オスモチンを含有する化粧品組成物
【課題】抗老化作用を有する化粧品組成物を提供する。
【解決手段】オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。化粧品組成物はさらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤、抗菌剤を含有することができる。化粧品組成物は、化粧品、医薬部外品、医療用品または衛生用品として利用されることができる。
【解決手段】オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。化粧品組成物はさらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤、抗菌剤を含有することができる。化粧品組成物は、化粧品、医薬部外品、医療用品または衛生用品として利用されることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オスモチンまたはオスモチン断片を有効成分とする化粧品組成物に関するものであり、特に、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品に利用されるものである。
【背景技術】
【０００２】
個体老化やこれに伴って発生する各種の疾患などは、分裂するすべての細胞の老化（分裂速度の低下、細胞機能の低下）と深く関わっている。例えば皮膚は、表皮細胞、繊維芽細胞、およびこれら細胞外の皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって水分保持、柔軟性、弾力性が確保され、肌は外観的にも張りと艶があり、みずみずしい状態に維持される。ところが、加齢や紫外線、乾燥、ストレスなどによって特に細胞外マトリックスや繊維芽細胞の機能低下が引き起こされ、その結果、皮膚の柔軟性、保湿機能は低下し、肌は張りや艶を失い、荒れ、しわ、くすみなどの老化症状が発生する。
【０００３】
細胞レベルで老化防止や抑制を目的に細胞賦活化剤、抗老化剤の探索が行われている。例えば動物由来の細胞賦活化剤としては、結合組織加水分解物（特許文献１）、胸腺・脾臓由来水溶性蛋白（特許文献２）、牛胎盤エキス（特許文献３）などが知られている。植物由来の細胞賦活化剤としては、ゴマ、サンヤク、トウガラシ、トウキ、ドクダミ、バクモンドウ（特許文献４）、アーモンド、セイヨウタンポポ、セイヨウニワトコ、センキュウ、センブリ、ソウハクヒ、トウニン、ニンジン、ホップ、ムクゲ、ヨクイニン（特許文献５、特許文献６）、ショウガ科ウコン属（特許文献７）、ハナヤスリ科ハナヤスリ属（特許文献８）の抽出物などが知られている。これらの一部は細胞賦活化剤、抗老化剤として医薬部外品や化粧品に利用されているが、満足すべき作用効果を発揮する細胞賦活化剤や抗老化剤は得られていない。
【０００４】
また、肌荒れを予防または治癒する検討もなされている。肌荒れとは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態の皮膚をいう。このような肌荒れはコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖・角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この肌荒れを予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給するなどの検討が行われている。
【０００５】
この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシルセラミドは、β−グルコセレブロシダーゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、肌荒れ防御のバリアの働きを持つと考えられる。洗浄剤による肌荒れにはセラミドの補充が有効であり、肌荒れの改善に高い効果を示すことが報告されている（非特許文献１）。
【０００６】
しかし、グルコシルセラミドが主成分である植物抽出液は、セラミドの代替としては未だ満足のいく結果は得られていないし、セラミドの合成も反応ステップが多いため、セラミドを大量に得るにはコスト高になる。
【０００７】
オスモチンは植物が浸透圧ストレスに応答して発現するＰＲ−５ファミリー・タンパク質であり、種々の生理作用が報告されている（非特許文献２）。また、非特許文献２にはタバコ由来オスモチンが、ヒト、マウスなどにおいて脂肪細胞から分泌され、抗メタボリックシンドローム作用を有する球状アディポネクチンと立体構造上の相同性を示すことが記載されている。さらに、タバコ由来オスモチンの受容体ＰＨＯ３６は酵母のＡｄｉｐｏＲホモログであることが記載されている。
【０００８】
加えて、非特許文献２には、骨格筋モデル細胞であるＣ２Ｃ１２を用いた検討により、オスモチンは、アディポネクチンと同様に、５’−ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）をリン酸化させうることが記載されている。また、オスモチンによるＡＭＰＫのリン酸化活性はＡｄｉｐｏＲの発現低下に伴って減弱することが示されている。そのため、オスモチンはＡｄｉｐｏＲを介してＡＭＰＫをリン酸化している可能性が示唆されている。
【０００９】
しかし、オスモチンまたはオスモチン断片の抗老化効果はこれまで報告されていなかった。
【特許文献１】特開昭６２−８４０２４号公報
【特許文献２】特開昭６３−１８８６９７号公報
【特許文献３】特開平０３−１４１２９９号公報
【特許文献４】特開平１０−４５６１５号公報
【特許文献５】特開平１０−０３６２７９号公報
【特許文献６】特開平１０−３６２７９号公報
【特許文献７】特開２００４−７５６３２号公報
【特許文献８】特開２００５−８９３７５号公報
【非特許文献１】ジャーナル オブ バイオサイエンス アンド バイオエンジニアリング，９４，１８７（２００２）
【非特許文献２】モレキュラー セル，１７，１７１（２００５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
哺乳類、特にヒトに対して細胞賦活化作用や抗老化作用を付与することは極めて重要な課題であり、動物由来、植物由来の細胞賦活化物質や抗老化剤は各種見つかっているが、実際には産業上利用可能な程度に十分かつ安定した効果は得られておらず、新規な細胞賦活化剤や抗老化剤が探索されているのが現状である。
【００１１】
本発明の目的は、上記問題点を改善した、抗老化作用、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などを有する化粧品組成物を提供することにある。さらに、本発明の目的は、当該化粧品組成物を含む化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意努力した結果、オスモチンまたはオスモチン断片を含む化粧品組成物により、抗老化効果が得られるということを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１３】
即ち、本発明は、以下の（１）〜（１０）の発明を包含する。
（１）オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。
（２）オスモチンまたはオスモチン断片が天然資源から抽出されたものであることを特徴とする（１）に記載の化粧品組成物。
（３）オスモチンまたはオスモチン断片がＤＮＡ組換え技術を用いて製造されたものであることを特徴とする（１）に記載の化粧品組成物。
（４）さらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有することを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載の化粧品組成物。
（５）美白剤が、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（６）抗老化剤が、抗炎症剤および／または抗酸化剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（７）保湿剤が、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（８）紫外線吸収剤が、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤及びベンゾフェノン系紫外線吸収剤からなる群から選択された少なくとも１種の化合物であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（９）抗菌剤が有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（１０）化粧品、医薬部外品、医療用品、または衛生用品として利用されるものであることを特徴とする（１）〜（９）のいずれかに記載の化粧品組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物により、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、抗老化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などの効果を有する、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することできる。
【００１５】
また、本発明の化粧品組成物で使用するオスモチンまたはオスモチン断片は植物由来であるため安全性に優れており、本発明の化粧品組成物は長期にわたる使用に十分に耐えることができる。さらに、オスモチンまたはオスモチン断片は、ＤＮＡ組換え技術により製造できるため原料コストが安価であり、大量生産が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明で使用するオスモチンまたはオスモチン断片は、天然資源から抽出するか、ＤＮＡ組換え技術を用いて製造してもよく、プレミックス品として使用してもよい。
【００１７】
天然資源から抽出したオスモチンとは、植物において浸透圧ストレスにより誘導されるオスモチンであり、オスモチン断片とは前記オスモチンの部分配列を指す。オスモチンおよびオスモチン断片は、具体的にはタバコから抽出することが可能であるが、特にこれに限定されず、例えば、ジャガイモ、トマト、ピーマン、あるいはトウガラシからも抽出することができる。
【００１８】
また、ＤＮＡ組換え技術により製造されたオスモチン、すなわちオスモチン組換えタンパク質（以下、単に「本発明にかかる組換えタンパク質」ともいう）は、天然では浸透圧ストレスによって誘導されるオスモチン（以下、「オスモチン」または「Ｏｓｍ」ともいう）の組換えタンパク質であって、５’−ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（以下、「ＡＭＰＫ」ともいう）をリン酸化する活性（以下、「ＡＭＰＫリン酸化活性」ともいう）を有するものである。ＡＭＰＫリン酸化活性は、Ｏｓｍが有する生理活性の１つである。したがって、本発明にかかる組換えタンパク質は、ＡＭＰＫリン酸化活性以外の生理活性を有していてもよい。ＡＭＰＫリン酸化活性以外の生理活性としては、例えば、抗菌活性が挙げられる。本明細書において、「タンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性」とは、該タンパク質をＡＭＰＫに作用させた時の全ＡＭＰＫ（以下、「ｔｏｔａｌ−ＡＭＰＫ」または「ｔ−ＡＭＰＫ」ともいう）中、リン酸化を受けたＡＭＰＫ（以下、「ｐ−ＡＭＰＫ」ともいう）の割合によって表わされる。つまり、ｔ−ＡＭＰＫ中、ｐ−ＡＭＰＫの割合が高いほど、該タンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性が高いことを示す。なお、ＡＭＰＫリン酸化活性は、本明細書に記載されている方法により測定することができる。本明細書中で使用される場合、用語「タンパク質」は、「ポリペプチド」または「ペプチド」と交換可能に使用される。
【００１９】
本発明で使用する組換えタンパク質は、例えば、植物、大腸菌、酵母、真菌類、昆虫、および哺乳類等を宿主として製造されることが好ましく、中でも、大腸菌を宿主として製造されることがより好ましい。
【００２０】
本発明で使用する組換えタンパク質は、上述したように、ＡＭＰＫリン酸化活性を有する。上記ＡＭＰＫリン酸化活性は、後述する実施例に記載の方法により測定することができる。ここで、本発明で使用する組換えタンパク質の構造について具体的に説明する。本発明で使用する組換えタンパク質としては、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４（タバコ由来）、ＡＡＵ９５２４１（ジャガイモ由来）、ＡＡＣ６４１７１（トマト由来）、ＣＡＣ３４０５５（ピーマン由来）、あるいはＡＡＰ８６７８１（トウガラシ由来）として登録されているアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。また、本発明で使用する組換えタンパク質は、ポリペプチド以外の構造を含む複合ポリペプチドであってもよい。本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド以外の構造」としては、糖鎖およびイソプレノイド基等を挙げることができるが、特に限定されない。さらに、本発明で使用する組換えタンパク質は、Ｎ末端またはＣ末端に付加的なポリペプチドを含むものであってもよい。付加的なポリペプチドとしては、例えば、Ｈｉｓ、Ｍｙｃ、Ｆｌａｇ等のエピトープ標識ポリペプチドや、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグが挙げられる。必要に応じて、これらの付加的なポリペプチドを利用して、本発明で使用する組換えタンパク質のアフィニティー精製を行ってもよい。
【００２１】
また、一実施形態において、本発明で使用する組換えタンパク質は、Ｏｓｍの変異体でありうる。つまり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４、ＡＡＵ９５２４１、ＡＡＣ６４１７１、ＣＡＣ３４０５５、あるいはＡＡＰ８６７８１として登録されているアミノ酸配列からなるポリペプチドの変異体でありうる。具体的には、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。なお、本明細書中においてタンパク質またはポリペプチドに関して用いられる場合、用語「変異体」は、ＡＭＰＫリン酸化活性を有するポリペプチドが意図される。
【００２２】
また、上記変異体には、欠失、挿入、逆転、反復、およびタイプ置換（例えば、親水性残基の別の残基への置換、しかし通常は強い親水性の残基を強い疎水性の残基には置換しない）を含む変異体が含まれる。特に、ポリペプチドにおける「中性」アミノ酸置換は、一般的にそのポリペプチドの活性にほとんど影響しない。
【００２３】
また、好ましい変異体として、保存性もしくは非保存性アミノ酸置換、欠失、または付加を有する変異体が挙げられる。このような変異体もまた、本発明で使用する組換えタンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性を変化させない。代表的な保存性置換としては、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの中での１つのアミノ酸から別のアミノ酸への置換；ヒドロキシル残基ＳｅｒとＴｈｒの間の交換、酸性残基ＡｓｐとＧｌｕの間の交換、アミド残基ＡｓｎとＧｌｎの間の置換、塩基性残基ＬｙｓとＡｒｇの間の交換、ならびに芳香族残基ＰｈｅとＴｙｒの間の置換を挙げることができる。
【００２４】
ポリペプチドを構成するアミノ酸配列中のいくつかのアミノ酸が、このポリペプチドの構造または機能に有意に影響することなく容易に改変され得ることは、当該分野において周知である。
【００２５】
当業者は、周知技術を使用してポリペプチドのアミノ酸配列において１個または数個のアミノ酸を容易に変異させることができる。例えば、公知の点変異導入法に従えば、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの任意の塩基を変異させることができる。また、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの任意の部位に対応するプライマーを設計して欠失変異体または付加変異体を作製することができる。さらに、本明細書中に記載される方法を用いれば、作製した変異体が所望のＡＭＰＫリン酸化活性を有するか否かを容易に決定することができる。
【００２６】
また、本発明にかかる組換えタンパク質は、一実施形態として、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第１位〜第２２５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチドでありうる。ＯｓｍにおいてＣ末端側の２０アミノ酸残基からなるポリペプチドは、タンパク合成後、液胞へ輸送されるためのシグナル配列であり、削除してもＯｓｍの活性には影響しないことが報告されている。したがって、上記ポリペプチドもまた、ＡＭＰＫリン酸化活性を有するため、本発明で使用する組換えタンパク質に含まれる。
【００２７】
さらに、本発明で使用する組換えタンパク質は、別の実施形態として、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第２位〜第２４５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチド；ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第２位〜第２２５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチドでありうる。
【００２８】
オスモチンまたはオスモチン断片は、プレミックス品として使用してもよい。「プレミックス品」とは機能性の素材の他に、分散剤などを添加したり、溶媒で化粧品製造時に使いやすいように希釈したりしたものである。
【００２９】
オスモチンおよびオスモチン断片は、単独で使用してもよいが、２種以上を併用することもできる。
【００３０】
化粧品組成物中のオスモチンまたはオスモチン断片の添加量は、オスモチンまたはオスモチン断片の有する作用を損なわない範囲で添加すれば良く、通常０．００１〜５０質量％が好ましく、０．１〜２０質量％がより好ましく、１〜１５質量％がさらに好ましく、３〜１０質量％が特に好ましい。ここで、化粧品組成物に添加する前記オスモチンまたはオスモチン断片の使用形態は任意である。例えば、オスモチンまたはオスモチン断片を天然あるいはＤＮＡ組換え技術を用いた宿主からの抽出物のまま、あるいは精製した高純度品、もしくは水に懸濁し、あるいはエタノール等の有機溶媒に溶かした後使用してもよい。
【００３１】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、化粧品配合剤として、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有してもよい。これらの化粧品配合剤により、美白効果、保湿効果、紫外線吸収効果及び抗菌効果を付加することができる。また、抗老化剤については、オスモチンまたはオスモチン断片との相乗効果が期待できる。
【００３２】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、美白剤を含有してもよい。美白剤は、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であってもよい。
【００３３】
美白剤としては、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン及びその誘導体、ルシノール、エデト酸及びその誘導体、並びに胎盤抽出物、ｔ−ＡＭＣＨＡ、アセロラエキス、エイジツエキス、エラグ酸またはその誘導体、火辣エキス、カミツレエキス，カミツレ花エキス・（尿素）、キウイエキス、グルタチオン、トコトリエノール、フェルラ酸、ラズベリーケトン、ルシノール、ウワウルシエキス、ジパルミチン酸ピリドキシン、イオウ、コウジ酸またはその誘導体、グルコサミンまたはその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸またはその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、油溶性カンゾウエキス等が例示される。
【００３４】
これらの美白剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３５】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、さらに他の抗老化剤を含有してもよい。抗老化剤は、抗炎症剤および／または抗酸化剤であってもよい。
【００３６】
抗炎症剤としては、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸及びその塩、イソプロピルアミノカプロン酸及びその塩、アラントイン、塩化リゾチーム、グアイアズレン、サリチル酸メチル、γ−オリザノールが例示され、抗酸化剤としては、αカロチン、βカロチン、γカロチン、リコピン、クリプトキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、イソゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン等のカロチノイド；１，４−ジアザシクロオクタン、２，５−ジメチルフラン、２−メチルフラン、２，５−ジフェニルフラン、１，３−ジフェニルイソベンゾフラン、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、ｄトコフェロール、ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、アラニン又はそのアルキルエステル；ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、アスコルビン酸、タンニン酸、エピカテキン、エピカロカテキン、エピカテキンガレート、エピカロカテキンガレート等のタンニン類、ルチン等のフラボノイド、その他没食子酸プロピル、アスタキサンチン、カロチン、トコフエロール、アスコルビン酸、エデト酸四ナトリウム、エリソルビン酸、酢酸トコフェロール、酢酸レチノール、ジビチルヒドロキシトルエン、ステアリン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、メチルシラノールジオレイルトコフェロール・無水ケイ酸混合物、ニコチン酸ベンジル、感光素４０１号、アスパラギン酸、アデノシン三リン酸２Ｎａ、アミノ酪酸、ウイキョウエキス、オランダカラシエキス、カフェイン、クロレラエキス、サフランエキス、ショウキョウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、葉酸、レチノール、パルミチン酸レチノール、イノシトール、ウコンエキス、オリザノール、カロチン、カロットエキス、コムギ胚牙エキス、センキュウエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、ドダミエキス、トコフエロール、ニコチン酸トコフエロール、ボタンエキス、エルゴカルシフェロール、ジカプリル酸ピリドキシン、バチルアルコール、ステアリン酸グリチルレチニル、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、塩酸ジフェンヒドラミン、塩化リゾチーム、アミノカプロン酸、レイシエキス、ヨクイニン、メリロートエキス、ボタンエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、センキュウエキス、ゲンノショコエキス、アラントイン、アルニカエキス、アルニカ花エキス、オウゴンエキス、オウレンエキス、オドリコソウエキス、ガマ穂エキス、カミツレエキス、カラミン、カワラヨモギエキス、甘草エキス、グアイアズレン、クチナシエキス、クマザサエキス、グリチルリチン酸２Ｋ、グリチルレチン酸ステアリル、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、コンフリーエキス、コンフリー葉エキス、酢酸トコフエロール、サリチル酸メチル、酸化亜鉛、シコンエキス，ムラサキ根エキス、シソエキス、シソ葉エキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、スイカズラエキス、セージエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、トウキンセンカエキス、ピリドキシンＨＣｌ、ビワ葉エキス、フユボダイジュエキス、モモ葉・果実エキス、ヤグルマギクエキス、ユキノシタエキス、ヨモギエキス、レタスエキス、ローマカミツレエキス、ワレモコウエキス及びカカロール、ポリアミン等が例示される。
【００３７】
これらの抗老化剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３８】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、保湿剤を含有してもよい。保湿剤としては、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であればよく、親水性保湿剤として、アミノ酸，ペプチド，蛋白質，高級アルコール及びこれらの誘導体，親油性保湿剤として、リン脂質 ，糖 脂質 ，ステロイド類を用いてもよい。
【００３９】
保湿剤としては、ピリドンカルボン酸ナトリウム、グリコール、グリセリン、グルコース、マルトース、マルチトール、ショ糖、フラクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトトリオース、スレイトール、エリスリトール、デンプン分解糖還元アルコール、ソルビトール、エチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ジグリセリン、トリグリセリン、テトラグリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−プロパンジオール、その他セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸またはそのエステル類、エイコサペンタエン酸またはそのエステル類、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物またはその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、ピロリドンカルボン酸、トマトエキス、ツバキ油、大豆リン脂質、ヒアルロン酸、トレオニン、グリコール酸アンモニウム、アルギン酸メチルシラノール、ヨクイニン、トウキエキス、トウキ根エキス、ダイズエキス、アスパラガスエキス、ＤＮＡ−Ｎａ、ＰＣＡ−Ｎａ、ＲＮＡ−Ｎａ、アシタバエキス、アスパラギン酸、アマチヤエキス、アラニン、アルギニン、アルギン酸Ｎａ、アルテアエキス、アロエベラエキスー、オイスタエキス、オオムギバクガエキス、カキ葉、加水分解ケラチン、加水分解コラーゲン、加水分解コンキオリン、加水分解卵殻膜、加水分解卵白、加水分解シルク、加水分解ダイズタンパク、褐藻エキス、カリンエキス、キイチゴエキス、キシリトール、キトサン、キュウリエキス、キュウリ果実エキス、グアバ菓エキス、クインスシードエキス、グリシン、グリセリン、グルコース、グレープフルーツエキス、グレープフルーツ果実エキス、クレマティスエキス、ゴボウエキス、コメ発酵液、コンドロイチン硫酸Ｎａ、魚コラ一ゲノ、サンザシエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、グリセリン、シスチン、システイン、スギナエキス、ゼニアオイエキス、セリン、ソルビトール、ダイズタンパク、トマトエキス、乳酸Ｎａ、乳酸桿菌、ダイズ醗酵エキス、尿素仰／ノバラエキス・アーモンド浬、コーン油、ハチミツ、ヒアルロン酸Ｎａ、フクノエキス、ベタイン、ヘチマエキス、マルチトール、マルトース、マンニトール、ユリエキス、ラクトフェリン、リシン、リンゴエキス、レンゲソウエキス、ローヤルゼリー、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール１０００、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソブチル、ヘキシルデカノール、乳酸ミリスチル、ラノリン脂肪酸、トリカプリルグリセリル、オレイルアルコール、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸デシル、還元ラノリン、オクチルドデカノール、アーモンド油、アボカド油、オリーブ油、オレイン酸、オレンジラフイー油、カカオ脂、カロットエキス、ゴマ油、サザンカ油、サフラワー油、ジヒドロコレステロール、スクワラン、ステアリン酸コレステリル、セラミド２、月見草油、ヒマシ油、ヒマワリ油、セフニド３、ヒマワリ種子油、ハイブリッドヒマワリ油、フィトスフィンゴシン、ブドウ種子油、ホホバ油、ホホバ種子油、ミネラルオイル、ミンク油、マカデミアナッツ油、メドウフォーム油、ユーカリ油、ユーカリ葉油、ラノリン、リノール酸、ローズヒップ油、ワセリン及びポリグルタミン酸等が例示される。
【００４０】
これらの保湿剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４１】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、紫外線吸収剤を含有してもよい。紫外線吸収剤としては、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤などを使用しても良い。
【００４２】
紫外線吸収剤として、安息香酸アミル、パラアミノ安息香酸オクチル、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸フェニル、サリチル酸オクチル、サリチル酸ベンジル、サリチル酸ブチルフェニル、サリチル酸ホモメンチル、ケイ皮酸ベンジル、パラメトキシケイ皮酸２−エトキシエチル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、ジパラメトキシケイ皮酸モノ２−エチルヘキサン酸グリセリル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、ジイソプロピル・ジイソプロピルケイ皮酸エステル混合物、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸およびその塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルフォン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシ−ジベンゾイルメタン、２、４、６−トリアニリノ−ｐ−（カルボ−２’−エチルヘキシル−１’−オキシ）−１、３、５−トリアジン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、パラジメチルアミノ安息香酸２−エチルヘキシル、パラアミノ安息香酸エチル、トプチルメトキシジペンゾイルメタン、オキシベンゾン−１、グアイアズレンスルホン酸エチル、酸化亜鉛、シノキサート、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレートなどが例示される。
【００４３】
これらの紫外線吸収剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４４】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、抗菌剤を含有してもよい。抗菌剤は、有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であってもよい。
【００４５】
抗菌剤としては、オウバク抽出液、ハロカルバン、クロロフェネシン、塩化リゾチーム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、イソプロピルメチルフェノール、チモール、ヘキサクロロフェン、ベルベリン、チオキソロン、サリチル酸およびそれらの誘導体、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、パラクロルメタクレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール、石炭酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、ヘキサクロロフェン、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、感光素、ビス（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛、チアントール、ヒノキチオール、トリクロサン、トリクロロヒドロキシジフェニルエーテル、クロルヘキシジングルコン酸塩、フェノキシエタノール、レゾルシン、アズレン、サリチル酸、ジンクピリチオン、モノニトログアヤコールナトリウム、ウイキョウエキス、サンショウエキス、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及びウンデシレン酸誘導体などが例示される。
【００４６】
これらの抗菌剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４７】
オスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物の形態は特に制限されない。したがって、固体、液体、ペースト、ゼリー、粉末などのいずれの状態をとるものであってもよい。このような状態を形成するために、例えばゲル化剤を用いて固化したり、液体を用いて分散状態にしたりすることができる。また、溶媒を添加して溶液にしたり、噴霧乾燥して粉末状にしたりすることもできる。
【００４８】
例えば、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は化粧品として使用することができる。化粧品としては、化粧石鹸、シャンプー、洗顔料、リンス、アイクリーム、アイシャドウ、クリーム・乳液、化粧水、香水、おしろい、化粧油、頭髪用化粧品、染毛料、練香水、パウダー、パック、クレンジングクリーム、ひげそり用クリーム、ひげそり用ローション、日焼けオイル、日焼け止めオイル、日焼けローション、日焼け止めローション、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム、ファンデーション、粉末香水、ほお紅、マスカラ、眉墨、爪クリーム、美爪エナメル、美爪エナメル除去液、洗毛料、浴用化粧品、口紅、リップクリーム、アイライナー、歯磨き、デオドラント剤、オーデコロン、養毛剤および育毛剤などが例示される。また、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、軟膏剤や湿布剤などとして使用することもできる。
【００４９】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物には、使用目的に応じて様々な成分をさらに添加させておくことができる。
【００５０】
例えば、オスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、非イオン性界面活性剤、低級アルコール、多価アルコール、油類、高級脂肪酸、高級アルコール、合成エステル、シリコーンなどに溶解して用いてもよい。
【００５１】
非イオン界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ペンタ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン等）；グリセリンポリグリセリン脂肪酸類（例えば、モノ綿実油脂肪酸グリセリン、モノエルカ酸グリセリン、セスキオレイン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、α，α’−オレイン酸ピログルタミン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸等）；プロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、モノステアリン酸プロピレングリコール等）；硬化ヒマシ油誘導体；グリセリンアルキルエーテル等が挙げられる。
【００５２】
ＰＯＥ系の親水性非イオン界面活性剤としては、例えば、ＰＯＥ−ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンテトラオレエート等）；ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート、ＰＯＥ−ソルビットモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビットペンタオレエート、ＰＯＥ−ソルビットモノステアレート等）；ＰＯＥ−グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−グリセリンモノステアレート、ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート、ＰＯＥ−グリセリントリイソステアレート等のＰＯＥ−モノオレエート等）；ＰＯＥ−脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ジステアレート、ＰＯＥ−モノジオレエート、ジステアリン酸エチレングリコール等）；ＰＯＥ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ−ラウリルエーテル、ＰＯＥ−オレイルエーテル、ＰＯＥ−ステアリルエーテル、ＰＯＥ−ベヘニルエーテル、ＰＯＥ−２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ−コレスタノールエーテル等）；プルロニック型類（例えば、プルロニック等）；ＰＯＥ・ＰＯＰ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ・ＰＯＰ−セチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−２−デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−モノブチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−水添ラノリン、ＰＯＥ・ＰＯＰ−グリセリンエーテル等）；テトラＰＯＥ・テトラＰＯＰ−エチレンジアミン縮合物類（例えば、テトロニック等）；ＰＯＥ−ヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体（例えば、ＰＯＥ−ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油トリイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油マレイン酸等）；ＰＯＥ−ミツロウ・ラノリン誘導体（例えば、ＰＯＥ−ソルビットミツロウ等）；アルカノールアミド（例えば、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ラウリン酸モノエタノールアミド、脂肪酸イソプロパノールアミド等）；ＰＯＥ−プロピレングリコール脂肪酸エステル；ＰＯＥ−アルキルアミン；ＰＯＥ−脂肪酸アミド；ショ糖脂肪酸エステル；アルキルエトキシジメチルアミンオキシド；トリオレイルリン酸等が挙げられる。
【００５３】
低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール等が挙げられる。
【００５４】
多価アルコールとしては、例えば、２価のアルコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、テトラメチレングリコール、２，３−ブチレングリコール、ペンタメチレングリコール、２−ブテン−１，４−ジオール、ヘキシレングリコール、オクチレングリコール等）；３価のアルコール（例えば、グリセリン、トリメチロールプロパン等）；４価アルコール（例えば、１，２，６−ヘキサントリオール等のペンタエリスリトール等）；５価アルコール（例えば、キシリトール等）；６価アルコール（例えば、ソルビトール、マンニトール等）；多価アルコール重合体（例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、ジグリセリン、ポリエチレングリコール、トリグリセリン、テトラグリセリン、ポリグリセリン等）；２価のアルコールアルキルエーテル類（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、エチレングリコールモノフェニルエーテル、エチレングリコールモノヘキシルエーテル、エチレングリコールモノ２−メチルヘキシルエーテル、エチレングリコールイソアミルエーテル、エチレングリコールベンジルエーテル、エチレングリコールイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル等）；２価アルコールアルキルエーテル類（例えば、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエチルエーテル、トリエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールイソプロピルエーテル、ジプロピレングリコールメチルエーテル、ジプロピレングリコールエチルエーテル、ジプロピレングリコールブチルエーテル等）；２価アルコールエーテルエステル（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノフェニルエーテルアセテート、エチレングリコールジアジベート、エチレングリコールジサクシネート、ジエチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、ジエチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノエチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノプロピルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノフェニルエーテルアセテート等）；グリセリンモノアルキルエーテル（例えば、キミルアルコール、セラキルアルコール、バチルアルコール等）；糖アルコール（例えば、ソルビトール、マルチトール、マルトトリオース、マンニトール、ショ糖、エリトリトール、グルコース、フルクトース、デンプン分解糖、マルトース、キシリトース、デンプン分解糖還元アルコール等）；グリソリッド；テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＥ−テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＰ−ブチルエーテル；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ブチルエーテル；トリポリオキシプロピレングリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテルリン酸；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ペンタンエリスリトールエーテル、ポリグリセリン等が挙げられる。
【００５５】
油類としては、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油およびその硬化油、流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンが挙げられる。
【００５６】
高級脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール、ホホバアルコール、ラノリンアルコール、バチルアルコール、２−デシルテトラテセシノール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等が挙げられる。合成エステルとしては、例えば、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等が挙げられる。シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキサン等の環状ポリシロキサン、シリコーン樹脂等の三次元網目構造のもの等が挙げられる。
【００５７】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、化粧品以外に、医薬部外品、医療用品、衛生用品に配合して利用されることができる。
【００５８】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物を、医薬部外品、医療用品、衛生用品の形態で実施する場合、剤形は限定されず、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、丸剤、錠剤、固形剤、液剤、ゲル、気泡、乳液、クリーム、軟膏、シート、ムース、浴用剤など多様なものとすることができる。
【００５９】
医薬部外品、医療用品、衛生用品としては、例えば内用・外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの頭髪化粧料、ファンデーション、白粉、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛などのメークアップ化粧料、美爪料などの仕上げ用化粧料、香水類、浴用剤、その他、歯磨き類、口中清涼剤・含嗽剤、液臭・防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュなどが挙げられる。また、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、軟膏剤や湿布剤などとして使用することもできる。
【００６０】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が期待できる限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００６１】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、医薬部外品、医療用品、衛生用品に使用される成分や添加剤を併用して配合することができる。これらの成分や添加剤としては、ロウ類、鉱物油、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、金属セッケン、ガム質および水溶性高分子化合物、界面活性剤、ビタミン類、アミノ酸、動物あるいは植物、生薬の抽出物やエキス、微生物培養代謝物、α−ヒドロキシ酸、無機顔料、収斂剤、殺菌・消毒薬、頭髪用剤、香料、色素・着色剤、甘味料、栄養強化剤などが挙げられる。
【００６２】
例えば、ロウ類としては、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウなどが挙げられる。
【００６３】
例えば、鉱物油としては、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス、ポリエチレン末、スクワレン、スクワラン、プリスタンなどが挙げられる。
【００６４】
例えば、脂肪酸類としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸などの合成脂肪酸が挙げられる。
【００６５】
例えば、アルコール類としては、エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノールなどの合成アルコール、酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、バチルアルコール、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、ショ糖などの多価アルコール類などが挙げられる。
【００６６】
例えば、エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコールなどが挙げられる。
【００６７】
例えば、金属セッケンとしては、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛などが挙げられる。
【００６８】
例えば、ガム質および水溶性高分子化合物としては、アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシアルキルキチン、キトサン、ヒドロキシアルキルキチン、低分子キトサン、キトサン塩、硫酸化キチン、リン酸化キチン、アルギン酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイドまたはその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミンなどが挙げられる。
【００６９】
例えば、界面活性剤としては、アニオン界面活性剤（カルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アミン塩、四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤（カルボン酸型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤）、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤などが挙げられる。
【００７０】
例えば、ビタミン類としては、ビタミンＡ群ではレチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群では、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群では、アスコルビン酸およびその誘導体、ビタミンＤ群では、エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群では、トコフェロールおよびその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群では、フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）などが挙げられる。
【００７１】
例えば、アミノ酸としては、バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、あるいはピロリドンカルボン酸の如きアミノ酸誘導体などが挙げられる。
【００７２】
例えば、動物あるいは植物、生薬の抽出物やエキスとしては、アセンヤク（阿仙薬）、アシタバ、アセロラ、アルテア、アルニカ、アボカド、アマチャ（甘茶）、アロエ、アロエベラ、イラクサ、イチョウ（銀杏葉、銀杏）、ウイキョウ（茴香）、ウコン（鬱金）、ウスバサイシン（細辛）、ウメ（烏梅）、ウラジロガシ、ウワウルシ、ノイバラ（営実）、ヒキオコシ（延命草）、オウギ（黄耆）、コガネバナ（オウゴン）、ヤマザクラ（桜皮）、キハダ（黄柏）、オウレン（黄連）、オタネニンジン（人参）、オトギリソウ（弟切草）、オドリコソウ、オランダガラシ、オレンジ、イトヒメハギ（遠志）、ウツボグサ（夏枯草）、ツルドクダミ（何首烏）、エンジュ（槐花）、ヨモギ（ガイ葉）、ガジュツ（莪朮）、クズ（葛根）、カノコソウ（吉草根）、カミツレ、キカラスウリ（瓜呂根）、カワラヨモギ（茵チン蒿）、カンゾウ（甘草）、フキタンポポ（款冬花、款冬葉）、キイチゴ、キウイ果実、キキョウ（桔梗）、キク（菊花）、キササゲ（梓実）、ミカン属植物果実（枳実）、タチバナ（橘皮）、キュウリ、ウドまたはシシウド（羌活、独活）、アンズ（杏仁）、クコ（地骨皮、枸杞子、枸杞葉）、クララ（苦参）、クスノキ、クマザサ、グレープフルーツ果実、ニッケイ（桂皮）、ケイガイ（ケイガイ）、エビスグサ（決明子）、マルバアサガオまたはアサガオ（ケン牛子）、ベニバナ（紅花）、ゴバイシ（五倍子）、コンフリー、コパイバ、クチナシ（山梔子）、ゲンチアナ、ホオノキ（厚朴）、ヒナタイノコズチ（牛膝）、ゴシュユ（呉茱萸）、ゴボウ、チョウセンゴミシ（五味子）、米、米ぬか、コムギ、ミシマサイコ（柴胡）、サフラン、サボンソウ、サンザシ（山ザ子）、サンショウ（山椒）、サルビア、サンシチニンジン（三七人参）、シイタケ（椎茸）、ジオウ（地黄）、シクンシ（使君子）、ムラサキ（紫根）、シソ（紫蘇葉、紫蘇子）、カキ（柿蒂）、シャクヤク（芍薬）、オオバコ（車前子、車前草）、ショウガ（生姜）、ショウブ（菖蒲）、トウネズミモチ（女貞子）、シモツケソウ、シラカバ、スイカズラ（金銀花、忍冬）、セイヨウキヅタ、セイヨウノコギリソウ、セイヨウニワトコ、アズキ（赤小豆）、ニワトコ（接骨木）、ゼニアオイ、センキュウ（川キュウ）、センブリ（当薬）、クワ（桑白皮、桑葉）、ナツメ（大棗）、ダイズ、タラノキ、チクセツニンジン（竹節人参）、ハナスゲ（知母）、ワレモコウ（地楡）、ドクダミ（十薬）、フユムシナツクサタケ（冬虫夏草）、トウガラシ、ホオズキ（登呂根）、タチジャコウソウ、リョクチャ（緑茶）、コウチャ（紅茶）、チョウジ（丁子）、ウンシュウミカン（陳皮）、ツバキ、ツボクサ、トウガラシ（番椒）、トウキ（当帰）、トウキンセンカ、ダイダイ（橙皮）、ワレモコウ（地楡）、トウモロコシ（南蛮毛）、トチュウ（杜仲、杜仲葉）、トマト、ナンテン（南天実）、ニンニク（大サン）、オオムギ（麦芽）、ハクセン（白蘚皮）、ジャノヒゲ（麦門冬）、パセリ、バタタ、ハッカ（薄荷）、ハマメリス、バラ、ビワ葉（枇杷葉）、マツホド（茯リョウ）、ブドウまたはその葉、ヘチマ、ボダイジュ、ボタン（牡丹皮）、ホップ、マイカイ（マイ瑰花）、松葉、マロニエ、マンネンロウ、ムクロジ、メリッサ、メリロート、ボケ（木瓜）、モヤシ、モモ（桃仁、桃葉）、ヒオウギ（射干）、ビンロウジュ（檳ロウ子）、メハジキ（益母草）、ヤグルマギク、ユキノシタ（虎耳草）、ヤマモモ（楊梅皮）、ヤシャブシ（矢車）、ハトムギ（ヨクイニン）、モウコヨモギ、ヤマヨモギ、ラベンダー、リンゴ果実、マンネンタケ（霊芝）、レモン果実、レンギョウ（連翹）、レンゲソウ、ゲンノショウコ（老鸛草）、ハシリドコロ（ロート根）、鶏トサカ、牛・人の胎盤抽出物、豚・牛の胃、十二指腸、或いは腸の抽出物若しくはその分解物、水溶性コラーゲン、水溶性コラーゲン誘導体、コラーゲン加水分解物、エラスチン、エラスチン加水分解物、水溶性エラスチン誘導体、シルク蛋白、シルク蛋白分解物、牛血球蛋白分解物などが挙げられる。
【００７３】
例えば、微生物培養代謝物としては、酵母エキス、亜鉛含有酵母エキス、ゲルマニウム含有酵母エキス、セレン含有酵母エキス、マグネシウム含有酵母エキス、米醗酵エキス、ユーグレナ抽出物、脱脂粉乳の乳酸発酵物などが挙げられる。
【００７４】
例えば、α−ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸などが挙げられる。
【００７５】
例えば、無機顔料としては、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミンなどが挙げられる。
【００７６】
例えば、収斂剤としては、乳酸、酒石酸、コハク酸、クエン酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、ｐ−フェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レソルシン、塩化第二鉄、タンニン酸などが挙げられる。
【００７７】
例えば、殺菌・消毒薬としては、アクリノール、イオウ、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルロザニリン、クレゾール、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリンまたはその加水分解物などが挙げられる。
【００７８】
例えば、頭髪用剤としては、二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニウム液、ジンクピリチオン、ビフェナミン、チアントール、カスタリチンキ、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チオグリコール酸などが挙げられる。
【００７９】
例えば、香料としては、ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、檜精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油などの植物性香料、その他合成香料などが挙げられる。
【００８０】
例えば、色素・着色剤としては、赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチンなどが挙げられる。
【００８１】
例えば、甘味料としては、砂糖、甘茶、果糖、アラビノース、ガラクトース、キシロース、マンノース、麦芽糖、蜂蜜、ブドウ糖、ミラクリン、モネリンなどが挙げられる。
【００８２】
例えば、栄養強化剤としては、貝殻焼成カルシウム、シアノコラバミン、酵母、小麦胚芽、大豆胚芽、卵黄粉末、ヘミセルロース、ヘム鉄などが挙げられる。
【００８３】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物に配合することができる成分や添加剤としては、その他、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質およびその分解物、動・植物性多糖類およびその分解物、動・植物性糖蛋白質およびその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料、酵素などが挙げられる。
【００８４】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、抗老化効果、保湿効果、コラーゲン生成促進効果、細胞賦活化効果、育毛効果及び肌荒れ改善効果などが必要とされる場合に広く使用することができる。使用量は、所期の抗老化効果、保湿効果、コラーゲン生成促進効果、細胞賦活化効果、育毛効果及び肌荒れ改善効果などを十分に奏する範囲内で決定する。
【００８５】
本発明の化粧品組成物は、前記のような効果から、化粧品組成物や化粧品として利用されることは勿論であるが、そのほかにも、医薬部外品組成物、医療用品組成物、衛生用品組成物、機能性食品組成物や、医薬部外品、医療用品、衛生用品などの形態やプレミックス品などの形態で利用することができる。
【００８６】
なお、本明細書において「細胞賦活化」とは、細胞機能や細胞活性を維持または亢進させることを指している。「細胞賦活化」の結果、細胞機能や細胞活性の低下を抑制、すなわち細胞の老化を抑制することができる。したがって、「細胞賦活化剤」は、「抗老化剤」としての有用性を持つ。例えば、皮膚細胞における「細胞賦活化、抗老化」とは、加齢や光老化による基底膜の構造変化の蓄積に伴う皮膚細胞の機能低下を小さくすることで、皮膚のしわ、たるみ、硬化等を防止、改善して弾力のある若々しい健康な肌の状態を維持することなどを指している。また、例えば、毛乳頭細胞または毛母細胞においては、加齢、ストレス、ホルモンバランスによる毛乳頭細胞または毛母細胞の機能低下を小さくすることで、ヘアサイクルを維持して脱毛を抑えることなどを指している。
【実施例】
【００８７】
以下の実施例により、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、これらに何ら限定されるものではない。
【００８８】
実施例１ オスモチンのＤＮＡ組換え技術による製造
〔調製例１：タバコＢＹ−２培養細胞からのタバコオスモチン遺伝子の単離〕
タバコＢＹ−２培養細胞から、図１に示すフローで、タバコオスモチン遺伝子を単離した。以下、タバコオスモチン遺伝子の単離方法について詳細に説明する。
【００８９】
（１）鋳型ＤＮＡサンプルの調製
タバコＢＹ−２培養細胞より、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ ＲＮＡ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡ ３μｇに対してＲＱ１ ＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ ＤＮａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＤＮａｓｅ除去処理を行い、ＴａｑＭａｎ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡ（以下、「試料１」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９０】
（２）タバコオスモチン遺伝子に相補的なオリゴヌクレオチド（ＰＣＲ用のプライマー）の合成
パーキンエルマー社製ＤＮＡシンセサイザー３９２型を用いて、ホスホアミダイト法にて、配列番号２および３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチド（以下、それぞれ、「オリゴ１」および「オリゴ２」ともいう）を合成した。合成はマニュアルに従い、各種オリゴヌクレオチドの脱保護はアンモニア水で５５℃、一夜実施した。オリゴヌクレオチドの精製は、パーキンエルマー社ＯＰＣカラムにて実施するか、もしくはＤＮＡ合成受託会社（（株）日本バイオサービス、オペロン（株）、シグマジェノシス（株）等）に依頼した。なお、オリゴ１はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第１位〜第２０位の塩基と相同な配列からなるフォワードプライマーであり、オリゴ２はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第７１８位〜第７３８位の塩基に相補的な配列からなるリバースプライマーである。
【００９１】
（３）ＰＣＲ法によるタバコオスモチン遺伝子の増幅
上記試料１を含む溶液２μｌ、オリゴ１およびオリゴ２を各２５ｐｍｏｌｅｓ、および１０×ＰＣＲｍｉｘ、０．２ｍＭ ｄＮＴＰｓ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼにミリＱを加えて全量を５０μｌとした。ＰＣＲ反応は最初に９４℃で１分間の熱処理後、次いで９４℃−１５秒間のデナチュレーション工程、及び５５℃−３０秒間のアニーリング及び６８℃−１分間のＤＮＡ伸長反応工程を１サイクルとして、これを計３０サイクル行うことにより実施した。
【００９２】
（４）タバコオスモチン遺伝子のクローニング
上記で増幅したタバコオスモチン遺伝子を含むＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、タバコオスモチン遺伝子のみを含むＤＮＡ（ＰＣＲ産物；以下、「試料２」ともいう）を含有する溶液を調製した。試料２はＴＡｒｇｅｔ Ｃｌｏｎｅ−ｐｌｕｓ（東洋紡績）を用いてプラスミドベクターへ挿入し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α株に形質転換し、全長タバコオスモチン遺伝子を挿入したプラスミドＤＮＡ（以下、「試料３」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９３】
〔調製例２：タバコオスモチン遺伝子を含む組換え発現ベクターの作製〕
調製例１で単離したタバコオスモチン遺伝子を用いて、図１に示すフローで、組換え発現ベクターを構築した。以下、組換えベクターの構築方法について詳細に説明する。
【００９４】
（１）タバコオスモチン遺伝子へ制限酵素サイトを付加するためのオリゴヌクレオチドの合成
パーキンエルマー社製ＤＮＡシンセサイザー３９２型を用いて、ホスホアミダイト法にて、配列番号３および４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチド（以下、それぞれ「オリゴ３」および「オリゴ４」ともいう）を合成した。合成はマニュアルに従い、各種オリゴヌクレオチドの脱保護はアンモニア水で５５℃、一夜実施した。オリゴヌクレオチドの精製は、パーキンエルマー社ＯＰＣカラムにて実施するか、もしくはＤＮＡ合成受託会社（（株）日本バイオサービス、オペロン（株）、シグマジェノシス（株）等）に依頼した。なお、オリゴ３はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第４位〜第１９位の塩基と相同な配列の５’末端側にＥｃｏＲＩサイトが付加された塩基配列からなるフォワードプライマーであり、オリゴ４はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第６６２位〜第６７５位の塩基に相補的な配列の５’末端側にＳａｃＩサイトが付加された塩基配列からなるリバースプライマーである。
【００９５】
（２）タバコオスモチン遺伝子への制限酵素サイトの付加
上記試料３を含む溶液を２μｌ、オリゴ３およびオリゴ４を各２５ｐｍｏｌｅｓ、および１０×ＰＣＲｍｉｘ、０．２ｍＭ ｄＮＴＰｓ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼにミリＱを加えて全量を５０μｌとした。
ＰＣＲ反応は最初に９４℃で１分間の熱処理後、次いで９４℃−１５秒間のデナチュレーション工程、及び５５℃−３０秒間のアニーリング及び６８℃−１分間のＤＮＡ伸長反応工程を１サイクルとして、これを計３０サイクル行うことにより実施した。上記で増幅したＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、制限酵素サイトを付加されたタバコオスモチン遺伝子のみを含むＤＮＡ（ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトを付加したタバコオスモチン遺伝子；以下、「試料４」ともいう）を含有する溶液を調製した。
【００９６】
（３）タバコオスモチン遺伝子タンパク発現ベクターの構築
上記試料４を制限酵素ＥｃｏＲＩ（東洋紡績）およびＳａｃＩ（東洋紡績）にて制限酵素処理し、制限酵素処理した試料４を含むＤＮＡ溶液を１％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、制限酵素により切断されたタバコオスモチン遺伝子を含むＤＮＡ（ｏｓｍｏｔｉｎ−ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ；以下、「試料５」ともいう）を含有する溶液を調製した。なお、制限酵素処理の試薬組成および反応条件は試薬の推奨条件に従った。同様にｐＥＴ２８ａベクターも制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｃＩにて制限酵素処理し、ｐＥＴ２８ａベクターを含むＤＮＡ溶液より、制限酵素により切断されたｐＥＴ２８ａベクターを含むＤＮＡ（ｐＥＴ２８−ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ；以下、「試料６」ともいう）を含有する溶液を調製した。
【００９７】
試料５と試料６とをモル比で５：１の割合で混合し、ＤＮＡ Ｌｉａｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｖｅｒ．１（宝酒造）を加え、１６℃にて１８時間のライゲーション反応を行った。得られた反応液１μｌを大腸菌ＤＨ５α株（東洋紡績）５０μｌと混合し、定法に従い形質転換した。出現したコロニーよりプラスミドＤＮＡを抽出し、ｐＥＴ２８ａに組込まれたタバコオスモチン遺伝子を含むプラスミドＤＮＡ（ｏｓｍｏｔｉｎ−ｐＥＴ２８；以下、「試料７」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９８】
実施例２：大腸菌を用いたタバコオスモチン組換えタンパク質の大量発現
（１）形質転換体大腸菌の作製およびタバコオスモチン組換えタンパク質の発現誘導
調製例２で調製した試料７を含む溶液を１μｌと、大腸菌ＢＬ２１ Ｓｔａｒ （ＤＥ３）株 ２０μｌとを混合し、定法に従い形質転換した。出現したコロニーより釣菌し、ＬＢ−Ｋａｍ（カナマイシン）液体培地５ｍｌに植菌し、３７℃にて１６時間培養した。翌日、培養液５ｍｌをＴＢ−Ｋａｍ液体培地５００ｍｌに添加し、３７℃にて４時間培養後、ＩＰＴＧ ０．１ｍＭを添加し、さらに２５℃にて４時間培養した。
【００９９】
（２）可溶性画分からのタバコオスモチン組換えタンパク質の精製
上記で培養したＴＢ−Ｋａｍ液体培地より集菌し、得られた大腸菌ペレットをＢｕｇＢｕｓｔｅｒ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｎｏｖａｇｅｎ）２０ｍｌに懸濁した。室温にて２０分間インキュベートした後、５８００×ｇにて２０分間遠心し、上清を回収し、ライセートを調製した。調製したライセートは精製バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡアガロース・ビーズと混合し、４℃で１時間インキュベートを行い、ライセートに含まれるタバコオスモチン組換えタンパク質をビーズに吸着させた。インキュベート終了後、１５００×ｇにて５分間遠心し、上清を除去してビーズを回収した。ビーズは洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、２０％グリセロール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で洗浄し、溶出バッファー（２５０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）にて溶出を行い、精製されたタバコオスモチン組換えタンパク質を回収した。
【０１００】
（３）シャペロニンの除去
上記で調製したタバコオスモチン組換えタンパク質をＰＤ−１０ Ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥヘルスケア）にて脱塩および５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）への置換を行った。脱塩し、バッファー置換を行ったタバコオスモチン組換えタンパク質を最終濃度が５０μｇ／ｍｌになるように反応バッファー（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、５ｍｇ／ｍｌ カゼイン：ｐＨ８．０）で調整し、３７℃で３０分間インキュベートし、タバコオスモチン組換えタンパク質に結合した大腸菌由来シャペロニンを除去した。シャペロニンを除去したタバコオスモチン組換えタンパク質溶液にＮａＣｌを最終濃度が３００ｍＭになるように添加したのち、５８００×ｇで２０分間遠心し、上清を回収した。回収した上清は精製バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡアガロース・ビーズと混合し、４℃で１時間インキュベートを行い、上清に含まれるタバコオスモチン組換えタンパク質をビーズに吸着させた。インキュベート終了後、１５００×ｇにて５分間遠心し、上清を除去してビーズを回収した。ビーズは洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、２０％グリセロール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）、およびＬＰＳ除去バッファー（１．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で洗浄し、溶出バッファー（２５０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）にて溶出を行い、タバコオスモチン組換えタンパク質を回収した。
【０１０１】
回収したタバコオスモチン組換えタンパク質はＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて４℃で１６時間透析し、脱塩およびＰＢＳへの置換を行った。ＰＢＳ置換したタバコオスモチン組換えタンパク質を還元レムリ処理し、２−１５％グラジエントゲルを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、ゲルをクマシー染色したところ、図２に示すように、約２６ｋＤの位置にバンドが検出された。
【０１０２】
実施例３：タバコオスモチン組換えタンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性測定
（１）Ｃ２Ｃ１２細胞の分化誘導
マウス骨格筋細胞であるＣ２Ｃ１２細胞を１２穴プレートに播種し、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地にて１００％コンフルエントになるまで培養した後、２．５％ウマ血清を含むＤＭＥＭ培地に交換して７日間培養し、分化誘導した。
【０１０３】
（２）タバコオスモチン組換えタンパク質の添加
上記の分化誘導させたＣ２Ｃ１２細胞を無血清培地に交換して、３７℃で７時間培養した後、培地中に２ｍＭ／ｗｅｌｌとなるように、ＡＩＣＡＲ（１−ｂ−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｉｄｅ：ＴＲＣ）を加え、さらに３７℃で３０分間培養した。ＡＩＣＡＲ添加の１時間後に、実施例２で調製したタバコオスモチン組換えタンパク質をＡＩＣＡＲ同様に培地中に添加して、３７℃で７分間培養した後、Ｃ２Ｃ１２細胞を回収した。回収した細胞は液体窒素で凍結し、測定まで−８０℃にて保存した。
【０１０４】
（３）ウェスタンブロッティング
上記にて回収したＣ２Ｃ１２細胞に細胞溶解バッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭピロリン酸、１０ｍＭフッ化ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＰＭＳＦ）を各ウェル１００μｌ添加して細胞を回収し、超音波処理後、１０，０００×ｇにて１５分間遠心し、上清を回収した。回収した上清は還元レムリ処理を行い、１サンプルあたり１０μｇずつ用いて７．５％アクリルアミドゲルにてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ終了後、定法に従ってＰＶＤＦ膜に転写した。
【０１０５】
上記にてタンパクが転写されたＰＶＤＦ膜は５％スキムミルク溶液を用いて、室温にて１時間のブロッキング反応を行った。ブロッキング終了後、抗αＡＭＰＫポリクローナル抗体（１／１０００ Ｔｏｔａｌ ＡＭＰＫ：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）およびリン酸化ＡＭＰＫモノクローナル抗体（１／１０００ ｐ−ＡＭＰＫ：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を用いて、室温にて１時間の一次抗体反応を行った。一次抗体反応終了後、ＨＲＰ−Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（ＺＹＭＥＤ）を用いて室温にて４５分間の二次抗体反応を行った。二次抗体反応終了後、ＥＣＬ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥヘルスケア）にて検出した。その結果を図３に示す。
【０１０６】
（４）活性評価
上記のウェスタンブロッティングにて検出されたバンド（図３を参照）をＳｃｉｏｎ Ｉｍａｇｅｓにて画像解析し、Ｔｏｔａｌ ＡＭＰＫに対するｐ−ＡＭＰＫの割合（ＡＭＰＫリン酸化活性）を算出した。その結果、図４に示すように、無血清培地のみを添加したブランクと比較して、タバコオスモチン組換えタンパク質の添加により、ＡＭＰＫがリン酸化されている割合（ＡＭＰＫリン酸化活性）が増加することが確認できた。
【０１０７】
実施例４：オスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例４）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１０８】
実施例５：保湿剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例５）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１０９】
実施例６：紫外線吸収剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例６）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１０】
実施例７：保湿剤と紫外線吸収剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例７）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１１】
実施例８：抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例８）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１２】
実施例９：保湿剤と抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例９）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１３】
実施例１０：保湿剤と紫外線吸収剤と抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例１０）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１４】
美容液の評価（比較例）
比較例４〜１０の美容液を用いて、５名のパネリストが、これを使用したときの、のび、つき、しっとり感、かさつきにくさについて評価し、次の基準に従って判定した。結果を表１に示す。表１から明らかなように、比較例の美容液はしっとり感、のび、かさつき難さのいずれかで良好と評価される場合もあるが、つきに関しては良好と評価されることはなかった。
判定基準：
◎：５名中４名以上が良好と評価した。
○：５名中３名が良好と評価した。
△：５名中２名が良好と評価した。
×：５名中１名以下が良好と評価した。
【０１１５】
【表１】
【０１１６】
美容液の評価（本発明例）
実施例４〜１０に示したオスモチンを含む組成の美容液を用いて、５名のパネリストが、これを使用したときの、のび、つき、しっとり感、かさつきにくさについて評価し、次の基準に従って判定した。結果を表２に示す。表２から明らかなように、本発明の美容液はのび、つき、しっとり感、かさつきにくさのいずれも良好であった。なお、いずれの場合も、本発明の美容液の抗老化効果は良好と評価された。
判定基準：
◎：５名中４名以上が良好と評価した。
○：５名中３名が良好と評価した。
△：５名中２名が良好と評価した。
×：５名中１名以下が良好と評価した。
【０１１７】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物により、抗老化作用、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などの効果を有する、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することができる。また、従来より、原料コストが安価であり、大量生産可能となり、長期にわたる使用に十分に耐え得ることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】実施例におけるタバコオスモチン組換えタンパク質の発現ベクターの構築方法を示す図である。
【図２】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す図である。
【図３】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質を添加したＣ２Ｃ１２細胞のライセートを用いたウェスタンブロッティングの結果を示す図である。
【図４】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質によるＣ２Ｃ１２細胞のＡＭＰＫリン酸化活性測定の結果を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【０１２０】
配列番号２〜５は合成オリゴヌクレオチドの配列である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オスモチンまたはオスモチン断片を有効成分とする化粧品組成物に関するものであり、特に、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品に利用されるものである。
【背景技術】
【０００２】
個体老化やこれに伴って発生する各種の疾患などは、分裂するすべての細胞の老化（分裂速度の低下、細胞機能の低下）と深く関わっている。例えば皮膚は、表皮細胞、繊維芽細胞、およびこれら細胞外の皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって水分保持、柔軟性、弾力性が確保され、肌は外観的にも張りと艶があり、みずみずしい状態に維持される。ところが、加齢や紫外線、乾燥、ストレスなどによって特に細胞外マトリックスや繊維芽細胞の機能低下が引き起こされ、その結果、皮膚の柔軟性、保湿機能は低下し、肌は張りや艶を失い、荒れ、しわ、くすみなどの老化症状が発生する。
【０００３】
細胞レベルで老化防止や抑制を目的に細胞賦活化剤、抗老化剤の探索が行われている。例えば動物由来の細胞賦活化剤としては、結合組織加水分解物（特許文献１）、胸腺・脾臓由来水溶性蛋白（特許文献２）、牛胎盤エキス（特許文献３）などが知られている。植物由来の細胞賦活化剤としては、ゴマ、サンヤク、トウガラシ、トウキ、ドクダミ、バクモンドウ（特許文献４）、アーモンド、セイヨウタンポポ、セイヨウニワトコ、センキュウ、センブリ、ソウハクヒ、トウニン、ニンジン、ホップ、ムクゲ、ヨクイニン（特許文献５、特許文献６）、ショウガ科ウコン属（特許文献７）、ハナヤスリ科ハナヤスリ属（特許文献８）の抽出物などが知られている。これらの一部は細胞賦活化剤、抗老化剤として医薬部外品や化粧品に利用されているが、満足すべき作用効果を発揮する細胞賦活化剤や抗老化剤は得られていない。
【０００４】
また、肌荒れを予防または治癒する検討もなされている。肌荒れとは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態の皮膚をいう。このような肌荒れはコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖・角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この肌荒れを予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給するなどの検討が行われている。
【０００５】
この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシルセラミドは、β−グルコセレブロシダーゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、肌荒れ防御のバリアの働きを持つと考えられる。洗浄剤による肌荒れにはセラミドの補充が有効であり、肌荒れの改善に高い効果を示すことが報告されている（非特許文献１）。
【０００６】
しかし、グルコシルセラミドが主成分である植物抽出液は、セラミドの代替としては未だ満足のいく結果は得られていないし、セラミドの合成も反応ステップが多いため、セラミドを大量に得るにはコスト高になる。
【０００７】
オスモチンは植物が浸透圧ストレスに応答して発現するＰＲ−５ファミリー・タンパク質であり、種々の生理作用が報告されている（非特許文献２）。また、非特許文献２にはタバコ由来オスモチンが、ヒト、マウスなどにおいて脂肪細胞から分泌され、抗メタボリックシンドローム作用を有する球状アディポネクチンと立体構造上の相同性を示すことが記載されている。さらに、タバコ由来オスモチンの受容体ＰＨＯ３６は酵母のＡｄｉｐｏＲホモログであることが記載されている。
【０００８】
加えて、非特許文献２には、骨格筋モデル細胞であるＣ２Ｃ１２を用いた検討により、オスモチンは、アディポネクチンと同様に、５’−ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）をリン酸化させうることが記載されている。また、オスモチンによるＡＭＰＫのリン酸化活性はＡｄｉｐｏＲの発現低下に伴って減弱することが示されている。そのため、オスモチンはＡｄｉｐｏＲを介してＡＭＰＫをリン酸化している可能性が示唆されている。
【０００９】
しかし、オスモチンまたはオスモチン断片の抗老化効果はこれまで報告されていなかった。
【特許文献１】特開昭６２−８４０２４号公報
【特許文献２】特開昭６３−１８８６９７号公報
【特許文献３】特開平０３−１４１２９９号公報
【特許文献４】特開平１０−４５６１５号公報
【特許文献５】特開平１０−０３６２７９号公報
【特許文献６】特開平１０−３６２７９号公報
【特許文献７】特開２００４−７５６３２号公報
【特許文献８】特開２００５−８９３７５号公報
【非特許文献１】ジャーナル オブ バイオサイエンス アンド バイオエンジニアリング，９４，１８７（２００２）
【非特許文献２】モレキュラー セル，１７，１７１（２００５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
哺乳類、特にヒトに対して細胞賦活化作用や抗老化作用を付与することは極めて重要な課題であり、動物由来、植物由来の細胞賦活化物質や抗老化剤は各種見つかっているが、実際には産業上利用可能な程度に十分かつ安定した効果は得られておらず、新規な細胞賦活化剤や抗老化剤が探索されているのが現状である。
【００１１】
本発明の目的は、上記問題点を改善した、抗老化作用、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などを有する化粧品組成物を提供することにある。さらに、本発明の目的は、当該化粧品組成物を含む化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意努力した結果、オスモチンまたはオスモチン断片を含む化粧品組成物により、抗老化効果が得られるということを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１３】
即ち、本発明は、以下の（１）〜（１０）の発明を包含する。
（１）オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。
（２）オスモチンまたはオスモチン断片が天然資源から抽出されたものであることを特徴とする（１）に記載の化粧品組成物。
（３）オスモチンまたはオスモチン断片がＤＮＡ組換え技術を用いて製造されたものであることを特徴とする（１）に記載の化粧品組成物。
（４）さらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有することを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載の化粧品組成物。
（５）美白剤が、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（６）抗老化剤が、抗炎症剤および／または抗酸化剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（７）保湿剤が、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（８）紫外線吸収剤が、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤及びベンゾフェノン系紫外線吸収剤からなる群から選択された少なくとも１種の化合物であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（９）抗菌剤が有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であることを特徴とする（４）に記載の化粧品組成物。
（１０）化粧品、医薬部外品、医療用品、または衛生用品として利用されるものであることを特徴とする（１）〜（９）のいずれかに記載の化粧品組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物により、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、抗老化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などの効果を有する、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することできる。
【００１５】
また、本発明の化粧品組成物で使用するオスモチンまたはオスモチン断片は植物由来であるため安全性に優れており、本発明の化粧品組成物は長期にわたる使用に十分に耐えることができる。さらに、オスモチンまたはオスモチン断片は、ＤＮＡ組換え技術により製造できるため原料コストが安価であり、大量生産が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明で使用するオスモチンまたはオスモチン断片は、天然資源から抽出するか、ＤＮＡ組換え技術を用いて製造してもよく、プレミックス品として使用してもよい。
【００１７】
天然資源から抽出したオスモチンとは、植物において浸透圧ストレスにより誘導されるオスモチンであり、オスモチン断片とは前記オスモチンの部分配列を指す。オスモチンおよびオスモチン断片は、具体的にはタバコから抽出することが可能であるが、特にこれに限定されず、例えば、ジャガイモ、トマト、ピーマン、あるいはトウガラシからも抽出することができる。
【００１８】
また、ＤＮＡ組換え技術により製造されたオスモチン、すなわちオスモチン組換えタンパク質（以下、単に「本発明にかかる組換えタンパク質」ともいう）は、天然では浸透圧ストレスによって誘導されるオスモチン（以下、「オスモチン」または「Ｏｓｍ」ともいう）の組換えタンパク質であって、５’−ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（以下、「ＡＭＰＫ」ともいう）をリン酸化する活性（以下、「ＡＭＰＫリン酸化活性」ともいう）を有するものである。ＡＭＰＫリン酸化活性は、Ｏｓｍが有する生理活性の１つである。したがって、本発明にかかる組換えタンパク質は、ＡＭＰＫリン酸化活性以外の生理活性を有していてもよい。ＡＭＰＫリン酸化活性以外の生理活性としては、例えば、抗菌活性が挙げられる。本明細書において、「タンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性」とは、該タンパク質をＡＭＰＫに作用させた時の全ＡＭＰＫ（以下、「ｔｏｔａｌ−ＡＭＰＫ」または「ｔ−ＡＭＰＫ」ともいう）中、リン酸化を受けたＡＭＰＫ（以下、「ｐ−ＡＭＰＫ」ともいう）の割合によって表わされる。つまり、ｔ−ＡＭＰＫ中、ｐ−ＡＭＰＫの割合が高いほど、該タンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性が高いことを示す。なお、ＡＭＰＫリン酸化活性は、本明細書に記載されている方法により測定することができる。本明細書中で使用される場合、用語「タンパク質」は、「ポリペプチド」または「ペプチド」と交換可能に使用される。
【００１９】
本発明で使用する組換えタンパク質は、例えば、植物、大腸菌、酵母、真菌類、昆虫、および哺乳類等を宿主として製造されることが好ましく、中でも、大腸菌を宿主として製造されることがより好ましい。
【００２０】
本発明で使用する組換えタンパク質は、上述したように、ＡＭＰＫリン酸化活性を有する。上記ＡＭＰＫリン酸化活性は、後述する実施例に記載の方法により測定することができる。ここで、本発明で使用する組換えタンパク質の構造について具体的に説明する。本発明で使用する組換えタンパク質としては、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４（タバコ由来）、ＡＡＵ９５２４１（ジャガイモ由来）、ＡＡＣ６４１７１（トマト由来）、ＣＡＣ３４０５５（ピーマン由来）、あるいはＡＡＰ８６７８１（トウガラシ由来）として登録されているアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。また、本発明で使用する組換えタンパク質は、ポリペプチド以外の構造を含む複合ポリペプチドであってもよい。本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド以外の構造」としては、糖鎖およびイソプレノイド基等を挙げることができるが、特に限定されない。さらに、本発明で使用する組換えタンパク質は、Ｎ末端またはＣ末端に付加的なポリペプチドを含むものであってもよい。付加的なポリペプチドとしては、例えば、Ｈｉｓ、Ｍｙｃ、Ｆｌａｇ等のエピトープ標識ポリペプチドや、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグが挙げられる。必要に応じて、これらの付加的なポリペプチドを利用して、本発明で使用する組換えタンパク質のアフィニティー精製を行ってもよい。
【００２１】
また、一実施形態において、本発明で使用する組換えタンパク質は、Ｏｓｍの変異体でありうる。つまり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４、ＡＡＵ９５２４１、ＡＡＣ６４１７１、ＣＡＣ３４０５５、あるいはＡＡＰ８６７８１として登録されているアミノ酸配列からなるポリペプチドの変異体でありうる。具体的には、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。なお、本明細書中においてタンパク質またはポリペプチドに関して用いられる場合、用語「変異体」は、ＡＭＰＫリン酸化活性を有するポリペプチドが意図される。
【００２２】
また、上記変異体には、欠失、挿入、逆転、反復、およびタイプ置換（例えば、親水性残基の別の残基への置換、しかし通常は強い親水性の残基を強い疎水性の残基には置換しない）を含む変異体が含まれる。特に、ポリペプチドにおける「中性」アミノ酸置換は、一般的にそのポリペプチドの活性にほとんど影響しない。
【００２３】
また、好ましい変異体として、保存性もしくは非保存性アミノ酸置換、欠失、または付加を有する変異体が挙げられる。このような変異体もまた、本発明で使用する組換えタンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性を変化させない。代表的な保存性置換としては、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの中での１つのアミノ酸から別のアミノ酸への置換；ヒドロキシル残基ＳｅｒとＴｈｒの間の交換、酸性残基ＡｓｐとＧｌｕの間の交換、アミド残基ＡｓｎとＧｌｎの間の置換、塩基性残基ＬｙｓとＡｒｇの間の交換、ならびに芳香族残基ＰｈｅとＴｙｒの間の置換を挙げることができる。
【００２４】
ポリペプチドを構成するアミノ酸配列中のいくつかのアミノ酸が、このポリペプチドの構造または機能に有意に影響することなく容易に改変され得ることは、当該分野において周知である。
【００２５】
当業者は、周知技術を使用してポリペプチドのアミノ酸配列において１個または数個のアミノ酸を容易に変異させることができる。例えば、公知の点変異導入法に従えば、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの任意の塩基を変異させることができる。また、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの任意の部位に対応するプライマーを設計して欠失変異体または付加変異体を作製することができる。さらに、本明細書中に記載される方法を用いれば、作製した変異体が所望のＡＭＰＫリン酸化活性を有するか否かを容易に決定することができる。
【００２６】
また、本発明にかかる組換えタンパク質は、一実施形態として、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第１位〜第２２５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチドでありうる。ＯｓｍにおいてＣ末端側の２０アミノ酸残基からなるポリペプチドは、タンパク合成後、液胞へ輸送されるためのシグナル配列であり、削除してもＯｓｍの活性には影響しないことが報告されている。したがって、上記ポリペプチドもまた、ＡＭＰＫリン酸化活性を有するため、本発明で使用する組換えタンパク質に含まれる。
【００２７】
さらに、本発明で使用する組換えタンパク質は、別の実施形態として、ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第２位〜第２４５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチド；ＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号ＣＡＡ４３８５４として登録されているアミノ酸配列の第２位〜第２２５位からなるアミノ酸配列からなるポリペプチドでありうる。
【００２８】
オスモチンまたはオスモチン断片は、プレミックス品として使用してもよい。「プレミックス品」とは機能性の素材の他に、分散剤などを添加したり、溶媒で化粧品製造時に使いやすいように希釈したりしたものである。
【００２９】
オスモチンおよびオスモチン断片は、単独で使用してもよいが、２種以上を併用することもできる。
【００３０】
化粧品組成物中のオスモチンまたはオスモチン断片の添加量は、オスモチンまたはオスモチン断片の有する作用を損なわない範囲で添加すれば良く、通常０．００１〜５０質量％が好ましく、０．１〜２０質量％がより好ましく、１〜１５質量％がさらに好ましく、３〜１０質量％が特に好ましい。ここで、化粧品組成物に添加する前記オスモチンまたはオスモチン断片の使用形態は任意である。例えば、オスモチンまたはオスモチン断片を天然あるいはＤＮＡ組換え技術を用いた宿主からの抽出物のまま、あるいは精製した高純度品、もしくは水に懸濁し、あるいはエタノール等の有機溶媒に溶かした後使用してもよい。
【００３１】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、化粧品配合剤として、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有してもよい。これらの化粧品配合剤により、美白効果、保湿効果、紫外線吸収効果及び抗菌効果を付加することができる。また、抗老化剤については、オスモチンまたはオスモチン断片との相乗効果が期待できる。
【００３２】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、美白剤を含有してもよい。美白剤は、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であってもよい。
【００３３】
美白剤としては、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン及びその誘導体、ルシノール、エデト酸及びその誘導体、並びに胎盤抽出物、ｔ−ＡＭＣＨＡ、アセロラエキス、エイジツエキス、エラグ酸またはその誘導体、火辣エキス、カミツレエキス，カミツレ花エキス・（尿素）、キウイエキス、グルタチオン、トコトリエノール、フェルラ酸、ラズベリーケトン、ルシノール、ウワウルシエキス、ジパルミチン酸ピリドキシン、イオウ、コウジ酸またはその誘導体、グルコサミンまたはその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸またはその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、油溶性カンゾウエキス等が例示される。
【００３４】
これらの美白剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３５】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、さらに他の抗老化剤を含有してもよい。抗老化剤は、抗炎症剤および／または抗酸化剤であってもよい。
【００３６】
抗炎症剤としては、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸及びその塩、イソプロピルアミノカプロン酸及びその塩、アラントイン、塩化リゾチーム、グアイアズレン、サリチル酸メチル、γ−オリザノールが例示され、抗酸化剤としては、αカロチン、βカロチン、γカロチン、リコピン、クリプトキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、イソゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン等のカロチノイド；１，４−ジアザシクロオクタン、２，５−ジメチルフラン、２−メチルフラン、２，５−ジフェニルフラン、１，３−ジフェニルイソベンゾフラン、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、ｄトコフェロール、ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、アラニン又はそのアルキルエステル；ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、アスコルビン酸、タンニン酸、エピカテキン、エピカロカテキン、エピカテキンガレート、エピカロカテキンガレート等のタンニン類、ルチン等のフラボノイド、その他没食子酸プロピル、アスタキサンチン、カロチン、トコフエロール、アスコルビン酸、エデト酸四ナトリウム、エリソルビン酸、酢酸トコフェロール、酢酸レチノール、ジビチルヒドロキシトルエン、ステアリン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、メチルシラノールジオレイルトコフェロール・無水ケイ酸混合物、ニコチン酸ベンジル、感光素４０１号、アスパラギン酸、アデノシン三リン酸２Ｎａ、アミノ酪酸、ウイキョウエキス、オランダカラシエキス、カフェイン、クロレラエキス、サフランエキス、ショウキョウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、葉酸、レチノール、パルミチン酸レチノール、イノシトール、ウコンエキス、オリザノール、カロチン、カロットエキス、コムギ胚牙エキス、センキュウエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、ドダミエキス、トコフエロール、ニコチン酸トコフエロール、ボタンエキス、エルゴカルシフェロール、ジカプリル酸ピリドキシン、バチルアルコール、ステアリン酸グリチルレチニル、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、塩酸ジフェンヒドラミン、塩化リゾチーム、アミノカプロン酸、レイシエキス、ヨクイニン、メリロートエキス、ボタンエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、センキュウエキス、ゲンノショコエキス、アラントイン、アルニカエキス、アルニカ花エキス、オウゴンエキス、オウレンエキス、オドリコソウエキス、ガマ穂エキス、カミツレエキス、カラミン、カワラヨモギエキス、甘草エキス、グアイアズレン、クチナシエキス、クマザサエキス、グリチルリチン酸２Ｋ、グリチルレチン酸ステアリル、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、コンフリーエキス、コンフリー葉エキス、酢酸トコフエロール、サリチル酸メチル、酸化亜鉛、シコンエキス，ムラサキ根エキス、シソエキス、シソ葉エキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、スイカズラエキス、セージエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、トウキンセンカエキス、ピリドキシンＨＣｌ、ビワ葉エキス、フユボダイジュエキス、モモ葉・果実エキス、ヤグルマギクエキス、ユキノシタエキス、ヨモギエキス、レタスエキス、ローマカミツレエキス、ワレモコウエキス及びカカロール、ポリアミン等が例示される。
【００３７】
これらの抗老化剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３８】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、保湿剤を含有してもよい。保湿剤としては、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であればよく、親水性保湿剤として、アミノ酸，ペプチド，蛋白質，高級アルコール及びこれらの誘導体，親油性保湿剤として、リン脂質 ，糖 脂質 ，ステロイド類を用いてもよい。
【００３９】
保湿剤としては、ピリドンカルボン酸ナトリウム、グリコール、グリセリン、グルコース、マルトース、マルチトール、ショ糖、フラクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトトリオース、スレイトール、エリスリトール、デンプン分解糖還元アルコール、ソルビトール、エチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ジグリセリン、トリグリセリン、テトラグリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−プロパンジオール、その他セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸またはそのエステル類、エイコサペンタエン酸またはそのエステル類、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物またはその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、ピロリドンカルボン酸、トマトエキス、ツバキ油、大豆リン脂質、ヒアルロン酸、トレオニン、グリコール酸アンモニウム、アルギン酸メチルシラノール、ヨクイニン、トウキエキス、トウキ根エキス、ダイズエキス、アスパラガスエキス、ＤＮＡ−Ｎａ、ＰＣＡ−Ｎａ、ＲＮＡ−Ｎａ、アシタバエキス、アスパラギン酸、アマチヤエキス、アラニン、アルギニン、アルギン酸Ｎａ、アルテアエキス、アロエベラエキスー、オイスタエキス、オオムギバクガエキス、カキ葉、加水分解ケラチン、加水分解コラーゲン、加水分解コンキオリン、加水分解卵殻膜、加水分解卵白、加水分解シルク、加水分解ダイズタンパク、褐藻エキス、カリンエキス、キイチゴエキス、キシリトール、キトサン、キュウリエキス、キュウリ果実エキス、グアバ菓エキス、クインスシードエキス、グリシン、グリセリン、グルコース、グレープフルーツエキス、グレープフルーツ果実エキス、クレマティスエキス、ゴボウエキス、コメ発酵液、コンドロイチン硫酸Ｎａ、魚コラ一ゲノ、サンザシエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、グリセリン、シスチン、システイン、スギナエキス、ゼニアオイエキス、セリン、ソルビトール、ダイズタンパク、トマトエキス、乳酸Ｎａ、乳酸桿菌、ダイズ醗酵エキス、尿素仰／ノバラエキス・アーモンド浬、コーン油、ハチミツ、ヒアルロン酸Ｎａ、フクノエキス、ベタイン、ヘチマエキス、マルチトール、マルトース、マンニトール、ユリエキス、ラクトフェリン、リシン、リンゴエキス、レンゲソウエキス、ローヤルゼリー、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール１０００、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソブチル、ヘキシルデカノール、乳酸ミリスチル、ラノリン脂肪酸、トリカプリルグリセリル、オレイルアルコール、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸デシル、還元ラノリン、オクチルドデカノール、アーモンド油、アボカド油、オリーブ油、オレイン酸、オレンジラフイー油、カカオ脂、カロットエキス、ゴマ油、サザンカ油、サフラワー油、ジヒドロコレステロール、スクワラン、ステアリン酸コレステリル、セラミド２、月見草油、ヒマシ油、ヒマワリ油、セフニド３、ヒマワリ種子油、ハイブリッドヒマワリ油、フィトスフィンゴシン、ブドウ種子油、ホホバ油、ホホバ種子油、ミネラルオイル、ミンク油、マカデミアナッツ油、メドウフォーム油、ユーカリ油、ユーカリ葉油、ラノリン、リノール酸、ローズヒップ油、ワセリン及びポリグルタミン酸等が例示される。
【００４０】
これらの保湿剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４１】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、紫外線吸収剤を含有してもよい。紫外線吸収剤としては、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤などを使用しても良い。
【００４２】
紫外線吸収剤として、安息香酸アミル、パラアミノ安息香酸オクチル、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸フェニル、サリチル酸オクチル、サリチル酸ベンジル、サリチル酸ブチルフェニル、サリチル酸ホモメンチル、ケイ皮酸ベンジル、パラメトキシケイ皮酸２−エトキシエチル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、ジパラメトキシケイ皮酸モノ２−エチルヘキサン酸グリセリル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、ジイソプロピル・ジイソプロピルケイ皮酸エステル混合物、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸およびその塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルフォン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシ−ジベンゾイルメタン、２、４、６−トリアニリノ−ｐ−（カルボ−２’−エチルヘキシル−１’−オキシ）−１、３、５−トリアジン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、パラジメチルアミノ安息香酸２−エチルヘキシル、パラアミノ安息香酸エチル、トプチルメトキシジペンゾイルメタン、オキシベンゾン−１、グアイアズレンスルホン酸エチル、酸化亜鉛、シノキサート、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレートなどが例示される。
【００４３】
これらの紫外線吸収剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４４】
本発明の化粧品組成物は、オスモチンまたはオスモチン断片以外に、抗菌剤を含有してもよい。抗菌剤は、有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であってもよい。
【００４５】
抗菌剤としては、オウバク抽出液、ハロカルバン、クロロフェネシン、塩化リゾチーム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、イソプロピルメチルフェノール、チモール、ヘキサクロロフェン、ベルベリン、チオキソロン、サリチル酸およびそれらの誘導体、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、パラクロルメタクレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール、石炭酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、ヘキサクロロフェン、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、感光素、ビス（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛、チアントール、ヒノキチオール、トリクロサン、トリクロロヒドロキシジフェニルエーテル、クロルヘキシジングルコン酸塩、フェノキシエタノール、レゾルシン、アズレン、サリチル酸、ジンクピリチオン、モノニトログアヤコールナトリウム、ウイキョウエキス、サンショウエキス、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及びウンデシレン酸誘導体などが例示される。
【００４６】
これらの抗菌剤は、１種を単独で、若しくは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４７】
オスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物の形態は特に制限されない。したがって、固体、液体、ペースト、ゼリー、粉末などのいずれの状態をとるものであってもよい。このような状態を形成するために、例えばゲル化剤を用いて固化したり、液体を用いて分散状態にしたりすることができる。また、溶媒を添加して溶液にしたり、噴霧乾燥して粉末状にしたりすることもできる。
【００４８】
例えば、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は化粧品として使用することができる。化粧品としては、化粧石鹸、シャンプー、洗顔料、リンス、アイクリーム、アイシャドウ、クリーム・乳液、化粧水、香水、おしろい、化粧油、頭髪用化粧品、染毛料、練香水、パウダー、パック、クレンジングクリーム、ひげそり用クリーム、ひげそり用ローション、日焼けオイル、日焼け止めオイル、日焼けローション、日焼け止めローション、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム、ファンデーション、粉末香水、ほお紅、マスカラ、眉墨、爪クリーム、美爪エナメル、美爪エナメル除去液、洗毛料、浴用化粧品、口紅、リップクリーム、アイライナー、歯磨き、デオドラント剤、オーデコロン、養毛剤および育毛剤などが例示される。また、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、軟膏剤や湿布剤などとして使用することもできる。
【００４９】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物には、使用目的に応じて様々な成分をさらに添加させておくことができる。
【００５０】
例えば、オスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、非イオン性界面活性剤、低級アルコール、多価アルコール、油類、高級脂肪酸、高級アルコール、合成エステル、シリコーンなどに溶解して用いてもよい。
【００５１】
非イオン界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ペンタ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン等）；グリセリンポリグリセリン脂肪酸類（例えば、モノ綿実油脂肪酸グリセリン、モノエルカ酸グリセリン、セスキオレイン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、α，α’−オレイン酸ピログルタミン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸等）；プロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、モノステアリン酸プロピレングリコール等）；硬化ヒマシ油誘導体；グリセリンアルキルエーテル等が挙げられる。
【００５２】
ＰＯＥ系の親水性非イオン界面活性剤としては、例えば、ＰＯＥ−ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンテトラオレエート等）；ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート、ＰＯＥ−ソルビットモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビットペンタオレエート、ＰＯＥ−ソルビットモノステアレート等）；ＰＯＥ−グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−グリセリンモノステアレート、ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート、ＰＯＥ−グリセリントリイソステアレート等のＰＯＥ−モノオレエート等）；ＰＯＥ−脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ジステアレート、ＰＯＥ−モノジオレエート、ジステアリン酸エチレングリコール等）；ＰＯＥ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ−ラウリルエーテル、ＰＯＥ−オレイルエーテル、ＰＯＥ−ステアリルエーテル、ＰＯＥ−ベヘニルエーテル、ＰＯＥ−２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ−コレスタノールエーテル等）；プルロニック型類（例えば、プルロニック等）；ＰＯＥ・ＰＯＰ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ・ＰＯＰ−セチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−２−デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−モノブチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−水添ラノリン、ＰＯＥ・ＰＯＰ−グリセリンエーテル等）；テトラＰＯＥ・テトラＰＯＰ−エチレンジアミン縮合物類（例えば、テトロニック等）；ＰＯＥ−ヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体（例えば、ＰＯＥ−ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油トリイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油マレイン酸等）；ＰＯＥ−ミツロウ・ラノリン誘導体（例えば、ＰＯＥ−ソルビットミツロウ等）；アルカノールアミド（例えば、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ラウリン酸モノエタノールアミド、脂肪酸イソプロパノールアミド等）；ＰＯＥ−プロピレングリコール脂肪酸エステル；ＰＯＥ−アルキルアミン；ＰＯＥ−脂肪酸アミド；ショ糖脂肪酸エステル；アルキルエトキシジメチルアミンオキシド；トリオレイルリン酸等が挙げられる。
【００５３】
低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール等が挙げられる。
【００５４】
多価アルコールとしては、例えば、２価のアルコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、テトラメチレングリコール、２，３−ブチレングリコール、ペンタメチレングリコール、２−ブテン−１，４−ジオール、ヘキシレングリコール、オクチレングリコール等）；３価のアルコール（例えば、グリセリン、トリメチロールプロパン等）；４価アルコール（例えば、１，２，６−ヘキサントリオール等のペンタエリスリトール等）；５価アルコール（例えば、キシリトール等）；６価アルコール（例えば、ソルビトール、マンニトール等）；多価アルコール重合体（例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、ジグリセリン、ポリエチレングリコール、トリグリセリン、テトラグリセリン、ポリグリセリン等）；２価のアルコールアルキルエーテル類（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、エチレングリコールモノフェニルエーテル、エチレングリコールモノヘキシルエーテル、エチレングリコールモノ２−メチルヘキシルエーテル、エチレングリコールイソアミルエーテル、エチレングリコールベンジルエーテル、エチレングリコールイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル等）；２価アルコールアルキルエーテル類（例えば、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエチルエーテル、トリエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールイソプロピルエーテル、ジプロピレングリコールメチルエーテル、ジプロピレングリコールエチルエーテル、ジプロピレングリコールブチルエーテル等）；２価アルコールエーテルエステル（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノフェニルエーテルアセテート、エチレングリコールジアジベート、エチレングリコールジサクシネート、ジエチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、ジエチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノエチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノプロピルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノフェニルエーテルアセテート等）；グリセリンモノアルキルエーテル（例えば、キミルアルコール、セラキルアルコール、バチルアルコール等）；糖アルコール（例えば、ソルビトール、マルチトール、マルトトリオース、マンニトール、ショ糖、エリトリトール、グルコース、フルクトース、デンプン分解糖、マルトース、キシリトース、デンプン分解糖還元アルコール等）；グリソリッド；テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＥ−テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＰ−ブチルエーテル；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ブチルエーテル；トリポリオキシプロピレングリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテルリン酸；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ペンタンエリスリトールエーテル、ポリグリセリン等が挙げられる。
【００５５】
油類としては、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油およびその硬化油、流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンが挙げられる。
【００５６】
高級脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール、ホホバアルコール、ラノリンアルコール、バチルアルコール、２−デシルテトラテセシノール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等が挙げられる。合成エステルとしては、例えば、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等が挙げられる。シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキサン等の環状ポリシロキサン、シリコーン樹脂等の三次元網目構造のもの等が挙げられる。
【００５７】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、化粧品以外に、医薬部外品、医療用品、衛生用品に配合して利用されることができる。
【００５８】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物を、医薬部外品、医療用品、衛生用品の形態で実施する場合、剤形は限定されず、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、丸剤、錠剤、固形剤、液剤、ゲル、気泡、乳液、クリーム、軟膏、シート、ムース、浴用剤など多様なものとすることができる。
【００５９】
医薬部外品、医療用品、衛生用品としては、例えば内用・外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの頭髪化粧料、ファンデーション、白粉、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛などのメークアップ化粧料、美爪料などの仕上げ用化粧料、香水類、浴用剤、その他、歯磨き類、口中清涼剤・含嗽剤、液臭・防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュなどが挙げられる。また、本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、軟膏剤や湿布剤などとして使用することもできる。
【００６０】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が期待できる限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００６１】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、医薬部外品、医療用品、衛生用品に使用される成分や添加剤を併用して配合することができる。これらの成分や添加剤としては、ロウ類、鉱物油、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、金属セッケン、ガム質および水溶性高分子化合物、界面活性剤、ビタミン類、アミノ酸、動物あるいは植物、生薬の抽出物やエキス、微生物培養代謝物、α−ヒドロキシ酸、無機顔料、収斂剤、殺菌・消毒薬、頭髪用剤、香料、色素・着色剤、甘味料、栄養強化剤などが挙げられる。
【００６２】
例えば、ロウ類としては、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウなどが挙げられる。
【００６３】
例えば、鉱物油としては、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス、ポリエチレン末、スクワレン、スクワラン、プリスタンなどが挙げられる。
【００６４】
例えば、脂肪酸類としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸などの合成脂肪酸が挙げられる。
【００６５】
例えば、アルコール類としては、エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノールなどの合成アルコール、酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、バチルアルコール、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、ショ糖などの多価アルコール類などが挙げられる。
【００６６】
例えば、エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコールなどが挙げられる。
【００６７】
例えば、金属セッケンとしては、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛などが挙げられる。
【００６８】
例えば、ガム質および水溶性高分子化合物としては、アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシアルキルキチン、キトサン、ヒドロキシアルキルキチン、低分子キトサン、キトサン塩、硫酸化キチン、リン酸化キチン、アルギン酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイドまたはその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミンなどが挙げられる。
【００６９】
例えば、界面活性剤としては、アニオン界面活性剤（カルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アミン塩、四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤（カルボン酸型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤）、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤などが挙げられる。
【００７０】
例えば、ビタミン類としては、ビタミンＡ群ではレチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群では、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群では、アスコルビン酸およびその誘導体、ビタミンＤ群では、エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群では、トコフェロールおよびその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群では、フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）などが挙げられる。
【００７１】
例えば、アミノ酸としては、バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、あるいはピロリドンカルボン酸の如きアミノ酸誘導体などが挙げられる。
【００７２】
例えば、動物あるいは植物、生薬の抽出物やエキスとしては、アセンヤク（阿仙薬）、アシタバ、アセロラ、アルテア、アルニカ、アボカド、アマチャ（甘茶）、アロエ、アロエベラ、イラクサ、イチョウ（銀杏葉、銀杏）、ウイキョウ（茴香）、ウコン（鬱金）、ウスバサイシン（細辛）、ウメ（烏梅）、ウラジロガシ、ウワウルシ、ノイバラ（営実）、ヒキオコシ（延命草）、オウギ（黄耆）、コガネバナ（オウゴン）、ヤマザクラ（桜皮）、キハダ（黄柏）、オウレン（黄連）、オタネニンジン（人参）、オトギリソウ（弟切草）、オドリコソウ、オランダガラシ、オレンジ、イトヒメハギ（遠志）、ウツボグサ（夏枯草）、ツルドクダミ（何首烏）、エンジュ（槐花）、ヨモギ（ガイ葉）、ガジュツ（莪朮）、クズ（葛根）、カノコソウ（吉草根）、カミツレ、キカラスウリ（瓜呂根）、カワラヨモギ（茵チン蒿）、カンゾウ（甘草）、フキタンポポ（款冬花、款冬葉）、キイチゴ、キウイ果実、キキョウ（桔梗）、キク（菊花）、キササゲ（梓実）、ミカン属植物果実（枳実）、タチバナ（橘皮）、キュウリ、ウドまたはシシウド（羌活、独活）、アンズ（杏仁）、クコ（地骨皮、枸杞子、枸杞葉）、クララ（苦参）、クスノキ、クマザサ、グレープフルーツ果実、ニッケイ（桂皮）、ケイガイ（ケイガイ）、エビスグサ（決明子）、マルバアサガオまたはアサガオ（ケン牛子）、ベニバナ（紅花）、ゴバイシ（五倍子）、コンフリー、コパイバ、クチナシ（山梔子）、ゲンチアナ、ホオノキ（厚朴）、ヒナタイノコズチ（牛膝）、ゴシュユ（呉茱萸）、ゴボウ、チョウセンゴミシ（五味子）、米、米ぬか、コムギ、ミシマサイコ（柴胡）、サフラン、サボンソウ、サンザシ（山ザ子）、サンショウ（山椒）、サルビア、サンシチニンジン（三七人参）、シイタケ（椎茸）、ジオウ（地黄）、シクンシ（使君子）、ムラサキ（紫根）、シソ（紫蘇葉、紫蘇子）、カキ（柿蒂）、シャクヤク（芍薬）、オオバコ（車前子、車前草）、ショウガ（生姜）、ショウブ（菖蒲）、トウネズミモチ（女貞子）、シモツケソウ、シラカバ、スイカズラ（金銀花、忍冬）、セイヨウキヅタ、セイヨウノコギリソウ、セイヨウニワトコ、アズキ（赤小豆）、ニワトコ（接骨木）、ゼニアオイ、センキュウ（川キュウ）、センブリ（当薬）、クワ（桑白皮、桑葉）、ナツメ（大棗）、ダイズ、タラノキ、チクセツニンジン（竹節人参）、ハナスゲ（知母）、ワレモコウ（地楡）、ドクダミ（十薬）、フユムシナツクサタケ（冬虫夏草）、トウガラシ、ホオズキ（登呂根）、タチジャコウソウ、リョクチャ（緑茶）、コウチャ（紅茶）、チョウジ（丁子）、ウンシュウミカン（陳皮）、ツバキ、ツボクサ、トウガラシ（番椒）、トウキ（当帰）、トウキンセンカ、ダイダイ（橙皮）、ワレモコウ（地楡）、トウモロコシ（南蛮毛）、トチュウ（杜仲、杜仲葉）、トマト、ナンテン（南天実）、ニンニク（大サン）、オオムギ（麦芽）、ハクセン（白蘚皮）、ジャノヒゲ（麦門冬）、パセリ、バタタ、ハッカ（薄荷）、ハマメリス、バラ、ビワ葉（枇杷葉）、マツホド（茯リョウ）、ブドウまたはその葉、ヘチマ、ボダイジュ、ボタン（牡丹皮）、ホップ、マイカイ（マイ瑰花）、松葉、マロニエ、マンネンロウ、ムクロジ、メリッサ、メリロート、ボケ（木瓜）、モヤシ、モモ（桃仁、桃葉）、ヒオウギ（射干）、ビンロウジュ（檳ロウ子）、メハジキ（益母草）、ヤグルマギク、ユキノシタ（虎耳草）、ヤマモモ（楊梅皮）、ヤシャブシ（矢車）、ハトムギ（ヨクイニン）、モウコヨモギ、ヤマヨモギ、ラベンダー、リンゴ果実、マンネンタケ（霊芝）、レモン果実、レンギョウ（連翹）、レンゲソウ、ゲンノショウコ（老鸛草）、ハシリドコロ（ロート根）、鶏トサカ、牛・人の胎盤抽出物、豚・牛の胃、十二指腸、或いは腸の抽出物若しくはその分解物、水溶性コラーゲン、水溶性コラーゲン誘導体、コラーゲン加水分解物、エラスチン、エラスチン加水分解物、水溶性エラスチン誘導体、シルク蛋白、シルク蛋白分解物、牛血球蛋白分解物などが挙げられる。
【００７３】
例えば、微生物培養代謝物としては、酵母エキス、亜鉛含有酵母エキス、ゲルマニウム含有酵母エキス、セレン含有酵母エキス、マグネシウム含有酵母エキス、米醗酵エキス、ユーグレナ抽出物、脱脂粉乳の乳酸発酵物などが挙げられる。
【００７４】
例えば、α−ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸などが挙げられる。
【００７５】
例えば、無機顔料としては、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミンなどが挙げられる。
【００７６】
例えば、収斂剤としては、乳酸、酒石酸、コハク酸、クエン酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、ｐ−フェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レソルシン、塩化第二鉄、タンニン酸などが挙げられる。
【００７７】
例えば、殺菌・消毒薬としては、アクリノール、イオウ、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルロザニリン、クレゾール、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリンまたはその加水分解物などが挙げられる。
【００７８】
例えば、頭髪用剤としては、二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニウム液、ジンクピリチオン、ビフェナミン、チアントール、カスタリチンキ、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チオグリコール酸などが挙げられる。
【００７９】
例えば、香料としては、ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、檜精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油などの植物性香料、その他合成香料などが挙げられる。
【００８０】
例えば、色素・着色剤としては、赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチンなどが挙げられる。
【００８１】
例えば、甘味料としては、砂糖、甘茶、果糖、アラビノース、ガラクトース、キシロース、マンノース、麦芽糖、蜂蜜、ブドウ糖、ミラクリン、モネリンなどが挙げられる。
【００８２】
例えば、栄養強化剤としては、貝殻焼成カルシウム、シアノコラバミン、酵母、小麦胚芽、大豆胚芽、卵黄粉末、ヘミセルロース、ヘム鉄などが挙げられる。
【００８３】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物に配合することができる成分や添加剤としては、その他、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質およびその分解物、動・植物性多糖類およびその分解物、動・植物性糖蛋白質およびその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料、酵素などが挙げられる。
【００８４】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物は、抗老化効果、保湿効果、コラーゲン生成促進効果、細胞賦活化効果、育毛効果及び肌荒れ改善効果などが必要とされる場合に広く使用することができる。使用量は、所期の抗老化効果、保湿効果、コラーゲン生成促進効果、細胞賦活化効果、育毛効果及び肌荒れ改善効果などを十分に奏する範囲内で決定する。
【００８５】
本発明の化粧品組成物は、前記のような効果から、化粧品組成物や化粧品として利用されることは勿論であるが、そのほかにも、医薬部外品組成物、医療用品組成物、衛生用品組成物、機能性食品組成物や、医薬部外品、医療用品、衛生用品などの形態やプレミックス品などの形態で利用することができる。
【００８６】
なお、本明細書において「細胞賦活化」とは、細胞機能や細胞活性を維持または亢進させることを指している。「細胞賦活化」の結果、細胞機能や細胞活性の低下を抑制、すなわち細胞の老化を抑制することができる。したがって、「細胞賦活化剤」は、「抗老化剤」としての有用性を持つ。例えば、皮膚細胞における「細胞賦活化、抗老化」とは、加齢や光老化による基底膜の構造変化の蓄積に伴う皮膚細胞の機能低下を小さくすることで、皮膚のしわ、たるみ、硬化等を防止、改善して弾力のある若々しい健康な肌の状態を維持することなどを指している。また、例えば、毛乳頭細胞または毛母細胞においては、加齢、ストレス、ホルモンバランスによる毛乳頭細胞または毛母細胞の機能低下を小さくすることで、ヘアサイクルを維持して脱毛を抑えることなどを指している。
【実施例】
【００８７】
以下の実施例により、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、これらに何ら限定されるものではない。
【００８８】
実施例１ オスモチンのＤＮＡ組換え技術による製造
〔調製例１：タバコＢＹ−２培養細胞からのタバコオスモチン遺伝子の単離〕
タバコＢＹ−２培養細胞から、図１に示すフローで、タバコオスモチン遺伝子を単離した。以下、タバコオスモチン遺伝子の単離方法について詳細に説明する。
【００８９】
（１）鋳型ＤＮＡサンプルの調製
タバコＢＹ−２培養細胞より、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ ＲＮＡ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡ ３μｇに対してＲＱ１ ＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ ＤＮａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＤＮａｓｅ除去処理を行い、ＴａｑＭａｎ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡ（以下、「試料１」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９０】
（２）タバコオスモチン遺伝子に相補的なオリゴヌクレオチド（ＰＣＲ用のプライマー）の合成
パーキンエルマー社製ＤＮＡシンセサイザー３９２型を用いて、ホスホアミダイト法にて、配列番号２および３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチド（以下、それぞれ、「オリゴ１」および「オリゴ２」ともいう）を合成した。合成はマニュアルに従い、各種オリゴヌクレオチドの脱保護はアンモニア水で５５℃、一夜実施した。オリゴヌクレオチドの精製は、パーキンエルマー社ＯＰＣカラムにて実施するか、もしくはＤＮＡ合成受託会社（（株）日本バイオサービス、オペロン（株）、シグマジェノシス（株）等）に依頼した。なお、オリゴ１はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第１位〜第２０位の塩基と相同な配列からなるフォワードプライマーであり、オリゴ２はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第７１８位〜第７３８位の塩基に相補的な配列からなるリバースプライマーである。
【００９１】
（３）ＰＣＲ法によるタバコオスモチン遺伝子の増幅
上記試料１を含む溶液２μｌ、オリゴ１およびオリゴ２を各２５ｐｍｏｌｅｓ、および１０×ＰＣＲｍｉｘ、０．２ｍＭ ｄＮＴＰｓ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼにミリＱを加えて全量を５０μｌとした。ＰＣＲ反応は最初に９４℃で１分間の熱処理後、次いで９４℃−１５秒間のデナチュレーション工程、及び５５℃−３０秒間のアニーリング及び６８℃−１分間のＤＮＡ伸長反応工程を１サイクルとして、これを計３０サイクル行うことにより実施した。
【００９２】
（４）タバコオスモチン遺伝子のクローニング
上記で増幅したタバコオスモチン遺伝子を含むＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、タバコオスモチン遺伝子のみを含むＤＮＡ（ＰＣＲ産物；以下、「試料２」ともいう）を含有する溶液を調製した。試料２はＴＡｒｇｅｔ Ｃｌｏｎｅ−ｐｌｕｓ（東洋紡績）を用いてプラスミドベクターへ挿入し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α株に形質転換し、全長タバコオスモチン遺伝子を挿入したプラスミドＤＮＡ（以下、「試料３」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９３】
〔調製例２：タバコオスモチン遺伝子を含む組換え発現ベクターの作製〕
調製例１で単離したタバコオスモチン遺伝子を用いて、図１に示すフローで、組換え発現ベクターを構築した。以下、組換えベクターの構築方法について詳細に説明する。
【００９４】
（１）タバコオスモチン遺伝子へ制限酵素サイトを付加するためのオリゴヌクレオチドの合成
パーキンエルマー社製ＤＮＡシンセサイザー３９２型を用いて、ホスホアミダイト法にて、配列番号３および４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチド（以下、それぞれ「オリゴ３」および「オリゴ４」ともいう）を合成した。合成はマニュアルに従い、各種オリゴヌクレオチドの脱保護はアンモニア水で５５℃、一夜実施した。オリゴヌクレオチドの精製は、パーキンエルマー社ＯＰＣカラムにて実施するか、もしくはＤＮＡ合成受託会社（（株）日本バイオサービス、オペロン（株）、シグマジェノシス（株）等）に依頼した。なお、オリゴ３はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第４位〜第１９位の塩基と相同な配列の５’末端側にＥｃｏＲＩサイトが付加された塩基配列からなるフォワードプライマーであり、オリゴ４はＧｅｎＢａｎｋにアクセション番号Ｘ６１６７９として登録されている塩基配列（配列番号１に示される塩基配列）の第６６２位〜第６７５位の塩基に相補的な配列の５’末端側にＳａｃＩサイトが付加された塩基配列からなるリバースプライマーである。
【００９５】
（２）タバコオスモチン遺伝子への制限酵素サイトの付加
上記試料３を含む溶液を２μｌ、オリゴ３およびオリゴ４を各２５ｐｍｏｌｅｓ、および１０×ＰＣＲｍｉｘ、０．２ｍＭ ｄＮＴＰｓ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼにミリＱを加えて全量を５０μｌとした。
ＰＣＲ反応は最初に９４℃で１分間の熱処理後、次いで９４℃−１５秒間のデナチュレーション工程、及び５５℃−３０秒間のアニーリング及び６８℃−１分間のＤＮＡ伸長反応工程を１サイクルとして、これを計３０サイクル行うことにより実施した。上記で増幅したＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、制限酵素サイトを付加されたタバコオスモチン遺伝子のみを含むＤＮＡ（ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトを付加したタバコオスモチン遺伝子；以下、「試料４」ともいう）を含有する溶液を調製した。
【００９６】
（３）タバコオスモチン遺伝子タンパク発現ベクターの構築
上記試料４を制限酵素ＥｃｏＲＩ（東洋紡績）およびＳａｃＩ（東洋紡績）にて制限酵素処理し、制限酵素処理した試料４を含むＤＮＡ溶液を１％アガロースゲル電気泳動にて単離し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて精製し、制限酵素により切断されたタバコオスモチン遺伝子を含むＤＮＡ（ｏｓｍｏｔｉｎ−ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ；以下、「試料５」ともいう）を含有する溶液を調製した。なお、制限酵素処理の試薬組成および反応条件は試薬の推奨条件に従った。同様にｐＥＴ２８ａベクターも制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｃＩにて制限酵素処理し、ｐＥＴ２８ａベクターを含むＤＮＡ溶液より、制限酵素により切断されたｐＥＴ２８ａベクターを含むＤＮＡ（ｐＥＴ２８−ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ；以下、「試料６」ともいう）を含有する溶液を調製した。
【００９７】
試料５と試料６とをモル比で５：１の割合で混合し、ＤＮＡ Ｌｉａｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｖｅｒ．１（宝酒造）を加え、１６℃にて１８時間のライゲーション反応を行った。得られた反応液１μｌを大腸菌ＤＨ５α株（東洋紡績）５０μｌと混合し、定法に従い形質転換した。出現したコロニーよりプラスミドＤＮＡを抽出し、ｐＥＴ２８ａに組込まれたタバコオスモチン遺伝子を含むプラスミドＤＮＡ（ｏｓｍｏｔｉｎ−ｐＥＴ２８；以下、「試料７」ともいう）を含む溶液を調製した。
【００９８】
実施例２：大腸菌を用いたタバコオスモチン組換えタンパク質の大量発現
（１）形質転換体大腸菌の作製およびタバコオスモチン組換えタンパク質の発現誘導
調製例２で調製した試料７を含む溶液を１μｌと、大腸菌ＢＬ２１ Ｓｔａｒ （ＤＥ３）株 ２０μｌとを混合し、定法に従い形質転換した。出現したコロニーより釣菌し、ＬＢ−Ｋａｍ（カナマイシン）液体培地５ｍｌに植菌し、３７℃にて１６時間培養した。翌日、培養液５ｍｌをＴＢ−Ｋａｍ液体培地５００ｍｌに添加し、３７℃にて４時間培養後、ＩＰＴＧ ０．１ｍＭを添加し、さらに２５℃にて４時間培養した。
【００９９】
（２）可溶性画分からのタバコオスモチン組換えタンパク質の精製
上記で培養したＴＢ−Ｋａｍ液体培地より集菌し、得られた大腸菌ペレットをＢｕｇＢｕｓｔｅｒ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｎｏｖａｇｅｎ）２０ｍｌに懸濁した。室温にて２０分間インキュベートした後、５８００×ｇにて２０分間遠心し、上清を回収し、ライセートを調製した。調製したライセートは精製バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡアガロース・ビーズと混合し、４℃で１時間インキュベートを行い、ライセートに含まれるタバコオスモチン組換えタンパク質をビーズに吸着させた。インキュベート終了後、１５００×ｇにて５分間遠心し、上清を除去してビーズを回収した。ビーズは洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、２０％グリセロール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で洗浄し、溶出バッファー（２５０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）にて溶出を行い、精製されたタバコオスモチン組換えタンパク質を回収した。
【０１００】
（３）シャペロニンの除去
上記で調製したタバコオスモチン組換えタンパク質をＰＤ−１０ Ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥヘルスケア）にて脱塩および５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）への置換を行った。脱塩し、バッファー置換を行ったタバコオスモチン組換えタンパク質を最終濃度が５０μｇ／ｍｌになるように反応バッファー（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、５ｍｇ／ｍｌ カゼイン：ｐＨ８．０）で調整し、３７℃で３０分間インキュベートし、タバコオスモチン組換えタンパク質に結合した大腸菌由来シャペロニンを除去した。シャペロニンを除去したタバコオスモチン組換えタンパク質溶液にＮａＣｌを最終濃度が３００ｍＭになるように添加したのち、５８００×ｇで２０分間遠心し、上清を回収した。回収した上清は精製バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡアガロース・ビーズと混合し、４℃で１時間インキュベートを行い、上清に含まれるタバコオスモチン組換えタンパク質をビーズに吸着させた。インキュベート終了後、１５００×ｇにて５分間遠心し、上清を除去してビーズを回収した。ビーズは洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、２０％グリセロール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）、およびＬＰＳ除去バッファー（１．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）で洗浄し、溶出バッファー（２５０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ：ｐＨ８．０）にて溶出を行い、タバコオスモチン組換えタンパク質を回収した。
【０１０１】
回収したタバコオスモチン組換えタンパク質はＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて４℃で１６時間透析し、脱塩およびＰＢＳへの置換を行った。ＰＢＳ置換したタバコオスモチン組換えタンパク質を還元レムリ処理し、２−１５％グラジエントゲルを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、ゲルをクマシー染色したところ、図２に示すように、約２６ｋＤの位置にバンドが検出された。
【０１０２】
実施例３：タバコオスモチン組換えタンパク質のＡＭＰＫリン酸化活性測定
（１）Ｃ２Ｃ１２細胞の分化誘導
マウス骨格筋細胞であるＣ２Ｃ１２細胞を１２穴プレートに播種し、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地にて１００％コンフルエントになるまで培養した後、２．５％ウマ血清を含むＤＭＥＭ培地に交換して７日間培養し、分化誘導した。
【０１０３】
（２）タバコオスモチン組換えタンパク質の添加
上記の分化誘導させたＣ２Ｃ１２細胞を無血清培地に交換して、３７℃で７時間培養した後、培地中に２ｍＭ／ｗｅｌｌとなるように、ＡＩＣＡＲ（１−ｂ−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｉｄｅ：ＴＲＣ）を加え、さらに３７℃で３０分間培養した。ＡＩＣＡＲ添加の１時間後に、実施例２で調製したタバコオスモチン組換えタンパク質をＡＩＣＡＲ同様に培地中に添加して、３７℃で７分間培養した後、Ｃ２Ｃ１２細胞を回収した。回収した細胞は液体窒素で凍結し、測定まで−８０℃にて保存した。
【０１０４】
（３）ウェスタンブロッティング
上記にて回収したＣ２Ｃ１２細胞に細胞溶解バッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭピロリン酸、１０ｍＭフッ化ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＰＭＳＦ）を各ウェル１００μｌ添加して細胞を回収し、超音波処理後、１０，０００×ｇにて１５分間遠心し、上清を回収した。回収した上清は還元レムリ処理を行い、１サンプルあたり１０μｇずつ用いて７．５％アクリルアミドゲルにてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ終了後、定法に従ってＰＶＤＦ膜に転写した。
【０１０５】
上記にてタンパクが転写されたＰＶＤＦ膜は５％スキムミルク溶液を用いて、室温にて１時間のブロッキング反応を行った。ブロッキング終了後、抗αＡＭＰＫポリクローナル抗体（１／１０００ Ｔｏｔａｌ ＡＭＰＫ：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）およびリン酸化ＡＭＰＫモノクローナル抗体（１／１０００ ｐ−ＡＭＰＫ：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を用いて、室温にて１時間の一次抗体反応を行った。一次抗体反応終了後、ＨＲＰ−Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（ＺＹＭＥＤ）を用いて室温にて４５分間の二次抗体反応を行った。二次抗体反応終了後、ＥＣＬ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥヘルスケア）にて検出した。その結果を図３に示す。
【０１０６】
（４）活性評価
上記のウェスタンブロッティングにて検出されたバンド（図３を参照）をＳｃｉｏｎ Ｉｍａｇｅｓにて画像解析し、Ｔｏｔａｌ ＡＭＰＫに対するｐ−ＡＭＰＫの割合（ＡＭＰＫリン酸化活性）を算出した。その結果、図４に示すように、無血清培地のみを添加したブランクと比較して、タバコオスモチン組換えタンパク質の添加により、ＡＭＰＫがリン酸化されている割合（ＡＭＰＫリン酸化活性）が増加することが確認できた。
【０１０７】
実施例４：オスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例４）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１０８】
実施例５：保湿剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例５）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１０９】
実施例６：紫外線吸収剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例６）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１０】
実施例７：保湿剤と紫外線吸収剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例７）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１１】
実施例８：抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例８）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１２】
実施例９：保湿剤と抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例９）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１３】
実施例１０：保湿剤と紫外線吸収剤と抗菌剤を含むオスモチン美容液の製造
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。オスモチンは、実施例２で調製したものを使用した。コントロール（比較例１０）として、オスモチンを含まない美容液も常法により製造した。
（組成） （重量％）
油相成分：ステアリン酸 ３．０
スクワラン ５．０
オリーブ油 ５．０
オスモチン ５．０
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート ５．０
ソルビタンモノステアレート ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン １．０
保湿剤：ポリグルタミン酸 ４．０
紫外線吸収剤：パラアミノ安息香酸オクチル ４．０
抗菌剤：ウンデシレン酸亜鉛 ４．０
水相成分：プロピレングリコール ５．０
精製水 全体で１００となる量
【０１１４】
美容液の評価（比較例）
比較例４〜１０の美容液を用いて、５名のパネリストが、これを使用したときの、のび、つき、しっとり感、かさつきにくさについて評価し、次の基準に従って判定した。結果を表１に示す。表１から明らかなように、比較例の美容液はしっとり感、のび、かさつき難さのいずれかで良好と評価される場合もあるが、つきに関しては良好と評価されることはなかった。
判定基準：
◎：５名中４名以上が良好と評価した。
○：５名中３名が良好と評価した。
△：５名中２名が良好と評価した。
×：５名中１名以下が良好と評価した。
【０１１５】
【表１】
【０１１６】
美容液の評価（本発明例）
実施例４〜１０に示したオスモチンを含む組成の美容液を用いて、５名のパネリストが、これを使用したときの、のび、つき、しっとり感、かさつきにくさについて評価し、次の基準に従って判定した。結果を表２に示す。表２から明らかなように、本発明の美容液はのび、つき、しっとり感、かさつきにくさのいずれも良好であった。なお、いずれの場合も、本発明の美容液の抗老化効果は良好と評価された。
判定基準：
◎：５名中４名以上が良好と評価した。
○：５名中３名が良好と評価した。
△：５名中２名が良好と評価した。
×：５名中１名以下が良好と評価した。
【０１１７】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明のオスモチンまたはオスモチン断片を含有する化粧品組成物により、抗老化作用、保湿作用、コラーゲン生成促進作用、細胞賦活化作用、育毛作用及び肌荒れ改善作用などの効果を有する、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品を提供することができる。また、従来より、原料コストが安価であり、大量生産可能となり、長期にわたる使用に十分に耐え得ることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】実施例におけるタバコオスモチン組換えタンパク質の発現ベクターの構築方法を示す図である。
【図２】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す図である。
【図３】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質を添加したＣ２Ｃ１２細胞のライセートを用いたウェスタンブロッティングの結果を示す図である。
【図４】実施例にかかるタバコオスモチン組換えタンパク質によるＣ２Ｃ１２細胞のＡＭＰＫリン酸化活性測定の結果を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【０１２０】
配列番号２〜５は合成オリゴヌクレオチドの配列である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。
【請求項２】
オスモチンまたはオスモチン断片が天然資源から抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項３】
オスモチンまたはオスモチン断片がＤＮＡ組換え技術を用いて製造されたものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項４】
さらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の化粧品組成物。
【請求項５】
美白剤が、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項６】
抗老化剤が、抗炎症剤および／または抗酸化剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項７】
保湿剤が、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項８】
紫外線吸収剤が、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤及びベンゾフェノン系紫外線吸収剤からなる群から選択された少なくとも１種の化合物であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項９】
抗菌剤が有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項１０】
化粧品、医薬部外品、医療用品、または衛生用品として利用されるものであることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の化粧品組成物。
【請求項１】
オスモチンまたはオスモチン断片を含有することを特徴とする化粧品組成物。
【請求項２】
オスモチンまたはオスモチン断片が天然資源から抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項３】
オスモチンまたはオスモチン断片がＤＮＡ組換え技術を用いて製造されたものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項４】
さらに、美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤及び抗菌剤からなる群から選択された少なくとも１種の化粧品配合剤を含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の化粧品組成物。
【請求項５】
美白剤が、メラニン生成抑制剤、メラニン分解促進剤および／またはメラニン輸送阻害剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項６】
抗老化剤が、抗炎症剤および／または抗酸化剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項７】
保湿剤が、親水性保湿剤および／または親油性保湿剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項８】
紫外線吸収剤が、安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、トリアジン系紫外線吸収剤及びベンゾフェノン系紫外線吸収剤からなる群から選択された少なくとも１種の化合物であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項９】
抗菌剤が有機系抗菌剤および／または無機系抗菌剤であることを特徴とする請求項４に記載の化粧品組成物。
【請求項１０】
化粧品、医薬部外品、医療用品、または衛生用品として利用されるものであることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の化粧品組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００９−２５６２６４（Ｐ２００９−２５６２６４Ａ）
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１０８８８４（Ｐ２００８−１０８８８４）
【出願日】平成２０年４月１８日（２００８．４．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２０年４月２０日 社団法人日本内分泌学会発行の「日本内分泌学会雑誌 Ｖｏｌ．８４，Ｎｏ．１，第８１回 日本内分泌学会学術総会抄録集」に発表
【出願人】（０００００３１６０）東洋紡績株式会社 (3,622)
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月１８日（２００８．４．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２０年４月２０日 社団法人日本内分泌学会発行の「日本内分泌学会雑誌 Ｖｏｌ．８４，Ｎｏ．１，第８１回 日本内分泌学会学術総会抄録集」に発表
【出願人】（０００００３１６０）東洋紡績株式会社 (3,622)
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【Ｆターム（参考）】
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