化学療法剤と組み合わせた癌の治療用免疫サイトカイン
本発明は、テネイシン−Ｃを標的とする抗体−インターロイキン２（ＩＬ２）コンジュゲートと組み合わせて、抗癌剤、例えばドキソルビシンまたはパクリタキセルを使用する癌の治療に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法剤と免疫サイトカインとの組合せを使用した癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
テネイシン−Ｃは、細胞接着を調節する細胞外マトリックスの大型六量体糖タンパク質である。これは、細胞増殖および細胞遊走などのプロセスに関与しており、形態形成および胚形成の間、ならびに腫瘍形成または血管新生下で生じる組織構造の変化に関係している。
【０００３】
テネイシン−Ｃの大型アイソフォーム(large isoform)の強力な過剰発現は、多くの腫瘍で報告されており［Ｂｏｒｓｉ １９９２年 上記］、ドメインＡ１およびドメインＤに特異的なモノクローナル抗体は、それぞれ、臨床において広範に特徴づけられている［Ｒｉｖａ Ｐら Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９２年；第５１巻：７〜１３頁、Ｒｉｖａ Ｐら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９５年；第５５巻：５９５２ｓ〜５９５６ｓ頁、Ｐａｇａｎｅｌｌｉ Ｇら Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ １９９４年；第２１巻：３１４〜３２１頁、Ｒｅａｒｄｏｎ ＤＡら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００２年；第２０巻：１３８９〜１３９７頁、Ｂｉｇｎｅｒ ＤＤら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９８年；第１６巻：２２０２〜２２１２頁］。
【０００４】
テネイシン−Ｃに特異的なヒトモノクローナル抗体断片は、国際公開第２００６／０５０８３４号パンフレットに記載されており、正常組織と比べて優先的に腫瘍組織と結合することが示されている。これらの抗体は、例えば、サイトカインなどのトキシンを腫瘍細胞へと特異的に送達するのに有用である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００６／０５０８３４パンフレット
【特許文献２】欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書
【特許文献３】英国特許出願公開第２１８８６３８（Ａ）号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第２３９４００号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第０１２０６９４号明細書
【特許文献６】欧州特許出願公開第０１２５０２３号明細書
【特許文献７】ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５
【特許文献８】国際公開第９４／１３８０４号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｏｒｓｉ １９９２ 上記
【非特許文献２】Ｒｉｖａ Ｐら Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９２年；第５１巻：７〜１３頁
【非特許文献３】Ｒｉｖａ Ｐら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９５年；第５５巻：５９５２ｓ〜５９５６ｓ頁、
【非特許文献４】Ｐａｇａｎｅｌｌｉ Ｇら Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ １９９４年；第２１巻：３１４〜３２１頁
【非特許文献５】Ｒｅａｒｄｏｎ ＤＡら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００２年；第２０巻：１３８９〜１３９７頁
【非特許文献６】Ｂｉｇｎｅｒ ＤＤら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９８年；第１６巻：２２０２〜２２１２頁
【非特許文献７】Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第２１５巻：４０５〜４１０頁
【非特許文献８】ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ 第８５巻：２４４４〜２４４８頁
【非特許文献９】ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．第１４７巻：１９５〜１９７頁
【非特許文献１０】Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７年）第２５巻 ３３８９〜３４０２頁
【非特許文献１１】Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ 第３４１巻、５４４〜５４６頁（１９８９年）
【非特許文献１２】Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４２巻、４２３〜４２６頁、１９８８年
【非特許文献１３】Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、第８５巻、５８７９〜５８８３頁、１９８８年
【非特許文献１４】Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ 第９０巻 ６４４４〜６４４８頁、１９９３年
【非特許文献１５】Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ 第１４巻 １２３９〜１２４５頁 １９９６年
【非特許文献１６】Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第５６巻 ３０５５〜３０６１頁 １９９６年
【非特許文献１７】Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７年
【非特許文献１８】ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、テネイシン−Ｃを標的とする抗体−サイトカインコンジュゲートが、癌の治療において、ドキソルビシンおよびパクリタキセルなどの抗癌化合物と予想外の相乗作用を示すことを発見した。
【０００８】
本発明の一態様では、抗癌化合物および抗体−インターロイキン２（ＩＬ２）コンジュゲートを、それを必要とする個体に投与することを含み、ここで抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたＩＬ２を含む、癌の治療方法が提供される。
【０００９】
本発明の他の態様では、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて、それを必要としている個体に抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法に使用するための抗癌化合物、および抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて、それを必要とする個体に抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における抗癌化合物の使用が提供され、前記抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む。
【００１０】
本発明の他の態様では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートを、抗癌化合物と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲート、および抗体−ＩＬ２コンジュゲートを、抗癌化合物と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートの使用が提供される。
【００１１】
本発明の他の態様では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと抗癌化合物との組合せ、ならびに抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと抗癌化合物との組合せの使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図２】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図３】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図４】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図５】ヌードマウスに移植されたＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌腫瘍に対する、ドキソルビシン、Ｆ１６−ＩＬ２、および組換えＩＬ２の効果を示す図である。
【図６】ヌードマウスに移植されたＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌腫瘍に対する、パクリタキセル（タキソール（商標））およびＦ１６−ＩＬ２の効果を示す図である。
【図７】小型テネイシン−Ｃアイソフォーム（Ａ）および大型テネイシン−Ｃアイソフォーム（Ｂ）の模式図を示す図である。いくつかのフィブロネクチンタイプＩＩＩ様ドメインは、選択的スプライシングの影響下にあり、分子に含まれているか（Ｂ）または除外されているか（Ａ）のいずれかである。テネイシンＣのアミノ酸配列およびコーディングヌクレオチド配列は、それぞれ、配列データベース参照番号ＮＰ＿００２１５１．１ ＧＩ：４５０４５４９およびＮＭ＿００２１６０．１ ＧＩ：４５０４５４８として公表されている。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書中に記載されているような治療に好適な癌には、任意のタイプの固形癌もしくは非固形癌または悪性リンパ腫、特に白血病、肉腫、皮膚癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、結腸直腸癌、子宮頚癌、肝臓癌、頭頸部癌、食道癌、膵臓癌、腎癌、胃癌、および大脳癌が含まれる。癌は家族性であってもよく、または散発性であってもよい。
【００１４】
いくつかの好ましい実施形態では、癌は乳癌であってもよい。
【００１５】
抗癌化合物とは、癌細胞の成長、分裂、および／または増殖を阻害する細胞毒性化合物である。抗癌化合物は、ある場合には、患者の正常な非癌細胞に影響を与える場合がある。例えば、抗癌化合物は、細胞周期を阻害、またはアポトーシスを活性化する場合がある。細胞周期を阻害する好適な抗癌化合物には、有糸分裂紡錘体形成の阻害剤を含むＤＮＡ損傷剤および抗有系分裂剤が含まれる。
【００１６】
ＤＮＡ損傷剤は、細胞内ＤＮＡのＤＮＡ ＤＳＢを誘導し、それによってＤＮＡ複製を阻害または破棄する化学療法化合物である。癌の治療に使用するための多くの好適な化合物が、当技術分野で知られており、例えば、ブレオマイシンヒドルキシ尿素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ ｈｙｄｏｒｘｙｕｒｅａ）、マイトマイシン、およびアクチノマイシン、ならびにダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、およびバルルビシンなどのアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅ）、エトポシドおよびテニポシド、およびテカン（ｔｅｃａｎ）ファミリーのメンバー、例えばイリノテカン、トポテカン、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）を含むトポイソメラーゼＩおよびＩＩ活性の阻害剤が含まれる。ＤＮＡ損傷剤は、任意の便利な形態または製剤で、本明細書中に記載されているように使用することができる。例えば、特定のＤＮＡ損傷剤の任意の好適な異性体、塩、溶媒和物、化学的に保護された形態、またはプロドラッグを使用することができる。
【００１７】
いくつかの好ましい実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、ドキソルビシン（（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−ジオン）である。ドキソルビシンは、アドリアマイシン（商標）およびルベックス（商標）などの商品名で癌の治療に広く使用されているアントラサイクリン・インターカレート剤である。
【００１８】
有糸分裂紡錘体形成を阻害する抗癌化合物は、例えば微小管に結合し、微小管重合または微小管安定性を変更して、細胞周期進行の阻害および最終的にはアポトーシスを導くことができる。有糸分裂紡錘体形成阻害剤の例には、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソール（商標）：β−（ベンゾイルアミノ）−α−ヒドロキシ−，６，１２ｂ−ビス（アセチルオキシ）−１２−（ベンゾイルオキシ）−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ（３，４）ベンズ（１，２−ｂ）オキセト−９−イルエステル，（２ａＲ−（２ａ−α，４−β，４ａ−β，６−β，９−α（α−Ｒ＊，β−Ｓ＊），１１−α，１２−α，１２ａ−α，２ｂ−α））−ベンゼンプロパン酸）およびその類似体または誘導体が含まれる。
【００１９】
タキサンとは、４員のオキセタン環と連結されている１５員のタキサン環系からなる複合エステルである。好ましいタキサンは、微小管形成の増強に必要であることが当技術分野で知られている成分を有するもの、例えばパクリタキセルおよびドセタキセルである。パクリタキセルおよびドセタキセルの構造は、タキサン環Ｃ−１０位における置換、およびＣ−１３に結合されているエステル側鎖における置換の点で異なっている。ドセタキセルは、Ｃ−１３位の（２Ｒ，３Ｓ）−フェニルイソセリン部分のアミノ基に、ベンゾイルの代わりにｔ−ブトキシカルボニルを有し、Ｃ−１０のアセトキシ基の代わりにヒドロキシル基を有する。パクリタキセルおよびドセタキセルの構造は、当技術分野で周知である。
【００２０】
本明細書中に記載されているような使用に好適な他のタキサンは、炭素６〜１２を含むパクリタキセル分子の部分に沿って、Ｃ−７、Ｃ−９、およびＣ−１０に酸素官能基を有する構造的変異を有するパクリタキセル誘導体である。多数のそのような誘導体が当技術分野で知られており、そのような誘導体は、パクリタキセルの生物活性に匹敵する生物学的活性を示すことが知られている。例えば、Ｃ−７ヒドロキシル基のアシル化、または水素によるその置換は、パクリタキセルの活性を有意には低減しない。加えて、１０位のアセトキシ基を水素と置換しても、ほんの少しの活性低下が引き起こされるだけである。
【００２１】
Ｃ−９カルボニル基をα−ＯＨ基へと還元すると、チューブリン形成活性のわずかな増大が引き起こされることが知られている。加えて、シクロプロパン環が７位および８位を架橋している転位生成物は、パクリタキセルとほぼ同様に細胞毒性であることが知られている。ｍ−置換ベンゾイル誘導体は、それらのｐ−置換類似体より活性であり、多くの場合パクリタキセル自体より活性であることも報告されている。
【００２２】
本明細書中に記載されているような使用に好適な別のパクリタキセル類似体は、Ａ−ノル−パクリタキセル（Ａ−ｎｏｒ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）である。この類似体は、パクリタキセルの活性のほんの３分の１であるチューブリン形成活性を示す。Ａ−ノル−パクリタキセルおよびパクリタキセルは、非常に類似した分子形状を有しており、それにより、それらのチューブリン形成活性が類似していることが説明できる。
【００２３】
他の好適なタキサンは、タキサズム（ｔａｘａｓｍ）、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−パクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル、およびそれらの混合物である。
【００２４】
いくつかの好ましい実施形態では、抗癌化合物はパクリタキセルである。
【００２５】
本明細書中に記載されているような使用のための抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含むことができる。
【００２６】
インターロイキン−２（ＩＬ２）は、免疫調節と、Ｔリンパ球およびＢリンパ球の増殖とに関与する分泌サイトカインである。ＩＬ２は、腫瘍細胞に対して細胞毒性効果を有することが示されており、組換えヒトＩＬ２（アルデスロイキン：プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標））は、転移性腎癌および転移性黒色腫の治療用にＦＤＡ承認を有する。ヒトＩＬ２の配列は、配列番号１１に提示されており、配列データベース参照番号ＮＰ＿０００５７７．２ ＧＩ：２８１７８８６１として公表されている。
【００２７】
いくつかの好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートのＩＬ２部分は、配列番号１１に提示されている成熟ヒトＩＬ２配列と、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。
【００２８】
配列同一性は、一般的にアルゴリズムＧＡＰに準拠して定義される（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧ ｐａｃｋａｇｅ、Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ Ｉｎｃ社製、サンディエゴ ＵＳＡ）。ＧＡＰは、ニードルマン−ブンシュアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を使用して、一致の数を最大化しギャップの数を最小化する２つの完全配列を整列する。一般的には、ギャップ生成ペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝４を用いて、初期設定パラメーターが使用される。ＧＡＰの使用が好ましい場合があるが、他のアルゴリズム、例えばＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第２１５巻：４０５〜４１０頁の方法を使用している）、ＦＡＳＴＡ（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ 第８５巻：２４４４〜２４４８頁の方法を使用している）、またはスミス−ウォーターマンアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．第１４７巻：１９５〜１９７頁）、または上記のＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）のＴＢＬＡＳＴＮプログラムを、一般的には初期設定パラメーターを用いて使用してもよい。特に、ｐｓｉ−Ｂｌａｓｔアルゴリズム（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７年）第２５巻 ３３８９〜３４０２頁）を使用することができる。
【００２９】
いくつかの特に好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートのＩＬ２部分は、配列番号１１に提示されている成熟ヒトＩＬ２の配列を含む。
【００３０】
ＩＬ２部分は、抗体またはそのポリペプチド構成要素の上流（Ｎ末端）または下流（Ｃ末端）に融合することができる。
【００３１】
ＩＬ２部分は、任意の好適な共有結合手段または非共有結合手段によって、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分に接続または結合することができる。好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、ＩＬ２および抗テネイシンＣ抗体またはそのポリペプチド構成要素（例えば、抗体またはＦａｂなどの多鎖抗体断片の重鎖または軽鎖）を含む融合タンパク質であってもよい。したがって、例えば、ＩＬ２部分は、抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインに融合することができる。典型的には、抗体またはその構成要素とＩＬ２部分は、ペプチドリンカー、例えば約５〜２５残基、例えば１０〜２０残基、好ましくは約１５残基のペプチドを介して結合されている。ペプチドリンカーの好適な例は、当技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１２で示されているようなアミノ酸配列を有してもよい。通常、リンカーは、モチーフの１つまたは複数のタンデムリピートを含むアミノ酸配列を有する。典型的には、モチーフは５個の残基の配列であり、好ましくは、残基のうち少なくとも４個はＧｌｙまたはＳｅｒである。５個の残基のうちの４個がＧｌｙまたはＳｅｒである場合、残りの残基はＡｌａであってもよい。より好ましくは、５個の残基の各々はＧｌｙまたはＳｅｒである。好ましいモチーフは、ＧＧＧＧＳ、ＳＳＳＳＧ、ＧＳＧＳＡ、およびＧＧＳＧＧである。好ましくは、モチーフは、配列において隣接しており、介在するヌクレオチドがリピート間に存在しない。リンカー配列は、モチーフの１つから５つのリピート、好ましくはモチーフの３つまたは４つのリピートを含んでいてもよく、またはそれらからなっていてもよい。例えば、３つのタンデムリピートを有するリンカーは、以下のアミノ酸配列の１つを有していてもよい：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ−配列番号１３
ＳＳＳＳＧＳＳＳＳＧＳＳＳＳＧ−配列番号１４
ＧＳＧＳＡＧＳＧＳＡＧＳＧＳＡ−配列番号１５
ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ−配列番号１６
好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分は、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的に結合する。例えば、抗体は、テネイシン−Ｃ小型アイソフォームと比べて、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームと優先的に結合することができる。最も好ましくは、抗体は、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームのＡ１ドメインに結合する。
【００３２】
好ましい抗体は、腫瘍特異的であり、正常組織と比べて腫瘍組織に優先的に結合する。抗体は、例えば、腫瘍組織の間質ならびに／または新生血管構造および血管周囲構造に対して、正常組織より優先的に結合することができる。
【００３３】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための好適な抗体の例は、国際公開第２００６／０５０８３４号パンフレットに開示されている。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分は、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃに対する結合に競合する。
【００３５】
抗体間の競合は、例えばＥＬＩＳＡを使用して、および／または他の未標識抗体（複数可）の存在下で検出することができる１つの抗体に対する特異的リポーター分子の標識化によって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで容易にアッセイすることができ、同一エピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体の同定を可能にする。
【００３６】
本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための好適な抗体は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含んでいてもよく、
ＶＨドメインは、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインは、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む。
【００３７】
いくつかの好ましい実施形態では、抗体は、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含んでいてもよい。
【００３８】
これらのＶＨドメインおよびＶＬドメインならびにＣＤＲの変異体も、本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための抗体に使用することができる。好適な変異体は、配列変更または突然変異およびスクリーニングの方法によって取得することができる。
【００３９】
本明細書中に記載されているような使用のための特定の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸配列変更（アミノ酸残基の付加、欠失、置換、および／または挿入）、恐らくは、約２０未満の変更、約１５未満の変更、約１０未満の変更、または約５つ未満の変更、４、３、２、または１つの変更を含んでいてもよい。１つまたは複数のフレームワーク領域および／または１つまたは複数のＣＤＲに、変更がなされていてもよい。特に、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、および／またはＶＨ ＣＤＲ３、特にＶＨ ＣＤＲ３に変更がなされていてもよい。
【００４０】
抗癌化合物、抗体−ＩＬ２コンジュゲート、およびこれらの分子の１つまたは両方を含む組成物の投与は、好ましくは「治療上有効な量」内であり、これは患者に有益性を示すのに十分である。そのような有益性は、少なくとも１つの徴候の少なくとも寛解であり得る。実際の投与量、ならびに投与の速度および時間的経過は、治療されるものの性質および重症度に依存するであろう。治療の処方、例えば用量などに関する決定は、一般開業医および他の医師の責任内にある。
【００４１】
正確な用量は、多くの要素、治療される区域の大きさおよび位置、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの厳密な性質（例えば、全抗体、断片、または二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ））に依存するであろう。典型的な抗体−ＩＬ２コンジュゲート用量は、全身投与の場合は０．５ｍｇから１００ｇ、局所投与の場合は１０μｇから１ｍｇの範囲であろう。典型的には、コンジュゲートの抗体部分は、全抗体、好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであろう。これは、成人患者の単回治療用の用量であり、小児および幼児用には比例的に調節することができ、他の抗体構成用に分子量に比例させて調節することもできる。抗癌化合物用の適切な用量および投薬計画は、当技術分野で周知である。
【００４２】
治療は、医師の裁量により、毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で反復することができる。
【００４３】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、任意の好適な投薬計画に従って、順次または同時に投与することができる。
【００４４】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、通常、活性化合物に加えて少なくとも１つの成分を含んでいてもよい医薬組成物の形態で個体に投与されるであろう。
【００４５】
好適な成分には、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者に周知の他の物質が含まれる。そのような物質は非毒性であるべきで、活性成分の効果を妨げるべきではない。担体または他の物質の厳密な性質は、投与経路に依存するであろうし、投与経路は、経口であってもよく、または注射によって、例えば静脈内でもよい。
【００４６】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、別々の医薬組成物中に配合してもよく、または適切な場合には、同一医薬組成物中に配合してもよい。
【００４７】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む癌の治療に使用するための医薬組成物が提供される。
【００４８】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを配合することを含む癌の治療に使用するための医薬組成物を作製するための方法が提供される。
【００４９】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、散剤、または液剤の形態であってもよい。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含むことができる。液状医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱油、または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他のサッカライド溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールなどのグリコールが含まれていてもよい。
【００５０】
静脈注射または疾患部位への注射の場合、活性成分は、発熱性物質を含まない、好適なｐＨ、等張性、および安定性を有する、非経口的に許容される水溶液の形態であろう。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを使用して、好適な溶液を調製することが十分に可能である。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、および／または他の添加剤が含まれていてもよい。
【００５１】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む癌の治療に使用するための治療用キットが提供される。
【００５２】
キットの構成要素（すなわち、抗癌化合物および抗体−ＩＬ２コンジュゲート）は、無菌であり、密封されたバイアルまたは他の容器の中にある。キットは、本明細書中に記載されている方法で構成要素を使用するための説明書をさらに含んでいてもよい。キットの構成要素は、容器、例えば、袋、箱、ビン、カン、またはブリスターパックに含まれていてもよく、または包装されていてもよい。
【００５３】
用語
抗体
これは天然であるか、または部分的合成もしくは全合成的に生成されたかにかかわらず、これから免疫グロブリンを表す。この用語は、抗体結合ドメインであるかまたは抗体結合ドメインと実質的に相同的である結合ドメインを有する任意のポリペプチドまたはタンパク質も包含する。抗体の例は、免疫グロブリンアイソタイプおよびそれらのアイソタイプのサブクラス；Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄなどの抗原結合ドメインを含む断片；ならびに二重特異性抗体である。
【００５４】
モノクローナル抗体および他の抗体を採取し、組換えＤＮＡ技術の手法を使用して、元の抗体の特異性を保持する他の抗体またはキメラ分子を産生することが可能である。そのような手法は、抗体の免疫グロブリン可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするＤＮＡを、異なる免疫グロブリンの定常領域、またはフレームワーク領域を有する定常領域に導入することを伴っていてもよい。例えば、欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書、英国特許出願公開第２１８８６３８（Ａ）号明細書、または欧州特許出願公開第２３９４００号明細書を参照されたい。ハイブリドーマまたは抗体を産生する他の細胞は、遺伝子突然変異または他の変化の影響下にある可能性があり、産生された抗体の結合特異性を変更する場合もまたは変更しない場合もある。
【００５５】
抗体は様々な様式で修飾されている場合があるため、「抗体」という用語は、必要とされる特異性を有する結合ドメインを有する任意の特異的結合メンバーまたは物質を包含すると解釈されるべきである。したがって、この用語は、天然であるか、または部分的合成もしくは全合成的に産生されたかにかかわらず、免疫グロブリン結合ドメインを含む任意のポリペプチドを含む、抗体の抗体断片、誘導体、機能的等価物、および相同体を包含する。したがって、別のポリペプチドに融合された免疫グロブリン結合ドメインを含むキメラ分子、または等価物が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は、欧州特許出願公開第０１２０６９４号明細書および欧州特許出願公開第０１２５０２３号明細書に記載されている。
【００５６】
全抗体の断片は、抗原に結合するという機能を果たし得ることが示されている。結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ 第３４１巻、５４４〜５４６頁（１９８９年））；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片；（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、この２つのドメインを結合させて抗原結合部位の形成を可能にするペプチドリンカーによって連結されている単一鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４２巻、４２３〜４２６頁、１９８８年；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、第８５巻、５８７９〜５８８３頁、１９８８年）；（ｖｉｉｉ）二重特異的な単一鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）「二重特異性抗体」、遺伝子融合によって構築された多価性または多重特異性断片（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ 第９０巻 ６４４４〜６４４８頁、１９９３年）である。Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または二重特異性抗体分子は、ＶＨドメインとＶＬドメインとを連結するジスルフィド架橋を組み入れることによって安定化することができる（Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ 第１４巻 １２３９〜１２４５頁 １９９６年）。ＣＨ３ドメインに結合されたｓｃＦｖを含むミニ抗体（Ｍｉｎｉｂｏｄｙ）も作製することができる（Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第５６巻 ３０５５〜３０６１頁 １９９６年）。
【００５７】
二重特異性抗体はポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、この２つのドメインは連結されている（例えば、ペプチドリンカーによって）が、互いに結合して抗原結合部位を形成することはできず、抗原結合部位は、多量体内の一方のポリペプチドの第１のドメインと、多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの結合によって形成される（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット）。
【００５８】
抗原結合ドメイン
これは、抗原に特異的に結合し、抗原の一部またはすべてに相補的である区域を含む抗体の部分を表す。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定の部分に結合できるだけであり、その部分はエピトープと称されている。抗原結合ドメインは、１つまたは複数の抗体可変ドメインによって提供されてもよい（例えば、ＶＨドメインからなるいわゆるＦｄ抗体断片）。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００５９】
特異性
これは、特異的な結合対の１つのメンバーが、その特異的結合パートナー（複数可）以外の分子とはいかなる有意な結合をも示さない状況を指すために使用することができる。例えば、テネイシン−Ｃに特異的な抗体は、フィブロネクチンなどの細胞外マトリックスの他の構成要素に対して、ほぼまたは全く結合を示すことはできない。同様に、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的な抗体は、テネイシン−Ｃ小型アイソフォームに対して、ほぼまたは全く結合を示すことができない。この用語は、例えば、抗原結合ドメインが、多数の抗原によって担持されている特定のエピトープに特異的である場合にも適用可能であり、その場合には、抗原結合ドメインを担持する特異的結合メンバーは、エピトープを担持する種々の抗原に結合することができるであろう。
【００６０】
含む（Ｃｏｍｐｒｉｓｅ）
これは、包む（ｉｎｃｌｕｄｅ）という意味で一般的に使用され、換言すると、１つまたは複数の特徴または構成要素の存在が許容されるということである。
【００６１】
「実質的に提示されているように」とは、本発明の関連ＣＤＲまたはＶＨドメインもしくはＶＬドメインが、本明細書中に提示されている配列の特定の領域と同一であるか、または高度に類似するであろうことを意味する。「高度に類似した」によって、１つから５つまで、好ましくは、１つから３つまたは１つもしくは２つ、あるいは３つまたは４つなどの１つから４つの置換が、ＣＤＲおよび／またはＶＨドメインもしくはＶＬドメインになされていてもよいことが企図されている。
【００６２】
本発明のＣＤＲを担持するための構造は、一般的に、そのＣＤＲが、再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然のＶＨ抗体可変ドメインおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲに対応する位置に位置する抗体重鎖配列もしくは抗体軽鎖配列またはその実質的な部分であろう。免疫グロブリン可変ドメインおよびＣＤＲの構造および位置は、（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７年、およびその改訂版、現在はインターネットで入手可能である（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ））を参照することによって決定することができる。
【００６３】
当業者であれば、本開示を考慮すると、本発明の種々のさらなる態様および実施形態が明白になろう。本明細書において言及された文書およびデータベースエントリーはすべて、参照によってそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、「および／または」は、２つの特定の特徴または構成要素の各々の、他方の有無にかかわらない具体的な開示として受け取られるべきである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、および（ｉｉｉ）ＡおよびＢの各々の具体的な開示として、あたかも各々が本明細書中で個々に提示されるように受け取られるべきである。
【００６５】
状況がそうでないと指示しない限り、上記で提示された特徴の記載および定義は、本発明の任意の特定の態様または実施形態に限定されず、記載されているすべての態様および実施形態に等しく適用される。
【実施例】
【００６６】
これから、本発明の特定の態様および実施形態を、上記で説明された図および下記で説明する表を参照して、実施例によって例示する。
【００６７】
実験
生体内分布
生体内分布解析によってｉｎ ｖｉｖｏターゲティング能力を評価した。１０７個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０週齢から１２週齢のＢａｌｂ／ｃヌード雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に皮下注射することによって、担癌マウスを得た。腫瘍が明白に触知可能になったときにマウスを群別し（ｎ≧５）、生体内分布の８日前、２４時間前、または２時間前に、１０ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを側尾静脈に静脈注射した。対照群は、ドキソルビシン投与から除外した。精製Ｆ１６−ＩＬ２を放射性ヨウ素で標識し、全マウスの側尾静脈に注射した。注射（マウス１匹当たり１２．５μｇ、３．３μＣｉ）の２４時間後にマウスを犠牲にした。臓器を計量し、Ｐａｃｋａｒｄ社製Ｃｏｂｒａガンマ計で放射活性を計数した。代表的な臓器の放射活性量は、組織のグラム当たり注射用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として表した。
【００６８】
これらの実験の結果により、ドキソルビシンの事前注射は、免疫サイトカインの腫瘍ターゲティングを損なわないことが示された（図１〜４）。
【００６９】
治療
２×１０７個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０週齢から１２週齢のＢａｌｂ／ｃヌード雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に皮下注射することによって、担癌マウスを得た。腫瘍が明白に触知可能であった腫瘍細胞移植の９日後にマウスを群別し（ｎ＝５）、生理食塩水、２０μｇのＦ１６−ＩＬ２（６．６μｇのＩＬ２に相当する）、６．６μｇの組換えＩＬ２（プロロイキン（登録商標））、および４ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを、２５０μｌの最大容積で側尾静脈に静脈注射した。マウスを毎日モニターし、週３回カリパスを用いて、以下の式：容積＝長さ×幅２×０．５を使用して腫瘍の増殖を測定した。腫瘍が２０００ｍｍ３を超える容積に達したとき、または腫瘍が、スイス規則(Swiss regulations)に従って、およびVeterinaramt des Kantons Zurich(198/2005)によって与えられたプロジェクトライセンスに基づいて壊死性になったとき、動物を犠牲にした。腫瘍の大きさは、平均±ＳＥとして表す。
【００７０】
ヌードマウスに移植したＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌モデルにおいて、Ｆ１６−ＩＬ２とドキソルビシンとの間に相乗効果が認められた（図５）。より高用量のドキソルビシンが、より低い用量よりさらに効果的だったことも認められた。
【００７１】
同じ方法で作製した担癌マウスの側尾静脈に、生理食塩水、２０μｇのＦ１６−ＩＬ２（６．６μｇのＩＬ２に相当する）、および１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのタキソール（商標）を、２５０μｌの最大容積で静脈注射した。上記で記載したようにマウスをモニターし、腫瘍の成長を測定した。
【００７２】
ヌードマウスに移植したＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌モデルにおいて、Ｆ１６−ＩＬ２とタキソール（商標）との間に相乗効果が認められた（図６）。
【００７３】
配列
配列番号１．４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインヌクレオチド配列
GAG GTG CAG CTG TTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCT GGG GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT AGC CGG TAT GGT GCG AGC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTC TCA GCT ATT AGT GGT AGT GGT GGT AGC ACA TAC TAC GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG AAA GCG CAT AAT GCT TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTG TCG AGA
配列番号２ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインアミノ酸配列
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT LVTVSREVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT LVTVSR
配列番号３ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインヌクレオチド配列
TCG TCT GAG CTG ACT CAG GAC CCT GCT GTG TCT GTG GCC TTG GGA CAG ACA GTC AGG ATC ACA TGC CAA GGA GAC AGC CTC AGA AGC TAT TAT GCA AGC TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA CAG GCC CCT GTA CTT GTC ATC TAT GGT AAA AAC AAC CGG CCC TCA GGG ATC CCA GAC CGA TTC TCT GGC TCC AGC TCA GGA AAC ACA GCT TCC TTG ACC ATC ACT GGG GCT CAG GCG GAA GAT GAG GCT GAC TAT TAC TGT AAC TCC TCT GTT TAT ACT ATG CCG CCC GTG GTA TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGC
配列番号４ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインアミノ酸配列
SSELTQDPAV SVALGQTVRI TCQGDSLRSY YASWYQQKPG QAPVLVIYGK NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCNSS VYTMPPVVFG GGTKLTVLG
配列番号５ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列
RYGAS
配列番号６ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列
AISGSGGSTYYADSVKG
配列番号７ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列
AHNAFDY
配列番号８ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列
QGDSLRSYYAS
配列番号９ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列
GKNNRPS
配列番号１０ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列
NSSVYTMPPVV
配列番号１１ ｈＩＬ２前駆体配列（成熟ｈＩＬ２：残基７〜１５０）
MYRMQLLSCI ALSLALVTNS APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT
配列番号１２ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGGGSGGGGSGGGG
配列番号１３ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGGGSGGGGSGGGGS
配列番号１４ ペプチドリンカーアミノ酸配列
SSSSGSSSSGSSSSG
配列番号１５ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GSGSAGSGSAGSGSA
配列番号１６ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGSGGGGSGGGGSGG
【配列表フリーテキスト】
【００７４】
配列番号１：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインヌクレオチド配列
配列番号２：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインアミノ酸配列
配列番号３：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインヌクレオチド配列
配列番号４：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインアミノ酸配列
配列番号５：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号６：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号７：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号８：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号９：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号１０：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号１２：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１３：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１４：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１５：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１６：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１７：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号１８：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号１９：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号２０：合成順序：リンカーモチーフ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法剤と免疫サイトカインとの組合せを使用した癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
テネイシン−Ｃは、細胞接着を調節する細胞外マトリックスの大型六量体糖タンパク質である。これは、細胞増殖および細胞遊走などのプロセスに関与しており、形態形成および胚形成の間、ならびに腫瘍形成または血管新生下で生じる組織構造の変化に関係している。
【０００３】
テネイシン−Ｃの大型アイソフォーム(large isoform)の強力な過剰発現は、多くの腫瘍で報告されており［Ｂｏｒｓｉ １９９２年 上記］、ドメインＡ１およびドメインＤに特異的なモノクローナル抗体は、それぞれ、臨床において広範に特徴づけられている［Ｒｉｖａ Ｐら Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９２年；第５１巻：７〜１３頁、Ｒｉｖａ Ｐら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９５年；第５５巻：５９５２ｓ〜５９５６ｓ頁、Ｐａｇａｎｅｌｌｉ Ｇら Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ １９９４年；第２１巻：３１４〜３２１頁、Ｒｅａｒｄｏｎ ＤＡら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００２年；第２０巻：１３８９〜１３９７頁、Ｂｉｇｎｅｒ ＤＤら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９８年；第１６巻：２２０２〜２２１２頁］。
【０００４】
テネイシン−Ｃに特異的なヒトモノクローナル抗体断片は、国際公開第２００６／０５０８３４号パンフレットに記載されており、正常組織と比べて優先的に腫瘍組織と結合することが示されている。これらの抗体は、例えば、サイトカインなどのトキシンを腫瘍細胞へと特異的に送達するのに有用である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００６／０５０８３４パンフレット
【特許文献２】欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書
【特許文献３】英国特許出願公開第２１８８６３８（Ａ）号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第２３９４００号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第０１２０６９４号明細書
【特許文献６】欧州特許出願公開第０１２５０２３号明細書
【特許文献７】ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５
【特許文献８】国際公開第９４／１３８０４号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｏｒｓｉ １９９２ 上記
【非特許文献２】Ｒｉｖａ Ｐら Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９２年；第５１巻：７〜１３頁
【非特許文献３】Ｒｉｖａ Ｐら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９５年；第５５巻：５９５２ｓ〜５９５６ｓ頁、
【非特許文献４】Ｐａｇａｎｅｌｌｉ Ｇら Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ １９９４年；第２１巻：３１４〜３２１頁
【非特許文献５】Ｒｅａｒｄｏｎ ＤＡら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００２年；第２０巻：１３８９〜１３９７頁
【非特許文献６】Ｂｉｇｎｅｒ ＤＤら Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９８年；第１６巻：２２０２〜２２１２頁
【非特許文献７】Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第２１５巻：４０５〜４１０頁
【非特許文献８】ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ 第８５巻：２４４４〜２４４８頁
【非特許文献９】ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．第１４７巻：１９５〜１９７頁
【非特許文献１０】Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７年）第２５巻 ３３８９〜３４０２頁
【非特許文献１１】Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ 第３４１巻、５４４〜５４６頁（１９８９年）
【非特許文献１２】Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４２巻、４２３〜４２６頁、１９８８年
【非特許文献１３】Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、第８５巻、５８７９〜５８８３頁、１９８８年
【非特許文献１４】Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ 第９０巻 ６４４４〜６４４８頁、１９９３年
【非特許文献１５】Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ 第１４巻 １２３９〜１２４５頁 １９９６年
【非特許文献１６】Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第５６巻 ３０５５〜３０６１頁 １９９６年
【非特許文献１７】Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７年
【非特許文献１８】ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、テネイシン−Ｃを標的とする抗体−サイトカインコンジュゲートが、癌の治療において、ドキソルビシンおよびパクリタキセルなどの抗癌化合物と予想外の相乗作用を示すことを発見した。
【０００８】
本発明の一態様では、抗癌化合物および抗体−インターロイキン２（ＩＬ２）コンジュゲートを、それを必要とする個体に投与することを含み、ここで抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたＩＬ２を含む、癌の治療方法が提供される。
【０００９】
本発明の他の態様では、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて、それを必要としている個体に抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法に使用するための抗癌化合物、および抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて、それを必要とする個体に抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における抗癌化合物の使用が提供され、前記抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む。
【００１０】
本発明の他の態様では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートを、抗癌化合物と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲート、および抗体−ＩＬ２コンジュゲートを、抗癌化合物と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートの使用が提供される。
【００１１】
本発明の他の態様では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと抗癌化合物との組合せ、ならびに抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートと抗癌化合物との組合せの使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図２】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図３】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図４】ドキソルビシンのプレ注射後に投与された標識Ｆ１６−ＩＬ２の生体内分布を示す図である。
【図５】ヌードマウスに移植されたＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌腫瘍に対する、ドキソルビシン、Ｆ１６−ＩＬ２、および組換えＩＬ２の効果を示す図である。
【図６】ヌードマウスに移植されたＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌腫瘍に対する、パクリタキセル（タキソール（商標））およびＦ１６−ＩＬ２の効果を示す図である。
【図７】小型テネイシン−Ｃアイソフォーム（Ａ）および大型テネイシン−Ｃアイソフォーム（Ｂ）の模式図を示す図である。いくつかのフィブロネクチンタイプＩＩＩ様ドメインは、選択的スプライシングの影響下にあり、分子に含まれているか（Ｂ）または除外されているか（Ａ）のいずれかである。テネイシンＣのアミノ酸配列およびコーディングヌクレオチド配列は、それぞれ、配列データベース参照番号ＮＰ＿００２１５１．１ ＧＩ：４５０４５４９およびＮＭ＿００２１６０．１ ＧＩ：４５０４５４８として公表されている。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書中に記載されているような治療に好適な癌には、任意のタイプの固形癌もしくは非固形癌または悪性リンパ腫、特に白血病、肉腫、皮膚癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、結腸直腸癌、子宮頚癌、肝臓癌、頭頸部癌、食道癌、膵臓癌、腎癌、胃癌、および大脳癌が含まれる。癌は家族性であってもよく、または散発性であってもよい。
【００１４】
いくつかの好ましい実施形態では、癌は乳癌であってもよい。
【００１５】
抗癌化合物とは、癌細胞の成長、分裂、および／または増殖を阻害する細胞毒性化合物である。抗癌化合物は、ある場合には、患者の正常な非癌細胞に影響を与える場合がある。例えば、抗癌化合物は、細胞周期を阻害、またはアポトーシスを活性化する場合がある。細胞周期を阻害する好適な抗癌化合物には、有糸分裂紡錘体形成の阻害剤を含むＤＮＡ損傷剤および抗有系分裂剤が含まれる。
【００１６】
ＤＮＡ損傷剤は、細胞内ＤＮＡのＤＮＡ ＤＳＢを誘導し、それによってＤＮＡ複製を阻害または破棄する化学療法化合物である。癌の治療に使用するための多くの好適な化合物が、当技術分野で知られており、例えば、ブレオマイシンヒドルキシ尿素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ ｈｙｄｏｒｘｙｕｒｅａ）、マイトマイシン、およびアクチノマイシン、ならびにダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、およびバルルビシンなどのアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅ）、エトポシドおよびテニポシド、およびテカン（ｔｅｃａｎ）ファミリーのメンバー、例えばイリノテカン、トポテカン、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）を含むトポイソメラーゼＩおよびＩＩ活性の阻害剤が含まれる。ＤＮＡ損傷剤は、任意の便利な形態または製剤で、本明細書中に記載されているように使用することができる。例えば、特定のＤＮＡ損傷剤の任意の好適な異性体、塩、溶媒和物、化学的に保護された形態、またはプロドラッグを使用することができる。
【００１７】
いくつかの好ましい実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、ドキソルビシン（（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−ジオン）である。ドキソルビシンは、アドリアマイシン（商標）およびルベックス（商標）などの商品名で癌の治療に広く使用されているアントラサイクリン・インターカレート剤である。
【００１８】
有糸分裂紡錘体形成を阻害する抗癌化合物は、例えば微小管に結合し、微小管重合または微小管安定性を変更して、細胞周期進行の阻害および最終的にはアポトーシスを導くことができる。有糸分裂紡錘体形成阻害剤の例には、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソール（商標）：β−（ベンゾイルアミノ）−α−ヒドロキシ−，６，１２ｂ−ビス（アセチルオキシ）−１２−（ベンゾイルオキシ）−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ（３，４）ベンズ（１，２−ｂ）オキセト−９−イルエステル，（２ａＲ−（２ａ−α，４−β，４ａ−β，６−β，９−α（α−Ｒ＊，β−Ｓ＊），１１−α，１２−α，１２ａ−α，２ｂ−α））−ベンゼンプロパン酸）およびその類似体または誘導体が含まれる。
【００１９】
タキサンとは、４員のオキセタン環と連結されている１５員のタキサン環系からなる複合エステルである。好ましいタキサンは、微小管形成の増強に必要であることが当技術分野で知られている成分を有するもの、例えばパクリタキセルおよびドセタキセルである。パクリタキセルおよびドセタキセルの構造は、タキサン環Ｃ−１０位における置換、およびＣ−１３に結合されているエステル側鎖における置換の点で異なっている。ドセタキセルは、Ｃ−１３位の（２Ｒ，３Ｓ）−フェニルイソセリン部分のアミノ基に、ベンゾイルの代わりにｔ−ブトキシカルボニルを有し、Ｃ−１０のアセトキシ基の代わりにヒドロキシル基を有する。パクリタキセルおよびドセタキセルの構造は、当技術分野で周知である。
【００２０】
本明細書中に記載されているような使用に好適な他のタキサンは、炭素６〜１２を含むパクリタキセル分子の部分に沿って、Ｃ−７、Ｃ−９、およびＣ−１０に酸素官能基を有する構造的変異を有するパクリタキセル誘導体である。多数のそのような誘導体が当技術分野で知られており、そのような誘導体は、パクリタキセルの生物活性に匹敵する生物学的活性を示すことが知られている。例えば、Ｃ−７ヒドロキシル基のアシル化、または水素によるその置換は、パクリタキセルの活性を有意には低減しない。加えて、１０位のアセトキシ基を水素と置換しても、ほんの少しの活性低下が引き起こされるだけである。
【００２１】
Ｃ−９カルボニル基をα−ＯＨ基へと還元すると、チューブリン形成活性のわずかな増大が引き起こされることが知られている。加えて、シクロプロパン環が７位および８位を架橋している転位生成物は、パクリタキセルとほぼ同様に細胞毒性であることが知られている。ｍ−置換ベンゾイル誘導体は、それらのｐ−置換類似体より活性であり、多くの場合パクリタキセル自体より活性であることも報告されている。
【００２２】
本明細書中に記載されているような使用に好適な別のパクリタキセル類似体は、Ａ−ノル−パクリタキセル（Ａ−ｎｏｒ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）である。この類似体は、パクリタキセルの活性のほんの３分の１であるチューブリン形成活性を示す。Ａ−ノル−パクリタキセルおよびパクリタキセルは、非常に類似した分子形状を有しており、それにより、それらのチューブリン形成活性が類似していることが説明できる。
【００２３】
他の好適なタキサンは、タキサズム（ｔａｘａｓｍ）、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−パクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル、およびそれらの混合物である。
【００２４】
いくつかの好ましい実施形態では、抗癌化合物はパクリタキセルである。
【００２５】
本明細書中に記載されているような使用のための抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含むことができる。
【００２６】
インターロイキン−２（ＩＬ２）は、免疫調節と、Ｔリンパ球およびＢリンパ球の増殖とに関与する分泌サイトカインである。ＩＬ２は、腫瘍細胞に対して細胞毒性効果を有することが示されており、組換えヒトＩＬ２（アルデスロイキン：プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標））は、転移性腎癌および転移性黒色腫の治療用にＦＤＡ承認を有する。ヒトＩＬ２の配列は、配列番号１１に提示されており、配列データベース参照番号ＮＰ＿０００５７７．２ ＧＩ：２８１７８８６１として公表されている。
【００２７】
いくつかの好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートのＩＬ２部分は、配列番号１１に提示されている成熟ヒトＩＬ２配列と、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。
【００２８】
配列同一性は、一般的にアルゴリズムＧＡＰに準拠して定義される（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧ ｐａｃｋａｇｅ、Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ Ｉｎｃ社製、サンディエゴ ＵＳＡ）。ＧＡＰは、ニードルマン−ブンシュアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を使用して、一致の数を最大化しギャップの数を最小化する２つの完全配列を整列する。一般的には、ギャップ生成ペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝４を用いて、初期設定パラメーターが使用される。ＧＡＰの使用が好ましい場合があるが、他のアルゴリズム、例えばＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第２１５巻：４０５〜４１０頁の方法を使用している）、ＦＡＳＴＡ（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ 第８５巻：２４４４〜２４４８頁の方法を使用している）、またはスミス−ウォーターマンアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．第１４７巻：１９５〜１９７頁）、または上記のＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）のＴＢＬＡＳＴＮプログラムを、一般的には初期設定パラメーターを用いて使用してもよい。特に、ｐｓｉ−Ｂｌａｓｔアルゴリズム（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７年）第２５巻 ３３８９〜３４０２頁）を使用することができる。
【００２９】
いくつかの特に好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートのＩＬ２部分は、配列番号１１に提示されている成熟ヒトＩＬ２の配列を含む。
【００３０】
ＩＬ２部分は、抗体またはそのポリペプチド構成要素の上流（Ｎ末端）または下流（Ｃ末端）に融合することができる。
【００３１】
ＩＬ２部分は、任意の好適な共有結合手段または非共有結合手段によって、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分に接続または結合することができる。好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートは、ＩＬ２および抗テネイシンＣ抗体またはそのポリペプチド構成要素（例えば、抗体またはＦａｂなどの多鎖抗体断片の重鎖または軽鎖）を含む融合タンパク質であってもよい。したがって、例えば、ＩＬ２部分は、抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインに融合することができる。典型的には、抗体またはその構成要素とＩＬ２部分は、ペプチドリンカー、例えば約５〜２５残基、例えば１０〜２０残基、好ましくは約１５残基のペプチドを介して結合されている。ペプチドリンカーの好適な例は、当技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１２で示されているようなアミノ酸配列を有してもよい。通常、リンカーは、モチーフの１つまたは複数のタンデムリピートを含むアミノ酸配列を有する。典型的には、モチーフは５個の残基の配列であり、好ましくは、残基のうち少なくとも４個はＧｌｙまたはＳｅｒである。５個の残基のうちの４個がＧｌｙまたはＳｅｒである場合、残りの残基はＡｌａであってもよい。より好ましくは、５個の残基の各々はＧｌｙまたはＳｅｒである。好ましいモチーフは、ＧＧＧＧＳ、ＳＳＳＳＧ、ＧＳＧＳＡ、およびＧＧＳＧＧである。好ましくは、モチーフは、配列において隣接しており、介在するヌクレオチドがリピート間に存在しない。リンカー配列は、モチーフの１つから５つのリピート、好ましくはモチーフの３つまたは４つのリピートを含んでいてもよく、またはそれらからなっていてもよい。例えば、３つのタンデムリピートを有するリンカーは、以下のアミノ酸配列の１つを有していてもよい：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ−配列番号１３
ＳＳＳＳＧＳＳＳＳＧＳＳＳＳＧ−配列番号１４
ＧＳＧＳＡＧＳＧＳＡＧＳＧＳＡ−配列番号１５
ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ−配列番号１６
好ましい実施形態では、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分は、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的に結合する。例えば、抗体は、テネイシン−Ｃ小型アイソフォームと比べて、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームと優先的に結合することができる。最も好ましくは、抗体は、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームのＡ１ドメインに結合する。
【００３２】
好ましい抗体は、腫瘍特異的であり、正常組織と比べて腫瘍組織に優先的に結合する。抗体は、例えば、腫瘍組織の間質ならびに／または新生血管構造および血管周囲構造に対して、正常組織より優先的に結合することができる。
【００３３】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための好適な抗体の例は、国際公開第２００６／０５０８３４号パンフレットに開示されている。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートの抗体部分は、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃに対する結合に競合する。
【００３５】
抗体間の競合は、例えばＥＬＩＳＡを使用して、および／または他の未標識抗体（複数可）の存在下で検出することができる１つの抗体に対する特異的リポーター分子の標識化によって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで容易にアッセイすることができ、同一エピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体の同定を可能にする。
【００３６】
本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための好適な抗体は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含んでいてもよく、
ＶＨドメインは、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインは、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む。
【００３７】
いくつかの好ましい実施形態では、抗体は、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含んでいてもよい。
【００３８】
これらのＶＨドメインおよびＶＬドメインならびにＣＤＲの変異体も、本明細書中に記載されているような抗体−ＩＬ２コンジュゲートに使用するための抗体に使用することができる。好適な変異体は、配列変更または突然変異およびスクリーニングの方法によって取得することができる。
【００３９】
本明細書中に記載されているような使用のための特定の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸配列変更（アミノ酸残基の付加、欠失、置換、および／または挿入）、恐らくは、約２０未満の変更、約１５未満の変更、約１０未満の変更、または約５つ未満の変更、４、３、２、または１つの変更を含んでいてもよい。１つまたは複数のフレームワーク領域および／または１つまたは複数のＣＤＲに、変更がなされていてもよい。特に、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、および／またはＶＨ ＣＤＲ３、特にＶＨ ＣＤＲ３に変更がなされていてもよい。
【００４０】
抗癌化合物、抗体−ＩＬ２コンジュゲート、およびこれらの分子の１つまたは両方を含む組成物の投与は、好ましくは「治療上有効な量」内であり、これは患者に有益性を示すのに十分である。そのような有益性は、少なくとも１つの徴候の少なくとも寛解であり得る。実際の投与量、ならびに投与の速度および時間的経過は、治療されるものの性質および重症度に依存するであろう。治療の処方、例えば用量などに関する決定は、一般開業医および他の医師の責任内にある。
【００４１】
正確な用量は、多くの要素、治療される区域の大きさおよび位置、抗体−ＩＬ２コンジュゲートの厳密な性質（例えば、全抗体、断片、または二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ））に依存するであろう。典型的な抗体−ＩＬ２コンジュゲート用量は、全身投与の場合は０．５ｍｇから１００ｇ、局所投与の場合は１０μｇから１ｍｇの範囲であろう。典型的には、コンジュゲートの抗体部分は、全抗体、好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであろう。これは、成人患者の単回治療用の用量であり、小児および幼児用には比例的に調節することができ、他の抗体構成用に分子量に比例させて調節することもできる。抗癌化合物用の適切な用量および投薬計画は、当技術分野で周知である。
【００４２】
治療は、医師の裁量により、毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で反復することができる。
【００４３】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、任意の好適な投薬計画に従って、順次または同時に投与することができる。
【００４４】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、通常、活性化合物に加えて少なくとも１つの成分を含んでいてもよい医薬組成物の形態で個体に投与されるであろう。
【００４５】
好適な成分には、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者に周知の他の物質が含まれる。そのような物質は非毒性であるべきで、活性成分の効果を妨げるべきではない。担体または他の物質の厳密な性質は、投与経路に依存するであろうし、投与経路は、経口であってもよく、または注射によって、例えば静脈内でもよい。
【００４６】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートおよび抗癌化合物は、別々の医薬組成物中に配合してもよく、または適切な場合には、同一医薬組成物中に配合してもよい。
【００４７】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む癌の治療に使用するための医薬組成物が提供される。
【００４８】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを配合することを含む癌の治療に使用するための医薬組成物を作製するための方法が提供される。
【００４９】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、散剤、または液剤の形態であってもよい。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含むことができる。液状医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱油、または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他のサッカライド溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールなどのグリコールが含まれていてもよい。
【００５０】
静脈注射または疾患部位への注射の場合、活性成分は、発熱性物質を含まない、好適なｐＨ、等張性、および安定性を有する、非経口的に許容される水溶液の形態であろう。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを使用して、好適な溶液を調製することが十分に可能である。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、および／または他の添加剤が含まれていてもよい。
【００５１】
本発明の別の態様では、抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む癌の治療に使用するための治療用キットが提供される。
【００５２】
キットの構成要素（すなわち、抗癌化合物および抗体−ＩＬ２コンジュゲート）は、無菌であり、密封されたバイアルまたは他の容器の中にある。キットは、本明細書中に記載されている方法で構成要素を使用するための説明書をさらに含んでいてもよい。キットの構成要素は、容器、例えば、袋、箱、ビン、カン、またはブリスターパックに含まれていてもよく、または包装されていてもよい。
【００５３】
用語
抗体
これは天然であるか、または部分的合成もしくは全合成的に生成されたかにかかわらず、これから免疫グロブリンを表す。この用語は、抗体結合ドメインであるかまたは抗体結合ドメインと実質的に相同的である結合ドメインを有する任意のポリペプチドまたはタンパク質も包含する。抗体の例は、免疫グロブリンアイソタイプおよびそれらのアイソタイプのサブクラス；Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄなどの抗原結合ドメインを含む断片；ならびに二重特異性抗体である。
【００５４】
モノクローナル抗体および他の抗体を採取し、組換えＤＮＡ技術の手法を使用して、元の抗体の特異性を保持する他の抗体またはキメラ分子を産生することが可能である。そのような手法は、抗体の免疫グロブリン可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするＤＮＡを、異なる免疫グロブリンの定常領域、またはフレームワーク領域を有する定常領域に導入することを伴っていてもよい。例えば、欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書、英国特許出願公開第２１８８６３８（Ａ）号明細書、または欧州特許出願公開第２３９４００号明細書を参照されたい。ハイブリドーマまたは抗体を産生する他の細胞は、遺伝子突然変異または他の変化の影響下にある可能性があり、産生された抗体の結合特異性を変更する場合もまたは変更しない場合もある。
【００５５】
抗体は様々な様式で修飾されている場合があるため、「抗体」という用語は、必要とされる特異性を有する結合ドメインを有する任意の特異的結合メンバーまたは物質を包含すると解釈されるべきである。したがって、この用語は、天然であるか、または部分的合成もしくは全合成的に産生されたかにかかわらず、免疫グロブリン結合ドメインを含む任意のポリペプチドを含む、抗体の抗体断片、誘導体、機能的等価物、および相同体を包含する。したがって、別のポリペプチドに融合された免疫グロブリン結合ドメインを含むキメラ分子、または等価物が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は、欧州特許出願公開第０１２０６９４号明細書および欧州特許出願公開第０１２５０２３号明細書に記載されている。
【００５６】
全抗体の断片は、抗原に結合するという機能を果たし得ることが示されている。結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ 第３４１巻、５４４〜５４６頁（１９８９年））；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片；（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、この２つのドメインを結合させて抗原結合部位の形成を可能にするペプチドリンカーによって連結されている単一鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４２巻、４２３〜４２６頁、１９８８年；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、第８５巻、５８７９〜５８８３頁、１９８８年）；（ｖｉｉｉ）二重特異的な単一鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）「二重特異性抗体」、遺伝子融合によって構築された多価性または多重特異性断片（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ 第９０巻 ６４４４〜６４４８頁、１９９３年）である。Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または二重特異性抗体分子は、ＶＨドメインとＶＬドメインとを連結するジスルフィド架橋を組み入れることによって安定化することができる（Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ 第１４巻 １２３９〜１２４５頁 １９９６年）。ＣＨ３ドメインに結合されたｓｃＦｖを含むミニ抗体（Ｍｉｎｉｂｏｄｙ）も作製することができる（Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第５６巻 ３０５５〜３０６１頁 １９９６年）。
【００５７】
二重特異性抗体はポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、この２つのドメインは連結されている（例えば、ペプチドリンカーによって）が、互いに結合して抗原結合部位を形成することはできず、抗原結合部位は、多量体内の一方のポリペプチドの第１のドメインと、多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの結合によって形成される（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット）。
【００５８】
抗原結合ドメイン
これは、抗原に特異的に結合し、抗原の一部またはすべてに相補的である区域を含む抗体の部分を表す。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定の部分に結合できるだけであり、その部分はエピトープと称されている。抗原結合ドメインは、１つまたは複数の抗体可変ドメインによって提供されてもよい（例えば、ＶＨドメインからなるいわゆるＦｄ抗体断片）。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００５９】
特異性
これは、特異的な結合対の１つのメンバーが、その特異的結合パートナー（複数可）以外の分子とはいかなる有意な結合をも示さない状況を指すために使用することができる。例えば、テネイシン−Ｃに特異的な抗体は、フィブロネクチンなどの細胞外マトリックスの他の構成要素に対して、ほぼまたは全く結合を示すことはできない。同様に、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的な抗体は、テネイシン−Ｃ小型アイソフォームに対して、ほぼまたは全く結合を示すことができない。この用語は、例えば、抗原結合ドメインが、多数の抗原によって担持されている特定のエピトープに特異的である場合にも適用可能であり、その場合には、抗原結合ドメインを担持する特異的結合メンバーは、エピトープを担持する種々の抗原に結合することができるであろう。
【００６０】
含む（Ｃｏｍｐｒｉｓｅ）
これは、包む（ｉｎｃｌｕｄｅ）という意味で一般的に使用され、換言すると、１つまたは複数の特徴または構成要素の存在が許容されるということである。
【００６１】
「実質的に提示されているように」とは、本発明の関連ＣＤＲまたはＶＨドメインもしくはＶＬドメインが、本明細書中に提示されている配列の特定の領域と同一であるか、または高度に類似するであろうことを意味する。「高度に類似した」によって、１つから５つまで、好ましくは、１つから３つまたは１つもしくは２つ、あるいは３つまたは４つなどの１つから４つの置換が、ＣＤＲおよび／またはＶＨドメインもしくはＶＬドメインになされていてもよいことが企図されている。
【００６２】
本発明のＣＤＲを担持するための構造は、一般的に、そのＣＤＲが、再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然のＶＨ抗体可変ドメインおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲに対応する位置に位置する抗体重鎖配列もしくは抗体軽鎖配列またはその実質的な部分であろう。免疫グロブリン可変ドメインおよびＣＤＲの構造および位置は、（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７年、およびその改訂版、現在はインターネットで入手可能である（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ））を参照することによって決定することができる。
【００６３】
当業者であれば、本開示を考慮すると、本発明の種々のさらなる態様および実施形態が明白になろう。本明細書において言及された文書およびデータベースエントリーはすべて、参照によってそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、「および／または」は、２つの特定の特徴または構成要素の各々の、他方の有無にかかわらない具体的な開示として受け取られるべきである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、および（ｉｉｉ）ＡおよびＢの各々の具体的な開示として、あたかも各々が本明細書中で個々に提示されるように受け取られるべきである。
【００６５】
状況がそうでないと指示しない限り、上記で提示された特徴の記載および定義は、本発明の任意の特定の態様または実施形態に限定されず、記載されているすべての態様および実施形態に等しく適用される。
【実施例】
【００６６】
これから、本発明の特定の態様および実施形態を、上記で説明された図および下記で説明する表を参照して、実施例によって例示する。
【００６７】
実験
生体内分布
生体内分布解析によってｉｎ ｖｉｖｏターゲティング能力を評価した。１０７個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０週齢から１２週齢のＢａｌｂ／ｃヌード雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に皮下注射することによって、担癌マウスを得た。腫瘍が明白に触知可能になったときにマウスを群別し（ｎ≧５）、生体内分布の８日前、２４時間前、または２時間前に、１０ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを側尾静脈に静脈注射した。対照群は、ドキソルビシン投与から除外した。精製Ｆ１６−ＩＬ２を放射性ヨウ素で標識し、全マウスの側尾静脈に注射した。注射（マウス１匹当たり１２．５μｇ、３．３μＣｉ）の２４時間後にマウスを犠牲にした。臓器を計量し、Ｐａｃｋａｒｄ社製Ｃｏｂｒａガンマ計で放射活性を計数した。代表的な臓器の放射活性量は、組織のグラム当たり注射用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として表した。
【００６８】
これらの実験の結果により、ドキソルビシンの事前注射は、免疫サイトカインの腫瘍ターゲティングを損なわないことが示された（図１〜４）。
【００６９】
治療
２×１０７個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０週齢から１２週齢のＢａｌｂ／ｃヌード雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に皮下注射することによって、担癌マウスを得た。腫瘍が明白に触知可能であった腫瘍細胞移植の９日後にマウスを群別し（ｎ＝５）、生理食塩水、２０μｇのＦ１６−ＩＬ２（６．６μｇのＩＬ２に相当する）、６．６μｇの組換えＩＬ２（プロロイキン（登録商標））、および４ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを、２５０μｌの最大容積で側尾静脈に静脈注射した。マウスを毎日モニターし、週３回カリパスを用いて、以下の式：容積＝長さ×幅２×０．５を使用して腫瘍の増殖を測定した。腫瘍が２０００ｍｍ３を超える容積に達したとき、または腫瘍が、スイス規則(Swiss regulations)に従って、およびVeterinaramt des Kantons Zurich(198/2005)によって与えられたプロジェクトライセンスに基づいて壊死性になったとき、動物を犠牲にした。腫瘍の大きさは、平均±ＳＥとして表す。
【００７０】
ヌードマウスに移植したＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌モデルにおいて、Ｆ１６−ＩＬ２とドキソルビシンとの間に相乗効果が認められた（図５）。より高用量のドキソルビシンが、より低い用量よりさらに効果的だったことも認められた。
【００７１】
同じ方法で作製した担癌マウスの側尾静脈に、生理食塩水、２０μｇのＦ１６−ＩＬ２（６．６μｇのＩＬ２に相当する）、および１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのタキソール（商標）を、２５０μｌの最大容積で静脈注射した。上記で記載したようにマウスをモニターし、腫瘍の成長を測定した。
【００７２】
ヌードマウスに移植したＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌モデルにおいて、Ｆ１６−ＩＬ２とタキソール（商標）との間に相乗効果が認められた（図６）。
【００７３】
配列
配列番号１．４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインヌクレオチド配列
GAG GTG CAG CTG TTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCT GGG GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT AGC CGG TAT GGT GCG AGC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTC TCA GCT ATT AGT GGT AGT GGT GGT AGC ACA TAC TAC GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG AAA GCG CAT AAT GCT TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTG TCG AGA
配列番号２ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインアミノ酸配列
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT LVTVSREVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT LVTVSR
配列番号３ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインヌクレオチド配列
TCG TCT GAG CTG ACT CAG GAC CCT GCT GTG TCT GTG GCC TTG GGA CAG ACA GTC AGG ATC ACA TGC CAA GGA GAC AGC CTC AGA AGC TAT TAT GCA AGC TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA CAG GCC CCT GTA CTT GTC ATC TAT GGT AAA AAC AAC CGG CCC TCA GGG ATC CCA GAC CGA TTC TCT GGC TCC AGC TCA GGA AAC ACA GCT TCC TTG ACC ATC ACT GGG GCT CAG GCG GAA GAT GAG GCT GAC TAT TAC TGT AAC TCC TCT GTT TAT ACT ATG CCG CCC GTG GTA TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGC
配列番号４ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインアミノ酸配列
SSELTQDPAV SVALGQTVRI TCQGDSLRSY YASWYQQKPG QAPVLVIYGK NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCNSS VYTMPPVVFG GGTKLTVLG
配列番号５ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列
RYGAS
配列番号６ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列
AISGSGGSTYYADSVKG
配列番号７ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列
AHNAFDY
配列番号８ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列
QGDSLRSYYAS
配列番号９ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列
GKNNRPS
配列番号１０ ４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列
NSSVYTMPPVV
配列番号１１ ｈＩＬ２前駆体配列（成熟ｈＩＬ２：残基７〜１５０）
MYRMQLLSCI ALSLALVTNS APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT
配列番号１２ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGGGSGGGGSGGGG
配列番号１３ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGGGSGGGGSGGGGS
配列番号１４ ペプチドリンカーアミノ酸配列
SSSSGSSSSGSSSSG
配列番号１５ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GSGSAGSGSAGSGSA
配列番号１６ ペプチドリンカーアミノ酸配列
GGSGGGGSGGGGSGG
【配列表フリーテキスト】
【００７４】
配列番号１：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインヌクレオチド配列
配列番号２：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインアミノ酸配列
配列番号３：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインヌクレオチド配列
配列番号４：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインアミノ酸配列
配列番号５：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号６：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号７：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号８：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号９：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号１０：合成順序：４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号１２：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１３：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１４：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１５：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１６：合成順序：ペプチドリンカーアミノ酸配列
配列番号１７：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号１８：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号１９：合成順序：リンカーモチーフ
配列番号２０：合成順序：リンカーモチーフ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗癌化合物および抗体−インターロイキン２（ＩＬ２）コンジュゲートを、それを必要とする個体に投与することを含み、
抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたＩＬ２を含む癌の治療方法。
【請求項２】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォーム(tenascin-C large isoform)に特異的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームのＡ１ドメインに特異的に結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに対する結合に競合する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗体がＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含み、
ＶＨドメインが、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインが、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗癌化合物がＤＮＡ損傷剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗癌化合物がドキソルビシンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抗癌化合物が有糸分裂紡錘体形成の阻害剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
抗癌化合物がパクリタキセルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
癌が乳癌である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における抗癌化合物の使用であり、
抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む、使用。
【請求項１３】
抗癌化合物と組み合わせて抗体−ＩＬ２コンジュゲートを投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートの使用。
【請求項１４】
抗体が、前記テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的に結合する、請求項１２または請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームの前記Ａ１ドメインに特異的に結合する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに対する結合に競合する、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
抗体が、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体−抗原結合部位を含み、
ＶＨドメインが、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインが、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体−抗原結合部位を含む、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
抗癌化合物がＤＮＡ損傷剤である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
抗癌化合物がドキソルビシンである、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
抗癌化合物が有糸分裂紡錘体形成の阻害剤である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記抗癌化合物がパクリタキセルである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記癌が乳癌である、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む、癌の治療に使用するためのキット。
【請求項１】
抗癌化合物および抗体−インターロイキン２（ＩＬ２）コンジュゲートを、それを必要とする個体に投与することを含み、
抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたＩＬ２を含む癌の治療方法。
【請求項２】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォーム(tenascin-C large isoform)に特異的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームのＡ１ドメインに特異的に結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに対する結合に競合する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗体がＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含み、
ＶＨドメインが、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインが、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体抗原結合部位を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗癌化合物がＤＮＡ損傷剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗癌化合物がドキソルビシンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抗癌化合物が有糸分裂紡錘体形成の阻害剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
抗癌化合物がパクリタキセルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
癌が乳癌である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗体−ＩＬ２コンジュゲートと組み合わせて抗癌化合物を投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における抗癌化合物の使用であり、
抗体−ＩＬ２コンジュゲートが、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む、使用。
【請求項１３】
抗癌化合物と組み合わせて抗体−ＩＬ２コンジュゲートを投与することを含む癌の治療方法で使用するための薬剤の製造における、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートの使用。
【請求項１４】
抗体が、前記テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに特異的に結合する、請求項１２または請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
抗体が、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームの前記Ａ１ドメインに特異的に結合する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体と、テネイシン−Ｃ大型アイソフォームに対する結合に競合する、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
抗体が、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体−抗原結合部位を含み、
ＶＨドメインが、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号７のＶＨ ＣＤＲ３を含み、
ＶＬドメインが、配列番号８のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１０のＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
抗体が、配列番号２の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＨドメインおよび配列番号４の４Ａ１−Ｆ１６ ＶＬドメインを含む抗体−抗原結合部位を含む、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
抗癌化合物がＤＮＡ損傷剤である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
抗癌化合物がドキソルビシンである、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
抗癌化合物が有糸分裂紡錘体形成の阻害剤である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記抗癌化合物がパクリタキセルである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記癌が乳癌である、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
抗癌化合物と、テネイシン−Ｃに特異的に結合する抗体にコンジュゲートされたインターロイキン２（ＩＬ２）を含む抗体−ＩＬ２コンジュゲートとを含む、癌の治療に使用するためのキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１０−５３１３４９（Ｐ２０１０−５３１３４９Ａ）
【公表日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１４１８２（Ｐ２０１０−５１４１８２）
【出願日】平成２０年６月２５日（２００８．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００２３１０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００１２１９
【国際公開日】平成２０年１２月３１日（２００８．１２．３１）
【出願人】（５０９３４７１９２）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２５日（２００８．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００２３１０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００１２１９
【国際公開日】平成２０年１２月３１日（２００８．１２．３１）
【出願人】（５０９３４７１９２）
【Ｆターム（参考）】
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