アタシセプトなどのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を用いた自己免疫疾患を治療するための投薬法
種々の態様において、本発明は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む自己免疫疾患を治療するための方法、組成物、投薬、及び投与スケジュールを提供し、このような治療を必要とする患者にアタシセプトなどのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を投与することを含む。一態様では、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子は、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの増殖を誘導する機能を遅くし、抑制し、又は阻害するのに十分な量で投与し、特に、治療過程全体にわたって、相対的に低い投薬量で融合分子の複数回投与の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
種々の態様では、本発明は、免疫系の自己免疫疾患又は障害を治療するための方法及び組成物に関し、ＴＮＦファミリーのリガンドの機能のブロッキングを最大にする特定の投薬処方計画を用いて、アタシセプト（ａｔａｃｉｃｅｐｔ）などのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を投与することを含む。
【背景技術】
【０００２】
ＢＬｙＳリガンド／受容体ファミリー
３つの受容体であるＴＡＣＩ（膜貫通活性化因子又はカルシウム調節シクロフィリンリガンド相互作用因子）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）及びＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子に対する受容体、ＴＮＦファミリーに属する）が同定され、それらは、２つの増殖因子であるＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘導リガンド）に対する独自の結合親和性を有する（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ ２０００；１０（１３）：７８５−７８８；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；２９３：２１０８−２１１１）。ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの両方に結合し、一方、ＢＡＦＦ−Ｒは、高親和性でＢＬｙＳだけに結合可能に見える（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ ２０００；１０（１３）：７８５−７８８；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；２９３：２１０８−２１１１）。結果として、ＢＬｙＳは、３つ全ての受容体を介してシグナル伝達することができ、一方、ＡＰＲＩＬだけは、ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡを介してシグナル伝達を可能にする。さらに、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬ（３つのタンパク質の集団、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬの各々を１又は２コピー含む）の循環ヘテロ三量体複合体は、全身性免疫系リウマチ性疾患の患者から採取した血清試料において同定され、インビトロにおいてＢ細胞増殖を誘導することが示されている（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１）。３つ全ての受容体に対するＩｇ融合タンパク質のうち、アタシセプトなどのＴＡＣＩ−Ｆｃ５だけは、ヘテロ三量体複合体の生物学的活性をブロックすることができる（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１）。
【０００３】
ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞の成熟、増殖及び生存の強力な刺激因子である（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０４：９９５−９９９．Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２．Ｇｒｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００２；１０９（１）：５９−６８）。ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬは、自己免疫疾患、特にＢ細胞が関与する疾患の持続に必要とされる場合がある。高レベルのＢＬｙＳを発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウスは、細胞障害を提示し、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の患者に見られるものと類似した症状を示す（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｖｉｓｅｄ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ １９９６；８７：４９９０−４９９７．Ｃｈｅｅｍａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００１；４４（６）：１３１３−１３１９）。同様に、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬのレベル上昇は、ＳＬＥ患者、及び関節リウマチのような種々の自己免疫疾患の他の患者から採取した血清試料において測定され（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１；Ｍａｒｉｅｔｔｅ Ｘ．，Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２００３；６２（２）：１６８− １７１；Ｈａｈｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９８；１８８（６）：１１８５−１１９０）、動物モデルからヒトへ、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとＢ細胞を媒介した疾患との関連性が広がりつつある。
【０００４】
全身性エリテマトーデス
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、自己免疫疾患であり、臨床的には、漸増及び漸減過程によって特徴付けられ、並びに、皮膚、腎臓及び中枢神経系を含む多臓器の関与によって特徴付けられる（Ｋａｍｍｅｒ Ｇ Ｍ ａｎｄ Ｔｓｏｋｏｓ Ｇ Ｃ Ｅｄｓ．（１９９９）Ｌｕｐｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ １ｓｔ Ｅｄ，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｊ．；Ｌａｈｉｔａ Ｒ Ｇ Ｅｄ．（１９９９）Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｒｏｍａｔｏｓｕｓ，３ｒｄ Ｅｄ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）。ＳＬＥの全体的な有病率は、２０００人に約１人であり、７００人の白人女性のうちの約１人が一生涯でＳＬＥを発症する（Ｌａｈｉｔａ Ｒ Ｇ （１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｓｅｐ；１１（５）：３５２−６）。米国だけは、５０万人がＳＬＥであり、大部分が妊娠可能な時期にある女性である（Ｈａｒｄｉｎ Ｊ Ａ（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１１０１−１１１１）。
【０００５】
ＳＬＥを診断するための単一な基準はない。米国リウマチ学会は、ＳＬＥを診断するための１１個の基準を生み出し、それらは、皮膚、全身、及び実験室試験の局面のおけるＳＬＥの臨床スペクトルを測るものである。これらの基準には、頬部発疹、円形発疹、太陽光に対する感受性、口内潰瘍、関節炎、漿膜炎、腎臓及び中枢神経系の炎症、血液変性、並びに抗核抗体の存在が含まれる。患者は、ＳＬＥ患者として分類されるためには、これらの基準のうち４つを満たす必要がある（Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２５：１２７１−１２７７）。ＳＬＥは、通常、限定されないが、抗核抗体を検出するための血液試験；腎機能を評価する血液及び尿の試験；多くの場合、ＳＬＥと関連する低レベルの補体の存在を検出する補体試験；炎症レベルを測定するための沈降速度（ＥＳＲ）又はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）；肺障害を評価するためのＸ線、及び心臓障害を評価するためのＥＫＧが含まれる。
【０００６】
ＳＬＥの標準的な治療は、一般的な免疫応答阻害剤であるステロイドのグルココルチコイドの投与である。症状を軽減するためにそれを使用することができる；しかしながら、現在、ＳＬＥの治療に有効ではない。通常、０．５ｍｇ未満／ｋｇ／日レベルの低投薬量で、経口のプレドニソンが与えられる。残念なことに、この治療は、患者を寛解な状態に維持するには不十分であり、この疾患の再燃（ｆｌａｒｉｎｇ）は頻繁である。再燃は、連続して３日間、３０ｍｇのメチルプレドニソロン／ｋｇ／日で静脈パルスを介して高投薬量のグルココルチコイドを用いて制御可能である。しかしながら、高投薬量でのステロイド処置は、重篤な副作用を患者に与え得る。
【０００７】
これらの標準的な治療は、一般的には非特異的であり、重篤な副作用と頻繁に関連付けられ、疾患の進行、又は生命を脅かす腎合併症（ループス腎炎、すなわち、ＬＮ）への移行に有意に影響を与えない。結論として、ＳＬＥを治療するための新規な方法を開発することが、当該技術分野において長年にわたって必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
様々な態様では、本発明は、自己免疫疾患を治療する方法に関する。具体的には、本発明の方法は、ヒト免疫グロブリン定常ドメイン及びＴＡＣＩ細胞外ドメイン、又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するその断片を含む組成物を患者に投与することを含む。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン、又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する能力を保持するその任意の断片の融合体を含む分子、例えばアタシセプトを用いて、ＳＬＥを含む自己免疫疾患を治療する方法を含む。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメインあるいはＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片とを含む有効量の融合分子をそれを必要とする患者に投与することを含む、ＳＬＥを治療する方法を含む。一態様では、ＴＡＣＩの細胞外ドメインの断片は、１又は２個のシステイン繰り返しモチーフを含む。別の態様では、この断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸３０〜１１０を含む断片である。なお別の態様では、この断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸１〜１５４（配列番号１）を含む断片である。
【００１１】
別の態様では、本発明は、配列番号２として記載される配列を有するヒト免疫グロブリン定常ドメインであるＦｃ５と、配列番号１として記載される配列を有するＴＡＣＩ細胞外ドメインとを含む融合ポリペプチドであるＴＡＣＩ−Ｆｃ５を含む組成物を患者に投与することによって、ＳＬＥを治療する方法を含む。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号２として記載される配列を有するヒト免疫グロブリン定常ドメインと、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合し、配列番号１と少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％同一であるポリペプチドとを含む融合ポリペプチドを含む組成物を患者に投与することによって、ＳＬＥを治療する方法を含む。
【００１３】
他の自己免疫疾患は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片とを含む融合タンパク質を患者に投与することによる本発明の方法によって治療することができる。このような自己免疫疾患には、限定されないが、関節リウマチ（ＲＡ）、グレーブス病、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、糸球体腎炎、移植による拒絶反応、例えば、臓器及び組織同種移植及び異種移植拒絶反応、並びに移植片対宿主疾患が挙げられる。
【００１４】
一態様では、本発明の方法は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜患者の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇの量でアタシセプト融合分子をＳＬＥ患者に投与することを含む。アタシセプト分子は、所定の間隔で複数回投与することができる。具体的には、該分子は、所定の投薬期間中に複数回投与することができる。例えば、投薬は、毎週又は３週間ごとの間隔で相対的に低い投薬量で行うことができる。アタシセプト融合ポリペプチドを用いた初期の治療は、２週に１回（ｂｉ−ｗｅｅｋｌｙ）（隔週）又は３週に１回（ｔｒｉ−ｗｅｅｋｌｙ）（第３週毎）を基準にして、それぞれ少なくとも２又は３週を超える更なる週の期間、該ポリペプチドの投与へと続く。例えば、ポリペプチドは、２週に１回を基準にして、さらに２〜３０週間投与されてもよい。あるいは、該ポリペプチドは、毎週又は毎日を基準にして投与されてもよい。
【００１５】
本発明の方法によれば、アタシセプトポリペプチドは、皮下、経口、又は静脈内に、他の薬剤と組み合わせて、ＳＬＥ患者にすることができる。このような薬剤には、限定されないが、下記が含まれる：ＮＳＡＩＤＳ（非ステロイド性抗炎症薬）、オーバー・ザ・カウンターと処方箋を必要とするものの両方を含み、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシンジフルニサル、ナブメトン；抗マラリア薬、例えば、硫酸ヒドロキシクロロキン及びクロロキン；副腎脂質ステロイド、例えば、プレドニソン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニソロン；並びに、免疫抑制剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキセート、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイド。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】主要な薬物動態測定である、皮下投与に関する数日間の時間に対するプロットされた遊離アタシセプト濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、記号表に示されている。
【００１７】
【図２】主要な薬物動態測定である、皮下投与に関する数日間の時間に対するプロットされたアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、図１の記号表に示されている。
【００１８】
【図３Ａ】種々の免疫グロブリンレベル及びＢ細胞レベルにおける皮下投与の生物学的効果を図示する。
【００１９】
【図３Ｂ】種々の免疫グロブリンレベル及びＢ細胞レベルにおける皮下投与の生物学的効果を図示する。
【００２０】
【図４】アタシセプトの皮下及び静脈内投与のための遊離アタシセプト測定によって示される生物学的利用能における差を示す。
【００２１】
【図５】ＩｇＭ濃度対時間によって示される、２つの投与法を用いて観察された相対的に類似した生物学的活性を図示する。図４の記号表を参照されたい。
【００２２】
【図６】遊離アタシセプト対時間によって示される、皮下と静脈内投与法の類似性を図示する。
【００２３】
【図７】アタシセプト：ＢＬｙＳ複合体対時間によって示される、２つの投与法を用いて観察された相対的に類似した標的結合曲線を示す。図４の記号表を参照されたい。
【００２４】
【図８】ＩｇＭ対時間によって示される、どのようにして複数回投薬がより高い生物学的活性を生じるのかを図示する。
【００２５】
【図９】アタシセプト：ＢＬｙｓ複合体対時間によって示される、どのようにして標的結合が複数回投薬を用いてより高いかを図示する。図４の記号表を参照されたい。
【００２６】
【図１０】主要な薬物動態測定である、静脈内投与に関する数日間の時間に対するプロットされた遊離アタシセプト濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、記号表に示されている。
【００２７】
【図１１】主要な薬物動態測定である、静脈内投与に関する数日間の時間に対するプロットされたアタシセプト：ＢＬｙｓ複合体濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、図１０の記号表に示されている。
【００２８】
【図１２】静脈内投与を用いたバイオマーカー測定のグラフであり、特に免疫部グロブリンレベル及びＢ細胞レベルである。
【００２９】
【図１３】図１３Ａ及びＢは、皮下投与に関する、複合アタシセプト濃度（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙｓ複合体として定義される）対時間のグラフである（試験１）。（Ａ）単回投薬群；（Ｂ）複数回投薬群。平均±ＳＥ値を示す。複数回投薬は、第０、７、１４、及び２１日に投与された。投薬中の点は、濃度ピークが投薬間で捕捉されないことを示すようにつながってはいない。
【００３０】
【図１４】図１４Ａ及びＢは、静脈内投与に関する、複合アタシセプト濃度（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙｓ複合体として定義される）対時間のグラフである（試験２）。（Ａ）単回投薬群；（Ｂ）複数回投薬群。平均±ＳＥ値を示す。複数回投薬は、第０及び２１日に投与された。
【００３１】
【図１５Ａ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３２】
【図１５Ｂ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３３】
【図１５Ｃ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３４】
【図１６Ａ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３５】
【図１６Ｂ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３６】
【図１６Ｃ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３７】
【図１７Ａ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００３８】
【図１７Ｂ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００３９】
【図１７Ｃ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４０】
【図１８Ａ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４１】
【図１８Ｂ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４２】
【図１８Ｃ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４３】
【図１９】皮下及び静脈内試験の同じ単回投薬群におけるＩｇＭプロフィール（平均±ＳＥ）を示す。（Ａ）３ｍｇ／ｋｇ；（Ｂ）９ｍｇ／ｋｇ。
【００４４】
【図２０】皮下及び静脈内試験の同じ単回投薬群におけるアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体プロフィール（平均±ＳＥ）を示す。（Ａ）３ｍｇ／ｋｇ；（Ｂ）９ｍｇ／ｋｇ。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
種々の態様では、本発明は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとそれらの受容体との相互作用を阻害することによって、患者における自己免疫疾患を治療するための方法に関する。患者は、動物、例えばヒトであってもよい。一態様では、この方法は、１）ＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬを結合するその断片と少なくとも部分的に同一であるドメインを含むポリペプチド；２）ヒト免疫グロブリン定常鎖を含む阻害剤を利用する。一態様では、本発明の方法は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメインと少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％配列同一性を有する任意のポリペプチドとを含む融合分子を利用する。米国特許第５，９６９，１０２号、第６，３１６，２２２号、及び第６，５００，４２８号、並びに米国特許出願第０９１５６９，２４５号及び第０９１６２７，２０６号（それらの教示は、全体として参照により本明細書中に援用される）は、ＴＡＣＩの細胞外ドメイン、並びにＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬを含む、ＴＡＣＩリガンドと相互作用するＴＡＣＩ細胞外ドメインの特定の断片についての配列を開示する。１つは、ＴＡＣＩの細胞外ドメインの断片が１又は２つのシステイン繰り返しモチーフを含むことを例示する。別の例示的な断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸３０〜１１０又はその断片を含む断片である。なお別の例示的な断片は、ＴＡＣＩ細胞外ドメインのアミノ酸１〜１５４（配列番号１）又はその断片を含む断片である。
【００４６】
本発明の方法に有用な他の融合分子には、ヒト免疫グロブリン定常鎖と完全なＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそのオルソログとの間のポリペプチド、あるいは、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬリガンドに結合することができる細胞外ＴＡＣＩドメインの任意の断片との融合ポリペプチドが含まれる。本発明の方法に使用される融合分子のいずれかは、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子と呼ばれ得る。
【００４７】
ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、本発明の方法に有用なＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子の１つである。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、アミノ酸約１〜アミノ酸約１５４（配列番号１）の受容体ＴＡＣＩの細胞外の受容体部分と、ヒトＩｇＧの修飾されたＦｃ部分であるＦｃ５（配列番号２）とを含む組換え融合タンパク質である。本発明の方法に有用な他のＴＡＣＩ−Ｉｇ分子には、配列番号２を有するポリペプチドと、配列番号１と少なくとも約５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも約９９％同一であるＢＬｙＳに結合することができるポリペプチドとを含む融合分子が含まれる。
【００４８】
本発明の態様は、ＳＬＥを治療するためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子の方法を含む。本発明の方法を用いて治療され得る他の自己免疫疾患には、関節リウマチ（ＲＡ）、グレーブス病、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、糸球体腎炎、移植による拒絶反応、例えば、臓器及び組織同種移植及び異種移植拒絶反応、移植片対宿主疾患、又は循環成熟Ｂ細胞及び免疫グロブリン分泌細胞の数の減少及び疾患と関連した可溶性免疫グロブリンによって治療され得る任意の他の自己免疫疾患が挙げられる。
【００４９】
また、態様は、ヒト免疫グロブリン定常ドメインと、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合することができるＴＡＣＩ細胞外ドメインを含む融合分子を患者に投与することによって治療する方法を含む。
【００５０】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子は、限定されないが、経口、静脈内又は皮下を含む、投与の任意の適切な経路に従って患者に投与され得る。
【００５１】
本発明の方法に有用なＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、凍結、滅菌、等張液として調製及び保存されてもよい。このような製剤には、他の有効成分、賦形剤、例えば塩化ナトリウム、リン酸バッファー、及び水酸化ナトリウム又はＯ−リン酸（ｐＨ６．０）が含まれ得る。ＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、他の薬剤を併用して患者に投与することができる。このような薬剤には、限定されないが、ＮＳＡＩＤＳ（非ステロイド性抗炎症薬）、オーバー・ザ・カウンターと処方箋を必要とするものの両方を含み、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシンジフルニサル、ナブメトン；抗マラリア薬、例えば、硫酸ヒドロキシクロロキン及びクロロキン；副腎脂質ステロイド、例えば、プレドニソン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニソロン；並びに、免疫抑制剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキセート、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイドが挙げられる。
【００５２】
本発明の方法は、自己免疫疾患を治療するための他の方法と組み合わせて使用することができる。このような他の治療方法には、限定されないが、外科、鍼療法、理学療法、及び遺伝子治療が挙げられる。ＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、他の治療方法の前に、同時に、又は後に投与されてもよい。
【００５３】
ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、インビトロにおけるＢ細胞増殖のＢＬｙＳ活性化を阻害することが示されている。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５によるマウスの処置では、結果として、Ｂ細胞の発生を部分的にブロックする。このＢ細胞の発生は、骨髄にあるＢ細胞前躯体、末梢血Ｔ細胞、単球、及び好中球を含む他の細胞系統に対して最少の影響を有する。血中のＴＡＣＩ受容体の可溶性形態を過剰発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウスは、ほとんど成熟Ｂ細胞を生産せず、循環抗体レベルの減少が示される。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５トランスジェニックマウスは、胸腺、骨髄及び腸間膜リンパ節中に細胞を正常な数で有する。胸腺、リンパ節、及び脾臓におけるＴ細胞集団において有意な差はない（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２）。
【００５４】
さらに、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、抗原に対する一次応答又は二次応答中に投与されるかどうかにかかわらず、マウスにおける免疫応答における抗原に特異的な抗体の産生を阻害することができる。これらの試験では、エクスビボの抗原接種に対するＴ細胞応答のおける効果がないことが観察された。全身性紅斑性狼瘡の動物モデルでは、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を用いて処置は、疾患の開始及び進行を制限する点で有効であった（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０４：９９５−９９９）。同様に、コラーゲンによって誘導された関節炎のマウスモデルでは、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、コラーゲン特異的な抗体の産生を阻害し、炎症の罹患率と疾患の発生率の両方を減少させることができた（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２）。
【００５５】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を含む組成物は、患者に１回投与されてもよく、又は期間中に繰り返して患者に投与されてもよい。例えば、患者は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子の１回の皮下注射を受けてもよく、その後、彼又は彼女の状態をモニターしてもよい。状態の改善又は少なくとも安定化を示す患者は、追加の期間中に繰り返してＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を投与されてもよい。その追加の期間は、約２〜約５２週であってもよい。例えば、患者は、４週の期間内にＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を３回投薬で投与されてもよい。あるいは、患者は、１２週の期間内にＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を７回投薬で投与されてもよい。患者へのＴＡＣＩ−Ｉｇ分子の投与は、１日に１回（ｄａｉｌｙ）、２日に１回（ｂｉｄａｉｌｙ）、週に１回（ｗｅｅｋｌｙ）、２週に１回（ｂｉ−ｗｅｅｋｌｙ）、３週に１回（ｔｒｉ−ｗｅｅｋｌｙ）、月に１回（ｍｏｎｔｈｌｙ）、２か月に１回（ｂｉ−ｍｏｎｔｌｙ）などであってもよい。
【００５６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子は、患者の状態を治療するために有効である量で患者に投与される。一態様では、所定の疾患又は障害に関連して、用語「治療すること」には、限定されないが、疾患又は障害を阻害すること、例えば、疾患又は障害の発生を阻止すること；疾患又は障害を軽減すること、例えば、疾患又は障害の抑制を引き起こすこと；あるいは、疾患又は障害によって引き起こされるか又はそれに起因する状態を軽減すること、例えば、疾患又は障害の症状を軽減、予防又は治療することが挙げられる。別の態様では、その量は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜患者の体重１ｋｇあたり約２０ｍｇの範囲であってもよい。
【００５７】
融合ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子は、任意の適切な方法で送達されてもよい。一態様では、分子は、腹腔内注射によって送達される。別の態様では、腹腔内注射は、皮下注射を介する。別の態様では、腹腔内注射は、腹部前壁内に投与される。投薬するために１回を超える注射が必要とされる場合、注射は、数センチあけて、時間的に比較的近接して、例えば、適度の可能であるほど近接して投与されてもよい。繰り返しの薬物投与については、腹部前壁への投与部位は、交代にするか又は変更されてもよい。腹部前壁への皮下注射に関する例示的なゾーンには、右上側外部領域、左下側外部領域、右下側外部領域、左上側外部領域、中央下側領域、並びに右及び左大腿及び上腕が挙げられる。あるいは、対象とするＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子は、錠剤、カプセル、液体組成物又はゲルなどの形態で静脈内注射又は経口的に送達されてもよい。
【００５８】
現在、Ｂ細胞は、抗体依存性及び抗体非依存性のメカニズムを介して、ＳＬＥ病因における重要な役割を果たすと考えられている。抗体産生に加えて、Ｂ細胞は、非常に多くのサイトカインを分泌し、抗原提示細胞として作用し、多様なエフェクター機能を提供する。このようにして、Ｂ細胞は、ＳＬＥにおける薬物開発のための合理的な標的として明確にされてきた（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ＪＬ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ２００６；５：５６４−７６）。
【００５９】
いくつかのＢ細胞に指向された戦略は、ＳＬＥのための可能な治療として提案されている。これらの戦略のいくつかは、Ｂ細胞に指向されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の使用を通じてＢ細胞を排除するように設計されている（Ｌｅａｎｄｒｏ ＭＪ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＪＣ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＧＩ Ｅｈｒｅｎｓｔｅｉｎ ＭＲ，ｌｓｅｎｂｅｒｇ ＤＡ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００２；４６：２６７３−３；Ｌｏｏｎｅｙ ＲＪ，Ａｎｏｌｉｋ ＪＨ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｄｌ Ｆｅｌｇａｒ ＲＥ，Ｙｏｕｎｇ Ｆ，Ａｒｅｎｄ ＬＪ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００４；５０：２５８０−９；Ｌｅａｎｄｒｏ ＭＪ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｇ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＪＣ，Ｅｈｒｅｎｓｔｅｉｎ ＭＲ，ｌｓｅｎｂｅｒｇ ＤＡ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２００５；４４：１５４２−５；Ｄｏｒｎｅｒ Ｔ，Ｋａｕｆｍａｎ Ｊ，Ｗｅｇｅｎｅｒ ＷＡ，Ｔｅｏｈ Ｎ，Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ＤＭ，Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ ＧＲ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ ２００６；８：Ｒ７４）。一方、他は、Ｂ細胞刺激を妨げ（Ｂａｋｅｒ ＫＰ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＢＭ，Ｍａｉｎ ＳＨ，Ｃｈｏｉ ＧＨ，Ｗａｇｅｒ ＲＥ，Ｈａｌｐｅｒｎ ＷＧ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：３２５３−６５；Ｗａｌｌａｃｅ ＤＪ，Ｌｉｓｓｅ Ｊ，Ｓｔｏｈｌ Ｗ，ＭｃＫａｙ Ｊ，Ｂｏｌｉｎｇ Ｅｌ Ｍｅｒｒｉｌｌ ＪＴ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｎｎｕａｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｅｅｔｉｎｇ，２００６；Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｄｉｌｌｏｎ ＳＲ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｌｉｔｔａｕ Ａ，Ｒｏｑｕｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５：２８９−３０２）、又は、自己抗体産生Ｂ細胞を選択的に標的化しようとする（Ａｌａｒｃｏｎ−Ｓｅｇｏｖｉａ Ｄ，Ｔｕｍｌｉｎ ＪＡ，Ｆｕｒｉｅ ＲＡ，ＭｃＫａｙ ＪＤ，Ｃａｒｄｉｅｌ，ＭＨ，Ｓｔｒａｎｄ Ｖ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：４４２−５４；Ｌｕｇｅｒ Ｄ，Ｄａｙａｎ Ｍ，Ｚｉｎｇｅｒ Ｈ，Ｌｉｕ ＪＰ，Ｍｏｚｅｓ Ｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；２４：５７９−９０；Ｍａｕｅｒｍａｎｎ Ｎ，Ｓｔｈｏｅｇｅｒ Ｚ，Ｚｉｎｇｅｒ Ｈ，Ｍｏｚｅｓ Ｅ．，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００４；１３７：５１３−２０）。
【００６０】
Ｂ細胞刺激を阻害しようとする試みは、主に、Ｂリンパ球刺激因子（ＢＬｙｓ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる分子を伴う受容体−リガンド相互作用に焦点が当てられている。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、骨髄からの出た後に、Ｂ細胞の生存及び発達のために重要であるサイトカインの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのメンバーである。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、共通であるが、異なる受容体に結合する。両分子は、膜貫通活性化因子、及びカルシウム調節サイクロ（登録商標）フィリンリガンド（ＣＡＭＬ）相互作用因子（ＴＡＣＩ）、並びにＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に結合し、一方、ＢＬｙＳはまた、ＴＮＦファミリー−受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ）に属するＢ細胞活性化因子に結合し、ＡＰＲＩＬはプロテオグリカンと相互作用する。
【００６１】
動物モデル及びヒトにおける証拠の増加は、自己免疫疾患の発症におけるＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬに関する重要な役割を支持する。ＢＬｙＳを過剰発現するトランスジェニックマウスは、Ｂ細胞増殖及びポリクローナル高ガンマグロブリン血を示す（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｅｎｓｅｌｍａｎ Ｒ，Ｄｉｌｌｏｎ Ｓ，Ｍａｄｄｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０００：４０４：９９５−９；Ｍａｃｋａｙ Ｆ，Ｗｏｏｄｃｏｃｋ ＳＡ，Ｌａｗｔｏｎ Ｐ，Ａｍｂｒｏｓｅ Ｃ，Ｂａｅｔｓｃｈｅｒ Ｍ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９９；１９０：１６９７−７１０；Ｋｈａｒｅ ＳＤ，Ｓａｒｏｓｉ Ｉ，Ｘｉａ ＸＺ，ＭｃＣａｂｅ Ｓ，Ｍｉｎｅｒ Ｋ，Ｓｏｌｏｖｙｅｖ Ｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ２０００；９７：３３７０−５）。これらのマウスの中には、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体、腎臓における免疫グロブリン沈着、及び糸球体疾患の加速した発症からなる狼瘡様表現型を生じるものもあり、ＢＬｙＳレベルは、狼瘡になり易いＮＺＢＩＮＺＷ Ｆ１（ＢＩＷ）及びＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおいて蔵相する（Ｓｔｏｈｌ Ｗ，Ｘｕ Ｄ，Ｋｉｍ ＫＳ，Ｋｏｓｓ ＭＮ，Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ＴＮ，Ｄｅｏｃｈａｒａｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００５；５２：２０８０−９１）。また、ヒトでの試験は、全身性自己免疫疾患におけるＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬに関する役割を示唆する。ＳＬＥの患者では、抗ｄｓＤＮＡ抗体のレベルと正に相関するＢＬｙＳの血清レベルが増加する（Ｚｈａｎｇ Ｊ， Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｂａｋｅｒ Ｋ，Ｗａｎｇ Ｚ，Ａｌａｒｃｏｎ ＧＳ，Ｆｅｓｓｌｅｒ ＢＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１，１６６：６−１０；Ｃｈｅｅｍａ ＧＳ，Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｈｕｂｅｒｔ ＤＭ，Ｓｔｏｈｌ Ｗ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００１；４４：１３１３−１９；Ｓｔｏｈｌ Ｗ，Ｍｅｔｙａｓ Ｓ，Ｔａｎ ＳＭ，Ｃｈｅｅｍａ ＧＳ，Ｏａｍａｒ Ｂ，Ｘｕ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：３４７５−８６）。ＡＰＲＩＬの血清レベルは、健常な個体及び関節リウマチの患者と比較して、ＳＬＥの患者において上昇する（Ｋｏｙａｍａ Ｔ，Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ Ｈ，Ｍｉｙａｇｉ Ｙ，Ｈｉｍｅｊｉ Ｄ，Ｏｔｓｕｋａ Ｊ，Ｍｉｙａｇａｗａ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２００５；６４：１０６５−７）。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、炎症性関節炎の患者の唾液中に検出されている（Ｔａｎ ＳＭ，Ｘｕ Ｄ，Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｐｅｒｒｙ ＪＷ，Ａｒｋｆｅｌｄ ＤＧ，Ｅｈｒｅｓｍａｎｎ ＧＲ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：９８２−９２）。マウス及びヒトにおけるこれらの説得力のある観察は、いくつかのＢＬｙＳアンタゴニストの発症へと導く。これらの薬物の１つは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに接続されたＴＡＣＩ受容体の細胞外ドメインを含む組換え融合タンパク質である（アタシセプト、ＴＡＣＩ−ＩＧとして前記で言及される）。アタシセプトは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬお両方によるＢ細胞刺激をブロックする。調査しているいくつかの菌株は、アタシセプトがインビボにおいて強力な効果を有するという期待を支持する。最初に、アタシセプトを発現するトランスジェニックマウスは、成熟Ｂ細胞がほとんどなく、免疫グロブリン濃度が減少し、アタシセプトを用いた治療は、コラーゲン誘導の関節炎のマウスモデルにおいて関節炎の重傷性を減少させる。また、抗コラーゲン抗体の生成が抑制される（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｄｉｌｌｏｎ ＳＲ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｌｉｔｔａｕ Ａ，Ｒｏｑｕｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，上述）。第３に、アタシセプトを用いた狼瘡になり易い雌性Ｂ／Ｗマウスの治療は、タンパク尿の発症を示し、生存性を高める（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｅｎｓｅｌｍａｎ Ｒ，Ｄｉｌｌｏｎ Ｓ，Ｍａｄｄｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，上述）。最後に、狼瘡になり易い雌性ＢＩＷマウスにおけるマウスアタシセプトとＢＡＦＦ−Ｒ−Ｉｇ（ＢＬｙＳのみの阻害剤）の直接的な比較では、アタシセプトだけがＩｇＭの血清レベルを減少させ、腎臓における血漿細胞の頻度を低下させ、Ｔ細胞依存性抗原に対するＩｇＭ応答を阻害した。これは、これらのプロセスにおけるＡＰＲＩＬに関する役割を示唆する（Ｒａｍａｎｕｊａｍ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｘ，Ｈｕａｎｇ Ｗ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｓｃｈｉｆｆｅｒ Ｌ，Ｔａｏ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６；１１６：７２４−３４）。これらの有望な前臨床データに照らして、本出願人は、ＳＬＥの患者での臨床試験において、アタシセプトの生物学的作用、薬物動態解析、薬力学、及び安全性を試験した。
【００６２】
下記の実施例１及び２に記載の予備的なフェーズＩにおいて、アタシセプトは、ＳＬＥの患者において、局所的及び全身的に十分に寛容された。この予想される兆候におけるアタシセプトの生物学的活性の明確なサインが観察され、その作用機序（ＭｏＡ）に非常に沿っていた。
【００６３】
アタシセプトについての作用機序（ＭｏＡ）に関する現在の概念によれば、理論に制限されることなしに、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの阻害は、Ｂ細胞に対する効果をもたらし、非特異的及び特異的抗体の分泌を含み、それは、最終的には、種々のＳＬＥ関連バイオマーカーと臨床効果マーカーに影響を及ぼす。フェールＩ試験に関して典型的であるように、現在の分析における着目は、ＭｏＡカスケードの初期段階、具体的には、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬ阻害の初期バイオマーカー（例えば、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体）を用いて開始される応答、及び生物学的効果に焦点（例えば、Ｉｇレベル）が当てられている。
【００６４】
アタシセプトは、遊離した薬物曝露における投薬量に比例した値を超える増加、並びにアタシセプト−ＢＬｙＳ複合体の曝露における飽和した（投薬量に比例した値未満の）増加によって特徴付けられる、多面的な非線形ＰＫを示した。このような挙動は期待され、ＲＡ患者において報告されている。それは、アタシセプトのＰＫがそのリガンドによって仲介されるという仮説を支持する。全体で、アタシセプトのＰＫは、非線形ではあるが、１回投薬及び複数回投薬の間で一定であり、投薬量の全体で予測可能であった。アタシセプトの３つのＰＫマーカーは、ＲＡ及びＳＬＥ患者における非常な類似性があるように振る舞い、それは、自己免疫疾患のタイプがアタシセプトＰＫの主要な決定因子ではないことを指す。
【００６５】
遊離したアタシセプトの最小限蓄積と一緒に、複数回投薬（集団５及び６についての最大４週ごとの投薬、試験１）を用いた、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体の連続的な蓄積は、全身及び末梢において、可溶性遊離ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの考慮されるべき初期積載量の存在の証拠を与える。（文献による正常な対象と比較した）これらの試験において測定された基底のＢＬｙＳレベルの増加は、この仮説に有意になるように発言する。
【００６６】
また、可溶性リガンドとそれらの受容体との間の既存の予備投薬平衡がアタシセプトの投与によって崩壊されると、血液循環系、リンパ系及び周辺コンパートメントの間の複雑な動的な再分配プロセスが開始することが非常にあり得る。この再分配は、薬物とそのリガンドとの間に関与し、関与する分子の大きさを考慮すると、新しい平衡が達成されるまで、少なくとも数週間かかる可能性がある。
【００６７】
他方、長期の複合体蓄積は、遊離リガンドの内因性の発生の有意な速度を含むことができる（また、血液循環及び腹腔組織の両方における）。リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）投与後の血清ＢＬｙＳの増加速度に関する公開されたデータ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００６；５４：７２３−７３２）は、内因性ＢＬｙＳ生成がＢＬｙＳ阻害において重要な役割を果たし、考慮されるべきであるという追加の証拠を与えるようである。定常状態の獲得に対する長期間（週に１回の投薬の１カ月を超える期間）は、それらの仮説を支持する。
【００６８】
アタシセプトの飽和動力学は、最初、観察され、以前のフェーズＩ試験の健常なボランティア及びＲＡ患者に適用された１回のアタシセプト投薬を用いて報告され、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害が飽和可能であることを示し、即ち、飽和点を超えるアタシセプト曝露の増加が、ＢＬｙＳ（及び、結果的にはＡＰＲＩＬ）結合の観点での再発の阻止をもたらしたであろうことを示す。この現象は、治療的投薬処方計画が選択されると、考慮され、有効に活用されるべきである。
【００６９】
ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害の適切な飽和は、長期に維持されることが必要であるということを強調されるべきであり、時間内の適切なアタシセプト曝露パターンによって達成されるべきである。後者は、内因性ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬ生成及び再分配の複雑かつ大部分は特徴付けられていないプロセスと、アタシセプトの創出された動的プロフィールとの間の原動力を必要とする。このようなバランスは、投薬レベルだけでなく、投薬頻度の観点からも、投薬処方計画の適切な設計によって達成可能であるに過ぎない。アタシセプト蓄積量とＩｇ抗体応答との間の明確な関係は、区画化されていない方法によって達成されている；このような関係は、第一に、健常なボランティアにおける１回のアタシセプト投薬、並びにＲＡの患者における１回及び複数回のアタシセプト投薬を用いて検出された。現在の試験では、モニターされた３つ全てのＩｇマーカーは、アタシセプトの最初の投薬後に即座の減少を示した。４週間毎の投薬後、抗体応答の３つ全てのバイオマーカーは、明らかに投薬期間中に到達することなしに、定常状態に向けて、徐々にかつ確実に減少した。
【００７０】
ＲＡ試験において最初になされた、投薬頻度が３つの全てのバイオマーカーの応答における投薬レベルと少なくとも同程度の重要な役割を果たす可能性があるという観察は、皮下投与後のＳＬＥデータを用いて確かめられる（試験Ｉ）。一般に、バイオマーカーは、ＳＬＥ及びＲＡ集団に両方において、同様の投薬レベルで非常に類似して振る舞い、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害に基づく両方の指示のＭｏＡにおける共通のルートを明確に示す。
【００７１】
別の対象とする事実は、２つの試験のＰＫ及び生物学的活性の結果の比較から見出される。それらのいずれも、皮下利用性問題を扱うように設計されていないが、同様の皮下及び静脈内投薬（集団３、試験１対集団１、試験２、及び集団４、試験１対集団２、試験２）後の遊離した及び複合のアタシセプトの濃度−時間曲線（ＡＵＣ）下の部分及び全体の領域の比較は、「平均の」生物学的利用能の大体の見積りの誘導を可能にする。表２ａｂ及び３ａｂから、これらの見積りは、遊離した薬物と複合の薬物の両方について約３５〜４０％である−その数値は大きな分子量を有する分子に関する概数は除かない（Ｐｏｒｔｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｒｍａｎ，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２０００；８９：２９７−３１０）。
【００７２】
しかしながら、生物学的活性マーカーの検査は、図１９のＩｇＭについて例示されるように、類似の投薬は、投与経路に関係なく、類似した生物学的活性を生じることを示す。最初に、該薬物に対する２．５〜３倍の種々の全身的曝露が類似の生物学的効果をもたらし得るという観察が確立された実例と矛盾している；しかしながら、アタシセプトの場合では、この現象が十分に見出されてもよい。
【００７３】
皮下投与後の巨大なタンパク質分子の吸収の現在の理解は、タンパク質が、末梢リンパと毛細血管の両方への注射部位から流出し、リンパ管への取り込みは分子サイズとともに増加するということである。アタシセプトに相応のＭＷを有する薬物に関して、７０〜８０％と同程度の皮下投薬は最初に末梢リンパに届くことが期待され得ることが期待可能である。しかしながら、血液循環及びリンパ系は、非常に密接に絡み合い、接続されているため、血液とリンパコンパートメントとの間の物質交換は、巨大分子についても、適正に迅速であり、スムーズでなければならない。後者は、静脈内及び皮下ＰＫプロフィールの比較的に（ＭＷ７３．４ＫＤａ）の高速平衡化によって、アタシセプトの場合に確かめられる。
【００７４】
これらの考察は、少なくとも２つの可能な関連した、即ち、決して互いに矛盾がない、観察された現象の説明へと導く。「動力学的な」説明は、皮下投与を用いた場合でさえも、十分量の薬物が血液循環内に移動し、ＢＬｙＳの十分な阻害を確実にし、したがって、中心的コンパートメントにおいてＭｏＡカスケードを開始するものと仮定する。多くの生物学的効果は、根本的な薬物動態に対して遅延されることは周知である。アタシセプトの場合ではＰＤラグは、（１回目の投薬後のＩｇマーカーにおける即時現象によって明らかにされるように）過度ではないが、吸収によって引き起こされるＰＫラグをほぼ無関係な状態にするには十分であるようである。この仮説は、皮下及び静脈内試験の同一の１回投薬集団（図２０）におけるほとんど同一のアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体プロフィールによって支持され、この場合、類似性は、特に、投与後の最初の７日に示される。
【００７５】
「薬力学的な」説明は、血液循環及びリンパ系が、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）については「作用部位」であり、同様に、アタシセプトについては標的物を示すことである。投与の静脈内経路を用いると、薬物は、最初に血流に注射され、そこから、リンパ及び他の（標的及び非標的）周辺組織に分布する。投与の皮下経路を用いると、薬物は、最初に、並行してリンパコンパートメント及び血流に流れ込み、後者からは、他の（標的及び非標的）周辺組織に分布する。両方の場合において、両方の作用部位への薬物の浸透は、即時かつ迅速であり、それらの各々において類似の生物学的活性プロフィールに至る。
【００７６】
この対象の場合は、皮下に投与されたタンパク質薬物への曝露の評価は、全身又は「血清」生物学的利用能パラメーターを介して行わなければならないことを決定する実例の機械的応用が不適切であり、又はせいぜい不完全であり得るという仮説を支持する。「全身的な生物学的利用能が大きくなればなるほど、その効果も大きくなる」という規則は、この種の薬物において重要な例外を有する場合がある。
【００７７】
後者は、アタシセプトを用いた治療的処方計画の開発に関連した重要な実用的意義を有する。皮下投薬の頻度は、投薬溶液の注射体積及び濃度によって限定される場合があることを考慮すれば、静脈内経路は、そのようなものを必要とする場合の患者へのより大きな投薬量の薬物を送達する運搬体に過ぎない可能性があることは明かとなる。
【００７８】
良好な許容性、ＭｏＡに沿ったアタシセプト治療の顕著な生物学的活性、及び２つのＳＬＥフェーズＩ試験において観察された他の好ましい傾向は、ＳＬＥの患者における薬物の更なるリサーチのための論拠を提供する。各段階での現代の薬物開発科学実例によれば、新たに生じた情報は、既にあるものに付加されたものでなければならず、一方、薬物の知識基盤はアップデートされ、拡張され、改善されて、典型的な「学習及び確認」サイクルにおける次の段階の情報に基づく設計のために実質的に使用される。その実例に従って、本発明者らは、非常に複雑な設計（連続的な投薬量漸増）を用いた２つの初期の試験において、多数の曝露（遊離した複合のアタシセプト）、特定の結合（アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体）、生物学的活性（Ｉｇ及び免疫系細胞カウント）、並びにある種の疾患関連マーカー（抗ｄｓＤＮＡ抗体）を観察及び分析するように選択する。厳密な方法で生じた多量のデータを分析し、データに含まれる情報を抽出することにより、アタシセプトの安全性プロフィールの特徴付けに必要とされる投薬量範囲及び更なる試行のための処方計画を規定し、そのＭｏＡの理解を高め、臨床効果の初期の指示を確実にし、その最適な臨床的使用を規定することができる。
【実施例】
【００７９】
実施例１−アタシセプトの皮下投与
このフェーズＩｂの、二重盲式の、プラセボを対照とした、投薬量漸増の試行は、３：１の比率でアタシセプト又プラセボを用いて処置された患者の６集団（各々ｎ＝８、集団５を除く、ｎ＝７）を含む。集団１〜４は、プラセボ、又は０．３、１、３、若しくは９ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを１回皮下投薬された。集団５及び６は、プラセボ、又は１若しくは３ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを週に４回投薬された（表１を参照）。患者は、６週間（１〜４集団）、又は９週間（５及び６集団）続けた。結果測定には下記が含まれる：（ｉ）アタシセプトの全身的及び局所的寛容性；（ｉｉ）有害事象（ＡＥ）の頻度；（ｉｉｉ）アタシセプトの薬物動態及び薬力学、リンパ球亜集団及びＩｇレベルに対する効果を含む；並びに、（ｉｖ）ＳＬＥ疾患活性の測定。
【００８０】
軽度から中程度のＳＬＥを有する患者が加わった。アタシセプトの生物学的活性は、免疫グロブリンレベル、並びに成熟及び総Ｂ細胞における投薬量に依存した減少によって示された。この効果は、繰り返しの投薬集団において最も顕著であり、観察期間全体で維持された。Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又は単球の数において変化はなかった。マイルドな注射部位反応は、プラセボ群よりも、アタシセプトのうちでより頻繁に生じた。アタシセプトで処置された患者において、有害事象の頻度又はタイプにおける相違はなく、重篤及び重大な有害事象はなかった。
【００８１】
薬物動態は、遊離したアタシセプト（表２ａ）、アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体（表３ａ）、及び複合アタシセプト（遊離したアタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体として定義される、表４ａ）の血清レベルを測定することによって評価された。これらの各々の血清レベルは、酵素免疫吸着法を用いて定量した。ストレプトアビジン被覆されたマイクロプレート（Ａｄａｌｔｉｓ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ）に固定化された、アタシセプトに特異的なビオチン結合させたマウスｍＡｂ（遊離又は全体のアタシセプトの検出）（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）又はＢＬｙＳ若しくはアタシセプトのいずれかに特異的なビオチン結合させたヤギポリクローナル抗体（アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体の検出）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とともに血清をインキュベートした。抗体は、１：１０に希釈した患者試料、標準、又は対照試料とともに１時間インキュベートされた。洗浄後、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に結合させたアタシセプト特異的なマウスｍＡｂ（遊離したアタシセプト又はアタシセプト−ＢＬｙＳ複合体を検出するため）、又は複合ＥＬＩＳＡの場合には、アタシセプト及びＢＬｙＳに対するｍＡｂ（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）を添加し、室温で１時間インキュベートした。３つの全てのアッセイでは、アタシセプトの血清レベルが検出され、標準的なケミルミネッセンス法を用いて定量した。即ち、洗浄後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）をＨＲＰの基質として添加した（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。０．５Ｍの硫酸を用いて、２０分後に反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。患者試料の分析物濃度は、標準曲線を使用して、多項式二次フィッティングアルゴリズムを適用することによって再計算した。全ての試料は３点で測定した。標準試料については＜１５％の変動係数、及び患者試料の＜２０％の精度のアッセイ性能基準は許容された。アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、遊離アタシセプトについては１５．６ｎｇ／ｍＬ、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体（３：１のモル比で１．８２ｎｇ／ｍＬのアタシセプト−０．４４ｎｇ／ｍＬのＢＬｙＳに対応する１Ｕ／ｍＬ）については５Ｕ／ｍＬ、及び複合分析物については２５ｎｇ／ｍＬであった。平均スパイク回収は、それぞれ３つのアッセイの８２．５〜９７．０％、９３．９％、及び１０２．０〜１２５．８％の回収率に対応するＲＡ患者試料の低、中、及び高分析物濃度についての精度を試験するために行った。血清ＰＫマーカーは、下記のとおりにサンプリングした：（ｉ）１回投薬の集団１〜４については、基準、投与当日の４、８、１２時間、その後、試験日の２、３、４、８、１５、２２、２９、及び４３日；（ｉｉ）集団５及び６の複数回投薬の治療群については、基準、その後、試験日の８、１５、２２、２９、３６、４３、６４日。全ての集団において、投薬日のＰＫ試料は、名目上、トラフ（ｔｒｏｕｇｈ）のように特定された。
【００８２】
基準での血清中の未結合ＢＬｙＳ濃度を測定した。ＥＬＩＳＡによってＢＬｙＳを測定した。ＢＬｙＳに特異的なビオチニル化されたｍＡｂは、ストレプトアビジンでプレコートされたマイクロプレート中で１時間、患者試料、標準又は対照試料（１：１０に希釈）とともにインキュベートされた。洗浄後、抗ＢＬｙＳ、ＨＲＰ−結合されたマウスｍＡｂを室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢをＨＲＰ基質として添加した。２０分後、０．５Ｍの硫酸を用いて反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。患者試料の分析物濃度は、多項式二次フィッティングアルゴリズムを適用することによって標準曲線を用いて再計算した。全ての試料は３点で測定された。＜２０％ＣＶの精度のアッセイ性能基準は、患者試料における許容された測定であった。血清中のＬＬＯＱは、ＢＬｙＳで１．５６ｎｇ／ｍＬであった。ＲＡ患者試料中の低、中及び高濃度の分析物についての平均スパイク回収は、１０１〜１１３％の回収率に対応していた。
【００８３】
薬力学は、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ）、補体−３（Ｃ３）、及び抗核抗体（ＡＮＡ）の血清レベルを測定すること、リンパ球小集団のフローサイトメトリー分析を行うことによって評価した。免疫グロブリン及びＣ３は、標準的な方法を用いて測定された。ＡＮＡは、Ａｔｈｅｎａ Ｍｕｌｔｉａｎａｌｙｔｅ ＡＮＡテストシステム（Ｚｅｕｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）を用いて測定された。血中のＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡは、生物学的活性のマーカーとして評価された。バイオマーカーは、基準、投与当日の８時間（集団１〜４のみ）、その後、試験日の８、１５、２２、２９、３６、４３、及び６４日に測定された。
【００８４】
末梢血の単核細胞型（Ｂ及びＴ細胞小集団、ナチュラルキラー［ＮＫ］細胞、及び単球）は、４色フローサイトメトリーを用いて、抗体染色された末梢血試料において評価された。分析には下記が含まれる：総Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋）、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＢ４＋、ＣＤ８−）、Ｔ細胞傷害性／サプレッサー細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−、ＣＤ８＋）、総Ｂ細胞（ＣＤＩ９＋）、成熟Ｂ細胞（ＣＤＩ９＋、ＩｇＤ＋、ＣＤ２７−）、単球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−、ＣＤ１４＋、ＣＤ５６−）、及びＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ５６＋）。開発業務受託機関（Ｅｓｏｔｅｒｉｘ，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）は、血液試料処理、抗体染色、データの取得、分析、品質管理を行った。本発明者らは、Ｂ細胞小集団に関する更なる分析及び品質管理を行った。Ｂ細胞小集団については、小リンパ球及び大リンパ球を含むように分析ゲートを拡大し、後者は、大きさにして単球と類似していた。
【００８５】
病歴を包括的に回収し、身体検査を週に１回の基準で行った。血液学的、血清化学プロフィールは、週に１回の基準で行い、国立癌研究所の共通毒性基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）を用いて評価した。薬力学的評価のための血液試料は、繰り返し投薬集団については週に１回の基準で回収し、１回投薬の集団については１日目の４及び８時間、２、３、４及び８日、その後、週に１回の基準で回収した。
【００８６】
Ｄ４後の心電図は、１回投薬の集団において２週に１回の基準で行い、試験薬物の繰り返し投薬を受けている患者においては週に１回の基準で行った。
【００８７】
この試験は、治療が疾患活動性に及ぼす影響を決定するように供給されないが、下記の疾患活動性の測定が得られ、予備的な有効性データを提供した。ＳＥＬＥＮＡ ＳＬＥＤＡＩスコアは、基準、２９及び４３日（集団１〜４）、２２及び６４日（集団５と６）で決定された。抗ｄｓＤＮＡ抗体及びＣ３レベルは、基準、１５、２９、及び４３日（集団１〜４）、１５、２２、２９、４３、及び６４日（集団５と６）で測定された。
【００８８】
濃度−時間プロフィールを提示することを含むデータ分析法は、非コンパートメント分析（ＮＡＣ；ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウェア、バージョン５．０．１）に供された。ＬＬＯＱ下の全ての測定は、ＮＣＡについて無視された。バイオマーカー（ＩｇＭ、ＩｇＧ、又はＩｇＡ）データを「基準からの変化」フォーマットに変換し、次に、個々のバイオマーカー−時間プロフィールもＮＣＡに供された。その後、曝露（ＰＫ）及び応答に関して得られたＮＣＡ誘導の測定は、既存の曝露−応答関係を調査するために一緒に分析された。
【００８９】
リガンド−受容体の飽和結合薬物動態と一致しているという、非線形の薬物動態の証拠を示した（図１及び２）。遊離及び複合アタシセプトの濃度−時間プロフィールは、非常に速い吸収を伴う多面的な薬物動態を示し、Ｔｍａｘは、初回投薬後の約２４時間であり、初期分布相は７〜１４日続いた。遊離アタシセプトの低い蓄積は、繰り返し投薬の集団において観察された；複合アタシセプトの蓄積は僅かに高く、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体は、投薬期間全体で蓄積されることが分かった。
【００９０】
アタシセプトを用いた処置は、成熟及び総Ｂ細胞における初期の一時的な増加と関連し、その後、持続的な投薬に関係した減少と関連した（図３Ｂ）。１回投薬の３ｍｇ／ｋｇと９ｍｇ／ｋｇ群、及び繰り返し投薬群において、成熟Ｂ細胞における基準から約３５％の減少が２９日に見られた。１回投薬群では、この減少は、４３日まで継続した；繰り返し投薬群では、約６０％の減少が４３日に見られ、６４日の最後の評価まで４５〜６０％で持続した。総Ｂ細胞について観察されたパターンは、成熟Ｂ細胞と類似していた。３ｍｇ／ｋｇの１回投薬群では、総Ｂ細胞における基準からの約３０％の減少は、２９日に見られ、４３日まで持続した。繰り返し投薬群では、約４０〜５０％の減少は４３日に見られ、６４日の最後の評価まで３５〜６０％で持続した（図３Ｂ）。総Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又は傷害性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、又は単球の数において有意な差がなかった。
【００９１】
免疫グロブリンレベルの投薬量に依存した減少は、アタシセプト処置された患者において観察された（図３Ａと３Ｂ、表５ａも参照）。この効果は、繰り返し投薬群において最も顕著であった。ＩｇＭレベルは、処置により最大の減少を示し、３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群では４３日でほぼ５０％に到達した。ＩｇＡレベルは、２９日に３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群において約３３％まで減少し、ＩｇＧレベルは、３６日に３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群において約１６％まで減少した。最低の状態は、１回投薬の集団では１５〜２９日の間で生じ、繰り返し投薬集団では２９〜４３日の間で生じた。
【００９２】
その後、値が基準に向かって戻り始めた。最後に観察された値は、１回投薬集団では基準の約５〜３０％を下回り（０．３ｍｇ／ｋｇ群を除く、この場合、ＩｇＭ値は基準より上であった）、繰り返し投薬集団では基準の約８〜６５％を下回った。
【００９３】
これらの結果は、小さな投薬量のアタシセプトの多くの回数の投与が、高い投薬量を用いた少ない回数の投薬よりも良好な生物学的活性を生じることを示す（図７と図８）。
【００９４】
実施例２−アタシセプトの静脈内投与
このフェーズＩｂの、二重盲式の、プラセボを対照とした、投薬量漸増の試行は、３：１の比率でアタシセプト又はプラセボを用いて静脈内に処置された患者の４つの集団（各々ｎ＝６）を含んだ。集団１〜３は、１回投薬のプラセボ、３、９、又は１８ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを受けた。集団４は、２回投薬のプラセボ又は９ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを受け、第２の投薬は、第１の投薬の３週間後に生じた（表１を参照）。測定結果には下記が含まれる：（ｉ）静脈内アタシセプトの全身的及び局所的寛容性；（ｉｉ）有害事象（ＡＥ）の頻度；（ｉｉｉ）静脈内アタシセプトの薬物動態及び薬力学、リンパ球亜集団及びＩｇレベルに対する効果を含む；（ｉｖ）ＳＬＥ疾患活動性の測定。対象は、６週間（集団１〜３）又は９週間（集団４）で評価された；集団３及び４の対象は、ＰＫ及びバイオマーカーサンプリングのために試験日の８４と１２０日に戻された。血清ＰＫマーカーを下記のとおりサンプリングした：（ｉ）１回投薬の集団１〜３については、基準、投与当日の０．２５、０．５、４時間、その後、試験日の２、３、４、８、１５、２２、２９、及び４３日；（ｉｉ）複数回投薬の集団４については、基準、第１の投与当日の０．２５、０．５、４時間、その後、８、２２、２２（第２の投薬前、第２の投与後の０．２５及び０．５時間）、２９、３６、４３、６４日。集団３及び４は、試験日の８５及び１２０日にＰＫ測定された。全ての集団において、投薬日のＰＫ試料は、名目上、トラフ（ｔｒｏｕｇｈ）のように特定された。血清中の未結合のＢＬｙＳ濃度は、基準で測定された。血中のＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡは、生物学的活性のマーカーとして評価された。バイオマーカーは基準で測定され、その後、試験日２、３、４、８、１５（集団１〜３のみ）、２２、２９、３６、４３、及び６４（集団４のみ）で測定された。集団３及び４は、同様に試験日の８５と１２０日にＩｇ測定された。
【００９５】
実施例１と同様に、軽度から中程度のＳＬＥの患者が加わり、薬物動態は、遊離アタシセプト（表２ｂ）、アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体（表３ｂ）、及び複合アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体として定義される、表４ｂ）の血清レベルを測定することによって評価された。この効果は、繰り返し投薬集団において最も顕著であり、観察期間全体で持続された。Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び単球の数に変化はなかった。マイルドな投与部位反応は、プラセボ群よりも、アタシセプトのうちでより頻繁に生じた。有害事象の頻度及びタイプに差がなく、アタシセプトで処置された患者において重篤及び重傷の有害事象はなかった。皮下投与（実施例１を参照）と静脈内投与経路との間の比較は、非常に類似した薬物動態（リガンドによって媒介された非線形ＰＫ）、並びに予測可能であり、１回及び複数回の投薬と一致した類似のＰＫを表した（図９及び１０）。
【００９６】
静脈内投与に対する利点がないように思われるが（この投与経路を用いたより高い生物学的利用能があるにもかかわらず、図４を参照）、これらの結果もまた、少量のアタシセプトの多くの投与が、高い投薬量を用いて少ない回数の投薬よりも良好な生物学的活性を生じるという結論を支持する（図７及び８）。また、これらの結果は、皮下の投与を用いた薬物の低い生物学的利用能にもかかわらず、これらの２つの方法の結合プロフィールは同程度であることを指す（図７を参照）。
【００９７】
表１．フェーズＩのＳＬＥ試験におけるアタシセプトを用いた投薬治療
【００９８】
【表１】
【００９９】
表２ａ．遊離アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１００】
【表２】
【０１０１】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−最終投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０２】
表２ｂ．遊離アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１０３】
【表３】
【０１０４】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−第１の投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０５】
表３ａ．複合アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１０６】
【表４】
【０１０７】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団；Ｎ．Ｅ．−最終投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０８】
表３ｂ．複合アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１０９】
【表５】
【０１１０】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−第１の投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１１１】
表４ａ．ＢＬｙＳ−アタシセプト複合体についての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１１２】
【表６】
【０１１３】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
*Ｔ1/2及びＡＵＣINFはプロフィールの最終形態に起因してこの可変については信頼できる評価ではない。
【０１１４】
表４ｂ．ＢＬｙＳ−アタシセプト複合体についての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１１５】
【表７】
【０１１６】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−評価されていない。
*Ｔ1/2及びＡＵＣINFはプロフィールの最終形態に起因してこの可変については信頼できる評価ではない。
【０１１７】
表５ａ．免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ、ＩｇＡ、及びＩｇＧバイオマーカーについての非コンパートメント分析結果−試験１
【０１１８】
【表８】
【０１１９】
*集団１〜６についての活性−服用患者（ｎ＝６）
†プラセボ集団、全てのプラセボ患者を一緒にプールした（ｎ＝１２）。
Ｔmax、Ｉｇの最大減少の時間。
ｎ．ｄ．−データなし。
【０１２０】
表５ｂ．免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ、ＩｇＡ、及びＩｇＧバイオマーカーについての非コンパートメント分析結果−試験２
【０１２１】
【表９】
【０１２２】
*集団１〜４についての活性−服用患者（ｎ＝５）
†プラセボ集団、全てのプラセボ患者を一緒にプールした（ｎ＝４）。
Ｔmax、Ｉｇの最大減少の時間。
【０１２３】
参考文献
特許、公開された出願、及び他の刊行物を含む、本出願において引用された参考文献は参照により本明細書中に援用される。
【技術分野】
【０００１】
種々の態様では、本発明は、免疫系の自己免疫疾患又は障害を治療するための方法及び組成物に関し、ＴＮＦファミリーのリガンドの機能のブロッキングを最大にする特定の投薬処方計画を用いて、アタシセプト（ａｔａｃｉｃｅｐｔ）などのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を投与することを含む。
【背景技術】
【０００２】
ＢＬｙＳリガンド／受容体ファミリー
３つの受容体であるＴＡＣＩ（膜貫通活性化因子又はカルシウム調節シクロフィリンリガンド相互作用因子）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）及びＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子に対する受容体、ＴＮＦファミリーに属する）が同定され、それらは、２つの増殖因子であるＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘導リガンド）に対する独自の結合親和性を有する（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ ２０００；１０（１３）：７８５−７８８；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；２９３：２１０８−２１１１）。ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの両方に結合し、一方、ＢＡＦＦ−Ｒは、高親和性でＢＬｙＳだけに結合可能に見える（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ ２０００；１０（１３）：７８５−７８８；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；２９３：２１０８−２１１１）。結果として、ＢＬｙＳは、３つ全ての受容体を介してシグナル伝達することができ、一方、ＡＰＲＩＬだけは、ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡを介してシグナル伝達を可能にする。さらに、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬ（３つのタンパク質の集団、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬの各々を１又は２コピー含む）の循環ヘテロ三量体複合体は、全身性免疫系リウマチ性疾患の患者から採取した血清試料において同定され、インビトロにおいてＢ細胞増殖を誘導することが示されている（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１）。３つ全ての受容体に対するＩｇ融合タンパク質のうち、アタシセプトなどのＴＡＣＩ−Ｆｃ５だけは、ヘテロ三量体複合体の生物学的活性をブロックすることができる（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１）。
【０００３】
ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞の成熟、増殖及び生存の強力な刺激因子である（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０４：９９５−９９９．Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２．Ｇｒｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００２；１０９（１）：５９−６８）。ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬは、自己免疫疾患、特にＢ細胞が関与する疾患の持続に必要とされる場合がある。高レベルのＢＬｙＳを発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウスは、細胞障害を提示し、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の患者に見られるものと類似した症状を示す（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｖｉｓｅｄ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ １９９６；８７：４９９０−４９９７．Ｃｈｅｅｍａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００１；４４（６）：１３１３−１３１９）。同様に、ＢＬｙｓ及びＡＰＲＩＬのレベル上昇は、ＳＬＥ患者、及び関節リウマチのような種々の自己免疫疾患の他の患者から採取した血清試料において測定され（Ｒｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：４３１４−４３２１；Ｍａｒｉｅｔｔｅ Ｘ．，Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２００３；６２（２）：１６８− １７１；Ｈａｈｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９８；１８８（６）：１１８５−１１９０）、動物モデルからヒトへ、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとＢ細胞を媒介した疾患との関連性が広がりつつある。
【０００４】
全身性エリテマトーデス
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、自己免疫疾患であり、臨床的には、漸増及び漸減過程によって特徴付けられ、並びに、皮膚、腎臓及び中枢神経系を含む多臓器の関与によって特徴付けられる（Ｋａｍｍｅｒ Ｇ Ｍ ａｎｄ Ｔｓｏｋｏｓ Ｇ Ｃ Ｅｄｓ．（１９９９）Ｌｕｐｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ １ｓｔ Ｅｄ，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｊ．；Ｌａｈｉｔａ Ｒ Ｇ Ｅｄ．（１９９９）Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｒｏｍａｔｏｓｕｓ，３ｒｄ Ｅｄ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）。ＳＬＥの全体的な有病率は、２０００人に約１人であり、７００人の白人女性のうちの約１人が一生涯でＳＬＥを発症する（Ｌａｈｉｔａ Ｒ Ｇ （１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｓｅｐ；１１（５）：３５２−６）。米国だけは、５０万人がＳＬＥであり、大部分が妊娠可能な時期にある女性である（Ｈａｒｄｉｎ Ｊ Ａ（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１１０１−１１１１）。
【０００５】
ＳＬＥを診断するための単一な基準はない。米国リウマチ学会は、ＳＬＥを診断するための１１個の基準を生み出し、それらは、皮膚、全身、及び実験室試験の局面のおけるＳＬＥの臨床スペクトルを測るものである。これらの基準には、頬部発疹、円形発疹、太陽光に対する感受性、口内潰瘍、関節炎、漿膜炎、腎臓及び中枢神経系の炎症、血液変性、並びに抗核抗体の存在が含まれる。患者は、ＳＬＥ患者として分類されるためには、これらの基準のうち４つを満たす必要がある（Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２５：１２７１−１２７７）。ＳＬＥは、通常、限定されないが、抗核抗体を検出するための血液試験；腎機能を評価する血液及び尿の試験；多くの場合、ＳＬＥと関連する低レベルの補体の存在を検出する補体試験；炎症レベルを測定するための沈降速度（ＥＳＲ）又はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）；肺障害を評価するためのＸ線、及び心臓障害を評価するためのＥＫＧが含まれる。
【０００６】
ＳＬＥの標準的な治療は、一般的な免疫応答阻害剤であるステロイドのグルココルチコイドの投与である。症状を軽減するためにそれを使用することができる；しかしながら、現在、ＳＬＥの治療に有効ではない。通常、０．５ｍｇ未満／ｋｇ／日レベルの低投薬量で、経口のプレドニソンが与えられる。残念なことに、この治療は、患者を寛解な状態に維持するには不十分であり、この疾患の再燃（ｆｌａｒｉｎｇ）は頻繁である。再燃は、連続して３日間、３０ｍｇのメチルプレドニソロン／ｋｇ／日で静脈パルスを介して高投薬量のグルココルチコイドを用いて制御可能である。しかしながら、高投薬量でのステロイド処置は、重篤な副作用を患者に与え得る。
【０００７】
これらの標準的な治療は、一般的には非特異的であり、重篤な副作用と頻繁に関連付けられ、疾患の進行、又は生命を脅かす腎合併症（ループス腎炎、すなわち、ＬＮ）への移行に有意に影響を与えない。結論として、ＳＬＥを治療するための新規な方法を開発することが、当該技術分野において長年にわたって必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
様々な態様では、本発明は、自己免疫疾患を治療する方法に関する。具体的には、本発明の方法は、ヒト免疫グロブリン定常ドメイン及びＴＡＣＩ細胞外ドメイン、又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するその断片を含む組成物を患者に投与することを含む。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン、又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する能力を保持するその任意の断片の融合体を含む分子、例えばアタシセプトを用いて、ＳＬＥを含む自己免疫疾患を治療する方法を含む。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメインあるいはＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片とを含む有効量の融合分子をそれを必要とする患者に投与することを含む、ＳＬＥを治療する方法を含む。一態様では、ＴＡＣＩの細胞外ドメインの断片は、１又は２個のシステイン繰り返しモチーフを含む。別の態様では、この断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸３０〜１１０を含む断片である。なお別の態様では、この断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸１〜１５４（配列番号１）を含む断片である。
【００１１】
別の態様では、本発明は、配列番号２として記載される配列を有するヒト免疫グロブリン定常ドメインであるＦｃ５と、配列番号１として記載される配列を有するＴＡＣＩ細胞外ドメインとを含む融合ポリペプチドであるＴＡＣＩ−Ｆｃ５を含む組成物を患者に投与することによって、ＳＬＥを治療する方法を含む。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号２として記載される配列を有するヒト免疫グロブリン定常ドメインと、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合し、配列番号１と少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％同一であるポリペプチドとを含む融合ポリペプチドを含む組成物を患者に投与することによって、ＳＬＥを治療する方法を含む。
【００１３】
他の自己免疫疾患は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片とを含む融合タンパク質を患者に投与することによる本発明の方法によって治療することができる。このような自己免疫疾患には、限定されないが、関節リウマチ（ＲＡ）、グレーブス病、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、糸球体腎炎、移植による拒絶反応、例えば、臓器及び組織同種移植及び異種移植拒絶反応、並びに移植片対宿主疾患が挙げられる。
【００１４】
一態様では、本発明の方法は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜患者の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇの量でアタシセプト融合分子をＳＬＥ患者に投与することを含む。アタシセプト分子は、所定の間隔で複数回投与することができる。具体的には、該分子は、所定の投薬期間中に複数回投与することができる。例えば、投薬は、毎週又は３週間ごとの間隔で相対的に低い投薬量で行うことができる。アタシセプト融合ポリペプチドを用いた初期の治療は、２週に１回（ｂｉ−ｗｅｅｋｌｙ）（隔週）又は３週に１回（ｔｒｉ−ｗｅｅｋｌｙ）（第３週毎）を基準にして、それぞれ少なくとも２又は３週を超える更なる週の期間、該ポリペプチドの投与へと続く。例えば、ポリペプチドは、２週に１回を基準にして、さらに２〜３０週間投与されてもよい。あるいは、該ポリペプチドは、毎週又は毎日を基準にして投与されてもよい。
【００１５】
本発明の方法によれば、アタシセプトポリペプチドは、皮下、経口、又は静脈内に、他の薬剤と組み合わせて、ＳＬＥ患者にすることができる。このような薬剤には、限定されないが、下記が含まれる：ＮＳＡＩＤＳ（非ステロイド性抗炎症薬）、オーバー・ザ・カウンターと処方箋を必要とするものの両方を含み、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシンジフルニサル、ナブメトン；抗マラリア薬、例えば、硫酸ヒドロキシクロロキン及びクロロキン；副腎脂質ステロイド、例えば、プレドニソン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニソロン；並びに、免疫抑制剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキセート、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイド。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】主要な薬物動態測定である、皮下投与に関する数日間の時間に対するプロットされた遊離アタシセプト濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、記号表に示されている。
【００１７】
【図２】主要な薬物動態測定である、皮下投与に関する数日間の時間に対するプロットされたアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、図１の記号表に示されている。
【００１８】
【図３Ａ】種々の免疫グロブリンレベル及びＢ細胞レベルにおける皮下投与の生物学的効果を図示する。
【００１９】
【図３Ｂ】種々の免疫グロブリンレベル及びＢ細胞レベルにおける皮下投与の生物学的効果を図示する。
【００２０】
【図４】アタシセプトの皮下及び静脈内投与のための遊離アタシセプト測定によって示される生物学的利用能における差を示す。
【００２１】
【図５】ＩｇＭ濃度対時間によって示される、２つの投与法を用いて観察された相対的に類似した生物学的活性を図示する。図４の記号表を参照されたい。
【００２２】
【図６】遊離アタシセプト対時間によって示される、皮下と静脈内投与法の類似性を図示する。
【００２３】
【図７】アタシセプト：ＢＬｙＳ複合体対時間によって示される、２つの投与法を用いて観察された相対的に類似した標的結合曲線を示す。図４の記号表を参照されたい。
【００２４】
【図８】ＩｇＭ対時間によって示される、どのようにして複数回投薬がより高い生物学的活性を生じるのかを図示する。
【００２５】
【図９】アタシセプト：ＢＬｙｓ複合体対時間によって示される、どのようにして標的結合が複数回投薬を用いてより高いかを図示する。図４の記号表を参照されたい。
【００２６】
【図１０】主要な薬物動態測定である、静脈内投与に関する数日間の時間に対するプロットされた遊離アタシセプト濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、記号表に示されている。
【００２７】
【図１１】主要な薬物動態測定である、静脈内投与に関する数日間の時間に対するプロットされたアタシセプト：ＢＬｙｓ複合体濃度を図式的に表す。グラフの各線は投薬量であり、図１０の記号表に示されている。
【００２８】
【図１２】静脈内投与を用いたバイオマーカー測定のグラフであり、特に免疫部グロブリンレベル及びＢ細胞レベルである。
【００２９】
【図１３】図１３Ａ及びＢは、皮下投与に関する、複合アタシセプト濃度（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙｓ複合体として定義される）対時間のグラフである（試験１）。（Ａ）単回投薬群；（Ｂ）複数回投薬群。平均±ＳＥ値を示す。複数回投薬は、第０、７、１４、及び２１日に投与された。投薬中の点は、濃度ピークが投薬間で捕捉されないことを示すようにつながってはいない。
【００３０】
【図１４】図１４Ａ及びＢは、静脈内投与に関する、複合アタシセプト濃度（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙｓ複合体として定義される）対時間のグラフである（試験２）。（Ａ）単回投薬群；（Ｂ）複数回投薬群。平均±ＳＥ値を示す。複数回投薬は、第０及び２１日に投与された。
【００３１】
【図１５Ａ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３２】
【図１５Ｂ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３３】
【図１５Ｃ】群による試験１（皮下投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図３Ａ及び３Ｂにおいて示されたデータを延長している。
【００３４】
【図１６Ａ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３５】
【図１６Ｂ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３６】
【図１６Ｃ】群による試験２（静脈内投与）における免疫グロブリンサマリープロフィールである（基準の％、平均±ＳＥ）。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。この図は、図１２において示されたデータを延長している。
【００３７】
【図１７Ａ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００３８】
【図１７Ｂ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００３９】
【図１７Ｃ】アタシセプト皮下投薬（試験１）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４０】
【図１８Ａ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４１】
【図１８Ｂ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４２】
【図１８Ｃ】アタシセプト静脈内投薬（試験２）と観察された最大免疫グロブリン応答との間液を図示する（基準からの減少％）。バーは、平均±ＳＥを示す。（Ａ）ＩｇＭ、（Ｂ）ＩｇＡ、（Ｃ）ＩｇＧ。
【００４３】
【図１９】皮下及び静脈内試験の同じ単回投薬群におけるＩｇＭプロフィール（平均±ＳＥ）を示す。（Ａ）３ｍｇ／ｋｇ；（Ｂ）９ｍｇ／ｋｇ。
【００４４】
【図２０】皮下及び静脈内試験の同じ単回投薬群におけるアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体プロフィール（平均±ＳＥ）を示す。（Ａ）３ｍｇ／ｋｇ；（Ｂ）９ｍｇ／ｋｇ。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
種々の態様では、本発明は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとそれらの受容体との相互作用を阻害することによって、患者における自己免疫疾患を治療するための方法に関する。患者は、動物、例えばヒトであってもよい。一態様では、この方法は、１）ＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬを結合するその断片と少なくとも部分的に同一であるドメインを含むポリペプチド；２）ヒト免疫グロブリン定常鎖を含む阻害剤を利用する。一態様では、本発明の方法は、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＴＡＣＩ細胞外ドメインと少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％配列同一性を有する任意のポリペプチドとを含む融合分子を利用する。米国特許第５，９６９，１０２号、第６，３１６，２２２号、及び第６，５００，４２８号、並びに米国特許出願第０９１５６９，２４５号及び第０９１６２７，２０６号（それらの教示は、全体として参照により本明細書中に援用される）は、ＴＡＣＩの細胞外ドメイン、並びにＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬを含む、ＴＡＣＩリガンドと相互作用するＴＡＣＩ細胞外ドメインの特定の断片についての配列を開示する。１つは、ＴＡＣＩの細胞外ドメインの断片が１又は２つのシステイン繰り返しモチーフを含むことを例示する。別の例示的な断片は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインのアミノ酸３０〜１１０又はその断片を含む断片である。なお別の例示的な断片は、ＴＡＣＩ細胞外ドメインのアミノ酸１〜１５４（配列番号１）又はその断片を含む断片である。
【００４６】
本発明の方法に有用な他の融合分子には、ヒト免疫グロブリン定常鎖と完全なＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそのオルソログとの間のポリペプチド、あるいは、ヒト免疫グロブリン定常鎖と、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬリガンドに結合することができる細胞外ＴＡＣＩドメインの任意の断片との融合ポリペプチドが含まれる。本発明の方法に使用される融合分子のいずれかは、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子と呼ばれ得る。
【００４７】
ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、本発明の方法に有用なＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子の１つである。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、アミノ酸約１〜アミノ酸約１５４（配列番号１）の受容体ＴＡＣＩの細胞外の受容体部分と、ヒトＩｇＧの修飾されたＦｃ部分であるＦｃ５（配列番号２）とを含む組換え融合タンパク質である。本発明の方法に有用な他のＴＡＣＩ−Ｉｇ分子には、配列番号２を有するポリペプチドと、配列番号１と少なくとも約５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも約９９％同一であるＢＬｙＳに結合することができるポリペプチドとを含む融合分子が含まれる。
【００４８】
本発明の態様は、ＳＬＥを治療するためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子の方法を含む。本発明の方法を用いて治療され得る他の自己免疫疾患には、関節リウマチ（ＲＡ）、グレーブス病、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、糸球体腎炎、移植による拒絶反応、例えば、臓器及び組織同種移植及び異種移植拒絶反応、移植片対宿主疾患、又は循環成熟Ｂ細胞及び免疫グロブリン分泌細胞の数の減少及び疾患と関連した可溶性免疫グロブリンによって治療され得る任意の他の自己免疫疾患が挙げられる。
【００４９】
また、態様は、ヒト免疫グロブリン定常ドメインと、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合することができるＴＡＣＩ細胞外ドメインを含む融合分子を患者に投与することによって治療する方法を含む。
【００５０】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子は、限定されないが、経口、静脈内又は皮下を含む、投与の任意の適切な経路に従って患者に投与され得る。
【００５１】
本発明の方法に有用なＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、凍結、滅菌、等張液として調製及び保存されてもよい。このような製剤には、他の有効成分、賦形剤、例えば塩化ナトリウム、リン酸バッファー、及び水酸化ナトリウム又はＯ−リン酸（ｐＨ６．０）が含まれ得る。ＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、他の薬剤を併用して患者に投与することができる。このような薬剤には、限定されないが、ＮＳＡＩＤＳ（非ステロイド性抗炎症薬）、オーバー・ザ・カウンターと処方箋を必要とするものの両方を含み、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシンジフルニサル、ナブメトン；抗マラリア薬、例えば、硫酸ヒドロキシクロロキン及びクロロキン；副腎脂質ステロイド、例えば、プレドニソン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニソロン；並びに、免疫抑制剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキセート、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイドが挙げられる。
【００５２】
本発明の方法は、自己免疫疾患を治療するための他の方法と組み合わせて使用することができる。このような他の治療方法には、限定されないが、外科、鍼療法、理学療法、及び遺伝子治療が挙げられる。ＴＡＣＩ−Ｉｇ製剤は、他の治療方法の前に、同時に、又は後に投与されてもよい。
【００５３】
ＴＡＣＩ−Ｆｃ５は、インビトロにおけるＢ細胞増殖のＢＬｙＳ活性化を阻害することが示されている。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５によるマウスの処置では、結果として、Ｂ細胞の発生を部分的にブロックする。このＢ細胞の発生は、骨髄にあるＢ細胞前躯体、末梢血Ｔ細胞、単球、及び好中球を含む他の細胞系統に対して最少の影響を有する。血中のＴＡＣＩ受容体の可溶性形態を過剰発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウスは、ほとんど成熟Ｂ細胞を生産せず、循環抗体レベルの減少が示される。ＴＡＣＩ−Ｆｃ５トランスジェニックマウスは、胸腺、骨髄及び腸間膜リンパ節中に細胞を正常な数で有する。胸腺、リンパ節、及び脾臓におけるＴ細胞集団において有意な差はない（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２）。
【００５４】
さらに、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、抗原に対する一次応答又は二次応答中に投与されるかどうかにかかわらず、マウスにおける免疫応答における抗原に特異的な抗体の産生を阻害することができる。これらの試験では、エクスビボの抗原接種に対するＴ細胞応答のおける効果がないことが観察された。全身性紅斑性狼瘡の動物モデルでは、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を用いて処置は、疾患の開始及び進行を制限する点で有効であった（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０４：９９５−９９９）。同様に、コラーゲンによって誘導された関節炎のマウスモデルでは、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、コラーゲン特異的な抗体の産生を阻害し、炎症の罹患率と疾患の発生率の両方を減少させることができた（Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５（２）：２８９−３０２）。
【００５５】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を含む組成物は、患者に１回投与されてもよく、又は期間中に繰り返して患者に投与されてもよい。例えば、患者は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子の１回の皮下注射を受けてもよく、その後、彼又は彼女の状態をモニターしてもよい。状態の改善又は少なくとも安定化を示す患者は、追加の期間中に繰り返してＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を投与されてもよい。その追加の期間は、約２〜約５２週であってもよい。例えば、患者は、４週の期間内にＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を３回投薬で投与されてもよい。あるいは、患者は、１２週の期間内にＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子を７回投薬で投与されてもよい。患者へのＴＡＣＩ−Ｉｇ分子の投与は、１日に１回（ｄａｉｌｙ）、２日に１回（ｂｉｄａｉｌｙ）、週に１回（ｗｅｅｋｌｙ）、２週に１回（ｂｉ−ｗｅｅｋｌｙ）、３週に１回（ｔｒｉ−ｗｅｅｋｌｙ）、月に１回（ｍｏｎｔｈｌｙ）、２か月に１回（ｂｉ−ｍｏｎｔｌｙ）などであってもよい。
【００５６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子は、患者の状態を治療するために有効である量で患者に投与される。一態様では、所定の疾患又は障害に関連して、用語「治療すること」には、限定されないが、疾患又は障害を阻害すること、例えば、疾患又は障害の発生を阻止すること；疾患又は障害を軽減すること、例えば、疾患又は障害の抑制を引き起こすこと；あるいは、疾患又は障害によって引き起こされるか又はそれに起因する状態を軽減すること、例えば、疾患又は障害の症状を軽減、予防又は治療することが挙げられる。別の態様では、その量は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜患者の体重１ｋｇあたり約２０ｍｇの範囲であってもよい。
【００５７】
融合ＴＡＣＩ−Ｉｇ分子は、任意の適切な方法で送達されてもよい。一態様では、分子は、腹腔内注射によって送達される。別の態様では、腹腔内注射は、皮下注射を介する。別の態様では、腹腔内注射は、腹部前壁内に投与される。投薬するために１回を超える注射が必要とされる場合、注射は、数センチあけて、時間的に比較的近接して、例えば、適度の可能であるほど近接して投与されてもよい。繰り返しの薬物投与については、腹部前壁への投与部位は、交代にするか又は変更されてもよい。腹部前壁への皮下注射に関する例示的なゾーンには、右上側外部領域、左下側外部領域、右下側外部領域、左上側外部領域、中央下側領域、並びに右及び左大腿及び上腕が挙げられる。あるいは、対象とするＴＡＣＩ−Ｉｇ融合分子は、錠剤、カプセル、液体組成物又はゲルなどの形態で静脈内注射又は経口的に送達されてもよい。
【００５８】
現在、Ｂ細胞は、抗体依存性及び抗体非依存性のメカニズムを介して、ＳＬＥ病因における重要な役割を果たすと考えられている。抗体産生に加えて、Ｂ細胞は、非常に多くのサイトカインを分泌し、抗原提示細胞として作用し、多様なエフェクター機能を提供する。このようにして、Ｂ細胞は、ＳＬＥにおける薬物開発のための合理的な標的として明確にされてきた（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ＪＬ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ２００６；５：５６４−７６）。
【００５９】
いくつかのＢ細胞に指向された戦略は、ＳＬＥのための可能な治療として提案されている。これらの戦略のいくつかは、Ｂ細胞に指向されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の使用を通じてＢ細胞を排除するように設計されている（Ｌｅａｎｄｒｏ ＭＪ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＪＣ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＧＩ Ｅｈｒｅｎｓｔｅｉｎ ＭＲ，ｌｓｅｎｂｅｒｇ ＤＡ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００２；４６：２６７３−３；Ｌｏｏｎｅｙ ＲＪ，Ａｎｏｌｉｋ ＪＨ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｄｌ Ｆｅｌｇａｒ ＲＥ，Ｙｏｕｎｇ Ｆ，Ａｒｅｎｄ ＬＪ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００４；５０：２５８０−９；Ｌｅａｎｄｒｏ ＭＪ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｇ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＪＣ，Ｅｈｒｅｎｓｔｅｉｎ ＭＲ，ｌｓｅｎｂｅｒｇ ＤＡ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２００５；４４：１５４２−５；Ｄｏｒｎｅｒ Ｔ，Ｋａｕｆｍａｎ Ｊ，Ｗｅｇｅｎｅｒ ＷＡ，Ｔｅｏｈ Ｎ，Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ＤＭ，Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ ＧＲ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ ２００６；８：Ｒ７４）。一方、他は、Ｂ細胞刺激を妨げ（Ｂａｋｅｒ ＫＰ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＢＭ，Ｍａｉｎ ＳＨ，Ｃｈｏｉ ＧＨ，Ｗａｇｅｒ ＲＥ，Ｈａｌｐｅｒｎ ＷＧ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：３２５３−６５；Ｗａｌｌａｃｅ ＤＪ，Ｌｉｓｓｅ Ｊ，Ｓｔｏｈｌ Ｗ，ＭｃＫａｙ Ｊ，Ｂｏｌｉｎｇ Ｅｌ Ｍｅｒｒｉｌｌ ＪＴ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｎｎｕａｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｅｅｔｉｎｇ，２００６；Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｄｉｌｌｏｎ ＳＲ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｌｉｔｔａｕ Ａ，Ｒｏｑｕｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００１；１５：２８９−３０２）、又は、自己抗体産生Ｂ細胞を選択的に標的化しようとする（Ａｌａｒｃｏｎ−Ｓｅｇｏｖｉａ Ｄ，Ｔｕｍｌｉｎ ＪＡ，Ｆｕｒｉｅ ＲＡ，ＭｃＫａｙ ＪＤ，Ｃａｒｄｉｅｌ，ＭＨ，Ｓｔｒａｎｄ Ｖ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：４４２−５４；Ｌｕｇｅｒ Ｄ，Ｄａｙａｎ Ｍ，Ｚｉｎｇｅｒ Ｈ，Ｌｉｕ ＪＰ，Ｍｏｚｅｓ Ｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；２４：５７９−９０；Ｍａｕｅｒｍａｎｎ Ｎ，Ｓｔｈｏｅｇｅｒ Ｚ，Ｚｉｎｇｅｒ Ｈ，Ｍｏｚｅｓ Ｅ．，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００４；１３７：５１３−２０）。
【００６０】
Ｂ細胞刺激を阻害しようとする試みは、主に、Ｂリンパ球刺激因子（ＢＬｙｓ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる分子を伴う受容体−リガンド相互作用に焦点が当てられている。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、骨髄からの出た後に、Ｂ細胞の生存及び発達のために重要であるサイトカインの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのメンバーである。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、共通であるが、異なる受容体に結合する。両分子は、膜貫通活性化因子、及びカルシウム調節サイクロ（登録商標）フィリンリガンド（ＣＡＭＬ）相互作用因子（ＴＡＣＩ）、並びにＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に結合し、一方、ＢＬｙＳはまた、ＴＮＦファミリー−受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ）に属するＢ細胞活性化因子に結合し、ＡＰＲＩＬはプロテオグリカンと相互作用する。
【００６１】
動物モデル及びヒトにおける証拠の増加は、自己免疫疾患の発症におけるＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬに関する重要な役割を支持する。ＢＬｙＳを過剰発現するトランスジェニックマウスは、Ｂ細胞増殖及びポリクローナル高ガンマグロブリン血を示す（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｅｎｓｅｌｍａｎ Ｒ，Ｄｉｌｌｏｎ Ｓ，Ｍａｄｄｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０００：４０４：９９５−９；Ｍａｃｋａｙ Ｆ，Ｗｏｏｄｃｏｃｋ ＳＡ，Ｌａｗｔｏｎ Ｐ，Ａｍｂｒｏｓｅ Ｃ，Ｂａｅｔｓｃｈｅｒ Ｍ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９９；１９０：１６９７−７１０；Ｋｈａｒｅ ＳＤ，Ｓａｒｏｓｉ Ｉ，Ｘｉａ ＸＺ，ＭｃＣａｂｅ Ｓ，Ｍｉｎｅｒ Ｋ，Ｓｏｌｏｖｙｅｖ Ｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ２０００；９７：３３７０−５）。これらのマウスの中には、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体、腎臓における免疫グロブリン沈着、及び糸球体疾患の加速した発症からなる狼瘡様表現型を生じるものもあり、ＢＬｙＳレベルは、狼瘡になり易いＮＺＢＩＮＺＷ Ｆ１（ＢＩＷ）及びＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおいて蔵相する（Ｓｔｏｈｌ Ｗ，Ｘｕ Ｄ，Ｋｉｍ ＫＳ，Ｋｏｓｓ ＭＮ，Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ＴＮ，Ｄｅｏｃｈａｒａｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００５；５２：２０８０−９１）。また、ヒトでの試験は、全身性自己免疫疾患におけるＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬに関する役割を示唆する。ＳＬＥの患者では、抗ｄｓＤＮＡ抗体のレベルと正に相関するＢＬｙＳの血清レベルが増加する（Ｚｈａｎｇ Ｊ， Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｂａｋｅｒ Ｋ，Ｗａｎｇ Ｚ，Ａｌａｒｃｏｎ ＧＳ，Ｆｅｓｓｌｅｒ ＢＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１，１６６：６−１０；Ｃｈｅｅｍａ ＧＳ，Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｈｕｂｅｒｔ ＤＭ，Ｓｔｏｈｌ Ｗ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００１；４４：１３１３−１９；Ｓｔｏｈｌ Ｗ，Ｍｅｔｙａｓ Ｓ，Ｔａｎ ＳＭ，Ｃｈｅｅｍａ ＧＳ，Ｏａｍａｒ Ｂ，Ｘｕ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：３４７５−８６）。ＡＰＲＩＬの血清レベルは、健常な個体及び関節リウマチの患者と比較して、ＳＬＥの患者において上昇する（Ｋｏｙａｍａ Ｔ，Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ Ｈ，Ｍｉｙａｇｉ Ｙ，Ｈｉｍｅｊｉ Ｄ，Ｏｔｓｕｋａ Ｊ，Ｍｉｙａｇａｗａ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２００５；６４：１０６５−７）。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、炎症性関節炎の患者の唾液中に検出されている（Ｔａｎ ＳＭ，Ｘｕ Ｄ，Ｒｏｓｃｈｋｅ Ｖ，Ｐｅｒｒｙ ＪＷ，Ａｒｋｆｅｌｄ ＤＧ，Ｅｈｒｅｓｍａｎｎ ＧＲ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００３；４８：９８２−９２）。マウス及びヒトにおけるこれらの説得力のある観察は、いくつかのＢＬｙＳアンタゴニストの発症へと導く。これらの薬物の１つは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに接続されたＴＡＣＩ受容体の細胞外ドメインを含む組換え融合タンパク質である（アタシセプト、ＴＡＣＩ−ＩＧとして前記で言及される）。アタシセプトは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬお両方によるＢ細胞刺激をブロックする。調査しているいくつかの菌株は、アタシセプトがインビボにおいて強力な効果を有するという期待を支持する。最初に、アタシセプトを発現するトランスジェニックマウスは、成熟Ｂ細胞がほとんどなく、免疫グロブリン濃度が減少し、アタシセプトを用いた治療は、コラーゲン誘導の関節炎のマウスモデルにおいて関節炎の重傷性を減少させる。また、抗コラーゲン抗体の生成が抑制される（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｄｉｌｌｏｎ ＳＲ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｌｉｔｔａｕ Ａ，Ｒｏｑｕｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，上述）。第３に、アタシセプトを用いた狼瘡になり易い雌性Ｂ／Ｗマウスの治療は、タンパク尿の発症を示し、生存性を高める（Ｇｒｏｓｓ ＪＡ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，Ｍｕｄｒｉ Ｓ，Ｅｎｓｅｌｍａｎ Ｒ，Ｄｉｌｌｏｎ Ｓ，Ｍａｄｄｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，上述）。最後に、狼瘡になり易い雌性ＢＩＷマウスにおけるマウスアタシセプトとＢＡＦＦ−Ｒ−Ｉｇ（ＢＬｙＳのみの阻害剤）の直接的な比較では、アタシセプトだけがＩｇＭの血清レベルを減少させ、腎臓における血漿細胞の頻度を低下させ、Ｔ細胞依存性抗原に対するＩｇＭ応答を阻害した。これは、これらのプロセスにおけるＡＰＲＩＬに関する役割を示唆する（Ｒａｍａｎｕｊａｍ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｘ，Ｈｕａｎｇ Ｗ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｓｃｈｉｆｆｅｒ Ｌ，Ｔａｏ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６；１１６：７２４−３４）。これらの有望な前臨床データに照らして、本出願人は、ＳＬＥの患者での臨床試験において、アタシセプトの生物学的作用、薬物動態解析、薬力学、及び安全性を試験した。
【００６２】
下記の実施例１及び２に記載の予備的なフェーズＩにおいて、アタシセプトは、ＳＬＥの患者において、局所的及び全身的に十分に寛容された。この予想される兆候におけるアタシセプトの生物学的活性の明確なサインが観察され、その作用機序（ＭｏＡ）に非常に沿っていた。
【００６３】
アタシセプトについての作用機序（ＭｏＡ）に関する現在の概念によれば、理論に制限されることなしに、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの阻害は、Ｂ細胞に対する効果をもたらし、非特異的及び特異的抗体の分泌を含み、それは、最終的には、種々のＳＬＥ関連バイオマーカーと臨床効果マーカーに影響を及ぼす。フェールＩ試験に関して典型的であるように、現在の分析における着目は、ＭｏＡカスケードの初期段階、具体的には、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬ阻害の初期バイオマーカー（例えば、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体）を用いて開始される応答、及び生物学的効果に焦点（例えば、Ｉｇレベル）が当てられている。
【００６４】
アタシセプトは、遊離した薬物曝露における投薬量に比例した値を超える増加、並びにアタシセプト−ＢＬｙＳ複合体の曝露における飽和した（投薬量に比例した値未満の）増加によって特徴付けられる、多面的な非線形ＰＫを示した。このような挙動は期待され、ＲＡ患者において報告されている。それは、アタシセプトのＰＫがそのリガンドによって仲介されるという仮説を支持する。全体で、アタシセプトのＰＫは、非線形ではあるが、１回投薬及び複数回投薬の間で一定であり、投薬量の全体で予測可能であった。アタシセプトの３つのＰＫマーカーは、ＲＡ及びＳＬＥ患者における非常な類似性があるように振る舞い、それは、自己免疫疾患のタイプがアタシセプトＰＫの主要な決定因子ではないことを指す。
【００６５】
遊離したアタシセプトの最小限蓄積と一緒に、複数回投薬（集団５及び６についての最大４週ごとの投薬、試験１）を用いた、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体の連続的な蓄積は、全身及び末梢において、可溶性遊離ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの考慮されるべき初期積載量の存在の証拠を与える。（文献による正常な対象と比較した）これらの試験において測定された基底のＢＬｙＳレベルの増加は、この仮説に有意になるように発言する。
【００６６】
また、可溶性リガンドとそれらの受容体との間の既存の予備投薬平衡がアタシセプトの投与によって崩壊されると、血液循環系、リンパ系及び周辺コンパートメントの間の複雑な動的な再分配プロセスが開始することが非常にあり得る。この再分配は、薬物とそのリガンドとの間に関与し、関与する分子の大きさを考慮すると、新しい平衡が達成されるまで、少なくとも数週間かかる可能性がある。
【００６７】
他方、長期の複合体蓄積は、遊離リガンドの内因性の発生の有意な速度を含むことができる（また、血液循環及び腹腔組織の両方における）。リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）投与後の血清ＢＬｙＳの増加速度に関する公開されたデータ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００６；５４：７２３−７３２）は、内因性ＢＬｙＳ生成がＢＬｙＳ阻害において重要な役割を果たし、考慮されるべきであるという追加の証拠を与えるようである。定常状態の獲得に対する長期間（週に１回の投薬の１カ月を超える期間）は、それらの仮説を支持する。
【００６８】
アタシセプトの飽和動力学は、最初、観察され、以前のフェーズＩ試験の健常なボランティア及びＲＡ患者に適用された１回のアタシセプト投薬を用いて報告され、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害が飽和可能であることを示し、即ち、飽和点を超えるアタシセプト曝露の増加が、ＢＬｙＳ（及び、結果的にはＡＰＲＩＬ）結合の観点での再発の阻止をもたらしたであろうことを示す。この現象は、治療的投薬処方計画が選択されると、考慮され、有効に活用されるべきである。
【００６９】
ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害の適切な飽和は、長期に維持されることが必要であるということを強調されるべきであり、時間内の適切なアタシセプト曝露パターンによって達成されるべきである。後者は、内因性ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬ生成及び再分配の複雑かつ大部分は特徴付けられていないプロセスと、アタシセプトの創出された動的プロフィールとの間の原動力を必要とする。このようなバランスは、投薬レベルだけでなく、投薬頻度の観点からも、投薬処方計画の適切な設計によって達成可能であるに過ぎない。アタシセプト蓄積量とＩｇ抗体応答との間の明確な関係は、区画化されていない方法によって達成されている；このような関係は、第一に、健常なボランティアにおける１回のアタシセプト投薬、並びにＲＡの患者における１回及び複数回のアタシセプト投薬を用いて検出された。現在の試験では、モニターされた３つ全てのＩｇマーカーは、アタシセプトの最初の投薬後に即座の減少を示した。４週間毎の投薬後、抗体応答の３つ全てのバイオマーカーは、明らかに投薬期間中に到達することなしに、定常状態に向けて、徐々にかつ確実に減少した。
【００７０】
ＲＡ試験において最初になされた、投薬頻度が３つの全てのバイオマーカーの応答における投薬レベルと少なくとも同程度の重要な役割を果たす可能性があるという観察は、皮下投与後のＳＬＥデータを用いて確かめられる（試験Ｉ）。一般に、バイオマーカーは、ＳＬＥ及びＲＡ集団に両方において、同様の投薬レベルで非常に類似して振る舞い、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）阻害に基づく両方の指示のＭｏＡにおける共通のルートを明確に示す。
【００７１】
別の対象とする事実は、２つの試験のＰＫ及び生物学的活性の結果の比較から見出される。それらのいずれも、皮下利用性問題を扱うように設計されていないが、同様の皮下及び静脈内投薬（集団３、試験１対集団１、試験２、及び集団４、試験１対集団２、試験２）後の遊離した及び複合のアタシセプトの濃度−時間曲線（ＡＵＣ）下の部分及び全体の領域の比較は、「平均の」生物学的利用能の大体の見積りの誘導を可能にする。表２ａｂ及び３ａｂから、これらの見積りは、遊離した薬物と複合の薬物の両方について約３５〜４０％である−その数値は大きな分子量を有する分子に関する概数は除かない（Ｐｏｒｔｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｒｍａｎ，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２０００；８９：２９７−３１０）。
【００７２】
しかしながら、生物学的活性マーカーの検査は、図１９のＩｇＭについて例示されるように、類似の投薬は、投与経路に関係なく、類似した生物学的活性を生じることを示す。最初に、該薬物に対する２．５〜３倍の種々の全身的曝露が類似の生物学的効果をもたらし得るという観察が確立された実例と矛盾している；しかしながら、アタシセプトの場合では、この現象が十分に見出されてもよい。
【００７３】
皮下投与後の巨大なタンパク質分子の吸収の現在の理解は、タンパク質が、末梢リンパと毛細血管の両方への注射部位から流出し、リンパ管への取り込みは分子サイズとともに増加するということである。アタシセプトに相応のＭＷを有する薬物に関して、７０〜８０％と同程度の皮下投薬は最初に末梢リンパに届くことが期待され得ることが期待可能である。しかしながら、血液循環及びリンパ系は、非常に密接に絡み合い、接続されているため、血液とリンパコンパートメントとの間の物質交換は、巨大分子についても、適正に迅速であり、スムーズでなければならない。後者は、静脈内及び皮下ＰＫプロフィールの比較的に（ＭＷ７３．４ＫＤａ）の高速平衡化によって、アタシセプトの場合に確かめられる。
【００７４】
これらの考察は、少なくとも２つの可能な関連した、即ち、決して互いに矛盾がない、観察された現象の説明へと導く。「動力学的な」説明は、皮下投与を用いた場合でさえも、十分量の薬物が血液循環内に移動し、ＢＬｙＳの十分な阻害を確実にし、したがって、中心的コンパートメントにおいてＭｏＡカスケードを開始するものと仮定する。多くの生物学的効果は、根本的な薬物動態に対して遅延されることは周知である。アタシセプトの場合ではＰＤラグは、（１回目の投薬後のＩｇマーカーにおける即時現象によって明らかにされるように）過度ではないが、吸収によって引き起こされるＰＫラグをほぼ無関係な状態にするには十分であるようである。この仮説は、皮下及び静脈内試験の同一の１回投薬集団（図２０）におけるほとんど同一のアタシセプト：ＢＬｙＳ複合体プロフィールによって支持され、この場合、類似性は、特に、投与後の最初の７日に示される。
【００７５】
「薬力学的な」説明は、血液循環及びリンパ系が、ＢＬｙＳ（及びＡＰＲＩＬ）については「作用部位」であり、同様に、アタシセプトについては標的物を示すことである。投与の静脈内経路を用いると、薬物は、最初に血流に注射され、そこから、リンパ及び他の（標的及び非標的）周辺組織に分布する。投与の皮下経路を用いると、薬物は、最初に、並行してリンパコンパートメント及び血流に流れ込み、後者からは、他の（標的及び非標的）周辺組織に分布する。両方の場合において、両方の作用部位への薬物の浸透は、即時かつ迅速であり、それらの各々において類似の生物学的活性プロフィールに至る。
【００７６】
この対象の場合は、皮下に投与されたタンパク質薬物への曝露の評価は、全身又は「血清」生物学的利用能パラメーターを介して行わなければならないことを決定する実例の機械的応用が不適切であり、又はせいぜい不完全であり得るという仮説を支持する。「全身的な生物学的利用能が大きくなればなるほど、その効果も大きくなる」という規則は、この種の薬物において重要な例外を有する場合がある。
【００７７】
後者は、アタシセプトを用いた治療的処方計画の開発に関連した重要な実用的意義を有する。皮下投薬の頻度は、投薬溶液の注射体積及び濃度によって限定される場合があることを考慮すれば、静脈内経路は、そのようなものを必要とする場合の患者へのより大きな投薬量の薬物を送達する運搬体に過ぎない可能性があることは明かとなる。
【００７８】
良好な許容性、ＭｏＡに沿ったアタシセプト治療の顕著な生物学的活性、及び２つのＳＬＥフェーズＩ試験において観察された他の好ましい傾向は、ＳＬＥの患者における薬物の更なるリサーチのための論拠を提供する。各段階での現代の薬物開発科学実例によれば、新たに生じた情報は、既にあるものに付加されたものでなければならず、一方、薬物の知識基盤はアップデートされ、拡張され、改善されて、典型的な「学習及び確認」サイクルにおける次の段階の情報に基づく設計のために実質的に使用される。その実例に従って、本発明者らは、非常に複雑な設計（連続的な投薬量漸増）を用いた２つの初期の試験において、多数の曝露（遊離した複合のアタシセプト）、特定の結合（アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体）、生物学的活性（Ｉｇ及び免疫系細胞カウント）、並びにある種の疾患関連マーカー（抗ｄｓＤＮＡ抗体）を観察及び分析するように選択する。厳密な方法で生じた多量のデータを分析し、データに含まれる情報を抽出することにより、アタシセプトの安全性プロフィールの特徴付けに必要とされる投薬量範囲及び更なる試行のための処方計画を規定し、そのＭｏＡの理解を高め、臨床効果の初期の指示を確実にし、その最適な臨床的使用を規定することができる。
【実施例】
【００７９】
実施例１−アタシセプトの皮下投与
このフェーズＩｂの、二重盲式の、プラセボを対照とした、投薬量漸増の試行は、３：１の比率でアタシセプト又プラセボを用いて処置された患者の６集団（各々ｎ＝８、集団５を除く、ｎ＝７）を含む。集団１〜４は、プラセボ、又は０．３、１、３、若しくは９ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを１回皮下投薬された。集団５及び６は、プラセボ、又は１若しくは３ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを週に４回投薬された（表１を参照）。患者は、６週間（１〜４集団）、又は９週間（５及び６集団）続けた。結果測定には下記が含まれる：（ｉ）アタシセプトの全身的及び局所的寛容性；（ｉｉ）有害事象（ＡＥ）の頻度；（ｉｉｉ）アタシセプトの薬物動態及び薬力学、リンパ球亜集団及びＩｇレベルに対する効果を含む；並びに、（ｉｖ）ＳＬＥ疾患活性の測定。
【００８０】
軽度から中程度のＳＬＥを有する患者が加わった。アタシセプトの生物学的活性は、免疫グロブリンレベル、並びに成熟及び総Ｂ細胞における投薬量に依存した減少によって示された。この効果は、繰り返しの投薬集団において最も顕著であり、観察期間全体で維持された。Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又は単球の数において変化はなかった。マイルドな注射部位反応は、プラセボ群よりも、アタシセプトのうちでより頻繁に生じた。アタシセプトで処置された患者において、有害事象の頻度又はタイプにおける相違はなく、重篤及び重大な有害事象はなかった。
【００８１】
薬物動態は、遊離したアタシセプト（表２ａ）、アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体（表３ａ）、及び複合アタシセプト（遊離したアタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体として定義される、表４ａ）の血清レベルを測定することによって評価された。これらの各々の血清レベルは、酵素免疫吸着法を用いて定量した。ストレプトアビジン被覆されたマイクロプレート（Ａｄａｌｔｉｓ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ）に固定化された、アタシセプトに特異的なビオチン結合させたマウスｍＡｂ（遊離又は全体のアタシセプトの検出）（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）又はＢＬｙＳ若しくはアタシセプトのいずれかに特異的なビオチン結合させたヤギポリクローナル抗体（アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体の検出）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とともに血清をインキュベートした。抗体は、１：１０に希釈した患者試料、標準、又は対照試料とともに１時間インキュベートされた。洗浄後、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に結合させたアタシセプト特異的なマウスｍＡｂ（遊離したアタシセプト又はアタシセプト−ＢＬｙＳ複合体を検出するため）、又は複合ＥＬＩＳＡの場合には、アタシセプト及びＢＬｙＳに対するｍＡｂ（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）を添加し、室温で１時間インキュベートした。３つの全てのアッセイでは、アタシセプトの血清レベルが検出され、標準的なケミルミネッセンス法を用いて定量した。即ち、洗浄後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）をＨＲＰの基質として添加した（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。０．５Ｍの硫酸を用いて、２０分後に反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。患者試料の分析物濃度は、標準曲線を使用して、多項式二次フィッティングアルゴリズムを適用することによって再計算した。全ての試料は３点で測定した。標準試料については＜１５％の変動係数、及び患者試料の＜２０％の精度のアッセイ性能基準は許容された。アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、遊離アタシセプトについては１５．６ｎｇ／ｍＬ、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体（３：１のモル比で１．８２ｎｇ／ｍＬのアタシセプト−０．４４ｎｇ／ｍＬのＢＬｙＳに対応する１Ｕ／ｍＬ）については５Ｕ／ｍＬ、及び複合分析物については２５ｎｇ／ｍＬであった。平均スパイク回収は、それぞれ３つのアッセイの８２．５〜９７．０％、９３．９％、及び１０２．０〜１２５．８％の回収率に対応するＲＡ患者試料の低、中、及び高分析物濃度についての精度を試験するために行った。血清ＰＫマーカーは、下記のとおりにサンプリングした：（ｉ）１回投薬の集団１〜４については、基準、投与当日の４、８、１２時間、その後、試験日の２、３、４、８、１５、２２、２９、及び４３日；（ｉｉ）集団５及び６の複数回投薬の治療群については、基準、その後、試験日の８、１５、２２、２９、３６、４３、６４日。全ての集団において、投薬日のＰＫ試料は、名目上、トラフ（ｔｒｏｕｇｈ）のように特定された。
【００８２】
基準での血清中の未結合ＢＬｙＳ濃度を測定した。ＥＬＩＳＡによってＢＬｙＳを測定した。ＢＬｙＳに特異的なビオチニル化されたｍＡｂは、ストレプトアビジンでプレコートされたマイクロプレート中で１時間、患者試料、標準又は対照試料（１：１０に希釈）とともにインキュベートされた。洗浄後、抗ＢＬｙＳ、ＨＲＰ−結合されたマウスｍＡｂを室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢをＨＲＰ基質として添加した。２０分後、０．５Ｍの硫酸を用いて反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。患者試料の分析物濃度は、多項式二次フィッティングアルゴリズムを適用することによって標準曲線を用いて再計算した。全ての試料は３点で測定された。＜２０％ＣＶの精度のアッセイ性能基準は、患者試料における許容された測定であった。血清中のＬＬＯＱは、ＢＬｙＳで１．５６ｎｇ／ｍＬであった。ＲＡ患者試料中の低、中及び高濃度の分析物についての平均スパイク回収は、１０１〜１１３％の回収率に対応していた。
【００８３】
薬力学は、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ）、補体−３（Ｃ３）、及び抗核抗体（ＡＮＡ）の血清レベルを測定すること、リンパ球小集団のフローサイトメトリー分析を行うことによって評価した。免疫グロブリン及びＣ３は、標準的な方法を用いて測定された。ＡＮＡは、Ａｔｈｅｎａ Ｍｕｌｔｉａｎａｌｙｔｅ ＡＮＡテストシステム（Ｚｅｕｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）を用いて測定された。血中のＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡは、生物学的活性のマーカーとして評価された。バイオマーカーは、基準、投与当日の８時間（集団１〜４のみ）、その後、試験日の８、１５、２２、２９、３６、４３、及び６４日に測定された。
【００８４】
末梢血の単核細胞型（Ｂ及びＴ細胞小集団、ナチュラルキラー［ＮＫ］細胞、及び単球）は、４色フローサイトメトリーを用いて、抗体染色された末梢血試料において評価された。分析には下記が含まれる：総Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋）、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＢ４＋、ＣＤ８−）、Ｔ細胞傷害性／サプレッサー細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−、ＣＤ８＋）、総Ｂ細胞（ＣＤＩ９＋）、成熟Ｂ細胞（ＣＤＩ９＋、ＩｇＤ＋、ＣＤ２７−）、単球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−、ＣＤ１４＋、ＣＤ５６−）、及びＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ５６＋）。開発業務受託機関（Ｅｓｏｔｅｒｉｘ，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）は、血液試料処理、抗体染色、データの取得、分析、品質管理を行った。本発明者らは、Ｂ細胞小集団に関する更なる分析及び品質管理を行った。Ｂ細胞小集団については、小リンパ球及び大リンパ球を含むように分析ゲートを拡大し、後者は、大きさにして単球と類似していた。
【００８５】
病歴を包括的に回収し、身体検査を週に１回の基準で行った。血液学的、血清化学プロフィールは、週に１回の基準で行い、国立癌研究所の共通毒性基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）を用いて評価した。薬力学的評価のための血液試料は、繰り返し投薬集団については週に１回の基準で回収し、１回投薬の集団については１日目の４及び８時間、２、３、４及び８日、その後、週に１回の基準で回収した。
【００８６】
Ｄ４後の心電図は、１回投薬の集団において２週に１回の基準で行い、試験薬物の繰り返し投薬を受けている患者においては週に１回の基準で行った。
【００８７】
この試験は、治療が疾患活動性に及ぼす影響を決定するように供給されないが、下記の疾患活動性の測定が得られ、予備的な有効性データを提供した。ＳＥＬＥＮＡ ＳＬＥＤＡＩスコアは、基準、２９及び４３日（集団１〜４）、２２及び６４日（集団５と６）で決定された。抗ｄｓＤＮＡ抗体及びＣ３レベルは、基準、１５、２９、及び４３日（集団１〜４）、１５、２２、２９、４３、及び６４日（集団５と６）で測定された。
【００８８】
濃度−時間プロフィールを提示することを含むデータ分析法は、非コンパートメント分析（ＮＡＣ；ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウェア、バージョン５．０．１）に供された。ＬＬＯＱ下の全ての測定は、ＮＣＡについて無視された。バイオマーカー（ＩｇＭ、ＩｇＧ、又はＩｇＡ）データを「基準からの変化」フォーマットに変換し、次に、個々のバイオマーカー−時間プロフィールもＮＣＡに供された。その後、曝露（ＰＫ）及び応答に関して得られたＮＣＡ誘導の測定は、既存の曝露−応答関係を調査するために一緒に分析された。
【００８９】
リガンド−受容体の飽和結合薬物動態と一致しているという、非線形の薬物動態の証拠を示した（図１及び２）。遊離及び複合アタシセプトの濃度−時間プロフィールは、非常に速い吸収を伴う多面的な薬物動態を示し、Ｔｍａｘは、初回投薬後の約２４時間であり、初期分布相は７〜１４日続いた。遊離アタシセプトの低い蓄積は、繰り返し投薬の集団において観察された；複合アタシセプトの蓄積は僅かに高く、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体は、投薬期間全体で蓄積されることが分かった。
【００９０】
アタシセプトを用いた処置は、成熟及び総Ｂ細胞における初期の一時的な増加と関連し、その後、持続的な投薬に関係した減少と関連した（図３Ｂ）。１回投薬の３ｍｇ／ｋｇと９ｍｇ／ｋｇ群、及び繰り返し投薬群において、成熟Ｂ細胞における基準から約３５％の減少が２９日に見られた。１回投薬群では、この減少は、４３日まで継続した；繰り返し投薬群では、約６０％の減少が４３日に見られ、６４日の最後の評価まで４５〜６０％で持続した。総Ｂ細胞について観察されたパターンは、成熟Ｂ細胞と類似していた。３ｍｇ／ｋｇの１回投薬群では、総Ｂ細胞における基準からの約３０％の減少は、２９日に見られ、４３日まで持続した。繰り返し投薬群では、約４０〜５０％の減少は４３日に見られ、６４日の最後の評価まで３５〜６０％で持続した（図３Ｂ）。総Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又は傷害性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、又は単球の数において有意な差がなかった。
【００９１】
免疫グロブリンレベルの投薬量に依存した減少は、アタシセプト処置された患者において観察された（図３Ａと３Ｂ、表５ａも参照）。この効果は、繰り返し投薬群において最も顕著であった。ＩｇＭレベルは、処置により最大の減少を示し、３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群では４３日でほぼ５０％に到達した。ＩｇＡレベルは、２９日に３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群において約３３％まで減少し、ＩｇＧレベルは、３６日に３ｍｇ／ｋｇの繰り返し投薬群において約１６％まで減少した。最低の状態は、１回投薬の集団では１５〜２９日の間で生じ、繰り返し投薬集団では２９〜４３日の間で生じた。
【００９２】
その後、値が基準に向かって戻り始めた。最後に観察された値は、１回投薬集団では基準の約５〜３０％を下回り（０．３ｍｇ／ｋｇ群を除く、この場合、ＩｇＭ値は基準より上であった）、繰り返し投薬集団では基準の約８〜６５％を下回った。
【００９３】
これらの結果は、小さな投薬量のアタシセプトの多くの回数の投与が、高い投薬量を用いた少ない回数の投薬よりも良好な生物学的活性を生じることを示す（図７と図８）。
【００９４】
実施例２−アタシセプトの静脈内投与
このフェーズＩｂの、二重盲式の、プラセボを対照とした、投薬量漸増の試行は、３：１の比率でアタシセプト又はプラセボを用いて静脈内に処置された患者の４つの集団（各々ｎ＝６）を含んだ。集団１〜３は、１回投薬のプラセボ、３、９、又は１８ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを受けた。集団４は、２回投薬のプラセボ又は９ｍｇ／ｋｇのアタシセプトを受け、第２の投薬は、第１の投薬の３週間後に生じた（表１を参照）。測定結果には下記が含まれる：（ｉ）静脈内アタシセプトの全身的及び局所的寛容性；（ｉｉ）有害事象（ＡＥ）の頻度；（ｉｉｉ）静脈内アタシセプトの薬物動態及び薬力学、リンパ球亜集団及びＩｇレベルに対する効果を含む；（ｉｖ）ＳＬＥ疾患活動性の測定。対象は、６週間（集団１〜３）又は９週間（集団４）で評価された；集団３及び４の対象は、ＰＫ及びバイオマーカーサンプリングのために試験日の８４と１２０日に戻された。血清ＰＫマーカーを下記のとおりサンプリングした：（ｉ）１回投薬の集団１〜３については、基準、投与当日の０．２５、０．５、４時間、その後、試験日の２、３、４、８、１５、２２、２９、及び４３日；（ｉｉ）複数回投薬の集団４については、基準、第１の投与当日の０．２５、０．５、４時間、その後、８、２２、２２（第２の投薬前、第２の投与後の０．２５及び０．５時間）、２９、３６、４３、６４日。集団３及び４は、試験日の８５及び１２０日にＰＫ測定された。全ての集団において、投薬日のＰＫ試料は、名目上、トラフ（ｔｒｏｕｇｈ）のように特定された。血清中の未結合のＢＬｙＳ濃度は、基準で測定された。血中のＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡは、生物学的活性のマーカーとして評価された。バイオマーカーは基準で測定され、その後、試験日２、３、４、８、１５（集団１〜３のみ）、２２、２９、３６、４３、及び６４（集団４のみ）で測定された。集団３及び４は、同様に試験日の８５と１２０日にＩｇ測定された。
【００９５】
実施例１と同様に、軽度から中程度のＳＬＥの患者が加わり、薬物動態は、遊離アタシセプト（表２ｂ）、アタシセプト／ＢＬｙＳ複合体（表３ｂ）、及び複合アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体として定義される、表４ｂ）の血清レベルを測定することによって評価された。この効果は、繰り返し投薬集団において最も顕著であり、観察期間全体で持続された。Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び単球の数に変化はなかった。マイルドな投与部位反応は、プラセボ群よりも、アタシセプトのうちでより頻繁に生じた。有害事象の頻度及びタイプに差がなく、アタシセプトで処置された患者において重篤及び重傷の有害事象はなかった。皮下投与（実施例１を参照）と静脈内投与経路との間の比較は、非常に類似した薬物動態（リガンドによって媒介された非線形ＰＫ）、並びに予測可能であり、１回及び複数回の投薬と一致した類似のＰＫを表した（図９及び１０）。
【００９６】
静脈内投与に対する利点がないように思われるが（この投与経路を用いたより高い生物学的利用能があるにもかかわらず、図４を参照）、これらの結果もまた、少量のアタシセプトの多くの投与が、高い投薬量を用いて少ない回数の投薬よりも良好な生物学的活性を生じるという結論を支持する（図７及び８）。また、これらの結果は、皮下の投与を用いた薬物の低い生物学的利用能にもかかわらず、これらの２つの方法の結合プロフィールは同程度であることを指す（図７を参照）。
【００９７】
表１．フェーズＩのＳＬＥ試験におけるアタシセプトを用いた投薬治療
【００９８】
【表１】
【００９９】
表２ａ．遊離アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１００】
【表２】
【０１０１】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−最終投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０２】
表２ｂ．遊離アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１０３】
【表３】
【０１０４】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−第１の投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０５】
表３ａ．複合アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１０６】
【表４】
【０１０７】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団；Ｎ．Ｅ．−最終投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１０８】
表３ｂ．複合アタシセプトについての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１０９】
【表５】
【０１１０】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。
Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−第１の投薬後のサンプリングスキームに起因して評価されていない。
【０１１１】
表４ａ．ＢＬｙＳ−アタシセプト複合体についての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験１
【０１１２】
【表６】
【０１１３】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
*Ｔ1/2及びＡＵＣINFはプロフィールの最終形態に起因してこの可変については信頼できる評価ではない。
【０１１４】
表４ｂ．ＢＬｙＳ−アタシセプト複合体についての非コンパートメント分析由来の薬物動態パラメーター、試験２
【０１１５】
【表７】
【０１１６】
ＡＵＣ336、０時間〜３３６時間の濃度−時間曲線下の領域；ＡＵＣINF、０時間〜無限のＡＵＣ；Ｃmax、最大濃度；ＳＤ、標準偏差；Ｔ1/2、消失半減期；Ｔmax、最大濃度の時間。
最終投薬は５０４時間で投与された。Ｎ＝６ＳＬＥ患者／集団。
Ｎ．Ｅ．−評価されていない。
*Ｔ1/2及びＡＵＣINFはプロフィールの最終形態に起因してこの可変については信頼できる評価ではない。
【０１１７】
表５ａ．免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ、ＩｇＡ、及びＩｇＧバイオマーカーについての非コンパートメント分析結果−試験１
【０１１８】
【表８】
【０１１９】
*集団１〜６についての活性−服用患者（ｎ＝６）
†プラセボ集団、全てのプラセボ患者を一緒にプールした（ｎ＝１２）。
Ｔmax、Ｉｇの最大減少の時間。
ｎ．ｄ．−データなし。
【０１２０】
表５ｂ．免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ、ＩｇＡ、及びＩｇＧバイオマーカーについての非コンパートメント分析結果−試験２
【０１２１】
【表９】
【０１２２】
*集団１〜４についての活性−服用患者（ｎ＝５）
†プラセボ集団、全てのプラセボ患者を一緒にプールした（ｎ＝４）。
Ｔmax、Ｉｇの最大減少の時間。
【０１２３】
参考文献
特許、公開された出願、及び他の刊行物を含む、本出願において引用された参考文献は参照により本明細書中に援用される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者におけるＳＬＥを治療するための方法であって、
（ｉ）ＢＬｙＳに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はその断片；及び
（ｉｉ）ヒト免疫グロブリン定常ドメイン
を含む融合分子を含む組成物を前記患者に投与することを含み、ここで、前記投薬量が約１〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、前記投与が初回投薬後に複数の間隔で生じる前記方法。
【請求項２】
前記ＴＡＣＩ細胞外ドメインが配列番号１を含む配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＡＣｌ細胞外ドメインが配列番号１と少なくとも５０％同一である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒト免疫グロブリン定常ドメインが配列番号２を含む配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記融合分子がアタシセプト（ａｔａｃｉｃｅｐｔ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が約１〜約９ｍｇ／ｋｇの量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が前記量で投与され、毎週投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が前記量で投与され、週に３回投与され、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が前記量で１カ月の期間内に４回投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が前記量で１カ月の期間内に２回投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療が約２〜約５２週間持続する、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記方法が、前記患者に第２の薬剤を同時投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の薬剤が、ＮＳＡＩＤＳ、抗マラリア薬、副腎脂質ステロイド、免疫抑制剤、免疫ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイドからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記融合分子がアタシセプトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、皮下に、経口的に又は静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
患者におけるＳＬＥを治療するための方法であって、アタシセプトを含む医薬組成物を前記患者に投与することを含み、ここで、前記投薬量は、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、前記投与が初回投薬後に複数の間隔で生じる前記方法。
【請求項１８】
前記投与が皮下であり、前記投薬量が１ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が毎週である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与が皮下であり、前記投薬量が３ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が毎週である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記投薬量が９ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が週に３回である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１】
患者におけるＳＬＥを治療するための方法であって、
（ｉ）ＢＬｙＳに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はその断片；及び
（ｉｉ）ヒト免疫グロブリン定常ドメイン
を含む融合分子を含む組成物を前記患者に投与することを含み、ここで、前記投薬量が約１〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、前記投与が初回投薬後に複数の間隔で生じる前記方法。
【請求項２】
前記ＴＡＣＩ細胞外ドメインが配列番号１を含む配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＡＣｌ細胞外ドメインが配列番号１と少なくとも５０％同一である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒト免疫グロブリン定常ドメインが配列番号２を含む配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記融合分子がアタシセプト（ａｔａｃｉｃｅｐｔ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が約１〜約９ｍｇ／ｋｇの量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が前記量で投与され、毎週投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が前記量で投与され、週に３回投与され、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が前記量で１カ月の期間内に４回投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が前記量で１カ月の期間内に２回投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療が約２〜約５２週間持続する、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記方法が、前記患者に第２の薬剤を同時投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の薬剤が、ＮＳＡＩＤＳ、抗マラリア薬、副腎脂質ステロイド、免疫抑制剤、免疫ＩＶＩｇ、ＤＨＥＡ、及びサリドマイドからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記融合分子がアタシセプトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、皮下に、経口的に又は静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
患者におけるＳＬＥを治療するための方法であって、アタシセプトを含む医薬組成物を前記患者に投与することを含み、ここで、前記投薬量は、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、前記投与が初回投薬後に複数の間隔で生じる前記方法。
【請求項１８】
前記投与が皮下であり、前記投薬量が１ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が毎週である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与が皮下であり、前記投薬量が３ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が毎週である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記投薬量が９ｍｇ／ｋｇであり、前記複数の間隔が週に３回である、請求項１７に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１６Ｃ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１６Ｃ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９】
【図２０】
【公表番号】特表２０１０−５３００００（Ｐ２０１０−５３００００Ａ）
【公表日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１２３９０（Ｐ２０１０−５１２３９０）
【出願日】平成２０年６月１３日（２００８．６．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６９４５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１５７３６９
【国際公開日】平成２０年１２月２４日（２００８．１２．２４）
【出願人】（５０００４９８３１）ザイモジェネティクス，インコーポレイティド (37)
【出願人】（５０４１０４８９９）アレス トレーディング ソシエテ アノニム (59)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月１３日（２００８．６．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６９４５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１５７３６９
【国際公開日】平成２０年１２月２４日（２００８．１２．２４）
【出願人】（５０００４９８３１）ザイモジェネティクス，インコーポレイティド (37)
【出願人】（５０４１０４８９９）アレス トレーディング ソシエテ アノニム (59)
【Ｆターム（参考）】
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