マルチザイム（ｍｕｌｔｉｚｙｍｅ）および多価不飽和脂肪酸の製造におけるその使用
単離核酸断片およびマルチザイム（すなわち少なくとも２つの独立しかつ分離可能な酵素活性を有する単一のポリペプチド）をコードするかかる断片を含む組換えコンストラクトと、植物および油性酵母内で長鎖多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）をこれらのマルチザイムを用いて製造する方法が開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの独立しかつ分離可能な酵素活性を有する単一のポリペプチドを含むマルチザイム。
【請求項２】
酵素活性が、脂肪酸エロンガーゼ、脂肪酸デサチュラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、アシルＣｏＡシンターゼ、およびチオエステラーゼからなる群から選択される、請求項１に記載のマルチザイム。
【請求項３】
酵素活性が、少なくとも１つの脂肪酸デサチュラーゼに結合された少なくとも１つの脂肪酸エロンガーゼを含む、請求項１に記載のマルチザイム。
【請求項４】
脂肪酸デサチュラーゼが、Δ４デサチュラーゼ、Δ５デサチュラーゼ、Δ６デサチュラーゼ、Δ８デサチュラーゼ、Δ９デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼ、Δ１５デサチュラーゼ、またはΔ１７デサチュラーゼからなる群から選択される、請求項２または３に記載のマルチザイム。
【請求項５】
脂肪酸エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ、Ｃ１４／１６エロンガーゼ、Ｃ１６／１８エロンガーゼ、Ｃ１８／２０エロンガーゼ、またはＣ２０／２２エロンガーゼからなる群から選択される、請求項２または３に記載のマルチザイム。
【請求項６】
第１の酵素活性が第２の酵素活性に連結され、かつ連結がポリペプチド結合、配列番号１９８（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号２００（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２リンカー）および配列番号２３５（ＥａＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号４３８、配列番号４７２、配列番号４４５、ならびに配列番号５０４からなる群から選択される、請求項１、２または３に記載のマルチザイム。
【請求項７】
（ａ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、ＤＨＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項８】
ヌクレオチド配列が、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０を含む、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
（ａ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２０２（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０４（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２３１（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２３２（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３３（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、Ｃ２０エロンガーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
（ａ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号１９３、配列番号２１５、配列番号２１７、配列番号２２１、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号３８２、配列番号３８４、配列番号３８６、配列番号３８８、配列番号４０４、配列番号４０６または配列番号４０８で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１９２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５；配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号１９２、配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、Δ４デサチュラーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１２】
配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０のいずれかで示される配列を含む、ＤＨＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）のいずれかで示される配列を含む、Ｃ２０エロンガーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
配列番号１９２、配列番号２１４、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示される配列を含む、Δ４デサチュラーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１５】
少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結された請求項７〜１４のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチドのいずれかを含む組換えコンストラクト。
【請求項１６】
宿主細胞であって、そのゲノム内に請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、宿主細胞。
【請求項１７】
細胞が植物および酵母からなる群から選択される、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、形質転換ヤロウィア属。
【請求項１９】
細胞を形質転換するための方法であって、細胞を請求項１５に記載の組換えコンストラクトで形質転換するステップと、前記組換えコンストラクトで形質転換された細胞を選択するステップと、を含む、方法。
【請求項２０】
形質転換植物を生成するための方法であって、植物細胞を請求項７〜１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドのいずれかで形質転換するステップと、植物を前記形質転換植物細胞から再生するステップと、を含む、方法。
【請求項２１】
植物が大豆植物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
酵母を生成するための方法であって、酵母細胞を請求項７〜１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドのいずれかで形質転換するステップと、酵母を前記形質転換酵母細胞から成長させるステップと、を含む、方法。
【請求項２３】
植物であって、そのゲノム内に請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、植物。
【請求項２４】
油料種子植物である、請求項２３に記載の植物。
【請求項２５】
大豆である、請求項２３または２４に記載の植物。
【請求項２６】
請求項２３または２４に記載の植物から得られる種子。
【請求項２７】
請求項２５に記載の植物から得られる種子。
【請求項２８】
請求項２６に記載の種子から得られるオイル。
【請求項２９】
請求項２７に記載の種子から得られるオイル。
【請求項３０】
請求項２６に記載のオイルを含有する食料または飼料。
【請求項３１】
請求項２７に記載のオイルを含有する食料または飼料。
【請求項３２】
請求項２６に記載のオイルを含有する飲料。
【請求項３３】
請求項２７に記載のオイルを含有する飲料。
【請求項３４】
少なくとも１４７個のコドンがヤロウィア属内での発現のためにコドン最適化される、配列番号１８３で示されるＣ２０エロンガーゼをコードする単離核酸分子。
【請求項３５】
少なくとも１３４個のコドンがヤロウィア属内での発現のためにコドン最適化される、配列番号１８８で示されるＣ２０エロンガーゼをコードする単離核酸分子。
【請求項３６】
少なくとも２８５個のコドンがデサチュラーゼに結合されたエロンガーゼを含むヤロウィア属マルチザイムにおける発現のためにコドン最適化される、配列番号１９２で示されるΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする単離核酸分子。
【請求項３７】
マルチザイムを製造するための方法であって、
（ａ）第１のポリペプチドを少なくとも第２のポリペプチドと連結させるステップであって、ここで各ポリペプチドは独立しかつ分離可能な酵素活性を有するステップと；
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の独立しかつ分離可能な酵素活性について評価するステップと、
を含む、方法。
【請求項３８】
酵素活性が、脂肪酸エロンガーゼ、脂肪酸デサチュラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、アシルＣｏＡシンターゼ、およびチオエステラーゼからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
酵素活性が、少なくとも１つの脂肪酸デサチュラーゼに連結された少なくとも１つの脂肪酸エロンガーゼを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
脂肪酸デサチュラーゼが、Δ４デサチュラーゼ、Δ５デサチュラーゼ、Δ６デサチュラーゼ、Δ８デサチュラーゼ、Δ９デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼ、Δ１５デサチュラーゼ、またはΔ１７デサチュラーゼからなる群から選択される、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
脂肪酸エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ、Ｃ１４／１６エロンガーゼ、Ｃ１６／１８エロンガーゼ、Ｃ１８／２０エロンガーゼ、またはＣ２０／２２エロンガーゼからなる群から選択される、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４２】
連結が、ポリペプチド結合、配列番号１９８（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１リンカーアミノ酸配列）、配列番号２００（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２リンカー）、配列番号２３５（ＥａＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号４３５、配列番号４３８、配列番号４７２、および配列番号５０４からなる群から選択される、請求項３７、３８または３９に記載の方法。
【請求項４３】
油料種子植物の脂肪酸特性を改変するための方法であって、
（ａ）油料種子植物細胞を請求項１５に記載の組換えコンストラクトで形質転換するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記形質転換された油料種子植物細胞から植物を再生するステップと、
を含み、ここで前記植物は改変された脂肪酸特性を有する、方法。
【請求項４４】
油料種子植物が大豆である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項２３に記載の植物の子孫。
【請求項４６】
第１の酵素活性がΔ９エロンガーゼであり、かつ第２の酵素活性がΔ８デサチュラーゼである、請求項６に記載のマルチザイムを含む組換え微生物宿主細胞。
【請求項４７】
第１の酵素活性がＣ２０エロンガーゼであり、かつ第２の酵素活性がΔ４デサチュラーゼである、請求項６に記載のマルチザイムを含む組換え微生物宿主細胞。
【請求項４８】
宿主細胞が油性酵母である、請求項４６または４７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４９】
リノール酸をジホモγ−リノレン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Δ９エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ８デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Δ９エロンガーゼと前記Δ８デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＧＬＡシンターゼと、
ｉｉ）リノール酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をジホモγ−リノレン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５０】
α−リノレン酸をエイコサトリエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Δ９エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ８デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Δ９エロンガーゼと前記Δ８デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＧＬＡシンターゼと、
ｉｉ）α−リノレン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をエイコサトリエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５１】
エイコサペンタエン酸をドコサヘキサエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Ｃ２０エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ４デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Ｃ２０エロンガーゼと前記Δ４デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＨＡシンターゼと、
ｉｉ）エイコサペンタエン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をドコサヘキサエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５２】
アラキドン酸をドコサペンタエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Ｃ２０エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ４デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Ｃ２０エロンガーゼと前記Δ４デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＨＡシンターゼと、
ｉｉ）アラキドン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をドコサペンタエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５３】
ＤＧＬＡシンターゼが、配列番号４４１、配列番号４４７、配列番号４５４、配列番号４６１、配列番号４６４、配列番号４７１、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、および配列番号５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５４】
ＤＨＡシンターゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、および配列番号４１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５５】
ポリペプチドリンカーが、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２３５、配列番号４３８、配列番号４４５、配列番号４７２、および配列番号５０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
Δ９エロンガーゼが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号３１９、配列番号３５９、配列番号４２０、配列番号４２２、および配列番号５１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５７】
Δ８デサチュラーゼが、配列番号３２８、配列番号４２４、配列番号４２６、配列番号４２８、配列番号４３０、および配列番号５１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５８】
Ｃ２０エロンガーゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、配列番号１８４、および配列番号１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５９】
Δ４デサチュラーゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２１５、配列番号２２１、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号３８２、配列番号３８４、配列番号３８６、配列番号３８８、配列番号４０４、配列番号４０６、配列番号４０８、および配列番号１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項６０】
改善されたΔ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドを同定するための方法であって、
ａ）ベースラインのΔ４デサチュラーゼ活性を有するユーグレナ・アナベナから単離される野生型Δ４デサチュラーゼポリペプチドを提供するステップと、
ｂ）（ａ）の野生型ポリペプチドから約１〜約２００個のアミノ酸を切断し、前記ベースラインのΔ４デサチュラーゼ活性よりも増大したΔ４デサチュラーゼ活性を有する切断型突然変異ポリペプチドを製造するステップと、
を含む、方法。
【請求項６１】
野生型ポリペプチドがポリペプチドのＮ末端部分で切断される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
野生型ポリペプチドから約１〜約７０個のアミノ酸が切断される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
多価不飽和脂肪酸を生成し、かつ以下：
１）Δ９デサチュラーゼ、
２）Δ１２デサチュラーゼ、
３）Δ９エロンガーゼ、
４）Δ８デサチュラーゼ、
５）Δ５デサチュラーゼ、
６）Δ１７デサチュラーゼ、
７）Ｃ２０／２２エロンガーゼ、および
８）Δ４デサチュラーゼ；
の連続経路における酵素をコードするポリペプチドを発現する微生物宿主細胞であって、ここで前記ポリペプチドは少なくとも１つのマルチザイムを含み、前記融合体は少なくとも１つの連続的な酵素対の間での融合体を含む、微生物宿主細胞。
【請求項６４】
多価不飽和脂肪酸が、ω−３脂肪酸およびω−６脂肪酸からなる群から選択される、請求項６３に記載の微生物宿主。
【請求項６５】
（ａ）配列番号４４１、配列番号４４７、配列番号４５４、配列番号４６１、配列番号４６４、配列番号４７１、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、または配列番号５１９で示される、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号４４０、配列番号４４６、配列番号４５３、配列番号４６０、配列番号４６３、配列番号４７０、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、または配列番号４９６で示される、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号４４０、配列番号４４６、配列番号４５３、配列番号４６０、配列番号４６３、配列番号４７０、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、または配列番号４９６で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、ＤＧＬＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１】
少なくとも２つの独立しかつ分離可能な酵素活性を有する単一のポリペプチドを含むマルチザイム。
【請求項２】
酵素活性が、脂肪酸エロンガーゼ、脂肪酸デサチュラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、アシルＣｏＡシンターゼ、およびチオエステラーゼからなる群から選択される、請求項１に記載のマルチザイム。
【請求項３】
酵素活性が、少なくとも１つの脂肪酸デサチュラーゼに結合された少なくとも１つの脂肪酸エロンガーゼを含む、請求項１に記載のマルチザイム。
【請求項４】
脂肪酸デサチュラーゼが、Δ４デサチュラーゼ、Δ５デサチュラーゼ、Δ６デサチュラーゼ、Δ８デサチュラーゼ、Δ９デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼ、Δ１５デサチュラーゼ、またはΔ１７デサチュラーゼからなる群から選択される、請求項２または３に記載のマルチザイム。
【請求項５】
脂肪酸エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ、Ｃ１４／１６エロンガーゼ、Ｃ１６／１８エロンガーゼ、Ｃ１８／２０エロンガーゼ、またはＣ２０／２２エロンガーゼからなる群から選択される、請求項２または３に記載のマルチザイム。
【請求項６】
第１の酵素活性が第２の酵素活性に連結され、かつ連結がポリペプチド結合、配列番号１９８（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号２００（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２リンカー）および配列番号２３５（ＥａＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号４３８、配列番号４７２、配列番号４４５、ならびに配列番号５０４からなる群から選択される、請求項１、２または３に記載のマルチザイム。
【請求項７】
（ａ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）ＤＨＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、ＤＨＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項８】
ヌクレオチド配列が、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０を含む、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
（ａ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２０２（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０４（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２３１（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２３２（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３３（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）Ｃ２０エロンガーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、Ｃ２０エロンガーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
（ａ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで前記ポリペプチドは、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号１９３、配列番号２１５、配列番号２１７、配列番号２２１、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号３８２、配列番号３８４、配列番号３８６、配列番号３８８、配列番号４０４、配列番号４０６または配列番号４０８で示されるアミノ酸配列と比較される場合、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｖ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｂ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１９２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５；配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示されるヌクレオチド配列と比較される場合、ＢＬＡＳＴＮ法のアラインメントに基づいて少なくとも８０％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列；
（ｃ）Δ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、配列番号１１、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号１９２、配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、ここで前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、Δ４デサチュラーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１２】
配列番号１１、配列番号２０５、配列番号２１、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、または配列番号４１０のいずれかで示される配列を含む、ＤＨＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
配列番号１８３、配列番号１８８、配列番号２０１（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０６（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１＊Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２０３（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２７（ＥａＤＨＡｓｙｎ１ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２８（ＥａＤＨＡｓｙｎ２ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、配列番号２２９（ＥａＤＨＡｓｙｎ３ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）、または配列番号２３０（ＥａＤＨＡｓｙｎ４ Ｃ２０エロンガーゼドメイン）のいずれかで示される配列を含む、Ｃ２０エロンガーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
配列番号１９２、配列番号２１４、配列番号２２０、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号３８１、配列番号３８３、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号４０３、配列番号４０５、または配列番号４０７で示される配列を含む、Δ４デサチュラーゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１５】
少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結された請求項７〜１４のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチドのいずれかを含む組換えコンストラクト。
【請求項１６】
宿主細胞であって、そのゲノム内に請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、宿主細胞。
【請求項１７】
細胞が植物および酵母からなる群から選択される、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、形質転換ヤロウィア属。
【請求項１９】
細胞を形質転換するための方法であって、細胞を請求項１５に記載の組換えコンストラクトで形質転換するステップと、前記組換えコンストラクトで形質転換された細胞を選択するステップと、を含む、方法。
【請求項２０】
形質転換植物を生成するための方法であって、植物細胞を請求項７〜１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドのいずれかで形質転換するステップと、植物を前記形質転換植物細胞から再生するステップと、を含む、方法。
【請求項２１】
植物が大豆植物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
酵母を生成するための方法であって、酵母細胞を請求項７〜１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドのいずれかで形質転換するステップと、酵母を前記形質転換酵母細胞から成長させるステップと、を含む、方法。
【請求項２３】
植物であって、そのゲノム内に請求項１５に記載の組換えコンストラクトを含む、植物。
【請求項２４】
油料種子植物である、請求項２３に記載の植物。
【請求項２５】
大豆である、請求項２３または２４に記載の植物。
【請求項２６】
請求項２３または２４に記載の植物から得られる種子。
【請求項２７】
請求項２５に記載の植物から得られる種子。
【請求項２８】
請求項２６に記載の種子から得られるオイル。
【請求項２９】
請求項２７に記載の種子から得られるオイル。
【請求項３０】
請求項２６に記載のオイルを含有する食料または飼料。
【請求項３１】
請求項２７に記載のオイルを含有する食料または飼料。
【請求項３２】
請求項２６に記載のオイルを含有する飲料。
【請求項３３】
請求項２７に記載のオイルを含有する飲料。
【請求項３４】
少なくとも１４７個のコドンがヤロウィア属内での発現のためにコドン最適化される、配列番号１８３で示されるＣ２０エロンガーゼをコードする単離核酸分子。
【請求項３５】
少なくとも１３４個のコドンがヤロウィア属内での発現のためにコドン最適化される、配列番号１８８で示されるＣ２０エロンガーゼをコードする単離核酸分子。
【請求項３６】
少なくとも２８５個のコドンがデサチュラーゼに結合されたエロンガーゼを含むヤロウィア属マルチザイムにおける発現のためにコドン最適化される、配列番号１９２で示されるΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする単離核酸分子。
【請求項３７】
マルチザイムを製造するための方法であって、
（ａ）第１のポリペプチドを少なくとも第２のポリペプチドと連結させるステップであって、ここで各ポリペプチドは独立しかつ分離可能な酵素活性を有するステップと；
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の独立しかつ分離可能な酵素活性について評価するステップと、
を含む、方法。
【請求項３８】
酵素活性が、脂肪酸エロンガーゼ、脂肪酸デサチュラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、アシルＣｏＡシンターゼ、およびチオエステラーゼからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
酵素活性が、少なくとも１つの脂肪酸デサチュラーゼに連結された少なくとも１つの脂肪酸エロンガーゼを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
脂肪酸デサチュラーゼが、Δ４デサチュラーゼ、Δ５デサチュラーゼ、Δ６デサチュラーゼ、Δ８デサチュラーゼ、Δ９デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼ、Δ１５デサチュラーゼ、またはΔ１７デサチュラーゼからなる群から選択される、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
脂肪酸エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ、Ｃ１４／１６エロンガーゼ、Ｃ１６／１８エロンガーゼ、Ｃ１８／２０エロンガーゼ、またはＣ２０／２２エロンガーゼからなる群から選択される、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４２】
連結が、ポリペプチド結合、配列番号１９８（ＥｇＤＨＡｓｙｎ１リンカーアミノ酸配列）、配列番号２００（ＥｇＤＨＡｓｙｎ２リンカー）、配列番号２３５（ＥａＤＨＡｓｙｎ１リンカー）、配列番号４３５、配列番号４３８、配列番号４７２、および配列番号５０４からなる群から選択される、請求項３７、３８または３９に記載の方法。
【請求項４３】
油料種子植物の脂肪酸特性を改変するための方法であって、
（ａ）油料種子植物細胞を請求項１５に記載の組換えコンストラクトで形質転換するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記形質転換された油料種子植物細胞から植物を再生するステップと、
を含み、ここで前記植物は改変された脂肪酸特性を有する、方法。
【請求項４４】
油料種子植物が大豆である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項２３に記載の植物の子孫。
【請求項４６】
第１の酵素活性がΔ９エロンガーゼであり、かつ第２の酵素活性がΔ８デサチュラーゼである、請求項６に記載のマルチザイムを含む組換え微生物宿主細胞。
【請求項４７】
第１の酵素活性がＣ２０エロンガーゼであり、かつ第２の酵素活性がΔ４デサチュラーゼである、請求項６に記載のマルチザイムを含む組換え微生物宿主細胞。
【請求項４８】
宿主細胞が油性酵母である、請求項４６または４７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４９】
リノール酸をジホモγ−リノレン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Δ９エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ８デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Δ９エロンガーゼと前記Δ８デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＧＬＡシンターゼと、
ｉｉ）リノール酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をジホモγ−リノレン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５０】
α−リノレン酸をエイコサトリエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Δ９エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ８デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Δ９エロンガーゼと前記Δ８デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＧＬＡシンターゼと、
ｉｉ）α−リノレン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をエイコサトリエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５１】
エイコサペンタエン酸をドコサヘキサエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Ｃ２０エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ４デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Ｃ２０エロンガーゼと前記Δ４デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＨＡシンターゼと、
ｉｉ）エイコサペンタエン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をドコサヘキサエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５２】
アラキドン酸をドコサペンタエン酸に変換するための方法であって、
ａ）以下：
ｉ）１）Ｃ２０エロンガーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；
２）Δ４デサチュラーゼをコードする少なくとも１つのポリペプチド；および
３）前記Ｃ２０エロンガーゼと前記Δ４デサチュラーゼの間に挿入されるポリペプチドリンカー；
を含むＤＨＡシンターゼと、
ｉｉ）アラキドン酸の供給源と、
を含む組換え微生物宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）（ａ）の宿主細胞をドコサペンタエン酸が生成される条件下で成長させるステップと、
を含む、方法。
【請求項５３】
ＤＧＬＡシンターゼが、配列番号４４１、配列番号４４７、配列番号４５４、配列番号４６１、配列番号４６４、配列番号４７１、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、および配列番号５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５４】
ＤＨＡシンターゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、および配列番号４１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５５】
ポリペプチドリンカーが、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２３５、配列番号４３８、配列番号４４５、配列番号４７２、および配列番号５０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
Δ９エロンガーゼが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号３１９、配列番号３５９、配列番号４２０、配列番号４２２、および配列番号５１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５７】
Δ８デサチュラーゼが、配列番号３２８、配列番号４２４、配列番号４２６、配列番号４２８、配列番号４３０、および配列番号５１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５８】
Ｃ２０エロンガーゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、配列番号１８４、および配列番号１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５９】
Δ４デサチュラーゼが、配列番号１２、配列番号２２、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号２１５、配列番号２２１、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号３８２、配列番号３８４、配列番号３８６、配列番号３８８、配列番号４０４、配列番号４０６、配列番号４０８、および配列番号１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項６０】
改善されたΔ４デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドを同定するための方法であって、
ａ）ベースラインのΔ４デサチュラーゼ活性を有するユーグレナ・アナベナから単離される野生型Δ４デサチュラーゼポリペプチドを提供するステップと、
ｂ）（ａ）の野生型ポリペプチドから約１〜約２００個のアミノ酸を切断し、前記ベースラインのΔ４デサチュラーゼ活性よりも増大したΔ４デサチュラーゼ活性を有する切断型突然変異ポリペプチドを製造するステップと、
を含む、方法。
【請求項６１】
野生型ポリペプチドがポリペプチドのＮ末端部分で切断される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
野生型ポリペプチドから約１〜約７０個のアミノ酸が切断される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
多価不飽和脂肪酸を生成し、かつ以下：
１）Δ９デサチュラーゼ、
２）Δ１２デサチュラーゼ、
３）Δ９エロンガーゼ、
４）Δ８デサチュラーゼ、
５）Δ５デサチュラーゼ、
６）Δ１７デサチュラーゼ、
７）Ｃ２０／２２エロンガーゼ、および
８）Δ４デサチュラーゼ；
の連続経路における酵素をコードするポリペプチドを発現する微生物宿主細胞であって、ここで前記ポリペプチドは少なくとも１つのマルチザイムを含み、前記融合体は少なくとも１つの連続的な酵素対の間での融合体を含む、微生物宿主細胞。
【請求項６４】
多価不飽和脂肪酸が、ω−３脂肪酸およびω−６脂肪酸からなる群から選択される、請求項６３に記載の微生物宿主。
【請求項６５】
（ａ）配列番号４４１、配列番号４４７、配列番号４５４、配列番号４６１、配列番号４６４、配列番号４７１、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、または配列番号５１９で示される、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号４４０、配列番号４４６、配列番号４５３、配列番号４６０、配列番号４６３、配列番号４７０、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、または配列番号４９６で示される、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号４４０、配列番号４４６、配列番号４５３、配列番号４６０、配列番号４６３、配列番号４７０、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、または配列番号４９６で示されるヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、ＤＧＬＡシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のヌクレオチド配列の相補体であって、前記相補体および前記ヌクレオチド配列は同数のヌクレオチドからなりかつ１００％相補的である、相補体
を含む、ＤＧＬＡシンターゼをコードする単離ポリヌクレオチド。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１Ａ】
【図５１Ｂ】
【図５２Ａ】
【図５２Ｂ】
【図５２Ｃ】
【図５３Ａ】
【図５３Ｂ】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【図６９】
【図７０】
【図７１】
【図７２】
【図７３】
【図７４】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１Ａ】
【図５１Ｂ】
【図５２Ａ】
【図５２Ｂ】
【図５２Ｃ】
【図５３Ａ】
【図５３Ｂ】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【図６９】
【図７０】
【図７１】
【図７２】
【図７３】
【図７４】
【公表番号】特表２０１０−５２３１１３（Ｐ２０１０−５２３１１３Ａ）
【公表日】平成２２年７月１５日（２０１０．７．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５０２１３６（Ｐ２０１０−５０２１３６）
【出願日】平成２０年４月３日（２００８．４．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００４３７７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１２４０４８
【国際公開日】平成２０年１０月１６日（２００８．１０．１６）
【出願人】（３９００２３６７４）イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー (2,692)
【氏名又は名称原語表記】Ｅ．Ｉ．ＤＵ ＰＯＮＴ ＤＥ ＮＥＭＯＵＲＳ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月１５日（２０１０．７．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月３日（２００８．４．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００４３７７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１２４０４８
【国際公開日】平成２０年１０月１６日（２００８．１０．１６）
【出願人】（３９００２３６７４）イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー (2,692)
【氏名又は名称原語表記】Ｅ．Ｉ．ＤＵ ＰＯＮＴ ＤＥ ＮＥＭＯＵＲＳ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
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