害を治療することができる。一態様では、結腸癌には、結腸の癌の全ての形態が包含される。他の態様では、結腸癌には、散発性および遺伝性結腸癌が包含される。他の態様では、結腸癌には、悪性結腸新生物、上皮内癌、定型類癌腫および非定型類癌腫が包含される。他の態様では、結腸癌には、腺癌、扁平上皮癌および腺扁平上皮癌が包含される。他の態様では、結腸癌は、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌、家族性腺腫様ポリポーシス、ガードナー症候群、ポイツ−ジェガース症候群、ターコット症候群および若年性ポリポーシスからなる群から選択される遺伝性症候群と関連している。他の態様では、結腸癌は、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌、家族性腺腫様ポリポーシス、ガードナー症候群、ポイツ−ジェガース症候群、ターコット症候群および若年性ポリポーシスからなる群から選択される遺伝性症候群が原因である。
【００６３】
一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、結腸細胞に影響を及ぼす細胞増殖性障害の全ての形態が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、結腸癌、結腸の前癌性状態、結腸の腺腫様ポリープおよび結腸の異時性病変が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害には、腺腫が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害は、結腸の過形成、化生および異形成により特徴付けられる。他の態様では、個人に結腸の細胞増殖性障害を発症しやすくし得る前結腸疾患には、前結腸癌が包含される。他の態様では、個人に結腸の細胞増殖性障害を発症しやすくし得る現存する疾患には、クローン病および潰瘍性大腸炎が包含される。一態様では、結腸の細胞増殖性障害は、ｐ５３、ｒａｓ、ＦＡＰおよびＤＣＣからなる群から選択される遺伝子での変異に関連している。他の態様では、ｐ５３、ｒａｓ、ＦＡＰおよびＤＣＣからなる群から選択される遺伝子に変異が存在することにより、個人は、結腸の細胞増殖性障害を発症する危険性が高い。
【００６４】
「皮膚の細胞増殖性障害」は、皮膚の細胞に関する細胞増殖性障害である。一態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚細胞に影響を及ぼす細胞増殖性障害の全ての形態が包含される。一態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の前癌または前癌性状態、皮膚の良性増殖または病変、黒色腫、悪性黒色腫および皮膚の他の悪性増殖または病変ならびに皮膚以外の身体の組織および臓器での転移病変が包含される。他の態様では、皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の過形成、化生および異形成が包含される。
【００６５】
一態様では、治療される癌はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）ＴＮＭ分類系に従って病期分類されており、この際、腫瘍（Ｔ）は、ＴＸ、Ｔ１、Ｔ１ｍｉｃ、Ｔ１ａ、Ｔ１ｂ、Ｔ１ｃ、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ４ａ、Ｔ４ｂ、Ｔ４ｃまたはＴ４ｄのステージに指定され；局所リンパ節（Ｎ）は、ＮＸ、Ｎ０、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ２ａ、Ｎ２ｂ、Ｎ３、Ｎ３ａ、Ｎ３ｂまたはＮ３ｃのステージに指定され；遠隔転移（Ｍ）は、ＭＸ、Ｍ０またはＭ１のステージに指定される。他の態様では、治療される癌は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）分類に従って、ステージＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩＡ、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶとして病期分類されている。他の態様では、治療される癌は、ＡＪＣＣ分類に従ったグレードを、グレードＧＸ（例えば、グレードを指定することができない）、グレード１、グレード２、グレード３またはグレード４として指定されている。他の態様では、治療される癌は、ｐＮＸ、ｐＮ０、ＰＮ０（Ｉ−）、ＰＮ０（Ｉ＋）、ＰＮ０（ｍｏｌ−）、ＰＮ０（ｍｏｌ＋）、ＰＮ１、ＰＮ１（ｍｉ）、ＰＮ１ａ、ＰＮ１ｂ、ＰＮ１ｃ、ｐＮ２、ｐＮ２ａ、ｐＮ２ｂ、ｐＮ３、ｐＮ３ａ、ｐＮ３ｂまたはｐＮ３ｃのＡＪＣＣ病理分類（ｐＮ）に従って病期分類されている。
【００６６】
一態様では、治療される癌には、直径約２センチメートル以下であると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径約２から約５センチメートルであると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径約３センチメートル以上であると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌には、直径５センチメートルを超えると決定されている腫瘍が包含される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、十分に分化、中程度分化、軽度分化（ｐｏｏｒｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）または未分化と分類される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、有糸分裂数（例えば、細胞分裂量）または核多態性（例えば、細胞変化）に関して分類される。他の態様では、治療される癌は、顕微鏡による外観により、壊死の領域（例えば、死んでいるか、または変性している細胞の領域）と関連していると分類される。一態様では、治療される癌は、異常な核型を有するか、異常な数の染色体を有するか、または外観が異常な１種または複数の染色体を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、異数体、三倍体、四倍体であると、または倍数性の変化を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、染色体転座または染色体全体の欠失もしくは重複または染色体の一部の欠失、重複もしくは増幅の領域を有すると分類される。
【００６７】
一態様では、治療される癌を、ＤＮＡサイトメトリー、フローサイトメトリーまたはイメージサイトメトリーにより評価する。一態様では、治療される癌は、細胞分裂の合成期の（例えば、細胞分裂のＳ期の）細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％を有すると分類される。一態様では、治療される癌は、低いＳ期の割合または高いＳ期の割合を有すると分類される。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「正常細胞」は、「細胞増殖性障害」の一部として分類され得ない細胞である。一態様では、正常細胞は、望ましくない状態または疾患の発症をもたらし得る非制御もしくは異常な増殖またはその両方を欠いている。好ましくは、正常細胞は、正常に機能している細胞周期チェックポイント制御機構を有する。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「細胞と接触」とは、化合物または他の組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｔｅｒ）が細胞と直接接触しているか、または細胞において所望の生物学的効果を誘導するのに十分に近い状態を指す。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「候補化合物」は、その化合物が、研究者または臨床家が求めている所望の生物学的または医学的応答を細胞、組織、系、動物またはヒトにおいて顕在化できるかどうかを決定するために、１種または複数のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ生物学的アッセイで試験されているか、または試験される予定の本発明の化合物を指す。一態様では、候補化合物は、式Ｉの化合物である。好ましい態様では、生物学的または医学的応答は、癌の治療である。他の態様では、生物学的または医学的応答は、細胞増殖性障害の治療または予防である。一態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ生物学的アッセイには、これらに限られないが、酵素活性アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞生死判別アッセイが包含される。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「単独療法」は、単独の活性化合物または治療化合物をそれを必要とする被験体に投与することを指す。好ましくは、単独療法は、治療有効量の活性化合物を投与することを伴うことになる。例えば、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートでの癌単独療法は、治療有効量の（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体を、癌の治療を必要とする被験体に投与することを含む。単独療法は、複数の活性化合物の組合せを投与し、好ましくは組合せの各成分が治療有効量で存在する併用療法と対比することができる。一態様では、本発明の化合物での単独療法は、所望の生物学的効果をもたらす際に、併用療法よりも有効である。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「治療すること」は、疾患、状態または障害と闘うのを目的とする、患者の管理およびケアを記載するものであり、症状または合併症の発症を阻止するか、症状または合併症を緩和するか、または疾患、状態または障害を排除するために、本発明の化合物を投与することを包含する。
【００７３】
一態様では、癌を治療すると、腫瘍のサイズの縮小が生じる。腫瘍のサイズの縮小は、「腫瘍退縮」と称されることもある。好ましくは、治療後に、腫瘍サイズは、治療前のそのサイズに比較して５％以上縮小し；より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上縮小し；より好ましくは、２０％以上縮小し；より好ましくは、３０％以上縮小し；より好ましくは、４０％以上縮小し；なおより好ましくは、５０％以上縮小し；最も好ましくは、７５％超またはそれ以上縮小する。腫瘍のサイズは、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍のサイズは、腫瘍の直径として測定することができる。
【００７４】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍体積の縮小が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍体積は、治療前のそのサイズに比較して５％以上縮小し；より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上縮小し；より好ましくは、２０％以上縮小し；より好ましくは、３０％以上縮小し；より好ましくは、４０％以上縮小し；なおより好ましくは、５０％以上縮小し；最も好ましくは、７５％超またはそれ以上縮小する。腫瘍の体積は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。
【００７５】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍の数の減少が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍の数は、治療前の数に比較して５％以上減少し；より好ましくは、腫瘍の数は、１０％以上減少し；より好ましくは、２０％以上減少し；より好ましくは、３０％以上減少し；より好ましくは、４０％以上減少し；なおより好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超減少する。腫瘍の数は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍の数は、肉眼か、または規定の倍率で見ることができる腫瘍をカウントすることにより測定することができる。好ましい態様では、規定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×または５０×である。
【００７６】
他の態様では、癌を治療すると、原発腫瘍部位から遠隔の他の組織または臓器における転移病変の数の減少が生じる。好ましくは、治療後に、転移病変の数は、治療前の数に比較して５％以上減少し；より好ましくは、転移病変の数は、１０％以上減少し；より好ましくは、２０％以上減少し；より好ましくは、３０％以上減少し；より好ましくは、４０％以上減少し；なおより好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超減少する。転移病変の数は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、転移病変の数は、肉眼か、または規定の倍率で見ることができる転移病変をカウントすることにより測定することができる。好ましい態様では、規定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×または５０×である。
【００７７】
他の態様では、癌を治療すると、担体だけを与えられた集団と比較して、治療された被験体集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００７８】
他の態様では、癌を治療すると、未治療の被験体の集団と比較して、治療被験体の集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００７９】
他の態様では、癌を治療すると、本発明の化合物ではないまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体ではない薬物での単独療法を受けた集団と比較して、治療被験体の集団の平均生存期間の延長が生じる。好ましくは、平均生存期間は、３０日より長く；より好ましくは、６０日より長く；より好ましくは、９０日より長く；最も好ましくは、１２０日より長く延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現性のある手段により測定することができる。好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の平均生存期間を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の平均生存期間を算出することにより測定することもできる。
【００８０】
他の態様では、癌を治療すると、担体のみを与えられた集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。他の態様では、癌を治療すると、未治療の集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。さらなる態様では、癌を治療すると、本発明の化合物ではないまたは薬学的に許容されるその塩、類似体または誘導体ではない薬物での単独療法を受けた集団と比較して、治療被験体の集団の死亡率の低下が生じる。好ましくは、死亡率は、２％より大きく；より好ましくは、５％より大きく；より好ましくは、１０％より大きく；最も好ましくは、２５％より大きく低下する。好ましい態様では、治療被験体の集団の死亡率の低下は、任意の再現性のある手段により測定することができる。他の好ましい態様では、集団の死亡率の低下は、例えば、集団に対して、活性化合物で治療を開始した後の単位期間当たりの疾患関連死の平均数を算出することにより測定することができる。他の好ましい態様では、集団の死亡率の低下はまた、例えば、集団に対して、活性化合物での治療の第１ラウンドが完了した後の単位期間当たりの疾患関連死の平均数を算出することにより測定することができる。
【００８１】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍増殖速度の低下が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍増殖速度は、治療前の数値に対して少なくとも５％低下し；より好ましくは、腫瘍増殖速度は、少なくとも１０％低下し；より好ましくは、少なくとも２０％低下し；より好ましくは、少なくとも３０％低下し；より好ましくは、少なくとも４０％低下し；より好ましくは、少なくとも５０％低下し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低下し；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。腫瘍増殖速度は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍増殖速度を、単位期間当たりの腫瘍直径の変化により測定する。
【００８２】
他の態様では、癌を治療すると、腫瘍再増殖の低減が生じる。好ましくは、治療後に、腫瘍再増殖は５％未満であり；より好ましくは、腫瘍再増殖は、１０％未満；より好ましくは、２０％未満；より好ましくは、３０％未満；より好ましくは、４０％未満；より好ましくは、５０％未満；なおより好ましくは、５０％未満；最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再増殖は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、腫瘍再増殖を、例えば、治療後の先行する腫瘍退縮（ｐｒｉｏｒ ｔｕｍｏｒ ｓｈｉｒｉｎｋａｇｅ）後からの腫瘍の直径の増大を測定することにより測定する。他の好ましい態様では、腫瘍再増殖の低減は、治療を止めた後に腫瘍が再発し得ないことにより示される。
【００８３】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞増殖速度の低下が生じる。好ましくは、治療後には、細胞増殖速度は、少なくとも５％；より好ましくは、少なくとも１０％；より好ましくは、少なくとも２０％；より好ましくは、少なくとも３０％；より好ましくは、少なくとも４０％；より好ましくは、少なくとも５０％；なおより好ましくは、少なくとも５０％；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖速度は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、細胞増殖速度を、例えば、単位期間当たりの組織試料における分裂細胞の数を測定することにより測定する。
【００８４】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、増殖細胞の割合の低下が生じる。好ましくは、治療の後に、増殖細胞の割合は、少なくとも５％；より好ましくは、少なくとも１０％；より好ましくは、少なくとも２０％；より好ましくは、少なくとも３０％；より好ましくは、少なくとも４０％；より好ましくは、少なくとも５０％；なおより好ましくは、少なくとも５０％；最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。増殖細胞の割合は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、増殖細胞の割合を、例えば、組織試料中の非分裂細胞の数に対して、分裂細胞の数を定量化することにより測定する。他の好ましい態様では、増殖細胞の割合は、有系分裂指数に等しい。
【００８５】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞増殖の領域または帯のサイズの低減が生じる。好ましくは、治療の後に、細胞増殖の領域または帯のサイズは、治療前のそのサイズに対して少なくとも５％低減し；より好ましくは、少なくとも１０％低減し；より好ましくは、少なくとも２０％低減し；より好ましくは、少なくとも３０％低減し；より好ましくは、少なくとも４０％低減し；より好ましくは、少なくとも５０％低減し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低減し；最も好ましくは、少なくとも７５％低減する。細胞増殖の領域または帯のサイズは、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。好ましい態様では、細胞増殖の領域または帯のサイズは、細胞増殖の領域または帯の直径または幅として測定することができる。
【００８６】
他の態様では、細胞増殖性障害を治療または予防すると、異常な外観または形態を有する細胞の数または割合の低減が生じる。好ましくは、治療の後に、異常な形態を有する細胞の数は、治療前のそのサイズに対して少なくとも５％低減し；より好ましくは、少なくとも１０％低減し；より好ましくは、少なくとも２０％低減し；より好ましくは、少なくとも３０％低減し；より好ましくは、少なくとも４０％低減し；より好ましくは、少なくとも５０％低減し；なおより好ましくは、少なくとも５０％低減し；最も好ましくは、少なくとも７５％低減する。異常な細胞外観または形態は、任意の再現性のある測定手段により測定することができる。一態様では、異常な細胞形態を、顕微鏡により、例えば、倒立組織培養顕微鏡を使用して測定する。一態様では、異常な細胞形態は、核多態性の形態を取る。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「選択的に」という用語は、他の集団においてよりもある集団においてより高い頻度で生じる傾向を意味する。一態様では、比較される集団は、細胞集団である。好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、類似体もしくは誘導体は、癌または前癌性細胞に選択的に作用するが、正常細胞には作用しない。他の好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、類似体もしくは誘導体は、ある分子標的（例えば、Ｂ−ＲＡＦ）を調整するように選択的に作用する。他の好ましい態様では、本発明は、キナーゼなどの酵素の活性を選択的に阻害する方法を提供する。好ましくは、ある事象が、集団Ｂと比較して２倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は、集団Ｂに比べて集団Ａにおいて選択的に生じている。より好ましくは、ある事象が、５倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は選択的に生じる。より好ましくは、ある事象が、集団Ｂと比較して集団Ａにおいて１０倍を超える高い頻度で；より好ましくは、５０倍を超える；なおより好ましくは、１００倍を超える；最も好ましくは、１０００倍を超える高い頻度で集団Ａにおいて生じているならば、その事象は選択的に生じている。例えば、細胞死が、正常細胞と比較して２倍を超える頻度で癌細胞において生じるならば、細胞死が癌細胞において選択的に生じていると言える。
【００８８】
好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、分子標的（例えば、Ｂ−ＲＡＦ）の活性を調整する。一態様では、調整とは、分子標的の活性を刺激または阻害することを指す。好ましくは、本発明の化合物は、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して少なくとも２倍、分子標的の活性を刺激または阻害しているならば、分子標的の活性を調整している。より好ましくは、本発明の化合物は、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、分子標的の活性を刺激または阻害しているならば、分子標的の活性を調整している。分子標的の活性は、任意の再現性のある手段により測定することができる。分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。例えば、分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、酵素活性アッセイまたはＤＮＡ結合アッセイにより測定することができるか、または分子標的の活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、レポーター遺伝子の発現に関するアッセイにより測定することができる。
【００８９】
一態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、該化合物の添加が、同じ条件下ではあるが、前記化合物の存在のみを欠いている条件での分子標的の活性に対して１０％を超えて分子標的の活性を刺激または阻害しないならば、分子標的の活性を顕著には調整していない。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「アイソザイム選択的」という用語は、酵素の第２アイソフォームに比較して、酵素の第１アイソフォームの優先的な阻害または刺激を意味する（例えば、キナーゼアイソザイムベータに比較してのキナーゼアイソザイムアルファの優先的な阻害または刺激）。好ましくは、本発明の化合物は、生物学的効果を達成するのに必要な用量において、少なくとも４倍の差、好ましくは１０倍の差、より好ましくは５０倍の差を実証している。好ましくは、本発明の化合物は、阻害の範囲にわたって、この差を実証し、この差は、例えば、ＩＣ５０、即ち、該当する分子標的に対する５０％阻害で示される。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を、それを必要とする細胞または被験体に投与すると、ＲＡＦの活性の調整（即ち、刺激または阻害）が生じる。本明細書で使用される場合、ＲＡＦの活性は、ＲＡＦにより実行される任意の生物学的機能または活性を指す。例えば、ＲＡＦの機能には、下流標的タンパク質のリン酸化が包含される。
【００９２】
好ましい実施形態では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を、それを必要とする細胞または被験体に投与すると、ＥＲＫ１もしくはＥＲＫ２またはその両方の活性の調整（即ち、刺激または阻害）が生じる。本明細書で使用される場合、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２の活性は、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２により行なわれる任意の生物学的機能または活性を指す。例えば、ＥＲＫ１またはＥＲＫ２の機能には、下流標的タンパク質のリン酸化が包含される。
【００９３】
一態様では、活性化とは、組成物（例えば、タンパク質または核酸）を所望の生物学的機能を行うのに適した状況にすることを指す。一態様では、活性化され得る組成物はまた、非活性化状況も有する。一態様では、活性化された組成物は、阻害または刺激の生物学的機能またはその両方を有することもある。
【００９４】
一態様では、上昇は、組成物（例えば、タンパク質または核酸）の所望の生物学的活性の増大を指す。一態様では、上昇は、組成物の濃度の増大を介して生じ得る。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「細胞周期チェックポイント経路」は、細胞周期チェックポイントを調整することに関与している生化学的経路を指す。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周期チェックポイントを含む１種または複数の機能に対して刺激もしくは阻害作用またはその両方の作用を有し得る。細胞周期チェックポイント経路は、その両方が細胞周期チェックポイントを調整するのに寄与する少なくとも２種の組成物、好ましくはタンパク質からなる。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周期チェックポイント経路の１つまたは複数のメンバーの活性化を介して活性化され得る。好ましくは、細胞周期チェックポイント経路は、生化学的シグナル伝達経路である。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「細胞周期チェックポイント調節因子」は、少なくとも部分的に、細胞周期チェックポイントを調整する際に機能し得る組成物を指す。細胞周期チェックポイント調節因子は、細胞周期チェックポイントを含む１つまたは複数の機能に対して、刺激もしくは阻害作用またはその両方の作用を有してよい。一態様では、細胞周期チェックポイント調節因子は、タンパク質である。他の態様では、細胞周期チェックポイント調節因子は、タンパク質ではない。
【００９７】
一態様では、癌または細胞増殖性障害を治療すると、細胞死が生じ、好ましくは、細胞死は、集団中の細胞の数の少なくとも１０％の低減をもたらす。より好ましくは、細胞死は、少なくとも２０％の低減；より好ましくは、少なくとも３０％の低減；より好ましくは、少なくとも４０％の低減；より好ましくは、少なくとも５０％の低減；最も好ましくは、少なくとも７５％の低減を意味する。集団における細胞の数は、任意の再現性のある手段により測定することができる。一態様では、集団における細胞の数を、蛍光活性化細胞分取器（ＦＡＣＳ）により測定する。他の態様では、集団における細胞の数を、免疫蛍光顕微鏡検査法により測定する。他の態様では、集団における細胞の数を、光学顕微鏡検査法により測定する。他の態様では、細胞死を測定する方法は、Ｌｉら、（２００３年）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １００巻（５号）：２６７４〜８頁に示されている通りである。一態様では、細胞死は、アポトーシスにより生じる。
【００９８】
好ましい態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の有効量は、正常細胞に対して重大な細胞傷害性を有さない。化合物の治療有効量は、治療有効量での化合物の投与が、正常細胞の１０％を超える細胞死をもたらさないならば、正常細胞に対して重大な細胞傷害性を有さない。化合物の治療有効量は、治療有効量での化合物の投与が、正常細胞の１０％を超える細胞死をもたらさないならば、正常細胞の生存率に重大な影響を有さない。一態様では、細胞死は、アポトーシスにより生じる。
【００９９】
一態様では、細胞と本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体との接触は、癌細胞において選択的に細胞死を誘発または活性化させる。好ましくは、それを必要とする被験体への本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、癌細胞において選択的に細胞死を誘発または活性化させる。他の態様では、細胞と本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体との接触は、細胞増殖性障害の影響を受けている１種または複数の細胞において選択的に細胞死を誘発する。好ましくは、それを必要とする被験体への本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、細胞増殖性障害の影響を受けている１種または複数の細胞において選択的に細胞死を誘発する。好ましい態様では、本発明は、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体をそれを必要とする被験体に投与することにより癌を治療または予防する方法に関し、ここで、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体の投与は、下記のうちの１個または複数をもたらす：細胞周期のＧ１および／またはＳ期にある細胞の蓄積、正常細胞において重大な量の細胞死を伴うことのない癌細胞における細胞死を介しての細胞傷害性、少なくとも２の治療指数での動物における抗腫瘍活性および細胞周期チェックポイントの活性化。本明細書で使用される場合、「治療指数」は、有効用量で割った最大許容用量である。
【０１００】
当業者であれば、本明細書で論じている公知の技術または同等の技術の詳細な記載に関して一般的な参考テキストを参照することができる。これらのテキストには、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００５年）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第３版）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０００年）；Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．；Ｅｎｎａら、Ｃｕｒｒｅｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．；Ｆｉｎｇｌら、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１９７５年）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、第１８版（１９９０年）が包含される。勿論これらのテキストはまた、本発明の態様を行うまたは使用する際に参照することもできる。
【０１０１】
追加的な態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を第２の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。第２の化学療法剤は、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬であってよい。好ましい態様では、化学療法剤は、これらに限られないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（イマチニブ）、ＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル）、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ａｒａＣ、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル）、ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標）（ゴセレリン）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシンもしくはイダルビシンまたはオンラインで得られるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ’ｓ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓに列挙されている薬剤（ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｄｏｃｒｏｏｔ／ｃｄｇ／ｃｄｇ＿０．ａｓｐを参照のこと）であってよい。他の態様では、第２の化学療法剤は、Ｇ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）などのサイトカインであってよい。他の態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、放射線療法と組み合わせて投与してもよい。まだ他の態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、これらに限られないが、ＣＭＦ（シクロホスファミド、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル）、ＣＡＦ（シクロホスファミド、アドリアマイシンおよび５−フルオロウラシル）、ＡＣ（アドリアマイシンおよびシクロホスファミド）、ＦＥＣ（５−フルオロウラシル、エピルビシンおよびシクロホスファミド）、ＡＣＴもしくはＡＴＣ（アドリアマイシン、シクロホスファミドおよびパクリタキセル）またはＣＭＦＰ（シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシルおよびプレドニゾン）などの標準的な化学療法剤の組合せと組み合わせて投与してもよい。
【０１０２】
本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体は、投与に適した薬学的組成物に組み込むことができる。このような組成物は典型的には、化合物（即ち、活性化合物を包含する）および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合する任意のそして全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含することが意図されている。適切な担体は、当分野の標準的な参考テキストである、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。このような担体または希釈剤の好ましい例には、これらに限られないが、水、食塩水、リンガー液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンが包含される。薬学的に許容される担体には、ラクトース、石膏、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などのような固体担体が包含される。例示的な液体担体には、シロップ、落花生油、オリーブ油、水などが包含される。同様に、担体または希釈剤には、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリル（単独か、またはワックスと共に）、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸メチルなどのような当技術分野で公知の時間遅延物質が包含され得る。当技術分野で公知であるような他の充填剤、賦形剤、香味剤および他の添加剤もまた、本発明による薬学的組成物中に包含されていてよい。リポソームおよび不揮発性油などの非水性ビヒクルも使用することができる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。従来の任意の媒体または薬剤が活性化合物と相容性ではない場合を除き、組成物中でそれらを使用することが企図される。補助的な活性化合物もまた、組成物中に組み込むことができる。
【０１０３】
一態様では、治療有効量（例えば、腫瘍増殖の阻害、腫瘍細胞の死滅化、細胞増殖性障害の治療または予防などを介して所望の治療効果を達成するのに十分な有効レベル）の本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体（活性成分として）を標準的な薬学的担体または希釈剤と従来の手順に従って組み合わせることにより（即ち、本発明の薬学的組成物を製造することにより）調製される適切な剤形で、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、代謝産物、類似体もしくは誘導体を投与する。これらの手順は、所望の調製を達成するために適するように成分を混合、顆粒化および圧縮または溶解することを伴い得る。
【０１０４】
４．薬学的組成物および製剤
本発明の薬学的組成物を、その意図する投与経路に適合するように製剤化する。投与経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）および経粘膜投与が包含される。非経口、皮内または皮下用途で使用される液剤または懸濁剤には、次の成分が包含され得る：注射用の水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌の希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調節するための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調節することができる。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量用バイアルに封入することができる。
【０１０５】
本発明の化合物または薬学的組成物は被験体に、化学療法治療のために現在使用されている周知の方法のうちの多くで投与することができる。例えば、癌を治療するためには、本発明の化合物を腫瘍に直接注射するか、血流に注射するか、もしくは体腔に注射するか、または経口摂取するか、またはパッチを用いて皮膚を介して投与することができる。選択される用量は、有効な治療を構成するのに十分であるべきであるが、許容できない副作用をもたらすほど高くあるべきではない。疾患状態（例えば、癌、前癌など）および患者の健康の状況を好ましくは、治療中および治療後の合理的な期間、密に監視すべきである。
【０１０６】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、同定されている疾患または状態を治療、回復または予防するか、または検出可能な治療または阻害効果を示す薬剤の量を指す。効果は、当技術分野で公知の任意のアッセイ方法により検出することができる。被験体のための正確な有効量は、被験体の体重、サイズ、健康；状態の性質および規模；ならびに投与のために選択された治療剤または治療剤の組合せに依存することになる。所与の状況に対する治療有効量は、臨床家の技能および判断の範囲内である日常的な実験により決定することができる。好ましい態様では、治療される疾患または状態は癌である。他の態様では、治療される疾患または状態は、細胞増殖性障害である。
【０１０７】
いずれの化合物でも、治療有効量を初めに、例えば新生物細胞の細胞培養アッセイで、または動物モデル、通常はラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタで推定することができる。動物モデルはまた、適切な濃度範囲および投与経路を決定するために使用することもできる。次いで、このような情報を使用して、ヒトでの投与に有用な用量および経路を決定することができる。治療／予防効力および毒性を、標準的な薬学的手順により、細胞培養物または実験動物で、例えば、ＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に致命的な用量）で決定することができる。毒性作用と治療効果との用量比が、治療指数であり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。投与量は、使用される剤形、患者の感受性および投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。
【０１０８】
投与量および投与を、十分なレベルの活性剤（複数可）を提供するか、または所望の効果を維持するように調節する。考慮され得る要因には、疾患状況の重症度、被験体の全身健康、被験体の年齢、体重および性別、食事、投与時間および頻度、薬物の組合せ（複数可）、治療に対する反応感受性および許容性／応答が包含される。長時間作用性薬学的組成物を、特定の製剤の半減期およびクリアランス速度に応じて３から４日ごとに、毎週、２週ごとに１回投与することができる。
【０１０９】
本発明の活性な化合物を含有する薬学的組成物を、一般に公知である方法で、例えば従来の混合、溶解、顆粒化、糖剤製造、湿式粉砕、乳化、カプセル封入、包埋または凍結乾燥法によって製造することができる。活性化合物を薬学的に使用することができる製剤へと加工することを容易にする賦形剤および／または補助剤を含む１種または複数の薬学的に許容される担体を使用する従来の方法で、薬学的組成物を製剤化することができる。勿論、適切な製剤は、選択された投与経路に依存する。
【０１１０】
注射用の使用に適した薬学的組成物には、無菌の水性液剤（水溶性の場合）または分散剤および無菌の注射用液剤または分散剤を即時調製するための無菌の散剤が包含される。静脈内投与では、適切な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が包含される。いずれの場合も、組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒体であってよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用により、分散剤の場合には、必要な粒径を維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムを包含することが好ましい。注射用組成物の吸収期間の延長は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを包含させることによりもたらされ得る。
【０１１１】
無菌の注射用液剤は、必要量の活性化合物を適切な溶媒中に、上記で列挙された成分の１つまたは組合せと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することにより調製することができる。一般に分散剤は、活性化合物を、基本の分散媒体および上記で列挙された成分から必要とされる他の成分を有する無菌ビヒクル中へ組み込むことにより調製される。無菌の注射用液剤を調製するための無菌散剤の場合、調製方法は、活性成分および任意の追加的な所望の成分の粉末を、予め無菌濾過されたその溶液から得る、真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１１２】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用の薬学的に許容される担体を包含する。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へと圧縮され得る。経口による治療投与の目的では、活性化合物を賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用することができる。経口組成物はまた、うがい薬として使用するために流体担体を使用して調製することもでき、この際、流体担体中の化合物は口中に施与されて、音を立てて吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／またはアジュバント物質が、組成物の一部として包含されてよい。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれかまたは同様の性質を有する化合物を含有することができる：微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）またはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）などの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動化促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバーなどの香味剤。
【０１１３】
吸入による投与では、化合物を、適切な噴射剤、例えば、二酸化炭素などの気体を含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器から、エアロゾル噴霧の形態で送達する。
【０１１４】
全身投与もまた、経粘膜手段または経皮手段によってよい。経粘膜投与または経皮投与では、浸透される障壁に適した浸透剤を、製剤において使用する。このような浸透剤は通常、当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が包含される。経粘膜投与は、鼻噴霧または坐剤の使用を介して達成され得る。経皮投与では、活性化合物を、当技術分野で一般的に公知の軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤中で製剤化する。
【０１１５】
一態様では、活性化合物を、制御放出製剤など、身体からの迅速な排出に対して化合物を保護する薬学的に許容される担体を用いて調製するが、これには、移植片（ｉｍｐｌａｎｔ）およびマイクロカプセル化された送達系が包含される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製する方法は、当業者には明らかである。それらの物質はまた、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞に対して標的化されたリポソームを包含する）もまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載されている通り、当業者に公知の方法に従って調製することができる。
【０１１６】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために、単位剤形（ｄｏｓａｇｅ ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）で、経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療される被験体のための単位投与量として適切な物理的に分離した単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じるように算出された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形についての詳細は、活性化合物の固有の特徴および達成されるべき特定の治療効果によって規定され、それらに直接的に依存する。
【０１１７】
治療用途では、本発明に従って使用される薬学的組成物の投与量は、選択される投与量に影響を及ぼす他の要因の中でも薬剤、受容患者の年齢、体重および臨床状態ならびに治療を与える臨床家または担当医の経験および判断に応じて変動する。一般に、用量は、腫瘍の増殖を遅くし、好ましくは退縮させ、また好ましくは癌を完全に退縮させるのに十分であるべきである。投与量は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１日当たり約３０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。好ましい態様では、投与量は、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから１日当たり約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。一態様では、用量は、約０．１ｍｇ／日から約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日から約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日から約１０ｇ／日；約０．１ｍｇから約３ｇ／日；または約０．１ｍｇから約１ｇ／日の範囲で、単回、分割または連続用量（この用量は、患者のｋｇでの体重、ｍ２での体表面積および年齢で調節することができる）となる。薬剤の有効量は、臨床家または他の有資格観察者により認められるような客観的に同定可能な改善をもたらす量である。例えば、患者における腫瘍の退縮を、腫瘍の直径に関して測定することができる。腫瘍直径の低減は、退縮を示している。退縮はまた、治療を止めた後に腫瘍が再発し得ないことによっても示される。本明細書で使用される場合、「有効な投与量」という用語は、被験体または細胞において所望の生物学的効果を生じる活性化合物の量を指す。
【０１１８】
薬学的組成物は、容器、パックまたはディスペンサーに、投与指示書と共に包含されていてよい。
【０１１９】
本明細書中で挙げられた全ての特許、特許出願および参照文献は、その全体が本明細書に参照により援用される。
【実施例】
【０１２０】
本発明の様々な特徴をさらに説明するために、下記に実施例を提供する。実施例はまた、本発明を実行するための有用な方法を説明している。これらの実施例は、特許請求されている本発明を制限するものではない。
（実施例１）
ビス−ナトリウム（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
ステップ１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルリン酸カリウムの調製
【０１２１】
【化３】
０℃で、激しく撹拌されているホスホン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４０．０ｇ、２０６．２ｍｍｏｌ）およびＫＨＣＯ３（１２．６ｇ）の水（１７８ｍｌ）中の混合物に、微粉末ＫＭｎＯ４を少量ずつ５０分にわたって加えた（注；激しい発熱反応、効果的な冷却が重要である）。添加の後に、混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、６０℃で１５分間加熱した。副生成物ＭｎＯ２を濾別した。濾液を炭（３．２ｇ）と一緒に沸騰させることにより脱色し、濾過した。濾液をさらに精製することなく、次の反応に持ち越した。
【０１２２】
ステップ２：リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
【０１２３】
【化４】
ステップ１から得られた溶液に、濃塩酸（１６ｍｌ）を０℃で撹拌しながら徐々に加えた。生成物を沈殿させ、濾過により集め、真空下で一晩乾燥させると、リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２８．３ｇが白色の針状物として得られた。
【０１２４】
ステップ３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートの調製
【０１２５】
【化５】
リン酸水素ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２４．９ｇ、１３３．３ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（３９．９ｇ、５３３．３ｍｍｏｌ）および硫酸水素テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（４．０ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の水（１０００ｍｌ）中の混合物に、ジクロロメタン（６２３ｍｌ）を加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌し、次いで、クロロ硫酸クロロメチル（２３．５ｇ、１６０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３７０ｍｌ）溶液を激しく撹拌しながら加えた。生じた混合物を室温で一晩（２０時間）撹拌した。有機層を分離し、ブライン（５００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮すると、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート１４．０ｇが無色のオイルとして得られた。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ５．７２（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．１４（ｓ，１８Ｈ）。
【０１２６】
ステップ４：（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）−ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
【０１２７】
【化６】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノール（２．０ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（０．１８５ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（０．４２ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｄｅ）（１５ｍｌ）中の混合物を室温で１０分間撹拌した。この混合物に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート（１．２９ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルミド（５ｍｌ）溶液を加えた。生じた混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣をジクロロメタン（１００ｍｌ）に入れ、水（１００ｍｌ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製すると、（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート１．６０ｇがオレンジ色の固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．１４−８．０５（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．１６−７．０８（ｍ，２Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），４．００−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．７８−３．７０（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．４２（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），１．９８−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．６６−１．５２（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｓ，１８Ｈ），１．３５−１．３０（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７４３。
【０１２８】
ステップ４の代替の方法
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノール（３１．５６ｇ、０．０６０６ｍｏｌ、１．０当量）およびＣｓ２ＣＯ３（３９．４９ｇ、０．１２１ｍｏｌ、２．０当量）をフラスコに投入した。ＤＭＦ（１２６ｍｌ、４体積）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌した。化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェートのＤＭＦ（６３ｍｌ、３．７体積）溶液を混合物に１０分で滴加した。生じた混合物を室温で２４時間撹拌した。反応が完了した（ＨＰＬＣ：出発物質のＡＵＣ０．１７％）。ＥｔＯＡｃ（２８５ｍｌ）を加えた。混合物を激しく撹拌しながら１２℃に冷却した。水（３８０ｍｌ）を１０分で加えたが、その間、温度を２２℃未満に維持した。混合物を１０分間撹拌した。２層を分離した。水性相をＥｔＯＡｃ（２８５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１１５ｍｌ）で洗浄した。溶液を乾燥するまで蒸発させると、粗製の明赤色のオイル生成物（５５ｇ、＞１００％）が得られたが、次のステップのためにさらに精製することはなかった。
【０１２９】
ステップ５：（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートの調製
【０１３０】
【化７】
（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート（１．６８ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３４ｍｌ）中の０℃の溶液にトリフルオロ酢酸（２．６１ｍｌ、３４．０ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を室温で４５分間（または出発物質が消失するまで）撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣をエチルエーテル（１００ｍｌ）中で２時間撹拌した。生成物を遠心分離により集め、真空下で一晩乾燥させると、表題化合物１．５０ｇがオレンジ色の固体として得られた。粗製生成物を精製することなく、ステップ６でそのまま使用した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．１３−８．０８（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．２４（ｍ，３Ｈ），７．１７−７．１２（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），４．４０−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．７５−３．６８（ｍ，１Ｈ），３．４８−３．４０（ｍ，１Ｈ），２．６０（ｂｒ． ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５５−２．４５（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．４６−１．３４（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６３１。
【０１３１】
ステップ５の代替の方法
粗製（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェート（２８．１５ｇ、０．０３２６ｍｏｌ）のアセトン（１２０ｍｌ）溶液を５００ｍＬフラスコに投入した。水（１２０ｍｌ）を撹拌しながら加えた。濁った混合物を５０℃に１８時間加熱した。白色の結晶質の生成物が沈殿した。次いで、混合物を５５℃まで２４時間加熱した。反応は完了した（ＨＰＬＣにより監視）。反応混合物を２０℃に冷却し、３時間撹拌し、漏斗で濾過した。ケークを水（３×１２０ｍｌ）で洗浄し、次いで、アセトン（３×１２０ｍｌ）で洗浄した。濾過用漏斗を室内減圧（ｈｏｕｓｅ ｖａｃｕｕｍ）でさらに３時間維持した。緑色がかった固体を真空炉（８０℃／２０トル）で６時間乾燥させると、所望の生成物（１７．２ｇ）が得られた。
【０１３２】
ステップ６：ビス−ナトリウム（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチルホスフェートの調製
【０１３３】
【化８】
撹拌棒を備えたフラスコ中の（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（２．９３ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）に、水酸化ナトリウム（５５８ｍｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）の水（３０ｍｌ）溶液を加えた。透明な溶液が生じるまで（３０分）、生じた混合物を撹拌した。透明な溶液を、５００ｍｌフラスコに移した。撹拌している間に、アセトン２００ｍｌを徐々に加えた。生じた懸濁液を１０分間撹拌し、次いで、撹拌することなく１時間放置した。液体をフラスコからデカンテーションして、廃棄した。残渣に、アセトン（２００ｍｌ）を加えた。溶液を２時間激しく撹拌した。固体生成物を遠心分離により集めた。この固体を水３０ｍｌに溶かし、アセトン２００ｍｌを撹拌しながら加えた。１０分間撹拌した後に、懸濁液を撹拌することなく２時間放置し、液体をデカンテーションした。残渣に、アセトン（２００ｍｌ）を加え、生じた混合物を２時間撹拌した。固体を遠心分離により集め、真空下、４５℃で２４時間乾燥させると、２．３０ｇがオレンジ色の固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ） ４００ＭＨｚ δ ７．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．２ ２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｓ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．５９−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｂｒ． ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｂｒ． ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），２．６６−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．７８−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．３８（ｍ，１Ｈ），１．３０−１．１９（ｍ，１Ｈ）； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６３１；Ｃ２５Ｈ２４Ｎ８Ｏ８ＰＳ・２．６Ｎａ・０．６ＴＦＡ・０．４アセトンの元素分析、算出値、４２．２３％Ｃ、３．５４％Ｈ、１４．３８％Ｎ、実測値、４２．２２％Ｃ、３．８０％Ｈ、１４．２７％Ｎ。
（実施例２）
（Ｒ）−３−（５−（３−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）フェニル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェートの調製
【０１３４】
【化９】
（Ｒ）−３−（５−（３−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）フェニル）イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノール（０．３２２ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）のピリジン（２．０ｍＬ）中の０℃の溶液に、ＰＯＣｌ３（０．１０４ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えた。添加の後に、混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、水２ｍＬを加えた。生じた混合物を一晩撹拌し、１ＮのＨＣｌ溶液を使用して、ＰＨ＝１〜２まで酸性化した。固体を遠心分離により集め、逆相ＨＰＬＣにより、調節剤としてギ酸を使用して精製した。黄色の固体（１１０ｍｇ）が得られた。融点２３９〜２４５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ ８．７０（ｂｓ，１ Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１ Ｈ），７．７７−７．７５（ｍ，２ Ｈ），７．３８−７．５６（ｍ，２ Ｈ），７．４２（ｍ，３ Ｈ），７．３７−７．３５（ｍ，１ Ｈ），７．２２−７．２１（ｍ． ２ Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１ Ｈ）， ３．９５（ｂｓ，１ Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１ Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１ Ｈ），２．５２（ｍ，１ Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１ Ｈ），１．８７（ｍ，２ Ｈ），１．６０−１．５７（ｍ，１ Ｈ），１．４３−１．３７（ｍ，１ Ｈ）； ； ３１Ｐ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） ４００ＭＨｚ δ −５．２０１； ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６４７。
（実施例３）
ＲＡＦ活性の測定
材料：ＲＡＦキナーゼおよび抗ホスホＭＥＫ１／２抗体はＵｐｓｔａｔｅ（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、ＶＡ）からのものであった。使用されたＲＡＦ基質は、全長Ｎ末端ＧＳＴ−ＭＥＫ−１であり、これを、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させ、ＨＰＬＣにより自家精製した。全てのタンパク質を等分し、−８０℃で貯蔵した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（商標）遮断試薬はＰｉｅｒｃｅ（ｃａｔ．＃３７５１５）からのものであった。ＡＴＰはＲｏｃｈｅ（ｃａｔ．＃１９０３５７２２）からのものであった。アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ウサギ抗体はＰｉｅｒｃｅ（ｃａｔ．＃３１３４０）からのものであった。
【０１３５】
方法：全てのＲＡＦの生化学的アッセイを、２０ｍＭのＭＯＰＳ、５ｍＭのＥＧＴＡ、３７．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴおよび５０μＭのＡＴＰを含有するアッセイ緩衝液を使用して行った。６．２５ｎｇ／ウェルの変異体Ｂ−ＲＡＦおよび７．５ｎｇ／ウェルのＭＥＫ−１が最終アッセイ条件には存在した。１％のＤＭＳＯおよび最終濃度よりも３倍高い濃度の試験化合物２０μｌを含有するアッセイ緩衝液中で、化合物を連続希釈し、ポリプロピレンＶ−ウェル反応プレートに加えた。ビヒクル対照ウェルには、試験ウェルと同じ濃度のＤＭＳＯのみを有する緩衝液を与えた。迅速に連続して、基質２０μｌ（０．４５ｎｇ／μｌ ＭＥＫ−１）を、続いて、酵素２０μｌ（０．３７５ｎｇ／μｌ 変異体Ｂ−ＲＡＦ）を加えた。これらの反応プレートを室温で３０分間インキュベートした。ＭＥＫ−１の捕捉を、反応混合物５０μｌを非特異的タンパク質捕捉に対して設計されているＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）マイクロプレートに移すことにより開始した。室温でのＭＥＫ−１の３０分捕捉の後に、このプレートをＴＢＳＴ（６×２００μＬ／ウェル）で洗浄して、反応を完全に停止させた。次いで、プレートを、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（商標）遮断試薬１００μｌ／ウェルを加えることにより１時間遮断した。プレートを再び、ＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、続いて、Ｐｉｅｒｃｅ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（ＰＢＳ）中で１：１０００希釈されたＵｐｓｔａｔｅ抗ホスホＭＥＫ１／２ ７０μｌ／ウェルを加えた。６０分のインキュベーションの後に、このプレートをＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中１：４０００で調製された二次抗体（Ｐｉｅｒｃｅ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ標識ヤギ抗ウサギ）７０μｌを加えた。室温で４５分インキュベートした後に、マイクロプレートのウェルをＴＢＳＴ（２００μｌ／ウェルで６回）で洗浄し、その後、Ａｔｔｏｐｈｏｓ（商標）蛍光アルカリホスファターゼ基質１００μｌ／ウェルを、製造者の指示書（ＪＢＬ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って加えた。蛍光をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで、次のフィルターを使用して読み取った：励起フィルター：ＣＦＰ４３０ｎＭ、放射フィルター：放射フィルター５７９ｎＭ。
【０１３６】
本発明の化合物は、ＲＡＦキナーゼの阻害を介して、ＭＥＫのリン酸化を阻止する。本発明の一定の化合物でのＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害データを表１に示す。
（実施例４）
エレクトロブロッティング読取りを伴う細胞ベースのリン酸化アッセイ
本発明の化合物を、一般には全てのアイソフォーム、野生型および変異体両方のＲＡＦキナーゼ（Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦおよびＣ−ＲＡＦ）ならびに特にはヒト癌細胞における変異体Ｂ−ＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）を阻害するその能力に関してスクリーニングした。Ａ３７５は、ヒト癌で見出される最も共通したＢ−ＲＡＦ変異−Ｖ６００Ｅを内包するヒト黒色腫細胞系である。このアッセイにおけるＲＡＦキナーゼを阻害する化合物の能力は、ＭＥＫおよびＥＲＫリン酸化の低減と相関しており、したがって、潜在的なｉｎ ｖｉｖｏ治療活性の直接的な指標である。
【０１３７】
材料：ＡＴＣＣからのＡ３７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を追加されたＤＭＥＭ培地中で維持した。
【０１３８】
方法：試験化合物をＤＭＳＯ中に溶かし、１：１０００で希釈した。Ａ３７５細胞を６ウェル組織培養プレートに１ウェル当たり５〜８×１０５で播種し、３７℃で２４時間培養した。細胞を化合物と共に１時間インキュベートし、その後、ＥＰａｇｅ（商標）添加バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で溶解した。溶解産物を８％ＥＰａｇｅ（商標）ゲル上で電気泳動させ、ポリビニリデンジフルオリド膜に移した。一次および二次抗体と共にインキュベートした後に、免疫染色されたタンパク質を検出し、Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外イメージャー（ＬＩ−ＣＯＲ）により定量化した。分析を非線形回帰により行い、用量応答曲線を生じさせた。算出されたＩＣ５０値は、ホスホ−ＭＥＫおよびホスホ−ＥＲＫレベルにおいて５０％の低減をもたらす試験化合物の濃度であった。使用された一次抗体は、抗ＭＥＫ（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ）、抗ＥＲＫ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ホスホ−ＥＲＫおよび抗ホスホ−ＭＥＫ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）であった。使用された二次抗体は、ＩＲＤＹＥ８００抗ウサギ、ＩＲＤＹＥ８００抗マウス（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０抗マウスおよびＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６８０抗ウサギ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であった。
【０１３９】
図２は、癌細胞中のホスホ−ＥＲＫに対する式Ｉの化合物の効果を示している。Ａ３７５細胞を０、１２、３７、１１１、３３３および１０００ｎＭの示されている化合物で１時間処理した。ホスホ−ＥＲＫおよび全ＥＲＫのレベルを、免疫ブロット法によりアクセスした（ａｃｃｅｓｓｅｄ）。
【０１４０】
本発明の化合物は、ホスホ−ＭＥＫおよびホスホ−ＥＲＫのレベルを、ＲＡＦキナーゼの阻害を介して低減する。本発明の一定の化合物でのＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害データを、図２および表１に示す。
（実施例５）
細胞増殖阻害アッセイ
本発明の化合物を、様々な癌細胞系に対する活性に関して試験した。このアッセイにおける細胞増殖を阻害する化合物の能力は、代謝活性な細胞において見出されるデヒドロゲナーゼ酵素活性の低減と相関している。
【０１４１】
材料：ＡＴＣＣからの広範に多様な癌細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を追加されたＤＭＥＭ培地中で維持した。ＮＣＭ４６０（Ｉｎｃｅｌｌ）、正常な結腸上皮細胞系およびヒト乳房上皮細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ）を３７℃、５％ＣＯ２で、それぞれＤＭＥＭおよびＨＥＢＭ培地（Ｃａｍｂｒｅｘ）中で維持した。
【０１４２】
方法：試験化合物をＤＭＳＯ中で溶解し３００×まで希釈し、次いで、１：４０にＤＭＥＭ中で希釈した。細胞を９６ウェル組織培養プレートに１ウェル当たり１〜５×１０３で播種し、３７℃で２４時間培養した。細胞を試験化合物と共に７２時間インキュベートし、続いて、テトラゾリウム化合物（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩；ＭＴＳ）および電子結合試薬、フェナジンメトスルフェート（ＰＭＳ）と共に４時間インキュベートした。ＭＴＳが、細胞中のデヒドロゲナーゼにより化学的に還元されてホルマザンになった。ホルマザンの吸光度の測定を、ＥＮＶＩＳＩＯＮ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して４９２ｎｍで評価した。算出ＩＣ５０値は、吸光度の５０％低下をもたらす試験化合物の濃度である。
【０１４３】
本発明の化合物は、様々な癌細胞の増殖を阻害する。本発明の一定の化合物でのデータを表２および表３に示す。
（実施例６）
化合物活性のパターンについての観察
酵素阻害および細胞系阻害の予期せぬパターンにより、式Ｉの一定の化合物は、プロドラッグであると考えられる。さらに、これらの化合物は意外にも、溶解度の劇的な増大を示すので、有効な治療組成物へのその製剤化能力を助長する。
【０１４４】
化合物１５および１６は、化合物１４の共通する親構造を共有するという点で化合物１４の類似体であり、それらは親構造のフェノール系酸素に結合しているホスフェートまたはメチルホスフェートを有する。表Ｉに示されている通り、チアゾール化合物１５および１６は、化合物１４よりも変異体Ｂ−ＲＡＦの阻害においてかなり効力が劣る。詳細には、化合物１５は、化合物１４に対して約４００倍のＩＣ５０の上昇を示し、化合物１６は、約１９３倍の上昇を示す。しかしながら、同様のパターンは、表Ｉにも示されている通り細胞ベースのＥＲＫ阻害データでは現れず、これらは、ＥＣ５０においてそれぞれ約２および４倍離れている。同様の効果が、オキサゾール類似体：化合物１７、１８および１９で見られる。例えば、化合物１９は、化合物１７に対してＢ−ＲＡＦ ＩＣ５０の３６５上昇を示し、ＥＣ５０にはほとんど変化を示さない。
【０１４５】
ｉｎ−ｖｉｖｏ対ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性での上記不一致についての説明は、化合物１５、１６、１８および１９は、Ａ３７５細胞により代謝またはそうでなければ変換されて、それぞれ化合物１４および１７をもたらすプロドラッグとして作用しているということである。
【０１４６】
図３に示されている通り、化合物１７および１９は、異種移植片癌モデルにおいてその抗腫瘍活性を維持する（測定の詳細は実施例７に示されている）。化合物１７を１６０ｍｇ／ｋｇで腹膜内（ＩＰ）注射し、化合物１９を３００ｍｇ／ｋｇ（ｍｍｏｌｅ／ｋｇで表した場合は等用量、塩成分を考慮）でＩＰ注射した。
【０１４７】
化合物１７および１９は、図３の異種移植片モデルにおいて同等に有効であるようであり、化合物１９は、さらに潜在的な利点を有する。表４で分かるように、化合物１９は、生物学的に該当するｐＨで、またはその付近で、水溶液中で劇的により高い溶解度を有する。したがって、化合物１９は、製剤化がより容易である可能性がある（例えば、静脈内溶液を調製するために、または当技術分野で公知の他の送達方法のために）。溶解度測定についての詳細は、実施例８に示す。
（実施例７）
無胸腺マウスにおける異種移植片モデルのプロトコル
マウス異種移植片モデルを、Ｊａｃｏｂら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００４年；８巻：２１３〜２１９頁およびＷｉｌｈｅｌｍら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４年；６４巻：７０９９〜７１０９頁の方法に従って行った。
【０１４８】
動物のケア ６週齢の雌のＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスをＴａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹから購入し、１〜２週間順応させた。マウスを無菌のマイクロアイソレーターケージに１ケージ当たりマウス５匹で収容し、食餌と水を自由に摂らせた。全ての実験手順および外科的処置は、ＡｒＱｕｌｅ’ｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって認められた。
【０１４９】
腫瘍細胞系およびモデル 癌腫細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（ＡＴＣＣ）、（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ）から入手し、推奨される通りに増殖させた。マウスに、無菌のハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）０．１ｍｌ中の２．５〜１０×１０６細胞を右上側腹部に皮下移植した。化合物の投与を、腫瘍サイズが７５から２００ｍｇの間の範囲に及んだときに開始した。腫瘍測定および体重を、電子キャリパーおよび天秤を用いて、週に２から３回集めた。腫瘍重量（ｍｇ）を式：長さ×（幅）２）／２から算出し；この式をまた、単位密度１ｍｇ＝１ｍｍ３と仮定して腫瘍体積を算出するために使用することができる。阻害パーセントまたは腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）パーセントを、次の式：１−［治療されたものの平均腫瘍値／対照の平均腫瘍値］×１００を使用して算出した。＞３０％致死率および／または＞２０％の正味体重低下をもたらした治療は、毒性と考え得る。
（実施例８）
様々なｐＨでの平衡溶解度決定のためのプロトコル
化合物の溶解度を、従来の振盪フラスコ法により決定した。固体化合物の一定部分を所望のｐＨの適切な緩衝液と混合し、室温（約２５℃）で６〜２４時間振盪することにより平衡化させた。下記の水性緩衝液をｐＨ対照のために使用した：０．１ＮのＨＣｌ ｐＨ＝１．２、５０ｍＭの乳酸緩衝液ｐＨ＝３．０、５０ｍＭの酢酸緩衝液ｐＨ＝５．０および１００ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．４。平衡化の後に、試料を０．４５ｕｍフィルターで濾過し、標準溶液の較正曲線に対してＨＰＬＣ／ＵＶにより分析した。
（実施例９）
本発明の例示的な化合物とｃ−Ｍｅｔ阻害剤との組合せ
別段に述べられていない限り、次の材料および方法を、本明細書に記載の生物学的アッセイに適用する。細胞培養物および試薬：癌細胞系を、１０％ウシ胎児血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ培地中で培養した。
【０１５０】
細胞増殖分析。細胞生存をＭＴＳアッセイにより決定した。簡略には、細胞を９６ウェルプレートに１ウェル当たり２０００〜１００００細胞で播種し、完全増殖培地中で２４時間培養し、次いで、様々な薬物および薬物組合せで７２時間処理した。ＭＴＳを加え、４時間インキュベートし、続いて、マイクロプレートリーダーを使用して５７０ｎｍで細胞生存率を評価した。データを未処理の対照に対して正規化し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌで分析した。
【０１５１】
本明細書に記載の研究は、本明細書に示されている式Ｉの化合物、即ち、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート、Ｖ６００Ｅ変異体Ｂ−Ｒａｆ阻害剤を、ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの低分子量阻害剤である（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５，−ジオンと組み合わせて使用した。
【０１５２】
一連の遺伝子型および組織起源を包含する５５種のヒト癌細胞系のパネルを７２時間ＭＴＳ細胞傷害性アッセイで、幅広い範囲の化合物濃度にわたって調べた。化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートおよび（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンは、７２時間ＭＴＳアッセイのためにチェッカーボードの３倍希釈物で構成された。
【０１５３】
本実施例では、２種の独立した実験を並行して行った。Ｃｈｏｕアルゴリズムを使用して、下記に示されている通りの併用指数（ＣＩ）を算出した。
【０１５４】
【数１】
（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートと（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンとの併用データを表５に示す。癌細胞系のアイデンティティおよび組織起源を示す。結果は、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートと（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンとの組合せは、ＮＣＩ−Ｈ５２（ＮＳＣＬＣ）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳房）、ＳＮＵ４７５（肝臓）を包含する多くの細胞系およびＰＣ３（前立腺）細胞系において相乗的細胞傷害性をもたらし、多くの他の細胞系において相加的細胞傷害性を示したことを示している。
【０１５５】
【表１−１】
【０１５６】
【表１−２】
【０１５７】
【表１−３】
【０１５８】
【表１−４】
【０１５９】
【表１−５】
【０１６０】
【表１−６】
【０１６１】
【表１−７】
【０１６２】
【表２】
【０１６３】
【表３−１】
【０１６４】
【表３−２】
【０１６５】
【表３−３】
【０１６６】
【表４】
【０１６７】
【表５−１】
【０１６８】
【表５−２】
上記の論述は、本発明の様々な例示的実施形態を開示しているが、当業者であれば、本発明の真の範囲から逸脱することなく、本発明の利点の一部を達成する様々な変更を成し得ることは明らかなはずである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１０】
の化合物または薬学的に許容されるその塩であって、式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である、
化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ２およびＲ３が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ４が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくない場合、好ましい配置はＲである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６がアルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−シアノフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されて、請求項１に記載の式Ｉの化合物をもたらすプロドラッグであって、Ｒ７は、前記加水分解後にＨまたはＣＨ２ＯＨである、プロドラッグ。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物。
【請求項１１】
第２の化学療法剤をさらに含む、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記第２の化学療法剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記第２の化学療法剤が、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬からなる群から選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記第２の化学療法剤が、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートである、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
細胞増殖性障害を治療または予防する方法であって、前記細胞増殖性障害を伴う細胞を有する被験体に、前記細胞増殖性障害が治療される治療有効量の請求項１から５のいずれかに記載の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与する工程を含む方法。
【請求項１７】
増殖性障害を伴う前記細胞が、ＲＡＦをコードするＤＮＡを含有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＲＡＦが、Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦまたはＣ−ＲＡＦである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＲＡＦが、Ｂ−ＲＡＦである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｂ−ＲＡＦが野生型である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｂ−ＲＡＦが変異体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｂ−ＲＡＦ変異体がＢ−ＲＡＦＶ６００Ｅである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞が、構成的に高いＲＡＦ活性を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞増殖性障害が、前癌性状態である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞増殖性障害が黒色腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
前記細胞増殖性障害が乳頭状甲状腺癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞増殖性障害が結腸癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞増殖性障害が、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍、リンパ系腫瘍、肉腫、癌腫および腺癌のうちの１つである、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞増殖性障害が先天性母斑である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物または薬学的に許容されるその塩を、第２の化学療法剤と組み合わせて投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２の化学療法剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の化学療法剤が（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記式Ｉの化合物が（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌が、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌または膵臓癌である、請求項３３に記載の方法。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１０】
の化合物または薬学的に許容されるその塩であって、式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｐであり；
ｍは、１から３の整数であり；
ｎは、１から３の整数であり；
ｏは、０から２の整数であり；
ｐは、０から２の整数であり；
Ｚは、水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ４、−ＯＲ４、−ＮＲ４Ｒ５であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、置換もしくは非置換低級アルキル、−ＣＯＯＲ４または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４および各Ｒ５は独立に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、環を形成していてもよく；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８フルオロ置換アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８フルオロ置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロシクリル、アリール、ハロゲン置換アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル置換ヘテロアリールおよびハロゲン置換ヘテロアリールからなる群から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは（ＣＨ２Ｏ）ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲ４ＯＲ５である、
化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ２およびＲ３が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ４が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｍ＋ｎ＝４であり、ｍがｎに等しくない場合、好ましい配置はＲである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが水素、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−、−Ｓ（Ｏ）２−であり；Ｒ６がアルキル置換ヘテロシクリルまたはアルキル置換ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（４−シアノフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；３−（５−（２−（１−（４−フルオロフェニルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（（３−（５−（２−（１−（シクロプロピルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メトキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；（Ｒ）−２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（２−フルオロ−５−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
（Ｒ）−３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）フェニル二水素ホスフェート；（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（４−クロロフェニルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート；および（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
化合物（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートまたは薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されて、請求項１に記載の式Ｉの化合物をもたらすプロドラッグであって、Ｒ７は、前記加水分解後にＨまたはＣＨ２ＯＨである、プロドラッグ。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物。
【請求項１１】
第２の化学療法剤をさらに含む、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記第２の化学療法剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミモシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記第２の化学療法剤が、タキサン、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的化薬、トポイソメラーゼ毒薬、標的化モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、分子標的もしくは酵素の阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）またはシチジン類似体薬からなる群から選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記第２の化学療法剤が、（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートである、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
細胞増殖性障害を治療または予防する方法であって、前記細胞増殖性障害を伴う細胞を有する被験体に、前記細胞増殖性障害が治療される治療有効量の請求項１から５のいずれかに記載の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与する工程を含む方法。
【請求項１７】
増殖性障害を伴う前記細胞が、ＲＡＦをコードするＤＮＡを含有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＲＡＦが、Ａ−ＲＡＦ、Ｂ−ＲＡＦまたはＣ−ＲＡＦである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＲＡＦが、Ｂ−ＲＡＦである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｂ−ＲＡＦが野生型である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｂ−ＲＡＦが変異体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｂ−ＲＡＦ変異体がＢ−ＲＡＦＶ６００Ｅである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞が、構成的に高いＲＡＦ活性を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞増殖性障害が、前癌性状態である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞増殖性障害が黒色腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
前記細胞増殖性障害が乳頭状甲状腺癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞増殖性障害が結腸癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞増殖性障害が、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌、脳癌、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、血液系腫瘍、リンパ系腫瘍、肉腫、癌腫および腺癌のうちの１つである、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞増殖性障害が先天性母斑である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物または薬学的に許容されるその塩を、第２の化学療法剤と組み合わせて投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２の化学療法剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン、ゲムシタビン、Ａｒａ、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、エポチロン、ナベルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン イマタニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブマレエート、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の化学療法剤が（−）−トランス−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記式Ｉの化合物が（Ｒ）−（３−（５−（２−（１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルスルホニル）ピペリジン−３−イルアミノ）ピリミジン−４−イル）イミダゾ［２，１−ｂ］オキサゾール−６−イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェートである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌が、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌または膵臓癌である、請求項３３に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１２−５１１０２１（Ｐ２０１２−５１１０２１Ａ）
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３９７４９（Ｐ２０１１−５３９７４９）
【出願日】平成２１年１２月４日（２００９．１２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６６８２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６５８９３
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５０１０５４２２９）アークル インコーポレイテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月４日（２００９．１２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６６８２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６５８９３
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５０１０５４２２９）アークル インコーポレイテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
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