ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤
本発明は、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有してなる肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤の提供を目的とする。
本発明は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤である。本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有効である。
本発明は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤である。本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有効である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
過食、栄養過多、運動不足などにより、肥満人口は増加の一途を辿っている。肥満者、特に内臓脂肪が蓄積した内臓脂肪型肥満の肥満者では、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病を合併しており、大きな社会問題である。また、肥満者がその体重を５〜１０％減少させると、合併している生活習慣病の症状が軽減又は改善することから、肥満の予防及び／又は改善は、生活習慣病の予防及び／又は改善に繋がる。
【０００３】
アドレナリン受容体は、交感神経から遊離されるアドレナリンやノルアドレナリンなどのカテコールアミン作動薬と結合する受容体であり、カテコールアミン作動薬に対する感受性によりα受容体とβ受容体の２種類に分けられる。すなわち、αアドレナリン受容体は、ノルアドレナリン≧アドレナリン＞ドーパミン＞イソプロテレノールの順に感受性を示し、βアドレナリン受容体は、イソプロテレノール＞アドレナリン≧ノルアドレナリン＞ドーパミンの順に感受性を示す。
【０００４】
βアドレナリン受容体には、β１、β２、β３受容体があり、近年β４受容体の存在も示唆されている。それぞれの受容体に対するアゴニスト（作動薬）の作用として、β１アドレナリン受容体アゴニストは心拍数増加作用、β２アドレナリン受容体アゴニストは気管支平滑筋弛緩作用、β３アドレナリン受容体アゴニストは熱産生の活性化作用及び脂肪分解の促進作用があることが知られている。このことから、肥満などの生活習慣病の予防及び／又は改善には、β３アドレナリン受容体アゴニストが有効である。
【０００５】
β３アドレナリン受容体アゴニストは、１９８４年に初めて発見され、動物実験において熱産生や脂肪分解による抗肥満作用、抗糖尿病作用が認められた。しかし、これらの作用はヒトにおいて微弱であった。この効果差の原因が、１９８９年になり、マウスやラットなどの齧歯類とヒトのβ３アドレナリン受容体の化学構造上の種差であることが明確になった（非特許文献１及び２を参照）。これらのことから、β１やβ２よりもβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高く、且つ、ヒトのβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高いアゴニスト、すなわち選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストが、肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であり、その開発が望まれている。
【０００６】
最近、選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストとして幾つかの化合物が知られており（非特許文献１を参照）、臨床試験において抗肥満薬又は抗糖尿病薬としての効果が確認されてきている。しかし、食経験のある天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストは未だ知られていない。
【０００７】
ところで、キンレンカは、キンポウゲ科キンバイソウ属（Ｔｒｏｌｌｉｕｓ）の植物であり、１０種あまりあるキンバイソウの仲間を中国では金蓮花（キンレンカ）と称し、その花は解毒作用や扁桃炎などに効果があり、茶花として使用されている（非特許文献３を参照）。
【０００８】
サンヤクは、ヤマノイモ科ヤマノイモ属（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）の植物であり、その多肉根は古来より強壮、滋養などの効果があることが知られており、民間では夜尿、遺精、盗汗などに用いられている（非特許文献４を参照）。
【０００９】
サンリョウは、ミクリ科ミクリ属（Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ）の植物であり、荊三稜と黒三稜に大別される。その根茎は、中国、特に東北地方で近縁種のヒメミクリＳｐａｒｇａｎｉｕｍ ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｍ Ｍａｘｉｍ．、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．、Ｓ．ｍｉｎｉｍｕｍ Ｈｉｌｌ．の根茎とともに荊三稜（ケイサンリョウ）と称され、中国淅江省ではＳ．ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｕｒｃｚ．の根茎も荊三稜と称している。なお荊三稜は元来、カヤツリグサ科（Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ）のウキヤガラＳｃｉｒｐｕｓ ｙａｇａｒａ Ｏｈｗｉの根茎である。これらは通経、催乳薬の一つとして利用されている。（非特許文献４を参照）。
【００１０】
キンカランは、ツヅラフジ科ティノスポラ属（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ）の植物である。その塊根の水又はエタノールエキスは、ウサギ、マウスに対し経口投与により胸腺萎縮効果、抗副腎皮質ホルモン様作用及び結核桿菌に対して抑制作用がある。中国の臨床では、流感、急性扁桃腺炎、肺炎、胆道感染、皮膚化膿感染などによる発熱に対して解熱作用、消炎鎮痛作用があるが、副作用は少ないと報告されている。よって、キンカランは解熱、解毒薬として、急・慢性扁桃腺炎、急性咽喉炎、口腔炎、耳下腺炎、乳腺炎、虫垂炎、急・慢性腸炎、胃炎、でき物などに用いられている。また獣医用薬として双鵝症、こ脹症、炭疸病などに用いられている（非特許文献４を参照）。
【００１１】
しかし、キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランが、ヒトβ３アドレナリン受容体作用を有していること、並びに、ヒトにおいて肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であることは、未だ知られていない。
【非特許文献１】高倉康人、吉田俊秀，日本薬理学雑誌，１１８，３１５〜３２０，２００１
【非特許文献２】Ｃ．Ｗｅｙｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２５，１１〜２１，１９９９
【非特許文献３】堀田満（編集代表），世界有用植物事典，平凡社
【非特許文献４】三橋博，原色牧野和漢薬草大圖鑑，北隆館
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランを、溶媒、特に水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物、キンカラン抽出物が、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤に関する。
また、本発明は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、生活習慣病の予防及び／又は改善剤に関する。
さらに、本発明は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与して、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法に関する。
【００１５】
以下に、本発明について詳しく説明する。
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするものである。
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、抽出物そのものでもよいし、抽出物に公知の担体や助剤、飲食物材料、薬剤学的に許容される他の製剤素材などを添加した組成物でもよい。
このように、当該ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、食経験のある天然素材由来である。
【００１６】
本発明に使用するキンレンカ（金蓮花）は、キンポウゲ科キンバイソウ属（Ｔｒｏｌｌｉｕｓ）の植物の花である。本発明において、キンバイソウ属のいずれの品種も使用できるが、Ｔｒｏｌｌｉｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｂｇｅ．の花が好ましい。
【００１７】
本発明に使用するサンヤク（山薬）は、別名ジネンジョウといい、ヤマノイモ科ヤマノイモ属（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）の植物の多肉根であり、水洗後、皮を除いて乾燥したものを使用する。本発明において、ヤマノイモ属のいずれの品種も使用できるが、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．の多肉根が好ましい。
【００１８】
本発明に使用するサンリョウ（三稜）は、ミクリ科ミクリ属（Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ）の植物の根茎である。近縁種のヒメミクリＳｐａｒｇａｎｉｕｍ ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｍ Ｍａｘｉｍ．、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．、Ｓ．ｍｉｎｉｍｕｍ Ｈｉｌｌ．、Ｓ．ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｕｒｃｚ．、カヤツリグサ科（Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ）のウキヤガラＳｃｉｒｐｕｓ ｙａｇａｒａ Ｏｈｗｉのうちいずれの品種も使用できるが、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．の根茎が好ましい。
【００１９】
本発明に使用するキンカラン（金果欖）は、ツヅラフジ科ティノスポラ属（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ）の植物の塊根である。本発明において、ティノスポラ属のいずれの品種も使用できるが、Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ ｃａｐｉｌｌｉｐｅｓ Ｇａｇｎｅｐ．の塊根が好ましい。
【００２０】
本発明に使用するキンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物、キンカラン抽出物は、上記キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランから溶媒抽出などによって得ることができる。また、当該抽出物は、飲料品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は、粗抽出物若しくは半精製抽出物として本発明に使用できる。
【００２１】
溶媒抽出を行う場合は、例えば、キンレンカの花、サンヤクの多肉根、サンリョウの根茎、キンカランの塊根を、原形のまま、又は、粉砕したもの若しくは粉末にしたものを、重量基準で普通１〜２０倍量、好ましくは３〜１０倍量の下記抽出溶媒に浸し、攪拌及び／又は放置することにより抽出し、濾過又は遠心分離などにより抽出液を得ることができる。次いで、得られた抽出液から、濃縮及び／又は濃縮乾固などにより溶媒を除去し、当該抽出物を得ることができる。
【００２２】
抽出溶媒としては、水溶性有機溶媒を含有する溶媒が好ましい。
水溶性有機溶媒を含有する溶媒としては、水溶性有機溶媒のみからなるものか、又は、水溶性有機溶媒と水の混合物が好ましい。
当該水溶性有機溶媒としては、炭素数１〜３の低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール及び２−プロパノール）がより好ましく、残留溶媒の安全性の点からはエタノールが特に好ましい。
【００２３】
また、水溶性有機溶媒の濃度は、１０容量％以上が好ましく、５０容量％以上がより好ましく、９０容量％以上が特に好ましい。つまり、濃度の観点からは、抽出溶媒として、水溶性有機溶媒を１０容量％以上含む水溶液が好ましく、水溶性有機溶媒を５０容量％以上含む水溶液がより好ましく、水溶性有機溶媒を９０容量％以上含む水溶液が特に好ましい。また、水溶性有機溶媒の濃度の上限は特に限定されず、１００容量％以下が好ましい。
【００２４】
抽出温度は、特に限定されず、通常−２０〜１００℃、好ましくは１〜８０℃、より好ましくは２０〜６０℃で好適に実施できる。
抽出時間は、特に限定されず、通常０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。
【００２５】
本発明において、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用の評価法は、特に限定されず、例えば、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞を用いることにより評価できる。すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験系にて、ＣＨＯ細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）などの動物細胞に、ヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現させ、その細胞に当該抽出物を添加し、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇を測定することにより評価できる（Ａ．Ａ．Ｋｏｎｋａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２９１，８７５〜８８３，１９９９；Ｔ．Ｋｉｓｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２２，１０７３〜１０７８，１９９９）。また、上記ヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現している細胞に、ＣＲＥ−ＬＵＣレポーター遺伝子をトランスフェクションした後、当該抽出物を添加し、ルシフェラーゼ活性を測定することにより評価できる（Ｗ．Ｚｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２，２２８７〜２９９４，１９９９；Ｓ．Ｓ．Ｖａｎｓａｌ ＆ Ｄ．Ｒ．Ｆｅｌｌｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｅｍａｃｏｌ．，５８，８０７〜８１０，１９９９）。なお、ＣＲＥ−ＬＵＣは、サイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ（ＬＵＣ）遺伝子を結合したレポーター遺伝子であり、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇によりルシフェラーゼが発現する。
【００２６】
さらに、上記の実験系において、ヒトβ３アドレナリン受容体の代わりに、ヒトβ１又はβ２アドレナリン受容体を発現している細胞を用いれば、β１、β２、β３での差を比較でき、その選択性を評価できる。
【００２７】
次に、本発明の生活習慣病の予防及び／又は改善剤は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有するものである。
本発明の上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、熱産生の活性化作用及び脂肪分解作用を有しており、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として利用できる。
また、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤として利用できる。
【００２８】
ここでいう肥満及び肥満症は、日本肥満学会の肥満症診断基準に従う。すなわち、肥満は、ＢＭＩ（Ｂｏｄｙ Ｍａｓｓ Ｉｎｄｅｘ（体格指数）：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）が２５以上と定義される。肥満症は、肥満であり且つ、肥満による健康障害又は内臓脂肪型肥満である、と定義される。内臓脂肪型肥満の判定は、ウエスト（臍周り径）が男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上、又は、腹部ＣＴ検査による内臓脂肪面積が１００ｃｍ２以上である。また、肥満による健康障害とは、１）２型糖尿病・耐糖能障害、２）脂質代謝異常、３）高血圧、４）高尿酸血症・痛風、５）冠動脈疾患（心筋梗塞・狭心症）、６）脳梗塞（脳血栓症・一過性脳虚血発作）、７）睡眠時無呼吸症候群・Ｐｉｃｋｗｉｃｋ症候群、８）脂肪肝、９）整形外科的疾患（変形性関節症・腰椎症）、１０）月経異常、からなる群より選ばれる少なくとも１つである。
【００２９】
また、上記の肥満として、体脂肪率が男性で２５％以上、女性で３０％以上である高体脂肪率の状態も含む。上記の２型糖尿病・耐糖能障害として、例えば、高血糖、高インスリン血症などの状態も含む。上記の脂質代謝異常として、例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高ＬＤＬ−コレステロール血症、低ＨＤＬ−コレステロール血症などの状態も含む。
【００３０】
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤、並びに、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤（以下、本発明予防改善剤と称する）は、飲食用及び医薬用として利用することができ、その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品、機能性食品などの飲食品、あるいは一般用医薬品、大衆薬（ｏｖｅｒ−ｔｈｅ−ｃｏｕｎｔｅｒ ｄｒｕｇ：ＯＴＣ）などの容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などとして利用できる。
【００３１】
本発明予防改善剤を飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用し易い形態に成型して摂取することができる。
これらの成型剤における本発明予防改善剤の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは２〜９５重量％、さらに好ましくは１０〜９０重量％である。
【００３２】
さらに、本発明予防改善剤は、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。
飲食用として本発明予防改善剤を摂取する場合、その摂取量は、当該抽出物換算で成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ重量、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ重量である。
【００３３】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。
これら製剤の投与量としては、当該抽出物換算で成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００３４】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【００３５】
また、本発明の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与するものである。
当該方法においては、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、上述の飲食品、医薬品、医薬部外品などで用いられる形態、投与量で投与することができる。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によれば、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を得ることができる。これを含有してなる組成物は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３８】
（実施例１）
キンレンカの花（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、キンレンカ抽出物８７．７ｍｇを得た。
【００３９】
（実施例２）
サンヤクの多肉根（新和物産社）の粉末品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、サンヤク抽出物１４．７ｍｇを得た。
【００４０】
（実施例３）
サンリョウの根茎（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、サンリョウ抽出物１７．９ｍｇを得た。
【００４１】
（実施例４）
キンカランの塊根（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、キンカラン抽出物６９．３ｍｇを得た。
【００４２】
（実施例５）ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト活性
ＣＨＯ−Ｋ１細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）に、ヒトβ３アドレナリン受容体遺伝子の発現用プラスミドを、遺伝子導入用試薬であるリポフェクトアミンＴＭ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてトランスフェクションし、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞（以下、β３／ＣＨＯ細胞と称す）を取得した。
【００４３】
実験１日目：β３／ＣＨＯ細胞を９６穴培養プレートに３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ２条件下で約２４時間培養した。培地には、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含むＨＤ培地を用いた。なお、ＨＤ培地は、Ｈａｍ Ｆ−１２（ＳＩＧＭＡ社）５．３５ｇ／Ｌ、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社）４．７５ｇ／Ｌ、Ｌ−グルタミン（和光純薬工業社）０．５９ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（和光純薬工業社）０．０４４ｇ／Ｌ、重炭酸ナトリウム（ＧＩＢＣＯ社）１．２７ｇ／Ｌの組成で調製した。
【００４４】
実験２日目：細胞にｐＣＲＥ−ｌｕｃ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社）を、リポフェクトアミンＴＭ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてトランスフェクションした。その６時間後、新たな培地に交換し、一晩培養した。なお、ｐＣＲＥ−ｌｕｃはサイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ（ｌｕｃ）遺伝子を結合したレポータープラスミドである。
【００４５】
実験３日目：サンプル（上記実施例１〜４それぞれで得られた抽出物）を含む培地に交換し、６時間培養した。上記サンプルを含む培地は、上記抽出物それぞれをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、培地に１／１０００容量添加し、表１記載の濃度としたものである。無処置対照にはＤＭＳＯのみを、陽性対照には選択的β３アドレナリン受容体アゴニストであるＢＲＬ３７３４４（ＴＯＣＲＩＳ社）を用いた。細胞をＣａ，Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルシフェラーゼによる発光測定試薬であるルックライトＴＭ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）を添加し、トップカウントＴＭマイクロシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。無処置対照のルシフェラーゼ発光強度に対する比をとり、サンプルのルシフェラーゼ比活性とした。
実施例１〜４で得た抽出物について測定した結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】
陽性対照のＢＲＬ３７３４４では、有意なルシフェラーゼ比活性の上昇が認めたれた。つまり、ＢＲＬ３７３４４は、ヒトβ３アドレナリン受容体を介して細胞内サイクリックＡＭＰ濃度を上昇させ、ルシフェラーゼを発現させていることから、ＢＲＬ３７３４４のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用が確認された。
また、実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物、実施例４のキンカラン抽出物はいずれも、陽性対照のＢＲＬ３７３４４と同様に、有意なルシフェラーゼ比活性の上昇が認められ、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有していることが認められた。
【００４８】
（実施例６）ヒトβ１、β２、β３アドレナリン受容体への結合活性
ヒトβ１、β２、β３アドレナリン受容体それぞれに対する結合活性は、ＲＩ標識リガンドに対する結合阻害実験（ＭＤＳ Ｐｈａｒｍａ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社：アッセイＮｏ．２０４０１０，２０４１１０，２０４２００）により評価した。実施例１〜４で得た抽出物それぞれについて測定した結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
【００５０】
実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物はいずれも、ヒトβ１及びβ２アドレナリン受容体よりもヒトβ３アドレナリン受容体に対して強い結合阻害が認められた。また、実施例４のキンカラン抽出物は、ヒトβ１アドレナリン受容体よりもヒトβ２及びβ３アドレナリン受容体に対して強い結合阻害が認められた。これらのことから、実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物、実施例４のキンカラン抽出物は、ヒトβ３アドレナリン受容体に結合し、そのアゴニスト作用を示すことが認められた。
【００５１】
（実施例７）
実施例１と同様にして得たキンレンカ抽出物を５重量部、中鎖脂肪酸トリグリセリドを１００重量部、ビタミンＥを１重量部の組成で混合し、キンレンカ抽出物を含有する調味油を調製した。
【００５２】
（実施例８）
実施例２と同様にして得たサンヤク抽出物を４０重量部、カルボキシメチルセルロース・ナトリウムを４０重量部、結晶セルロースを１５重量部、ビタミンＣを５重量部の組成で混合し、粉砕し、ゼラチン製ハードカプセルに充填して、サンヤク抽出物を含有する飲食用ハードカプセル剤を調製した。
【００５３】
（実施例９）
実施例３と同様にして得たサンリョウ抽出物を２５重量部、ヤシ油を１５０重量部、グレープシード油を７０重量部、ビタミンＥを５重量部の組成で混合し、サンリョウ抽出物を含有する飲食用ソフトカプセル剤を調製した。
【００５４】
（実施例１０）
実施例４と同様にして得たキンカラン抽出物を２重量部、スクワランを２０重量部、オリーブ油を１０重量部、精製蜜蝋を５重量部、グリセリンモノスレアレートを３重量部、セトステアルコールを２重量部、ポリオキシエチレン硬化ひまし油を３重量部、グリセリンを１０重量部、ビタミンＣを３重量部、精製水を４２重量部の組成で混合、乳化し、キンカラン抽出物を含有する皮膚用クリームを調製した。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明によれば、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を得ることができる。これを含有してなる組成物は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
過食、栄養過多、運動不足などにより、肥満人口は増加の一途を辿っている。肥満者、特に内臓脂肪が蓄積した内臓脂肪型肥満の肥満者では、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病を合併しており、大きな社会問題である。また、肥満者がその体重を５〜１０％減少させると、合併している生活習慣病の症状が軽減又は改善することから、肥満の予防及び／又は改善は、生活習慣病の予防及び／又は改善に繋がる。
【０００３】
アドレナリン受容体は、交感神経から遊離されるアドレナリンやノルアドレナリンなどのカテコールアミン作動薬と結合する受容体であり、カテコールアミン作動薬に対する感受性によりα受容体とβ受容体の２種類に分けられる。すなわち、αアドレナリン受容体は、ノルアドレナリン≧アドレナリン＞ドーパミン＞イソプロテレノールの順に感受性を示し、βアドレナリン受容体は、イソプロテレノール＞アドレナリン≧ノルアドレナリン＞ドーパミンの順に感受性を示す。
【０００４】
βアドレナリン受容体には、β１、β２、β３受容体があり、近年β４受容体の存在も示唆されている。それぞれの受容体に対するアゴニスト（作動薬）の作用として、β１アドレナリン受容体アゴニストは心拍数増加作用、β２アドレナリン受容体アゴニストは気管支平滑筋弛緩作用、β３アドレナリン受容体アゴニストは熱産生の活性化作用及び脂肪分解の促進作用があることが知られている。このことから、肥満などの生活習慣病の予防及び／又は改善には、β３アドレナリン受容体アゴニストが有効である。
【０００５】
β３アドレナリン受容体アゴニストは、１９８４年に初めて発見され、動物実験において熱産生や脂肪分解による抗肥満作用、抗糖尿病作用が認められた。しかし、これらの作用はヒトにおいて微弱であった。この効果差の原因が、１９８９年になり、マウスやラットなどの齧歯類とヒトのβ３アドレナリン受容体の化学構造上の種差であることが明確になった（非特許文献１及び２を参照）。これらのことから、β１やβ２よりもβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高く、且つ、ヒトのβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高いアゴニスト、すなわち選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストが、肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であり、その開発が望まれている。
【０００６】
最近、選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストとして幾つかの化合物が知られており（非特許文献１を参照）、臨床試験において抗肥満薬又は抗糖尿病薬としての効果が確認されてきている。しかし、食経験のある天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストは未だ知られていない。
【０００７】
ところで、キンレンカは、キンポウゲ科キンバイソウ属（Ｔｒｏｌｌｉｕｓ）の植物であり、１０種あまりあるキンバイソウの仲間を中国では金蓮花（キンレンカ）と称し、その花は解毒作用や扁桃炎などに効果があり、茶花として使用されている（非特許文献３を参照）。
【０００８】
サンヤクは、ヤマノイモ科ヤマノイモ属（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）の植物であり、その多肉根は古来より強壮、滋養などの効果があることが知られており、民間では夜尿、遺精、盗汗などに用いられている（非特許文献４を参照）。
【０００９】
サンリョウは、ミクリ科ミクリ属（Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ）の植物であり、荊三稜と黒三稜に大別される。その根茎は、中国、特に東北地方で近縁種のヒメミクリＳｐａｒｇａｎｉｕｍ ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｍ Ｍａｘｉｍ．、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．、Ｓ．ｍｉｎｉｍｕｍ Ｈｉｌｌ．の根茎とともに荊三稜（ケイサンリョウ）と称され、中国淅江省ではＳ．ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｕｒｃｚ．の根茎も荊三稜と称している。なお荊三稜は元来、カヤツリグサ科（Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ）のウキヤガラＳｃｉｒｐｕｓ ｙａｇａｒａ Ｏｈｗｉの根茎である。これらは通経、催乳薬の一つとして利用されている。（非特許文献４を参照）。
【００１０】
キンカランは、ツヅラフジ科ティノスポラ属（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ）の植物である。その塊根の水又はエタノールエキスは、ウサギ、マウスに対し経口投与により胸腺萎縮効果、抗副腎皮質ホルモン様作用及び結核桿菌に対して抑制作用がある。中国の臨床では、流感、急性扁桃腺炎、肺炎、胆道感染、皮膚化膿感染などによる発熱に対して解熱作用、消炎鎮痛作用があるが、副作用は少ないと報告されている。よって、キンカランは解熱、解毒薬として、急・慢性扁桃腺炎、急性咽喉炎、口腔炎、耳下腺炎、乳腺炎、虫垂炎、急・慢性腸炎、胃炎、でき物などに用いられている。また獣医用薬として双鵝症、こ脹症、炭疸病などに用いられている（非特許文献４を参照）。
【００１１】
しかし、キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランが、ヒトβ３アドレナリン受容体作用を有していること、並びに、ヒトにおいて肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であることは、未だ知られていない。
【非特許文献１】高倉康人、吉田俊秀，日本薬理学雑誌，１１８，３１５〜３２０，２００１
【非特許文献２】Ｃ．Ｗｅｙｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２５，１１〜２１，１９９９
【非特許文献３】堀田満（編集代表），世界有用植物事典，平凡社
【非特許文献４】三橋博，原色牧野和漢薬草大圖鑑，北隆館
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランを、溶媒、特に水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物、キンカラン抽出物が、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤に関する。
また、本発明は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、生活習慣病の予防及び／又は改善剤に関する。
さらに、本発明は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与して、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法に関する。
【００１５】
以下に、本発明について詳しく説明する。
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするものである。
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、抽出物そのものでもよいし、抽出物に公知の担体や助剤、飲食物材料、薬剤学的に許容される他の製剤素材などを添加した組成物でもよい。
このように、当該ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、食経験のある天然素材由来である。
【００１６】
本発明に使用するキンレンカ（金蓮花）は、キンポウゲ科キンバイソウ属（Ｔｒｏｌｌｉｕｓ）の植物の花である。本発明において、キンバイソウ属のいずれの品種も使用できるが、Ｔｒｏｌｌｉｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｂｇｅ．の花が好ましい。
【００１７】
本発明に使用するサンヤク（山薬）は、別名ジネンジョウといい、ヤマノイモ科ヤマノイモ属（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）の植物の多肉根であり、水洗後、皮を除いて乾燥したものを使用する。本発明において、ヤマノイモ属のいずれの品種も使用できるが、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．の多肉根が好ましい。
【００１８】
本発明に使用するサンリョウ（三稜）は、ミクリ科ミクリ属（Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ）の植物の根茎である。近縁種のヒメミクリＳｐａｒｇａｎｉｕｍ ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｍ Ｍａｘｉｍ．、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．、Ｓ．ｍｉｎｉｍｕｍ Ｈｉｌｌ．、Ｓ．ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｕｒｃｚ．、カヤツリグサ科（Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ）のウキヤガラＳｃｉｒｐｕｓ ｙａｇａｒａ Ｏｈｗｉのうちいずれの品種も使用できるが、エゾミクリＳ．ｓｉｍｐｌｅｘ Ｈｕｄｓ．の根茎が好ましい。
【００１９】
本発明に使用するキンカラン（金果欖）は、ツヅラフジ科ティノスポラ属（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ）の植物の塊根である。本発明において、ティノスポラ属のいずれの品種も使用できるが、Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ ｃａｐｉｌｌｉｐｅｓ Ｇａｇｎｅｐ．の塊根が好ましい。
【００２０】
本発明に使用するキンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物、キンカラン抽出物は、上記キンレンカ、サンヤク、サンリョウ、キンカランから溶媒抽出などによって得ることができる。また、当該抽出物は、飲料品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は、粗抽出物若しくは半精製抽出物として本発明に使用できる。
【００２１】
溶媒抽出を行う場合は、例えば、キンレンカの花、サンヤクの多肉根、サンリョウの根茎、キンカランの塊根を、原形のまま、又は、粉砕したもの若しくは粉末にしたものを、重量基準で普通１〜２０倍量、好ましくは３〜１０倍量の下記抽出溶媒に浸し、攪拌及び／又は放置することにより抽出し、濾過又は遠心分離などにより抽出液を得ることができる。次いで、得られた抽出液から、濃縮及び／又は濃縮乾固などにより溶媒を除去し、当該抽出物を得ることができる。
【００２２】
抽出溶媒としては、水溶性有機溶媒を含有する溶媒が好ましい。
水溶性有機溶媒を含有する溶媒としては、水溶性有機溶媒のみからなるものか、又は、水溶性有機溶媒と水の混合物が好ましい。
当該水溶性有機溶媒としては、炭素数１〜３の低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール及び２−プロパノール）がより好ましく、残留溶媒の安全性の点からはエタノールが特に好ましい。
【００２３】
また、水溶性有機溶媒の濃度は、１０容量％以上が好ましく、５０容量％以上がより好ましく、９０容量％以上が特に好ましい。つまり、濃度の観点からは、抽出溶媒として、水溶性有機溶媒を１０容量％以上含む水溶液が好ましく、水溶性有機溶媒を５０容量％以上含む水溶液がより好ましく、水溶性有機溶媒を９０容量％以上含む水溶液が特に好ましい。また、水溶性有機溶媒の濃度の上限は特に限定されず、１００容量％以下が好ましい。
【００２４】
抽出温度は、特に限定されず、通常−２０〜１００℃、好ましくは１〜８０℃、より好ましくは２０〜６０℃で好適に実施できる。
抽出時間は、特に限定されず、通常０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。
【００２５】
本発明において、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用の評価法は、特に限定されず、例えば、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞を用いることにより評価できる。すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験系にて、ＣＨＯ細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）などの動物細胞に、ヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現させ、その細胞に当該抽出物を添加し、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇を測定することにより評価できる（Ａ．Ａ．Ｋｏｎｋａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２９１，８７５〜８８３，１９９９；Ｔ．Ｋｉｓｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２２，１０７３〜１０７８，１９９９）。また、上記ヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現している細胞に、ＣＲＥ−ＬＵＣレポーター遺伝子をトランスフェクションした後、当該抽出物を添加し、ルシフェラーゼ活性を測定することにより評価できる（Ｗ．Ｚｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２，２２８７〜２９９４，１９９９；Ｓ．Ｓ．Ｖａｎｓａｌ ＆ Ｄ．Ｒ．Ｆｅｌｌｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｅｍａｃｏｌ．，５８，８０７〜８１０，１９９９）。なお、ＣＲＥ−ＬＵＣは、サイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ（ＬＵＣ）遺伝子を結合したレポーター遺伝子であり、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇によりルシフェラーゼが発現する。
【００２６】
さらに、上記の実験系において、ヒトβ３アドレナリン受容体の代わりに、ヒトβ１又はβ２アドレナリン受容体を発現している細胞を用いれば、β１、β２、β３での差を比較でき、その選択性を評価できる。
【００２７】
次に、本発明の生活習慣病の予防及び／又は改善剤は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有するものである。
本発明の上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、熱産生の活性化作用及び脂肪分解作用を有しており、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として利用できる。
また、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤として利用できる。
【００２８】
ここでいう肥満及び肥満症は、日本肥満学会の肥満症診断基準に従う。すなわち、肥満は、ＢＭＩ（Ｂｏｄｙ Ｍａｓｓ Ｉｎｄｅｘ（体格指数）：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）が２５以上と定義される。肥満症は、肥満であり且つ、肥満による健康障害又は内臓脂肪型肥満である、と定義される。内臓脂肪型肥満の判定は、ウエスト（臍周り径）が男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上、又は、腹部ＣＴ検査による内臓脂肪面積が１００ｃｍ２以上である。また、肥満による健康障害とは、１）２型糖尿病・耐糖能障害、２）脂質代謝異常、３）高血圧、４）高尿酸血症・痛風、５）冠動脈疾患（心筋梗塞・狭心症）、６）脳梗塞（脳血栓症・一過性脳虚血発作）、７）睡眠時無呼吸症候群・Ｐｉｃｋｗｉｃｋ症候群、８）脂肪肝、９）整形外科的疾患（変形性関節症・腰椎症）、１０）月経異常、からなる群より選ばれる少なくとも１つである。
【００２９】
また、上記の肥満として、体脂肪率が男性で２５％以上、女性で３０％以上である高体脂肪率の状態も含む。上記の２型糖尿病・耐糖能障害として、例えば、高血糖、高インスリン血症などの状態も含む。上記の脂質代謝異常として、例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高ＬＤＬ−コレステロール血症、低ＨＤＬ−コレステロール血症などの状態も含む。
【００３０】
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤、並びに、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤（以下、本発明予防改善剤と称する）は、飲食用及び医薬用として利用することができ、その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品、機能性食品などの飲食品、あるいは一般用医薬品、大衆薬（ｏｖｅｒ−ｔｈｅ−ｃｏｕｎｔｅｒ ｄｒｕｇ：ＯＴＣ）などの容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などとして利用できる。
【００３１】
本発明予防改善剤を飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用し易い形態に成型して摂取することができる。
これらの成型剤における本発明予防改善剤の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは２〜９５重量％、さらに好ましくは１０〜９０重量％である。
【００３２】
さらに、本発明予防改善剤は、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。
飲食用として本発明予防改善剤を摂取する場合、その摂取量は、当該抽出物換算で成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ重量、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ重量である。
【００３３】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。
これら製剤の投与量としては、当該抽出物換算で成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００３４】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【００３５】
また、本発明の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法は、上記ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与するものである。
当該方法においては、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、上述の飲食品、医薬品、医薬部外品などで用いられる形態、投与量で投与することができる。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によれば、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を得ることができる。これを含有してなる組成物は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３８】
（実施例１）
キンレンカの花（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、キンレンカ抽出物８７．７ｍｇを得た。
【００３９】
（実施例２）
サンヤクの多肉根（新和物産社）の粉末品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、サンヤク抽出物１４．７ｍｇを得た。
【００４０】
（実施例３）
サンリョウの根茎（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、サンリョウ抽出物１７．９ｍｇを得た。
【００４１】
（実施例４）
キンカランの塊根（新和物産社）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水 １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、キンカラン抽出物６９．３ｍｇを得た。
【００４２】
（実施例５）ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト活性
ＣＨＯ−Ｋ１細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）に、ヒトβ３アドレナリン受容体遺伝子の発現用プラスミドを、遺伝子導入用試薬であるリポフェクトアミンＴＭ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてトランスフェクションし、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞（以下、β３／ＣＨＯ細胞と称す）を取得した。
【００４３】
実験１日目：β３／ＣＨＯ細胞を９６穴培養プレートに３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ２条件下で約２４時間培養した。培地には、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含むＨＤ培地を用いた。なお、ＨＤ培地は、Ｈａｍ Ｆ−１２（ＳＩＧＭＡ社）５．３５ｇ／Ｌ、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社）４．７５ｇ／Ｌ、Ｌ−グルタミン（和光純薬工業社）０．５９ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（和光純薬工業社）０．０４４ｇ／Ｌ、重炭酸ナトリウム（ＧＩＢＣＯ社）１．２７ｇ／Ｌの組成で調製した。
【００４４】
実験２日目：細胞にｐＣＲＥ−ｌｕｃ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社）を、リポフェクトアミンＴＭ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてトランスフェクションした。その６時間後、新たな培地に交換し、一晩培養した。なお、ｐＣＲＥ−ｌｕｃはサイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ（ｌｕｃ）遺伝子を結合したレポータープラスミドである。
【００４５】
実験３日目：サンプル（上記実施例１〜４それぞれで得られた抽出物）を含む培地に交換し、６時間培養した。上記サンプルを含む培地は、上記抽出物それぞれをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、培地に１／１０００容量添加し、表１記載の濃度としたものである。無処置対照にはＤＭＳＯのみを、陽性対照には選択的β３アドレナリン受容体アゴニストであるＢＲＬ３７３４４（ＴＯＣＲＩＳ社）を用いた。細胞をＣａ，Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルシフェラーゼによる発光測定試薬であるルックライトＴＭ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）を添加し、トップカウントＴＭマイクロシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。無処置対照のルシフェラーゼ発光強度に対する比をとり、サンプルのルシフェラーゼ比活性とした。
実施例１〜４で得た抽出物について測定した結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】
陽性対照のＢＲＬ３７３４４では、有意なルシフェラーゼ比活性の上昇が認めたれた。つまり、ＢＲＬ３７３４４は、ヒトβ３アドレナリン受容体を介して細胞内サイクリックＡＭＰ濃度を上昇させ、ルシフェラーゼを発現させていることから、ＢＲＬ３７３４４のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用が確認された。
また、実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物、実施例４のキンカラン抽出物はいずれも、陽性対照のＢＲＬ３７３４４と同様に、有意なルシフェラーゼ比活性の上昇が認められ、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有していることが認められた。
【００４８】
（実施例６）ヒトβ１、β２、β３アドレナリン受容体への結合活性
ヒトβ１、β２、β３アドレナリン受容体それぞれに対する結合活性は、ＲＩ標識リガンドに対する結合阻害実験（ＭＤＳ Ｐｈａｒｍａ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社：アッセイＮｏ．２０４０１０，２０４１１０，２０４２００）により評価した。実施例１〜４で得た抽出物それぞれについて測定した結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
【００５０】
実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物はいずれも、ヒトβ１及びβ２アドレナリン受容体よりもヒトβ３アドレナリン受容体に対して強い結合阻害が認められた。また、実施例４のキンカラン抽出物は、ヒトβ１アドレナリン受容体よりもヒトβ２及びβ３アドレナリン受容体に対して強い結合阻害が認められた。これらのことから、実施例１のキンレンカ抽出物、実施例２のサンヤク抽出物、実施例３のサンリョウ抽出物、実施例４のキンカラン抽出物は、ヒトβ３アドレナリン受容体に結合し、そのアゴニスト作用を示すことが認められた。
【００５１】
（実施例７）
実施例１と同様にして得たキンレンカ抽出物を５重量部、中鎖脂肪酸トリグリセリドを１００重量部、ビタミンＥを１重量部の組成で混合し、キンレンカ抽出物を含有する調味油を調製した。
【００５２】
（実施例８）
実施例２と同様にして得たサンヤク抽出物を４０重量部、カルボキシメチルセルロース・ナトリウムを４０重量部、結晶セルロースを１５重量部、ビタミンＣを５重量部の組成で混合し、粉砕し、ゼラチン製ハードカプセルに充填して、サンヤク抽出物を含有する飲食用ハードカプセル剤を調製した。
【００５３】
（実施例９）
実施例３と同様にして得たサンリョウ抽出物を２５重量部、ヤシ油を１５０重量部、グレープシード油を７０重量部、ビタミンＥを５重量部の組成で混合し、サンリョウ抽出物を含有する飲食用ソフトカプセル剤を調製した。
【００５４】
（実施例１０）
実施例４と同様にして得たキンカラン抽出物を２重量部、スクワランを２０重量部、オリーブ油を１０重量部、精製蜜蝋を５重量部、グリセリンモノスレアレートを３重量部、セトステアルコールを２重量部、ポリオキシエチレン硬化ひまし油を３重量部、グリセリンを１０重量部、ビタミンＣを３重量部、精製水を４２重量部の組成で混合、乳化し、キンカラン抽出物を含有する皮膚用クリームを調製した。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明によれば、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を得ることができる。これを含有してなる組成物は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防及び／又は改善剤として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項２】
キンレンカ抽出物が、キンレンカを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項３】
サンヤク抽出物が、サンヤクを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項４】
サンリョウ抽出物が、サンリョウを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項５】
キンカラン抽出物が、キンカランを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項６】
水溶性有機溶媒を含有する溶媒が、１０容量％以上の炭素数１〜３の低級アルコールを含有する溶媒である、請求項２〜５のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項７】
水溶性有機溶媒を含有する溶媒が、１０容量％以上のエタノールを含有する溶媒である、請求項２〜６のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、生活習慣病の予防及び／又は改善剤。
【請求項９】
生活習慣病が、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症及び痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項８記載の生活習慣病の予防及び／又は改善剤。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与して、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１２】
生活習慣病が、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症及び痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項１１記載の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１】
キンレンカ抽出物、サンヤク抽出物、サンリョウ抽出物及びキンカラン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分として含有してなるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項２】
キンレンカ抽出物が、キンレンカを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項３】
サンヤク抽出物が、サンヤクを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項４】
サンリョウ抽出物が、サンリョウを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項５】
キンカラン抽出物が、キンカランを水溶性有機溶媒を含有する溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項６】
水溶性有機溶媒を含有する溶媒が、１０容量％以上の炭素数１〜３の低級アルコールを含有する溶媒である、請求項２〜５のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項７】
水溶性有機溶媒を含有する溶媒が、１０容量％以上のエタノールを含有する溶媒である、請求項２〜６のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、生活習慣病の予防及び／又は改善剤。
【請求項９】
生活習慣病が、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症及び痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項８記載の生活習慣病の予防及び／又は改善剤。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状の予防及び／又は改善剤。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与して、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１２】
生活習慣病が、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症及び痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項１１記載の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を投与することを特徴とする、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧及び高尿酸血症からなる群より選ばれる少なくとも１つの症状を予防及び／又は改善する方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８２３９１
【国際公開日】平成１７年９月９日（２００５．９．９）
【発行日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１０５０１（Ｐ２００６−５１０５０１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００５／００３２８４
【国際出願日】平成１７年２月２８日（２００５．２．２８）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年９月９日（２００５．９．９）
【発行日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００５／００３２８４
【国際出願日】平成１７年２月２８日（２００５．２．２８）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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