タンパク質を安定化、保護及び可溶化させるための方法及びキット
本発明は、タンパク質を安定化又は可溶化させるための方法及びキットであって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法及びキットに関する。イヌリン誘導体及びグルコシド誘導体は、本発明の方法及びキットにおいて使用するのに適した糖ポリマー誘導体である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質の立体配座を安定化させるため、凝集及び／又は分解からタンパク質を保護するため、並びに／或いはタンパク質の可溶性を改善するための方法、キット及び試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質の生物学的機能は、その３次元構造に依存する。タンパク質は、ポリペプチドと呼ばれるアミノ酸の線状鎖として形成される。ｉｎ ｖｉｖｏでは、細胞内の適切な状態において、線状ポリペプチド鎖がフォールディングされ、これはシャペロンと呼ばれるタンパク質によって助長される可能性があるプロセスである。成熟したフォールディング状態のタンパク質は、原型構造として知られる活性のある３次元の立体配座を有する。この構造は、水素結合、静電性及び疎水性相互作用などの弱い力に依存する。これらの力はタンパク質の環境によって影響されるので、環境の変化が、タンパク質の変性及び／又は分解並びに機能の消失をもたらす構造破壊を引き起こす可能性がある。タンパク質のプロセシング中及びタンパク質の保存時に、このような問題に遭遇する。
【０００３】
遺伝的工学処理によるタンパク質の生成は、封入体としての非活性状態のタンパク質凝集体の蓄積をもたらすことが多い。宿主細胞から単離及び精製した後、タンパク質又は封入体は非フォールディング状態（変性状態）にし、且つ後に、タンパク質がそれらの原型構造及び生物活性を取り戻すように、リフォールディング状態（再生状態）にしなければならない。
【０００４】
伝統的なタンパク質フォールディング法は、変性剤希釈又はカラム系手法に関する。変性タンパク質は一般に、変性剤を希釈することによってリフォールディングされる。これはタンパク質分子の疎水性部分の崩壊を誘導し、それを行う際に、タンパク質は分子のコア中のその疎水性部分を保護する。あいにく、疎水性部分の崩壊時に、タンパク質は常に原型の生物活性がある立体配座を形成するわけではなく；２つの競合反応、リフォールディングと凝集が起こる。タンパク質凝集の誘導因子は、表面に曝されている疎水性アミノ酸残基であることが示唆される。凝集は望ましくなく、機能性、原型タンパク質の収率を低下させる。リフォールディングは一次反応（速度＝Ｋ＊［ｐｒｏｔ］）として知られているが、凝集反応は高濃度においてリフォールディングより助長される、何故なら凝集反応は高次反応（ｎ）（速度＝Ｋ’＊［ｐｒｏｔ］ｎ）だからである。タンパク質リフォールディングとタンパク質凝集の割合は、タンパク質濃度に強く依存する。プロセスの規模では、この濃度依存性は増大した凝集をもたらす可能性があり、したがってリフォールディング収率を低下させる可能性がある。これは、タンパク質溶液中での不完全な混合型によるものである可能性がある。大きなタンパク質分子をプロセシングすることは非常に難しい、何故ならそれらの分子は小さな変性剤分子よりもゆっくりと拡散し、それによって非常に局在したタンパク質濃度及び低い変性剤濃度を含む微環境、即ちタンパク質リフォールディングよりタンパク質凝集を助長する環境を形成するからである。
【０００５】
ジスルフィド結合を有するタンパク質に関して、原型タンパク質は成熟中に「成熟状態」であることを必要とすることが多く、非原型ジスルフィド結合を有する非凝集モノマータンパク質分子が最初に作製される可能性があり；次いでタンパク質特異的な酸化還元型結合を使用することによって、ジスルフィド結合が混合し、タンパク質は原型ジスルフィド結合を有する機能性タンパク質分子に成熟する。
【０００６】
リフォールディングプロセスは通常、「リフォールディング助剤」の存在下においてバッファー中に変性タンパク質分子を分散させて、再生を増大させることを含む。フォールディング助剤は通常、フォールディング中間体の溶解度を増大させる、且つ／又はフォールディング反応と凝集反応の相対反応速度を変える。ポリエチレングリコール及びさまざまな糖、例えばスクロース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、及び界面活性剤、例えばＣｈａｐｓ、Ｔｗｅｅｎ、ＳＤＳ、ドデシルマルトシドが、リフォールディング助剤として使用されてきている（Ｄｅ Ｂｅｍａｄｅｚ Ｃｌａｒｋ（１９９８）「現在のバイオテクノロジーの見解（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）９、１５７〜１６３」）。
【０００７】
α、β及びγシクロデキストリン（ＣＤ）は幾つかの酵素の安定化、可溶化及び親和性による精製において有用であることが報告されてきているが、これらのＣＤとタンパク質の間の性質及び相互作用、並びに生物活性に対するそれらの影響は依然明らかではない。α、β及びγシクロデキストリンはいずれも界面活性剤不在下（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ｅｌ、ＥＰ０８７１６５１、米国特許第５，７２８，８０４号）、及び界面活性剤含有リフォールディング環境（Ｇｅｉｌｌｍａｎ ＆ Ｒｏｚｅｍａ、米国特許第５，５６３，０５７号）でのタンパク質のリフォールディングを助長するための人工シャペロンとして使用されてきている。シクロデキストリンは、多数のグルコース残基から構成される環状オリゴ糖である。シクロデキストリンは、環構造内の糖残基の数に従い分類され、α−シクロデキストリンは６個のグルコース残基を有し、β−シクロデキストリンは７個のグルコース残基を有し、及びγ−シクロデキストリンは８個のグルコース残基を有する。シクロデキストリンを誘導体化によって修飾して、誘導体を生成することができる。
【０００８】
シクロデキストリンの内腔は疎水性であり、一方で外側表面は親水性である。疎水性の内側部分は、乏しい可溶性の薬剤を被包することができる。親水性の外側部分は可溶化を助長し、したがってシクロデキストリンは医薬品配合物中の有用なアジュバントである。
【０００９】
ＥＰ００９４１５７及び米国特許第４，６５９，６９６号（Ｈｉｒａｉ ｅｔ ａｌ）は、親水性で、生理的活性がある（フォールディング、原型）ペプチドとシクロデキストリン誘導体の物理的混合物から本質的になる医薬組成物中でのα−、β−、及びγ−シクロデキストリン誘導体の使用を記載しており、この組成物は剤形の均質な混合物である。
【００１０】
ＥＰ０４３７６７８Ｂ１、米国特許第５，７３０，９６９号及び米国特許第５，９９７，８５６号（Ｈｏｒａ）は、特定のシクロデキストリン誘導体：ヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシル、並びにβ−及びγ−シクロデキストリンのマルトトリオシル誘導体を使用してポリペプチド、特にタンパク質を可溶化及び／又は安定化させるための方法を記載しており；ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン誘導体が好ましい。ポリペプチド、場合によってはタンパク質、及び前述の特定のシクロデキストリン誘導体を含む水性及び凍結乾燥組成物も開示されている。
【００１１】
ＥＰ０８７１６５１及び米国特許第５，７２８，８０４号（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ｅｌ）は、非フォールディング状態又は凝集状態のタンパク質を再生するのに有効な量のシクロデキストリンを用いて、界面活性剤を含まない水性培地中で前記非フォールディング状態又は凝集状態のタンパク質を再生するための方法に関するものである。この場合、タンパク質は凝集を最少にするように選択した低い濃度、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｍｌで存在し、シクロデキストリンを含むリフォールディング用バッファー中で自発的にリフォールディングする。リフォールディング後、シクロデキストリンは透析によって除去される。
【００１２】
米国特許第５，５６３，０５７号（Ｇｅｌｌｍａｎ及びＲｏｚｅｍａ）は、線状アルキル無極性成分を有する界面活性剤、例えばＣＴＡＢ及びＴｒｉｔｏｎ（登録商標）−Ｘ１００（オクトキシノール−９）をミスフォールディング状態の酵素に加えて、酵素−界面活性剤複合体を形成させ、次いでそれをシクロデキストリンと接触させて、酵素に第２の活性状態の立体配座をとらせることによって、ミスフォールディング状態の配置から第２原型の活性状態の配置に酵素をリフォールディングするための方法を記載している。
【００１３】
Ｈｉｎｒｉｃｈｓ ｅｔ ａｌ（２００１）、「国際医薬ジャーナル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ）」、２１５、１６３〜１７４は、非誘導体化状態のイヌリン、イヌリンＳＣ９５（ＤＰｎ／ＤＰｗ＝５．５／６．０）、イヌリンＲＳ（ＤＰｎ／ＤＰｗ＝１４．２／１９．４）、及びイヌリンＥＸＬ６０８（ＤＰｎ／ＤＰｗ２３．０／２６．２）を使用して、凍結乾燥及びその後の乾燥タンパク質の保存中の分解からアルカリホスファターゼを保護することを記載している。
【００１４】
ＷＯ９６／４１８７０（Ｇｏｍｂａｃ ｅｔ ａｌ）は、コラゲナーゼを安定化させるための、イソマルト及び／又はイヌリン（非誘導体化状態）を含む凍結、乾燥又は凍結乾燥水溶性コラゲナーゼ組成物を記載している。
【００１５】
イヌリンは、ポリフルクトースの鎖から一般になるＤ−フルクタンであり、その中でフルクトース単位は大部分は互いに結合しているか、又はβ（２−１）結合によってのみ結合している。その大部分が１つのグルコシル単位中の末端であるポリフルクトース鎖の多分散系混合物として、一般にイヌリンは天然に存在する。イヌリンは植物から抽出される細菌合成から得ることができるか、又はスクロースから始める酵素による合成によってｉｎ ｖｉｔｒｏで作製することができる。細菌によって生成されるイヌリンは、植物源由来のイヌリンより分枝状であり、より大きな分子量（約２，０００〜約２０，０００，０００までの範囲）を一般に有し、一方植物源由来のイヌリンは、一般に約６００〜約２０，０００の範囲の分子量を有する、線状又はわずかに分枝状のポリフルクトース鎖、或いはその混合物から一般に構成される。
【００１６】
Ｇがグルコシル単位を表し、Ｆがフルクトシル単位を表し、ｎが炭水化物鎖中で互いに結合したフルクトシル単位の数を表す整数である、一般式ＧＦ．ｎ又はＦ．ｎによって、末端炭水化物単位に応じてイヌリンを表すことができる。１個のイヌリン分子中の糖単位（フルクトース及びグルコース単位）の数、即ち前述の式中のｎの値は、（ＤＰ）によって表される重合度として表される。おそらく存在する単糖グルコース（Ｇ）及びフルクトース（Ｆ）、並びに二糖スクロース（ＧＦ）を考慮せずに、イヌリン組成物中に存在するイヌリン分子の合計数で割った、所与の前記イヌリン組成物中の糖単位（Ｇ及びＦ単位）の合計数に対応する値である、（ＤＰ）によって表されるパラメータ（数）平均重合度を使用することも多い。平均重合度（ＤＰ）は、例えばＬ．Ｄｅ Ｌｅｅｎｈｅｅｒ（Ｓｔａｒｃｈ、４６（５）、１９３〜１９６、（１９９４）、及び「有機素材としての炭水化物（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、Ｖｏｌ．ＩＩＩ、ｐ．６７〜９２、（１９９６）」によって記載された方法によって決定することができる。
【００１７】
イヌリンは植物源から、主にチコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ）の根及びキクイモ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ）の塊茎から一般に調製され、その中でイヌリンは、新鮮な植物物質に対して約１０〜２０％ｗ／ｗの濃度で存在し得る。植物源由来のイヌリンは通常、２〜約１００の範囲の重合度（ＤＰ）を有する線状及びわずかに分枝状の多糖鎖の多分散系混合物である。例えばＥＰ０７６９０２６及びＥＰ０６７０８５０中に記載されたのと同様に、知られている技法に従い、イヌリンを前記植物部分から容易に抽出し、精製且つ場合によっては分別して、不純物、単糖及び二糖並びに望ましくないオリゴ糖を除去し、さまざまな等級のイヌリンを提供することができる。
【００１８】
典型的には約６〜約４０の範囲の（ＤＰ）を有するイヌリンが市販されている。チコリー由来のイヌリンは、例えばＯｒａｆｔｉ（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）からＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）としてさまざまな等級で入手可能である。典型的なＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）等級には、（約１０の（ＤＰ）を有し合計約８重量％までのグルコース、フルクトース及びスクロースを含む）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＳＴ、（約１０の（ＤＰ）を有するが合計１重量％未満のグルコース、フルクトース及びスクロースを含む）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＬＳ、及び（少なくとも２３の（ＤＰ）、一般に約２５の（ＤＰ）を有し、且つグルコース、フルクトース及びスクロースをほとんど含まない）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＲＴＭ．ＨＰがある。Ｉｎｕｔｅｃ（登録商標）Ｎ２５、２５のＤＰを有する非誘導体化状態のイヌリンはＯｒａｆｔｉから入手可能である。
【００１９】
通常（ＤＰ）＜１０として定義される低い重合度を有するイヌリンは、イヌロ−オリゴ糖、フルクト−オリゴ糖又はオリゴフルクトースと一般に名付けられる。オリゴフルクトースはイヌリンの部分的な（好ましくは酵素による）加水分解によって従来の方法で得ることができ、当技術分野でよく知られている技法に従いスクロースから酵素によるｉｎ ｖｉｔｒｏ合成によって得ることもできる。例えばＯｒａｆｔｉ、（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）からのＲＡＦＴＩＬＯＳＥ（登録商標）、例えばオリゴフルクトースの約９５重量％の平均含有率を有し、２〜７の範囲の重合度（ＤＰ）を有し、且つ合計約５重量％のグルコース、フルクトース及びスクロースを含むＲＡＦＴＩＬＯＳＥ（登録商標）Ｐ９５として、幾つかの等級のオリゴフルクトースが市販されている。
【００２０】
さまざまなイヌリン誘導体、及びイヌリン誘導体を調製するための方法は、その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第６，５３４，６４７号（Ｓｔｅｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ）中に記載されている。
【００２１】
ポリフルクトース骨格において疎水性アルキル鎖で誘導体化させたイヌリン、例えばＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（ＳＰ１）がＯｒａｆｔｉ（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）から市販されている。
【００２２】
デンプンは、生分解性の貯蔵多糖として多くの植物中に多量に存在する、よく知られている炭水化物である。デンプン分子は、α−１，４グルコシル−グルコシル結合によって互いに結合しそれによって（アミロースと呼ばれる）線状鎖デンプン構造を形成する、又はα−１，４及びα−１，６グルコシル結合によって結合しそれによって分枝点にα−１，６グルコシル−グルコシル結合を有する（アミロペクチンと呼ばれる）分子状鎖デンプン構造を形成する、Ｄ−グルコシル単位から構成されるポリマーである。植物源に応じて主に線状構造又は主に分枝状構造を有するポリマー分子の多分散系混合物として、デンプンは天然に存在する。デンプンは前記構造を有する分子の多分散系混合物として、天然に存在する可能性もある。重合度（ＤＰ）、即ちデンプン分子中の互いに結合したグリコシル単位の数は大きく変わる可能性があり、それは主に植物源及び採取時間に依存する。
【００２３】
グリコシル単位間の結合は加水分解、熱及びせん断力に敏感である。酸加水分解、酵素加水分解、熱処理又はせん断によって、或いは前記処理の組合せによって、本明細書でデンプン加水分解生成物と一般的に呼ぶさまざまなデンプン誘導体を調製するために、この現象は産業上利用されている。デンプンの源、加水分解触媒、加水分解条件、熱処理及び／又はせん断条件に応じて、本質的にグルコースから構成される生成物から、グルコースシロップと一般に呼ばれる生成物を経てマルトデキストリン及びデキストリンと一般に呼ばれる生成物の範囲まで、広くさまざまなデンプン加水分解生成物を得ることができる。デンプン加水分解生成物は、当技術分野ではよく知られている。
【００２４】
Ｄ−グルコース（デキストロース）は強い還元力を示す。デンプン加水分解生成物は、Ｄ−グルコシル鎖から構成されるＤ−グルコース、オリゴマー（ＤＰ＜１０）及び／又はポリマー（ＤＰ＞１０）分子から構成される多分散系混合物であり、これらもオリゴマー及びポリマー分子上のＤ−グルコース及び還元糖単位（実質的に末端グルコシル単位である）の存在から生じる還元力を示す。
【００２５】
結果として、所与のデンプン生成物から始まり、加水分解の程度が大きくなるほど、より多くの分子（モノマーＤ−グルコース、オリゴマー及び残りのポリマー分子）が加水分解生成物中に存在し、したがってデンプン加水分解生成物のより高い還元力が得られる。したがって、デンプン加水分解生成物の還元力は、さまざまなデンプン加水分解生成物を区別及び指定するための、顕著な選択の特徴となっている。還元力はデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）として表され、これは乾燥物質１００グラム当たりのＤ−グルコース（デキストロース）のグラム数に形式上相当する。１００のＤ．Ｅ．を定義に従い有するＤ−グルコースでは、そのＤ．Ｅ．は所与の生成物中の乾燥生成物ベースでのＤ−グルコース及び還元糖単位（デキストロースとして表す）の量を示す。したがってＤ．Ｅ．は、実際デンプンの加水分解の程度の測定値でもあり、さらにデンプン加水分解生成物中のグルコースポリマーの平均分子量の相対的指標でもある。
【００２６】
Ｄ−グルコースから本質的に構成される加水分解生成物以外に、デンプン加水分解生成物のＤ．Ｅ．は１〜約９６の範囲である可能性があり、Ｄ．Ｅ．に基づいた広くさまざまな等級のデンプン加水分解生成物が市販されている。
【００２７】
２０を超えるＤ．Ｅ．を有する加水分解生成物は、一般にグルコースシロップと呼ばれる。４７までのＤ．Ｅ．を有するグルコースシロップを、従来の技法によって、例えばスプレー乾燥によって乾燥させて、最大約５ｗｔ％の湿気を含む粉末形のいわゆる「乾燥グルコースシロップ」を得ることができる。
【００２８】
２０以下のＤ．Ｅ．を有する加水分解生成物は、一般にマルトデキストリン及びデキストリンと呼ばれる。その製造プロセスは通常最後にスプレー乾燥工程を含み、最大約５ｗｔ％の湿気を含む粉末形でもこれらの加水分解生成物を生成する（ｗｔ％は重量％を示す）。
【００２９】
グルコースシロップ、マルトデキストリン及びデキストリンは、よく知られている方法に従って調節された加水分解条件下において、さまざまなデンプン源から大規模に工業的に生成される。得られるさまざまな等級のデンプン加水分解生成物は、それらのデンプン供給源物質、及び製造法の指標（例えば、マルトデキストリン／デキストリン）と組合せることが多いそれらのＤ．Ｅ．値によって通常定義される。
【００３０】
幾つかの規制には従うが、用語「マルトデキストリン」はトウモロコシデンプン由来の生成物を称するものとし、本明細書で使用する用語マルトデキストリンはトウモロコシデンプンの加水分解生成物に限られないが、任意の供給源由来のデンプンから得られる２０以下のＤ．Ｅ．を有するデンプン加水分解生成物を本明細書では示す。
【００３１】
デンプンの典型的な市販の供給源はトウモロコシ、ジャガイモ、タピオカ、コメ、モロコシ及びコムギである。しかしながら、本発明と組合せて使用するのに適したデンプン加水分解生成物は、前記供給源由来のデンプンに限られず、それらは任意の供給源由来のデンプンから得られるデンプン加水分解生成物に及ぶ。
【００３２】
グルコースシロップ、マルトデキストリン及びデキストリンはよく知られており、市販されている。例えば、グルコースシロップ及びマルトデキストリンの生成、性質及び適用例は、文献「Ｓｔａｒｃｈ Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．（１９９２）中の総説記事中に記載されてきている。さらに、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社からの技術文献「ＧＬＵＣＩＤＥＸ Ｂｒｏｃｈｕｒｅ８／０９．９８」ではマルトデキストリンを記載し、乾燥グルコースシロップが記載され、さまざまな等級が販売用に提供されている。
【００３３】
プロセシング中及び保存時にタンパク質の安定性を調節することは、多くの産業、特に医薬及びバイオテクノロジー産業において問題として認識されている。タンパク質が遭遇する難点はタンパク質の製造を困難にし、低い収率をもたらし、プロセスを不経済にする可能性がある。タンパク質は、プロセシング中にタンパク質の分解及び機能の消失をもたらす可能性がある条件に曝されるので、したがってタンパク質プロセシングの方法を改善して、タンパク質を保護しタンパク質の損傷又は消失を最少にする必要性が存在する。さらに、タンパク質の溶解度を改善しタンパク質の凝集を低下させる必要性が存在する。プロセシングを高いタンパク質濃度で行い、それによって体積を低下させることができるように、溶液中でのタンパク質プロセシングに関する方法を改善する要求がさらに存在する。残念ながら、凝集は一般に高いタンパク質濃度で刺激され、高い局所タンパク質濃度の領域は大きな反応容器中では除去するのは困難である。界面活性剤又はカオトロピック剤を使用してタンパク質の溶解度を保つことができるが、界面活性剤は下流プロセシング中に除去するのは非常に困難であり、使用する化学物質に関して他の欠点が存在する、例えば変性剤塩酸グアニジンは毒性であり、タンパク質生成用機器のステンレス鋼製容器及びパイプを腐食する。変性剤尿素にタンパク質を長時間曝すことは、アミノ酸の修飾、例えばカルバミル化をもたらす可能性がある。界面活性剤及び可溶化剤、アルギニンなどは、タンパク質研究所で使用される最も一般的な分析技法（例えばＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、ＲＰ−ＨＰＬＣ）の幾つかには不適合である。このような汚染を排除するためのバッファー交換が考えられるが、未知の希釈又はサンプルの消失をもたらし、タンパク質凝集を引き起こす可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３４】
本発明によって処理される問題は、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ（例えば、変性状態の立体配座、又は原型立体配座にタンパク質を保つ）、それによってタンパク質の凝集を減少させ、タンパク質の溶解性を改善し、分解に対してタンパク質を保護することを含む。本発明はさらに、タンパク質が変性状態又は原型の非凝集形で溶液中に保たれ、容器又は他のタンパク質分子への粘着を減らし、凝集する傾向を低下させるように、タンパク質の溶解性を改善しようとするものである。
【００３５】
本発明の目的は、現在の方法に関する欠点を軽減するように、タンパク質プロセシングの方法、特にタンパク質フォールディング、精製、濃縮及び／又は保存に関する方法において使用することができるタンパク質を安定化させるため、保護するため、及び可溶化するための方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
第１の態様では本発明は、タンパク質を安定化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
好ましい安定化法では、タンパク質と糖ポリマー誘導体を水溶液中で接触させる。安定化法は、水溶液の乾燥、脱水、蒸発、又は凍結乾燥（凍結乾燥）をさらに含むことができる。
【００３８】
本発明の安定化法では、タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる。タンパク質は変性形で安定化させることができ、非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態であってよく、或いは原型の立体配座で安定化させることができる。原型立体配座のタンパク質に関する方法では、タンパク質を変性に対して安定化させる。
【００３９】
本発明の安定化法では、タンパク質を凝集に対して安定化させる。本発明の安定化法は、タンパク質を分解に対して保護するためにも有用である。
【００４０】
第２の態様では本発明は、タンパク質を可溶化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法を提供する。
【００４１】
本発明の安定化法及び可溶化法は、タンパク質のプロセシング法、特にタンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる方法において有用である。本発明の安定化法及び可溶化法は、１つ又は複数のタンパク質精製工程、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及び／又はクロマトグラフィーを含む、タンパク質のプロセシング法において使用することができる。
【００４２】
第３の態様では本発明は、糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではなく、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための使用を提供する。
【００４３】
本発明によれば、糖ポリマー誘導体を使用して、原型タンパク質の変性又は変性（非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態の）タンパク質の再生などの、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ、タンパク質を所望の配置に保つのを助ける。糖ポリマー誘導体は、例えば熱、電磁放射、せん断応力、タンパク質分解による、或いは還元、酸化、又はカルバミル化などの化学修飾による分解に対してタンパク質を安定化させるように働く。本発明の方法では、糖ポリマー誘導体を使用して、水溶液中でタンパク質を安定化させることができ、或いは例えば水溶液の乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）によって生成した乾燥形でタンパク質を安定化させることができる。
【００４４】
第４の態様では本発明は、糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではない、タンパク質を可溶化させるための使用を提供する。
【００４５】
本明細書で使用する用語「タンパク質」は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド及びオリゴペプチドを含む。タンパク質は合成又は天然に存在するものであってよく、化学合成によって、或いは組換え又は非組換え法によって得ることができる。ＤＮＡ組換え又は成熟技法を使用して、タンパク質を生成することができる。タンパク質はｉｎ ｖｉｖｏ、完全な動物中、或いは真核生物又は原核生物細胞中で生成することができ；或いは、例えば大腸菌溶解物、小麦麦芽エキス、又はウサギ網状赤血球を使用する無細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳などのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を使用して、タンパク質を発生させることができる。無細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写後、例えばファージ又はリボソームディスプレイ後に使用することができる。
【００４６】
変性タンパク質は、完全に変性状態、又は部分的に変性状態、或いはタンパク質が非フォールディング状態のタンパク質及び／又は部分的にフォールディングリフォールディング状態の中間体などの、非原型の形であるように再生状態にすることができる。変性タンパク質を含む水溶液又は乾燥サンプルは、１つ又は複数のこれらの形を含み得る。原型タンパク質は、フォールディング状態の機能的な立体配座である。幾つかのタンパク質は水溶液中に、或いは乾燥サンプル中に、汚染した凝集体及び／又は封入体の形で存在する可能性もある。
【００４７】
本発明の方法中で使用するのに適した糖ポリマー誘導体は、適切な濃度及び適切な条件で、溶液中で非原型、非フォールディング状態又は部分的にフォールディングした可溶状態に変性タンパク質を保つことができる誘導体である。用語「糖ポリマー誘導体」は、α−、β−又はγ−シクロデキストリン及びそれらの誘導体は除外する。１つ、又は複数の（即ち混合物の）糖ポリマー誘導体を、本発明の方法又は使用中で用いることができる。適切な糖ポリマー誘導体は、疎水性アミノ酸側鎖を保護する、或いは実質的なタンパク質電荷又は水素結合特性を変えることができる誘導体である。本明細書で使用する用語「糖ポリマー誘導体」は、３個以上の単糖単位を含むポリマー及びオリゴマー糖分子を含む。糖ポリマー誘導体は、線状又は非線状両親媒性の糖ポリマー誘導体であってよい。
【００４８】
本発明の方法中で使用する糖ポリマー誘導体は、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タゴトース、キシルロース及びリブロースからなる群から選択される１つ又は複数の糖を含むことができる。これらの糖類の中では、グルコース、フルクトース、マンノース及び／又はガラクトースが、４つの最も一般的で単純な（モノマー）糖単位である。糖ポリマー誘導体は、デキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、プルラン、マンナン、キチン、キトサン、イヌリン、レバン、キシラン、シクロデキストリン（ただし、それはα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないものとする）、シクロアミロース又はその誘導体であってよい。適切な糖ポリマー誘導体は、その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第５，２０２，４３３号及び米国特許第５，２０４，４５７号中に開示されている。
【００４９】
両親媒性の糖ポリマーは、原型及び／又は変性タンパク質と疎水性相互作用することができる。適切な置換基を用いた糖ポリマーの誘導体化は、両親媒性及びタンパク質との相互作用の強度を増大させる。本発明の方法、使用及びキットで使用する糖ポリマー誘導体に適した置換基には、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される置換基がある。炭水化物分子当たり１つ又は複数の置換基が存在してよい。アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アラルキル、脂肪酸及びポリオール基は、直鎖又は分枝鎖状の基であってよい。置換基は２〜２５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることが好ましく、置換基は３〜２２個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることがより好ましく、置換基は３〜１８個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることが最も好ましい。
【００５０】
糖ポリマー誘導体は、３個以上の糖単位を含む環状糖ポリマー誘導体であってよく、糖ポリマー誘導体は、α−、β−又はγ−シクロデキストリンを除いたシクロデキストリン誘導体などのグルコサンであってよい。
【００５１】
糖ポリマー誘導体が、グルコサンなどの環状糖ポリマー誘導体、例えばシクロデキストリン誘導体であるとき、タンパク質を安定化させるために本発明の方法において使用する濃度は、好ましくは存在するタンパク質の１００〜１０，０００倍のモル濃度、より好ましくは存在するタンパク質の１００〜５，０００倍のモル濃度、さらにより好ましくは存在するタンパク質の１００〜２，０００倍のモル濃度、さらに好ましくは存在するタンパク質の５００〜１，５００倍のモル濃度、最も好ましくは存在するタンパク質の約１，０００倍のモル濃度である。
【００５２】
本発明の方法及び使用では、糖ポリマー誘導体は、３個以上の単糖単位を含む線状又は分枝状糖ポリマー誘導体、フルクトサンなど、例えばイヌリン誘導体、又はグルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシドであることが好ましい。好ましい誘導体には、本明細書に記載する式（Ｉ）のイヌリン誘導体及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体がある。式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体は、デンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンであることが好ましく、本明細書で定義する式（ＩＩＩ）の単位から構成される式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが特に好ましい。
【００５３】
イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビルは、約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０、例えば２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０の重合度を有することが適切である。イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体は、１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基、例えば１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化されることが好ましい。１つ又は複数の無極性ヒドロカルビル基は、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択されることが好ましい。無極性ヒドロカルビル基は１〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルキル基であってよく、且つ／或いは無極性ヒドロカルビル基は２〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子有するアルケニル基又はアルキニル基であってよい。
【００５４】
本明細書に記載する方法及び使用に適した糖ポリマー誘導体は、０．０１〜３．０又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５の糖単位当たりの平均置換度を典型的には有する。好ましいイヌリン誘導体は、０．０１〜３．０、又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０２〜１．０又は０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５又は０．０３〜０．３の範囲の糖単位当たりの平均置換度を典型的には有する。好ましいグルコシドヒドロカルビル誘導体は、０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、より好ましくは０．０３〜０．３の範囲の置換度を一般に有する。
【００５５】
好ましい態様では本発明では、イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を安定化させる方法を提供する。タンパク質とイヌリン誘導体は、水溶液中で接触させることが好ましい。水溶液中でタンパク質を安定化させる方法は、水溶液を乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）させて、乾燥タンパク質／イヌリン誘導体組成物を生成することをさらに含むことができる。タンパク質を一定の長さの時間保存する場合、（及び原型、機能性である場合）、乾燥はタンパク質の立体配座、完全性の維持を助長するのに特に有用である。このような方法では、タンパク質をイヌリン誘導体によって立体配座の変化に対して安定化させる。安定化させるタンパク質は変性タンパク質の形、又は原型の立体配座であってよい。変性タンパク質は凝集に対して安定化させ、原型タンパク質は変性に対して安定化させる。変性タンパク質と原型タンパク質の両方を分解に対して保護する。
【００５６】
他の好ましい態様では本発明では、イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法を提供する。非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質の水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法も提供する。本発明はさらに、原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質の水溶液、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法を提供する。
【００５７】
タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な糖ポリマー誘導体、例えばイヌリン誘導体の濃度は、変性タンパク質の再生を遅らせる濃度である。適切な濃度では、糖ポリマー誘導体が存在しない場合に起こる回復より遅い構造の回復がある、何故なら糖ポリマー誘導体は、タンパク質を非原型配置に保つのを手助けするからである。糖ポリマー誘導体の存在は、誘導体が存在しない場合に観察されるリフォールディング率と比較して、リフォールディング率を低下させる。所与の立体配座（変性状態又は原型）の所与のタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の濃度は、温度、溶液状態、タンパク質濃度及びタンパク質自体などのさまざまな要因に依存する。適切な濃度は当業者によって容易に決定することができる。
【００５８】
タンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の濃度は一般に、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍、好ましくはタンパク質のモル濃度の約０．５〜約５００、約１〜約３００、約１〜約１００、約１〜約５０、約１〜約３０、約１〜約２５、又は約１〜約２０倍の範囲内にある。典型的にはイヌリン誘導体は、約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ又は約０．２５〜２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶液中に存在する。水溶液中のイヌリン誘導体の濃度の上限は、溶液中のそのイヌリン誘導体の溶解度によって決定される。
【００５９】
イヌリン誘導体を使用してタンパク質を安定化させ保護する本発明の方法は、タンパク質のプロセシング法、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーなどの１つ又は複数のタンパク質精製工程を含むタンパク質フォールディング法及び／又はプロセシング法において有用である。
【００６０】
本発明は、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の使用を提供し、本発明を使用して、水溶液中又は乾燥形でタンパク質を安定化させることができる。
【００６１】
本発明の方法及び使用中で使用するのに適したイヌリン誘導体は、Ｉｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（Ｏｒａｆｔｉ、ベルギー）である。
【００６２】
本発明の方法又は使用に好ましいイヌリン誘導体は、式（Ｉ）の化合物であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく、
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である化合物である。
【００６３】
Ｒ１又はＲ２がアルキル基である場合、それは１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６４】
Ｒ１又はＲ２がアルケニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルケニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６５】
Ｒ１又はＲ２がアルキニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６６】
Ｒ１又はＲ２がハロアルキル基である場合、それは１つ又は複数のハロゲン原子（例えばフッ素、塩素又は臭素原子）で置換された前に定義したアルキル基である。前記ハロアルキル基は１〜３個のハロゲン原子置換基を有することが好ましく、１〜３個のフッ素又は塩素原子置換基を有することがより好ましい。前記ハロアルキル基は３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６７】
Ｒ１又はＲ２がシクロアルキル基である場合、それは３〜９個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；前記シクロアルキル基は３〜７個の炭素原子を有することが好ましく、４〜６個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６８】
Ｒ１又はＲ２がアリール基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する芳香族基、例えばフェニル基又はナフチル基である。
【００６９】
Ｒ１又はＲ２がアラルキル基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数の芳香族基、例えばベンジル基又はトリフェニルメチル基で置換された、前に定義したアルキル基である。
【００７０】
基Ｒ１及びＲ２はそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択することができる。１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルキル基であってよく；１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２は、２〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基であることが適切である。アルキル基Ｒ１及びＲ２はそれぞれ、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状アルキル基、又は３〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する分枝状アルキル基であってよい。
【００７１】
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度は、０．０１〜３．０、又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０２〜１．０又は０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５又は０．０３〜０．３の範囲にあることが適切である。式（Ｉ）の化合物は、例えばイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンであってよい。
【００７２】
他の態様では本発明は、グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を安定化させるための方法を提供する。
【００７３】
本発明の好ましい安定化法では、タンパク質とグルコシド誘導体、例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体を水溶液中で接触させる。安定化法は、水溶液の乾燥、脱水、蒸発、又は凍結乾燥（凍結乾燥）をさらに含むことができる。
【００７４】
本発明のこのような安定化法では、グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）が作用して、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させる。非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態であってよい変性形で、タンパク質を安定化させることができ、或いはタンパク質は原型の立体配座で安定化させることができる。グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）と原型の立体配座のタンパク質を接触させることを含む方法では、タンパク質を変性に対して安定化させる。本発明の安定化法では、適切にはグルコシドヒドロカルビル誘導体であるグルコシド誘導体による凝集に対して、タンパク質を安定化させる。グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）を使用する本発明の安定化法は、タンパク質を分解に対して保護するためにも有用である。
【００７５】
さらに他の態様では本発明は、グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法を提供する。
【００７６】
グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体を使用する、本発明の安定化法及び可溶化法は、タンパク質プロセシングの方法、特にタンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる方法において有用である。本発明のこのような安定化法及び可溶化法は、１つ又は複数のタンパク質精製工程、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及び／又はクロマトグラフィーを含むタンパク質プロセシングの方法において使用することができる。
【００７７】
他の態様では本発明は、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための、グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体の使用を提供する。
【００７８】
本発明によれば、好ましくはグルコシドヒドロカルビル誘導体であるグルコシド誘導体を使用して、原型タンパク質の変性又は変性（非フォールディング状態或いは部分的にフォールディング状態）タンパク質の再生などの、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ、タンパク質を所望の配置に保つのを助ける。グルコシド誘導体が作用して、例えば熱、電磁放射、せん断応力、タンパク質分解による、或いは還元、酸化、又はカルバミル化などの化学修飾による分解に対してタンパク質を安定化させる。本発明の方法では、グルコシド誘導体、グルコシドヒドロカルビル誘導体を使用して水溶液中で、或いは例えば水溶液の乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）によって生成した乾燥形で、タンパク質を安定化させることができる。
【００７９】
さらに他の態様では本発明は、タンパク質を可溶化させるためのグルコシド誘導体、適切にはグルコシドヒドロカルビル誘導体の使用を提供する。
【００８０】
グルコシド誘導体はグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが好ましく、さらに式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが好ましい。
【００８１】
Ｒ１がアルキル基である場合、それは１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８２】
Ｒ１がアルケニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルケニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８３】
Ｒ１がアルキニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８４】
Ｒ１がハロアルキル基である場合、それは１つ又は複数のハロゲン原子（例えばフッ素、塩素又は臭素原子）で置換された前に定義したアルキル基である。前記ハロアルキル基は１〜３個のハロゲン原子置換基を有することが好ましく、１〜３個のフッ素又は塩素原子置換基を有することがより好ましい。
【００８５】
前記ハロアルキル基は３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８６】
Ｒ１がシクロアルキル基である場合、それは３〜９個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；前記シクロアルキル基は３〜７個の炭素原子を有することが好ましく、４〜６個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８７】
Ｒ１がアリール基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する芳香族基、例えばフェニル基又はナフチル基である。
【００８８】
Ｒ１がアラルキル基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数の芳香族基、例えばベンジル基又はトリフェニルメチル基で置換された、前に定義したアルキル基である。
【００８９】
好ましくは、１つ又は複数の基Ｒ１は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であってよく、且つ／或いは１つ又は複数の基Ｒ１は、２〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基であってよい。それぞれのアルキル基Ｒ１は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状アルキル基、又は３〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する分枝状アルキル基であることが適切である。
【００９０】
式（ＩＩ）の化合物では、グルコシル単位当たりの平均置換度は０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、及び最も好ましくは０．０３〜０．３である。
【００９１】
式（ＩＩ）の化合物は、多分散系の線状又は分枝状のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタンであってよい。それぞれのグルコシル単位ＧはＤ−グルコシル又はＬ−グルコシル単位、好ましくはＤ−グルコシル単位であってよい。グルコシル単位は１，４−結合又は１，６−結合を介して結合することができ、且つ結合はそれぞれα−結合又はβ−結合であってよい。
【００９２】
本発明の方法及び使用の好ましい実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物はデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンである。
【００９３】
特に好ましいデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンは、式（ＩＩＩ）の単位であって、
Ｇ’（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ｂ（ＩＩＩ）
上式で、
Ｇ’がデンプン加水分解生成物分子のグルコシル単位を表し、デンプン加水分解生成物が１〜４７の範囲のデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）を有し、
Ｒ１が前に定義したヒドロカルビル基であり、且つ
ｂがグルコシル単位当たりのカルバミン酸ヒドロカルビル基の数を表し、基の数は置換度（ＤＳ）、即ち式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビルウレタンのグルコシル単位当たりのヒドロカルビル置換基の平均数として一般的に表し、前記ＤＳ値が０．０１〜２．０の範囲である単位から構成される式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体である。
【００９４】
カルバミン酸基によって理論上置換することができる、対象グルコシド分子のグルコシル単位当たりのヒドロキシル基の数は、非末端、非分枝状グルコシル単位に関しては最大３であり、一方末端又は非末端の分枝状グルコシル単位に関しては、その数はそれぞれで４又は２ある。さらに、ＤＳはグルコシル単位当たりの置換基の平均数を表すので、グルコシドＮ−カルバミン酸ヒドロカルビル（ＩＩａ）分子中には、カルバミン酸ヒドロカルビル基によって置換されていないグルコシル単位が存在する可能性があることは明らかである（したがって式（ＩＩＩ）中の前記グルコシル単位に関するｂはゼロである）。
【００９５】
デンプン加水分解生成物は一般に、グルコシド分子の多分散系混合物の形で現れる。したがって、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）を調製するための出発物質として、通常の場合通りこのような混合物を使用するとき、得られる生成物はグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の対応する多分散系混合物でもある。このような多分散系混合物は、本発明の方法及び使用において利用するためのグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の好ましい実施形態を構成する。
【００９６】
前記グルコシド分子の多分散系混合物から構成され１〜４７の範囲のＤ．Ｅ．を有する、市販等級のデンプン加水分解生成物は、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）を調製するのに非常に適している。
【００９７】
典型的には、本発明のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の調製において使用するのに適したデンプン加水分解生成物は、例えばＲＯＱＵＥＴＴＥ社から入手可能であるＧＬＵＣＩＤＥＸ（登録商標）マルトデキストリン及びＧＬＵＣＩＤＥＸ（登録商標）乾燥グルコースシロップ例えば、型１（Ｄ．Ｅ．最大５を基にしたジャガイモ）、型２（Ｄ．Ｅ．最大５を基にした青色メイズ）、型６（Ｄ．Ｅ．５〜８を基にした青色メイズ）、型９（Ｄ．Ｅ．８〜１０を基にしたジャガイモ）のマルトデキストリン、並びに型１２（Ｄ．Ｅ．１１〜１４）、型１７（Ｄ．Ｅ．１５〜１８）及び型１９（Ｄ．Ｅ．１８〜２０）のマルトデキストリン、並びに型２１（Ｄ．Ｅ．２０〜２３）、型２８Ｅ（Ｄ．Ｅ．２８〜３１）、型２９（Ｄ．Ｅ．２８〜３１）、型３２（Ｄ．Ｅ．３１〜３４）、型３３（Ｄ．Ｅ．３１〜３４）、型３８（Ｄ．Ｅ．３６〜４０）、型３９（Ｄ．Ｅ．３８〜４１）、型４０（Ｄ．Ｅ．３８〜４２）及び型４７（Ｄ．Ｅ．４３〜４７）の乾燥グルコースシロップなどである。
【００９８】
本発明のヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）のヒドロカルビル基、即ち本明細書で前に定義した式（ＩＩＩ）中のＲ１基は、好ましくは飽和Ｃ３〜Ｃ２２アルキル基、より好ましくは飽和Ｃ４〜Ｃ１８アルキル基、さらにより好ましくは飽和線状Ｃ４〜Ｃ１８アルキル基、最も好ましくは飽和線状Ｃ６〜Ｃ１８アルキル基である。典型的には、適切なアルキル基にはブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル及びオクタデシル基がある。
【００９９】
他の好ましい実施形態では、ヒドロカルビル基はＣ３〜Ｃ２２アルケニル基、好ましくはＣ４〜Ｃ１８アルケニル基、最も好ましくは線状Ｃ６〜Ｃ１８アルケニル基である。
【０１００】
典型的には、適切なアルケニル基にはブテニル、ヘキセニル、オクテニル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル及びオクタデセニル基がある。
【０１０１】
本発明のウレタン（ＩＩａ）中では、式（ＩＩＩ）の単位の全Ｒ１基は同じであるか又は異なってよい。後者のウレタン（ＩＩａ）は、実際は前に定義した異なるＲ１基を有する２個以上のイソシアネートの混合物である式Ｒ１−ＮＣＯのイソシアネートと、デンプン加水分解生成物を反応させることによって、以下に記載する方法に従い容易に調製することができる。
【０１０２】
飽和アルキルイソシアネートは、例えば第１級又は第２級アルキル−アミンとホスゲンを反応させることによって、従来通りに調製することができる。不飽和アルキルイソシアネートは、アルケニル−アミンから同様に調製することができる。基Ｒ２Ｒ３Ｃ＝ＣＨ−が式（ＩＩＩ）の基Ｒ１に対応し、且つＲ２が水素又はアルキル基を表し、且つＲ３がアルキル又はビニル基を表す式Ｒ２Ｒ３Ｃ＝ＣＨ−ＮＣＯ（ＩＶ）の、α，β−不飽和アルキルイソシアネートは、Ｋ．Ｋｏｅｎｉｇ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．、２１（４）、３３４〜３３５（１９７９））によって開示されたのと同様に、アルデヒドＲ２Ｒ３ＣＨ−ＣＨＯとＭｅ３Ｃ−ＮＨ２の縮合、次に（そのエナミン形と平衡状態で）生じたシッフ塩基とホスゲンの反応、及びＭｅ３Ｃ−Ｃｌの熱除去によって調製することができる。さらに、さまざまな不飽和アルキルイソシアネートが、特にＤｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．の米国特許第３，８９０，３８３号及び米国特許第３，８０３，０６２号中で開示されている。式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（前に定義したＲ１）の多くのアルキルシアネートが市販されている。
【０１０３】
本発明によるグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）は、式（ＩＩＩ）のグルコシル単位当たり０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、及び最も好ましくは０．０３〜０．３の範囲の置換度（ＤＳ）を有する。
【０１０４】
カルバミン酸ヒドロカルビルの１つ又は複数の置換基は、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）のグルコシル単位上のさまざまな位置に位置し得る。
【０１０５】
本発明のグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）は、デンプン加水分解生成物、イソシアネート及び反応生成物に関して不活性である溶媒中に溶かして、例えばデンプン加水分解生成物と選択したヒドロカルビルイソシアネート又はヒドロカルビルイソシアネートの混合物を反応させることによって、ウレタン、単糖、二糖、及び多糖を調製するための従来の方法と同様に調製することができる。
【０１０６】
適切な溶媒には、反応性ヒドロキシル及びアミン基を含まない溶媒又は溶媒混合物、例えばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）などがある。
【０１０７】
デンプン加水分解生成物とヒドロカルビルイソシアネートの間の反応は、無水条件下で行うことが好ましい。これを鑑みて、デンプン加水分解生成物及び溶媒は、それらをヒドロカルビルイソシアネートと接触させる前に、０．５ｗｔ％未満の含水率まで乾燥させることが好ましい。例えば乾燥空気流中でデンプン加水分解生成物を加熱すること、又は減圧下でデンプン加水分解生成物を加熱すること、又はデンプン加水分解生成物の溶液、反応用に選択した溶媒中から、場合によっては減圧下で共沸蒸留によって水を除去することなどを含めた、従来の技法によって乾燥を行うことができる。乾燥中に最高温度は、デンプン加水分解生成物及び溶媒の性質に応じて、如何なる分解又は副反応をも回避するために過剰になってはならない。好ましくは、前記温度は約８０℃未満に保たなければならない。
【０１０８】
軽い攪拌〜激しい攪拌下において、適切な溶媒に溶かしたデンプン加水分解生成物と、非希釈形又は無水溶媒に溶かしたヒドロカルビルイソシアネートを接触させることによって、典型的には反応を行う。広い温度範囲、典型的には室温〜約８０℃まで、又は温度が低い場合は反応混合物の還流温度で、好ましくは約６０℃と約８０℃の間の温度で反応を行うことができる。
【０１０９】
典型的にはデンプン加水分解生成物は、必要な場合は加熱下で適切な溶媒に溶かす。したがって、ヒドロカルビルイソシアネート（場合によっては同じ不活性溶媒又は他の不活性溶媒に溶けているが、前者の溶媒と混和性であることが好ましい）を、溶解グルコシドに攪拌下でゆっくり加える。グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の望ましい置換度は、反応物の割合を調節することによって得ることができる。ウレタンを形成するためのヒドロカルビルイソシアネートとアルコールヒドロキシル基の反応は定量反応なので、ウレタン（ＩＩａ）の置換度は、デンプン加水分解生成物のグルコシル単位当たりのヒドロカルビルイソシアネートの適切なモル比を選択することによって調節することができる。通常反応混合物は、一定時間、通常約３０分〜約２４時間攪拌しながら加熱して、試薬間の反応を終了させる。次いで反応混合物は、従来の技法によって、例えば通常は室温に冷却した後に、試薬を溶かすために使用する１つ又は複数の溶媒と混和性である溶媒であるが、グルコシドアルキルウレタン（ＩＩａ）が全く溶けないか或いは非常に少ししか溶けない沈殿溶媒に反応混合物を注ぐことにより、形成されたウレタン（ＩＩａ）を沈殿させることによって後処理する。次いでウレタン（ＩＩａ）を例えば濾過又は遠心分離によって反応混合物から物理的に単離し、ウレタン（ＩＩａ）が全く溶けないか或いは非常にわずかのみ溶ける適切な溶媒で洗浄し、任意の一般的な技法を使用して乾燥させる。
【０１１０】
本発明による望ましいウレタン（ＩＩａ）を合成するための他の好都合な方法は、Ｗ．Ｇｅｒｈａｒｄｔ、Ａｂｂ．Ｄｔｓｃｈ．Ａｋａｄ．Ｗｉｓｓ．ベルリン、ＫＬ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｏｌ．Ｂｉｏｌ、Ｖｏｌ１９６６（６）、２４〜３６、（１９６７）（Ｃ．Ａ．、６Ｓ、１４３２３）によって記載された方法と類似の形式で行うことができる。その方法は、ジメチルホルムアミド中での一点反応における、シアン酸カリウム及び選択したヒドロカルビルハロゲン化物、好ましくは臭化ヒドロカルビルを用いたデンプン加水分解生成物の変換を含む。
【０１１１】
本明細書に記載する糖ポリマー誘導体、特にイヌリン誘導体及びグルコシドヒドロカルビル誘導体の方法及び使用は、食料品、栄養補助食品、化粧品又は薬剤調製物中に使用されるタンパク質の安定化、保護及び可溶化に有益に適用することができる。この文脈において、特に相当量の糖ポリマー誘導体がタンパク質生成物中に存在する場合、非毒性糖ポリマー誘導体が通常使用される。タンパク質生成物中に高濃度の糖ポリマー誘導体の存在が望ましくない場合、したがって糖ポリマー誘導体はタンパク質から容易に分離することができる。
【０１１２】
本発明の方法及び使用は有用である、何故なら使用する糖ポリマー誘導体は、伝統的な変性剤、可溶化剤及び保護物質、例えば界面活性剤、アルギニン及び塩酸グアニジンより、はるかに低い程度でタンパク質分析技法に影響を与えるからである。
【０１１３】
糖ポリマー誘導体は一般にシャペロンタンパク質より安価であるので、したがって本発明は、特に従来技術の方法が不経済となる可能性がある工程のスケールアップにおいて、可溶性を維持又は改善するコスト効率の良い手段を提供する。
【０１１４】
本発明の方法では、タンパク質の下流工程を害さずに凝集が抑制される。
【０１１５】
本発明の方法は、保存時にタンパク質の安定性を高め、クロマトグラフィーによる精製を向上させ、タンパク質濃縮中の損失を最小にし、且つ透析中のタンパク質の凝集を低下させるのに適している。本発明を全てのタンパク質処理分野に適用して、収率を増大させ、溶液体積を減少させることができ、資金の出費が減らされ、生成工程の有効性を改善することができることを意味する。
【０１１６】
本発明の方法を実施するためのキットを提供し、キットは一般に、本明細書に記載する糖ポリマー誘導体、例えば１つ又は複数のイヌリン誘導体、及び／又は１つ又は複数のグルコシドヒドロカルビル誘導体、好ましくは１つ又は複数の式（Ｉ）のイヌリン誘導体、及び／又は１つ又は複数の式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体の供給物を、場合によっては他の試薬、バイアル、ピペットチップ及びスパンカラムなどの消耗品、及び／又はキットを使用するための教示書と一緒に含む。
【０１１７】
キットは、本発明の方法を実施する際に使用するのに適した、バッファー及び他の試薬を含むこともできる。
【０１１８】
本発明は、タンパク質、及び約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０、例えば２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の重合度を有するイヌリン誘導体を含む組成物も提供する。本発明の組成物において、イヌリン誘導体はＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１であってよい。このような組成物において有用なイヌリン誘導体には、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基及び１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される、１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化された誘導体がある。
【０１１９】
このような組成物では、イヌリン誘導体は式（Ｉ）の化合物であってよく、したがって本発明は、タンパク質、及び式（Ｉ）のイヌリン誘導体であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０であるイヌリン誘導体を含む組成物を提供する。
【０１２０】
本発明のこの態様による組成物では、式（Ｉ）の化合物は多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンであってよく、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択することができる。
【０１２１】
本発明による組成物はタンパク質、及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体を含むことができる。
【０１２２】
本発明の組成物では、イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体のモル濃度は一般に、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍、好ましくはタンパク質のモル濃度の約０．５〜約５００、約１〜約３００、約１〜約１００、約１〜約５０、約１〜約３０、約１〜約２５、又は約１〜約２０倍の範囲内にある。組成物は液体、例えば水溶液形であってよく、或いは乾燥形であってよい。好ましい実施形態では組成物は、例えば注射、摂取、吸入又は局所施用による投与に適している可能性がある水溶液形であるか、或いは適切な液体（滅菌蒸留水、生理食塩水、又は薬剤として許容可能なバッファーなど）中での還元用、例えば注射、摂取、吸入又は局所投与による投与用の乾燥形である医薬組成物である。
【０１２３】
本発明による組成物は、ヒト及び／又は動物の疾患の診断、治療、予防又は調査において使用するのに適している。本発明による医薬組成物は、例えばインシュリン、エリスロポイエチンなどの治療用タンパク質、抗体又は抗体断片を含むことができる。医薬組成物は、免疫処置用の抗原タンパク質を含むことができる。
【実施例】
【０１２４】
（実施例１）
変性リゾチームの希釈中の、タンパク質の安定化及び保護、凝集の抑制
試験タンパク質、メンドリ卵白リゾチーム（Ｆｌｕｋａ、＃６２９７１）を、変性バッファー、８Ｍの尿素、０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ、３２ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ８．２中に１５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶かした。タンパク質は一晩４℃で変性させた。次いで変性タンパク質を、さまざまな濃度のＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（アルキル−イヌリン）を含む０．１ｍＭのトリス−ＨＣｌ、５ｍＭのＧＳＳＧ、ｐＨ８．２の溶液中に２０倍に希釈した。室温で１５分のインキュベーション後に４９２ｎｍでの光の吸収（Ａ４９２）により、溶液の濁度を測定することによって凝集を調べた。これらの結果は図１及び２中に示す。
【０１２５】
（実施例２）
変性クエン酸シンターゼの希釈中の、タンパク質の安定化及び保護、凝集の抑制
試験タンパク質、ブタ心臓のクエン酸シンターゼ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｃ３２６０）を、変性バッファー、８Ｍの尿素、０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ、３２ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ８．２中に溶かした。この溶液を調製して、限外濾過装置（Ｖｉｖａｓｐｉｎ５００ＰＥＳ、１０ｋＤａのＭＷＣＯ、Ｆｉｓｈｅｒ、＃ＦＤＰ８７５０１０Ｘ）を使用して最終濃度５ｍｇ／ｍｌのタンパク質を得て、変性バッファーへのバッファー交換を実施した。タンパク質は一晩４℃で変性させた。次いで変性タンパク質を、さまざまな濃度のアルキル−イヌリンを含む０．１ｍＭのトリス−ＨＣｌ、５ｍＭのＧＳＳＧ、ｐＨ８．２の溶液中に２０倍に希釈した。室温で１５分のインキュベーション後に４９２ｎｍでの光の吸収（Ａ４９２）により、溶液の濁度を測定することによって凝集を調べた。これらの結果は図３及び４中に示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２６】
【図１】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集を示す図である。最終的なリゾチーム濃度は０．７５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸はＡ４９２の測定値（凝集）を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図２】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集の相対的低下を示す図である。最終的なリゾチーム濃度は０．７５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸は凝集の低下率を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図３】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集を示す図である。最終的なクエン酸シンターゼ濃度は０．２５ｍｇ／ｍｌである。ｙ軸はＡ４９２の測定値（凝集）を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図４】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集の相対的低下を示す図である。最終的なクエン酸シンターゼ濃度は０．２５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸は凝集の低下率を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質の立体配座を安定化させるため、凝集及び／又は分解からタンパク質を保護するため、並びに／或いはタンパク質の可溶性を改善するための方法、キット及び試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質の生物学的機能は、その３次元構造に依存する。タンパク質は、ポリペプチドと呼ばれるアミノ酸の線状鎖として形成される。ｉｎ ｖｉｖｏでは、細胞内の適切な状態において、線状ポリペプチド鎖がフォールディングされ、これはシャペロンと呼ばれるタンパク質によって助長される可能性があるプロセスである。成熟したフォールディング状態のタンパク質は、原型構造として知られる活性のある３次元の立体配座を有する。この構造は、水素結合、静電性及び疎水性相互作用などの弱い力に依存する。これらの力はタンパク質の環境によって影響されるので、環境の変化が、タンパク質の変性及び／又は分解並びに機能の消失をもたらす構造破壊を引き起こす可能性がある。タンパク質のプロセシング中及びタンパク質の保存時に、このような問題に遭遇する。
【０００３】
遺伝的工学処理によるタンパク質の生成は、封入体としての非活性状態のタンパク質凝集体の蓄積をもたらすことが多い。宿主細胞から単離及び精製した後、タンパク質又は封入体は非フォールディング状態（変性状態）にし、且つ後に、タンパク質がそれらの原型構造及び生物活性を取り戻すように、リフォールディング状態（再生状態）にしなければならない。
【０００４】
伝統的なタンパク質フォールディング法は、変性剤希釈又はカラム系手法に関する。変性タンパク質は一般に、変性剤を希釈することによってリフォールディングされる。これはタンパク質分子の疎水性部分の崩壊を誘導し、それを行う際に、タンパク質は分子のコア中のその疎水性部分を保護する。あいにく、疎水性部分の崩壊時に、タンパク質は常に原型の生物活性がある立体配座を形成するわけではなく；２つの競合反応、リフォールディングと凝集が起こる。タンパク質凝集の誘導因子は、表面に曝されている疎水性アミノ酸残基であることが示唆される。凝集は望ましくなく、機能性、原型タンパク質の収率を低下させる。リフォールディングは一次反応（速度＝Ｋ＊［ｐｒｏｔ］）として知られているが、凝集反応は高濃度においてリフォールディングより助長される、何故なら凝集反応は高次反応（ｎ）（速度＝Ｋ’＊［ｐｒｏｔ］ｎ）だからである。タンパク質リフォールディングとタンパク質凝集の割合は、タンパク質濃度に強く依存する。プロセスの規模では、この濃度依存性は増大した凝集をもたらす可能性があり、したがってリフォールディング収率を低下させる可能性がある。これは、タンパク質溶液中での不完全な混合型によるものである可能性がある。大きなタンパク質分子をプロセシングすることは非常に難しい、何故ならそれらの分子は小さな変性剤分子よりもゆっくりと拡散し、それによって非常に局在したタンパク質濃度及び低い変性剤濃度を含む微環境、即ちタンパク質リフォールディングよりタンパク質凝集を助長する環境を形成するからである。
【０００５】
ジスルフィド結合を有するタンパク質に関して、原型タンパク質は成熟中に「成熟状態」であることを必要とすることが多く、非原型ジスルフィド結合を有する非凝集モノマータンパク質分子が最初に作製される可能性があり；次いでタンパク質特異的な酸化還元型結合を使用することによって、ジスルフィド結合が混合し、タンパク質は原型ジスルフィド結合を有する機能性タンパク質分子に成熟する。
【０００６】
リフォールディングプロセスは通常、「リフォールディング助剤」の存在下においてバッファー中に変性タンパク質分子を分散させて、再生を増大させることを含む。フォールディング助剤は通常、フォールディング中間体の溶解度を増大させる、且つ／又はフォールディング反応と凝集反応の相対反応速度を変える。ポリエチレングリコール及びさまざまな糖、例えばスクロース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、及び界面活性剤、例えばＣｈａｐｓ、Ｔｗｅｅｎ、ＳＤＳ、ドデシルマルトシドが、リフォールディング助剤として使用されてきている（Ｄｅ Ｂｅｍａｄｅｚ Ｃｌａｒｋ（１９９８）「現在のバイオテクノロジーの見解（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）９、１５７〜１６３」）。
【０００７】
α、β及びγシクロデキストリン（ＣＤ）は幾つかの酵素の安定化、可溶化及び親和性による精製において有用であることが報告されてきているが、これらのＣＤとタンパク質の間の性質及び相互作用、並びに生物活性に対するそれらの影響は依然明らかではない。α、β及びγシクロデキストリンはいずれも界面活性剤不在下（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ｅｌ、ＥＰ０８７１６５１、米国特許第５，７２８，８０４号）、及び界面活性剤含有リフォールディング環境（Ｇｅｉｌｌｍａｎ ＆ Ｒｏｚｅｍａ、米国特許第５，５６３，０５７号）でのタンパク質のリフォールディングを助長するための人工シャペロンとして使用されてきている。シクロデキストリンは、多数のグルコース残基から構成される環状オリゴ糖である。シクロデキストリンは、環構造内の糖残基の数に従い分類され、α−シクロデキストリンは６個のグルコース残基を有し、β−シクロデキストリンは７個のグルコース残基を有し、及びγ−シクロデキストリンは８個のグルコース残基を有する。シクロデキストリンを誘導体化によって修飾して、誘導体を生成することができる。
【０００８】
シクロデキストリンの内腔は疎水性であり、一方で外側表面は親水性である。疎水性の内側部分は、乏しい可溶性の薬剤を被包することができる。親水性の外側部分は可溶化を助長し、したがってシクロデキストリンは医薬品配合物中の有用なアジュバントである。
【０００９】
ＥＰ００９４１５７及び米国特許第４，６５９，６９６号（Ｈｉｒａｉ ｅｔ ａｌ）は、親水性で、生理的活性がある（フォールディング、原型）ペプチドとシクロデキストリン誘導体の物理的混合物から本質的になる医薬組成物中でのα−、β−、及びγ−シクロデキストリン誘導体の使用を記載しており、この組成物は剤形の均質な混合物である。
【００１０】
ＥＰ０４３７６７８Ｂ１、米国特許第５，７３０，９６９号及び米国特許第５，９９７，８５６号（Ｈｏｒａ）は、特定のシクロデキストリン誘導体：ヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシル、並びにβ−及びγ−シクロデキストリンのマルトトリオシル誘導体を使用してポリペプチド、特にタンパク質を可溶化及び／又は安定化させるための方法を記載しており；ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン誘導体が好ましい。ポリペプチド、場合によってはタンパク質、及び前述の特定のシクロデキストリン誘導体を含む水性及び凍結乾燥組成物も開示されている。
【００１１】
ＥＰ０８７１６５１及び米国特許第５，７２８，８０４号（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ｅｌ）は、非フォールディング状態又は凝集状態のタンパク質を再生するのに有効な量のシクロデキストリンを用いて、界面活性剤を含まない水性培地中で前記非フォールディング状態又は凝集状態のタンパク質を再生するための方法に関するものである。この場合、タンパク質は凝集を最少にするように選択した低い濃度、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｍｌで存在し、シクロデキストリンを含むリフォールディング用バッファー中で自発的にリフォールディングする。リフォールディング後、シクロデキストリンは透析によって除去される。
【００１２】
米国特許第５，５６３，０５７号（Ｇｅｌｌｍａｎ及びＲｏｚｅｍａ）は、線状アルキル無極性成分を有する界面活性剤、例えばＣＴＡＢ及びＴｒｉｔｏｎ（登録商標）−Ｘ１００（オクトキシノール−９）をミスフォールディング状態の酵素に加えて、酵素−界面活性剤複合体を形成させ、次いでそれをシクロデキストリンと接触させて、酵素に第２の活性状態の立体配座をとらせることによって、ミスフォールディング状態の配置から第２原型の活性状態の配置に酵素をリフォールディングするための方法を記載している。
【００１３】
Ｈｉｎｒｉｃｈｓ ｅｔ ａｌ（２００１）、「国際医薬ジャーナル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ）」、２１５、１６３〜１７４は、非誘導体化状態のイヌリン、イヌリンＳＣ９５（ＤＰｎ／ＤＰｗ＝５．５／６．０）、イヌリンＲＳ（ＤＰｎ／ＤＰｗ＝１４．２／１９．４）、及びイヌリンＥＸＬ６０８（ＤＰｎ／ＤＰｗ２３．０／２６．２）を使用して、凍結乾燥及びその後の乾燥タンパク質の保存中の分解からアルカリホスファターゼを保護することを記載している。
【００１４】
ＷＯ９６／４１８７０（Ｇｏｍｂａｃ ｅｔ ａｌ）は、コラゲナーゼを安定化させるための、イソマルト及び／又はイヌリン（非誘導体化状態）を含む凍結、乾燥又は凍結乾燥水溶性コラゲナーゼ組成物を記載している。
【００１５】
イヌリンは、ポリフルクトースの鎖から一般になるＤ−フルクタンであり、その中でフルクトース単位は大部分は互いに結合しているか、又はβ（２−１）結合によってのみ結合している。その大部分が１つのグルコシル単位中の末端であるポリフルクトース鎖の多分散系混合物として、一般にイヌリンは天然に存在する。イヌリンは植物から抽出される細菌合成から得ることができるか、又はスクロースから始める酵素による合成によってｉｎ ｖｉｔｒｏで作製することができる。細菌によって生成されるイヌリンは、植物源由来のイヌリンより分枝状であり、より大きな分子量（約２，０００〜約２０，０００，０００までの範囲）を一般に有し、一方植物源由来のイヌリンは、一般に約６００〜約２０，０００の範囲の分子量を有する、線状又はわずかに分枝状のポリフルクトース鎖、或いはその混合物から一般に構成される。
【００１６】
Ｇがグルコシル単位を表し、Ｆがフルクトシル単位を表し、ｎが炭水化物鎖中で互いに結合したフルクトシル単位の数を表す整数である、一般式ＧＦ．ｎ又はＦ．ｎによって、末端炭水化物単位に応じてイヌリンを表すことができる。１個のイヌリン分子中の糖単位（フルクトース及びグルコース単位）の数、即ち前述の式中のｎの値は、（ＤＰ）によって表される重合度として表される。おそらく存在する単糖グルコース（Ｇ）及びフルクトース（Ｆ）、並びに二糖スクロース（ＧＦ）を考慮せずに、イヌリン組成物中に存在するイヌリン分子の合計数で割った、所与の前記イヌリン組成物中の糖単位（Ｇ及びＦ単位）の合計数に対応する値である、（ＤＰ）によって表されるパラメータ（数）平均重合度を使用することも多い。平均重合度（ＤＰ）は、例えばＬ．Ｄｅ Ｌｅｅｎｈｅｅｒ（Ｓｔａｒｃｈ、４６（５）、１９３〜１９６、（１９９４）、及び「有機素材としての炭水化物（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、Ｖｏｌ．ＩＩＩ、ｐ．６７〜９２、（１９９６）」によって記載された方法によって決定することができる。
【００１７】
イヌリンは植物源から、主にチコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ）の根及びキクイモ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ）の塊茎から一般に調製され、その中でイヌリンは、新鮮な植物物質に対して約１０〜２０％ｗ／ｗの濃度で存在し得る。植物源由来のイヌリンは通常、２〜約１００の範囲の重合度（ＤＰ）を有する線状及びわずかに分枝状の多糖鎖の多分散系混合物である。例えばＥＰ０７６９０２６及びＥＰ０６７０８５０中に記載されたのと同様に、知られている技法に従い、イヌリンを前記植物部分から容易に抽出し、精製且つ場合によっては分別して、不純物、単糖及び二糖並びに望ましくないオリゴ糖を除去し、さまざまな等級のイヌリンを提供することができる。
【００１８】
典型的には約６〜約４０の範囲の（ＤＰ）を有するイヌリンが市販されている。チコリー由来のイヌリンは、例えばＯｒａｆｔｉ（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）からＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）としてさまざまな等級で入手可能である。典型的なＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）等級には、（約１０の（ＤＰ）を有し合計約８重量％までのグルコース、フルクトース及びスクロースを含む）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＳＴ、（約１０の（ＤＰ）を有するが合計１重量％未満のグルコース、フルクトース及びスクロースを含む）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＬＳ、及び（少なくとも２３の（ＤＰ）、一般に約２５の（ＤＰ）を有し、且つグルコース、フルクトース及びスクロースをほとんど含まない）ＲＡＦＴＩＬＩＮＥ（登録商標）ＲＴＭ．ＨＰがある。Ｉｎｕｔｅｃ（登録商標）Ｎ２５、２５のＤＰを有する非誘導体化状態のイヌリンはＯｒａｆｔｉから入手可能である。
【００１９】
通常（ＤＰ）＜１０として定義される低い重合度を有するイヌリンは、イヌロ−オリゴ糖、フルクト−オリゴ糖又はオリゴフルクトースと一般に名付けられる。オリゴフルクトースはイヌリンの部分的な（好ましくは酵素による）加水分解によって従来の方法で得ることができ、当技術分野でよく知られている技法に従いスクロースから酵素によるｉｎ ｖｉｔｒｏ合成によって得ることもできる。例えばＯｒａｆｔｉ、（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）からのＲＡＦＴＩＬＯＳＥ（登録商標）、例えばオリゴフルクトースの約９５重量％の平均含有率を有し、２〜７の範囲の重合度（ＤＰ）を有し、且つ合計約５重量％のグルコース、フルクトース及びスクロースを含むＲＡＦＴＩＬＯＳＥ（登録商標）Ｐ９５として、幾つかの等級のオリゴフルクトースが市販されている。
【００２０】
さまざまなイヌリン誘導体、及びイヌリン誘導体を調製するための方法は、その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第６，５３４，６４７号（Ｓｔｅｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ）中に記載されている。
【００２１】
ポリフルクトース骨格において疎水性アルキル鎖で誘導体化させたイヌリン、例えばＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（ＳＰ１）がＯｒａｆｔｉ（Ｔｉｅｎｅｎ、ベルギー）から市販されている。
【００２２】
デンプンは、生分解性の貯蔵多糖として多くの植物中に多量に存在する、よく知られている炭水化物である。デンプン分子は、α−１，４グルコシル−グルコシル結合によって互いに結合しそれによって（アミロースと呼ばれる）線状鎖デンプン構造を形成する、又はα−１，４及びα−１，６グルコシル結合によって結合しそれによって分枝点にα−１，６グルコシル−グルコシル結合を有する（アミロペクチンと呼ばれる）分子状鎖デンプン構造を形成する、Ｄ−グルコシル単位から構成されるポリマーである。植物源に応じて主に線状構造又は主に分枝状構造を有するポリマー分子の多分散系混合物として、デンプンは天然に存在する。デンプンは前記構造を有する分子の多分散系混合物として、天然に存在する可能性もある。重合度（ＤＰ）、即ちデンプン分子中の互いに結合したグリコシル単位の数は大きく変わる可能性があり、それは主に植物源及び採取時間に依存する。
【００２３】
グリコシル単位間の結合は加水分解、熱及びせん断力に敏感である。酸加水分解、酵素加水分解、熱処理又はせん断によって、或いは前記処理の組合せによって、本明細書でデンプン加水分解生成物と一般的に呼ぶさまざまなデンプン誘導体を調製するために、この現象は産業上利用されている。デンプンの源、加水分解触媒、加水分解条件、熱処理及び／又はせん断条件に応じて、本質的にグルコースから構成される生成物から、グルコースシロップと一般に呼ばれる生成物を経てマルトデキストリン及びデキストリンと一般に呼ばれる生成物の範囲まで、広くさまざまなデンプン加水分解生成物を得ることができる。デンプン加水分解生成物は、当技術分野ではよく知られている。
【００２４】
Ｄ−グルコース（デキストロース）は強い還元力を示す。デンプン加水分解生成物は、Ｄ−グルコシル鎖から構成されるＤ−グルコース、オリゴマー（ＤＰ＜１０）及び／又はポリマー（ＤＰ＞１０）分子から構成される多分散系混合物であり、これらもオリゴマー及びポリマー分子上のＤ−グルコース及び還元糖単位（実質的に末端グルコシル単位である）の存在から生じる還元力を示す。
【００２５】
結果として、所与のデンプン生成物から始まり、加水分解の程度が大きくなるほど、より多くの分子（モノマーＤ−グルコース、オリゴマー及び残りのポリマー分子）が加水分解生成物中に存在し、したがってデンプン加水分解生成物のより高い還元力が得られる。したがって、デンプン加水分解生成物の還元力は、さまざまなデンプン加水分解生成物を区別及び指定するための、顕著な選択の特徴となっている。還元力はデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）として表され、これは乾燥物質１００グラム当たりのＤ−グルコース（デキストロース）のグラム数に形式上相当する。１００のＤ．Ｅ．を定義に従い有するＤ−グルコースでは、そのＤ．Ｅ．は所与の生成物中の乾燥生成物ベースでのＤ−グルコース及び還元糖単位（デキストロースとして表す）の量を示す。したがってＤ．Ｅ．は、実際デンプンの加水分解の程度の測定値でもあり、さらにデンプン加水分解生成物中のグルコースポリマーの平均分子量の相対的指標でもある。
【００２６】
Ｄ−グルコースから本質的に構成される加水分解生成物以外に、デンプン加水分解生成物のＤ．Ｅ．は１〜約９６の範囲である可能性があり、Ｄ．Ｅ．に基づいた広くさまざまな等級のデンプン加水分解生成物が市販されている。
【００２７】
２０を超えるＤ．Ｅ．を有する加水分解生成物は、一般にグルコースシロップと呼ばれる。４７までのＤ．Ｅ．を有するグルコースシロップを、従来の技法によって、例えばスプレー乾燥によって乾燥させて、最大約５ｗｔ％の湿気を含む粉末形のいわゆる「乾燥グルコースシロップ」を得ることができる。
【００２８】
２０以下のＤ．Ｅ．を有する加水分解生成物は、一般にマルトデキストリン及びデキストリンと呼ばれる。その製造プロセスは通常最後にスプレー乾燥工程を含み、最大約５ｗｔ％の湿気を含む粉末形でもこれらの加水分解生成物を生成する（ｗｔ％は重量％を示す）。
【００２９】
グルコースシロップ、マルトデキストリン及びデキストリンは、よく知られている方法に従って調節された加水分解条件下において、さまざまなデンプン源から大規模に工業的に生成される。得られるさまざまな等級のデンプン加水分解生成物は、それらのデンプン供給源物質、及び製造法の指標（例えば、マルトデキストリン／デキストリン）と組合せることが多いそれらのＤ．Ｅ．値によって通常定義される。
【００３０】
幾つかの規制には従うが、用語「マルトデキストリン」はトウモロコシデンプン由来の生成物を称するものとし、本明細書で使用する用語マルトデキストリンはトウモロコシデンプンの加水分解生成物に限られないが、任意の供給源由来のデンプンから得られる２０以下のＤ．Ｅ．を有するデンプン加水分解生成物を本明細書では示す。
【００３１】
デンプンの典型的な市販の供給源はトウモロコシ、ジャガイモ、タピオカ、コメ、モロコシ及びコムギである。しかしながら、本発明と組合せて使用するのに適したデンプン加水分解生成物は、前記供給源由来のデンプンに限られず、それらは任意の供給源由来のデンプンから得られるデンプン加水分解生成物に及ぶ。
【００３２】
グルコースシロップ、マルトデキストリン及びデキストリンはよく知られており、市販されている。例えば、グルコースシロップ及びマルトデキストリンの生成、性質及び適用例は、文献「Ｓｔａｒｃｈ Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．（１９９２）中の総説記事中に記載されてきている。さらに、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社からの技術文献「ＧＬＵＣＩＤＥＸ Ｂｒｏｃｈｕｒｅ８／０９．９８」ではマルトデキストリンを記載し、乾燥グルコースシロップが記載され、さまざまな等級が販売用に提供されている。
【００３３】
プロセシング中及び保存時にタンパク質の安定性を調節することは、多くの産業、特に医薬及びバイオテクノロジー産業において問題として認識されている。タンパク質が遭遇する難点はタンパク質の製造を困難にし、低い収率をもたらし、プロセスを不経済にする可能性がある。タンパク質は、プロセシング中にタンパク質の分解及び機能の消失をもたらす可能性がある条件に曝されるので、したがってタンパク質プロセシングの方法を改善して、タンパク質を保護しタンパク質の損傷又は消失を最少にする必要性が存在する。さらに、タンパク質の溶解度を改善しタンパク質の凝集を低下させる必要性が存在する。プロセシングを高いタンパク質濃度で行い、それによって体積を低下させることができるように、溶液中でのタンパク質プロセシングに関する方法を改善する要求がさらに存在する。残念ながら、凝集は一般に高いタンパク質濃度で刺激され、高い局所タンパク質濃度の領域は大きな反応容器中では除去するのは困難である。界面活性剤又はカオトロピック剤を使用してタンパク質の溶解度を保つことができるが、界面活性剤は下流プロセシング中に除去するのは非常に困難であり、使用する化学物質に関して他の欠点が存在する、例えば変性剤塩酸グアニジンは毒性であり、タンパク質生成用機器のステンレス鋼製容器及びパイプを腐食する。変性剤尿素にタンパク質を長時間曝すことは、アミノ酸の修飾、例えばカルバミル化をもたらす可能性がある。界面活性剤及び可溶化剤、アルギニンなどは、タンパク質研究所で使用される最も一般的な分析技法（例えばＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、ＲＰ−ＨＰＬＣ）の幾つかには不適合である。このような汚染を排除するためのバッファー交換が考えられるが、未知の希釈又はサンプルの消失をもたらし、タンパク質凝集を引き起こす可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３４】
本発明によって処理される問題は、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ（例えば、変性状態の立体配座、又は原型立体配座にタンパク質を保つ）、それによってタンパク質の凝集を減少させ、タンパク質の溶解性を改善し、分解に対してタンパク質を保護することを含む。本発明はさらに、タンパク質が変性状態又は原型の非凝集形で溶液中に保たれ、容器又は他のタンパク質分子への粘着を減らし、凝集する傾向を低下させるように、タンパク質の溶解性を改善しようとするものである。
【００３５】
本発明の目的は、現在の方法に関する欠点を軽減するように、タンパク質プロセシングの方法、特にタンパク質フォールディング、精製、濃縮及び／又は保存に関する方法において使用することができるタンパク質を安定化させるため、保護するため、及び可溶化するための方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
第１の態様では本発明は、タンパク質を安定化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
好ましい安定化法では、タンパク質と糖ポリマー誘導体を水溶液中で接触させる。安定化法は、水溶液の乾燥、脱水、蒸発、又は凍結乾燥（凍結乾燥）をさらに含むことができる。
【００３８】
本発明の安定化法では、タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる。タンパク質は変性形で安定化させることができ、非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態であってよく、或いは原型の立体配座で安定化させることができる。原型立体配座のタンパク質に関する方法では、タンパク質を変性に対して安定化させる。
【００３９】
本発明の安定化法では、タンパク質を凝集に対して安定化させる。本発明の安定化法は、タンパク質を分解に対して保護するためにも有用である。
【００４０】
第２の態様では本発明は、タンパク質を可溶化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法を提供する。
【００４１】
本発明の安定化法及び可溶化法は、タンパク質のプロセシング法、特にタンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる方法において有用である。本発明の安定化法及び可溶化法は、１つ又は複数のタンパク質精製工程、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及び／又はクロマトグラフィーを含む、タンパク質のプロセシング法において使用することができる。
【００４２】
第３の態様では本発明は、糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではなく、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための使用を提供する。
【００４３】
本発明によれば、糖ポリマー誘導体を使用して、原型タンパク質の変性又は変性（非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態の）タンパク質の再生などの、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ、タンパク質を所望の配置に保つのを助ける。糖ポリマー誘導体は、例えば熱、電磁放射、せん断応力、タンパク質分解による、或いは還元、酸化、又はカルバミル化などの化学修飾による分解に対してタンパク質を安定化させるように働く。本発明の方法では、糖ポリマー誘導体を使用して、水溶液中でタンパク質を安定化させることができ、或いは例えば水溶液の乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）によって生成した乾燥形でタンパク質を安定化させることができる。
【００４４】
第４の態様では本発明は、糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではない、タンパク質を可溶化させるための使用を提供する。
【００４５】
本明細書で使用する用語「タンパク質」は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド及びオリゴペプチドを含む。タンパク質は合成又は天然に存在するものであってよく、化学合成によって、或いは組換え又は非組換え法によって得ることができる。ＤＮＡ組換え又は成熟技法を使用して、タンパク質を生成することができる。タンパク質はｉｎ ｖｉｖｏ、完全な動物中、或いは真核生物又は原核生物細胞中で生成することができ；或いは、例えば大腸菌溶解物、小麦麦芽エキス、又はウサギ網状赤血球を使用する無細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳などのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を使用して、タンパク質を発生させることができる。無細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写後、例えばファージ又はリボソームディスプレイ後に使用することができる。
【００４６】
変性タンパク質は、完全に変性状態、又は部分的に変性状態、或いはタンパク質が非フォールディング状態のタンパク質及び／又は部分的にフォールディングリフォールディング状態の中間体などの、非原型の形であるように再生状態にすることができる。変性タンパク質を含む水溶液又は乾燥サンプルは、１つ又は複数のこれらの形を含み得る。原型タンパク質は、フォールディング状態の機能的な立体配座である。幾つかのタンパク質は水溶液中に、或いは乾燥サンプル中に、汚染した凝集体及び／又は封入体の形で存在する可能性もある。
【００４７】
本発明の方法中で使用するのに適した糖ポリマー誘導体は、適切な濃度及び適切な条件で、溶液中で非原型、非フォールディング状態又は部分的にフォールディングした可溶状態に変性タンパク質を保つことができる誘導体である。用語「糖ポリマー誘導体」は、α−、β−又はγ−シクロデキストリン及びそれらの誘導体は除外する。１つ、又は複数の（即ち混合物の）糖ポリマー誘導体を、本発明の方法又は使用中で用いることができる。適切な糖ポリマー誘導体は、疎水性アミノ酸側鎖を保護する、或いは実質的なタンパク質電荷又は水素結合特性を変えることができる誘導体である。本明細書で使用する用語「糖ポリマー誘導体」は、３個以上の単糖単位を含むポリマー及びオリゴマー糖分子を含む。糖ポリマー誘導体は、線状又は非線状両親媒性の糖ポリマー誘導体であってよい。
【００４８】
本発明の方法中で使用する糖ポリマー誘導体は、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タゴトース、キシルロース及びリブロースからなる群から選択される１つ又は複数の糖を含むことができる。これらの糖類の中では、グルコース、フルクトース、マンノース及び／又はガラクトースが、４つの最も一般的で単純な（モノマー）糖単位である。糖ポリマー誘導体は、デキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、プルラン、マンナン、キチン、キトサン、イヌリン、レバン、キシラン、シクロデキストリン（ただし、それはα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないものとする）、シクロアミロース又はその誘導体であってよい。適切な糖ポリマー誘導体は、その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第５，２０２，４３３号及び米国特許第５，２０４，４５７号中に開示されている。
【００４９】
両親媒性の糖ポリマーは、原型及び／又は変性タンパク質と疎水性相互作用することができる。適切な置換基を用いた糖ポリマーの誘導体化は、両親媒性及びタンパク質との相互作用の強度を増大させる。本発明の方法、使用及びキットで使用する糖ポリマー誘導体に適した置換基には、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される置換基がある。炭水化物分子当たり１つ又は複数の置換基が存在してよい。アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アラルキル、脂肪酸及びポリオール基は、直鎖又は分枝鎖状の基であってよい。置換基は２〜２５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることが好ましく、置換基は３〜２２個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることがより好ましく、置換基は３〜１８個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル基から選択されることが最も好ましい。
【００５０】
糖ポリマー誘導体は、３個以上の糖単位を含む環状糖ポリマー誘導体であってよく、糖ポリマー誘導体は、α−、β−又はγ−シクロデキストリンを除いたシクロデキストリン誘導体などのグルコサンであってよい。
【００５１】
糖ポリマー誘導体が、グルコサンなどの環状糖ポリマー誘導体、例えばシクロデキストリン誘導体であるとき、タンパク質を安定化させるために本発明の方法において使用する濃度は、好ましくは存在するタンパク質の１００〜１０，０００倍のモル濃度、より好ましくは存在するタンパク質の１００〜５，０００倍のモル濃度、さらにより好ましくは存在するタンパク質の１００〜２，０００倍のモル濃度、さらに好ましくは存在するタンパク質の５００〜１，５００倍のモル濃度、最も好ましくは存在するタンパク質の約１，０００倍のモル濃度である。
【００５２】
本発明の方法及び使用では、糖ポリマー誘導体は、３個以上の単糖単位を含む線状又は分枝状糖ポリマー誘導体、フルクトサンなど、例えばイヌリン誘導体、又はグルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシドであることが好ましい。好ましい誘導体には、本明細書に記載する式（Ｉ）のイヌリン誘導体及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体がある。式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体は、デンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンであることが好ましく、本明細書で定義する式（ＩＩＩ）の単位から構成される式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが特に好ましい。
【００５３】
イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビルは、約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０、例えば２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０の重合度を有することが適切である。イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体は、１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基、例えば１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化されることが好ましい。１つ又は複数の無極性ヒドロカルビル基は、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択されることが好ましい。無極性ヒドロカルビル基は１〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルキル基であってよく、且つ／或いは無極性ヒドロカルビル基は２〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子有するアルケニル基又はアルキニル基であってよい。
【００５４】
本明細書に記載する方法及び使用に適した糖ポリマー誘導体は、０．０１〜３．０又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５の糖単位当たりの平均置換度を典型的には有する。好ましいイヌリン誘導体は、０．０１〜３．０、又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０２〜１．０又は０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５又は０．０３〜０．３の範囲の糖単位当たりの平均置換度を典型的には有する。好ましいグルコシドヒドロカルビル誘導体は、０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、より好ましくは０．０３〜０．３の範囲の置換度を一般に有する。
【００５５】
好ましい態様では本発明では、イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を安定化させる方法を提供する。タンパク質とイヌリン誘導体は、水溶液中で接触させることが好ましい。水溶液中でタンパク質を安定化させる方法は、水溶液を乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）させて、乾燥タンパク質／イヌリン誘導体組成物を生成することをさらに含むことができる。タンパク質を一定の長さの時間保存する場合、（及び原型、機能性である場合）、乾燥はタンパク質の立体配座、完全性の維持を助長するのに特に有用である。このような方法では、タンパク質をイヌリン誘導体によって立体配座の変化に対して安定化させる。安定化させるタンパク質は変性タンパク質の形、又は原型の立体配座であってよい。変性タンパク質は凝集に対して安定化させ、原型タンパク質は変性に対して安定化させる。変性タンパク質と原型タンパク質の両方を分解に対して保護する。
【００５６】
他の好ましい態様では本発明では、イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法を提供する。非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質の水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法も提供する。本発明はさらに、原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質の水溶液、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法を提供する。
【００５７】
タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な糖ポリマー誘導体、例えばイヌリン誘導体の濃度は、変性タンパク質の再生を遅らせる濃度である。適切な濃度では、糖ポリマー誘導体が存在しない場合に起こる回復より遅い構造の回復がある、何故なら糖ポリマー誘導体は、タンパク質を非原型配置に保つのを手助けするからである。糖ポリマー誘導体の存在は、誘導体が存在しない場合に観察されるリフォールディング率と比較して、リフォールディング率を低下させる。所与の立体配座（変性状態又は原型）の所与のタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の濃度は、温度、溶液状態、タンパク質濃度及びタンパク質自体などのさまざまな要因に依存する。適切な濃度は当業者によって容易に決定することができる。
【００５８】
タンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の濃度は一般に、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍、好ましくはタンパク質のモル濃度の約０．５〜約５００、約１〜約３００、約１〜約１００、約１〜約５０、約１〜約３０、約１〜約２５、又は約１〜約２０倍の範囲内にある。典型的にはイヌリン誘導体は、約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ又は約０．２５〜２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶液中に存在する。水溶液中のイヌリン誘導体の濃度の上限は、溶液中のそのイヌリン誘導体の溶解度によって決定される。
【００５９】
イヌリン誘導体を使用してタンパク質を安定化させ保護する本発明の方法は、タンパク質のプロセシング法、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーなどの１つ又は複数のタンパク質精製工程を含むタンパク質フォールディング法及び／又はプロセシング法において有用である。
【００６０】
本発明は、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の使用を提供し、本発明を使用して、水溶液中又は乾燥形でタンパク質を安定化させることができる。
【００６１】
本発明の方法及び使用中で使用するのに適したイヌリン誘導体は、Ｉｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（Ｏｒａｆｔｉ、ベルギー）である。
【００６２】
本発明の方法又は使用に好ましいイヌリン誘導体は、式（Ｉ）の化合物であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく、
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である化合物である。
【００６３】
Ｒ１又はＲ２がアルキル基である場合、それは１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６４】
Ｒ１又はＲ２がアルケニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルケニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６５】
Ｒ１又はＲ２がアルキニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６６】
Ｒ１又はＲ２がハロアルキル基である場合、それは１つ又は複数のハロゲン原子（例えばフッ素、塩素又は臭素原子）で置換された前に定義したアルキル基である。前記ハロアルキル基は１〜３個のハロゲン原子置換基を有することが好ましく、１〜３個のフッ素又は塩素原子置換基を有することがより好ましい。前記ハロアルキル基は３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６７】
Ｒ１又はＲ２がシクロアルキル基である場合、それは３〜９個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；前記シクロアルキル基は３〜７個の炭素原子を有することが好ましく、４〜６個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００６８】
Ｒ１又はＲ２がアリール基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する芳香族基、例えばフェニル基又はナフチル基である。
【００６９】
Ｒ１又はＲ２がアラルキル基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数の芳香族基、例えばベンジル基又はトリフェニルメチル基で置換された、前に定義したアルキル基である。
【００７０】
基Ｒ１及びＲ２はそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個、好ましくは３〜２２個、及び最も好ましくは３〜１８個の炭素原子の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択することができる。１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルキル基であってよく；１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２は、２〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基であることが適切である。アルキル基Ｒ１及びＲ２はそれぞれ、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状アルキル基、又は３〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する分枝状アルキル基であってよい。
【００７１】
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度は、０．０１〜３．０、又は０．０２〜３．０、好ましくは０．０２〜１．０又は０．０５〜１．０、最も好ましくは０．０５〜０．５又は０．０３〜０．３の範囲にあることが適切である。式（Ｉ）の化合物は、例えばイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンであってよい。
【００７２】
他の態様では本発明は、グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を安定化させるための方法を提供する。
【００７３】
本発明の好ましい安定化法では、タンパク質とグルコシド誘導体、例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体を水溶液中で接触させる。安定化法は、水溶液の乾燥、脱水、蒸発、又は凍結乾燥（凍結乾燥）をさらに含むことができる。
【００７４】
本発明のこのような安定化法では、グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）が作用して、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させる。非フォールディング状態又は部分的にフォールディング状態であってよい変性形で、タンパク質を安定化させることができ、或いはタンパク質は原型の立体配座で安定化させることができる。グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）と原型の立体配座のタンパク質を接触させることを含む方法では、タンパク質を変性に対して安定化させる。本発明の安定化法では、適切にはグルコシドヒドロカルビル誘導体であるグルコシド誘導体による凝集に対して、タンパク質を安定化させる。グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）を使用する本発明の安定化法は、タンパク質を分解に対して保護するためにも有用である。
【００７５】
さらに他の態様では本発明は、グルコシド誘導体（例えばグルコシドヒドロカルビル誘導体）とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法を提供する。
【００７６】
グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体を使用する、本発明の安定化法及び可溶化法は、タンパク質プロセシングの方法、特にタンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる方法において有用である。本発明のこのような安定化法及び可溶化法は、１つ又は複数のタンパク質精製工程、例えば透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及び／又はクロマトグラフィーを含むタンパク質プロセシングの方法において使用することができる。
【００７７】
他の態様では本発明は、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための、グルコシドヒドロカルビル誘導体などのグルコシド誘導体の使用を提供する。
【００７８】
本発明によれば、好ましくはグルコシドヒドロカルビル誘導体であるグルコシド誘導体を使用して、原型タンパク質の変性又は変性（非フォールディング状態或いは部分的にフォールディング状態）タンパク質の再生などの、立体配座の変化に対してタンパク質を安定化させ、タンパク質を所望の配置に保つのを助ける。グルコシド誘導体が作用して、例えば熱、電磁放射、せん断応力、タンパク質分解による、或いは還元、酸化、又はカルバミル化などの化学修飾による分解に対してタンパク質を安定化させる。本発明の方法では、グルコシド誘導体、グルコシドヒドロカルビル誘導体を使用して水溶液中で、或いは例えば水溶液の乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥（凍結乾燥）によって生成した乾燥形で、タンパク質を安定化させることができる。
【００７９】
さらに他の態様では本発明は、タンパク質を可溶化させるためのグルコシド誘導体、適切にはグルコシドヒドロカルビル誘導体の使用を提供する。
【００８０】
グルコシド誘導体はグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが好ましく、さらに式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体であることが好ましい。
【００８１】
Ｒ１がアルキル基である場合、それは１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８２】
Ｒ１がアルケニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルケニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８３】
Ｒ１がアルキニル基である場合、それは２〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキニル基であり；それは３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８４】
Ｒ１がハロアルキル基である場合、それは１つ又は複数のハロゲン原子（例えばフッ素、塩素又は臭素原子）で置換された前に定義したアルキル基である。前記ハロアルキル基は１〜３個のハロゲン原子置換基を有することが好ましく、１〜３個のフッ素又は塩素原子置換基を有することがより好ましい。
【００８５】
前記ハロアルキル基は３〜２２個の炭素原子を有することが好ましく、３〜１８個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８６】
Ｒ１がシクロアルキル基である場合、それは３〜９個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；前記シクロアルキル基は３〜７個の炭素原子を有することが好ましく、４〜６個の炭素原子を有することが最も好ましい。
【００８７】
Ｒ１がアリール基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する芳香族基、例えばフェニル基又はナフチル基である。
【００８８】
Ｒ１がアラルキル基である場合、それは１つ又は複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数の芳香族基、例えばベンジル基又はトリフェニルメチル基で置換された、前に定義したアルキル基である。
【００８９】
好ましくは、１つ又は複数の基Ｒ１は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状アルキル基であってよく、且つ／或いは１つ又は複数の基Ｒ１は、２〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基であってよい。それぞれのアルキル基Ｒ１は、１〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する線状アルキル基、又は３〜２５個、好ましくは３〜２２個、最も好ましくは３〜１８個の炭素原子を有する分枝状アルキル基であることが適切である。
【００９０】
式（ＩＩ）の化合物では、グルコシル単位当たりの平均置換度は０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、及び最も好ましくは０．０３〜０．３である。
【００９１】
式（ＩＩ）の化合物は、多分散系の線状又は分枝状のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタンであってよい。それぞれのグルコシル単位ＧはＤ−グルコシル又はＬ−グルコシル単位、好ましくはＤ−グルコシル単位であってよい。グルコシル単位は１，４−結合又は１，６−結合を介して結合することができ、且つ結合はそれぞれα−結合又はβ−結合であってよい。
【００９２】
本発明の方法及び使用の好ましい実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物はデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンである。
【００９３】
特に好ましいデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンは、式（ＩＩＩ）の単位であって、
Ｇ’（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ｂ（ＩＩＩ）
上式で、
Ｇ’がデンプン加水分解生成物分子のグルコシル単位を表し、デンプン加水分解生成物が１〜４７の範囲のデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）を有し、
Ｒ１が前に定義したヒドロカルビル基であり、且つ
ｂがグルコシル単位当たりのカルバミン酸ヒドロカルビル基の数を表し、基の数は置換度（ＤＳ）、即ち式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビルウレタンのグルコシル単位当たりのヒドロカルビル置換基の平均数として一般的に表し、前記ＤＳ値が０．０１〜２．０の範囲である単位から構成される式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体である。
【００９４】
カルバミン酸基によって理論上置換することができる、対象グルコシド分子のグルコシル単位当たりのヒドロキシル基の数は、非末端、非分枝状グルコシル単位に関しては最大３であり、一方末端又は非末端の分枝状グルコシル単位に関しては、その数はそれぞれで４又は２ある。さらに、ＤＳはグルコシル単位当たりの置換基の平均数を表すので、グルコシドＮ−カルバミン酸ヒドロカルビル（ＩＩａ）分子中には、カルバミン酸ヒドロカルビル基によって置換されていないグルコシル単位が存在する可能性があることは明らかである（したがって式（ＩＩＩ）中の前記グルコシル単位に関するｂはゼロである）。
【００９５】
デンプン加水分解生成物は一般に、グルコシド分子の多分散系混合物の形で現れる。したがって、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）を調製するための出発物質として、通常の場合通りこのような混合物を使用するとき、得られる生成物はグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の対応する多分散系混合物でもある。このような多分散系混合物は、本発明の方法及び使用において利用するためのグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の好ましい実施形態を構成する。
【００９６】
前記グルコシド分子の多分散系混合物から構成され１〜４７の範囲のＤ．Ｅ．を有する、市販等級のデンプン加水分解生成物は、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）を調製するのに非常に適している。
【００９７】
典型的には、本発明のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の調製において使用するのに適したデンプン加水分解生成物は、例えばＲＯＱＵＥＴＴＥ社から入手可能であるＧＬＵＣＩＤＥＸ（登録商標）マルトデキストリン及びＧＬＵＣＩＤＥＸ（登録商標）乾燥グルコースシロップ例えば、型１（Ｄ．Ｅ．最大５を基にしたジャガイモ）、型２（Ｄ．Ｅ．最大５を基にした青色メイズ）、型６（Ｄ．Ｅ．５〜８を基にした青色メイズ）、型９（Ｄ．Ｅ．８〜１０を基にしたジャガイモ）のマルトデキストリン、並びに型１２（Ｄ．Ｅ．１１〜１４）、型１７（Ｄ．Ｅ．１５〜１８）及び型１９（Ｄ．Ｅ．１８〜２０）のマルトデキストリン、並びに型２１（Ｄ．Ｅ．２０〜２３）、型２８Ｅ（Ｄ．Ｅ．２８〜３１）、型２９（Ｄ．Ｅ．２８〜３１）、型３２（Ｄ．Ｅ．３１〜３４）、型３３（Ｄ．Ｅ．３１〜３４）、型３８（Ｄ．Ｅ．３６〜４０）、型３９（Ｄ．Ｅ．３８〜４１）、型４０（Ｄ．Ｅ．３８〜４２）及び型４７（Ｄ．Ｅ．４３〜４７）の乾燥グルコースシロップなどである。
【００９８】
本発明のヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）のヒドロカルビル基、即ち本明細書で前に定義した式（ＩＩＩ）中のＲ１基は、好ましくは飽和Ｃ３〜Ｃ２２アルキル基、より好ましくは飽和Ｃ４〜Ｃ１８アルキル基、さらにより好ましくは飽和線状Ｃ４〜Ｃ１８アルキル基、最も好ましくは飽和線状Ｃ６〜Ｃ１８アルキル基である。典型的には、適切なアルキル基にはブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル及びオクタデシル基がある。
【００９９】
他の好ましい実施形態では、ヒドロカルビル基はＣ３〜Ｃ２２アルケニル基、好ましくはＣ４〜Ｃ１８アルケニル基、最も好ましくは線状Ｃ６〜Ｃ１８アルケニル基である。
【０１００】
典型的には、適切なアルケニル基にはブテニル、ヘキセニル、オクテニル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル及びオクタデセニル基がある。
【０１０１】
本発明のウレタン（ＩＩａ）中では、式（ＩＩＩ）の単位の全Ｒ１基は同じであるか又は異なってよい。後者のウレタン（ＩＩａ）は、実際は前に定義した異なるＲ１基を有する２個以上のイソシアネートの混合物である式Ｒ１−ＮＣＯのイソシアネートと、デンプン加水分解生成物を反応させることによって、以下に記載する方法に従い容易に調製することができる。
【０１０２】
飽和アルキルイソシアネートは、例えば第１級又は第２級アルキル−アミンとホスゲンを反応させることによって、従来通りに調製することができる。不飽和アルキルイソシアネートは、アルケニル−アミンから同様に調製することができる。基Ｒ２Ｒ３Ｃ＝ＣＨ−が式（ＩＩＩ）の基Ｒ１に対応し、且つＲ２が水素又はアルキル基を表し、且つＲ３がアルキル又はビニル基を表す式Ｒ２Ｒ３Ｃ＝ＣＨ−ＮＣＯ（ＩＶ）の、α，β−不飽和アルキルイソシアネートは、Ｋ．Ｋｏｅｎｉｇ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．、２１（４）、３３４〜３３５（１９７９））によって開示されたのと同様に、アルデヒドＲ２Ｒ３ＣＨ−ＣＨＯとＭｅ３Ｃ−ＮＨ２の縮合、次に（そのエナミン形と平衡状態で）生じたシッフ塩基とホスゲンの反応、及びＭｅ３Ｃ−Ｃｌの熱除去によって調製することができる。さらに、さまざまな不飽和アルキルイソシアネートが、特にＤｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．の米国特許第３，８９０，３８３号及び米国特許第３，８０３，０６２号中で開示されている。式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（前に定義したＲ１）の多くのアルキルシアネートが市販されている。
【０１０３】
本発明によるグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）は、式（ＩＩＩ）のグルコシル単位当たり０．０１〜２．０、好ましくは０．０２〜１．０、及び最も好ましくは０．０３〜０．３の範囲の置換度（ＤＳ）を有する。
【０１０４】
カルバミン酸ヒドロカルビルの１つ又は複数の置換基は、グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）のグルコシル単位上のさまざまな位置に位置し得る。
【０１０５】
本発明のグルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）は、デンプン加水分解生成物、イソシアネート及び反応生成物に関して不活性である溶媒中に溶かして、例えばデンプン加水分解生成物と選択したヒドロカルビルイソシアネート又はヒドロカルビルイソシアネートの混合物を反応させることによって、ウレタン、単糖、二糖、及び多糖を調製するための従来の方法と同様に調製することができる。
【０１０６】
適切な溶媒には、反応性ヒドロキシル及びアミン基を含まない溶媒又は溶媒混合物、例えばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）などがある。
【０１０７】
デンプン加水分解生成物とヒドロカルビルイソシアネートの間の反応は、無水条件下で行うことが好ましい。これを鑑みて、デンプン加水分解生成物及び溶媒は、それらをヒドロカルビルイソシアネートと接触させる前に、０．５ｗｔ％未満の含水率まで乾燥させることが好ましい。例えば乾燥空気流中でデンプン加水分解生成物を加熱すること、又は減圧下でデンプン加水分解生成物を加熱すること、又はデンプン加水分解生成物の溶液、反応用に選択した溶媒中から、場合によっては減圧下で共沸蒸留によって水を除去することなどを含めた、従来の技法によって乾燥を行うことができる。乾燥中に最高温度は、デンプン加水分解生成物及び溶媒の性質に応じて、如何なる分解又は副反応をも回避するために過剰になってはならない。好ましくは、前記温度は約８０℃未満に保たなければならない。
【０１０８】
軽い攪拌〜激しい攪拌下において、適切な溶媒に溶かしたデンプン加水分解生成物と、非希釈形又は無水溶媒に溶かしたヒドロカルビルイソシアネートを接触させることによって、典型的には反応を行う。広い温度範囲、典型的には室温〜約８０℃まで、又は温度が低い場合は反応混合物の還流温度で、好ましくは約６０℃と約８０℃の間の温度で反応を行うことができる。
【０１０９】
典型的にはデンプン加水分解生成物は、必要な場合は加熱下で適切な溶媒に溶かす。したがって、ヒドロカルビルイソシアネート（場合によっては同じ不活性溶媒又は他の不活性溶媒に溶けているが、前者の溶媒と混和性であることが好ましい）を、溶解グルコシドに攪拌下でゆっくり加える。グルコシドヒドロカルビルウレタン（ＩＩａ）の望ましい置換度は、反応物の割合を調節することによって得ることができる。ウレタンを形成するためのヒドロカルビルイソシアネートとアルコールヒドロキシル基の反応は定量反応なので、ウレタン（ＩＩａ）の置換度は、デンプン加水分解生成物のグルコシル単位当たりのヒドロカルビルイソシアネートの適切なモル比を選択することによって調節することができる。通常反応混合物は、一定時間、通常約３０分〜約２４時間攪拌しながら加熱して、試薬間の反応を終了させる。次いで反応混合物は、従来の技法によって、例えば通常は室温に冷却した後に、試薬を溶かすために使用する１つ又は複数の溶媒と混和性である溶媒であるが、グルコシドアルキルウレタン（ＩＩａ）が全く溶けないか或いは非常に少ししか溶けない沈殿溶媒に反応混合物を注ぐことにより、形成されたウレタン（ＩＩａ）を沈殿させることによって後処理する。次いでウレタン（ＩＩａ）を例えば濾過又は遠心分離によって反応混合物から物理的に単離し、ウレタン（ＩＩａ）が全く溶けないか或いは非常にわずかのみ溶ける適切な溶媒で洗浄し、任意の一般的な技法を使用して乾燥させる。
【０１１０】
本発明による望ましいウレタン（ＩＩａ）を合成するための他の好都合な方法は、Ｗ．Ｇｅｒｈａｒｄｔ、Ａｂｂ．Ｄｔｓｃｈ．Ａｋａｄ．Ｗｉｓｓ．ベルリン、ＫＬ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｏｌ．Ｂｉｏｌ、Ｖｏｌ１９６６（６）、２４〜３６、（１９６７）（Ｃ．Ａ．、６Ｓ、１４３２３）によって記載された方法と類似の形式で行うことができる。その方法は、ジメチルホルムアミド中での一点反応における、シアン酸カリウム及び選択したヒドロカルビルハロゲン化物、好ましくは臭化ヒドロカルビルを用いたデンプン加水分解生成物の変換を含む。
【０１１１】
本明細書に記載する糖ポリマー誘導体、特にイヌリン誘導体及びグルコシドヒドロカルビル誘導体の方法及び使用は、食料品、栄養補助食品、化粧品又は薬剤調製物中に使用されるタンパク質の安定化、保護及び可溶化に有益に適用することができる。この文脈において、特に相当量の糖ポリマー誘導体がタンパク質生成物中に存在する場合、非毒性糖ポリマー誘導体が通常使用される。タンパク質生成物中に高濃度の糖ポリマー誘導体の存在が望ましくない場合、したがって糖ポリマー誘導体はタンパク質から容易に分離することができる。
【０１１２】
本発明の方法及び使用は有用である、何故なら使用する糖ポリマー誘導体は、伝統的な変性剤、可溶化剤及び保護物質、例えば界面活性剤、アルギニン及び塩酸グアニジンより、はるかに低い程度でタンパク質分析技法に影響を与えるからである。
【０１１３】
糖ポリマー誘導体は一般にシャペロンタンパク質より安価であるので、したがって本発明は、特に従来技術の方法が不経済となる可能性がある工程のスケールアップにおいて、可溶性を維持又は改善するコスト効率の良い手段を提供する。
【０１１４】
本発明の方法では、タンパク質の下流工程を害さずに凝集が抑制される。
【０１１５】
本発明の方法は、保存時にタンパク質の安定性を高め、クロマトグラフィーによる精製を向上させ、タンパク質濃縮中の損失を最小にし、且つ透析中のタンパク質の凝集を低下させるのに適している。本発明を全てのタンパク質処理分野に適用して、収率を増大させ、溶液体積を減少させることができ、資金の出費が減らされ、生成工程の有効性を改善することができることを意味する。
【０１１６】
本発明の方法を実施するためのキットを提供し、キットは一般に、本明細書に記載する糖ポリマー誘導体、例えば１つ又は複数のイヌリン誘導体、及び／又は１つ又は複数のグルコシドヒドロカルビル誘導体、好ましくは１つ又は複数の式（Ｉ）のイヌリン誘導体、及び／又は１つ又は複数の式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体の供給物を、場合によっては他の試薬、バイアル、ピペットチップ及びスパンカラムなどの消耗品、及び／又はキットを使用するための教示書と一緒に含む。
【０１１７】
キットは、本発明の方法を実施する際に使用するのに適した、バッファー及び他の試薬を含むこともできる。
【０１１８】
本発明は、タンパク質、及び約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０、例えば２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の重合度を有するイヌリン誘導体を含む組成物も提供する。本発明の組成物において、イヌリン誘導体はＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１であってよい。このような組成物において有用なイヌリン誘導体には、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基及び１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される、１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化された誘導体がある。
【０１１９】
このような組成物では、イヌリン誘導体は式（Ｉ）の化合物であってよく、したがって本発明は、タンパク質、及び式（Ｉ）のイヌリン誘導体であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０であるイヌリン誘導体を含む組成物を提供する。
【０１２０】
本発明のこの態様による組成物では、式（Ｉ）の化合物は多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンであってよく、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択することができる。
【０１２１】
本発明による組成物はタンパク質、及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体を含むことができる。
【０１２２】
本発明の組成物では、イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体のモル濃度は一般に、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍、好ましくはタンパク質のモル濃度の約０．５〜約５００、約１〜約３００、約１〜約１００、約１〜約５０、約１〜約３０、約１〜約２５、又は約１〜約２０倍の範囲内にある。組成物は液体、例えば水溶液形であってよく、或いは乾燥形であってよい。好ましい実施形態では組成物は、例えば注射、摂取、吸入又は局所施用による投与に適している可能性がある水溶液形であるか、或いは適切な液体（滅菌蒸留水、生理食塩水、又は薬剤として許容可能なバッファーなど）中での還元用、例えば注射、摂取、吸入又は局所投与による投与用の乾燥形である医薬組成物である。
【０１２３】
本発明による組成物は、ヒト及び／又は動物の疾患の診断、治療、予防又は調査において使用するのに適している。本発明による医薬組成物は、例えばインシュリン、エリスロポイエチンなどの治療用タンパク質、抗体又は抗体断片を含むことができる。医薬組成物は、免疫処置用の抗原タンパク質を含むことができる。
【実施例】
【０１２４】
（実施例１）
変性リゾチームの希釈中の、タンパク質の安定化及び保護、凝集の抑制
試験タンパク質、メンドリ卵白リゾチーム（Ｆｌｕｋａ、＃６２９７１）を、変性バッファー、８Ｍの尿素、０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ、３２ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ８．２中に１５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶かした。タンパク質は一晩４℃で変性させた。次いで変性タンパク質を、さまざまな濃度のＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１（アルキル−イヌリン）を含む０．１ｍＭのトリス−ＨＣｌ、５ｍＭのＧＳＳＧ、ｐＨ８．２の溶液中に２０倍に希釈した。室温で１５分のインキュベーション後に４９２ｎｍでの光の吸収（Ａ４９２）により、溶液の濁度を測定することによって凝集を調べた。これらの結果は図１及び２中に示す。
【０１２５】
（実施例２）
変性クエン酸シンターゼの希釈中の、タンパク質の安定化及び保護、凝集の抑制
試験タンパク質、ブタ心臓のクエン酸シンターゼ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｃ３２６０）を、変性バッファー、８Ｍの尿素、０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ、３２ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ８．２中に溶かした。この溶液を調製して、限外濾過装置（Ｖｉｖａｓｐｉｎ５００ＰＥＳ、１０ｋＤａのＭＷＣＯ、Ｆｉｓｈｅｒ、＃ＦＤＰ８７５０１０Ｘ）を使用して最終濃度５ｍｇ／ｍｌのタンパク質を得て、変性バッファーへのバッファー交換を実施した。タンパク質は一晩４℃で変性させた。次いで変性タンパク質を、さまざまな濃度のアルキル−イヌリンを含む０．１ｍＭのトリス−ＨＣｌ、５ｍＭのＧＳＳＧ、ｐＨ８．２の溶液中に２０倍に希釈した。室温で１５分のインキュベーション後に４９２ｎｍでの光の吸収（Ａ４９２）により、溶液の濁度を測定することによって凝集を調べた。これらの結果は図３及び４中に示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２６】
【図１】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集を示す図である。最終的なリゾチーム濃度は０．７５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸はＡ４９２の測定値（凝集）を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図２】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集の相対的低下を示す図である。最終的なリゾチーム濃度は０．７５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸は凝集の低下率を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図３】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集を示す図である。最終的なクエン酸シンターゼ濃度は０．２５ｍｇ／ｍｌである。ｙ軸はＡ４９２の測定値（凝集）を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【図４】変性タンパク質を希釈するために使用した溶液中のアルキル−イヌリン濃度の関数として、タンパク質の凝集の相対的低下を示す図である。最終的なクエン酸シンターゼ濃度は０．２５ｍｇ／ｍｌであった。ｙ軸は凝集の低下率を示し、ｘ軸はｍｇ／ｍｌでアルキル−イヌリン濃度を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質を安定化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法。
【請求項２】
タンパク質と糖ポリマー誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって水溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
タンパク質が変性タンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
タンパク質を分解に対して保護する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
タンパク質を可溶化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記請求項のいずれかに記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項１２】
タンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではなく、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための使用。
【請求項１６】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではない、タンパク質を可溶化させるための使用。
【請求項１９】
糖ポリマー誘導体がエリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タゴトース、キシルロース及びリブロースからなる群から選択される１つ又は複数の糖を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２０】
糖ポリマー誘導体がデキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、プルラン、マンナン、キチン、キトサン、イヌリン、レバン、キシラン、シクロデキストリン又はシクロアミロースである、請求項１９に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
糖ポリマー誘導体が３個以上の単糖単位を含む環状糖ポリマー誘導体である、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２２】
環状糖ポリマー誘導体がグルコサンである、請求項２１に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
環状糖ポリマー誘導体がシクロデキストリン誘導体である、請求項２１又は２２に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
糖ポリマー誘導体のモル濃度がタンパク質のモル濃度の約１０〜約１０，０００倍の範囲にある、請求項２１から２３までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
糖ポリマー誘導体が３個以上の単糖単位を含む線状又は分枝状糖ポリマー誘導体である、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
糖ポリマー誘導体がフルクトサン又はグルコサンである、請求項２５に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
糖ポリマー誘導体がイヌリン誘導体である、請求項２６に記載の方法又は使用。
【請求項２８】
糖ポリマー誘導体がグルコシド誘導体である、請求項２６に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
イヌリン誘導体又はグルコシド誘導体が約３〜約５００、約３〜約２５０、約３〜約１００、約３〜約５０、約１０〜約５０、約１５〜約４０、又は約２０〜約３０の重合度を有する、請求項２８に記載の方法又は使用。
【請求項３０】
糖ポリマー誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項３１】
糖ポリマー誘導体が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項３２】
１つ又は複数の無極性ヒドロカルビル基が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択される、請求項３０又は請求項３１に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
無極性ヒドロカルビル基が１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項３０から３２までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
無極性ヒドロカルビル基が２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基である、請求項３０から３３までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３５】
糖ポリマー誘導体がイヌリン誘導体であるとき、糖単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、請求項１に記載のタンパク質を安定化させる方法。
【請求項３７】
タンパク質とイヌリン誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、請求項３６から３８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質が変性タンパク質である、請求項３６から３９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項３６から３９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、請求項３６から４２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
タンパク質を分解に対して保護する、請求項３６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
タンパク質とイヌリン誘導体を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法。
【請求項４６】
非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法。
【請求項４７】
原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法。
【請求項４８】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によりこのようにして得られた溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項４７又は請求項４８に記載の方法。
【請求項４９】
イヌリン誘導体の濃度がタンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項３６から４８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
イヌリン誘導体が約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項３６から４９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
請求項３６から５０までのいずれか一項に記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項５２】
タンパク質をフォールディングする方法を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項５１又は請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の使用。
【請求項５６】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項５５又は請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
イヌリン誘導体が約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０の重合度を有する、請求項３６から５７までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項５９】
イヌリン誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項３６から５８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
イヌリン誘導体が、線状アルキル誘導体、分枝状アルキル誘導体、芳香族基、ポリオール及び脂肪酸からなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
イヌリン誘導体が式（Ｉ）の化合物であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択され、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基を含む群から選択され、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり、
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく、且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である化合物である、請求項３６から６０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
基Ｒ１及びＲ２がそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２が１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項６１又は請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２が２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基である、請求項６１から６３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
アルキル基Ｒ１及びＲ２がそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基又は３〜２５個の炭素原子を有する分枝状アルキル基である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項６１から６５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がシクロアルキル基である、請求項６１から６６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項６１から６７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項６１から６８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０２〜１．０である、請求項６１から６９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
式（Ｉ）の化合物が多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンである、請求項６１から７０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
式（Ｉ）の化合物がイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、請求項６１から７１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
イヌリン誘導体がＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１である、請求項５８から６０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
グルコシドヒドロカルビル誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、請求項１に記載のタンパク質を安定化させるための方法。
【請求項７５】
タンパク質とグルコシドヒドロカルビル誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、請求項７４から７６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
タンパク質が変性タンパク質である、請求項７４から７７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項７４から７７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、請求項７４から８０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
タンパク質を分解に対して保護する、請求項７４から８０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
グルコシドヒドロカルビル誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法。
【請求項８４】
非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のグルコシドヒドロカルビル誘導体を提供することを含む方法。
【請求項８５】
原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のグルコシドヒドロカルビル誘導体を提供することを含む方法。
【請求項８６】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によりこのようにして得られた溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項８４又は請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
グルコシドヒドロカルビル誘導体の濃度がタンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項７４から８６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
イヌリン誘導体が約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項７４から８７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
請求項７４から８８までのいずれか一項に記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項９０】
タンパク質をフォールディングする方法を含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項８９又は請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための、グルコシドヒドロカルビル誘導体の使用。
【請求項９４】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項９０に記載の使用。
【請求項９５】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項９３又は請求項９４に記載の使用。
【請求項９６】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０の重合度を有する、請求項７４から９５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項９７】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項７４から９６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
糖ポリマー誘導体が式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体である、請求項７４から９８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルキル基から選択されるアルキル基である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルケニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルケニル基である、請求項９９又は請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルキニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルキニル基である、請求項９９から１０１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項９９から１０２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がシクロアルキル基である、請求項９９から１０３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項９９から１０４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項９９から１０５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０２〜１．０である、請求項９９から１０６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
式（ＩＩ）の前記化合物が多分散系の線状又は分枝状のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタンである、請求項９９から１０７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
式（ＩＩ）の前記化合物がデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
式（ＩＩ）の化合物が式（ＩＩＩ）の単位であって、
Ｇ’（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ｂ（ＩＩＩ）
上式で、
Ｇ’がデンプン加水分解生成物分子のグルコシル単位を表し、デンプン加水分解生成物が１〜４７の範囲のデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）を有し、
Ｒ１が前に定義したヒドロカルビル基であり、且つ
ｂがグルコシル単位当たりのカルバミン酸ヒドロカルビル基の数を表し、基の数は置換度（ＤＳ）、即ち式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビルウレタンのグルコシル単位当たりのヒドロカルビル置換基の平均数として一般的に表し、前記ＤＳ値が０．０１〜２．０の範囲である単位から構成されるグルコシドヒドロカルビル誘導体である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルキル基から選択されるアルキル基である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルケニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルケニル基である、請求項１１０又は請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルキニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルキニル基である、請求項１１０から１１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項１１０から１１３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数の前記Ｒ１基がシクロアルキル基である、請求項１１０から１１４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項１１０から１１５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項１１０から１１６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、ＤＳ値が０．０２〜１．０である、請求項１１０から１１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
請求項１から１１８までのいずれか一項に記載の方法又は使用を実施するためのキット。
【請求項１２０】
１つ又は複数の式（Ｉ）のイヌリン誘導体及び／或いは１つ又は複数の式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体を含む、請求項１１９に記載のキット。
【請求項１２１】
タンパク質、及び式（Ｉ）のイヌリン誘導体であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０であるイヌリン誘導体を含む組成物。
【請求項１２２】
式（Ｉ）の化合物が多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンである、請求項１２１に記載の組成物。
【請求項１２３】
式（Ｉ）の化合物がイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、請求項１２１又は請求項１２２に記載の組成物。
【請求項１２４】
タンパク質、及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体を含む組成物。
【請求項１２５】
イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体のモル濃度が、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項１２０から１２４までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２６】
水溶液である、請求項１２０から１２５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２７】
乾燥形である、請求項１２０から１２５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２８】
医薬組成物である、請求項１２０から１２７までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１】
タンパク質を安定化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法。
【請求項２】
タンパク質と糖ポリマー誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって水溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
タンパク質が変性タンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
タンパク質を分解に対して保護する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
タンパク質を可溶化させる方法であって、タンパク質と糖ポリマー誘導体を接触させ、前記糖ポリマー誘導体がα−β−又はγ−シクロデキストリンではないことを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記請求項のいずれかに記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項１２】
タンパク質をフォールディングする方法を含むか又はそれからなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではなく、凝集、立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための使用。
【請求項１６】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
糖ポリマー誘導体の使用であって、前記糖ポリマー誘導体がα−、β−又はγ−シクロデキストリンではない、タンパク質を可溶化させるための使用。
【請求項１９】
糖ポリマー誘導体がエリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タゴトース、キシルロース及びリブロースからなる群から選択される１つ又は複数の糖を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２０】
糖ポリマー誘導体がデキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、プルラン、マンナン、キチン、キトサン、イヌリン、レバン、キシラン、シクロデキストリン又はシクロアミロースである、請求項１９に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
糖ポリマー誘導体が３個以上の単糖単位を含む環状糖ポリマー誘導体である、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２２】
環状糖ポリマー誘導体がグルコサンである、請求項２１に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
環状糖ポリマー誘導体がシクロデキストリン誘導体である、請求項２１又は２２に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
糖ポリマー誘導体のモル濃度がタンパク質のモル濃度の約１０〜約１０，０００倍の範囲にある、請求項２１から２３までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
糖ポリマー誘導体が３個以上の単糖単位を含む線状又は分枝状糖ポリマー誘導体である、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
糖ポリマー誘導体がフルクトサン又はグルコサンである、請求項２５に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
糖ポリマー誘導体がイヌリン誘導体である、請求項２６に記載の方法又は使用。
【請求項２８】
糖ポリマー誘導体がグルコシド誘導体である、請求項２６に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
イヌリン誘導体又はグルコシド誘導体が約３〜約５００、約３〜約２５０、約３〜約１００、約３〜約５０、約１０〜約５０、約１５〜約４０、又は約２０〜約３０の重合度を有する、請求項２８に記載の方法又は使用。
【請求項３０】
糖ポリマー誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項３１】
糖ポリマー誘導体が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、前記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項３２】
１つ又は複数の無極性ヒドロカルビル基が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択される、請求項３０又は請求項３１に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
無極性ヒドロカルビル基が１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項３０から３２までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
無極性ヒドロカルビル基が２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基である、請求項３０から３３までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３５】
糖ポリマー誘導体がイヌリン誘導体であるとき、糖単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
イヌリン誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、請求項１に記載のタンパク質を安定化させる方法。
【請求項３７】
タンパク質とイヌリン誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、請求項３６から３８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質が変性タンパク質である、請求項３６から３９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項３６から３９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、請求項３６から４２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
タンパク質を分解に対して保護する、請求項３６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
タンパク質とイヌリン誘導体を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法。
【請求項４６】
非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法。
【請求項４７】
原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のイヌリン誘導体を提供することを含む方法。
【請求項４８】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によりこのようにして得られた溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項４７又は請求項４８に記載の方法。
【請求項４９】
イヌリン誘導体の濃度がタンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項３６から４８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
イヌリン誘導体が約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項３６から４９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
請求項３６から５０までのいずれか一項に記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項５２】
タンパク質をフォールディングする方法を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項５１又は請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるためのイヌリン誘導体の使用。
【請求項５６】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項５５又は請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
イヌリン誘導体が約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０の重合度を有する、請求項３６から５７までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項５９】
イヌリン誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項３６から５８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
イヌリン誘導体が、線状アルキル誘導体、分枝状アルキル誘導体、芳香族基、ポリオール及び脂肪酸からなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
イヌリン誘導体が式（Ｉ）の化合物であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択され、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基を含む群から選択され、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり、
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく、且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０である化合物である、請求項３６から６０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
基Ｒ１及びＲ２がそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、並びに２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２が１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項６１又は請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
１つ又は複数の基Ｒ１及びＲ２が２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基又はアルキニル基である、請求項６１から６３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
アルキル基Ｒ１及びＲ２がそれぞれ、１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基又は３〜２５個の炭素原子を有する分枝状アルキル基である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項６１から６５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がシクロアルキル基である、請求項６１から６６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項６１から６７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項６１から６８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０２〜１．０である、請求項６１から６９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
式（Ｉ）の化合物が多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンである、請求項６１から７０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
式（Ｉ）の化合物がイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、請求項６１から７１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
イヌリン誘導体がＩｎｕｔｅｃ（登録商標）ＳＰ１である、請求項５８から６０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
グルコシドヒドロカルビル誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、請求項１に記載のタンパク質を安定化させるための方法。
【請求項７５】
タンパク質とグルコシドヒドロカルビル誘導体を水溶液中で接触させることを特徴とする、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によって溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
タンパク質を立体配座の変化に対して安定化させる、請求項７４から７６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
タンパク質が変性タンパク質である、請求項７４から７７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
タンパク質が原型の立体配座である、請求項７４から７７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
タンパク質を変性に対して安定化させる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
タンパク質を凝集に対して安定化させる、請求項７４から８０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
タンパク質を分解に対して保護する、請求項７４から８０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
グルコシドヒドロカルビル誘導体とタンパク質を接触させることを特徴とする、タンパク質を可溶化させる方法。
【請求項８４】
非原型配置のタンパク質を安定化させるための方法であって、非原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、タンパク質のフォールディングを阻害するのに充分な濃度のグルコシドヒドロカルビル誘導体を提供することを含む方法。
【請求項８５】
原型立体配座のタンパク質を安定化させるための方法であって、原型立体配座のタンパク質を含む水溶液に、原型立体配座のタンパク質を維持するのに充分な濃度のグルコシドヒドロカルビル誘導体を提供することを含む方法。
【請求項８６】
乾燥、脱水、蒸発又は凍結乾燥によりこのようにして得られた溶液を乾燥させることをさらに含む、請求項８４又は請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
グルコシドヒドロカルビル誘導体の濃度がタンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項７４から８６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
イヌリン誘導体が約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項７４から８７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
請求項７４から８８までのいずれか一項に記載の方法を含む、タンパク質のプロセシング法。
【請求項９０】
タンパク質をフォールディングする方法を含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
１つ又は複数のタンパク質精製工程を含む、請求項８９又は請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記タンパク質精製工程が透析、ダイアフィルトレーション、限外濾過及びクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
立体配座の変化及び／又は分解に対してタンパク質を安定化させるための、グルコシドヒドロカルビル誘導体の使用。
【請求項９４】
水溶液中でタンパク質を安定化させるための、請求項９０に記載の使用。
【請求項９５】
乾燥形でタンパク質を安定化させるための、請求項９３又は請求項９４に記載の使用。
【請求項９６】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が約３〜５００、３〜２５０又は３〜１００、好ましくは３〜５０、より好ましくは１０〜５０、さらにより好ましくは１５〜４０、さらに好ましくは２０〜３０の重合度を有する、請求項７４から９５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項９７】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項７４から９６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
グルコシドヒドロカルビル誘導体が、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基、２〜２５個の炭素原子を有するアルケニル基及びアルキニル基、１〜２５個の炭素原子を有するハロアルキル基、３〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１４個の炭素原子を有するアリール基、６〜１４個の炭素原子を有する１つ又は複数のアリール基で置換された１〜２５個の炭素原子を有するアルキル基を含むアラルキル基、２〜２５個の炭素原子を有する脂肪酸基並びに１〜２５個の炭素原子を有するポリオールからなる群から選択される１つ又は複数の型の無極性ヒドロカルビル基によって誘導体化される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
糖ポリマー誘導体が式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体である、請求項７４から９８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルキル基から選択されるアルキル基である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルケニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルケニル基である、請求項９９又は請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルキニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルキニル基である、請求項９９から１０１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項９９から１０２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がシクロアルキル基である、請求項９９から１０３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項９９から１０４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項９９から１０５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０２〜１．０である、請求項９９から１０６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
式（ＩＩ）の前記化合物が多分散系の線状又は分枝状のグルコシドＮ−ヒドロカルビルウレタンである、請求項９９から１０７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
式（ＩＩ）の前記化合物がデンプン加水分解生成物のヒドロカルビルウレタンである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
式（ＩＩ）の化合物が式（ＩＩＩ）の単位であって、
Ｇ’（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ｂ（ＩＩＩ）
上式で、
Ｇ’がデンプン加水分解生成物分子のグルコシル単位を表し、デンプン加水分解生成物が１〜４７の範囲のデキストロース当量（Ｄ．Ｅ．）を有し、
Ｒ１が前に定義したヒドロカルビル基であり、且つ
ｂがグルコシル単位当たりのカルバミン酸ヒドロカルビル基の数を表し、基の数は置換度（ＤＳ）、即ち式（ＩＩａ）のグルコシドヒドロカルビルウレタンのグルコシル単位当たりのヒドロカルビル置換基の平均数として一般的に表し、前記ＤＳ値が０．０１〜２．０の範囲である単位から構成されるグルコシドヒドロカルビル誘導体である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１〜２５個の炭素原子を有する線状アルキル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルキル基から選択されるアルキル基である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルケニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルケニル基である、請求項１１０又は請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が２〜２５個の炭素原子を有する線状アルキニル基、及び３〜２５個の炭素原子を有する分枝鎖状アルケニル基から選択されるアルキニル基である、請求項１１０から１１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基が１つ又は複数のハロゲン原子を有するハロアルキル基である、請求項１１０から１１３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数の前記Ｒ１基がシクロアルキル基である、請求項１１０から１１４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアリール基である、請求項１１０から１１５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、１つ又は複数のＲ１基がアラルキル基である、請求項１１０から１１６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
式（ＩＩ）の前記化合物中において、ＤＳ値が０．０２〜１．０である、請求項１１０から１１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
請求項１から１１８までのいずれか一項に記載の方法又は使用を実施するためのキット。
【請求項１２０】
１つ又は複数の式（Ｉ）のイヌリン誘導体及び／或いは１つ又は複数の式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体を含む、請求項１１９に記載のキット。
【請求項１２１】
タンパク質、及び式（Ｉ）のイヌリン誘導体であって、
Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ−［Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂ］ｎ（Ｉ）
上式で、
Ｇが末端グルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよい単位であり；
Ｒ１が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａが０〜４の整数であり；
Ｆが、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）の１つ又は複数の基で置換されていてよいフルクトシル単位であり；
Ｒ２が１〜２５個の炭素原子を有する線状又は分枝鎖状の飽和又は不飽和ヒドロカルビル基であり、且つフルクトシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）基が存在する場合、Ｒ２基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ｂが末端フルクトシル単位に関して０〜３及び０〜４の整数であり；
ｎが２〜４９９、好ましくは２〜２４９、２〜９９、２〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂのそれぞれの単位が式Ｆ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ２）ｂの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位又はフルクトシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜３．０であるイヌリン誘導体を含む組成物。
【請求項１２２】
式（Ｉ）の化合物が多分散系の線状又はわずかに分枝状のイヌリンＮ−アルキルウレタンである、請求項１２１に記載の組成物。
【請求項１２３】
式（Ｉ）の化合物がイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクチル、イヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸ドデシル、及びイヌリンＮ−ｎ−カルバミン酸オクタデシルからなる群から選択される、請求項１２１又は請求項１２２に記載の組成物。
【請求項１２４】
タンパク質、及び式（ＩＩ）のグルコシドヒドロカルビル誘導体であって、
［Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａ］ｎ（ＩＩ）
上式で、
Ｇがグルコシル単位であって、その１つ又は複数のヒドロキシル基が式（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）の１つ又は複数の基で置換されていてよいグルコシル単位であり；
Ｒ１がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びアラルキル基からなる群から選択されるヒドロカルビル基であり、且つそれぞれのグルコシル単位上に２個以上の（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）基が存在する場合、Ｒ１基はそれぞれ同じであるか又は異なってよく；
ａは末端グルコシル単位に関して０〜４、非分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜３、及び分枝状、非末端グルコシル単位に関して０〜２の整数であり；
ｎは３〜４９９、好ましくは３〜２４９、３〜９９、３〜４９、９〜４９、１４〜３９、１９〜２９、又は１９〜２４の整数であり、
式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａのそれぞれの単位が式Ｇ（Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ１）ａの任意の他の単位と同じであるか又は異なってよく；且つ
グルコシル単位当たりの平均置換度が０．０１〜２．０であるグルコシドヒドロカルビル誘導体を含む組成物。
【請求項１２５】
イヌリン誘導体又はグルコシドヒドロカルビル誘導体のモル濃度が、タンパク質のモル濃度の約０．１〜約１０００倍の範囲にある、請求項１２０から１２４までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２６】
水溶液である、請求項１２０から１２５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２７】
乾燥形である、請求項１２０から１２５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２８】
医薬組成物である、請求項１２０から１２７までのいずれか一項に記載の組成物。
【図１】
【図３】
【図２】
【図４】
【図３】
【図２】
【図４】
【公表番号】特表２００８−５０１６３９（Ｐ２００８−５０１６３９Ａ）
【公表日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０８９８４（Ｐ２００７−５０８９８４）
【出願日】平成１７年４月２５日（２００５．４．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５００５７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０３０６７
【国際公開日】平成１７年１１月３日（２００５．１１．３）
【出願人】（５０６３５５３５０）ノベシン リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２５日（２００５．４．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０５００５７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０３０６７
【国際公開日】平成１７年１１月３日（２００５．１１．３）
【出願人】（５０６３５５３５０）ノベシン リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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