イオン性複合体
【課題】リンペプチド／リンタンパク質によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形リン酸フッ化カルシウムの超増量複合体を提供すること。
【解決手段】本発明は、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を提供する。
【解決手段】本発明は、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンペプチド／リンタンパク質によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形リン酸フッ化カルシウムの超増量（ｓｕｐｅｒｌｏａｄｅｄ）複合体に関する。これらの超増量複合体は、齲蝕の早期段階の齲蝕を再石灰化（修復）することから、歯および骨の構造を保護するために、ならびにその他の歯学的／医学的用途（歯石予防、歯の侵食／腐食予防、および象牙質知覚過敏予防を含む）のために有用な抗齲蝕原性特性を有する。本発明の超増量複合体を生成する方法、ならびに齲蝕、歯石、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏を処置または予防する方法もまた提供される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
齲蝕は、歯垢の歯病原性（ｏｄｏｎｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）細菌による食事性糖分の発酵から通常生じる有機酸による歯の硬質組織の脱灰によって開始される。齲蝕は依然として公衆衛生上の大きな問題である。さらに、修復した歯の表面は、修復部の縁部周囲がさらに齲蝕になり得る。大部分の先進国におけるフッ素の使用によって齲蝕の罹患率は低減してきてはいるものの、この疾患は依然として公衆衛生上の大きな問題となっている。歯の侵食／腐食は、食事性酸または逆流した酸による歯のミネラル分の喪失である。象牙質知覚過敏は、保護石灰化層の喪失により露出した象牙細管によるものであり、セメント質および歯石は、歯の表面へのリン酸カルシウムミネラルの望ましくない付着物である。従って、これらの全ての状態、齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石は、リン酸カルシウムレベルの不均衡である。齲蝕、歯の侵食／腐食、および象牙質知覚過敏は、失われたリン酸カルシウムを補うために生物学的に利用可能なカルシウムイオンおよびリン酸イオンを提供することにより、安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）を用いて処置され得る。安定化されたＡＣＰは、歯石の表面にも結合して、さらなる付着を防ぎ得る。従って、安定化されたＡＣＰおよび安定化された無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）は、口腔疾患およびその他の医学的状態の予防および処置において大きな役割を果たし得る。
【０００３】
カゼインはミルク中にミセル形態で存在し、これらのミセルは、直径約１００ｎｍの概ね球状をした粒子であり、水、塩、乳糖およびホエイタンパク質の連続相中に分散していると考えられている。カゼインミセルは、骨および歯を形成するカルシウムおよびリン酸イオンの生物学的に利用可能な供給源を提供する、リン酸カルシウムの担体の役割を果たす。カルシウムおよびリン酸イオンを可溶性および生物学的利用性の状態に維持するカゼインミセルの能力は、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）として知られる、カゼインのトリプシン処理された多リン酸化ペプチドによって保持されている。特許文献１には、アルカリ性ｐＨで生成されたカゼインホスホペプチド−無定形リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）およびＣＰＰによって安定化された無定形フッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）が記載されている。このような複合体は、動物およびヒトのインサイチュ齲蝕モデルにおけるエナメル質脱灰を予防し、エナメル質の表層下病変の再石灰化を促進することが示されている。
【０００４】
これらの複合体を形成するのに活性であるリンペプチドは、それらが完全長カゼインタンパク質の一部であるか否かに関係なく、この形成を行う。トリプシン消化により形成される活性カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）は、特許文献２に明記されており、これには、以下のようなペプチドＢｏｓ αｓ１−カゼインＸ−５Ｐ（ｆ５９−７９）［１］、Ｂｏｓ β―カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２５）［２］、Ｂｏｓ αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ４６−７０）［３］、およびＢｏｓ αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２１）［４］が含まれる：
【０００５】
【化１】
超増量無定形リン酸カルシウム複合体の安定化を助ける活性を有するその他のカゼインホスホペプチドは、配列Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｘａａ−Ｇｌｕ／Ｓｅｒ（Ｐ）（この場合Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリル残基を表す）を含むペプチドである。従って、超増量無定形リン酸カルシウムおよび無定形フッ化リン酸カルシウム複合体を安定化させるのに活性であるリンペプチド／リンタンパク質は、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（この場合、Ａはホスホアミノ酸、好ましくはホスホセリンであり；Ｂはホスホアミノ酸を含む任意のアミノ酸であり；Ｃはグルタメート、アスパルテートまたはホスホアミノ酸のうちの１つである）を含むものである。
【０００６】
特許文献１に記載の通りカゼインホスホペプチドによって安定化された無定形リン酸カルシウムは、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．（オーストラリア ビクトリア）から供給されるＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして販売される製品にて市販されている。しかし、カゼインホスホペプチドによって安定化された無定形リン酸カルシウムのさらに効果的な形態を処置に利用することが望ましいと思われる。さらに、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭを蒸留水のような担体に溶解させると、平衡を形成するためにイオンが周囲の水へ漏出することが避けられなくなる。これは、用途によっては、処置等のためにこの組成物により送達可能なリン酸カルシウムを低減することになる。
【特許文献１】国際公開第９８／４０４０６号
【特許文献２】米国特許第５，０１５，６２８号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、複合体。
（項目２）
前記ＰＰがカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である、項目１に記載の複合体。
（項目３）
前記カルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜５０モルの範囲内にある、項目１に記載の複合体。
（項目４）
項目１に記載の複合体を含む、口腔ケア配合物。
（項目５）
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であってＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を生成するための方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する、方法。
（項目６）
ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物。
（項目７）
前記リン酸カルシウムがＣａＨＰＯ４の形態にある、項目６に記載の配合物。
（項目８）
項目７に記載の配合物を含む、口腔ケア配合物。
（項目９）
歯の表面または表層下を再石灰化するための方法であって、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を該歯の表面または表層下に適用する工程を包含し、該複合体がＰＰ１モル当たりカルシウム約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、方法。
（項目１０）
ヒトを含む動物における齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石の１つ以上を処置および／または予防する方法であって、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を歯の表面または表層下に適用する工程を包含し、該複合体がＰＰ１モル当たりカルシウム約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、方法。
（発明の要旨）
一態様において、本発明は「超増量」リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を提供する。この複合体は、任意のｐＨ（例えば、３〜１０）で形成され得る。好ましくは、リンペプチドは、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（この場合、Ａはホスホアミノ酸、好ましくはホスホセリンであり；Ｂはホスホアミノ酸を含む任意のアミノ酸であり；Ｃはグルタメート、アスパルテートまたはホスホアミノ酸である）を含む。ホスホアミノ酸はホスホセリンであり得る。ＰＰは、カルシウムイオンおよびリン酸イオンが超増量されている。カルシウムイオンは、ＰＰ１モル当たりＣａが３０〜１，０００モルの範囲内にあり得るか、またはＰＰ１モル当たりＣａが３０〜１００モルもしくは３０〜５０の範囲内にあり得る。別の実施形態において、ＰＰ１モル当たりのＣａのモル数は、少なくとも２５、３０、３５、４０、４５または５０である。リン酸イオンは一般的に、カルシウムイオンに対する比率（Ｃａ：Ｐ）が１．５〜１．８：１にて存在する。１つの実施形態において、この比は約１．５８：１である。
【０００８】
さらなる態様において、本発明は、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を提供する。
【０００９】
好ましい実施形態において、カルシウムイオン含量は、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０〜１００モルの範囲内にある。より好ましくは、カルシウムイオン含量は、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０〜約５０モルの範囲内にある。
【００１０】
本発明はさらに、上述のＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰの複合体の水性配合物に関する。
【００１１】
本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語（またはその文法上の変形）は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語と同等であり、交換可能に使用され得、その他の要素または特徴の存在を排除するものと見なしてはならない。
【００１２】
驚いたことに、ＷＯ９８／４０４０６号に記載の方法を使用して生成されるようなカゼインホスホペプチド−無定形リン酸カルシウム（ＣＰＰ−ＡＣＰ）の、エナメル質表層下病変（齲歯の早期段階）を再石灰化（修復）する活性は、可能であるとされる量を上回るカルシウムおよびリン酸イオンをカゼインホスホペプチドに超増量することによって、実質的に増大させることができる。このカルシウムは、ＣａＨＰＯ４、または乳酸カルシウムおよびリン酸水素ナトリウム、またはカルシウム塩またはリン酸塩のその他の好適な形態であってもよい。
【００１３】
本発明の複合体のＰＰは、カゼインリン酸ペプチド（ＣＰＰ）であり得、これはインタクトなカゼインまたはカゼインの断片であり得る。形成されたＣＰＰ−無定形リン酸カルシウム複合体は、コロイド複合体であり得、この場合、コア粒子が凝集して、水に懸濁した大径の（例えば１００ｎｍ）コロイド粒子を形成する。
【００１４】
ＰＰは何れの供給源に由来するものであってもよく；完全長カゼインポリペプチドを含めたより大きなポリペプチド中に存在してもよく、あるいは、カゼインまたはホスビチンのようなその他のホスホアミノ酸リッチタンパク質のトリプシン消化または化学的消化（例えばアルカリ性加水分解）によって、あるいは化学合成または組み換え合成によって単離されてもよいが、但し、これは、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−を含む。このコア配列に隣接する配列は、任意の配列であり得る。しかし、αｓ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αｓ２（４６−７０）［３］、およびαｓ２（１−２１）［４］中の隣接配列が好ましい。これらの隣接配列は、１つ以上の残基の欠失、付加または保存的置換によって改変され得る。このアミノ酸組成物および隣接領域の配列は、重要ではないものの、好ましい隣接領域は、モチーフの構造的作用に寄与してペプチドのコンホメーションを維持し、全てのホスホリル基およびカルボキシル基がカルシウムイオンと相互作用できるようにする。
【００１５】
好ましい実施形態において、ＰＰは、αｓ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αｓ２（４６−７０）［３］、およびαｓ２（１−２１）［４］からなる群から選択される。
【００１６】
好ましい実施形態において、ＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ中の少なくとも４０重量％のＰＰは、上記のペプチド［１］〜［４］の１つ以上であるかそれらを含むタンパク質またはタンパク質断片の混合物である。好ましくは、ＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ中ＰＰの少なくとも６０重量％、より好ましくは少なくとも７０重量％が、ペプチド［１］〜［４］であるかそれらを含むタンパク質またはタンパク質断片の混合物である。
【００１７】
リンペプチドは、超増量カルシウム、リン酸塩（およびフッ化物）を安定化させて準安定溶液を生成すると考えられている。この結合は、ＡＣＰまたはＡＣＦＰがリン酸カルシウムの核形成および沈殿を開始するサイズに成長するのを阻害すると考えられている。このように、カルシウム、およびフッ化物イオンのようなその他のイオンは、例えば歯の表面に局在して、脱灰を予防し、齲蝕の形成を予防または低減することができる。
【００１８】
そのため、さらなる態様において、本発明は、上述のような安定した超増量ＡＣＦＰ複合体または安定した超増量ＡＣＰ複合体であって、標的部位において、カルシウム、フッ化物およびリン酸塩イオンを含むがこれらに限定されないイオンを共局在させる送達ビヒクルとして作用する複合体を提供する。好ましい実施形態において、複合体は、優れた齲食予防作用を生じる徐放性無定形剤形中にある。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は又、上述のようなＡＣＰまたはＡＣＦＰの安定した超増量複合体を生成する方法であって、
（ｉ）カルシウム、無機リン酸塩およびフッ化物（場合による）を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰを含む溶液と（ｉ）を混合する工程
を包含する方法も提供する。
【００２０】
好ましい実施形態において、ＰＰは、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である。
【００２１】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰのＡＣＰ／ＡＣＦＰとしてのカルシウム（およびリン酸塩）イオン含量を増大させる方法であって、
（ｉ）カルシウム、無機リン酸塩およびフッ化物（場合による）からなる溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰを含む溶液と（ｉ）を混合する工程；
あるいは
（ｉ）カルシウム（例えば、ＣａＨＰＯ４、乳酸カルシウム等）を含む粉末を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰ粉末と（ｉ）を混合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２２】
ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして知られる商品中のＰＰ−ＡＣＰ複合体のリン酸カルシウム充填量を増大させると、特定の用途に好適であるよりも粘性の高い調剤が生成され得ることが、既に見出されている。従って、用途によっては、ＰＰ−ＡＣＰをリン酸カルシウム（特にＣａＨＰＯ４）と乾燥混合させた後に、配合物、例えば練り歯磨きまたはチューインガムのような口腔ケア配合物に混入するのが有用である。
【００２３】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；
（ｉｉ）溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２４】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物が提供される。好ましくは、リン酸カルシウムはＣａＨＰＯ４である。好ましくは、リン酸カルシウム（例えばＣａＨＰＯ４）は、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体と乾燥混合される。好ましい実施形態において、ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体とリン酸カルシウムとの比率は、約１：１〜５０、より好ましくは約１：１〜２５、より好ましくは約１：５〜１５である。一実施形態において、ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体とリン酸カルシウムとの比率は、約１：１０である。
【００２５】
本発明のさらなる態様においては、上述のように、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等しい重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物を含む口腔ケア組成物が提供される。
【００２６】
本発明のさらなる態様においては、口腔内に使用する時にＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を含む口腔ケア配合物を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む粉末を得る工程；
（ｉｉ）有効量のリン酸カルシウムと乾燥混合させる工程；ならびに
（ｉｉｉ）乾燥混合されたＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰおよびリン酸カルシウム混合物を口腔ケア配合物に配合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２７】
好ましくは、乾燥混合させるリン酸カルシウムの形態は、ＣａＨＰＯ４である。
【００２８】
好ましくは、口腔ケア配合物は、練り歯磨き、歯科用クリーム；チューインガム；ロゼンジ；含嗽薬および歯磨き粉からなる群から選択される。何らかの理論または作用様式に束縛されるわけではないが、生理学的に許容される担体への複合体の混入によって本来の希釈が行われ、さらに歯科用途における唾液中にて希釈が行われるにもかかわらず、「超増量」リンペプチドは、十分に高い濃度のカルシウムおよびリン酸イオン、特に場合によりＡＣＰおよびＡＣＦＰを送達できると考えられている。そのため、この配合物はカルシウムおよびリン酸イオンのイオン種形成を維持する。本発明は、送達部位における増量されたＡＣＰ−ＡＣＦＰを対象とする。これは、ＡＣＰ／ＡＣＦＰ含量が高い出発原料、および／または製造と使用の間におけるＡＣＰ／ＡＣＦＰの喪失または漏出の低減によって達成することができる。
【００２９】
これらの超増量複合体は又、食事不耐性、アレルギー、または宗教的または文化的要因のような何らかの理由によって、食事におけるカルシウム必要量を供給するのに充分な量の乳製品を消費できない、または消費したがらない対象の栄養補助食品としても有用である。本発明の超増量複合体は、骨の成長の促進を必要とする対象、例えば、骨折修復、関節置換、骨移植または頭蓋顔面手術を受ける対象のカルシウムアジュバントとして有用である。
【００３０】
本発明のさらなる態様においては、歯を再石灰化する方法であって、上述のような超増量複合体を望ましくは薬学的に許容される担体にて歯に適用することを含む方法が提供される。この複合体は、リン酸カルシウム、フッ化カルシウムまたはその両方を含み得る。この方法は、好ましくは処置を必要とする対象に適用する。
【００３１】
さらなる態様において、本発明は、歯の表面または表層下を再石灰化する方法であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を、歯の表面または表層下に適用する工程を含む方法を提供する。
【００３２】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する医薬品の製造における、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウム複合体の使用が提供される。
【００３３】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化するための、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００３４】
好ましくは、歯の表面または表層下は、歯のエナメル質であり、より好ましくは歯のエナメル質における表面または表層下の病巣である。
【００３５】
安定したＡＣＦＰまたはＡＣＰ超増量複合体は、練り歯磨き、含嗽薬または口内用配合物のような口腔ケア組成物に混入される場合もあれば、これらの組成物中で形成する場合もある。これは、例えば、齲蝕または齲歯の予防および／または処置を助け得る。ＡＣＦＰまたはＡＣＰ超増量複合体（単独でＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含むか、あるいはリン酸カルシウム（例えばＣａＨＰＯ４）と共にＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含み得る）は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２５％、より好ましくは０．５〜２０％、および場合により０．５〜１０％を含み得る。口腔組成物の場合、ＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの投与量は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは０．５％〜２０％または０．５％〜１０％であることが好ましい。特に好ましい実施形態において、本発明の口腔組成物は、約１〜５％の超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む。上記の薬剤を含む本発明の口腔組成物は、例えば、練り歯磨き、歯磨き粉および液体歯磨き剤等の歯磨き剤、含嗽薬、トローチ、チューインガム、歯科用ペースト、歯肉マッサージクリーム、嗽錠剤、乳製品およびその他の食品のような、口内に適用可能な種々の形態で調製および使用され得る。本発明による口腔組成物は、それぞれの口腔組成物の種類および形態に応じて、追加の周知の成分をさらに含み得る。
【００３６】
本発明の特定の好ましい形態において、口腔組成物は、含嗽薬またはリンスのように、実質的に液体の性質であり得る。このような調剤において、ビヒクルは一般的に、望ましくは以下に記載するような湿潤剤を含む、水とアルコールの混合物である。一般的に、水とアルコールの重量比は、約１：１〜約２０：１の範囲内にある。この種の調剤中における水とアルコールの混合物の合計量は、一般的に調剤の約７０〜約９９．９重量％の範囲内にある。アルコールは一般的にエタノールまたはイソプロパノールであるが、エタノールが好ましい。
【００３７】
本発明のこのような液体およびその他の調剤のｐＨは、一般的に約３〜約１０の範囲内にあり、典型的には約５．０〜７．０の範囲内にある。このｐＨは、酸（例えば、クエン酸または安息香酸）または塩基（例えば水酸化ナトリウム）で調節してもよければ、あるいは（クエン酸ナトリウム、安息香酸塩、炭酸塩または重炭酸塩、水素化リン酸二ナトリウム、二水素リン酸ナトリウム等で）緩衝化してもよい。
【００３８】
一実施形態において、本発明の口腔組成物は、約５．５のｐＨを有する。
【００３９】
従って、本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する組成物であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を、薬学的に許容される担体および／またはアジュバントと共に含む組成物が提供される。
【００４０】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する組成物であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体と共に、薬学的に許容される担体および／またはアジュバントとにより本質的に構成される組成物が提供される。
【００４１】
別の実施形態において、本発明による口腔組成物は、カルシウムキレート剤、例えばピロリン酸塩、ポリホスフェート、クエン酸塩、ＥＤＴＡ等を含む。
【００４２】
本発明の他の望ましい形態において、口腔組成物は、歯磨き粉、歯科用錠剤、または練り歯磨き（歯科用クリーム）またはゲル状歯磨きのように、実質的に固体またはペースト状の性質であり得る。このような固体またはペースト状の口腔調剤は、一般的に歯科学的に許容される研磨剤を含む。研磨剤の例としては、水不溶性メタリン酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム二水和物、無水リン酸二カルシウム、ピロリン酸カルシウム、オルトリン酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、炭酸カルシウム、水和アルミナ、焼成アルミナ、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸ジルコン、シリカ、ベントナイト、およびそれらの混合物である。その他の好適な研磨剤としては、メラミン−、フェノール−および尿素−ホルムアルデヒド、および架橋ポリエポキシドおよびポリエステルのような粒状熱硬化性樹脂が挙げられる。好ましい研磨剤としては、約５ミクロン以下の粒子サイズ、約１．１ミクロン以下の平均粒子サイズ、および約５０，０００ｃｍ２／ｇ以下の表面積を有する結晶性シリカ、シリカゲルまたはコロイドシリカ、ならびに複合無定形アルカリ金属アルミノケイ酸塩が挙げられる。
【００４３】
見た目に透明なゲルを使用する場合には、Ｓｙｌｏｉｄ ７２およびＳｙｌｏｉｄ ７４のような商標名ＳＹＬＯＩＤ、あるいはＳａｎｔｏｃｅｌ １００のような商標名ＳＡＮＴＯＣＥＬで販売されているようなコロイドシリカの研磨剤、即ち、アルカリ金属アルミノケイ酸塩複合体が特に有用である。なぜなら、これらの複合体の屈折率が、歯磨き粉に共通して使用されるゲル化剤−液体（水および／または保湿剤を含む）系の屈折率に近いためである。
【００４４】
いわゆる「水不溶性」研磨剤の多くは、陰イオンの性質をしており、少量の溶解性物質も含む。そのため、不溶性メタリン酸ナトリウムは、例えばＴｈｏｒｐｅ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ９，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ｐｐ．５１０−５１１で例示されるような、任意の好適な方法で形成され得る。Ｍａｄｒｅｌｌ’ｓ ｓａｌｔおよびＫｕｒｒｏｌ’ｓ ｓａｌｔとして知られる不溶性メタリン酸ナトリウムの形態が、好適な物質のさらなる例である。これらのメタリン酸塩は、僅かな水溶解性しか示さないため、通常は不溶性メタリン酸塩（ＩＭＰ）と呼ばれる。これらの中には、不純物として少量の可溶性リン酸塩物質が、通常の場合、数重量％（例えば４重量％以下）存在する。不溶性メタリン酸塩の場合に可溶性トリメタリン酸ナトリウムを含むと考えられている可溶性リン酸塩物質の量は、所望の場合水で洗浄することによって、低減または除去され得る。不溶性アルカリ金属メタリン酸塩は一般的に、本物質の１％以下で３７ミクロンを超えるような粒子サイズの粉末形態で使用される。
【００４５】
研磨剤は一般的に、約１０重量％〜約９９重量％の濃度で固体またはペースト状の組成物中に存在する。好ましくは、研磨剤は、練り歯磨き中に約１０％〜約７５％の量で存在し、歯磨き粉中に約７５％〜約９９％の量で存在する。練り歯磨きにおいて、研磨剤が珪素系の性質である場合には、一般的に約１０〜３０重量％の量で存在する。その他の研磨剤は、一般的に約３０〜７５重量％の量で存在する。
【００４６】
練り歯磨きにおいて、液状ビヒクルは、一般的に調剤の約１０重量％〜約８０重量％の量の水および保湿剤を含み得る。グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールおよびポリプロピレングリコールは、好適な保湿剤／担体の例である。水、グリセリンおよびソルビトールの液体混合物も好都合である。屈折率が重要となる透明なゲルにおいて、約２．５〜３０重量／重量％の水、０〜約７０重量／重量％のグリセリン、および約２０〜８０重量／重量％のソルビトールを使用するのが好ましい。
【００４７】
練り歯磨き、クリームおよびゲルは、一般的に約０．１〜約１０、好ましくは約０．５〜約５重量／重量％の割合で、天然若しくは合成増粘剤またはゲル化剤を含む。好適な増粘剤は、合成ヘクトライト、即ち、例えばＬａｐｏｒｔｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄにより販売されているＬａｐｏｎｉｔｅ（例えばＣＰ、ＳＰ２００２、Ｄ）として入手可能な合成コロイドマグネシウムアルカリ金属ケイ酸塩複合体クレイである。Ｌａｐｏｎｉｔｅ Ｄは、重量で約５８．００％のＳｉＯ２、約２５．４０％のＭｇＯ、約３．０５％のＮａ２０、約０．９８％のＬｉ２Ｏ、ならびに幾らかの水および微量の金属である。その真比重は２．５３であり、見掛け嵩密度は湿度８％で１．０ｇ／ｍｌである。
【００４８】
その他の好適な増粘剤としては、トチャカ、イオタカラギナン、トラガカントガム、澱粉、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース（例えば、Ｎａｔｒｏｓｏｌとして入手可能）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ならびに微細に粉砕されたＳｙｌｏｉｄ（例えば２４４）のようなコロイドシリカが挙げられる。プロピレングリコール、ジプロピレングリコールおよびヘキシレングリコールのような保湿ポリオール；メチルセロソルブおよびエチルセロソルブのようなセロソルブ；オリーブオイル、ヒマシ油およびワセリンのような、直鎖に少なくとも約１２個の炭素を有する植物性油およびワックス；ならびに酢酸アミル、酢酸エチルおよび安息香酸ベンジルのようなエステルといった可溶化剤が含まれる場合もある。
【００４９】
口腔調剤は、従来通り、好適なラベルを貼ったパッケージに入れて販売されるか、あるいは流通されるべきであることが理解されるであろう。そのため、マウスリンスのジャーは、本質的にマウスリンスまたは含嗽薬であると記載し、使用上の注意事項を記載したラベルを有し；練り歯磨き、クリームまたはゲルは通常、本質的に練り歯磨き、ゲルまたは歯科用クリームであると記載したラベルを有する押出しチューブ（一般的にはアルミニウム製、鉛張りまたはプラスチック張り）、あるいは含量を計量するその他のスクィーズ式、ポンプ式または加圧式ディスペンサーに入れられる。
【００５０】
本発明の組成物では、有機界面活性剤が使用されて、予防作用を増大させ、口腔全体へ活性剤を十分且つ完全に分散させるのを助け、本発明の組成物を化粧品としてより許容されるものにし得る。有機界面活性剤は、好ましくは陰イオン性、非イオン性または両性の性質をしており、好ましくは活性剤と相互作用しない。界面活性剤としては、組成物に洗浄および発泡特性をもたらす洗浄剤を使用するのが好ましい。陰イオン性表面剤の好適な例には、硬化ココナッツオイル脂肪酸の一硫化モノグリセリドのナトリウム塩のような高級脂肪酸一硫酸モノグリセリド；ラウリル硫酸ナトリウムのような高級硫化アルキル、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホン酸塩；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホン酸塩；高級アルキルスルホ−アセテート；１，２−ジヒドロキシプロパンスルホネートの高級脂肪酸エステル；および低級脂肪酸アミノカルボキシ酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミド（例えば、脂肪酸、アルキルまたはアシル基に１２個〜１６個の炭素を有するアミド）等がある。最後に述べたアミドの例には、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ならびに石鹸または類似の高級脂肪酸物質を実質的に含まないＮ−ラウロイル、Ｎ−ミリストイルまたはＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム塩、カリウム塩およびエタノールアミン塩がある。本発明の口腔組成物におけるこれらのサルコナイト化合物の使用は、特に好都合である。なぜなら、これらの物質は、酸溶液における歯のエナメル質の溶解度の幾分低下させることに加えて、炭水化物の分解によって口腔内における酸形成を阻止する効果を長期間示すためである。使用するのに好適な水溶性非イオン性界面活性剤の例には、長い疎水性鎖（例えば約１２〜２０個の炭素からなる脂肪族鎖）を有する、エチレンオキシドと種々の反応性水素含有化合物との縮合生成物があり、これらの縮合生成物（「エトキサマー」）は、親水性ポリオキシエチレン部分、例えば、ポリ（エチレンオキシド）と脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪アミド、多価アルコール（例えば、ソルビタンモノステアレート）およびポリプロピレンオキシド（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ物質）の縮合生成物を含む。
【００５１】
界面活性剤は、一般的に約０．１〜５重量％の量で存在する。界面活性剤は、本発明の活性剤の溶解を助けることによって、必要とされる溶解保湿剤の量を減らし得ることは、注目すべき点である。
【００５２】
本発明の口腔調剤には、漂白剤、保存剤、シリコン、クロロフィル化合物、および／または尿素、リン酸二アンモニウムのようなアンモニア材料、ならびにそれらの混合物といったその他種々の物質が混入され得る。これらのアジュバントは、存在する場合、所望の特性および特徴に実質的に悪影響を与えない量で調剤に混入される。
【００５３】
着香剤または甘味剤は、何れの好適なものも使用され得る。好適な着香成分の例には、着香オイル（例えば、スペアミント、ペパーミント、ウインターグリーン、サッサフラス、クローブ、セージ、ユーカリ、マヨラナ、シナモン、レモンおよびオレンジのオイル、ならびにサリチル酸メチルがある。好適な甘味剤には、蔗糖、乳糖、マルトース、ソルビトール、キシリトール、サイクラミン酸ナトリウム、ペリラルチン、ＡＭＰ（アスパルチルフェニルアラニン、メチルエステル）、サッカリン等がある。好適には、着香剤および甘味剤は、それぞれまたは一緒になって、調剤の約０．１％〜５％以上を含み得る。
【００５４】
本発明は又、上述のような組成物の使用も提供する。本発明の好ましい実施において、本発明の組成物を含む含嗽薬または歯磨き粉のような、本発明による口腔組成物は、定期的に（例えば、毎日若しくは２日毎若しくは３日毎に、または好ましくは１日１〜３回）、好ましくは約３．０〜約１０．０、より好ましくは５．０〜約９．０のｐＨで、少なくとも２週間〜８週間以上または一生にわたり、歯肉および歯に適用される。一実施形態において、口腔組成物のｐＨは、約５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０である。
【００５５】
本発明の組成物は又、例えば、温かいガムベースに撹拌するか、またはガムベースの表面を被覆することによって、ロゼンジに、またはチューインガムに、またはその他の製品に混入してもよい。ガムベースの例は、望ましくは従来の可塑剤または軟化剤、砂糖、あるいはグルコース、ソルビトール等のその他の甘味剤と一緒にした、ジェルトン、ゴムラテックス、ビニライト樹脂等である。
【００５６】
別の実施形態において、本発明の複合体は、好ましくは０．１〜１００重量／重量％、より好ましくは１〜５０重量／重量％、最も好ましくは１〜１０％、および特に２重量／重量％の食料品を含む栄養補助食品を形成するように配合される。本複合体は又、食品に混入される場合もある。
【００５７】
さらなる態様において、本発明は、上述のような超増量ＡＣＦＰおよび／またはＡＣＰ複合体の何れかを、薬学的に許容される担体と一緒に含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。このような組成物は、歯科用抗齲食性組成物、治療用組成物、および栄養補助食品からなる群から選択され得る。歯科用組成物または治療用組成物は、ゲル、液体、固体、粉末、クリームまたはロゼンジの形態であり得る。治療用組成物は又、錠剤またはカプセルの形態である場合もある。一実施形態において、超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰ複合体は、実質的にこのような組成物の再石灰化活性化合物にすぎない。さらなる実施形態において、超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰは、口腔ケア組成物である組成物が口腔内の唾液と接触した後に形成する。
【００５８】
さらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏、および歯石を処置または予防する方法であって、処置を必要とする対象の歯または歯肉に本発明の複合体または組成物を投与する工程を含む方法が提供される。複合体の局所投与が好ましい。
【００５９】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による超増量ＡＣＦＰおよび／またはＡＣＰ複合体を添加した歯科用修復材を含む、歯科修復用組成物が提供される。歯科用修復材の基部は、グラスアイオノマーセメント、複合材料、またはその他何れかの適合する修復材であってよい。歯科用修復材に含まれる超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体の量は、０．０１〜８０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは１〜５重量％であるのが好ましい。上述の薬剤を含む本発明の歯科用修復材は、歯科用途での実施に適用可能な種々の形態で調製および使用され得る。本発明による歯科用修復材はさらに、それぞれの歯科用修復材の種類および形態に応じて、その他のイオン（例えば、抗菌イオンＺｎ２＋、Ａｇ＋等）またはその他の追加の成分を含み得る。超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体のｐＨは、２〜１０、より好ましくは５〜９、さらに好ましくは５〜７であるのが好ましい。超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む歯科用修復材料のｐＨは、２〜１０、より好ましくは５〜９、さらに好ましくは５〜７であるのが好ましい。
【００６０】
本発明は又、修復組成物の製造方法も対象とする。好ましくは、本方法は、上述のような超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰ複合体を基部の歯科用修復材に添加することを含む。本発明は又、上述のような修復組成物を齲蝕の処置および／または予防に使用することにも関する。
【００６１】
本発明のさらなる態様においては、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、および（ｂ）ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体を含むキットも提供される。本キットは場合により、歯科用修復組成物の調製に使用するための説明書を含み得る。
【００６２】
好ましい実施形態において、歯科用修復材は、多孔性の歯科用セメントである。さらに好ましい実施形態において、歯科用修復材料は、グラスアイオノマーセメントである。何らかの理論または作用様式に拘束されるわけではないが、グラスアイオノマーセメントのような特定の種類の多孔性歯科用セメントにおける微孔は、本発明の複合体を歯表面へ通過させて、歯科用物質の再石灰化を促進する。
【００６３】
本発明は又、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、および（ｂ）超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体および／または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含むキットにも関する。
【００６４】
本発明は又、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、（ｂ）カゼインホスホペプチド、（ｃ）カルシウムイオン、および（ｄ）リン酸イオン、ならびに場合によりフッ化物イオンを含むキットにも関する。本キットは場合により、歯科用修復組成物の調製に使用するための説明書を含み得る。
【００６５】
本発明は又、ヒトを含む動物における齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置および／または予防する方法であって、本発明による組成物あるいは本発明により製造される組成物を用意する工程、処置および／または予防を必要とする動物の歯に適用する工程を含む方法も提供する。
【００６６】
さらなる態様において、本発明は、身体、特に骨のカルシウムの喪失、カルシウムの欠乏、カルシウム吸収不良等に関連する１つ以上の状態を処置する方法に関する。このような状態の例としては、骨粗しょう症および骨軟化症が挙げられるが、これらに限定されない。一般的には、カルシウムの生物学的利用性を増大させることによって改善することができる状態であれば何れも考慮される。
【００６７】
本発明のさらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置または予防する組成物の製造における、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００６８】
本発明のさらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置または予防するための、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００６９】
本明細書では特にヒトにおける用途を言及しているが、本発明は獣医学的の目的にも有用であることが明確に理解されるであろう。そのため、全ての態様において、本発明は、牛、羊、馬および家禽のような家畜；猫および犬のような愛玩動物；ならびに動物園の動物に対して有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】カルシウムおよびリン酸イオンを超増量したＣＰＰによる、インビトロにおけるエナメル質表層病変の再石灰化の増大。
【図２】リン酸カルシウムを超増量したＣＰＰを含有する練り歯磨きによる、インビトロにおけるエナメル質表層病変の再石灰化の増大。
【実施例】
【００７１】
次に、以下の非限定的な実施例を参照しながら、本発明を説明する。
（実施例１）
ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）は、オーストラリア ビクトリアのＲｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．から販売されたものである。この製品（＃８４１１１７）は、１４．３重量％のカルシウム、２２．３重量％のリン酸塩、および４７重量％のカゼインホスホペプチドを含んでいた。この製品を０．５％溶解し、ＨＣｌを添加してｐＨ５．５に調節した。次いで、２．５ＭのＮａＯＨを添加してｐＨを５．５に維持しながら、３．２５ＭのＣａＣｌ２および２ＭのＮａＨ２ＰＯ４を滴下することにより、カルシウムおよびリン酸イオンを添加した。この溶液が半透明になるまで、カルシウムおよびリン酸イオンの滴下を続けた。添加したカルシウムとリン酸塩の濃度を記録した。この溶液は又、カルシウムおよびリン酸イオンを０．５％のＣＰＰ−ＡＣＰ溶液に滴下し、さらにリン酸カルシウムを添加してｐＨを５．５に低下させることによっても形成され得る。
【００７２】
【表１】
これらの結果は、ＣＰＰ−ＡＣＰにカルシウムおよびリン酸イオンを超増量することにより、熱力学的に安定した複合体を準安定溶液中に生成できることを示している。
【００７３】
（実施例２）
別の実施例においては、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）粉末をＣａＨＰＯ４粉末と、ＣＰＰ−ＡＣＰ：ＣａＨＰＯ４＝１：１０の重量比で乾燥混合させた。次いで、この粉末を無糖のガムおよび練り歯磨き配合物に１〜５重量／重量％で添加した。
【００７４】
（実施例３）
通常ＣＰＰ−ＡＣＰおよび超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）によるインビトロにおけるエナメル質表層下病変の再石灰化の比較
抜歯したヒト第３大臼歯の研磨したエナメル質表層を、鋸でひいて平板（８×４ｍｍ２）に切断し、酸耐性マニキュア液を被覆して、１ｍｍの間隔をおいた咬合側半分および歯肉側半分の近遠心窓（１×７ｍｍ２）を形成した（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）。これらの窓の中に表層下エナメル質病変を、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）が改良したＷｈｉｔｅのＣａｒｂｏｐｏｌ法（Ｗｈｉｔｅ Ｄ．Ｊ． （１９８７） Ｃａｒｉｅｓ Ｒｅｓ ２１， ２２８−２４２）を使用して作り出した。エナメル質の平板を鋸で半分に切断し、４×４ｍｍ２ブロックを形成した。一方のブロックの歯肉側半分の病変と他方のブロックの咬合側半分病変にマニキュアで封止し、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）に記載の通りに脱灰対照を作り出した。
【００７５】
これらのエナメル質側半分の病変を、３７℃にて１０日間混合せずに、２種類の再石灰化溶液に曝した。再石灰化溶液は、塩酸でｐＨ５．５に調節した０．５重量／容量％のＣＰＰ−ＡＣＰ、ならびに実施例１で調製した超増量ＣＰＰ−ＡＣＰであった。
【００７６】
再石灰化後、両ブロックのそれぞれの対をエタノール中で脱水し、メタクリン酸メチル樹脂（Ｐａｌａｄｕｒ、Ｋｕｌｚｅｒ［ドイツ］）に埋め込んだ。これらの２００〜３００μｍの切片を、病変の表面に対して垂直に切断し、ラップ盤で８０±５μｍに加工し、上述のように厚さ１０×１４μｍのアルミニウムステップウェッジと並べて放射線透過写真を撮影した。
【００７７】
病変の放射線透過画像を、Ｄｉｌｕｘ ２２顕微鏡（Ｅｒｎｓｔ Ｌｅｉｚ Ｗｅｔｚｌａｒ［ドイツ］）の透過光によって造影した。これらの画像をビデオカメラ（Ｓｏｎｙ ＤＸＣ ９３０Ｐ）で撮影し、画像化ソフトウェア（Ｏｐｔｉｍａｓ ６．２）の制御下でデジタル化した（Ｓｃｉｏｎ Ｉｍａｇｉｎｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｏｌｏｕｒ Ｇｒａｂｂｅｒ ７）。病変、対照およびアルミニウムステップウェッジの画像を、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通りスキャンした。エナメル質切片の厚さを測定し、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通り、Ａｎｇｍａｒ（Ａｎｇｍａｒ Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （１９６３） Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｒｅｓ ８， １２−２３）の等式を使用して、容量％のミネラルデータを測定した。再石灰化の百分率（％Ｒ）も、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通り計算した。
【００７８】
エナメル質表層下病変の再石灰化を図１に示す。
【００７９】
図１の結果は、超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）溶液が、通常のＣＰＰ−ＡＣＰ溶液よりも、インビトロにおけるエナメル質表層下病変の再石灰化に優れていることを示している。
【００８０】
（実施例４）
超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む練り歯磨き配合物がエナメル質表層下病変を再石灰化する能力を、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ等（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ． Ｄｅｎｔ Ｒｅｓ． ８２， ２０６−２１１）のプロトコールを使用し、インサイチュ無作為クロスオーバー二重盲検臨床試験にて調査した。１０人の対象が、実施例３に記載の通り調製した表層下の脱灰病変を含む６つのヒトエナメル質の半分の平板片を使用した取り外し可能な口蓋装置を装着した。各エナメル質のもう半分の平板を加湿容器中に保存し、対照脱灰病変として使用した。この試験では以下の７つの処置を行った：即ち、０．２重量／重量％の通常ＣＰＰ−ＡＣＰを含む練り歯磨きＢ；０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰ／１．０％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＣ（図２および実施例５では「１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ」を呼ばれる）；１．０％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＥ；１，０００ｐｐｍのＦを含む練り歯磨きＦ；１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰおよび１，０００ｐｐｍのＦを含む練り歯磨きＧ；０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰ／１．８％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＤ（図２および実施例５では「２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ」と呼ばれる）；および対照練り歯磨きＡ（プラセボ）。これらの練り歯磨きを１日に４回３０秒ずつ使用した。装置は、練り歯磨きの使用中および該練り歯磨きの使用後１時間、装着した。各処置を１４日間続け、１０人の対象それぞれが、各処置の間に１週間の休みを入れながら、各処置を行った。各処置の完了時にエナメル質平板を取り出し、それらの各々の脱灰対照と対にして、埋込みおよび切片化を行い、マイクロラジオグラフィーならびにコンピュータによるデンシトメトリー画像解析にかけて、再石灰化のレベルを測定した。エナメル質の再石灰化の百分率（％Ｒ）として示した結果は、図２に示されており；１．０％のＣａＨＰＯ４（１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ）または１．８％のＣａＨＰＯ４（２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ）の何れかを超増量した０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰが、同じ濃度の通常の０．２％ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣａＨＰＯ４単独よりも、エナメル質表層下病変を有意に再石灰化することを示している。２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰのペーストは、１，０００ｐｐｍのフッ化物を含むペーストよりも有意に優れていた。さらに、１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰおよび１，０００ｐｐｍのＦは、１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰまたは１，０００ｐｐｍのＦ単独よりも、さらなる効果を示した。
【００８１】
（実施例５）
超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む練り歯磨き配合物
【００８２】
【表２】
【００８３】
【表３】
【００８４】
【表４】
【００８５】
【表５】
【００８６】
【表６】
【００８７】
【表７】
【００８８】
【表８】
（実施例６）
含嗽薬配合物
【００８９】
【表９】
（実施例７）
ロゼンジ配合物
【００９０】
【表１０】
（実施例８）
チューインガム配合物
【００９１】
【表１１】
本明細書で開示および定義した本発明は、本文または図面に記載した、またはこれらから明らかになる複数の個々の特徴からなる代替の組み合わせ全てに適用されることが理解されるであろう。これらの異なる組み合わせは全て、本発明の種々の態様を構成する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンペプチド／リンタンパク質によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形リン酸フッ化カルシウムの超増量（ｓｕｐｅｒｌｏａｄｅｄ）複合体に関する。これらの超増量複合体は、齲蝕の早期段階の齲蝕を再石灰化（修復）することから、歯および骨の構造を保護するために、ならびにその他の歯学的／医学的用途（歯石予防、歯の侵食／腐食予防、および象牙質知覚過敏予防を含む）のために有用な抗齲蝕原性特性を有する。本発明の超増量複合体を生成する方法、ならびに齲蝕、歯石、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏を処置または予防する方法もまた提供される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
齲蝕は、歯垢の歯病原性（ｏｄｏｎｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）細菌による食事性糖分の発酵から通常生じる有機酸による歯の硬質組織の脱灰によって開始される。齲蝕は依然として公衆衛生上の大きな問題である。さらに、修復した歯の表面は、修復部の縁部周囲がさらに齲蝕になり得る。大部分の先進国におけるフッ素の使用によって齲蝕の罹患率は低減してきてはいるものの、この疾患は依然として公衆衛生上の大きな問題となっている。歯の侵食／腐食は、食事性酸または逆流した酸による歯のミネラル分の喪失である。象牙質知覚過敏は、保護石灰化層の喪失により露出した象牙細管によるものであり、セメント質および歯石は、歯の表面へのリン酸カルシウムミネラルの望ましくない付着物である。従って、これらの全ての状態、齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石は、リン酸カルシウムレベルの不均衡である。齲蝕、歯の侵食／腐食、および象牙質知覚過敏は、失われたリン酸カルシウムを補うために生物学的に利用可能なカルシウムイオンおよびリン酸イオンを提供することにより、安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）を用いて処置され得る。安定化されたＡＣＰは、歯石の表面にも結合して、さらなる付着を防ぎ得る。従って、安定化されたＡＣＰおよび安定化された無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）は、口腔疾患およびその他の医学的状態の予防および処置において大きな役割を果たし得る。
【０００３】
カゼインはミルク中にミセル形態で存在し、これらのミセルは、直径約１００ｎｍの概ね球状をした粒子であり、水、塩、乳糖およびホエイタンパク質の連続相中に分散していると考えられている。カゼインミセルは、骨および歯を形成するカルシウムおよびリン酸イオンの生物学的に利用可能な供給源を提供する、リン酸カルシウムの担体の役割を果たす。カルシウムおよびリン酸イオンを可溶性および生物学的利用性の状態に維持するカゼインミセルの能力は、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）として知られる、カゼインのトリプシン処理された多リン酸化ペプチドによって保持されている。特許文献１には、アルカリ性ｐＨで生成されたカゼインホスホペプチド−無定形リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）およびＣＰＰによって安定化された無定形フッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）が記載されている。このような複合体は、動物およびヒトのインサイチュ齲蝕モデルにおけるエナメル質脱灰を予防し、エナメル質の表層下病変の再石灰化を促進することが示されている。
【０００４】
これらの複合体を形成するのに活性であるリンペプチドは、それらが完全長カゼインタンパク質の一部であるか否かに関係なく、この形成を行う。トリプシン消化により形成される活性カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）は、特許文献２に明記されており、これには、以下のようなペプチドＢｏｓ αｓ１−カゼインＸ−５Ｐ（ｆ５９−７９）［１］、Ｂｏｓ β―カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２５）［２］、Ｂｏｓ αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ４６−７０）［３］、およびＢｏｓ αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２１）［４］が含まれる：
【０００５】
【化１】
超増量無定形リン酸カルシウム複合体の安定化を助ける活性を有するその他のカゼインホスホペプチドは、配列Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｘａａ−Ｇｌｕ／Ｓｅｒ（Ｐ）（この場合Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリル残基を表す）を含むペプチドである。従って、超増量無定形リン酸カルシウムおよび無定形フッ化リン酸カルシウム複合体を安定化させるのに活性であるリンペプチド／リンタンパク質は、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（この場合、Ａはホスホアミノ酸、好ましくはホスホセリンであり；Ｂはホスホアミノ酸を含む任意のアミノ酸であり；Ｃはグルタメート、アスパルテートまたはホスホアミノ酸のうちの１つである）を含むものである。
【０００６】
特許文献１に記載の通りカゼインホスホペプチドによって安定化された無定形リン酸カルシウムは、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．（オーストラリア ビクトリア）から供給されるＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして販売される製品にて市販されている。しかし、カゼインホスホペプチドによって安定化された無定形リン酸カルシウムのさらに効果的な形態を処置に利用することが望ましいと思われる。さらに、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭを蒸留水のような担体に溶解させると、平衡を形成するためにイオンが周囲の水へ漏出することが避けられなくなる。これは、用途によっては、処置等のためにこの組成物により送達可能なリン酸カルシウムを低減することになる。
【特許文献１】国際公開第９８／４０４０６号
【特許文献２】米国特許第５，０１５，６２８号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、複合体。
（項目２）
前記ＰＰがカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である、項目１に記載の複合体。
（項目３）
前記カルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜５０モルの範囲内にある、項目１に記載の複合体。
（項目４）
項目１に記載の複合体を含む、口腔ケア配合物。
（項目５）
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であってＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を生成するための方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する、方法。
（項目６）
ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物。
（項目７）
前記リン酸カルシウムがＣａＨＰＯ４の形態にある、項目６に記載の配合物。
（項目８）
項目７に記載の配合物を含む、口腔ケア配合物。
（項目９）
歯の表面または表層下を再石灰化するための方法であって、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を該歯の表面または表層下に適用する工程を包含し、該複合体がＰＰ１モル当たりカルシウム約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、方法。
（項目１０）
ヒトを含む動物における齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石の１つ以上を処置および／または予防する方法であって、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を歯の表面または表層下に適用する工程を包含し、該複合体がＰＰ１モル当たりカルシウム約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、方法。
（発明の要旨）
一態様において、本発明は「超増量」リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を提供する。この複合体は、任意のｐＨ（例えば、３〜１０）で形成され得る。好ましくは、リンペプチドは、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（この場合、Ａはホスホアミノ酸、好ましくはホスホセリンであり；Ｂはホスホアミノ酸を含む任意のアミノ酸であり；Ｃはグルタメート、アスパルテートまたはホスホアミノ酸である）を含む。ホスホアミノ酸はホスホセリンであり得る。ＰＰは、カルシウムイオンおよびリン酸イオンが超増量されている。カルシウムイオンは、ＰＰ１モル当たりＣａが３０〜１，０００モルの範囲内にあり得るか、またはＰＰ１モル当たりＣａが３０〜１００モルもしくは３０〜５０の範囲内にあり得る。別の実施形態において、ＰＰ１モル当たりのＣａのモル数は、少なくとも２５、３０、３５、４０、４５または５０である。リン酸イオンは一般的に、カルシウムイオンに対する比率（Ｃａ：Ｐ）が１．５〜１．８：１にて存在する。１つの実施形態において、この比は約１．５８：１である。
【０００８】
さらなる態様において、本発明は、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する複合体を提供する。
【０００９】
好ましい実施形態において、カルシウムイオン含量は、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０〜１００モルの範囲内にある。より好ましくは、カルシウムイオン含量は、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０〜約５０モルの範囲内にある。
【００１０】
本発明はさらに、上述のＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰの複合体の水性配合物に関する。
【００１１】
本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語（またはその文法上の変形）は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語と同等であり、交換可能に使用され得、その他の要素または特徴の存在を排除するものと見なしてはならない。
【００１２】
驚いたことに、ＷＯ９８／４０４０６号に記載の方法を使用して生成されるようなカゼインホスホペプチド−無定形リン酸カルシウム（ＣＰＰ−ＡＣＰ）の、エナメル質表層下病変（齲歯の早期段階）を再石灰化（修復）する活性は、可能であるとされる量を上回るカルシウムおよびリン酸イオンをカゼインホスホペプチドに超増量することによって、実質的に増大させることができる。このカルシウムは、ＣａＨＰＯ４、または乳酸カルシウムおよびリン酸水素ナトリウム、またはカルシウム塩またはリン酸塩のその他の好適な形態であってもよい。
【００１３】
本発明の複合体のＰＰは、カゼインリン酸ペプチド（ＣＰＰ）であり得、これはインタクトなカゼインまたはカゼインの断片であり得る。形成されたＣＰＰ−無定形リン酸カルシウム複合体は、コロイド複合体であり得、この場合、コア粒子が凝集して、水に懸濁した大径の（例えば１００ｎｍ）コロイド粒子を形成する。
【００１４】
ＰＰは何れの供給源に由来するものであってもよく；完全長カゼインポリペプチドを含めたより大きなポリペプチド中に存在してもよく、あるいは、カゼインまたはホスビチンのようなその他のホスホアミノ酸リッチタンパク質のトリプシン消化または化学的消化（例えばアルカリ性加水分解）によって、あるいは化学合成または組み換え合成によって単離されてもよいが、但し、これは、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−を含む。このコア配列に隣接する配列は、任意の配列であり得る。しかし、αｓ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αｓ２（４６−７０）［３］、およびαｓ２（１−２１）［４］中の隣接配列が好ましい。これらの隣接配列は、１つ以上の残基の欠失、付加または保存的置換によって改変され得る。このアミノ酸組成物および隣接領域の配列は、重要ではないものの、好ましい隣接領域は、モチーフの構造的作用に寄与してペプチドのコンホメーションを維持し、全てのホスホリル基およびカルボキシル基がカルシウムイオンと相互作用できるようにする。
【００１５】
好ましい実施形態において、ＰＰは、αｓ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αｓ２（４６−７０）［３］、およびαｓ２（１−２１）［４］からなる群から選択される。
【００１６】
好ましい実施形態において、ＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ中の少なくとも４０重量％のＰＰは、上記のペプチド［１］〜［４］の１つ以上であるかそれらを含むタンパク質またはタンパク質断片の混合物である。好ましくは、ＰＰによって安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ中ＰＰの少なくとも６０重量％、より好ましくは少なくとも７０重量％が、ペプチド［１］〜［４］であるかそれらを含むタンパク質またはタンパク質断片の混合物である。
【００１７】
リンペプチドは、超増量カルシウム、リン酸塩（およびフッ化物）を安定化させて準安定溶液を生成すると考えられている。この結合は、ＡＣＰまたはＡＣＦＰがリン酸カルシウムの核形成および沈殿を開始するサイズに成長するのを阻害すると考えられている。このように、カルシウム、およびフッ化物イオンのようなその他のイオンは、例えば歯の表面に局在して、脱灰を予防し、齲蝕の形成を予防または低減することができる。
【００１８】
そのため、さらなる態様において、本発明は、上述のような安定した超増量ＡＣＦＰ複合体または安定した超増量ＡＣＰ複合体であって、標的部位において、カルシウム、フッ化物およびリン酸塩イオンを含むがこれらに限定されないイオンを共局在させる送達ビヒクルとして作用する複合体を提供する。好ましい実施形態において、複合体は、優れた齲食予防作用を生じる徐放性無定形剤形中にある。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は又、上述のようなＡＣＰまたはＡＣＦＰの安定した超増量複合体を生成する方法であって、
（ｉ）カルシウム、無機リン酸塩およびフッ化物（場合による）を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰを含む溶液と（ｉ）を混合する工程
を包含する方法も提供する。
【００２０】
好ましい実施形態において、ＰＰは、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である。
【００２１】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰのＡＣＰ／ＡＣＦＰとしてのカルシウム（およびリン酸塩）イオン含量を増大させる方法であって、
（ｉ）カルシウム、無機リン酸塩およびフッ化物（場合による）からなる溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰを含む溶液と（ｉ）を混合する工程；
あるいは
（ｉ）カルシウム（例えば、ＣａＨＰＯ４、乳酸カルシウム等）を含む粉末を得る工程；ならびに
（ｉｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰ粉末と（ｉ）を混合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２２】
ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして知られる商品中のＰＰ−ＡＣＰ複合体のリン酸カルシウム充填量を増大させると、特定の用途に好適であるよりも粘性の高い調剤が生成され得ることが、既に見出されている。従って、用途によっては、ＰＰ−ＡＣＰをリン酸カルシウム（特にＣａＨＰＯ４）と乾燥混合させた後に、配合物、例えば練り歯磨きまたはチューインガムのような口腔ケア配合物に混入するのが有用である。
【００２３】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；
（ｉｉ）溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２４】
本発明のさらなる態様においては、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物が提供される。好ましくは、リン酸カルシウムはＣａＨＰＯ４である。好ましくは、リン酸カルシウム（例えばＣａＨＰＯ４）は、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体と乾燥混合される。好ましい実施形態において、ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体とリン酸カルシウムとの比率は、約１：１〜５０、より好ましくは約１：１〜２５、より好ましくは約１：５〜１５である。一実施形態において、ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体とリン酸カルシウムとの比率は、約１：１０である。
【００２５】
本発明のさらなる態様においては、上述のように、ＰＰによって安定化されたＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰの複合体を少なくとも等しい重量のリン酸カルシウムと一緒にした配合物を含む口腔ケア組成物が提供される。
【００２６】
本発明のさらなる態様においては、口腔内に使用する時にＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を含む口腔ケア配合物を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む粉末を得る工程；
（ｉｉ）有効量のリン酸カルシウムと乾燥混合させる工程；ならびに
（ｉｉｉ）乾燥混合されたＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰおよびリン酸カルシウム混合物を口腔ケア配合物に配合する工程
を包含する方法が提供される。
【００２７】
好ましくは、乾燥混合させるリン酸カルシウムの形態は、ＣａＨＰＯ４である。
【００２８】
好ましくは、口腔ケア配合物は、練り歯磨き、歯科用クリーム；チューインガム；ロゼンジ；含嗽薬および歯磨き粉からなる群から選択される。何らかの理論または作用様式に束縛されるわけではないが、生理学的に許容される担体への複合体の混入によって本来の希釈が行われ、さらに歯科用途における唾液中にて希釈が行われるにもかかわらず、「超増量」リンペプチドは、十分に高い濃度のカルシウムおよびリン酸イオン、特に場合によりＡＣＰおよびＡＣＦＰを送達できると考えられている。そのため、この配合物はカルシウムおよびリン酸イオンのイオン種形成を維持する。本発明は、送達部位における増量されたＡＣＰ−ＡＣＦＰを対象とする。これは、ＡＣＰ／ＡＣＦＰ含量が高い出発原料、および／または製造と使用の間におけるＡＣＰ／ＡＣＦＰの喪失または漏出の低減によって達成することができる。
【００２９】
これらの超増量複合体は又、食事不耐性、アレルギー、または宗教的または文化的要因のような何らかの理由によって、食事におけるカルシウム必要量を供給するのに充分な量の乳製品を消費できない、または消費したがらない対象の栄養補助食品としても有用である。本発明の超増量複合体は、骨の成長の促進を必要とする対象、例えば、骨折修復、関節置換、骨移植または頭蓋顔面手術を受ける対象のカルシウムアジュバントとして有用である。
【００３０】
本発明のさらなる態様においては、歯を再石灰化する方法であって、上述のような超増量複合体を望ましくは薬学的に許容される担体にて歯に適用することを含む方法が提供される。この複合体は、リン酸カルシウム、フッ化カルシウムまたはその両方を含み得る。この方法は、好ましくは処置を必要とする対象に適用する。
【００３１】
さらなる態様において、本発明は、歯の表面または表層下を再石灰化する方法であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を、歯の表面または表層下に適用する工程を含む方法を提供する。
【００３２】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する医薬品の製造における、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウム複合体の使用が提供される。
【００３３】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化するための、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００３４】
好ましくは、歯の表面または表層下は、歯のエナメル質であり、より好ましくは歯のエナメル質における表面または表層下の病巣である。
【００３５】
安定したＡＣＦＰまたはＡＣＰ超増量複合体は、練り歯磨き、含嗽薬または口内用配合物のような口腔ケア組成物に混入される場合もあれば、これらの組成物中で形成する場合もある。これは、例えば、齲蝕または齲歯の予防および／または処置を助け得る。ＡＣＦＰまたはＡＣＰ超増量複合体（単独でＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含むか、あるいはリン酸カルシウム（例えばＣａＨＰＯ４）と共にＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含み得る）は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２５％、より好ましくは０．５〜２０％、および場合により０．５〜１０％を含み得る。口腔組成物の場合、ＣＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの投与量は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは０．５％〜２０％または０．５％〜１０％であることが好ましい。特に好ましい実施形態において、本発明の口腔組成物は、約１〜５％の超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む。上記の薬剤を含む本発明の口腔組成物は、例えば、練り歯磨き、歯磨き粉および液体歯磨き剤等の歯磨き剤、含嗽薬、トローチ、チューインガム、歯科用ペースト、歯肉マッサージクリーム、嗽錠剤、乳製品およびその他の食品のような、口内に適用可能な種々の形態で調製および使用され得る。本発明による口腔組成物は、それぞれの口腔組成物の種類および形態に応じて、追加の周知の成分をさらに含み得る。
【００３６】
本発明の特定の好ましい形態において、口腔組成物は、含嗽薬またはリンスのように、実質的に液体の性質であり得る。このような調剤において、ビヒクルは一般的に、望ましくは以下に記載するような湿潤剤を含む、水とアルコールの混合物である。一般的に、水とアルコールの重量比は、約１：１〜約２０：１の範囲内にある。この種の調剤中における水とアルコールの混合物の合計量は、一般的に調剤の約７０〜約９９．９重量％の範囲内にある。アルコールは一般的にエタノールまたはイソプロパノールであるが、エタノールが好ましい。
【００３７】
本発明のこのような液体およびその他の調剤のｐＨは、一般的に約３〜約１０の範囲内にあり、典型的には約５．０〜７．０の範囲内にある。このｐＨは、酸（例えば、クエン酸または安息香酸）または塩基（例えば水酸化ナトリウム）で調節してもよければ、あるいは（クエン酸ナトリウム、安息香酸塩、炭酸塩または重炭酸塩、水素化リン酸二ナトリウム、二水素リン酸ナトリウム等で）緩衝化してもよい。
【００３８】
一実施形態において、本発明の口腔組成物は、約５．５のｐＨを有する。
【００３９】
従って、本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する組成物であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を、薬学的に許容される担体および／またはアジュバントと共に含む組成物が提供される。
【００４０】
本発明のさらなる態様においては、歯の表面または表層下を再石灰化する組成物であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体と共に、薬学的に許容される担体および／またはアジュバントとにより本質的に構成される組成物が提供される。
【００４１】
別の実施形態において、本発明による口腔組成物は、カルシウムキレート剤、例えばピロリン酸塩、ポリホスフェート、クエン酸塩、ＥＤＴＡ等を含む。
【００４２】
本発明の他の望ましい形態において、口腔組成物は、歯磨き粉、歯科用錠剤、または練り歯磨き（歯科用クリーム）またはゲル状歯磨きのように、実質的に固体またはペースト状の性質であり得る。このような固体またはペースト状の口腔調剤は、一般的に歯科学的に許容される研磨剤を含む。研磨剤の例としては、水不溶性メタリン酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム二水和物、無水リン酸二カルシウム、ピロリン酸カルシウム、オルトリン酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、炭酸カルシウム、水和アルミナ、焼成アルミナ、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸ジルコン、シリカ、ベントナイト、およびそれらの混合物である。その他の好適な研磨剤としては、メラミン−、フェノール−および尿素−ホルムアルデヒド、および架橋ポリエポキシドおよびポリエステルのような粒状熱硬化性樹脂が挙げられる。好ましい研磨剤としては、約５ミクロン以下の粒子サイズ、約１．１ミクロン以下の平均粒子サイズ、および約５０，０００ｃｍ２／ｇ以下の表面積を有する結晶性シリカ、シリカゲルまたはコロイドシリカ、ならびに複合無定形アルカリ金属アルミノケイ酸塩が挙げられる。
【００４３】
見た目に透明なゲルを使用する場合には、Ｓｙｌｏｉｄ ７２およびＳｙｌｏｉｄ ７４のような商標名ＳＹＬＯＩＤ、あるいはＳａｎｔｏｃｅｌ １００のような商標名ＳＡＮＴＯＣＥＬで販売されているようなコロイドシリカの研磨剤、即ち、アルカリ金属アルミノケイ酸塩複合体が特に有用である。なぜなら、これらの複合体の屈折率が、歯磨き粉に共通して使用されるゲル化剤−液体（水および／または保湿剤を含む）系の屈折率に近いためである。
【００４４】
いわゆる「水不溶性」研磨剤の多くは、陰イオンの性質をしており、少量の溶解性物質も含む。そのため、不溶性メタリン酸ナトリウムは、例えばＴｈｏｒｐｅ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ９，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ｐｐ．５１０−５１１で例示されるような、任意の好適な方法で形成され得る。Ｍａｄｒｅｌｌ’ｓ ｓａｌｔおよびＫｕｒｒｏｌ’ｓ ｓａｌｔとして知られる不溶性メタリン酸ナトリウムの形態が、好適な物質のさらなる例である。これらのメタリン酸塩は、僅かな水溶解性しか示さないため、通常は不溶性メタリン酸塩（ＩＭＰ）と呼ばれる。これらの中には、不純物として少量の可溶性リン酸塩物質が、通常の場合、数重量％（例えば４重量％以下）存在する。不溶性メタリン酸塩の場合に可溶性トリメタリン酸ナトリウムを含むと考えられている可溶性リン酸塩物質の量は、所望の場合水で洗浄することによって、低減または除去され得る。不溶性アルカリ金属メタリン酸塩は一般的に、本物質の１％以下で３７ミクロンを超えるような粒子サイズの粉末形態で使用される。
【００４５】
研磨剤は一般的に、約１０重量％〜約９９重量％の濃度で固体またはペースト状の組成物中に存在する。好ましくは、研磨剤は、練り歯磨き中に約１０％〜約７５％の量で存在し、歯磨き粉中に約７５％〜約９９％の量で存在する。練り歯磨きにおいて、研磨剤が珪素系の性質である場合には、一般的に約１０〜３０重量％の量で存在する。その他の研磨剤は、一般的に約３０〜７５重量％の量で存在する。
【００４６】
練り歯磨きにおいて、液状ビヒクルは、一般的に調剤の約１０重量％〜約８０重量％の量の水および保湿剤を含み得る。グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールおよびポリプロピレングリコールは、好適な保湿剤／担体の例である。水、グリセリンおよびソルビトールの液体混合物も好都合である。屈折率が重要となる透明なゲルにおいて、約２．５〜３０重量／重量％の水、０〜約７０重量／重量％のグリセリン、および約２０〜８０重量／重量％のソルビトールを使用するのが好ましい。
【００４７】
練り歯磨き、クリームおよびゲルは、一般的に約０．１〜約１０、好ましくは約０．５〜約５重量／重量％の割合で、天然若しくは合成増粘剤またはゲル化剤を含む。好適な増粘剤は、合成ヘクトライト、即ち、例えばＬａｐｏｒｔｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄにより販売されているＬａｐｏｎｉｔｅ（例えばＣＰ、ＳＰ２００２、Ｄ）として入手可能な合成コロイドマグネシウムアルカリ金属ケイ酸塩複合体クレイである。Ｌａｐｏｎｉｔｅ Ｄは、重量で約５８．００％のＳｉＯ２、約２５．４０％のＭｇＯ、約３．０５％のＮａ２０、約０．９８％のＬｉ２Ｏ、ならびに幾らかの水および微量の金属である。その真比重は２．５３であり、見掛け嵩密度は湿度８％で１．０ｇ／ｍｌである。
【００４８】
その他の好適な増粘剤としては、トチャカ、イオタカラギナン、トラガカントガム、澱粉、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース（例えば、Ｎａｔｒｏｓｏｌとして入手可能）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ならびに微細に粉砕されたＳｙｌｏｉｄ（例えば２４４）のようなコロイドシリカが挙げられる。プロピレングリコール、ジプロピレングリコールおよびヘキシレングリコールのような保湿ポリオール；メチルセロソルブおよびエチルセロソルブのようなセロソルブ；オリーブオイル、ヒマシ油およびワセリンのような、直鎖に少なくとも約１２個の炭素を有する植物性油およびワックス；ならびに酢酸アミル、酢酸エチルおよび安息香酸ベンジルのようなエステルといった可溶化剤が含まれる場合もある。
【００４９】
口腔調剤は、従来通り、好適なラベルを貼ったパッケージに入れて販売されるか、あるいは流通されるべきであることが理解されるであろう。そのため、マウスリンスのジャーは、本質的にマウスリンスまたは含嗽薬であると記載し、使用上の注意事項を記載したラベルを有し；練り歯磨き、クリームまたはゲルは通常、本質的に練り歯磨き、ゲルまたは歯科用クリームであると記載したラベルを有する押出しチューブ（一般的にはアルミニウム製、鉛張りまたはプラスチック張り）、あるいは含量を計量するその他のスクィーズ式、ポンプ式または加圧式ディスペンサーに入れられる。
【００５０】
本発明の組成物では、有機界面活性剤が使用されて、予防作用を増大させ、口腔全体へ活性剤を十分且つ完全に分散させるのを助け、本発明の組成物を化粧品としてより許容されるものにし得る。有機界面活性剤は、好ましくは陰イオン性、非イオン性または両性の性質をしており、好ましくは活性剤と相互作用しない。界面活性剤としては、組成物に洗浄および発泡特性をもたらす洗浄剤を使用するのが好ましい。陰イオン性表面剤の好適な例には、硬化ココナッツオイル脂肪酸の一硫化モノグリセリドのナトリウム塩のような高級脂肪酸一硫酸モノグリセリド；ラウリル硫酸ナトリウムのような高級硫化アルキル、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホン酸塩；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホン酸塩；高級アルキルスルホ−アセテート；１，２−ジヒドロキシプロパンスルホネートの高級脂肪酸エステル；および低級脂肪酸アミノカルボキシ酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミド（例えば、脂肪酸、アルキルまたはアシル基に１２個〜１６個の炭素を有するアミド）等がある。最後に述べたアミドの例には、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ならびに石鹸または類似の高級脂肪酸物質を実質的に含まないＮ−ラウロイル、Ｎ−ミリストイルまたはＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム塩、カリウム塩およびエタノールアミン塩がある。本発明の口腔組成物におけるこれらのサルコナイト化合物の使用は、特に好都合である。なぜなら、これらの物質は、酸溶液における歯のエナメル質の溶解度の幾分低下させることに加えて、炭水化物の分解によって口腔内における酸形成を阻止する効果を長期間示すためである。使用するのに好適な水溶性非イオン性界面活性剤の例には、長い疎水性鎖（例えば約１２〜２０個の炭素からなる脂肪族鎖）を有する、エチレンオキシドと種々の反応性水素含有化合物との縮合生成物があり、これらの縮合生成物（「エトキサマー」）は、親水性ポリオキシエチレン部分、例えば、ポリ（エチレンオキシド）と脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪アミド、多価アルコール（例えば、ソルビタンモノステアレート）およびポリプロピレンオキシド（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ物質）の縮合生成物を含む。
【００５１】
界面活性剤は、一般的に約０．１〜５重量％の量で存在する。界面活性剤は、本発明の活性剤の溶解を助けることによって、必要とされる溶解保湿剤の量を減らし得ることは、注目すべき点である。
【００５２】
本発明の口腔調剤には、漂白剤、保存剤、シリコン、クロロフィル化合物、および／または尿素、リン酸二アンモニウムのようなアンモニア材料、ならびにそれらの混合物といったその他種々の物質が混入され得る。これらのアジュバントは、存在する場合、所望の特性および特徴に実質的に悪影響を与えない量で調剤に混入される。
【００５３】
着香剤または甘味剤は、何れの好適なものも使用され得る。好適な着香成分の例には、着香オイル（例えば、スペアミント、ペパーミント、ウインターグリーン、サッサフラス、クローブ、セージ、ユーカリ、マヨラナ、シナモン、レモンおよびオレンジのオイル、ならびにサリチル酸メチルがある。好適な甘味剤には、蔗糖、乳糖、マルトース、ソルビトール、キシリトール、サイクラミン酸ナトリウム、ペリラルチン、ＡＭＰ（アスパルチルフェニルアラニン、メチルエステル）、サッカリン等がある。好適には、着香剤および甘味剤は、それぞれまたは一緒になって、調剤の約０．１％〜５％以上を含み得る。
【００５４】
本発明は又、上述のような組成物の使用も提供する。本発明の好ましい実施において、本発明の組成物を含む含嗽薬または歯磨き粉のような、本発明による口腔組成物は、定期的に（例えば、毎日若しくは２日毎若しくは３日毎に、または好ましくは１日１〜３回）、好ましくは約３．０〜約１０．０、より好ましくは５．０〜約９．０のｐＨで、少なくとも２週間〜８週間以上または一生にわたり、歯肉および歯に適用される。一実施形態において、口腔組成物のｐＨは、約５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０である。
【００５５】
本発明の組成物は又、例えば、温かいガムベースに撹拌するか、またはガムベースの表面を被覆することによって、ロゼンジに、またはチューインガムに、またはその他の製品に混入してもよい。ガムベースの例は、望ましくは従来の可塑剤または軟化剤、砂糖、あるいはグルコース、ソルビトール等のその他の甘味剤と一緒にした、ジェルトン、ゴムラテックス、ビニライト樹脂等である。
【００５６】
別の実施形態において、本発明の複合体は、好ましくは０．１〜１００重量／重量％、より好ましくは１〜５０重量／重量％、最も好ましくは１〜１０％、および特に２重量／重量％の食料品を含む栄養補助食品を形成するように配合される。本複合体は又、食品に混入される場合もある。
【００５７】
さらなる態様において、本発明は、上述のような超増量ＡＣＦＰおよび／またはＡＣＰ複合体の何れかを、薬学的に許容される担体と一緒に含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。このような組成物は、歯科用抗齲食性組成物、治療用組成物、および栄養補助食品からなる群から選択され得る。歯科用組成物または治療用組成物は、ゲル、液体、固体、粉末、クリームまたはロゼンジの形態であり得る。治療用組成物は又、錠剤またはカプセルの形態である場合もある。一実施形態において、超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰ複合体は、実質的にこのような組成物の再石灰化活性化合物にすぎない。さらなる実施形態において、超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰは、口腔ケア組成物である組成物が口腔内の唾液と接触した後に形成する。
【００５８】
さらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏、および歯石を処置または予防する方法であって、処置を必要とする対象の歯または歯肉に本発明の複合体または組成物を投与する工程を含む方法が提供される。複合体の局所投与が好ましい。
【００５９】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による超増量ＡＣＦＰおよび／またはＡＣＰ複合体を添加した歯科用修復材を含む、歯科修復用組成物が提供される。歯科用修復材の基部は、グラスアイオノマーセメント、複合材料、またはその他何れかの適合する修復材であってよい。歯科用修復材に含まれる超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体の量は、０．０１〜８０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは１〜５重量％であるのが好ましい。上述の薬剤を含む本発明の歯科用修復材は、歯科用途での実施に適用可能な種々の形態で調製および使用され得る。本発明による歯科用修復材はさらに、それぞれの歯科用修復材の種類および形態に応じて、その他のイオン（例えば、抗菌イオンＺｎ２＋、Ａｇ＋等）またはその他の追加の成分を含み得る。超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体のｐＨは、２〜１０、より好ましくは５〜９、さらに好ましくは５〜７であるのが好ましい。超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む歯科用修復材料のｐＨは、２〜１０、より好ましくは５〜９、さらに好ましくは５〜７であるのが好ましい。
【００６０】
本発明は又、修復組成物の製造方法も対象とする。好ましくは、本方法は、上述のような超増量ＡＣＰおよび／またはＡＣＦＰ複合体を基部の歯科用修復材に添加することを含む。本発明は又、上述のような修復組成物を齲蝕の処置および／または予防に使用することにも関する。
【００６１】
本発明のさらなる態様においては、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、および（ｂ）ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体を含むキットも提供される。本キットは場合により、歯科用修復組成物の調製に使用するための説明書を含み得る。
【００６２】
好ましい実施形態において、歯科用修復材は、多孔性の歯科用セメントである。さらに好ましい実施形態において、歯科用修復材料は、グラスアイオノマーセメントである。何らかの理論または作用様式に拘束されるわけではないが、グラスアイオノマーセメントのような特定の種類の多孔性歯科用セメントにおける微孔は、本発明の複合体を歯表面へ通過させて、歯科用物質の再石灰化を促進する。
【００６３】
本発明は又、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、および（ｂ）超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体および／または超増量ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含むキットにも関する。
【００６４】
本発明は又、歯科用修復組成物の調製に使用するキットであって、（ａ）歯科用修復材、（ｂ）カゼインホスホペプチド、（ｃ）カルシウムイオン、および（ｄ）リン酸イオン、ならびに場合によりフッ化物イオンを含むキットにも関する。本キットは場合により、歯科用修復組成物の調製に使用するための説明書を含み得る。
【００６５】
本発明は又、ヒトを含む動物における齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置および／または予防する方法であって、本発明による組成物あるいは本発明により製造される組成物を用意する工程、処置および／または予防を必要とする動物の歯に適用する工程を含む方法も提供する。
【００６６】
さらなる態様において、本発明は、身体、特に骨のカルシウムの喪失、カルシウムの欠乏、カルシウム吸収不良等に関連する１つ以上の状態を処置する方法に関する。このような状態の例としては、骨粗しょう症および骨軟化症が挙げられるが、これらに限定されない。一般的には、カルシウムの生物学的利用性を増大させることによって改善することができる状態であれば何れも考慮される。
【００６７】
本発明のさらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置または予防する組成物の製造における、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルよりも高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００６８】
本発明のさらなる態様においては、齲蝕または齲歯、歯牙浸食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石を処置または予防するための、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが約３０モルより高いカルシウムイオン含量を有する、リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムおよび／または無定形フッ化リン酸カルシウムの複合体の使用が提供される。
【００６９】
本明細書では特にヒトにおける用途を言及しているが、本発明は獣医学的の目的にも有用であることが明確に理解されるであろう。そのため、全ての態様において、本発明は、牛、羊、馬および家禽のような家畜；猫および犬のような愛玩動物；ならびに動物園の動物に対して有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】カルシウムおよびリン酸イオンを超増量したＣＰＰによる、インビトロにおけるエナメル質表層病変の再石灰化の増大。
【図２】リン酸カルシウムを超増量したＣＰＰを含有する練り歯磨きによる、インビトロにおけるエナメル質表層病変の再石灰化の増大。
【実施例】
【００７１】
次に、以下の非限定的な実施例を参照しながら、本発明を説明する。
（実施例１）
ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）は、オーストラリア ビクトリアのＲｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．から販売されたものである。この製品（＃８４１１１７）は、１４．３重量％のカルシウム、２２．３重量％のリン酸塩、および４７重量％のカゼインホスホペプチドを含んでいた。この製品を０．５％溶解し、ＨＣｌを添加してｐＨ５．５に調節した。次いで、２．５ＭのＮａＯＨを添加してｐＨを５．５に維持しながら、３．２５ＭのＣａＣｌ２および２ＭのＮａＨ２ＰＯ４を滴下することにより、カルシウムおよびリン酸イオンを添加した。この溶液が半透明になるまで、カルシウムおよびリン酸イオンの滴下を続けた。添加したカルシウムとリン酸塩の濃度を記録した。この溶液は又、カルシウムおよびリン酸イオンを０．５％のＣＰＰ−ＡＣＰ溶液に滴下し、さらにリン酸カルシウムを添加してｐＨを５．５に低下させることによっても形成され得る。
【００７２】
【表１】
これらの結果は、ＣＰＰ−ＡＣＰにカルシウムおよびリン酸イオンを超増量することにより、熱力学的に安定した複合体を準安定溶液中に生成できることを示している。
【００７３】
（実施例２）
別の実施例においては、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）粉末をＣａＨＰＯ４粉末と、ＣＰＰ−ＡＣＰ：ＣａＨＰＯ４＝１：１０の重量比で乾燥混合させた。次いで、この粉末を無糖のガムおよび練り歯磨き配合物に１〜５重量／重量％で添加した。
【００７４】
（実施例３）
通常ＣＰＰ−ＡＣＰおよび超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）によるインビトロにおけるエナメル質表層下病変の再石灰化の比較
抜歯したヒト第３大臼歯の研磨したエナメル質表層を、鋸でひいて平板（８×４ｍｍ２）に切断し、酸耐性マニキュア液を被覆して、１ｍｍの間隔をおいた咬合側半分および歯肉側半分の近遠心窓（１×７ｍｍ２）を形成した（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）。これらの窓の中に表層下エナメル質病変を、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）が改良したＷｈｉｔｅのＣａｒｂｏｐｏｌ法（Ｗｈｉｔｅ Ｄ．Ｊ． （１９８７） Ｃａｒｉｅｓ Ｒｅｓ ２１， ２２８−２４２）を使用して作り出した。エナメル質の平板を鋸で半分に切断し、４×４ｍｍ２ブロックを形成した。一方のブロックの歯肉側半分の病変と他方のブロックの咬合側半分病変にマニキュアで封止し、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ． （１９９７） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ７６， １５８７−１５９５）に記載の通りに脱灰対照を作り出した。
【００７５】
これらのエナメル質側半分の病変を、３７℃にて１０日間混合せずに、２種類の再石灰化溶液に曝した。再石灰化溶液は、塩酸でｐＨ５．５に調節した０．５重量／容量％のＣＰＰ−ＡＣＰ、ならびに実施例１で調製した超増量ＣＰＰ−ＡＣＰであった。
【００７６】
再石灰化後、両ブロックのそれぞれの対をエタノール中で脱水し、メタクリン酸メチル樹脂（Ｐａｌａｄｕｒ、Ｋｕｌｚｅｒ［ドイツ］）に埋め込んだ。これらの２００〜３００μｍの切片を、病変の表面に対して垂直に切断し、ラップ盤で８０±５μｍに加工し、上述のように厚さ１０×１４μｍのアルミニウムステップウェッジと並べて放射線透過写真を撮影した。
【００７７】
病変の放射線透過画像を、Ｄｉｌｕｘ ２２顕微鏡（Ｅｒｎｓｔ Ｌｅｉｚ Ｗｅｔｚｌａｒ［ドイツ］）の透過光によって造影した。これらの画像をビデオカメラ（Ｓｏｎｙ ＤＸＣ ９３０Ｐ）で撮影し、画像化ソフトウェア（Ｏｐｔｉｍａｓ ６．２）の制御下でデジタル化した（Ｓｃｉｏｎ Ｉｍａｇｉｎｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｏｌｏｕｒ Ｇｒａｂｂｅｒ ７）。病変、対照およびアルミニウムステップウェッジの画像を、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通りスキャンした。エナメル質切片の厚さを測定し、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通り、Ａｎｇｍａｒ（Ａｎｇｍａｒ Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （１９６３） Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｒｅｓ ８， １２−２３）の等式を使用して、容量％のミネラルデータを測定した。再石灰化の百分率（％Ｒ）も、Ｓｈｅｎ等（Ｓｈｅｎ， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｄｅｎｔ． Ｒｅｓ． ８０， ２０６６−２０７０）による既述の通り計算した。
【００７８】
エナメル質表層下病変の再石灰化を図１に示す。
【００７９】
図１の結果は、超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）溶液が、通常のＣＰＰ−ＡＣＰ溶液よりも、インビトロにおけるエナメル質表層下病変の再石灰化に優れていることを示している。
【００８０】
（実施例４）
超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む練り歯磨き配合物がエナメル質表層下病変を再石灰化する能力を、Ｒｅｉｎｏｌｄｓ等（Ｒｅｉｎｏｌｄｓ Ｅ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ． Ｄｅｎｔ Ｒｅｓ． ８２， ２０６−２１１）のプロトコールを使用し、インサイチュ無作為クロスオーバー二重盲検臨床試験にて調査した。１０人の対象が、実施例３に記載の通り調製した表層下の脱灰病変を含む６つのヒトエナメル質の半分の平板片を使用した取り外し可能な口蓋装置を装着した。各エナメル質のもう半分の平板を加湿容器中に保存し、対照脱灰病変として使用した。この試験では以下の７つの処置を行った：即ち、０．２重量／重量％の通常ＣＰＰ−ＡＣＰを含む練り歯磨きＢ；０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰ／１．０％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＣ（図２および実施例５では「１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ」を呼ばれる）；１．０％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＥ；１，０００ｐｐｍのＦを含む練り歯磨きＦ；１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰおよび１，０００ｐｐｍのＦを含む練り歯磨きＧ；０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰ／１．８％のＣａＨＰＯ４を含む練り歯磨きＤ（図２および実施例５では「２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ」と呼ばれる）；および対照練り歯磨きＡ（プラセボ）。これらの練り歯磨きを１日に４回３０秒ずつ使用した。装置は、練り歯磨きの使用中および該練り歯磨きの使用後１時間、装着した。各処置を１４日間続け、１０人の対象それぞれが、各処置の間に１週間の休みを入れながら、各処置を行った。各処置の完了時にエナメル質平板を取り出し、それらの各々の脱灰対照と対にして、埋込みおよび切片化を行い、マイクロラジオグラフィーならびにコンピュータによるデンシトメトリー画像解析にかけて、再石灰化のレベルを測定した。エナメル質の再石灰化の百分率（％Ｒ）として示した結果は、図２に示されており；１．０％のＣａＨＰＯ４（１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ）または１．８％のＣａＨＰＯ４（２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰ）の何れかを超増量した０．２％のＣＰＰ−ＡＣＰが、同じ濃度の通常の０．２％ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣａＨＰＯ４単独よりも、エナメル質表層下病変を有意に再石灰化することを示している。２．０％のｓＣＰＰ−ＡＣＰのペーストは、１，０００ｐｐｍのフッ化物を含むペーストよりも有意に優れていた。さらに、１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰおよび１，０００ｐｐｍのＦは、１．２％のｓＣＰＰ−ＡＣＰまたは１，０００ｐｐｍのＦ単独よりも、さらなる効果を示した。
【００８１】
（実施例５）
超増量ＣＰＰ−ＡＣＰ（ｓＣＰＰ−ＡＣＰ）を含む練り歯磨き配合物
【００８２】
【表２】
【００８３】
【表３】
【００８４】
【表４】
【００８５】
【表５】
【００８６】
【表６】
【００８７】
【表７】
【００８８】
【表８】
（実施例６）
含嗽薬配合物
【００８９】
【表９】
（実施例７）
ロゼンジ配合物
【００９０】
【表１０】
（実施例８）
チューインガム配合物
【００９１】
【表１１】
本明細書で開示および定義した本発明は、本文または図面に記載した、またはこれらから明らかになる複数の個々の特徴からなる代替の組み合わせ全てに適用されることが理解されるであろう。これらの異なる組み合わせは全て、本発明の種々の態様を構成する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、複合体。
【請求項２】
請求項１に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する工程によって生成される、複合体。
【請求項３】
前記ＰＰがカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である、請求項１または２に記載の複合体。
【請求項４】
前記複合体のカルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜１００モルの範囲内にある、請求項１から３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
前記複合体のカルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜５０モルの範囲内にある、請求項１から３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載の複合体を含む、口腔ケア配合物。
【請求項７】
前記複合体と少なくとも等重量のリン酸カルシウムまたは乳酸カルシウムをさらに含む、請求項６に記載の口腔ケア配合物。
【請求項８】
水性である、請求項６または７に記載の口腔ケア配合物。
【請求項９】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であってＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する複合体を生成するための方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する、方法。
【請求項１０】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を少なくとも等重量のリン酸水素カルシウムまたは乳酸カルシウムと一緒にした配合物。
【請求項１１】
前記ＰＰによって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体：リン酸水素カルシウムの重量比が１：１０である、請求項１０に記載の配合物。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の配合物を含む、口腔ケア配合物。
【請求項１３】
口腔内で使用するときにリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、ＰＰによって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を含む口腔ケア配合物を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む粉末を得る工程；
（ｉｉ）有効量のリン酸水素カルシウムまたは乳酸カルシウムと乾燥混合させる工程；ならびに
（ｉｉｉ）乾燥混合されたＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰおよびリン酸カルシウム混合物を口腔ケア配合物に配合する工程
を包含する方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法により生成される口腔ケア配合物。
【請求項１５】
歯の表面または表層下を再石灰化するための口腔ケア配合物であって、該配合物は請求項１から５のいずれか１項に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を活性成分として含有し、該複合体がＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、口腔ケア配合物。
【請求項１６】
齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石の１つ以上を処置および／または予防するための口腔ケア配合物であって、該配合物は請求項１から５のいずれか１項に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を活性成分として含有し、該複合体がＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、口腔ケア配合物。
【請求項１】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であって、ＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、複合体。
【請求項２】
請求項１に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する工程によって生成される、複合体。
【請求項３】
前記ＰＰがカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である、請求項１または２に記載の複合体。
【請求項４】
前記複合体のカルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜１００モルの範囲内にある、請求項１から３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
前記複合体のカルシウムイオン含量が、ＰＰ１モル当たりカルシウム３０〜５０モルの範囲内にある、請求項１から３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載の複合体を含む、口腔ケア配合物。
【請求項７】
前記複合体と少なくとも等重量のリン酸カルシウムまたは乳酸カルシウムをさらに含む、請求項６に記載の口腔ケア配合物。
【請求項８】
水性である、請求項６または７に記載の口腔ケア配合物。
【請求項９】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体であってＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する複合体を生成するための方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む溶液を得る工程；ならびに
（ｉｉ）該溶液のｐＨを７未満に保持しながらカルシウムイオンおよびリン酸イオンと混合する工程
を包含する、方法。
【請求項１０】
リンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を少なくとも等重量のリン酸水素カルシウムまたは乳酸カルシウムと一緒にした配合物。
【請求項１１】
前記ＰＰによって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体：リン酸水素カルシウムの重量比が１：１０である、請求項１０に記載の配合物。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の配合物を含む、口腔ケア配合物。
【請求項１３】
口腔内で使用するときにリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、ＰＰによって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）および／または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を含む口腔ケア配合物を生成する方法であって、
（ｉ）ＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰの複合体を含む粉末を得る工程；
（ｉｉ）有効量のリン酸水素カルシウムまたは乳酸カルシウムと乾燥混合させる工程；ならびに
（ｉｉｉ）乾燥混合されたＰＰ−ＡＣＰおよび／またはＰＰ−ＡＣＦＰおよびリン酸カルシウム混合物を口腔ケア配合物に配合する工程
を包含する方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法により生成される口腔ケア配合物。
【請求項１５】
歯の表面または表層下を再石灰化するための口腔ケア配合物であって、該配合物は請求項１から５のいずれか１項に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウム（ＡＣＰ）または無定形リン酸フッ化カルシウム（ＡＣＦＰ）の複合体を活性成分として含有し、該複合体がＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、口腔ケア配合物。
【請求項１６】
齲蝕、歯の侵食／腐食、象牙質知覚過敏および歯石の１つ以上を処置および／または予防するための口腔ケア配合物であって、該配合物は請求項１から５のいずれか１項に記載のリンペプチドまたはリンタンパク質（ＰＰ）によって安定化された無定形リン酸カルシウムまたは無定形リン酸フッ化カルシウムの複合体を活性成分として含有し、該複合体がＰＰ１モル当たりのカルシウムが３０モル以上のカルシウムイオン含量を有する、口腔ケア配合物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１３−２８６４４（Ｐ２０１３−２８６４４Ａ）
【公開日】平成２５年２月７日（２０１３．２．７）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２３７６５６（Ｐ２０１２−２３７６５６）
【出願日】平成２４年１０月２９日（２０１２．１０．２９）
【分割の表示】特願２００８−５１７２８０（Ｐ２００８−５１７２８０）の分割
【原出願日】平成１８年６月２３日（２００６．６．２３）
【出願人】（３０４０５４５０７）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月７日（２０１３．２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２３７６５６（Ｐ２０１２−２３７６５６）
【出願日】平成２４年１０月２９日（２０１２．１０．２９）
【分割の表示】特願２００８−５１７２８０（Ｐ２００８−５１７２８０）の分割
【原出願日】平成１８年６月２３日（２００６．６．２３）
【出願人】（３０４０５４５０７）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (4)
【Ｆターム（参考）】
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