【課題】本発明は、センシンレン（Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）抽出物を用いて、ＴＮＦα又はＩＬ−１β発現を阻害する方法に関する。
【解決手段】本発明は、センシンレンの抽出物が、ＴＮＦα及びＩＬ−１β両方の発現を阻害するという驚くべき発見に基づく。前記抽出物は、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲンアンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有することを特徴とする。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願に対するクロスリファレンス）
３５ＵＳＣ§１１９（ｅ）に準拠して、本出願は、２００４年４月２８日に出願された米国特許仮出願第６０／５６６，４７７号の優先権を主張し、該仮出願の内容は、本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、単核細胞サイトカインであり、主に単球及びマクロファージにより産生される。ＴＮＦ−αは多様な生物学的活性、すなわち：（１）癌細胞を殺す、又は癌細胞の増殖を阻害する活性、（２）好中性顆粒球の食作用を増進する活性、（３）感染性病原体を殺す活性、及び（４）炎症反応中、血管内皮細胞上の接着分子の発現を増加させる活性を有する。
【０００３】
ＴＮＦ−αの発現に関連した障害は、慢性関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチ、骨関節症、脊椎関節症、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む）、慢性心不全、全身エリテマトーデス、硬皮症、類肉腫症、多発性筋炎／皮膚筋炎、乾癬、多発性骨髄腫、脊髄形成異常の症候群、急性骨髄性白血病、パーキンソン病、ＡＤＤＳ痴呆複合体、アルツハイマー病、うつ病、敗血症、膿皮症壊疽、血敗血症、感染性ショック、ベーチェット症候群、移植片対宿主病、ブドウ膜炎、ヴェゲナーの肉芽腫症、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、喘息、急性膵炎、歯周病、悪液質、中枢神経系損傷、癌（例えば肺癌腫、食道癌、胃腺癌及び前立腺癌）、ウィルス性呼吸器疾患及び肥満を含むが、これに限定されるものではない。詳細は、非特許文献１から２５を参照のこと。
【０００４】
インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）は、単球、マクロファージ及び樹状細胞などの細胞により分泌されるサイトカインであり、広範囲の免疫反応及び炎症反応を仲介する。ＩＬ−１β産生を調節することにより、種々の障害（例えば慢性関節リウマチ、血敗血症、歯周病、慢性心不全、多発性筋炎／皮膚筋炎、急性膵炎、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、骨関節症、細菌性感染症、多発性骨髄腫、脊髄形成異常の症候群、ブドウ膜炎、中枢神経系損傷、ウィルス性呼吸器疾患、喘息、低下及び硬皮症）を治療することが可能となる。詳細は、非特許文献２６から４５を参照のこと。
【０００５】
【非特許文献１】Ｏｇａｔａ Ｈ．ら、Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００３；９（１４）：１１０７−１３
【非特許文献２】Ｍｏｌｌｅｒ Ｄ．Ｒ．ら、Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．２００３；２５３（１）：３１−４０
【非特許文献３】Ｔａｙｌｏｒ ＰＣ．ら、Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００３；９（１４）：１０９５−１０６
【非特許文献４】Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ Ｎ．ら、Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ．２００３；８８（３）：１８６−９１
【非特許文献５】Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ Ｆ．ら、Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ．２００３；７４（１）：９７−１０２
【非特許文献６】Ｗｅｉｎｂｅｒｇ Ｊ．Ｍ．ら、Ｃｕｔｉｓ．２００３；７１（１）：４１−５
【非特許文献７】Ｂｕｒｎｈａｍ Ｅ．ら、Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２００１；２９（３）：６９０−１
【非特許文献８】Ｓａｃｋ Ｍ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｎ ２００２；９４（１−２）：１２３−３５
【非特許文献９】Ｂａｒｎｅｓ ＰＪ．ら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００２；４２：８１−９８
【非特許文献１０】Ｍａｇｅｅｄ Ｒ．Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ ２００２；１１（１２）：８５０−５
【非特許文献１１】Ｔｓｉｍｂｅｒｉｄｏｕ Ａ．Ｍ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００２；２（３）：２７７−８６
【非特許文献１２】Ｍｕｌｌｅｒ Ｔ．ら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．２００２；３（１２）：１７６３−７
【非特許文献１３】Ｃａｌａｎｄｒａ Ｔ．ら、Ｃｕｒｒ Ｃｌｉｎ Ｔｏｐ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００２；２２：１−２３
【非特許文献１４】Ｇｉｒｏｌｏｍｏｎｉ Ｇら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．２００２；３（１１）：１５９０−５
【非特許文献１５】Ｔｕｔｕｎｃｕ Ｚ．ら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２００２；２０（６ Ｓｕｐｐｌ ２８）：Ｓ１４６−５１
【非特許文献１６】Ｂｒａｕｎ Ｊ．ら、Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２００２；１６（４）：６３１−５１
【非特許文献１７】Ｂａｒｎｅｓ ＰＪ．ら、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｆｏｕｎｄ Ｓｙｍｐ．２００１；２３４：２５５−６７；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ２６７−７２
【非特許文献１８】Ｂｒａｄｙ Ｍ．ら、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ ＣＨｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１９９９；１３（２）：２６５−８９
【非特許文献１９】Ｇｏｌｄｒｉｎｇ Ｍ．Ｂ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００１；１（５）：８１７−２９
【非特許文献２０】Ｍａｒｉｅｔｔｅ Ｘ．Ｒｅｖ Ｐｒａｔ．２００３；５３（５）：５０７−１１
【非特許文献２１】ＳｈａｒａｉａＲ．ら、Ｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．２００２；８５（１）：１６１−７１
【非特許文献２２】Ｗａｎｇ ＣＸ．ら、Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００２；６７（２）：１６１−７２
【非特許文献２３】Ｖａｎ Ｒｅｅｔｈ Ｋ．ら、Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２００２；８７（３−４）：１６１−８
【非特許文献２４】Ｌｅｏｎａｒｄ Ｂ．Ｅ．ら、ｌｎｔ Ｊ Ｄｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００１；１９（３）：３０５−１２
【非特許文献２５】Ｈａｙｓ ＳＪ．ら、ＣｕｒｒＰｈａｒｍ Ｄｅｓ．１９９８；４（４）：３３５−４８
【非特許文献２６】Ｔａｙｌｏｒ Ｐ．Ｃ．ら、ＣｕｒｒＰｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００３；９（１４）：１０９５−１０６
【非特許文献２７】Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ Ｒ．Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００３；３６（１０）：１２５９−６５
【非特許文献２８】Ｔａｋａｓｈｉｂａ Ｓ．ら、Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ．２００３；７４（１）：１０３−１０
【非特許文献２９】Ｄｉｗａｎ Ａ．ら、Ｃｕｒｒ ＭｏＩ Ｍｅｄ．２００３；３（２）：１６１−８２
【非特許文献３０】Ｌｕｎｄｂｅｒｇ Ｉ．Ｅ．ら、Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．２００２；２８（４）：７９９−８２２
【非特許文献３１】Ｍａｋｈｉｊａ Ｒ．ら、Ｊ Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｐａｎｃｒｅａｔ Ｓｕｒｇ．２００２；９（４）：４０１−１０
【非特許文献３２】Ｃｈｕｎｇ Ｋ．Ｆ．ら、Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ Ｓｕｐｐｌ．２００１；３４：５０ｓ〜５９ｓ
【非特許文献３３】Ｈａｌｌｅｇｕａ Ｄ．Ｓ．ら、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．２００２；６１（１１）：９６０−７
【非特許文献３４】Ｇｏｌｄｒｉｎｇ Ｍ．Ｂ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００１；１（５）：８１７−２９
【非特許文献３５】Ｍｒａｋ Ｒ．Ｅ．ら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ．２００１；２２（６）：９０３−８
【非特許文献３６】Ｂｒａｄｙ Ｍ．ら、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１９９９；３（２）：２６５−８９
【非特許文献３７】Ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｅｅｒ Ｊ．Ｗ．ら、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｄ．１９９８；８５６：２４３−５１
【非特許文献３８】ＲａｍｅｓｈｗａｒＰ．ら、Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２００３；１０９（１）：１−１０
【非特許文献３９】ｄｅ Ｋｏｚａｋ Ｙら、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；２１（２−３）：２３１−５３
【非特許文献４０】Ｗａｎｇ ＣＸ．ら、Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００２；６７（２）：１６１−７２
【非特許文献４１】Ｖａｎ Ｒｅｅｔｈ Ｋ．ら、Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２００２；８７（３−４）：１６１−８
【非特許文献４２】Ｓｔｉｒｌｉｎｇ Ｒ．Ｇ．ら、ＢｒＭｅｄ Ｂｕｌｌ．２０００；５６（４）：１０３７−５３
【非特許文献４３】Ｌｅｏｎａｒｄ Ｂ．Ｅ．ら、ｂｉｔ ＪＤｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００１；１９（３）：３０５−１２
【非特許文献４４】Ａｌｌａｎ Ｓ．Ｍ．ら、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．２０００；９１７：８４−９３
【非特許文献４５】Ｃａｆａｇｎａ Ｄ．ら、Ｍｉｎｅｒｖａ Ｍｅｄ．１９９８；８９（５）：１５３−６１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、被験者において、ＴＮＦα又はＩＬ−１βの発現を阻害する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、センシンレンの抽出物が、ＴＮＦα及びＩＬ−１β両方の発現を阻害するという驚くべき発見に基づく。センシンレンの地上部分から得られる前記抽出物は、アンドログラフォリド、１４−デオキシアンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド及びネオアンドログラフォリドである。望ましくは、前記抽出物は、２から２０重量％を含むアンドログラフォリド、１から６重量％の１４−デオキシアンドログラフォリド、１から１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド及び１から５重量％のネオアンドログラフォリドを含む。より望ましくは、前記抽出物は３から８重量％のアンドログラフォリド、３から５重量％の１４−デオキシアンドログラフォリド、７から９重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド及び２から４重量％のネオアンドログラフォリドを含む。特に望ましくは、４．２重量％のアンドログラフォリド、４．４重量％の１４−デオキシアンドログラフォリド、８重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲンアンドログラフォリド、２．１重量％のネオアンドログラフォリドを含む。
【０００８】
本発明の１つの実施態様は、被験者において、ＴＮＦα又はＩＬ−１βの発現を阻害する方法に関する。該方法は、被験者に、有効量の前記の抽出物を投与することを含む。
【０００９】
本発明の他の実施態様は、ＴＮＦα又はＩＬ−１βに関連した障害、すなわち：クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、慢性心不全、真性糖尿病、全身エリテマトーデス、多発性筋炎／皮膚筋炎、乾癬、急性骨髄性白血病、エイズ痴呆複合体、血敗血症、感染性ショック、移植片対宿主病、ブドウ膜炎、喘息、急性膵炎又は歯周病を治療する方法に関する。該方法は、治療の必要がある被験者に、有効量の前記の抽出物を投与することを含む。
【００１０】
また、ＴＮＦα関連障害及びＩＬ−１β関連障害の治療において使用するため、並びにこれらの障害を治療する薬剤製造に使用するための、前記の本発明の抽出物を含有する組成物も、本発明の範囲に含まれる。
【００１１】
本発明の幾つかの態様の詳細について、以下に示す。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、以下の説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、ＴＮＦα又はＩＬ−１βの発現を阻害し、ＴＮＦα関連障害を治療し、並びにＩＬ−１β関連障害を治療する方法であって、ＴＮＦαの発現を阻害する必要がある被験者に、有効量の前記の抽出物を投与することにより治療する方法を含む。用語「有効量」とは、被験者において、前記の効果の１つを与えるのに必要な抽出物の量を指す。有効量は、当業者に認識されるように、投与経路、賦形剤使用、及び他の剤の同時使用の可能性に応じて、適宜調節することが可能である。用語「治療する」とは、ＴＮＦα関連障害又はＩＬ−１β関連障害を有するか、あるいは該障害の症状を有するか、あるいは該障害に対する素因を有する被験者に、該障害、該障害の症状、又は該障害に対する素因を治癒、軽減、緩和、変化、修復、改善、好転、又はこれらに影響を及ぼす目的で、該抽出物を投与することを指す。
【００１３】
本発明で使用するための抽出物を調製するため、センシンレンの地上部分を、１以上の適切な溶媒、例えばエタノール、メタノール、及びアセトンに浸し；固体残渣から液体を分離し；そして該液体を濃縮することが可能である。こうして得た抽出物を更に処理することも可能である。例えば、クロマトグラフィーによって不純物を取り除くか、又は構成要素の比を調節することも可能である。
【００１４】
上記方法の１つを実施するため、こうした方法を必要とする被験者に、前記の抽出物のみ、又は該抽出物及び薬理学的に許容できる担体の混合物いずれかである組成物を、経口投与、直腸投与、非経口投与するか、吸入スプレーによって投与するか、又は移植容器を介して投与する。用語「非経口」は、本明細書において、皮下、皮内、静脈内、筋内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。
【００１５】
経口組成物は、限定されるわけではないが、錠剤、カプセル、エマルジョン及び水性懸濁物、分散物及び溶液を含む、経口的に許容しうるいずれかの投薬型であってもよい。錠剤に一般的に用いられる担体には、ラクトース及びコーンスターチが含まれる。典型的には、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤もまた、錠剤に添加される。カプセルとして経口投与する際に用いられる使用可能な希釈剤には、ラクトース及び乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁物又はエマルジョンとして経口投与する場合、乳化剤又は懸濁剤と組み合わせて、油性相中に活性成分を懸濁又は溶解することも可能である。必要に応じて特定の甘味剤、香味剤又は着色剤を添加することも可能である。
【００１６】
適切な分散剤又は湿潤剤（例えばＴｗｅｅｎ８０など）及び懸濁剤を用いて、当該技術分野における公知技術に従って、無菌の注射可能な組成物（例えば水性又は油性懸濁物）として配合することも可能である。前記の無菌の注射可能な組成物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のように、非毒性の、非経口的に許容しうる希釈剤又は溶媒中の、無菌注射可能溶液又は懸濁物であることも可能である。使用可能な、許容しうる賦形剤及び溶媒としては、マンニトール、水、リンゲル溶液及び等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。更に、溶媒又は懸濁媒体として、無菌不揮発性油が慣用的に使用される（例えば合成モノ−又はジ−グリセリド）。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、注射用組成物の調製に有用であり、オリーブ油又はヒマシ油などの薬理学的に許容できる天然の油、特にそのポリオキシエチル化型も使用可能である。これらの油又は懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、あるいはカルボキシメチルセルロース又は類似の分散剤を含有することも可能である。
【００１７】
薬剤配合の技術分野に周知の技術に従って、吸入組成物を調製することも可能であり、また生理食塩水の溶液として、ベンジルアルコール又は他の適切な保存剤、生物学的利用能を増進する吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は当該技術分野に知られる他の可溶化剤又は分散剤を添加して調製することも可能である。
【００１８】
油、クリーム、ローション、軟膏等の形で、局所組成物を配合することも可能である。組成物の適切な担体には、植物油又はミネラルオイル、白色ワセリン（白色軟パラフィン）、分枝鎖脂肪又は油脂、動物脂肪及び高分子量アルコール（炭素数Ｃ１２より大きい）が含まれる。好ましい担体は、活性成分が可溶性のものである。乳化剤、安定化剤、湿潤剤及び酸化防止剤、並びに望ましい場合、色又は芳香を与える物質を含有させることも可能である。更に、これらの局所配合物に、経皮浸透増進剤を使用することも可能である。こうした増進剤の例は、米国特許第３，９８９，８１６号及び第４，４４４，７６２号に記載されている。好ましくは、ミネラルオイル、自己乳化蜜蝋及び水の混合物からクリームを調製し、この混合物中で、少量のアーモンド油などの油に溶解した活性成分を混合する。こうしたクリームの例として、約４０重量部の水、約２０重量部の蜜蝋、約４０重量部のミネラルオイル及び約１重量部のアーモンド油を含むものが挙げられる。アーモンド油などの植物油中に活性成分を溶解させた溶液と加温したソフトパラフィンを混合し、そして混合物を冷却することによって、軟膏を配合することも可能である。こうした軟膏の例は、約３０重量％のアーモンド油及び約７０重量％の白色ソフトパラフィンを含むものである。
【００１９】
医薬組成物中の担体は、配合物の活性成分と適合し（そして好ましくは活性成分を安定化させることが可能であり）、治療しようとする被験者にとって有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。例えば、活性化合物の送達のため、シクロデキストリンなどの可溶化剤（抽出物の１以上の活性化合物と、特定のより可溶性である複合体を形成する）を、薬剤賦形剤として利用することも可能である。他の担体の例には、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、及びＤ＆Ｃ Ｙｅｌｌｏｗ＃１０が含まれる。
【００２０】
適切なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、前記の抽出物が、ＴＮＦα又はＩＬ−１β発現を阻害する有効性を予備的に評価することも可能である。ｉｎ ｖｉｖｏアッセイによって、抽出物のＴＮＦα関連障害又はＩＬ−１β関連障害を治療する際の有効性に関して解析することも可能である。例えば、ＴＮＦα又はＩＬ−１βに関連する障害を有する動物（例えば実験用マウス）に抽出物を投与し、その療法効果を評価することも可能である。そのようにして得られた結果に基づいて、適切な投薬量範囲及び投与経路を決定することも可能である。
【００２１】
更に詳述することなく、上記説明により本発明の実施が十分可能になったと考えられる。したがって、以下の具体的な実施例は、単に例示として解釈されるべきであり、そしていかなる意味でも、本開示以外の部分を除外するものと解釈してはならない。本明細書に引用する、特許を含む刊行物は全て、本明細書に完全に援用される。
【実施例】
【００２２】
＜センシンレンの抽出物の調製＞
センシンレンの地上部分の乾燥粉末（１ｋｇ）を８５％エタノールに懸濁した。懸濁物を２時間還流し、濾過した。残渣を８５％エタノールで再び抽出した。これらのエタノール溶液を混合・冷却し、更に濃縮して、１０５ｇの目的抽出物を得た。ＨＰＬＣ分析によって、該抽出物が４．０％のアンドログラフォリドを含有することが示された。
【００２３】
＜ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ＞
ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを行って、センシンレン抽出物のＴＮＦα及びＩＬ−１β発現を阻害する効果を評価した。
【００２４】
業者が推奨するプロトコルに従って、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）を用いて、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）細胞を新鮮血液から単離した。１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に、１×１０^５細胞／ｍｌの濃度で細胞を懸濁し、９６ウェルプレートに散布した（各ウェル中に総数１×１０^４細胞）。３つのウェル中で各反応を行った。
【００２５】
ＤＭＳＯ中に溶解した１０μｌのセンシンレン抽出物を各ウェルに添加した（最終濃度：０．１、０．３、１、３、１０、及び３０μｇ／ｍｌ）。１０μＭの最終濃度でデキサメタゾン（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ）を添加したウェルを陽性対照として用いた。１０μｌの培地を添加したウェルを陰性対照として用いた。前記プレートを５％ＣＯ_２条件下、３７℃で１５分間インキュベーションした。１００μｇ／ｍｌのリポ多糖を含む溶液１０μｌを、陰性対照を除く全てのウェルに添加した後、プレートを、５％ＣＯ_２条件下、３７℃で一晩インキュベーションした。
【００２６】
プレートを１０００ｒｐｍで１５分間回転し、上清を収集した。ＴＮＦα ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着アッセイ）キット及びＩＬ−１β ＥＬＩＳＡキット（Ｊｉｎｇｍｅｉ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用い、ＴＮＦα及びＩＬ−１βの濃度を測定した。
【００２７】
阻害比を以下のように計算した：
【数１】

式中、Ｃ_抽出物は、抽出物及びＬＰＳで処理したＰＢＭＣ細胞中のＴＮＦα又はＩＬ−１βの濃度であり、Ｃ_ＬＰＳは、ＬＰＳ及びデキサメタゾンで処理したＰＢＭＣ細胞中のＴＮＦα又はＩＬ−１βの濃度であり、Ｃ_対照は、ＬＰＳ又は抽出物で処理していないＰＢＭＣ細胞中のＴＮＦα又はＩＬ−１βの濃度である。
【００２８】
上記試験の結果、抽出物が、ＴＮＦα及びＩＬ−１β双方の発現を有意に阻害したことが示された。
【００２９】
＜ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ＞
ｉｎ ｖｉｖｏアッセイを行い、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する際のセンシンレン抽出物の有効性を評価した。
【００３０】
Ｂａｌｂ／ｃ雄マウス（１８〜２４ｇ）を、０．０５ｍｇ／１０ｇの１％ペントバルビタールナトリウムで麻酔した。ＩＢＤを誘導するため、５０％エタノール中の１．５ｍｇの２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ；Ｓｉｇｍａ）を、カテーテルを通じて、各マウス（ブランクの対照マウスを除く）に徐々に投与した。ブランク対照マウスには、０．１ｍｌの５０％エタノールのみを投与した。ＴＮＢＳ投与の２４時間前及び２時間前、ならびに投与後の各５日間、前記センシンレン抽出物でマウスを処置した。
【００３１】
ＴＮＢＳ投与前及び投与後の毎日、各マウスの体重を測定した。抽出物の最後の投与の２４時間後、マウスを屠殺した。結腸を取り除き、重量測定した。更に体重に対する結腸重量比を計算し、結腸及び他の臓器間の癒着もまた観察した。
【００３２】
肛門管の正確に２ｃｍ上に位置する結腸組織の試料を得て、１０％緩衝リン酸中で固定し、パラフィンに包埋し、切片を作製し、ヘマトキシリン／エオジンで染色した。顕微鏡横断切片上の炎症の度合いを、次の通り０から４に等級分けした（０：炎症の徴候なし；１：非常に低レベルの炎症；２：低レベルの白血球浸潤；３：高レベルの白血球浸潤、高密度の血管、及び結腸壁の肥厚；並びに４：貫壁性浸潤、杯細胞の欠失、高密度の血管、及び結腸壁の肥厚）。
【００３３】
以上の試験の結果、１５０ｍｇ／ｋｇのＴＮＢＳのみでマウスを処置すると、下痢、顕著かつ持続的な体重減少、体重に対する結腸重量比の有意な増加、及び５０％の死亡率により特徴付けられる重度の疾病が観察された。また、顕微鏡観察によって、各マウスの結腸が腸壁の全ての層で、貫壁性炎症を有することが観察された。対照的に、ＩＢＤの誘導前に、マウスをセンシンレン抽出物（５００ｍｇ／ｋｇ／日）で処置すると、全体の死亡率が減少し、消耗症候群の重症度がより低く、体重に対する結腸重量比がより低く、ＩＢＤの度合いがより低かった。また大腸壁は滑らかであり、周囲組織との癒着はなかった。
【００３４】
雄ウィスター・ラットを用いた別のアッセイを、前記と類似の方法に従って、ＩＢＤに対するセンシンレン抽出物の有効性を評価した。ＩＢＤを誘導するため、ＴＮＢＳの代わりにラットに２，４−ジニトロベンゼンスルホン酸を投与した。
【００３５】
以上の試験の結果、同様の結果が得られた。具体的には、センシンレン抽出物で処置したラットは、未処理のラットと比較しての死亡率が減少し、消耗症候群の重症度がより低く、体重に対する結腸重量比がより低く、ＩＢＤの度合いが低かった。
【００３６】
（他の実施態様）
以上において本発明の幾つかの態様を記載したが、本発明の技術思想及び範囲から逸脱することなく、多様な変更が可能であることが理解されるであろう。したがって、そのような他の実施態様もまた、特許請求の範囲内である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＮＦαの発現を阻害する必要がある被験者において、ＴＮＦαの発現を阻害する方法であって、有効量のセンシンレン（Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）の抽出物を該被験者に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記抽出物が、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抽出物が、２〜２０重量％のアンドログラフォリド、１〜６重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１〜１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び１〜５重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抽出物が、３〜８重量％のアンドログラフォリド、３〜５重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、７〜９重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２〜４重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記抽出物が、４．２重量％のアンドログラフォリド、４．４重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、８重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２．１重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１βの発現を阻害する必要がある被験者において、ＩＬ−１βの発現を阻害する方法であって、有効量のセンシンレンの抽出物を該被験者に投与することを含む方法。
【請求項７】
前記抽出物が、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出物が、２〜２０重量％のアンドログラフォリド、１〜６重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１〜１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び１〜５重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抽出物が、３〜８重量％のアンドログラフォリド、３〜５重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、７〜９重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２〜４重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抽出物が、４．２重量％のアンドログラフォリド、４．４重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、８重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２．１重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
炎症性腸疾患を治療する必要がある被験者において、炎症性腸疾患を治療する方法であって、有効量のセンシンレンの抽出物を該被験者に投与することを含む方法。
【請求項１２】
前記抽出物が、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抽出物が、２〜２０重量％のアンドログラフォリド、１〜６重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１〜１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び１〜５重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抽出物が、３〜８重量％のアンドログラフォリド、３〜５重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、７〜９重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２〜４重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抽出物が、４．２重量％のアンドログラフォリド、４．４重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、８重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び２．１重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記炎症性腸疾患がクローン病である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抽出物が、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抽出物が、２〜２０重量％のアンドログラフォリド、１〜６重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１〜１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び１〜５重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記抽出物が、アンドログラフォリド、１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及びネオアンドログラフォリドを含有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抽出物が、２〜２０重量％のアンドログラフォリド、１〜６重量％の１４−デオキシ−アンドログラフォリド、１〜１２重量％の１４−デオキシ−１１，１２−デヒドロゲン−アンドログラフォリド、及び１〜５重量％のネオアンドログラフォリドを含有する、請求項２０に記載の方法。

【公表番号】特表２００７−５３５５４２（Ｐ２００７−５３５５４２Ａ）
【公表日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１０８９１（Ｐ２００７−５１０８９１）
【出願日】平成１７年４月２６日（２００５．４．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１４２８８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０４７２２
【国際公開日】平成１７年１１月１０日（２００５．１１．１０）
【出願人】（５０６３６１６８３）ハッチソン　メディファーマ　エンタープライジズ　リミテッド (7)
【Ｆターム（参考）】