トリメブチン及びＮ−脱メチル化トリメブチンの塩類
【解決手段】 内蔵痛の治療に有用な改善鎮痛特性を有する、トリメブチン及びＮ−モノ脱メチル化トリメブチン、及びそれらの対応立体異性体の独特な塩類が提供される。本発明の塩類は特に、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの、腹痛によって特徴付けされる症状の治療に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連文献の相互参照
本出願は、２００６年６月６日付けで出願された米国仮出願第６０／８０４，０６７号に対して優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、トリメブチン及びＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの独特な塩類、及びそれらの対応立体異性体に関するものであり、これらは一般的な内蔵痛の治療において、及び特に、例えば炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの腸疾患を患った患者における腹痛によって特徴付けされる症状の治療において有用である改善された鎮痛特性を有しているものである。
【背景技術】
【０００３】
トリメブチン［３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル及びそのマレイン酸塩］は、ＩＢＳを含む機能的腸疾患の治療に対して１９６９年から多くの国で使用されてきた。腹痛を軽減するトリメブチンの有効性は、様々な臨床研究において示されてきた（例えば、Ｇｈｉｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ（１９８６）Ｓｉｎｇｌｅ ｄｒｕｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｃｏｌｏｎ：Ｒｏｃｉｖｅｒｉｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｍａｌｅａｔｅ．Ｃｕｒｒ Ｔｈｅｒ Ｒｅｓ ３９：５４１−５４８を参照のこと）。トリメブチンは、機能的腸疾患、特にＩＢＳを患った患者における急性及び慢性腹痛の治療において、３００〜６００ｍｇ／日の範囲の用量で有効であるように改善された。さらに、腹痛を示す小児にも有効である。
【０００４】
胃腸管に対するトリメブチンの作用は一部、（ｉ）末梢性ミュー、カッパ及びデルタオピエート受容体に対するアゴニスト効果、及び（ｉｉ）モチリンなどの胃腸ペプチドの放出、及び血管作動性腸ペプチド、ガストリン及びグルカゴンを含む他のペプチドの放出の調節を介して仲介されていると考えられる。さらに、トリメブチンは、胃内容排出を促進し、腸内の伝播性運動複合体の早期相ＩＩＩを誘導し、結腸の収縮活動を調節する。最近、トリメブチンは動物における腸管内腔の膨満によって誘導される反射を軽減し、内蔵感受性を調節することも示された。
【０００５】
一酸化窒素（ＮＯ）は最近、血管内皮への白血球粘着の減少（Ｇａｕｔｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｖｉａ Ｐ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｓｐｌａｎｃｈｎｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２６７：Ｇ５６２−Ｇ５６８）、及び様々な走化性因子の産生の抑制（Ｗａｌｆｏｒｄ ａｎｄ Ｌｏｓｃａｌｚｏ（２００３）Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ １：２１１２−２１１８）を含む、多くの抗炎症性作用を発揮することが示された。更に、ＮＳＡＩＤｓ、アセトアミノフェン及びウルソデオキシコール酸などの特定の薬剤へのＮＯ放出部位の取り込みによって、これらの薬剤の活性を増強し、親薬剤と比較して毒性が減少することが示された。
【０００６】
硫化水素（Ｈ２Ｓ）は、抗炎症性効果を発揮する別のタイプのガスメディエーターである。最近、Ｈ２Ｓ放出因子は内蔵痛のモデルにおいて鎮痛作用を示すことが見出された（Ｄｉｓｔｒｕｔｔｉ ｅｔ ａｌ（２００５）、Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ ｅｘｅｒｔｓ ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＫＡＴＰ ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３１６：３２５−３３５）。さらに、Ｈ２Ｓは腸組織において平滑筋弛緩薬となることが示された（Ｔｅａｇｕｅ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｔｈｅ Ｓｍｏｏｔｈ Ｍｕｓｃｌｅ Ｒｅｌａｘａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｓｕｌｆｉｄｅ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｏｌｅ ｔｏ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１３９−１４５を参照のこと）。
【０００７】
本発明者らは本出願において、トリメブチン或いはＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの塩類及びそれらの対応立体異性体が様々なＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出、若しくは混合性ＮＯ及びＨ２Ｓ放出部位と共に形成された場合、トリメブチンの活性は有意に増強されることを示した。特に、トリメブチン及びＮ?モノ脱メチル化トリメブチンのこれらＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出塩類の投与は、トリメブチン（トリメブチンマレイン酸）或いはその代謝産物Ｎ−モノ脱メチル化トリメブチン単独と比較した場合、及びＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独と比較した場合、改善された鎮痛特性を生じる。これらの塩類は特に、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、糖尿病性胃不全麻痺、胃腸障害及びそれらと同等のものなどの腹痛によって特徴付けされる症状の治療に有用である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一般的に、トリメブチン（ＴＭＢ）及びその活性代謝産物Ｎ−脱メチル化トリメブチン（Ｎｏｒ−ＴＭＢ）の塩類、及びそれらの対応立体異性体である（Ｒ）−ＴＭＢ、（Ｓ）−ＴＭＢ、（Ｒ）−Ｎｏｒ−ＴＢＭ及び（Ｓ）−Ｎｏｒ−ＴＢＭが提供され、ここにおいて前記塩類はＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位を用いて形成されるものである。ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位と智に塩類を形成することによって、ＴＮＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢの抗侵害受容効果は驚く程増強された。
【０００９】
特に、本発明のＴＭＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢ塩類は、結腸直腸膨満に関連した内蔵痛の軽減において、ＴＭＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢ単独、及びＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独と比べて優れている。ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独では、単独で投与した場合、結腸直腸膨満に関連した内蔵痛に対して有意な効果を有しているようには見えなかった。従って、本発明の一観点において、本発明の塩類は腹痛に関連する消化器系のあらゆる疾患に関連した痛みを軽減するのに有用である。
【００１０】
大まかに述べると、本発明の塩類は以下の一般式であり：
Ａ＋・Ｘ−（式Ｉ）
ここにおいて、Ａは、
【化１】
【００１１】
及びそれらの対応立体異性体であり；
Ｘは、ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位である。
【００１２】
好ましい実施形態において、Ｘは、以下の群：
【化２】
【００１３】
から選択されるものである。
【００１４】
無毒で有効的なＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位は、本発明において使用され得ることが理解される。
【００１５】
好ましい化合物は、以下の式で表される化合物である。
【００１６】
【化３】
【００１７】
【００１８】
【００１９】
【００２０】
更に、新規混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位は、前記一般式を有するように提供され、ニトロアルギニン−Ｒは好ましくは：
【化４】
【００２１】
であり、ここにおいてＲはＨ２Ｓ放出部位である。好ましい実施形態において、Ｒは、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン、システイン、及び４−（チオカルバモイル）安息香酸から成る群から選択されるものである。
【００２２】
更に、そのような治療を必要とする対象における内蔵痛を治療する方法が提供され、この方法は、内蔵痛を軽減する量の本発明の化合物を対象へ投与する工程を有するものである。１実施形態において、前記内蔵痛は腹痛である。別の実施形態において、前記腹痛は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１ａは、溶媒及びトリメブチンマレイン酸を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図１ｂは、溶媒及びトリメブチンマレイン酸を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図２】図２ａは、溶媒及びニトロアルギニン単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図２ｂは、溶媒及びニトロアルギニン単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図３】図３ａは、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図３ｂは、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図４ａ】図４ａは、Ｌ−ＮＡＭＥによる前処理をした或いはしていない、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図４ｂ】図４ｂは、Ｌ−ＮＡＭＥによる前処理をした或いはしていない、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図５ａ】図５ａは、トリメブチンマレイン酸及びトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（塩ＩＩＩ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図５ｂ】図５ｂは、溶媒及びチオカルバモイル安息香酸（ＴＢＺ）単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図６】図６は、４−（チオカルバモイル）安息香酸（ＴＢＺ）及び５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）のＨ２Ｓ産生を示した棒グラフを示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、本明細書に記載された好ましい実施形態に関して記載されるであろう。しかしながら、これらの実施形態は、本発明を例示する目的のためのものであり、請求項によって定義されたような本発明の観点を制限すると解釈されるものではないことが理解されるべきである。
【００２５】
本発明の化合物は、２つの活性部位である（１）ＴＭＢ或いはＮｏｒ−ＴＭＢ、若しくはそれらの立体異性体、及び（２）ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位、を含むものである。多くの場合において、本発明の塩類は、既知の開始物質及び試薬を用いて製造され得る。
【００２６】
本発明の化合物は、これに限定されるものではないが、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、感染性大腸炎（例えば、クロストリジウム・ディフィシル大腸炎、サルモネラ小腸炎、シゲラ感染症、エルシニア感染症、クリプトスポリジウム症、微胞子虫感染症、及びウイルス感染症などの偽膜性大腸炎）、放射線誘導性大腸炎、免疫低下宿主における大腸炎、糖尿病性胃不全麻痺及び胃腸障害を含む様々な疾患に関連した、腹痛などの内蔵痛の治療に利用される。
【００２７】
治療される特異的症状或いは疾患に依存して、対象は、本分野の当業者に予め決定されるような、あらゆる適切な治療上有効で安全な投与量で本発明の化合物を投与される。これらの化合物は、治療される前記対象の体重及び症状、及び選択された投与の特異的経路に依存して必要に応じて変更がなされるが、最も望ましくは１日約１〜約２０００ｍｇの範囲の投与量で、一回或いは分割用量で投与される。しかしながら、投与量レベルは、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約５〜９０ｍｇ／ｋｇの間の範囲、最も好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｋｇの間の範囲内であることが最も望ましい。しかしながら、治療される人の体重及び症状、及び前記薬物に対する個々の反応、さらには選択される薬学的処方のタイプ及び期間、そのような投与が実行される間のインターバルに依存して変更がなされる。いくつかの場合においては前述の範囲の下限以下の投与量レベルがより十分である一方、他の場合においてはより大量な投与量はあらゆる有害な副作用を引き起こさず使用されるが、そのような大用量はまず一日を通していくつかの小容量へ分割されるという条件である。
【００２８】
本発明の化合物はあらゆる薬学的処方の形態で投与され、その種類は投与の経路に依存するものである。これらの薬学的組成物は、適合性で薬学的に許容可能な賦形剤或いは溶媒を用いて、従来の方法によって調合され得る。そのような組成物の例としては、即時溶液、注入可能製剤、直腸、経鼻、眼球、膣内などの調合のための、カプセル、錠剤、経皮パッチ、薬用キャンディー、トローチ剤、スプレー、シロップ、粉末、顆粒、ゲル、エリキシル剤、坐薬、及びそれらと同等物を含む。投与の好ましい経路は、経口及び直腸経路である。
【００２９】
経口投与に対して、結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及びグリシンなどの様々な賦形剤を含有する錠剤は、デンプン（好ましくはコーン、ポテト或いはタピオカデンプン）、アルギン酸及び特定の複合ケイ酸などの様々な錠剤分解物質に加えて、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン及びアラビアゴムのような顆粒結合剤と共に使用する。付加的に、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクなどの潤滑剤は錠剤化目的のために使用され得る。同様な種類の固形組成物はさらにゼラチンカプセルにおける注入剤としても使用され；この関連における好ましい物質はさらに、ラクトース或いは乳糖、更には高分子量ポリエチレングリコールも含む。水性懸濁液及び／若しくはエリキシル剤が経口投与に望ましい場合、前記活性成分は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの様々な組み合わせなどの希釈剤と共に、甘味料或いは調味料、着色物質、及び望ましい場合乳化及び／若しくは懸濁剤と組み合わされる。
【００３０】
剤形は、即効型、徐放性、持続放出性、遅延放出性或いは標的遅延放出性に対して設計され得る。これらの用語の定義は本分野の当業者に既知である。更に、剤形放出性プロファイルは、ポリマー混合組成物、コーティングマトリックス組成物、多粒子組成物、コーティング多粒子組成物、イオン交換性樹脂ベース組成物、浸透ベース組成物、或いは生分解性ポリマー組成物によって影響を受ける。あらゆる理論に束縛されることを望むことなく、前記放出性は、有利な拡散、溶解、浸食、イオン交換、浸透或いはそれらの組み合わせから影響を受ける。
【００３１】
非経口的な投与に対して、セサミ或いはピーナッツオイルにおける、或いは水性プロピレングリコールにおける活性塩の溶液は使用され得る。前記水性溶液は、必要ならば適切に緩衝されるべきであり（好ましくはｐＨは８以上）、等張にするためにまず液体希釈剤を提供する。前記水性溶液は、静脈内注射目的に適切である。無菌状態での全てのこれら溶液の調合は、本分野の当業者によく知られている。
【００３２】
以下に非制限的な実施例が記載してあり、これは本分野の当業者が本発明を行い使用することを可能にするものである。
【実施例１】
【００３３】
トリメブチンニトロアルギニナート（Ｉ）の合成
【化５】
【００３４】
Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨ（０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，２Ｈ），７．１５（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２２．８，２６．４，２８．９，２９．１，４７．９，５６．４，６０．８，６４．４，６５．８，１０７．３，１２５．２，１２７．４，１２８．０，１２８．５，１４１．７，１４２．５，１５３．４，１５８．３，１６５．９，１７０．２．ｍｐ１８３°Ｃ（ｄｅｃ）。
【実施例２】
【００３６】
トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＩＩ）の合成
【化６】
【００３７】
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）の合成
１時間０℃でかき混ぜながら、５０ｍＬのジメチルホルムアミド中のＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（３．０ミリモル）の溶液へヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ミリモル）及びＤＣＣ（３．３ミリモル）を添加した。次にその反応混合物へ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（３．０ミリモル）を添加し、３時間０℃で、２４時間室温で機械的にかき混ぜた。濾過後、その濾液を減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した。次に得られた油状残留物を酢酸エチルに溶解し；有機層は鹹水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し前記溶媒を蒸発させた。未精製中間体ａは、ジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、前記溶媒を除去し、Ｈ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨを得た。未精製残留物としてのＴＦＡはジエチルエーテルで沈殿させ；得られた固形物は水に溶解させ、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白い固形物として２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００３８】
トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＩＩ）の合成
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次に、その溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例３】
【００３９】
トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ＩＩＩ）の合成
３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル４−チオカルバモイル安息香酸（トリメブチンチオカルバモイル安息香酸）の調合
【化７】
【００４０】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００４１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．７３（ｄｄ，２Ｈ），７．０１（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ）７．９３（ｄｄ，４Ｈ），９．６５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２８．９，５６．５，６０．８，６４．５，６５．７，１０７．１，１２５．３，１２７．４，１２８．１，１２８．６，１２９．５，１２９．７，１３２．３，１４１．８，１４２．５，１４８．５，１５３．４，１５４．８，１６５．９，１６９．４，１７２．５，１８８．６．
ｍｐ６６−６８°Ｃ（ｄｅｃ）。
【００４２】
４−（チオカルバモイル）安息香酸の合成
前記化合物は既に文献（Ｆａｉｒｆｕｌｌ，Ｅ．Ｓ．，Ｌｏｗｅ Ｊ．Ｌ．，Ｐｅａｋ Ｄ．Ａ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５２，７４２）で報告された手順に従って合成し、この文献はこの参照によって本明細書に組み込まれるものである。
【００４３】
【化８】
【００４４】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（２）
３ｇの４−シアノ安息香酸１（２０．４ミリモル）を４０ｍＬのピリジン中に溶解し、２．１ｍＬのトリエチルアミン（２０．４ミリモル）を添加した。乾燥水素スルフィドは、定常蒸気中の前記溶液を４時間通過させた。次に前記混合物を水へ注ぎ、固形物を濾過によって回収した。石油エーテルからの再結晶によって、２．５１ｇの純粋化合物２（６８％収率）を得た。
【００４５】
ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ １８２．２（Ｍ＋）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．９２（ｄｄ，４Ｈ），９．６８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．１２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１３．２５（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）
１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２７．３，１２９．６，１３２．０，１４８．５，１６９．４，１８８．６
ｍ．ｐ．２９６−２９８°Ｃ（ｄｅｃ．）。
【実施例４】
【００４６】
トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＶ）の合成
【化９】
【００４７】
炭酸４−ニトロ−フェニルエステル４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のＡＤＴ−ＯＨ（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。この反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａを濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００４８】
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次に、その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させた。未精製中間体を、ジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後溶媒を除去し、未精製残留物としてジエチルエーテルで沈殿させた産生物ｂを得た；この得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白い固形物として５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００４９】
トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＶ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその鼕液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例５】
【００５０】
トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｖ）の合成
【化１０】
【００５１】
炭酸４−ニトロ−フェニルエステル４−チオカルバモイル−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のｐ−ヒドロキシチオベンズアミド（１．０４モル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１４ミリモル）を添加した。その反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物はジエチルエーテルで処理した；産物ａは濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００５２】
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物としての産物ａを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくりと添加し、濾過によって回収された白い固形物として５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００５３】
トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｖ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例６】
【００５４】
Ｎ−ジメチルトリメブチンニトロアルギニナート（ＶＩ）の合成
【化１１】
【００５５】
Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨ（０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ， ４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，２Ｈ），７．０７（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．５１（ｄ，２Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２２．８，２６．４，２８．９，２９．１，４７．９，５６．４，６０．８，６４．４，６５．８，１０７．３，１２５．２，１２７．４，１２８．０，１２８．５，１４１．７，１４２．５，１５３．４，１５８．３，１６５．９，１７０．２．
ｍ．ｐ．７８−８０°Ｃ（ｄｅｃ）。
【００５７】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンの合成
前記混合物は文献（Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．，Ｆｉｇａｄ?ｒｅ Ｂ．，Ｓａｉｖｉｎ Ｓ．，Ｈｏｕｉｎ Ｇ．，Ｃｈｏｍａｒｄ Ｊ．Ｍ．，Ｃａｈｉｅｚ Ｇ．Ａｒｚｎｅｉｍ．−Ｆｏｒｓｃｈ．／Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．２０００（５０），５４４）に報告された手順にわずかな修正を加えて合成した。
【００５８】
【化１２】
【００５９】
フェニルグリシンエチルエステル塩酸（２）
【化１３】
【００６０】
２２ｍＬのＳＯＣｌ２を無水エタノール中の３０ｇのフェニルグリシン１（１９８．５ミリモル）の溶液へ液滴で添加した。穏やかな還流が自発的に生じ、それは３時間維持されていた。その反応によって室温まで冷却することができ、一晩中かき混ぜた。溶媒を真空下で除去し、白い粉末として４１．８ｇの２を得た（９８％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ １７９．８（Ｍ＋）。
【００６１】
エチルＮ−（フェニルメチレン）グリシナート（３）
【化１４】
【００６２】
１０．６ｇのエチルフェニルグリシナート塩酸２（４９．３ミリモル）の混合物に、１００ｍＬのジクロロメタン、５ｍ；のベンズアルデヒド（４９．２ミリモル）及び３０ｇの硫酸マグネシウム（２４９．２ミリモル）を室温で添加し、窒素雰囲気下で２１．２５ｍＬのトリエチルアミン（１５２．４６ミリモル）を添加した。１７時間かき混ぜた後、不均一な反応混合物はセライトを通して濾過し、その固形物を１００ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた粘稠性油は８０ｍＬのジエチルエーテル及び８０ｍＬの水で溶解するまでかき混ぜた。デカンテーション後、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させた。イミン（ｉｍｍｉｎｅ）エステル３（１２．４ｇ、９４％収率）を淡黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２６８．３（Ｍ＋）。
【００６３】
エチル２−フェニル−２−（Ｎ−フェニルメチレン）−ブタン酸（４）
【化１５】
【００６４】
窒素雰囲気下で、６４ｍＬの無水ＴＨＦ中の１２．３９ｇ（４６．４ミリモル）の３の溶液を、かき混ぜながら２．０４の水素化ナトリウム（６０％油分散、８５ミリモル）、１９２ｍｇのＣｕＣｌ２及び１２８ｍＬの無水ＴＨＦへ液滴で添加した。室温で９時間後、４．６６ｍＬ（５７．７ミリモル）のエチルヨウ素をその反応混合物へ素早く添加した。１８時間かき混ぜ続け、０．８６ｍＬの無水エタノールをその反応混合物へ注意しててんかした。かき混ぜている間、反応色が黄色〜赤〜オレンジへ変わり、次に緑に変わった。真空下でのその反応混合物の濃縮後、９５．８ｍＬのジエチルエーテル及び１６０ｍＬの水を添加し、結果生じた混合物を１０分かき混ぜ、次にセライトを通して濾過した。デカンテーション後、有機層を水で３回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次にジエチルエーテルを減圧下で蒸発させ、５．８２ｇの４（４３％収率）を供給した。黄色−オレンジ油として得られた未精製産物は、更なる精製なしで使用するのに十分純粋であった。ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ２９６．１（Ｍ＋）。
【００６５】
エチル２−アミノ−２−フェニルブタノエート塩酸（５）
【化１６】
【００６６】
５．８ｇの４（１９．７３ミリモル）、１７．６ｍＬのＴＨＦ、３５．１７ｍＬのジエチルエーテル、４４ｍＬの水及び２．６４ｍＬの濃縮ＨＣｌを室温で２４時間かき混ぜた。溶媒を真空下で反応混合物から除去し、結果生じた水性溶液をジエチルエーテルで２回洗浄した。次に水を減圧下で蒸発させ、オレンジの油として３．８ｇの５を得た（７９％収率）。
【００６７】
エチル２−アミノ−２−フェニルブタノエート（６）
【化１７】
【００６８】
未精製産物５を２２ｍの無水ＴＨＦに溶解し、２．６４ｍＬのトリエチルアミンを添加した。３０分かき混ぜた後、その混合物はセライトを通して濾過し、その固形物を１００ｍＬの無水ジエチルエーテルで洗浄した。回転エバポレータを使用してその溶媒を濃縮し、青色の油として２．４９ｇの６を得た（７７％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２０８（Ｍ＋）。
【００６９】
エチル２−ホルミルアミノ−２−フェニルブタノエート（７）
【化１８】
【００７０】
１２．７２ｍＬのギ酸及び２５．３８ｍＬの無水酢酸を液滴で、かき混ぜながら２．４９ｇ（１２．０３ミリモル）のアミン６へ添加した。室温で１５時間後、溶媒を減圧下で除去し、緑色の粘稠性油として３．０９ｇの７を得た（１００％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２３６（Ｍ＋）。
【００７１】
２−メチルアミノ−２−フェニルブタノール（８）
【化１９】
【００７２】
３０ｍＬの無水ＴＨＦ中の９００ｍｇ（２３．７１ミリモル）の水素リチウムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４）の懸濁液へ液滴で、１８ｍＬの無水ＴＨＦ中の３．０９ｇ（１３．１５ミリモル）の７（以前調合した）の溶液を添加した。還流下で４時間後、その反応混合物は室温まで冷却され、付加的量の水素リチウムアルミニウム（９００ｍｇ）を導入した。還流は４時間維持し、硫酸マグネシウムの水性飽和溶液を勢い良くかき混ぜながら、沈殿が形成されるまで−１０℃でゆっくり添加した。その固形物を濾過し、ＴＨＦで数回洗浄した。水性溶液が得られるまで、有機溶媒を減圧下で蒸発させた。その溶液を１００ｍＬのジエチルエーテルへ添加して、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒の蒸発によって、黄色の油として１．８４ｇの８を得た（７８％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ１８０．１（Ｍ＋）。
【００７３】
（２−メチルアミノ−２−フェニルブチル）３，４，５−トリメトキシ安息香酸（Ｎ−脱メチル化トリメブチン（９）
【化２０】
【００７４】
２８ｍＬの無水ＴＨＦ中の１．８４ｇの８（１０．３ミリモル）の溶液へ液滴で、４．１１ｍＬのｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５モル／Ｌ）を−７８℃で添加した。１５分後、１５．８ｍＬの無水ＴＨＦ中の２．３１ｇ（１０．０１ミリモル）の３，４，５−トリメトキシベンゾイル塩化物の溶液を添加した。次にその反応混合物を−３０℃（ｃａ１時間）まで暖め、１９ｍＬの酢酸を注意しながら添加した。溶媒を真空下で除去し、５５ｍＬのジエチルエーテル及び５５ｍＬの水を以前得られた油へ添加した。完全に溶解するまでかき混ぜた後、結果生じた混合物をデカンテーションし、水性層を固形Ｎａ２ＣＯ３でアルカリ化し、ジエチルエーテルで再抽出した。有機層は炭酸ナトリウムの飽和水性溶液及び鹹水で２回洗浄し、次に硫酸ナトリウムの上で乾燥させた。ジエチルエーテルを真空下で蒸発させ、エステル９をシリカゲルカラム（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン、７：３）上のクロマトグラフィによって精製し、淡黄色の油として１．４ｇの純粋Ｎ−脱メチル化トリメブチン９を得た（４９％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ３７４．１（Ｍ＋）。
【００７５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１．７５−１．９（ｍ，２Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，６Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．５０（ｄｄ，２Ｈ），７．０７−７．４４（ｍ，７Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．４，２８．５，２８．６，５５．９，６０．１，６１．１，６６．３，１００．５，１２６．５，１２７．０，１２９．３，１２８．０，１４２．０，１４２．５，１５２．７，１６５．６。
【実施例７】
【００７６】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＶＩＩ）
【化２１】
【００７７】
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）
５０ｍＬのジメチルホルムアミド中のＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（３．０ミリモル）の溶液へ、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ミリモル）及びＤＣＣ（３．３ミリモル）を１時間０℃でかき混ぜながら添加した。その反応混合物へ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（３．０ミリモル）を添加して、０℃で３時間、室温で２４時間機械的にかき混ぜた。濾過後、濾過物を減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した。得られた油状残留物を酢酸エチルへ溶解した；有機層は鹹水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。未精製中間体ａをジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、Ｈ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨを得た。未精製残留物としてのＴＦＡをジエチルエーテルで沈殿させた；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００７８】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＶＩＩ）
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例８】
【００７９】
３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（メチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル４−チオカルバモイル安息香酸（Ｎ−脱メチル化トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ＶＩＩＩ））
【化２２】
【００８０】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（０．１モル）及び脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物をエチルアルコール（２０ｍＬ）及びアセトニトリル（２０ｍＬ）中に溶解し、次に水（２００ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００８１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．７０−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，２Ｈ），７．０７（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３３（ｔ，２Ｈ），７．５２（ｄ，２Ｈ）７．９３（ｄｄ，４Ｈ），９．６３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２８．７，５６．５，６０．５，６４．６，６５．８，１０７．２，１２５．５，１２７．２，１２８．２，１２８．６，１２９．５，１２９．４，１３２．５，１４１．９，１４２．４，１４８．５，１５３．５，１５４．７，１６５．７，１６９．４，１７２．５，１８８．６．
ｍｐ６５−６７°Ｃ（ｄｅｃ．）。
【実施例９】
【００８２】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＸ）の合成
【化２３】
【００８３】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のＡＤＴ−ＯＨ（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。その反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａを濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００８４】
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢＵ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物として産物ｂを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００８５】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＸ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍｌ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例１０】
【００８６】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミドニトロ−アルギニナート（Ｘ）の合成
【化２４】
【００８７】
カルボン酸４−ニトロ−フェニルエステル４−チオカルバモイル−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のｐ−ヒドロキシチオベンズアミド（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。その反応混合物を室温で１０分かき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａは濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００８８】
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢＵ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を室温で２０時間かき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物として産物ｂを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００８９】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｘ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍｌ）及びエチルアルコール（２０ｍｌ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００９０】
化合物のテスト
【実施例１１】
【００９１】
内蔵痛認知のラットモデルにおける、塩Ｉであるトリメブチンニトロアルギニナートの効果対トリメブチン単独及びニトロアルギニン単独の効果の比較
過敏性腸症候群の前臨床モデルである内蔵痛認知のラットモデルは、以下の実施例で使用した。ラット（雄、Ｗｉｓｔａｒ、２００〜２５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｍｏｎｚａ、イタリア）から購入）はプラスティックケージに収容し、１２時間明／暗サイクルで７：００ＡＭにライトが付くという調節条件下で維持した。水道水及び標準実験室固形飼料は自由に与えた。実験前、ラットには個々に、２〜３日間プレキシガラスにおいて１日２〜３時間費やして訓練させた。これによってラットは移動−制限環境に適用できた。食べ物は結腸直腸膨満（ＣＲＤ）記録を実行する前１２時間は控えた。実験は覚醒ラットで行い、観察者が各動物へ投与した薬剤の正体が分からないような盲検で行った。
【００９２】
テスト当日、ラットはエーテル吸引で鎮静させ、２ｃｍ長ラテックスバルーンを肛門端から２ｃｍの直腸内に挿入し、尾の基部で固定した。そのバルーンは二重バレルカニューレを介して、コンピュータ（ＰｏｗｅｒＬａｂ ＰＣ，Ａ．Ｄ．Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，マサチューセッツ州、米国）によって直腸圧力を連続的にモニタリングする圧力トランスデューサー、及び前記バルーンの膨張／収縮に対するシリンジへ連結した。次に上昇Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ（商標）プラットホーム上の小さなケージ（２０ｘ８ｘ８ｃｍ）にラットを収容し、１時間覚醒及び適用させた。鎮静から回復した後、動物にＣＲＤ手順を施し、行動反応をテストした。実験前の夜、前記バルーンは膨張させ一晩放置したので、ラテックスは伸展し前記バルーンは適合した。
【００９３】
５分毎に実行された２０秒のＣＲＤは、０．４ｍｌから始めて１．６ｍｌの水になるまで０．４ｍｌずつの増加を適用させた。結腸パラメータ及び認知の正確な測定を達成するために、各強度において２回膨満を繰り返し、各動物のデータは解析用に平均化した。各動物はＣＲＤの二重セットを施された。第一セットのＣＲＤ（０．４ｍＬ〜１．６ｍＬの水）後２０分で、薬剤を腹腔内（ｉ．ｐ，）へ投与し、第二セットのＣＲＤを実行した。第一及び第二セットのＣＲＤの間、行動反応を評価し比較した。
【００９４】
ＣＲＤに対する行動反応は、半定量的スコア（１）を用いた腹部離脱性反射（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｒｅｆｌｅｘ：ＡＷＲ）を測定することによって評価した。ＡＷＲは、内蔵運動反射と同様な不随意運動反射であるが、後者と比較した場合、付加的な感作を引き起こす腹筋壁に記録電極及びワイヤを移植する場合に腹部手術を必要としないという点で有意な利点を有している（Ｎｅｓｓ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ Ｇｅｂｈａｒｔ，Ｇ．Ｆ．（１９９０）Ｐａｉｎ４１：１６７−２３４を参照のこと、これはこの参照により本明細書に組み込まれるものである）。
【００９５】
ＡＷＲの測定は、盲検観察者による段階ＣＲＤに対する動物の反応の視覚的観察、及びＡＩ−Ｃｈａｅｒ，Ｅ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９：１２７６−８５（これはこの参照によって本明細書に組み込まれるものである）に以前記載されたような、ＣＲＤに対する行動反応がないということに対応する段階０、刺激の開始時の短時間の頭部運動とそれに続く不動に対応する段階１、ラットの腹部をプラットホームから持ち上げていないにも関わらず生じる腹筋の穏やかな収縮に対応する段階２、プラットホームからの腹部の持ち上げを伴う腹筋の強い収縮に対応する段階３、及び身体アーチ及び腹部の持ち上げや骨盤構造及び陰嚢の持ち上げによって明らかになる腹筋の重度の収縮に対応する段階４といった行動スケールに従ったＡＷＲスコアの割当値から成る。
【００９６】
結腸コンプライアンス及び感受性に対するトリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの効果は、総数１５匹の絶食ラットを用いて決定した。トリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの投与がＣＲＤによって誘導された痛みを軽減できるかどうかを調査するために、第一セットのＣＲＤ（溶媒処理）後に５匹のラットを１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．の用量のトリメブチン、６ｋｇ／ｍｌ ｉ．ｐ．の用量のニトロアルギニン、或いは１６ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．の用量のトリメブチンニトロアルギニナートで処理し、その後第二セットのＣＲＤを繰り返した。これらの実験の結果は図１（ａ）、２（ａ）及び３（ａ）に示した。
【００９７】
結腸平滑筋に対するトリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの工科を決定するために、ＣＲＤ中の結腸−肛門のコンプライアンスは、結腸内−肛門容積及び圧力から得て、ｍＬ／ｍｍＨｇとして表現した。これらの結果は、図１（ｂ）、２（ｂ）及び３（ｂ）に示した。
【００９８】
トリメブチンニトロアルギニナートの内蔵鎮痛効果におけるＮＯの役割を決定するために、トリメブチンニトロアルギニナート（１６ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）或いは溶媒の投与１０分前にラットをメチレンブルー（１ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）、Ｌ−ＮＡＭＥ（２５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）或いは溶媒で前処理するという実験を行った。その結果は図４（ａ）及び４（ｂ）に示した。
【００９９】
全てのデータは、平均±ＳＥＭとして示し、サンプルサイズは５匹ラット／群であり；データの統計学的比較はスチューデント対応ｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｐａｉｒｄ ｔ−ｔｅｓｔ）によって行った。５％以下の有意確率（ｐ値）は有意とみなし、アステリスクによって示した。
【０１００】
図１（ａ）、２（ａ）及び３（ａ）では、トリメブチンニトロアルギニナートは、結腸直腸膨満に対する反応における内蔵痛を軽減する点でトリメブチンマレイン酸或いはニトロアルギニンより効果的であることが示された。しかしながら、図１（ｂ）、２（ｂ）及び３（ｂ）に示されたように、どの化合物も直腸内圧力を軽減する点では特に効果的ではなかった。図４（ａ）及び４（ｂ）では、トリメブチンニトロアルギニナートの内蔵鎮痛効果は、一酸化窒素シンターゼの阻害剤（Ｌ−ＮＡＭＥ）での前処理或いは可溶性グアニル酸シクラーゼの阻害剤（メチレンブルー）での前処理によって大部分は消失することが示された。これらの結果によって、トリメブチンニトロアルギニナートからの一酸化窒素の放出及び可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激は、この化合物の内蔵鎮痛効果に著しく貢献することが示唆された。
【０１０１】
従って、トリメブチンニトロアルギニナートは、消化管の様々な炎症性症状に関連した腹痛、さらには増加内蔵痛覚（付随炎症を有する或いは有さない）によって特徴付けされる過敏性腸症候群、胃腸障害などの機能的胃腸疾患を治療するのに有用である。
【実施例１２】
【０１０２】
内蔵痛認知のラットモデルにおける、塩ＩＩＩであるトリメブチンチオカルバモイル安息香酸の効果対トリメブチン単独及びチオカルバモイル安息香酸単独の効果
各５匹ラットの群を溶媒、トリメブチンマレイン酸（１０ｍｇ／ｋｇ）で処理した、或いはトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（塩ＩＩＩ）或いはチオカルバモイル安息香酸単独で処理したという例外以外は、実施例１１で記載したように実験を行った。
【０１０３】
図５（ａ）及び５（ｂ）では、トリメブチンチオカルバモイル安息香酸は、結腸直腸膨満に対する反応における内蔵痛を軽減する点でトリメブチンマレイン酸或いはチオカルバモイル安息香酸より効果的であることが示された。
【０１０４】
従って、トリメブチンチオカルバモイル安息香酸は、消化管の様々な炎症性症状に関連した腹痛、さらには増加内蔵痛覚（付随炎症を有する或いは有さない）によって特徴付けされる過敏性腸症候群、胃腸障害などの機能的胃腸疾患を治療するのに有用である。
【実施例１３】
【０１０５】
４−（チオカルバモイル）安息香酸及び５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオンによるＨ２Ｓの産生
Ｈ２Ｓ産生に対する３つの異なる条件下でＨ２Ｓを産生するために５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）及び４−（チオカルバモイル）安息香酸（ＴＢＺ）という２つの化合物をテストした。特に、１ｍＭ濃度ＡＤＴ−ＯＨ及びＴＢＺから１時間以内で産生されたＨ２Ｓの濃度を測定した。Ｈ２Ｓ放出は３つの条件下でテストした：（ｉ）化合物が緩衝液中に存在する場合、（ｉｉ）化合物が肝臓ホモジネート中に存在する場合、及び（ｉｉｉ）化合物が、シスタチオニン−γ−リアーゼ（ＰＡＧ＝ＤＬ−プロパルギルグリシン；２ｍＭ）の阻害剤である酵素の活性を阻止するＨ２Ｓシンターゼの阻害剤と共に、肝臓ホモジネートに存在する場合、である。結果は図６に示した。アステリスク（＊）は、対応溶媒処理群と比較して有意な（ｐ<０．０５）増加を意味する。アルファ（α）は、ＰＡＧの存在下でのインキュベーションの結果としてのＨ２Ｓ合成の有意な減少を示すものである。
【技術分野】
【０００１】
関連文献の相互参照
本出願は、２００６年６月６日付けで出願された米国仮出願第６０／８０４，０６７号に対して優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、トリメブチン及びＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの独特な塩類、及びそれらの対応立体異性体に関するものであり、これらは一般的な内蔵痛の治療において、及び特に、例えば炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの腸疾患を患った患者における腹痛によって特徴付けされる症状の治療において有用である改善された鎮痛特性を有しているものである。
【背景技術】
【０００３】
トリメブチン［３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル及びそのマレイン酸塩］は、ＩＢＳを含む機能的腸疾患の治療に対して１９６９年から多くの国で使用されてきた。腹痛を軽減するトリメブチンの有効性は、様々な臨床研究において示されてきた（例えば、Ｇｈｉｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ（１９８６）Ｓｉｎｇｌｅ ｄｒｕｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｃｏｌｏｎ：Ｒｏｃｉｖｅｒｉｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｍａｌｅａｔｅ．Ｃｕｒｒ Ｔｈｅｒ Ｒｅｓ ３９：５４１−５４８を参照のこと）。トリメブチンは、機能的腸疾患、特にＩＢＳを患った患者における急性及び慢性腹痛の治療において、３００〜６００ｍｇ／日の範囲の用量で有効であるように改善された。さらに、腹痛を示す小児にも有効である。
【０００４】
胃腸管に対するトリメブチンの作用は一部、（ｉ）末梢性ミュー、カッパ及びデルタオピエート受容体に対するアゴニスト効果、及び（ｉｉ）モチリンなどの胃腸ペプチドの放出、及び血管作動性腸ペプチド、ガストリン及びグルカゴンを含む他のペプチドの放出の調節を介して仲介されていると考えられる。さらに、トリメブチンは、胃内容排出を促進し、腸内の伝播性運動複合体の早期相ＩＩＩを誘導し、結腸の収縮活動を調節する。最近、トリメブチンは動物における腸管内腔の膨満によって誘導される反射を軽減し、内蔵感受性を調節することも示された。
【０００５】
一酸化窒素（ＮＯ）は最近、血管内皮への白血球粘着の減少（Ｇａｕｔｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｖｉａ Ｐ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｓｐｌａｎｃｈｎｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２６７：Ｇ５６２−Ｇ５６８）、及び様々な走化性因子の産生の抑制（Ｗａｌｆｏｒｄ ａｎｄ Ｌｏｓｃａｌｚｏ（２００３）Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ １：２１１２−２１１８）を含む、多くの抗炎症性作用を発揮することが示された。更に、ＮＳＡＩＤｓ、アセトアミノフェン及びウルソデオキシコール酸などの特定の薬剤へのＮＯ放出部位の取り込みによって、これらの薬剤の活性を増強し、親薬剤と比較して毒性が減少することが示された。
【０００６】
硫化水素（Ｈ２Ｓ）は、抗炎症性効果を発揮する別のタイプのガスメディエーターである。最近、Ｈ２Ｓ放出因子は内蔵痛のモデルにおいて鎮痛作用を示すことが見出された（Ｄｉｓｔｒｕｔｔｉ ｅｔ ａｌ（２００５）、Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ ｅｘｅｒｔｓ ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＫＡＴＰ ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３１６：３２５−３３５）。さらに、Ｈ２Ｓは腸組織において平滑筋弛緩薬となることが示された（Ｔｅａｇｕｅ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｔｈｅ Ｓｍｏｏｔｈ Ｍｕｓｃｌｅ Ｒｅｌａｘａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｓｕｌｆｉｄｅ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｏｌｅ ｔｏ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１３９−１４５を参照のこと）。
【０００７】
本発明者らは本出願において、トリメブチン或いはＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの塩類及びそれらの対応立体異性体が様々なＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出、若しくは混合性ＮＯ及びＨ２Ｓ放出部位と共に形成された場合、トリメブチンの活性は有意に増強されることを示した。特に、トリメブチン及びＮ?モノ脱メチル化トリメブチンのこれらＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出塩類の投与は、トリメブチン（トリメブチンマレイン酸）或いはその代謝産物Ｎ−モノ脱メチル化トリメブチン単独と比較した場合、及びＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独と比較した場合、改善された鎮痛特性を生じる。これらの塩類は特に、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、糖尿病性胃不全麻痺、胃腸障害及びそれらと同等のものなどの腹痛によって特徴付けされる症状の治療に有用である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一般的に、トリメブチン（ＴＭＢ）及びその活性代謝産物Ｎ−脱メチル化トリメブチン（Ｎｏｒ−ＴＭＢ）の塩類、及びそれらの対応立体異性体である（Ｒ）−ＴＭＢ、（Ｓ）−ＴＭＢ、（Ｒ）−Ｎｏｒ−ＴＢＭ及び（Ｓ）−Ｎｏｒ−ＴＢＭが提供され、ここにおいて前記塩類はＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位を用いて形成されるものである。ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位と智に塩類を形成することによって、ＴＮＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢの抗侵害受容効果は驚く程増強された。
【０００９】
特に、本発明のＴＭＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢ塩類は、結腸直腸膨満に関連した内蔵痛の軽減において、ＴＭＢ及びＮｏｒ−ＴＭＢ単独、及びＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独と比べて優れている。ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位単独では、単独で投与した場合、結腸直腸膨満に関連した内蔵痛に対して有意な効果を有しているようには見えなかった。従って、本発明の一観点において、本発明の塩類は腹痛に関連する消化器系のあらゆる疾患に関連した痛みを軽減するのに有用である。
【００１０】
大まかに述べると、本発明の塩類は以下の一般式であり：
Ａ＋・Ｘ−（式Ｉ）
ここにおいて、Ａは、
【化１】
【００１１】
及びそれらの対応立体異性体であり；
Ｘは、ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位である。
【００１２】
好ましい実施形態において、Ｘは、以下の群：
【化２】
【００１３】
から選択されるものである。
【００１４】
無毒で有効的なＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位は、本発明において使用され得ることが理解される。
【００１５】
好ましい化合物は、以下の式で表される化合物である。
【００１６】
【化３】
【００１７】
【００１８】
【００１９】
【００２０】
更に、新規混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位は、前記一般式を有するように提供され、ニトロアルギニン−Ｒは好ましくは：
【化４】
【００２１】
であり、ここにおいてＲはＨ２Ｓ放出部位である。好ましい実施形態において、Ｒは、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン、システイン、及び４−（チオカルバモイル）安息香酸から成る群から選択されるものである。
【００２２】
更に、そのような治療を必要とする対象における内蔵痛を治療する方法が提供され、この方法は、内蔵痛を軽減する量の本発明の化合物を対象へ投与する工程を有するものである。１実施形態において、前記内蔵痛は腹痛である。別の実施形態において、前記腹痛は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１ａは、溶媒及びトリメブチンマレイン酸を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図１ｂは、溶媒及びトリメブチンマレイン酸を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図２】図２ａは、溶媒及びニトロアルギニン単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図２ｂは、溶媒及びニトロアルギニン単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図３】図３ａは、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。 図３ｂは、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図４ａ】図４ａは、Ｌ−ＮＡＭＥによる前処理をした或いはしていない、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図４ｂ】図４ｂは、Ｌ−ＮＡＭＥによる前処理をした或いはしていない、溶媒及びトリメブチンニトロアルギニナート（塩Ｉ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける結腸直腸圧（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図５ａ】図５ａは、トリメブチンマレイン酸及びトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（塩ＩＩＩ）を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図５ｂ】図５ｂは、溶媒及びチオカルバモイル安息香酸（ＴＢＺ）単独を用いた、内蔵痛認知のラットモデルにおける認知スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図６】図６は、４−（チオカルバモイル）安息香酸（ＴＢＺ）及び５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）のＨ２Ｓ産生を示した棒グラフを示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、本明細書に記載された好ましい実施形態に関して記載されるであろう。しかしながら、これらの実施形態は、本発明を例示する目的のためのものであり、請求項によって定義されたような本発明の観点を制限すると解釈されるものではないことが理解されるべきである。
【００２５】
本発明の化合物は、２つの活性部位である（１）ＴＭＢ或いはＮｏｒ−ＴＭＢ、若しくはそれらの立体異性体、及び（２）ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位、を含むものである。多くの場合において、本発明の塩類は、既知の開始物質及び試薬を用いて製造され得る。
【００２６】
本発明の化合物は、これに限定されるものではないが、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、感染性大腸炎（例えば、クロストリジウム・ディフィシル大腸炎、サルモネラ小腸炎、シゲラ感染症、エルシニア感染症、クリプトスポリジウム症、微胞子虫感染症、及びウイルス感染症などの偽膜性大腸炎）、放射線誘導性大腸炎、免疫低下宿主における大腸炎、糖尿病性胃不全麻痺及び胃腸障害を含む様々な疾患に関連した、腹痛などの内蔵痛の治療に利用される。
【００２７】
治療される特異的症状或いは疾患に依存して、対象は、本分野の当業者に予め決定されるような、あらゆる適切な治療上有効で安全な投与量で本発明の化合物を投与される。これらの化合物は、治療される前記対象の体重及び症状、及び選択された投与の特異的経路に依存して必要に応じて変更がなされるが、最も望ましくは１日約１〜約２０００ｍｇの範囲の投与量で、一回或いは分割用量で投与される。しかしながら、投与量レベルは、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約５〜９０ｍｇ／ｋｇの間の範囲、最も好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｋｇの間の範囲内であることが最も望ましい。しかしながら、治療される人の体重及び症状、及び前記薬物に対する個々の反応、さらには選択される薬学的処方のタイプ及び期間、そのような投与が実行される間のインターバルに依存して変更がなされる。いくつかの場合においては前述の範囲の下限以下の投与量レベルがより十分である一方、他の場合においてはより大量な投与量はあらゆる有害な副作用を引き起こさず使用されるが、そのような大用量はまず一日を通していくつかの小容量へ分割されるという条件である。
【００２８】
本発明の化合物はあらゆる薬学的処方の形態で投与され、その種類は投与の経路に依存するものである。これらの薬学的組成物は、適合性で薬学的に許容可能な賦形剤或いは溶媒を用いて、従来の方法によって調合され得る。そのような組成物の例としては、即時溶液、注入可能製剤、直腸、経鼻、眼球、膣内などの調合のための、カプセル、錠剤、経皮パッチ、薬用キャンディー、トローチ剤、スプレー、シロップ、粉末、顆粒、ゲル、エリキシル剤、坐薬、及びそれらと同等物を含む。投与の好ましい経路は、経口及び直腸経路である。
【００２９】
経口投与に対して、結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及びグリシンなどの様々な賦形剤を含有する錠剤は、デンプン（好ましくはコーン、ポテト或いはタピオカデンプン）、アルギン酸及び特定の複合ケイ酸などの様々な錠剤分解物質に加えて、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン及びアラビアゴムのような顆粒結合剤と共に使用する。付加的に、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクなどの潤滑剤は錠剤化目的のために使用され得る。同様な種類の固形組成物はさらにゼラチンカプセルにおける注入剤としても使用され；この関連における好ましい物質はさらに、ラクトース或いは乳糖、更には高分子量ポリエチレングリコールも含む。水性懸濁液及び／若しくはエリキシル剤が経口投与に望ましい場合、前記活性成分は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの様々な組み合わせなどの希釈剤と共に、甘味料或いは調味料、着色物質、及び望ましい場合乳化及び／若しくは懸濁剤と組み合わされる。
【００３０】
剤形は、即効型、徐放性、持続放出性、遅延放出性或いは標的遅延放出性に対して設計され得る。これらの用語の定義は本分野の当業者に既知である。更に、剤形放出性プロファイルは、ポリマー混合組成物、コーティングマトリックス組成物、多粒子組成物、コーティング多粒子組成物、イオン交換性樹脂ベース組成物、浸透ベース組成物、或いは生分解性ポリマー組成物によって影響を受ける。あらゆる理論に束縛されることを望むことなく、前記放出性は、有利な拡散、溶解、浸食、イオン交換、浸透或いはそれらの組み合わせから影響を受ける。
【００３１】
非経口的な投与に対して、セサミ或いはピーナッツオイルにおける、或いは水性プロピレングリコールにおける活性塩の溶液は使用され得る。前記水性溶液は、必要ならば適切に緩衝されるべきであり（好ましくはｐＨは８以上）、等張にするためにまず液体希釈剤を提供する。前記水性溶液は、静脈内注射目的に適切である。無菌状態での全てのこれら溶液の調合は、本分野の当業者によく知られている。
【００３２】
以下に非制限的な実施例が記載してあり、これは本分野の当業者が本発明を行い使用することを可能にするものである。
【実施例１】
【００３３】
トリメブチンニトロアルギニナート（Ｉ）の合成
【化５】
【００３４】
Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨ（０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，２Ｈ），７．１５（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２２．８，２６．４，２８．９，２９．１，４７．９，５６．４，６０．８，６４．４，６５．８，１０７．３，１２５．２，１２７．４，１２８．０，１２８．５，１４１．７，１４２．５，１５３．４，１５８．３，１６５．９，１７０．２．ｍｐ１８３°Ｃ（ｄｅｃ）。
【実施例２】
【００３６】
トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＩＩ）の合成
【化６】
【００３７】
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）の合成
１時間０℃でかき混ぜながら、５０ｍＬのジメチルホルムアミド中のＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（３．０ミリモル）の溶液へヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ミリモル）及びＤＣＣ（３．３ミリモル）を添加した。次にその反応混合物へ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（３．０ミリモル）を添加し、３時間０℃で、２４時間室温で機械的にかき混ぜた。濾過後、その濾液を減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した。次に得られた油状残留物を酢酸エチルに溶解し；有機層は鹹水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し前記溶媒を蒸発させた。未精製中間体ａは、ジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、前記溶媒を除去し、Ｈ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨを得た。未精製残留物としてのＴＦＡはジエチルエーテルで沈殿させ；得られた固形物は水に溶解させ、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白い固形物として２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００３８】
トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＩＩ）の合成
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次に、その溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例３】
【００３９】
トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ＩＩＩ）の合成
３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル４−チオカルバモイル安息香酸（トリメブチンチオカルバモイル安息香酸）の調合
【化７】
【００４０】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００４１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．７３（ｄｄ，２Ｈ），７．０１（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ）７．９３（ｄｄ，４Ｈ），９．６５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２８．９，５６．５，６０．８，６４．５，６５．７，１０７．１，１２５．３，１２７．４，１２８．１，１２８．６，１２９．５，１２９．７，１３２．３，１４１．８，１４２．５，１４８．５，１５３．４，１５４．８，１６５．９，１６９．４，１７２．５，１８８．６．
ｍｐ６６−６８°Ｃ（ｄｅｃ）。
【００４２】
４−（チオカルバモイル）安息香酸の合成
前記化合物は既に文献（Ｆａｉｒｆｕｌｌ，Ｅ．Ｓ．，Ｌｏｗｅ Ｊ．Ｌ．，Ｐｅａｋ Ｄ．Ａ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５２，７４２）で報告された手順に従って合成し、この文献はこの参照によって本明細書に組み込まれるものである。
【００４３】
【化８】
【００４４】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（２）
３ｇの４−シアノ安息香酸１（２０．４ミリモル）を４０ｍＬのピリジン中に溶解し、２．１ｍＬのトリエチルアミン（２０．４ミリモル）を添加した。乾燥水素スルフィドは、定常蒸気中の前記溶液を４時間通過させた。次に前記混合物を水へ注ぎ、固形物を濾過によって回収した。石油エーテルからの再結晶によって、２．５１ｇの純粋化合物２（６８％収率）を得た。
【００４５】
ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ １８２．２（Ｍ＋）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．９２（ｄｄ，４Ｈ），９．６８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．１２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１３．２５（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）
１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２７．３，１２９．６，１３２．０，１４８．５，１６９．４，１８８．６
ｍ．ｐ．２９６−２９８°Ｃ（ｄｅｃ．）。
【実施例４】
【００４６】
トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＶ）の合成
【化９】
【００４７】
炭酸４−ニトロ−フェニルエステル４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のＡＤＴ−ＯＨ（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。この反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａを濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００４８】
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次に、その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させた。未精製中間体を、ジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後溶媒を除去し、未精製残留物としてジエチルエーテルで沈殿させた産生物ｂを得た；この得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白い固形物として５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００４９】
トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＶ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその鼕液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例５】
【００５０】
トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｖ）の合成
【化１０】
【００５１】
炭酸４−ニトロ−フェニルエステル４−チオカルバモイル−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のｐ−ヒドロキシチオベンズアミド（１．０４モル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１４ミリモル）を添加した。その反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物はジエチルエーテルで処理した；産物ａは濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００５２】
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物としての産物ａを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくりと添加し、濾過によって回収された白い固形物として５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００５３】
トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｖ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びトリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例６】
【００５４】
Ｎ−ジメチルトリメブチンニトロアルギニナート（ＶＩ）の合成
【化１１】
【００５５】
Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨ（０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を透明になるまで室温でかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．４５−１．７５（ｍ， ４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，２Ｈ），７．０７（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ），７．５１（ｄ，２Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２２．８，２６．４，２８．９，２９．１，４７．９，５６．４，６０．８，６４．４，６５．８，１０７．３，１２５．２，１２７．４，１２８．０，１２８．５，１４１．７，１４２．５，１５３．４，１５８．３，１６５．９，１７０．２．
ｍ．ｐ．７８−８０°Ｃ（ｄｅｃ）。
【００５７】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンの合成
前記混合物は文献（Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．，Ｆｉｇａｄ?ｒｅ Ｂ．，Ｓａｉｖｉｎ Ｓ．，Ｈｏｕｉｎ Ｇ．，Ｃｈｏｍａｒｄ Ｊ．Ｍ．，Ｃａｈｉｅｚ Ｇ．Ａｒｚｎｅｉｍ．−Ｆｏｒｓｃｈ．／Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．２０００（５０），５４４）に報告された手順にわずかな修正を加えて合成した。
【００５８】
【化１２】
【００５９】
フェニルグリシンエチルエステル塩酸（２）
【化１３】
【００６０】
２２ｍＬのＳＯＣｌ２を無水エタノール中の３０ｇのフェニルグリシン１（１９８．５ミリモル）の溶液へ液滴で添加した。穏やかな還流が自発的に生じ、それは３時間維持されていた。その反応によって室温まで冷却することができ、一晩中かき混ぜた。溶媒を真空下で除去し、白い粉末として４１．８ｇの２を得た（９８％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ １７９．８（Ｍ＋）。
【００６１】
エチルＮ−（フェニルメチレン）グリシナート（３）
【化１４】
【００６２】
１０．６ｇのエチルフェニルグリシナート塩酸２（４９．３ミリモル）の混合物に、１００ｍＬのジクロロメタン、５ｍ；のベンズアルデヒド（４９．２ミリモル）及び３０ｇの硫酸マグネシウム（２４９．２ミリモル）を室温で添加し、窒素雰囲気下で２１．２５ｍＬのトリエチルアミン（１５２．４６ミリモル）を添加した。１７時間かき混ぜた後、不均一な反応混合物はセライトを通して濾過し、その固形物を１００ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた粘稠性油は８０ｍＬのジエチルエーテル及び８０ｍＬの水で溶解するまでかき混ぜた。デカンテーション後、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させた。イミン（ｉｍｍｉｎｅ）エステル３（１２．４ｇ、９４％収率）を淡黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２６８．３（Ｍ＋）。
【００６３】
エチル２−フェニル−２−（Ｎ−フェニルメチレン）−ブタン酸（４）
【化１５】
【００６４】
窒素雰囲気下で、６４ｍＬの無水ＴＨＦ中の１２．３９ｇ（４６．４ミリモル）の３の溶液を、かき混ぜながら２．０４の水素化ナトリウム（６０％油分散、８５ミリモル）、１９２ｍｇのＣｕＣｌ２及び１２８ｍＬの無水ＴＨＦへ液滴で添加した。室温で９時間後、４．６６ｍＬ（５７．７ミリモル）のエチルヨウ素をその反応混合物へ素早く添加した。１８時間かき混ぜ続け、０．８６ｍＬの無水エタノールをその反応混合物へ注意しててんかした。かき混ぜている間、反応色が黄色〜赤〜オレンジへ変わり、次に緑に変わった。真空下でのその反応混合物の濃縮後、９５．８ｍＬのジエチルエーテル及び１６０ｍＬの水を添加し、結果生じた混合物を１０分かき混ぜ、次にセライトを通して濾過した。デカンテーション後、有機層を水で３回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次にジエチルエーテルを減圧下で蒸発させ、５．８２ｇの４（４３％収率）を供給した。黄色−オレンジ油として得られた未精製産物は、更なる精製なしで使用するのに十分純粋であった。ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｅ２９６．１（Ｍ＋）。
【００６５】
エチル２−アミノ−２−フェニルブタノエート塩酸（５）
【化１６】
【００６６】
５．８ｇの４（１９．７３ミリモル）、１７．６ｍＬのＴＨＦ、３５．１７ｍＬのジエチルエーテル、４４ｍＬの水及び２．６４ｍＬの濃縮ＨＣｌを室温で２４時間かき混ぜた。溶媒を真空下で反応混合物から除去し、結果生じた水性溶液をジエチルエーテルで２回洗浄した。次に水を減圧下で蒸発させ、オレンジの油として３．８ｇの５を得た（７９％収率）。
【００６７】
エチル２−アミノ−２−フェニルブタノエート（６）
【化１７】
【００６８】
未精製産物５を２２ｍの無水ＴＨＦに溶解し、２．６４ｍＬのトリエチルアミンを添加した。３０分かき混ぜた後、その混合物はセライトを通して濾過し、その固形物を１００ｍＬの無水ジエチルエーテルで洗浄した。回転エバポレータを使用してその溶媒を濃縮し、青色の油として２．４９ｇの６を得た（７７％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２０８（Ｍ＋）。
【００６９】
エチル２−ホルミルアミノ−２−フェニルブタノエート（７）
【化１８】
【００７０】
１２．７２ｍＬのギ酸及び２５．３８ｍＬの無水酢酸を液滴で、かき混ぜながら２．４９ｇ（１２．０３ミリモル）のアミン６へ添加した。室温で１５時間後、溶媒を減圧下で除去し、緑色の粘稠性油として３．０９ｇの７を得た（１００％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ２３６（Ｍ＋）。
【００７１】
２−メチルアミノ−２−フェニルブタノール（８）
【化１９】
【００７２】
３０ｍＬの無水ＴＨＦ中の９００ｍｇ（２３．７１ミリモル）の水素リチウムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４）の懸濁液へ液滴で、１８ｍＬの無水ＴＨＦ中の３．０９ｇ（１３．１５ミリモル）の７（以前調合した）の溶液を添加した。還流下で４時間後、その反応混合物は室温まで冷却され、付加的量の水素リチウムアルミニウム（９００ｍｇ）を導入した。還流は４時間維持し、硫酸マグネシウムの水性飽和溶液を勢い良くかき混ぜながら、沈殿が形成されるまで−１０℃でゆっくり添加した。その固形物を濾過し、ＴＨＦで数回洗浄した。水性溶液が得られるまで、有機溶媒を減圧下で蒸発させた。その溶液を１００ｍＬのジエチルエーテルへ添加して、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒の蒸発によって、黄色の油として１．８４ｇの８を得た（７８％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ１８０．１（Ｍ＋）。
【００７３】
（２−メチルアミノ−２−フェニルブチル）３，４，５−トリメトキシ安息香酸（Ｎ−脱メチル化トリメブチン（９）
【化２０】
【００７４】
２８ｍＬの無水ＴＨＦ中の１．８４ｇの８（１０．３ミリモル）の溶液へ液滴で、４．１１ｍＬのｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５モル／Ｌ）を−７８℃で添加した。１５分後、１５．８ｍＬの無水ＴＨＦ中の２．３１ｇ（１０．０１ミリモル）の３，４，５−トリメトキシベンゾイル塩化物の溶液を添加した。次にその反応混合物を−３０℃（ｃａ１時間）まで暖め、１９ｍＬの酢酸を注意しながら添加した。溶媒を真空下で除去し、５５ｍＬのジエチルエーテル及び５５ｍＬの水を以前得られた油へ添加した。完全に溶解するまでかき混ぜた後、結果生じた混合物をデカンテーションし、水性層を固形Ｎａ２ＣＯ３でアルカリ化し、ジエチルエーテルで再抽出した。有機層は炭酸ナトリウムの飽和水性溶液及び鹹水で２回洗浄し、次に硫酸ナトリウムの上で乾燥させた。ジエチルエーテルを真空下で蒸発させ、エステル９をシリカゲルカラム（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン、７：３）上のクロマトグラフィによって精製し、淡黄色の油として１．４ｇの純粋Ｎ−脱メチル化トリメブチン９を得た（４９％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｅ３７４．１（Ｍ＋）。
【００７５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１．７５−１．９（ｍ，２Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，６Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．５０（ｄｄ，２Ｈ），７．０７−７．４４（ｍ，７Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．４，２８．５，２８．６，５５．９，６０．１，６１．１，６６．３，１００．５，１２６．５，１２７．０，１２９．３，１２８．０，１４２．０，１４２．５，１５２．７，１６５．６。
【実施例７】
【００７６】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＶＩＩ）
【化２１】
【００７７】
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）
５０ｍＬのジメチルホルムアミド中のＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（３．０ミリモル）の溶液へ、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ミリモル）及びＤＣＣ（３．３ミリモル）を１時間０℃でかき混ぜながら添加した。その反応混合物へ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢｕ（３．０ミリモル）を添加して、０℃で３時間、室温で２４時間機械的にかき混ぜた。濾過後、濾過物を減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した。得られた油状残留物を酢酸エチルへ溶解した；有機層は鹹水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。未精製中間体ａをジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、Ｈ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨを得た。未精製残留物としてのＴＦＡをジエチルエーテルで沈殿させた；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００７８】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ＶＩＩ）
２−（２−アミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−５−ニトログアニジノ−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍＬ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例８】
【００７９】
３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（メチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル４−チオカルバモイル安息香酸（Ｎ−脱メチル化トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ＶＩＩＩ））
【化２２】
【００８０】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（０．１モル）及び脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物をエチルアルコール（２０ｍＬ）及びアセトニトリル（２０ｍＬ）中に溶解し、次に水（２００ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００８１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７２（ｔ，３Ｈ），１．７０−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），２．９０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｓ，９Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，２Ｈ），７．０７（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｔ，１Ｈ），７．３３（ｔ，２Ｈ），７．５２（ｄ，２Ｈ）７．９３（ｄｄ，４Ｈ），９．６３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７，２８．７，５６．５，６０．５，６４．６，６５．８，１０７．２，１２５．５，１２７．２，１２８．２，１２８．６，１２９．５，１２９．４，１３２．５，１４１．９，１４２．４，１４８．５，１５３．５，１５４．７，１６５．７，１６９．４，１７２．５，１８８．６．
ｍｐ６５−６７°Ｃ（ｄｅｃ．）。
【実施例９】
【００８２】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＸ）の合成
【化２３】
【００８３】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のＡＤＴ−ＯＨ（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。その反応混合物を１０時間室温でかき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって、望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａを濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００８４】
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢＵ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を２０時間室温でかき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物として産物ｂを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００８５】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンＡＤＴ−ニトロアルギニナート（ＩＸ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニル−アミノ］−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍｌ）及びエチルアルコール（２０ｍＬ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【実施例１０】
【００８６】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミドニトロ−アルギニナート（Ｘ）の合成
【化２４】
【００８７】
カルボン酸４−ニトロ−フェニルエステル４−チオカルバモイル−フェニルエステル（ａ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のｐ−ヒドロキシチオベンズアミド（１．０４ミリモル）のかき混ぜた懸濁液へ、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１６ミリモル）及び４−ニトロフェニルクロロギ酸（１．１５ミリモル）を添加した。その反応混合物を室温で１０分かき混ぜた。薄層クロマトグラフィによって望ましい産物の形成が完了したことが示された。溶媒を除去し、その残留物をジエチルエーテルで処理した；産物ａは濾過によって回収し、更なる精製をせずに使用した（収率８１％）。
【００８８】
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）の合成
５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のａ（１．０４ミリモル）の溶液へ４−ジメチルアミノピリジン（１．１６ミリモル）及びＨ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯｔＢＵ（１．０２ミリモル）を添加し、その溶液を室温で２０時間かき混ぜた。次にその反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。未精製中間体をジクロロメタン（ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ）中のトリフルオロ酢酸の溶液で処理した。１時間後、溶媒を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させた未精製残留物として産物ｂを得た；得られた固形物は水に溶解し、１Ｎ ＮａＯＨをゆっくり添加し、濾過によって回収された白色の固形物として５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ）を得た。
【００８９】
Ｎ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｘ）の合成
５−ニトログアニジノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−ペンタン酸（ｂ；０．１モル）及びＮ−脱メチル化トリメブチン（０．１モル）の混合物へ、水（２００ｍｌ）及びエチルアルコール（２０ｍｌ）を添加し、結果生じた懸濁液を室温で透明になるまでかき混ぜた。次にその溶液を凍結させ、望ましい塩（定量的収率）を供給するように凍結乾燥させた。
【００９０】
化合物のテスト
【実施例１１】
【００９１】
内蔵痛認知のラットモデルにおける、塩Ｉであるトリメブチンニトロアルギニナートの効果対トリメブチン単独及びニトロアルギニン単独の効果の比較
過敏性腸症候群の前臨床モデルである内蔵痛認知のラットモデルは、以下の実施例で使用した。ラット（雄、Ｗｉｓｔａｒ、２００〜２５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｍｏｎｚａ、イタリア）から購入）はプラスティックケージに収容し、１２時間明／暗サイクルで７：００ＡＭにライトが付くという調節条件下で維持した。水道水及び標準実験室固形飼料は自由に与えた。実験前、ラットには個々に、２〜３日間プレキシガラスにおいて１日２〜３時間費やして訓練させた。これによってラットは移動−制限環境に適用できた。食べ物は結腸直腸膨満（ＣＲＤ）記録を実行する前１２時間は控えた。実験は覚醒ラットで行い、観察者が各動物へ投与した薬剤の正体が分からないような盲検で行った。
【００９２】
テスト当日、ラットはエーテル吸引で鎮静させ、２ｃｍ長ラテックスバルーンを肛門端から２ｃｍの直腸内に挿入し、尾の基部で固定した。そのバルーンは二重バレルカニューレを介して、コンピュータ（ＰｏｗｅｒＬａｂ ＰＣ，Ａ．Ｄ．Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，マサチューセッツ州、米国）によって直腸圧力を連続的にモニタリングする圧力トランスデューサー、及び前記バルーンの膨張／収縮に対するシリンジへ連結した。次に上昇Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ（商標）プラットホーム上の小さなケージ（２０ｘ８ｘ８ｃｍ）にラットを収容し、１時間覚醒及び適用させた。鎮静から回復した後、動物にＣＲＤ手順を施し、行動反応をテストした。実験前の夜、前記バルーンは膨張させ一晩放置したので、ラテックスは伸展し前記バルーンは適合した。
【００９３】
５分毎に実行された２０秒のＣＲＤは、０．４ｍｌから始めて１．６ｍｌの水になるまで０．４ｍｌずつの増加を適用させた。結腸パラメータ及び認知の正確な測定を達成するために、各強度において２回膨満を繰り返し、各動物のデータは解析用に平均化した。各動物はＣＲＤの二重セットを施された。第一セットのＣＲＤ（０．４ｍＬ〜１．６ｍＬの水）後２０分で、薬剤を腹腔内（ｉ．ｐ，）へ投与し、第二セットのＣＲＤを実行した。第一及び第二セットのＣＲＤの間、行動反応を評価し比較した。
【００９４】
ＣＲＤに対する行動反応は、半定量的スコア（１）を用いた腹部離脱性反射（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｒｅｆｌｅｘ：ＡＷＲ）を測定することによって評価した。ＡＷＲは、内蔵運動反射と同様な不随意運動反射であるが、後者と比較した場合、付加的な感作を引き起こす腹筋壁に記録電極及びワイヤを移植する場合に腹部手術を必要としないという点で有意な利点を有している（Ｎｅｓｓ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ Ｇｅｂｈａｒｔ，Ｇ．Ｆ．（１９９０）Ｐａｉｎ４１：１６７−２３４を参照のこと、これはこの参照により本明細書に組み込まれるものである）。
【００９５】
ＡＷＲの測定は、盲検観察者による段階ＣＲＤに対する動物の反応の視覚的観察、及びＡＩ−Ｃｈａｅｒ，Ｅ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９：１２７６−８５（これはこの参照によって本明細書に組み込まれるものである）に以前記載されたような、ＣＲＤに対する行動反応がないということに対応する段階０、刺激の開始時の短時間の頭部運動とそれに続く不動に対応する段階１、ラットの腹部をプラットホームから持ち上げていないにも関わらず生じる腹筋の穏やかな収縮に対応する段階２、プラットホームからの腹部の持ち上げを伴う腹筋の強い収縮に対応する段階３、及び身体アーチ及び腹部の持ち上げや骨盤構造及び陰嚢の持ち上げによって明らかになる腹筋の重度の収縮に対応する段階４といった行動スケールに従ったＡＷＲスコアの割当値から成る。
【００９６】
結腸コンプライアンス及び感受性に対するトリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの効果は、総数１５匹の絶食ラットを用いて決定した。トリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの投与がＣＲＤによって誘導された痛みを軽減できるかどうかを調査するために、第一セットのＣＲＤ（溶媒処理）後に５匹のラットを１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．の用量のトリメブチン、６ｋｇ／ｍｌ ｉ．ｐ．の用量のニトロアルギニン、或いは１６ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．の用量のトリメブチンニトロアルギニナートで処理し、その後第二セットのＣＲＤを繰り返した。これらの実験の結果は図１（ａ）、２（ａ）及び３（ａ）に示した。
【００９７】
結腸平滑筋に対するトリメブチンマレイン酸、ニトロアルギニン及びトリメブチンニトロアルギニナートの工科を決定するために、ＣＲＤ中の結腸−肛門のコンプライアンスは、結腸内−肛門容積及び圧力から得て、ｍＬ／ｍｍＨｇとして表現した。これらの結果は、図１（ｂ）、２（ｂ）及び３（ｂ）に示した。
【００９８】
トリメブチンニトロアルギニナートの内蔵鎮痛効果におけるＮＯの役割を決定するために、トリメブチンニトロアルギニナート（１６ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）或いは溶媒の投与１０分前にラットをメチレンブルー（１ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）、Ｌ−ＮＡＭＥ（２５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）或いは溶媒で前処理するという実験を行った。その結果は図４（ａ）及び４（ｂ）に示した。
【００９９】
全てのデータは、平均±ＳＥＭとして示し、サンプルサイズは５匹ラット／群であり；データの統計学的比較はスチューデント対応ｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｐａｉｒｄ ｔ−ｔｅｓｔ）によって行った。５％以下の有意確率（ｐ値）は有意とみなし、アステリスクによって示した。
【０１００】
図１（ａ）、２（ａ）及び３（ａ）では、トリメブチンニトロアルギニナートは、結腸直腸膨満に対する反応における内蔵痛を軽減する点でトリメブチンマレイン酸或いはニトロアルギニンより効果的であることが示された。しかしながら、図１（ｂ）、２（ｂ）及び３（ｂ）に示されたように、どの化合物も直腸内圧力を軽減する点では特に効果的ではなかった。図４（ａ）及び４（ｂ）では、トリメブチンニトロアルギニナートの内蔵鎮痛効果は、一酸化窒素シンターゼの阻害剤（Ｌ−ＮＡＭＥ）での前処理或いは可溶性グアニル酸シクラーゼの阻害剤（メチレンブルー）での前処理によって大部分は消失することが示された。これらの結果によって、トリメブチンニトロアルギニナートからの一酸化窒素の放出及び可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激は、この化合物の内蔵鎮痛効果に著しく貢献することが示唆された。
【０１０１】
従って、トリメブチンニトロアルギニナートは、消化管の様々な炎症性症状に関連した腹痛、さらには増加内蔵痛覚（付随炎症を有する或いは有さない）によって特徴付けされる過敏性腸症候群、胃腸障害などの機能的胃腸疾患を治療するのに有用である。
【実施例１２】
【０１０２】
内蔵痛認知のラットモデルにおける、塩ＩＩＩであるトリメブチンチオカルバモイル安息香酸の効果対トリメブチン単独及びチオカルバモイル安息香酸単独の効果
各５匹ラットの群を溶媒、トリメブチンマレイン酸（１０ｍｇ／ｋｇ）で処理した、或いはトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（塩ＩＩＩ）或いはチオカルバモイル安息香酸単独で処理したという例外以外は、実施例１１で記載したように実験を行った。
【０１０３】
図５（ａ）及び５（ｂ）では、トリメブチンチオカルバモイル安息香酸は、結腸直腸膨満に対する反応における内蔵痛を軽減する点でトリメブチンマレイン酸或いはチオカルバモイル安息香酸より効果的であることが示された。
【０１０４】
従って、トリメブチンチオカルバモイル安息香酸は、消化管の様々な炎症性症状に関連した腹痛、さらには増加内蔵痛覚（付随炎症を有する或いは有さない）によって特徴付けされる過敏性腸症候群、胃腸障害などの機能的胃腸疾患を治療するのに有用である。
【実施例１３】
【０１０５】
４−（チオカルバモイル）安息香酸及び５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオンによるＨ２Ｓの産生
Ｈ２Ｓ産生に対する３つの異なる条件下でＨ２Ｓを産生するために５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）及び４−（チオカルバモイル）安息香酸（ＴＢＺ）という２つの化合物をテストした。特に、１ｍＭ濃度ＡＤＴ−ＯＨ及びＴＢＺから１時間以内で産生されたＨ２Ｓの濃度を測定した。Ｈ２Ｓ放出は３つの条件下でテストした：（ｉ）化合物が緩衝液中に存在する場合、（ｉｉ）化合物が肝臓ホモジネート中に存在する場合、及び（ｉｉｉ）化合物が、シスタチオニン−γ−リアーゼ（ＰＡＧ＝ＤＬ−プロパルギルグリシン；２ｍＭ）の阻害剤である酵素の活性を阻止するＨ２Ｓシンターゼの阻害剤と共に、肝臓ホモジネートに存在する場合、である。結果は図６に示した。アステリスク（＊）は、対応溶媒処理群と比較して有意な（ｐ<０．０５）増加を意味する。アルファ（α）は、ＰＡＧの存在下でのインキュベーションの結果としてのＨ２Ｓ合成の有意な減少を示すものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：
Ａ＋・Ｘ−
の化合物であって、
Ａは、
【化２５】
及びそれらの対応立体異性体であり；
Ｘは、ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出部位、或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位である、化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、Ｘは、
【化２６】
から成る群から選択されるものである。
【請求項３】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項４】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項５】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｔｈｉｏｃａｒｂａｍｏｙｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ）である。
【請求項６】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチン５−フェニル−１，２−ジチオン−３−チオン−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ５−ｐｈｅｎｙｌ−１，２−ｄｉｔｈｉｏｎｅ−３−ｔｈｉｏｎｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項７】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｉｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項８】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項９】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１０】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｔｈｉｏｃａｒｂａｍｏｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）である。
【請求項１１】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチン５−フェニル−１，２−ジチオン−３−チオン−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ５−ｐｈｅｎｙｌ−１，２−ｄｉｔｈｉｏｎｅ−３−ｔｈｉｏｎｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１２】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｉｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか１つに記載された化合物及び薬学的に許容可能な賦形剤或いは担体を有する、薬学的組成物。
【請求項１４】
治療を必要とする対象における内蔵痛を治療する方法であって、
請求項１〜１０のいずれかに記載された化合物を内蔵痛が軽減する量で前記対象に投与する工程を有する、方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記内蔵痛は腹痛である。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法において、前記腹痛は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【請求項１７】
一般式ニトロアルギニン−Ｒを有する化合物であって、Ｒは、トリメブチン及びＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの塩を調合するためのＨ２Ｓ−放出部位である、化合物。
【請求項１８】
請求項１７記載の化合物において、前記Ｒは、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン、システイン、及び４−（チオカルバモイル）安息香酸から成る群から選択されるものである。
【請求項１９】
治療を必要とする対象における内蔵痛を治療するための薬物の調合における、請求項１〜１０に記載された化合物の使用。
【請求項２０】
請求項１９記載の使用において、前記内蔵痛は腹痛である。
【請求項２１】
請求項２０記載の使用において、前記腹痛は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【請求項１】
一般式：
Ａ＋・Ｘ−
の化合物であって、
Ａは、
【化２５】
及びそれらの対応立体異性体であり；
Ｘは、ＮＯ−放出、Ｈ２Ｓ−放出部位、或いは混合性ＮＯ−及びＨ２Ｓ−放出部位である、化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、Ｘは、
【化２６】
から成る群から選択されるものである。
【請求項３】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項４】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項５】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンチオカルバモイル安息香酸（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｔｈｉｏｃａｒｂａｍｏｙｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ）である。
【請求項６】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチン５−フェニル−１，２−ジチオン−３−チオン−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ５−ｐｈｅｎｙｌ−１，２−ｄｉｔｈｉｏｎｅ−３−ｔｈｉｏｎｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項７】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はトリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｉｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項８】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項９】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンシステイニル−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１０】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンチオカルバモイル安息香酸（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｔｈｉｏｃａｒｂａｍｏｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）である。
【請求項１１】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチン５−フェニル−１，２−ジチオン−３−チオン−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ５−ｐｈｅｎｙｌ−１，２−ｄｉｔｈｉｏｎｅ−３−ｔｈｉｏｎｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１２】
請求項２記載の化合物において、前記化合物はＮ−脱メチル化トリメブチンｐ−ヒドロキシチオベンズアミド−ニトロアルギニナート（Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｉｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ−ｎｉｔｒｏａｒｇｉｎｉｎａｔｅ）である。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか１つに記載された化合物及び薬学的に許容可能な賦形剤或いは担体を有する、薬学的組成物。
【請求項１４】
治療を必要とする対象における内蔵痛を治療する方法であって、
請求項１〜１０のいずれかに記載された化合物を内蔵痛が軽減する量で前記対象に投与する工程を有する、方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記内蔵痛は腹痛である。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法において、前記腹痛は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【請求項１７】
一般式ニトロアルギニン−Ｒを有する化合物であって、Ｒは、トリメブチン及びＮ−モノ脱メチル化トリメブチンの塩を調合するためのＨ２Ｓ−放出部位である、化合物。
【請求項１８】
請求項１７記載の化合物において、前記Ｒは、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン、システイン、及び４−（チオカルバモイル）安息香酸から成る群から選択されるものである。
【請求項１９】
治療を必要とする対象における内蔵痛を治療するための薬物の調合における、請求項１〜１０に記載された化合物の使用。
【請求項２０】
請求項１９記載の使用において、前記内蔵痛は腹痛である。
【請求項２１】
請求項２０記載の使用において、前記腹痛は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺、及び胃腸障害などの胃腸疾患に起因するものである。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【公表番号】特表２００９−５３９７７７（Ｐ２００９−５３９７７７Ａ）
【公表日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１３５２４（Ｐ２００９−５１３５２４）
【出願日】平成１９年６月６日（２００７．６．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００７／００１００８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０６１１
【国際公開日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【出願人】（５０７３９１１３３）アンタイブ セラピューティクス インク． (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月６日（２００７．６．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００７／００１００８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０６１１
【国際公開日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【出願人】（５０７３９１１３３）アンタイブ セラピューティクス インク． (4)
【Ｆターム（参考）】
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