トマト抽出物を含有する生活習慣病改善剤
【課題】生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防または改善に有用な医薬品および飲食品の提供。
【解決手段】ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。当該抽出物またはその活性フラクションには、以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種が含まれることが好ましい。化合物（Ｉ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩＩ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＶ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄである。
【解決手段】ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。当該抽出物またはその活性フラクションには、以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種が含まれることが好ましい。化合物（Ｉ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩＩ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＶ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トマトやナス等のナス科植物の抽出物を含有する生活習慣病改善剤に関するものであり、詳細には、ナス科植物由来のＰＰＡＲ活性化能を有する抽出物またはその活性フラクションを有効成分とする生活習慣病の予防または改善用の医薬または飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化により、国民一人あたりの脂肪摂取量が上昇し、糖尿病、脂質異常症（高脂血症等）、高血圧、肥満などの生活習慣病と呼ばれる疾患が急激に増加している。また、メタボリックシンドロームは、代謝症候群、シンドロームＸ、死の四重奏、インスリン抵抗性症候群、内臓脂肪症候群とも呼ばれる複合生活習慣病であり、内臓脂肪型肥満に加えて、高血糖、高血圧、脂質異常のうちいずれか２つ以上を併せもった状態のことを言う。メタボリックシンドロームになると、糖尿病、高血圧症、高脂血症の一歩手前の段階でも、これらが内臓脂肪型肥満をベースに複数重なることによって、動脈硬化を進行させ、心臓病や脳卒中といった動脈硬化性疾患発症の相対的危険度が増すことが、国内外の疫学調査で明らかとなっている。
【０００３】
我が国では、２００８年４月よりメタボリックシンドローム発症予防を目的に４０歳以上の国民を対象として特定健康診断が開始され、国民のメタボリックシンドロームに対する関心が非常に高まっている。現在、メタボリックシンドロームの予防および治療には、糖尿病、高脂血症あるいは高血圧の治療薬が適応されており、疾病状態によっては、複数の薬剤服用を伴っている。
【０００４】
脂質代謝異常やインスリン抵抗性等の病態を改善する薬剤として、チアゾリジン誘導体
（ピオグリタゾン、トログリタゾンなど）やフィブレート製剤（フェノフィブレートやベザフィブレートなど）があり、これらはＰＰＡＲ（Peroxisome Proliferator Activated Receptor；ペルオキシソーム増殖薬活性化受容体）のアゴニストとして作用することが明らかにされている。前者は主に脂肪組織に分布するＰＰＡＲγを、後者は肝臓、腎臓、心臓、消化管に存在するＰＰＡＲαをターゲットとして作用する。
【０００５】
植物は多種多様な代謝産物およびそれらの中間体を含有しており、個々の植物それ自体を創薬における「化合物ライブラリー」の類似体と見なすことができる。特に遺伝子情報が詳細に判明しているトマトやナスなどのナス科植物においては、効率的生産法・先端的育種法の開発へと展開できる可能性が高い。最近、トマト摂取は循環器系糖尿病合併症のリスクを軽減することが報告され抗生活習慣病食品素材として有望であると考えられる。したがって、トマトやナスなどのナス科植物中にＰＰＡＲを活性化させる成分を見出すことができれば、生活習慣病の予防や改善に高い効果を有する医薬や飲食品の開発が期待できる。
【０００６】
トマト抽出物を抗生活習慣病食品素材として使用することに関する研究は従来行われており、例えば特許文献１には、トマト等のカロテノイドを含む野菜の抽出物を有効成分として含有する抗肥満剤が開示されている。また、例えば特許文献２には、血漿トリグリセライド濃度を下げるための薬剤を製造するために、水溶性トマト抽出物またはその活性フラクションを使用することが開示されている。しかし、トマト抽出物にＰＰＡＲ活性化能を有する成分が含有されていることは報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００３−９５９３０号公報
【特許文献２】特表２００８−５３００７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防または改善に有用なナス科植物由来の物質または成分を見出し、これを含有する医薬品および飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
［２］ナス科植物がトマトまたはナスである前記［１］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［３］ナス科植物がトマトである前記［１］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［４］抽出物またはその活性フラクションが脂溶性である前記［１］〜［３］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［５］ＰＰＡＲが、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγである前記［１］〜［４］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［６］抽出物またはその活性フラクションが以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含む前記［１］〜［５］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【化１】
［７］以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【化２】
［８］生活習慣病の予防または改善用である前記［１］〜［７］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［９］メタボリックシンドロームの予防または改善用である前記［１］〜［７］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［１０］生活習慣病が、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満または脂肪肝である前記［８］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［１１］前記［１］〜［１０］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬。
［１２］前記［１］〜［１０］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する飲食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤を提供することができる。当該ＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬および飲食品は、生活習慣病の予防または改善に有用である。また、当該ＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬および飲食品は、メタボリックシンドロームの予防または改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】トマト凍結乾燥粉末をエタノール抽出後、ヘキサン抽出し、さらにシリカゲルオープンカラムを用いた分画により得たＰＰＡＲα活性フラクションをＯＤＳカラムによるＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した結果を示す図である。
【図２】図１の結果から得られたＰＰＡＲα活性フラクションを、異なるＯＤＳカラムによる２回目のＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した結果を示す図である。
【図３】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、その溶出時間の結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよび９−ｏｘｏ−ＯＤＡの混合物の結果、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果、（ｃ）は９−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図４】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、そのフラグメントパターンの結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｅ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図５】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、その吸収波長の結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｅ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図６】トマト（ふりこま）果実の凍結乾燥物、既製のトマトジュースの凍結乾燥物、およびトマトジュースの原料トマト（ＮＤＭ７３６）果実の凍結乾燥物をそれぞれエタノール抽出し、その抽出物をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供した結果を示した図であり、（ａ）はふりこま果実の結果、（ｂ）はＮＤＭ７３６果実の結果、（ｃ）はトマトジュースの結果を示す図である。
【図７】ＲＦ５７、ならびに９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物のＰＰＡＲα活性化能を、ＰＰＡＲαレポーターアッセイを用いて測定した結果を示す図である。
【図８】ＲＦ５７、ならびに９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物のＰＰＡＲγ活性化能を、ＰＰＡＲγレポーターアッセイを用いて測定した結果を示す図である。
【図９】肝臓細胞における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１０】肝臓細胞におけるトリグリセリド（ＴＧ）蓄積に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１１】肝臓細胞における酸素消費に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１２】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、血糖値を測定した結果を示す図である。
【図１３】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、血中トリグリセリド（ＴＧ）を測定した結果を示す図である。
【図１４】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、経口糖負荷試験の負荷後血糖値の推移を示す図である。
【図１５】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、経口糖負荷試験実施後の血中インスリン濃度を測定した結果を示す図である。
【図１６】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、肝臓中のＴＧ蓄積量を測定した結果を示す図である。
【図１７】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現量を測定した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤を提供する。ナス科植物は特に限定されないが、トマト、ナス等のナス属植物が好ましい。より好ましくはトマトまたはナスであり、特に好ましくはトマトである。抽出物はナス科植物の植物体の全部または一部（葉、茎、根、花、果実など）から抽出したものであればよい。トマトの場合、果実を含む植物体からの抽出物が好ましく、熟した果実を含む植物体からの抽出物がより好ましい。
【００１３】
活性化フラクションは、ナス科植物の抽出物から単離されたフラクションであって、ＰＰＡＲ活性化能を有するフラクションを意味する。ナス科植物の抽出物または当該抽出物から単離されたフラクションがＰＰＡＲ活性化能を有することは、公知のＰＰＡＲ活性測定法を用いて確認することができる。公知のＰＰＡＲ活性測定法としては、例えば、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載のＰＰＡＲレポーターアッセイなどが挙げられる。
【００１４】
抽出物またはその活性フラクションは脂溶性であることが好ましい。脂溶性の抽出物は、例えば、ナス科植物の植物体、搾汁液、またはこれらの乾燥物や凍結乾燥物から疎水性の有機溶媒で抽出することにより取得することができる。疎水性の有機溶媒としては、例えば、エタノールなどのアルコール類、ヘキサンなどの炭化水素類、酢酸エチルなどのエステル類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルムなどのアルキルハライド等が挙げられる。
【００１５】
ＰＰＡＲは哺乳類ではα、δおよびγの３種類のアイソフォームが知られている。本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲα、δおよびγのいずれか１種を活性化できるものであればよいが、ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγを活性化できることが好ましく、ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγを活性化できることがより好ましい。ＰＰＡＲαは主に肝臓や骨格筋で脂肪酸の輸送や代謝に関連する遺伝子の発現を制御しており（Willson T. M. et al., J. Med. Chem. 43(4) 527-550 2000）、脂質代謝に深く関与していることから、高脂血症等の脂質異常症のための薬剤の標的タンパクとして注目されている。ＰＰＡＲγは、脂肪細胞の分化を司る調節因子であることが明らかにされている（Cell 79 : 1147-1156, 1994）。したがって、ＰＰＡＲγ活性化物質は、脂肪細胞分化を促進することにより、血液中の糖および遊離脂肪酸を低下させ、筋肉の遊離脂肪酸の低下とインスリン抵抗性を改善することができる。それゆえ、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγを活性化できる成分は、生活習慣病の予防もしくは改善に有用である。
【００１６】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含むことが好ましい。
【化３】
【００１７】
化合物（Ｉ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩＩ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＶ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄである。本発明者は、トマト果実には主として化合物（Ｉ）が存在するが、トマト抽出物の分画操作を行うことにより、主たる化合物が化合物（ＩＩ）に変換されていることを確認し、トマトの加工品であるトマトジュースには化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の全てが存在することを確認している。したがって、詳細は不明であるが、これらの類縁化合物は、トマト抽出物の分画操作や加工操作により相互に変換されるものと考えられる。また、本発明者は、これらの化合物がそれぞれ単独でもＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ活性化能を有していることを確認している。したがって、本発明のＰＰＡＲ活性化剤には、上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分として含有するものも含まれる。
【００１８】
上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）を含むナス科植物の抽出物の活性フラクションは、例えば以下の方法により調製することができる。例えばトマト果実を材料とする場合、トマト果実の凍結乾燥粉末を調製し、これをエタノールなどのアルコール類、ヘキサンなどの炭化水素類、酢酸エチルなどのエステル類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類またはジクロロメタン、クロロホルムなどのアルキルハライドで抽出する。抽出溶媒の量は原料の乾燥粉末に対し通常３〜２０倍（ｗ／ｗ）である。また抽出温度は室温から使用する溶媒の沸騰点までの範囲でいずれでもよい。抽出液をろ過して残渣と分離したのち、濃縮してエキスを調製する。得られたエキスを、シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィーに付し、シリカゲルの通常１０〜１００倍（ｗ／ｗ）量の、例えばヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（ヘキサン１００％−酢酸エチル１００％のグラジエント）で溶離する溶離液中のＰＰＡＲ活性を測定し、ＰＰＡＲ活性を有する溶離液を集め濃縮する。さらに、濃縮残留物を、逆相系シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ等）に付し、逆相系シリカゲルの通常１０〜２００倍（ｗ／ｗ）量の、例えばアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエントで溶離して、得られたフラクションのＰＰＡＲ活性を測定する。ＰＰＡＲ活性を有する溶離液を集めて濃縮し、逆相系シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィーを繰り返すことにより、高ＰＰＡＲ活性を有するフラクションを調製することができる。
【００１９】
溶離液のＰＰＡＲ活性を測定する方法は特に限定されず、公知のＰＰＡＲ活性測定法を用いることができる。例えば、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載のＰＰＡＲレポーターアッセイを好適に用いることができる。
【００２０】
また、上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）は、例えば、Ｋｕｋｌｅｖら（D. Kuklev et al., Chemistry and Physics of Lipids 85 (1997) 125-134）等に記載の方法およびこれに準じた方法にしたがって合成することができる。
【００２１】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの薬理試験において、脂肪酸代謝活性化作用、血糖値上昇抑制（抗糖尿病）作用、高脂血症抑制作用、脂肪肝抑制作用、耐糖能改善作用、血中インスリン上昇抑制作用を有することが確認されていることから（実施例４、５参照）、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝等の生活習慣病を予防または改善するために好適に用いることができる。
【００２２】
また、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、上記の薬理作用を有することから、メタボリックシンドロームを予防または改善するために好適に用いることができる。わが国では、以下の（１）に加えて（２）〜（４）のうち２つ以上が当てはまるとメタボリックシンドロームと診断される。
（１）腹囲（へそ周り）が、男性の場合は８５ｃｍ以上、女性の場合は９０ｃｍ以上
（２）中性脂肪が１５０ｍｇ/ｄＬ以上、ＨＤＬコレステロールが４０ｍｇ/ｄＬ未満、のいずれか、または両方
（３）最高（収縮期）血圧が１３０ｍｍＨｇ以上、最低（拡張期）血圧が８５ｍｍＨｇ以上、のいずれか、または両方
（４）空腹時血糖値が１１０ｍｇ/ｄＬ以上
本発明のＰＰＡＲ活性化剤をメタボリックシンドロームの診断基準を満たすヒトに適用すれば、少なくとも高血糖および脂質異常が改善されるので、治療対象を外れることが期待できる。
【００２３】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性化作用を有する薬剤の適用対象とされる疾患、例えば、糖尿病（１型糖尿病、２型糖尿病等）、脂質異常症（高トリグリセライド血症、高ＬＤＬ血症、低ＨＤＬ血症等）、糖尿病性合併症（神経障害、腎症、網膜症、白内障等）、耐糖能不全（ＩＧＴ）、肥満、骨粗鬆症、悪液質、脂肪肝、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、妊娠糖尿病、腎臓疾患、筋ジストロフィー、心筋梗塞、狭心症、脳血管障害、インスリン抵抗性症候群、シンドロームＸ、高インスリン血症、高インスリン血症における知覚障害、腫瘍（白血病、乳癌、前立腺癌、皮膚癌等）、過敏性腸症候群、急性または慢性下痢、内臓肥満症候群などの疾患を予防または改善するために、好適に用いることができる。
【００２４】
本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有する生活習慣病の予防または改善用医薬を提供する。また、本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用医薬を提供する。
【００２５】
本発明の医薬は、経口または非経口のいずれかの経路で哺乳動物に投与することができる。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。非経口剤としては、注射剤（例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤）、点滴剤、外用剤（例えば、経鼻投与製剤、経皮製剤、軟膏剤）、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）などが挙げられる。これらの製剤は、当該分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられ、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等を担体として使用できる。
【００２６】
経口用の固形剤（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等）は、有効成分を賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸等）等と混合し、常法に従って製剤化することができる。必要に応じて、コーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。
【００２７】
経口用の液剤（水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等）は、有効成分を一般的に用いられる希釈剤（精製水、エタノールまたはそれらの混液等）に溶解、懸濁または乳化して製剤化される。さらにこの液剤は、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、保存剤、緩衝剤等を含有していてもよい。
【００２８】
注射剤は、溶液、懸濁液、乳濁液、および用時溶剤に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤を包含する。注射剤は、有効成分を溶剤に溶解、懸濁または乳化して製剤化される。溶剤として、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノールのようなアルコール類等およびそれらの組み合わせが用いられる。さらにこの注射剤は、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリソルベート８０（登録商標）等）、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤等を含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか無菌操作法によって製造される。また無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の注射用蒸留水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。
【００２９】
本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有する生活習慣病の予防または改善用飲食品を提供する。また、本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用飲食品を提供する。「飲食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、病者用食品が含まれる。
【００３０】
本発明に好適な飲食品は特に限定されない。具体例には、例えば、いわゆる栄養補助食品（サプリメント）としての錠剤、顆粒剤、散剤、ドリンク剤等を挙げることができる。これ以外には、例えば茶飲料、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、そば、うどん、中華麺、即席麺等の麺類、飴、キャンディー、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子およびパン類、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品、加工乳、発酵乳等の乳製品、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品、ソース、たれ等の調味料、カレー、シチュー、丼、お粥、雑炊等のレトルトパウチ食品、アイスクリーム、シャーベット、かき氷等の冷菓などを挙げることができる。
【００３１】
本発明の医薬および飲食品は、人類が長年摂取してきたトマトやナスの抽出物を有効成分とするものであるから、毒性が低く、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等）に対し安全に用いられる。また、ＰＰＡＲαアゴニストはげっ歯類に対して肝臓の重量を増加（ペルオキシソームを増加）させる副作用があるが、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、マウスの肝臓を肥大させなかったことから（実施例５参照）、本発明の医薬および飲食品は高い安全性を有するものと考えられる。
【００３２】
本発明の医薬および飲食品の投与量または摂取量は、患者または摂取者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定できる。例えば、本発明の医薬を経口投与する場合、成人１人当たり０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で、また、非経口的に投与する場合は０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で一日１〜３回に分けて投与することができる。また、食品として摂取する場合には、成人１人１日当たり１００〜６０００ｍｇの範囲、好ましくは２００〜３０００ｍｇの範囲の摂取量となるように配合することができる。
【００３３】
さらに、本発明は、生活習慣病の予防または改善用医薬の製造のためのナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤の使用を提供する。また、メタボリックシンドロームの予防または改善用医薬の製造のためのナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤の使用を提供する。
また、本発明は、ＰＰＡＲ活性化能を有するナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを哺乳動物に投与する生活習慣病の予防または改善方法を提供する。また、ＰＰＡＲ活性化能を有するナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを哺乳動物に投与するメタボリックシンドロームの予防または改善方法を提供する。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３５】
〔実施例１：トマト抽出物のＰＰＡＲα活性フラクションの同定〕
（１−１）トマト抽出物の調製
トマト（加工用品種「ふりこま」）の果実破砕物を凍結乾燥し、トマト凍結乾燥粉末を得た。これにエタノールを添加して２４時間振とうし、抽出液を濃縮乾固した。さらに、ヘキサン抽出を行い、抽出液を濃縮乾固した後、シリカゲルオープンカラムに担持させて、ヘキサン−酢酸エチルの混合溶媒で溶出、分画を行った。続いて、ＯＤＳカラムによるＨＰＬＣ分画を２回行い、１分ごとにフラクションを得た。
シリカゲルオープンカラムにおける溶出には、ヘキサン１００％、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：３、酢酸エチル１００％をこの順に各ステップ５００ｍＬで溶出し、回収した各溶出液のＰＰＡＲα活性を測定した。
１回目のＨＰＬＣには、逆相５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ ＯＤＳカラム（カラムＡ、ナカライテスク）を用いた。移動相にはアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエント（０−６０分）を用い、流速は１ｍＬ／分とした。１分ごとに１ｍＬずつフラクションを回収し、各フラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。
２回目のＨＰＬＣには、逆相ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ−１００Ｖカラム（カラムＢ、東ソー）を用いた。移動相にはアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエント（０−６０分）を用い、流速は０．５ｍＬ／分とした。１分ごとに０．５ｍＬずつフラクションを回収し、各フラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。
【００３６】
（１−２）ＰＰＡＲα活性測定方法
ＰＰＡＲα活性測定には、ＰＰＡＲαレポーターアッセイを用いた。ＰＰＡＲαレポーターアッセイは、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載の方法に準じて行った。すなわち、細胞には、ｐ４ｘＵＡＳｇ−ｔｋ−ｌｕｃ（レポータープラスミド）、ｐＭ−ｈＰＰＡＲα（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲαのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）、ｐＣＭＸ−ＣＢＰ（ＣＢＰ（cAMP-response element-binding protein(CREB)-binding protein）用発現ベクター）およびｐＲＬ−ＣＭＶ（トランスフェクション効率を標準化するための内部のコントロール）をトランスフェクションしたＣＶ−１細胞（アフリカミドリザル腎細胞由来細胞株）を使用した。培地には、１０％牛胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン（10mg/mL）を含有するＤＭＥＭ培地を使用した。
【００３７】
ＣＶ−１細胞にリポフェクタミン（Invitrogen）を用いて上記ベクターをトランスフェクションし、２４時間培養した。続いて、ＰＰＡＲα活性測定用サンプルを含む培地に交換し、さらに２４時間培養した。ルシフェラーゼ活性の測定には、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｒ） Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Promega）およびルミノメーター（MicroLumat Plus、ベルトールジャパン）を使用し、試薬および装置の取扱説明書に従って、ルシフェラーゼ活性を測定した。なお、陽性対照として、既知のＰＰＡＲαアゴニストであるＧＷ−７６４７（2-[4-[2-[1-(4-シクロヘキシルブチル)-3-シクロヘキシルウレイド]エチル]フェニルチオ]イソ酪酸）を使用した。
【００３８】
（１−３）結果
シリカゲルオープンカラムを用いた分画により、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１で溶出したフラクションにＰＰＡＲα活性が認められ、これ以外の分画にはＰＰＡＲα活性が認められなかった。
ＰＰＡＲα活性が認められたヘキサン：酢酸エチル＝３：１で溶出したフラクションを１回目のＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。４０分〜４５分のフラクションのＰＰＡＲα活性測定結果を図１に示した。図１から明らかなように、４２〜４３分のフラクション（Ｆ４２、Ｆ４３）に強いＰＰＡＲα活性が認められた。
１回目のＨＰＬＣにおいて、ＰＰＡＲα活性が認められたフラクションを集めて２回目のＨＰＬＣに供した。２回目のＨＰＬＣで得られたフラクションの５４分〜５９分のＰＰＡＲα活性測定結果を図２に示した。図２から明らかなように、５７分のフラクション（ＲＦ５７）に強いＰＰＡＲα活性が認められた。
【００３９】
〔実施例２：トマト抽出物のＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）中に含有される機能性成分の同定〕
ＲＦ５７のＬＣ／ＭＳ解析を行い、ＲＦ５７に含まれるＰＰＡＲα活性化成分は、組成式Ｃ１８Ｈ３０Ｏ３の化合物であることが明らかとなった。さらに、ＮＭＲを用いてこのＰＰＡＲα活性化成分の構造解析を行った結果、この成分はＣ１８のケト不飽和脂肪酸であり、最大吸収波長（２７６ｎｍで）からケトン基とジエンは共役していることが推察された。この結果から、ＰＰＡＲα活性化成分の候補物質として、１３−ｏｘｏ−９，１１−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ（１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ）および９−ｏｘｏ−１０，１２−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ（９−ｏｘｏ−ＯＤＡ）が考えられた。
【００４０】
候補物質をさらに絞り込むために、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析を行って平面構造を推定し、ＰＰＡＲα活性化成分のケトン基とジエンの位置を確認した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析による溶出時間の結果を図３（ａ）〜（ｄ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよび９−ｏｘｏ−ＯＤＡの混合物の結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）はＲＦ５７の結果である。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析によるフラグメントパターンの結果を図４（ａ）〜（ｅ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｅ）はＲＦ５７の結果である。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析による吸収波長の結果を図５（ａ）〜（ｅ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｅ）はＲＦ５７の結果である。
図３、図４および図５に示した結果から、ＲＦ５７に含まれるＰＰＡＲα活性化成分は、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡであることが明らかとなった。
【００４１】
〔実施例３：トマト果実、トマトジュースに含まれるＰＰＡＲα活性化成分の同定〕
分画操作を施していないトマト果実や既製のトマトジュースにも、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡが含まれるか否かを確認した。すなわち、トマト（ふりこま）果実の凍結乾燥物、既製のトマトジュースの凍結乾燥物、およびトマトジュースの原料トマト（ＮＤＭ７３６）果実の凍結乾燥物をそれぞれエタノール抽出し、その抽出物をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供した。
結果を図６（ａ）〜（ｃ）に示した。（ａ）はふりこま果実の結果であり、（ｂ）はＮＤＭ７３６果実の結果であり、（ｃ）はトマトジュースの結果である。興味深いことに、トマト果実に存在するＰＰＡＲα活性化成分は、ＲＦ５７から同定された９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡではなく、その幾何異性体である９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡが主体であることが明らかとなった。また、トマトジュース中には、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡ以外に３種類の類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）が同定された。これらの結果から、分画操作や加工操作により、類縁体化合物が生成するものと推測された。
【００４２】
トマト果実およびトマトジュースから同定された９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡ以外の類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）をＰＰＡＲαレポーターアッセイに供し、ＰＰＡＲα活性化能を有することを確認した。
結果を図７に示した。図７から明らかなように、これらの類縁体化合物も、ＲＦ５７と同様に強いＰＰＡＲα活性化能を有していた。
【００４３】
〔実施例４：ＰＰＡＲγ活性化能の確認〕
９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡを含むＲＦ５７、および９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）について、ＰＰＡＲγ活性化能を有するか否かを確認するために、ＰＰＡＲγレポーターアッセイを行った。ＰＰＡＲγレポーターアッセイは、上記実施例１の（１−２）に記載のＰＰＡＲαレポーターアッセイの方法において、ｐＭ−ｈＰＰＡＲα（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲαのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）をｐＭ−ｈＰＰＡＲγ（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲγのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）に変更し、陽性対照を、既知のＰＰＡＲγアゴニストであるＴｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ（(+)-5-[4-[(6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-イル)メトキシ]ベンジル]-2,4-チアゾリジンジオン）に変更して実施した。
結果を図８に示した。図８から明らかなように、ＲＦ５７および９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物の類縁体化合物は、いずれもＰＰＡＲγ活性化能を有していることが確認された。
【００４４】
〔実施例５：ＲＦ５７の機能解析〕
（５−１）肝臓細胞における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現に関する評価
遺伝子導入によりＰＰＡＲαを高発現させたＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓由来）を１２ｗｅｌｌプレートに４×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２４時間インキュベートした。サンプル（ＲＦ５７またはＧＷ−７６４７）を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。細胞を回収し、β酸化関連遺伝子ＣＰＴ１Ａ（carnitine palmitoyltransferase 1A）のｍＲＮＡ発現量を定量的ＲＴ−ＰＣＲ法で測定した。
結果を図９に示した。図９から明らかなように、培地にＲＦ５７を添加することにより、ＣＰＴ１ＡのｍＲＮＡ発現量がコントロールに対して有意に増加した。なお、統計処理にはｕｎｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔを用いた。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４５】
（５−２）肝臓細胞におけるトリグリセリド（ＴＧ）蓄積に関する評価
遺伝子導入によりＰＰＡＲαを高発現させたＨｅｐＧ２細胞を１２ｗｅｌｌプレートに４×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２４時間インキュベートした。オレイン酸を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。ＲＦ５７を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。細胞を回収し、細胞内のＴＧ蓄積量をＴＧキット（Wako）を用いて測定した。
結果を図１０に示した。図１０から明らかなように、培地にＲＦ５７を添加することにより、細胞内のＴＧ蓄積量がコントロール（ＯＡ＋）に対して有意に減少した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４６】
（５−３）肝臓細胞における酸素消費に関する評価
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、♂）から肝細胞を門脈潅流法により分離し、初代培養肝細胞を調製した。得られた初代培養肝細胞をプレート（ＸＦ２４専用プレート）に５×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２時間インキュベートした。ＲＦ５７を添加した培地（濃度１０μＭまたは２０μＭ）に交換し、２４時間インキュベートした。酸素消費量測定装置ＸＦ２４（Seahorse Bioscience社製）にて、肝臓細胞の酸素消費量を測定した。
結果を図１１に示した。図１１から明らかなように、培地にＲＦ５７を２０μＭの濃度で添加することにより、肝細胞における酸素消費量（ＯＣＲ）が有意に増加した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４７】
以上の機能解析結果から、ＲＦ５７は、肝細胞に対してＰＰＡＲα活性化による脂肪燃焼作用を介した脂肪蓄積抑制作用を有するものと考えられた。
【００４８】
〔実施例６：肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）による評価〕
（６−１）動物および飼育
ＫＫＡｙ／ＴａＪｃｌ（♂、日本クレア）を４週齢で購入し、４日間一般飼料を与えて予備飼育した。予備飼育終了後、下記の(1)〜(4)の４群に群分けして高脂肪飼料に切り替えて、試験を開始した。動物は個別に飼育し、高脂肪飼料を４週間給餌した。被験物質には、混餌飼料を大量調製することが容易であることから、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡを使用した。また、陽性コントロールには、公知の高脂血症薬（ＰＰＡＲアゴニスト）であるベザフィブレート（Ｂｅｚａ）を使用した。合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよびＢｅｚａは、下記の濃度になるように飼料に添加し、混餌投与した。
(1) コントロール群（ｎ＝７）
(2) ０．０５％Ｂｅｚａ摂食群（ｎ＝６）
(3) ０．０２％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群（ｎ＝６）
(4) ０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群（ｎ＝８）
【００４９】
（６−２）血糖値および血中トリグリセリド（ＴＧ）の測定
実験開始前（０日目）、７日目、１４日目および２１日目に採血して、血糖値（血漿中グルコース濃度）を測定した。また、２１日目には血中ＴＧ濃度を測定した。
血糖値血糖値の測定結果を図１２に示した。図１２から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群はいずれの濃度においても、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食による血糖値の上昇を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
血中ＴＧ濃度の測定結果を図１３に示した。図１３から明らかなように、０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食による高脂血症の発症を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００５０】
（６−３）経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ、Oral glucose tolerance test）
試験開始２５日目に経口糖負荷試験を実施した。具体的には、マウスを１７時間絶食後、尾静脈から採血を行い（これを０分とする）、１．５ｍｇ／ｇ体重となるようにＤ−（＋）−グルコースを経口投与した。以降、１５、３０、６０、９０および１２０分後にそれぞれ尾静脈から採血を行い血糖値を測定した。
糖負荷後の血糖値の推移を図１４に示した。図１４から明らかなように、０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、糖負荷後の血糖値の上昇を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を、＊＊はｐ＜０．０１を表す。
血中インスリン濃度の測定結果を図１５に示した。図１５から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群はいずれの濃度においても、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食によるインスリン値の上昇（高インスリン血漿と呼ばれ、糖代謝機能が悪化した状態）を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を、＊＊はｐ＜０．０１を表す。
【００５１】
（６−４）肝臓重量、肝臓脂肪蓄積量および肝臓における脂肪酸β酸化関連酵素遺伝子発現量の評価
試験開始２８日目にマウスを安楽死させ肝臓を摘出した。得られた肝臓の重量を測定した後、肝臓中のＴＧはイソプロパノールでホモジナイズすることにより抽出し、アセチルアセトンを用いた発色法により定量した。また、肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子ｍＲＮＡは、キアゾール（QUIAGEN）を用いて抽出し、Ｒｎｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（QUIAGEN）により精製した。ｍＲＮＡ発現量は定量的ＲＴ−ＰＣＲ法で測定した。
肝臓中のＴＧ蓄積量を測定した結果を図１６に示した。図１６から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群では、肝臓中のＴＧ蓄積量が用量依存的に減少した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現量を測定した結果を図１７に示した。図１７から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群では、肝臓中の脂肪酸β酸化関連遺伝子ＣＰＴ１ＡのｍＲＮＡ発現量が、用量依存的に増加した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
肝臓重量を測定した結果を表１に示した。
【００５２】
【表１】
【００５３】
表１から明らかなように、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群の肝臓重量は、コントロール群と比較して有意に増加していたが、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、いずれの濃度でも肝臓重量を増加させなかった。一般に、ＰＰＡＲαアゴニストは、マウスやラット等のげっ歯類に対して肝臓の重量を増加（ペルオキシソームを増加）させる副作用があることが知られている。この結果から、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、肝臓肥大の副作用を発症させない点で安全性が高く、非常に有用であると考えられる。
【００５４】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トマトやナス等のナス科植物の抽出物を含有する生活習慣病改善剤に関するものであり、詳細には、ナス科植物由来のＰＰＡＲ活性化能を有する抽出物またはその活性フラクションを有効成分とする生活習慣病の予防または改善用の医薬または飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化により、国民一人あたりの脂肪摂取量が上昇し、糖尿病、脂質異常症（高脂血症等）、高血圧、肥満などの生活習慣病と呼ばれる疾患が急激に増加している。また、メタボリックシンドロームは、代謝症候群、シンドロームＸ、死の四重奏、インスリン抵抗性症候群、内臓脂肪症候群とも呼ばれる複合生活習慣病であり、内臓脂肪型肥満に加えて、高血糖、高血圧、脂質異常のうちいずれか２つ以上を併せもった状態のことを言う。メタボリックシンドロームになると、糖尿病、高血圧症、高脂血症の一歩手前の段階でも、これらが内臓脂肪型肥満をベースに複数重なることによって、動脈硬化を進行させ、心臓病や脳卒中といった動脈硬化性疾患発症の相対的危険度が増すことが、国内外の疫学調査で明らかとなっている。
【０００３】
我が国では、２００８年４月よりメタボリックシンドローム発症予防を目的に４０歳以上の国民を対象として特定健康診断が開始され、国民のメタボリックシンドロームに対する関心が非常に高まっている。現在、メタボリックシンドロームの予防および治療には、糖尿病、高脂血症あるいは高血圧の治療薬が適応されており、疾病状態によっては、複数の薬剤服用を伴っている。
【０００４】
脂質代謝異常やインスリン抵抗性等の病態を改善する薬剤として、チアゾリジン誘導体
（ピオグリタゾン、トログリタゾンなど）やフィブレート製剤（フェノフィブレートやベザフィブレートなど）があり、これらはＰＰＡＲ（Peroxisome Proliferator Activated Receptor；ペルオキシソーム増殖薬活性化受容体）のアゴニストとして作用することが明らかにされている。前者は主に脂肪組織に分布するＰＰＡＲγを、後者は肝臓、腎臓、心臓、消化管に存在するＰＰＡＲαをターゲットとして作用する。
【０００５】
植物は多種多様な代謝産物およびそれらの中間体を含有しており、個々の植物それ自体を創薬における「化合物ライブラリー」の類似体と見なすことができる。特に遺伝子情報が詳細に判明しているトマトやナスなどのナス科植物においては、効率的生産法・先端的育種法の開発へと展開できる可能性が高い。最近、トマト摂取は循環器系糖尿病合併症のリスクを軽減することが報告され抗生活習慣病食品素材として有望であると考えられる。したがって、トマトやナスなどのナス科植物中にＰＰＡＲを活性化させる成分を見出すことができれば、生活習慣病の予防や改善に高い効果を有する医薬や飲食品の開発が期待できる。
【０００６】
トマト抽出物を抗生活習慣病食品素材として使用することに関する研究は従来行われており、例えば特許文献１には、トマト等のカロテノイドを含む野菜の抽出物を有効成分として含有する抗肥満剤が開示されている。また、例えば特許文献２には、血漿トリグリセライド濃度を下げるための薬剤を製造するために、水溶性トマト抽出物またはその活性フラクションを使用することが開示されている。しかし、トマト抽出物にＰＰＡＲ活性化能を有する成分が含有されていることは報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００３−９５９３０号公報
【特許文献２】特表２００８−５３００７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防または改善に有用なナス科植物由来の物質または成分を見出し、これを含有する医薬品および飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
［２］ナス科植物がトマトまたはナスである前記［１］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［３］ナス科植物がトマトである前記［１］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［４］抽出物またはその活性フラクションが脂溶性である前記［１］〜［３］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［５］ＰＰＡＲが、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγである前記［１］〜［４］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［６］抽出物またはその活性フラクションが以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含む前記［１］〜［５］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【化１】
［７］以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【化２】
［８］生活習慣病の予防または改善用である前記［１］〜［７］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［９］メタボリックシンドロームの予防または改善用である前記［１］〜［７］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［１０］生活習慣病が、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満または脂肪肝である前記［８］に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
［１１］前記［１］〜［１０］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬。
［１２］前記［１］〜［１０］のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する飲食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤を提供することができる。当該ＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬および飲食品は、生活習慣病の予防または改善に有用である。また、当該ＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬および飲食品は、メタボリックシンドロームの予防または改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】トマト凍結乾燥粉末をエタノール抽出後、ヘキサン抽出し、さらにシリカゲルオープンカラムを用いた分画により得たＰＰＡＲα活性フラクションをＯＤＳカラムによるＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した結果を示す図である。
【図２】図１の結果から得られたＰＰＡＲα活性フラクションを、異なるＯＤＳカラムによる２回目のＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した結果を示す図である。
【図３】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、その溶出時間の結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよび９−ｏｘｏ−ＯＤＡの混合物の結果、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果、（ｃ）は９−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図４】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、そのフラグメントパターンの結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｅ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図５】ＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供し、その吸収波長の結果を示した図であり、（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果、（ｅ）はＲＦ５７の結果を示す図である。
【図６】トマト（ふりこま）果実の凍結乾燥物、既製のトマトジュースの凍結乾燥物、およびトマトジュースの原料トマト（ＮＤＭ７３６）果実の凍結乾燥物をそれぞれエタノール抽出し、その抽出物をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供した結果を示した図であり、（ａ）はふりこま果実の結果、（ｂ）はＮＤＭ７３６果実の結果、（ｃ）はトマトジュースの結果を示す図である。
【図７】ＲＦ５７、ならびに９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物のＰＰＡＲα活性化能を、ＰＰＡＲαレポーターアッセイを用いて測定した結果を示す図である。
【図８】ＲＦ５７、ならびに９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物のＰＰＡＲγ活性化能を、ＰＰＡＲγレポーターアッセイを用いて測定した結果を示す図である。
【図９】肝臓細胞における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１０】肝臓細胞におけるトリグリセリド（ＴＧ）蓄積に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１１】肝臓細胞における酸素消費に関するＲＦ５７の効果を評価した結果を示す図である。
【図１２】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、血糖値を測定した結果を示す図である。
【図１３】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、血中トリグリセリド（ＴＧ）を測定した結果を示す図である。
【図１４】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、経口糖負荷試験の負荷後血糖値の推移を示す図である。
【図１５】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、経口糖負荷試験実施後の血中インスリン濃度を測定した結果を示す図である。
【図１６】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、肝臓中のＴＧ蓄積量を測定した結果を示す図である。
【図１７】肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）を用いた試験において、肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現量を測定した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤を提供する。ナス科植物は特に限定されないが、トマト、ナス等のナス属植物が好ましい。より好ましくはトマトまたはナスであり、特に好ましくはトマトである。抽出物はナス科植物の植物体の全部または一部（葉、茎、根、花、果実など）から抽出したものであればよい。トマトの場合、果実を含む植物体からの抽出物が好ましく、熟した果実を含む植物体からの抽出物がより好ましい。
【００１３】
活性化フラクションは、ナス科植物の抽出物から単離されたフラクションであって、ＰＰＡＲ活性化能を有するフラクションを意味する。ナス科植物の抽出物または当該抽出物から単離されたフラクションがＰＰＡＲ活性化能を有することは、公知のＰＰＡＲ活性測定法を用いて確認することができる。公知のＰＰＡＲ活性測定法としては、例えば、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載のＰＰＡＲレポーターアッセイなどが挙げられる。
【００１４】
抽出物またはその活性フラクションは脂溶性であることが好ましい。脂溶性の抽出物は、例えば、ナス科植物の植物体、搾汁液、またはこれらの乾燥物や凍結乾燥物から疎水性の有機溶媒で抽出することにより取得することができる。疎水性の有機溶媒としては、例えば、エタノールなどのアルコール類、ヘキサンなどの炭化水素類、酢酸エチルなどのエステル類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルムなどのアルキルハライド等が挙げられる。
【００１５】
ＰＰＡＲは哺乳類ではα、δおよびγの３種類のアイソフォームが知られている。本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲα、δおよびγのいずれか１種を活性化できるものであればよいが、ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγを活性化できることが好ましく、ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγを活性化できることがより好ましい。ＰＰＡＲαは主に肝臓や骨格筋で脂肪酸の輸送や代謝に関連する遺伝子の発現を制御しており（Willson T. M. et al., J. Med. Chem. 43(4) 527-550 2000）、脂質代謝に深く関与していることから、高脂血症等の脂質異常症のための薬剤の標的タンパクとして注目されている。ＰＰＡＲγは、脂肪細胞の分化を司る調節因子であることが明らかにされている（Cell 79 : 1147-1156, 1994）。したがって、ＰＰＡＲγ活性化物質は、脂肪細胞分化を促進することにより、血液中の糖および遊離脂肪酸を低下させ、筋肉の遊離脂肪酸の低下とインスリン抵抗性を改善することができる。それゆえ、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγを活性化できる成分は、生活習慣病の予防もしくは改善に有用である。
【００１６】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含むことが好ましい。
【化３】
【００１７】
化合物（Ｉ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＩＩ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、化合物（ＩＶ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄである。本発明者は、トマト果実には主として化合物（Ｉ）が存在するが、トマト抽出物の分画操作を行うことにより、主たる化合物が化合物（ＩＩ）に変換されていることを確認し、トマトの加工品であるトマトジュースには化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の全てが存在することを確認している。したがって、詳細は不明であるが、これらの類縁化合物は、トマト抽出物の分画操作や加工操作により相互に変換されるものと考えられる。また、本発明者は、これらの化合物がそれぞれ単独でもＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ活性化能を有していることを確認している。したがって、本発明のＰＰＡＲ活性化剤には、上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分として含有するものも含まれる。
【００１８】
上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）を含むナス科植物の抽出物の活性フラクションは、例えば以下の方法により調製することができる。例えばトマト果実を材料とする場合、トマト果実の凍結乾燥粉末を調製し、これをエタノールなどのアルコール類、ヘキサンなどの炭化水素類、酢酸エチルなどのエステル類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類またはジクロロメタン、クロロホルムなどのアルキルハライドで抽出する。抽出溶媒の量は原料の乾燥粉末に対し通常３〜２０倍（ｗ／ｗ）である。また抽出温度は室温から使用する溶媒の沸騰点までの範囲でいずれでもよい。抽出液をろ過して残渣と分離したのち、濃縮してエキスを調製する。得られたエキスを、シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィーに付し、シリカゲルの通常１０〜１００倍（ｗ／ｗ）量の、例えばヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（ヘキサン１００％−酢酸エチル１００％のグラジエント）で溶離する溶離液中のＰＰＡＲ活性を測定し、ＰＰＡＲ活性を有する溶離液を集め濃縮する。さらに、濃縮残留物を、逆相系シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ等）に付し、逆相系シリカゲルの通常１０〜２００倍（ｗ／ｗ）量の、例えばアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエントで溶離して、得られたフラクションのＰＰＡＲ活性を測定する。ＰＰＡＲ活性を有する溶離液を集めて濃縮し、逆相系シリカゲルを固定相とするカラムクロマトグラフィーを繰り返すことにより、高ＰＰＡＲ活性を有するフラクションを調製することができる。
【００１９】
溶離液のＰＰＡＲ活性を測定する方法は特に限定されず、公知のＰＰＡＲ活性測定法を用いることができる。例えば、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載のＰＰＡＲレポーターアッセイを好適に用いることができる。
【００２０】
また、上記化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）は、例えば、Ｋｕｋｌｅｖら（D. Kuklev et al., Chemistry and Physics of Lipids 85 (1997) 125-134）等に記載の方法およびこれに準じた方法にしたがって合成することができる。
【００２１】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの薬理試験において、脂肪酸代謝活性化作用、血糖値上昇抑制（抗糖尿病）作用、高脂血症抑制作用、脂肪肝抑制作用、耐糖能改善作用、血中インスリン上昇抑制作用を有することが確認されていることから（実施例４、５参照）、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝等の生活習慣病を予防または改善するために好適に用いることができる。
【００２２】
また、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、上記の薬理作用を有することから、メタボリックシンドロームを予防または改善するために好適に用いることができる。わが国では、以下の（１）に加えて（２）〜（４）のうち２つ以上が当てはまるとメタボリックシンドロームと診断される。
（１）腹囲（へそ周り）が、男性の場合は８５ｃｍ以上、女性の場合は９０ｃｍ以上
（２）中性脂肪が１５０ｍｇ/ｄＬ以上、ＨＤＬコレステロールが４０ｍｇ/ｄＬ未満、のいずれか、または両方
（３）最高（収縮期）血圧が１３０ｍｍＨｇ以上、最低（拡張期）血圧が８５ｍｍＨｇ以上、のいずれか、または両方
（４）空腹時血糖値が１１０ｍｇ/ｄＬ以上
本発明のＰＰＡＲ活性化剤をメタボリックシンドロームの診断基準を満たすヒトに適用すれば、少なくとも高血糖および脂質異常が改善されるので、治療対象を外れることが期待できる。
【００２３】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性化作用を有する薬剤の適用対象とされる疾患、例えば、糖尿病（１型糖尿病、２型糖尿病等）、脂質異常症（高トリグリセライド血症、高ＬＤＬ血症、低ＨＤＬ血症等）、糖尿病性合併症（神経障害、腎症、網膜症、白内障等）、耐糖能不全（ＩＧＴ）、肥満、骨粗鬆症、悪液質、脂肪肝、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、妊娠糖尿病、腎臓疾患、筋ジストロフィー、心筋梗塞、狭心症、脳血管障害、インスリン抵抗性症候群、シンドロームＸ、高インスリン血症、高インスリン血症における知覚障害、腫瘍（白血病、乳癌、前立腺癌、皮膚癌等）、過敏性腸症候群、急性または慢性下痢、内臓肥満症候群などの疾患を予防または改善するために、好適に用いることができる。
【００２４】
本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有する生活習慣病の予防または改善用医薬を提供する。また、本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用医薬を提供する。
【００２５】
本発明の医薬は、経口または非経口のいずれかの経路で哺乳動物に投与することができる。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。非経口剤としては、注射剤（例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤）、点滴剤、外用剤（例えば、経鼻投与製剤、経皮製剤、軟膏剤）、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）などが挙げられる。これらの製剤は、当該分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられ、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等を担体として使用できる。
【００２６】
経口用の固形剤（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等）は、有効成分を賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸等）等と混合し、常法に従って製剤化することができる。必要に応じて、コーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。
【００２７】
経口用の液剤（水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等）は、有効成分を一般的に用いられる希釈剤（精製水、エタノールまたはそれらの混液等）に溶解、懸濁または乳化して製剤化される。さらにこの液剤は、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、保存剤、緩衝剤等を含有していてもよい。
【００２８】
注射剤は、溶液、懸濁液、乳濁液、および用時溶剤に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤を包含する。注射剤は、有効成分を溶剤に溶解、懸濁または乳化して製剤化される。溶剤として、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノールのようなアルコール類等およびそれらの組み合わせが用いられる。さらにこの注射剤は、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリソルベート８０（登録商標）等）、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤等を含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか無菌操作法によって製造される。また無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の注射用蒸留水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。
【００２９】
本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有する生活習慣病の予防または改善用飲食品を提供する。また、本発明は、上記本発明のＰＰＡＲ活性化剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用飲食品を提供する。「飲食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、病者用食品が含まれる。
【００３０】
本発明に好適な飲食品は特に限定されない。具体例には、例えば、いわゆる栄養補助食品（サプリメント）としての錠剤、顆粒剤、散剤、ドリンク剤等を挙げることができる。これ以外には、例えば茶飲料、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、そば、うどん、中華麺、即席麺等の麺類、飴、キャンディー、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子およびパン類、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品、加工乳、発酵乳等の乳製品、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品、ソース、たれ等の調味料、カレー、シチュー、丼、お粥、雑炊等のレトルトパウチ食品、アイスクリーム、シャーベット、かき氷等の冷菓などを挙げることができる。
【００３１】
本発明の医薬および飲食品は、人類が長年摂取してきたトマトやナスの抽出物を有効成分とするものであるから、毒性が低く、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等）に対し安全に用いられる。また、ＰＰＡＲαアゴニストはげっ歯類に対して肝臓の重量を増加（ペルオキシソームを増加）させる副作用があるが、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、マウスの肝臓を肥大させなかったことから（実施例５参照）、本発明の医薬および飲食品は高い安全性を有するものと考えられる。
【００３２】
本発明の医薬および飲食品の投与量または摂取量は、患者または摂取者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定できる。例えば、本発明の医薬を経口投与する場合、成人１人当たり０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で、また、非経口的に投与する場合は０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で一日１〜３回に分けて投与することができる。また、食品として摂取する場合には、成人１人１日当たり１００〜６０００ｍｇの範囲、好ましくは２００〜３０００ｍｇの範囲の摂取量となるように配合することができる。
【００３３】
さらに、本発明は、生活習慣病の予防または改善用医薬の製造のためのナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤の使用を提供する。また、メタボリックシンドロームの予防または改善用医薬の製造のためのナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤の使用を提供する。
また、本発明は、ＰＰＡＲ活性化能を有するナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを哺乳動物に投与する生活習慣病の予防または改善方法を提供する。また、ＰＰＡＲ活性化能を有するナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを哺乳動物に投与するメタボリックシンドロームの予防または改善方法を提供する。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３５】
〔実施例１：トマト抽出物のＰＰＡＲα活性フラクションの同定〕
（１−１）トマト抽出物の調製
トマト（加工用品種「ふりこま」）の果実破砕物を凍結乾燥し、トマト凍結乾燥粉末を得た。これにエタノールを添加して２４時間振とうし、抽出液を濃縮乾固した。さらに、ヘキサン抽出を行い、抽出液を濃縮乾固した後、シリカゲルオープンカラムに担持させて、ヘキサン−酢酸エチルの混合溶媒で溶出、分画を行った。続いて、ＯＤＳカラムによるＨＰＬＣ分画を２回行い、１分ごとにフラクションを得た。
シリカゲルオープンカラムにおける溶出には、ヘキサン１００％、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：３、酢酸エチル１００％をこの順に各ステップ５００ｍＬで溶出し、回収した各溶出液のＰＰＡＲα活性を測定した。
１回目のＨＰＬＣには、逆相５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ ＯＤＳカラム（カラムＡ、ナカライテスク）を用いた。移動相にはアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエント（０−６０分）を用い、流速は１ｍＬ／分とした。１分ごとに１ｍＬずつフラクションを回収し、各フラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。
２回目のＨＰＬＣには、逆相ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ−１００Ｖカラム（カラムＢ、東ソー）を用いた。移動相にはアセトニトリル／水の３０−１００％グラジエント（０−６０分）を用い、流速は０．５ｍＬ／分とした。１分ごとに０．５ｍＬずつフラクションを回収し、各フラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。
【００３６】
（１−２）ＰＰＡＲα活性測定方法
ＰＰＡＲα活性測定には、ＰＰＡＲαレポーターアッセイを用いた。ＰＰＡＲαレポーターアッセイは、Ｇｏｔｏら（T. Goto et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 337 (2005) 440-445）に記載の方法に準じて行った。すなわち、細胞には、ｐ４ｘＵＡＳｇ−ｔｋ−ｌｕｃ（レポータープラスミド）、ｐＭ−ｈＰＰＡＲα（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲαのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）、ｐＣＭＸ−ＣＢＰ（ＣＢＰ（cAMP-response element-binding protein(CREB)-binding protein）用発現ベクター）およびｐＲＬ−ＣＭＶ（トランスフェクション効率を標準化するための内部のコントロール）をトランスフェクションしたＣＶ−１細胞（アフリカミドリザル腎細胞由来細胞株）を使用した。培地には、１０％牛胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン（10mg/mL）を含有するＤＭＥＭ培地を使用した。
【００３７】
ＣＶ−１細胞にリポフェクタミン（Invitrogen）を用いて上記ベクターをトランスフェクションし、２４時間培養した。続いて、ＰＰＡＲα活性測定用サンプルを含む培地に交換し、さらに２４時間培養した。ルシフェラーゼ活性の測定には、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｒ） Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Promega）およびルミノメーター（MicroLumat Plus、ベルトールジャパン）を使用し、試薬および装置の取扱説明書に従って、ルシフェラーゼ活性を測定した。なお、陽性対照として、既知のＰＰＡＲαアゴニストであるＧＷ−７６４７（2-[4-[2-[1-(4-シクロヘキシルブチル)-3-シクロヘキシルウレイド]エチル]フェニルチオ]イソ酪酸）を使用した。
【００３８】
（１−３）結果
シリカゲルオープンカラムを用いた分画により、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１で溶出したフラクションにＰＰＡＲα活性が認められ、これ以外の分画にはＰＰＡＲα活性が認められなかった。
ＰＰＡＲα活性が認められたヘキサン：酢酸エチル＝３：１で溶出したフラクションを１回目のＨＰＬＣに供し、得られたフラクションのＰＰＡＲα活性を測定した。４０分〜４５分のフラクションのＰＰＡＲα活性測定結果を図１に示した。図１から明らかなように、４２〜４３分のフラクション（Ｆ４２、Ｆ４３）に強いＰＰＡＲα活性が認められた。
１回目のＨＰＬＣにおいて、ＰＰＡＲα活性が認められたフラクションを集めて２回目のＨＰＬＣに供した。２回目のＨＰＬＣで得られたフラクションの５４分〜５９分のＰＰＡＲα活性測定結果を図２に示した。図２から明らかなように、５７分のフラクション（ＲＦ５７）に強いＰＰＡＲα活性が認められた。
【００３９】
〔実施例２：トマト抽出物のＰＰＡＲα活性フラクション（ＲＦ５７）中に含有される機能性成分の同定〕
ＲＦ５７のＬＣ／ＭＳ解析を行い、ＲＦ５７に含まれるＰＰＡＲα活性化成分は、組成式Ｃ１８Ｈ３０Ｏ３の化合物であることが明らかとなった。さらに、ＮＭＲを用いてこのＰＰＡＲα活性化成分の構造解析を行った結果、この成分はＣ１８のケト不飽和脂肪酸であり、最大吸収波長（２７６ｎｍで）からケトン基とジエンは共役していることが推察された。この結果から、ＰＰＡＲα活性化成分の候補物質として、１３−ｏｘｏ−９，１１−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ（１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ）および９−ｏｘｏ−１０，１２−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ（９−ｏｘｏ−ＯＤＡ）が考えられた。
【００４０】
候補物質をさらに絞り込むために、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析を行って平面構造を推定し、ＰＰＡＲα活性化成分のケトン基とジエンの位置を確認した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析による溶出時間の結果を図３（ａ）〜（ｄ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよび９−ｏｘｏ−ＯＤＡの混合物の結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）はＲＦ５７の結果である。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析によるフラグメントパターンの結果を図４（ａ）〜（ｅ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｅ）はＲＦ５７の結果である。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析による吸収波長の結果を図５（ａ）〜（ｅ）に示した。（ａ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｂ）は１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｃ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡの結果であり、（ｄ）は９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの結果であり、（ｅ）はＲＦ５７の結果である。
図３、図４および図５に示した結果から、ＲＦ５７に含まれるＰＰＡＲα活性化成分は、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡであることが明らかとなった。
【００４１】
〔実施例３：トマト果実、トマトジュースに含まれるＰＰＡＲα活性化成分の同定〕
分画操作を施していないトマト果実や既製のトマトジュースにも、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡが含まれるか否かを確認した。すなわち、トマト（ふりこま）果実の凍結乾燥物、既製のトマトジュースの凍結乾燥物、およびトマトジュースの原料トマト（ＮＤＭ７３６）果実の凍結乾燥物をそれぞれエタノール抽出し、その抽出物をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に供した。
結果を図６（ａ）〜（ｃ）に示した。（ａ）はふりこま果実の結果であり、（ｂ）はＮＤＭ７３６果実の結果であり、（ｃ）はトマトジュースの結果である。興味深いことに、トマト果実に存在するＰＰＡＲα活性化成分は、ＲＦ５７から同定された９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡではなく、その幾何異性体である９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡが主体であることが明らかとなった。また、トマトジュース中には、９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡ以外に３種類の類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）が同定された。これらの結果から、分画操作や加工操作により、類縁体化合物が生成するものと推測された。
【００４２】
トマト果実およびトマトジュースから同定された９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡ以外の類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）をＰＰＡＲαレポーターアッセイに供し、ＰＰＡＲα活性化能を有することを確認した。
結果を図７に示した。図７から明らかなように、これらの類縁体化合物も、ＲＦ５７と同様に強いＰＰＡＲα活性化能を有していた。
【００４３】
〔実施例４：ＰＰＡＲγ活性化能の確認〕
９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡを含むＲＦ５７、および９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物（９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｚ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｚ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ、１３−ｏｘｏ−９（Ｅ），１１（Ｅ）−ＯＤＡ）について、ＰＰＡＲγ活性化能を有するか否かを確認するために、ＰＰＡＲγレポーターアッセイを行った。ＰＰＡＲγレポーターアッセイは、上記実施例１の（１−２）に記載のＰＰＡＲαレポーターアッセイの方法において、ｐＭ−ｈＰＰＡＲα（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲαのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）をｐＭ−ｈＰＰＡＲγ（ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインとヒトＰＰＡＲγのリガンド結合ドメインとのキメラタンパク質用発現ベクター）に変更し、陽性対照を、既知のＰＰＡＲγアゴニストであるＴｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ（(+)-5-[4-[(6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-イル)メトキシ]ベンジル]-2,4-チアゾリジンジオン）に変更して実施した。
結果を図８に示した。図８から明らかなように、ＲＦ５７および９−ｏｘｏ−１０（Ｅ），１２（Ｅ）−ＯＤＡの類縁体化合物の類縁体化合物は、いずれもＰＰＡＲγ活性化能を有していることが確認された。
【００４４】
〔実施例５：ＲＦ５７の機能解析〕
（５−１）肝臓細胞における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現に関する評価
遺伝子導入によりＰＰＡＲαを高発現させたＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓由来）を１２ｗｅｌｌプレートに４×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２４時間インキュベートした。サンプル（ＲＦ５７またはＧＷ−７６４７）を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。細胞を回収し、β酸化関連遺伝子ＣＰＴ１Ａ（carnitine palmitoyltransferase 1A）のｍＲＮＡ発現量を定量的ＲＴ−ＰＣＲ法で測定した。
結果を図９に示した。図９から明らかなように、培地にＲＦ５７を添加することにより、ＣＰＴ１ＡのｍＲＮＡ発現量がコントロールに対して有意に増加した。なお、統計処理にはｕｎｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔを用いた。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４５】
（５−２）肝臓細胞におけるトリグリセリド（ＴＧ）蓄積に関する評価
遺伝子導入によりＰＰＡＲαを高発現させたＨｅｐＧ２細胞を１２ｗｅｌｌプレートに４×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２４時間インキュベートした。オレイン酸を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。ＲＦ５７を添加した培地に交換し、２４時間インキュベートした。細胞を回収し、細胞内のＴＧ蓄積量をＴＧキット（Wako）を用いて測定した。
結果を図１０に示した。図１０から明らかなように、培地にＲＦ５７を添加することにより、細胞内のＴＧ蓄積量がコントロール（ＯＡ＋）に対して有意に減少した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４６】
（５−３）肝臓細胞における酸素消費に関する評価
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、♂）から肝細胞を門脈潅流法により分離し、初代培養肝細胞を調製した。得られた初代培養肝細胞をプレート（ＸＦ２４専用プレート）に５×１０５個／ｗｅｌｌで播種し、２時間インキュベートした。ＲＦ５７を添加した培地（濃度１０μＭまたは２０μＭ）に交換し、２４時間インキュベートした。酸素消費量測定装置ＸＦ２４（Seahorse Bioscience社製）にて、肝臓細胞の酸素消費量を測定した。
結果を図１１に示した。図１１から明らかなように、培地にＲＦ５７を２０μＭの濃度で添加することにより、肝細胞における酸素消費量（ＯＣＲ）が有意に増加した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００４７】
以上の機能解析結果から、ＲＦ５７は、肝細胞に対してＰＰＡＲα活性化による脂肪燃焼作用を介した脂肪蓄積抑制作用を有するものと考えられた。
【００４８】
〔実施例６：肥満・糖尿病モデルマウス（ＫＫＡｙ）による評価〕
（６−１）動物および飼育
ＫＫＡｙ／ＴａＪｃｌ（♂、日本クレア）を４週齢で購入し、４日間一般飼料を与えて予備飼育した。予備飼育終了後、下記の(1)〜(4)の４群に群分けして高脂肪飼料に切り替えて、試験を開始した。動物は個別に飼育し、高脂肪飼料を４週間給餌した。被験物質には、混餌飼料を大量調製することが容易であることから、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡを使用した。また、陽性コントロールには、公知の高脂血症薬（ＰＰＡＲアゴニスト）であるベザフィブレート（Ｂｅｚａ）を使用した。合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡおよびＢｅｚａは、下記の濃度になるように飼料に添加し、混餌投与した。
(1) コントロール群（ｎ＝７）
(2) ０．０５％Ｂｅｚａ摂食群（ｎ＝６）
(3) ０．０２％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群（ｎ＝６）
(4) ０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群（ｎ＝８）
【００４９】
（６−２）血糖値および血中トリグリセリド（ＴＧ）の測定
実験開始前（０日目）、７日目、１４日目および２１日目に採血して、血糖値（血漿中グルコース濃度）を測定した。また、２１日目には血中ＴＧ濃度を測定した。
血糖値血糖値の測定結果を図１２に示した。図１２から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群はいずれの濃度においても、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食による血糖値の上昇を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
血中ＴＧ濃度の測定結果を図１３に示した。図１３から明らかなように、０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食による高脂血症の発症を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
【００５０】
（６−３）経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ、Oral glucose tolerance test）
試験開始２５日目に経口糖負荷試験を実施した。具体的には、マウスを１７時間絶食後、尾静脈から採血を行い（これを０分とする）、１．５ｍｇ／ｇ体重となるようにＤ−（＋）−グルコースを経口投与した。以降、１５、３０、６０、９０および１２０分後にそれぞれ尾静脈から採血を行い血糖値を測定した。
糖負荷後の血糖値の推移を図１４に示した。図１４から明らかなように、０．０５％合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、糖負荷後の血糖値の上昇を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を、＊＊はｐ＜０．０１を表す。
血中インスリン濃度の測定結果を図１５に示した。図１５から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群はいずれの濃度においても、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群と同様に、高脂肪飼料の摂食によるインスリン値の上昇（高インスリン血漿と呼ばれ、糖代謝機能が悪化した状態）を有意に抑制した。図中、＊はｐ＜０．０５を、＊＊はｐ＜０．０１を表す。
【００５１】
（６−４）肝臓重量、肝臓脂肪蓄積量および肝臓における脂肪酸β酸化関連酵素遺伝子発現量の評価
試験開始２８日目にマウスを安楽死させ肝臓を摘出した。得られた肝臓の重量を測定した後、肝臓中のＴＧはイソプロパノールでホモジナイズすることにより抽出し、アセチルアセトンを用いた発色法により定量した。また、肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子ｍＲＮＡは、キアゾール（QUIAGEN）を用いて抽出し、Ｒｎｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（QUIAGEN）により精製した。ｍＲＮＡ発現量は定量的ＲＴ−ＰＣＲ法で測定した。
肝臓中のＴＧ蓄積量を測定した結果を図１６に示した。図１６から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群では、肝臓中のＴＧ蓄積量が用量依存的に減少した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
肝臓における脂肪酸β酸化関連遺伝子発現量を測定した結果を図１７に示した。図１７から明らかなように、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群では、肝臓中の脂肪酸β酸化関連遺伝子ＣＰＴ１ＡのｍＲＮＡ発現量が、用量依存的に増加した。図中、＊はｐ＜０．０５を表す。
肝臓重量を測定した結果を表１に示した。
【００５２】
【表１】
【００５３】
表１から明らかなように、０．０５％Ｂｅｚａ摂食群の肝臓重量は、コントロール群と比較して有意に増加していたが、合成１３−ｏｘｏ−ＯＤＡ摂食群は、いずれの濃度でも肝臓重量を増加させなかった。一般に、ＰＰＡＲαアゴニストは、マウスやラット等のげっ歯類に対して肝臓の重量を増加（ペルオキシソームを増加）させる副作用があることが知られている。この結果から、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、肝臓肥大の副作用を発症させない点で安全性が高く、非常に有用であると考えられる。
【００５４】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項２】
ナス科植物がトマトまたはナスである請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項３】
ナス科植物がトマトである請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項４】
抽出物またはその活性フラクションが脂溶性である請求項１〜３のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項５】
ＰＰＡＲが、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγである請求項１〜４のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項６】
抽出物またはその活性フラクションが以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含む請求項１〜５のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【化１】
【請求項７】
以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【化２】
【請求項８】
生活習慣病の予防または改善用である請求項１〜７のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項９】
メタボリックシンドロームの予防または改善用である請求項１〜７のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項１０】
生活習慣病が、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満または脂肪肝である請求項８に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する飲食品。
【請求項１】
ナス科植物の抽出物またはその活性フラクションを有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項２】
ナス科植物がトマトまたはナスである請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項３】
ナス科植物がトマトである請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項４】
抽出物またはその活性フラクションが脂溶性である請求項１〜３のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項５】
ＰＰＡＲが、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγである請求項１〜４のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項６】
抽出物またはその活性フラクションが以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を含む請求項１〜５のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【化１】
【請求項７】
以下の化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）の少なくとも１種を有効成分とするＰＰＡＲ活性化剤。
【化２】
【請求項８】
生活習慣病の予防または改善用である請求項１〜７のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項９】
メタボリックシンドロームの予防または改善用である請求項１〜７のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項１０】
生活習慣病が、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧、内臓脂肪型肥満または脂肪肝である請求項８に記載のＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する医薬。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化剤を含有する飲食品。
【図１】
【図２】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公開番号】特開２０１１−１８４４１１（Ｐ２０１１−１８４４１１Ａ）
【公開日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３８８６（Ｐ２０１０−５３８８６）
【出願日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２１年度、農業・食品産業技術総合研究機構「トマト由来抗肥満・抗生活習慣病成分の解析と応用基盤研究」委託事業、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１３２２７２）国立大学法人京都大学 (1,269)
【出願人】（５９６１７５８１０）財団法人かずさディー・エヌ・エー研究所 (40)
【出願人】（５９１０１４７１０）千葉県 (49)
【出願人】（０００１０４５５９）日本デルモンテ株式会社 (44)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２１年度、農業・食品産業技術総合研究機構「トマト由来抗肥満・抗生活習慣病成分の解析と応用基盤研究」委託事業、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１３２２７２）国立大学法人京都大学 (1,269)
【出願人】（５９６１７５８１０）財団法人かずさディー・エヌ・エー研究所 (40)
【出願人】（５９１０１４７１０）千葉県 (49)
【出願人】（０００１０４５５９）日本デルモンテ株式会社 (44)
【Ｆターム（参考）】
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