形質移入剤を用いることなく細胞、組織または臓器に吸収され、標的遺伝子をサイレンシングすることができる二本鎖オリゴヌクレオチド複合体を提供する。前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体は、細胞、組織または臓器への前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体の輸送および吸収を促進するコンジュゲート部を有する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
二本鎖オリゴヌクレオチド複合体であって、前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体は、
１８個から３０個のヌクレオチドよりなるセンス鎖と、
１８個から３０個のヌクレオチドよりなるアンチセンス鎖と、
コンジュゲート部と、
長さが３個から９個の原子数からなるリンカ分子とから構成され、
前記アンチセンス鎖は前記センス鎖および標的遺伝子双方に対して高い相補性を有し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とは二本鎖を形成し、
前記センス鎖のヌクレオチドの４０％から９０％、および前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの４０％から９０％は、化学的に修飾されたヌクレオチドあり、
前記コンジュゲート部は細胞内への輸送を促進し、
前記リンカ分子は前記コンジュゲート部を前記センス鎖と結合させることを特徴とする二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項２】
前記アンチセンス鎖の１０、１１、１２、１３または１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間にミスマッチを有する、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項３】
前記アンチセンス鎖の１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間に前記ミスマッチを有する、請求項２に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項４】
前記化学的に修飾された各ヌクレオチドが、２’F修飾ヌクレオチドおよび２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドからなる群から選ばれる、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項５】
前記センス鎖の１番目および２番目のヌクレオチド、全Ｃヌクレオチド、および全Ｕヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖の全Ｃヌクレオチドおよび全Ｕヌクレオチドは２’Ｆ修飾ヌクレオチドである、請求項４に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項６】
前記コンジュゲート部は、コレステロール、コレスタノール、スチグマステロール、コラン酸、およびエルゴステロールよりなる群から選ばれる、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項７】
前記リンカ分子は５個から８個の原子よりなる長さを持つ、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項８】
前記センス鎖の５’末端に結合した色素分子を少なくとも一つ有する、請求項７に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項９】
前記リンカ分子によってコンジュゲート部が前記センス鎖の３’末端に結合されている、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１０】
前記コンジュゲート部はコレステロールであり、前記リンカ分子は８個の原子よりなる長さを持ち、前記センス鎖が（式１）に示す構造を有する、請求項９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【化１】

【請求項１１】
前記コンジュゲート部はコレステロールであり、前記リンカ分子は５個の原子よりなる長さを持ち、前記センス鎖が（式２）に示す構造を有する、請求項９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【化２】

【請求項１２】
前記センス鎖の１番目および２番目のヌクレオチド、全Ｃヌクレオチド、および全Ｕヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾され、前記アンチセンス鎖の全Ｃヌクレオチドおよび全Ｕヌクレオチドは、２’Ｆ修飾される、請求項１１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１３】
ホスフェート基がアンチセンス鎖の５’末端にある、請求項１２に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１４】
前記センス鎖は１９個から２３個のヌクレオチドよりなる長さを有し、前記アンチセンス鎖は１９個から２３個のヌクレオチドよりなる長さを有する、請求項１３に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１５】
前記アンチセンス鎖の１０、１１、１２、１３または１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間にミスマッチを有する、請求項１４に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１６】
前記アンチセンス鎖の１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間に前記ミスマッチを有する、請求項１５に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１７】
前記アンチセンス鎖の３’末端にオーバーハングを有し、前記オーバーハングはホスホロチオエート連結部を有する、請求項１６に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項１８】
二本鎖オリゴヌクレオチド複合体であって、前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体は、
１８個から３０個のヌクレオチドよりなるセンス鎖と、
１８個から３０個のヌクレオチドよりなるアンチセンス鎖と、
前記センス鎖３’末端にＣ５リンカ分子を介して結合したコレステロール分子と、
前記アンチセンス鎖の５’末端に位置するホスフェート基とから構成され、
前記アンチセンス鎖は前記センス鎖および標的遺伝子双方に対して高い相補性を有し、前記センス鎖および前記アンチセンス鎖は二本鎖を形成し、
前記センス鎖に結合したコレステロール−リンカ分子は（式３）に示す構造を有し、
前記センス鎖のヌクレオチドの４０％から９０％、および前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの４０％から９０％は、化学的に修飾されたヌクレオチドであることを特徴とする二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【化３】

【請求項１９】
前記センス鎖の１番目および２番目のヌクレオチド、全Ｃヌクレオチド、および全Ｕヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖の全Ｃヌクレオチドおよび全Ｕヌクレオチドは２’Ｆ修飾ヌクレオチドである、請求項１８に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項２０】
前記アンチセンス鎖の１０、１１、１２、１３または１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間にミスマッチを有する、請求項１９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項２１】
前記アンチセンス鎖の１４番目のヌクレオチドと、前記センス鎖の相対するヌクレオチドとの間に前記ミスマッチを有する、請求項２０に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項２２】
前記アンチセンス鎖の３’末端に、ホスフォロチオエート連結部を含む２ヌクレオチドオーバーハングをさらに有する、請求項２１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド複合体。
【請求項２３】
細胞の標的遺伝子の発現を阻害する方法であって、前記方法は請求項１から請求項２２までの任意の請求項に記載される二本鎖オリゴヌクレオチド複合体を、前記細胞に輸送する方法。
【請求項２４】
前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体を、逆形質移入により前記細胞中に輸送することを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記二本鎖オリゴヌクレオチド複合体を、生体中前記細胞内に輸送することを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１から請求項２２までのいずれかの請求項に記載される二本鎖オリゴヌクレオチド複合体と、医薬品として許容される担体または希釈液の少なくとも一つとを含有する医薬品組成物。
【請求項２７】
請求項１から請求項２２までのいずれかの請求項に記載される二本鎖オリゴヌクレオチド複合体および希釈血清組織培養培地を含有する医薬品組成物。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１０Ｄ】

【図１０Ｅ】

【図１１】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１６】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１８Ｃ】

【図１８Ｄ】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図１９Ｄ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２２】

【公表番号】特表２０１０−５０４３５５（Ｐ２０１０−５０４３５５Ａ）
【公表日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２９３９６（Ｐ２００９−５２９３９６）
【出願日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７９０５１
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３６８２５
【国際公開日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（５０５１７５８２５）ダーマコン，　インコーポレイテッド (10)
【Ｆターム（参考）】