抗炎症剤、抗老化剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料
【課題】抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料を提供する。
【解決手段】抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤に、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを含有せしめ、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤に、マルツロシルアルギニンを含有せしめる。また、皮膚化粧料にマルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合する。
【解決手段】抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤に、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを含有せしめ、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤に、マルツロシルアルギニンを含有せしめる。また、皮膚化粧料にマルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤、抗老化剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因の一つとして、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（以下「ＴＮＦ−α」という）によるものが知られている。
【０００３】
ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症などの慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においてはＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。ＴＮＦ−α産生抑制作用を有するものとしては、ヒルガオ科ヨウサイからの抽出物等が知られている（特許文献１参照）。
【０００４】
また、炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害等の症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、炎症は、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊等の共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏等の中枢神経系も関与する、全身反応も引き起こす場合もある。このような炎症の個々の反応には、プロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２が関与することが明らかとなっている。
【０００５】
このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ阻害剤が用いられている（非特許文献１参照）。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ阻害剤としては、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチン等が知られている（特許文献２参照）。また、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する化合物としては、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン、その塩又はその水和物等が知られている（特許文献３参照）。
【０００６】
皮膚の構造は、大きく分けて、表皮、基底膜、真皮、皮下組織からなる。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在しており、その機能は多岐にわたり、表皮の真皮への接着、表皮の極性の決定、表皮の分化・増殖の制御、さらには真皮細胞が産生する因子や血成分由来の栄養供給の制御に関与している。そのため、基底膜は、皮膚の構造、恒常性の維持にとってきわめて重要な役割を果たしている。したがって、基底膜の構造が変化すると、しわ、たるみ等の皮膚の老化症状を呈するようになる。特に、基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンの産生量が減少すると、基底膜の構造が変化し、しわ、たるみ等の皮膚の老化症状を呈するようになる。
【０００７】
また、皮膚の真皮は、繊維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、ヒアルロン酸、Ｉ型コラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。そのため、真皮は、皮膚の張りや艶に必要な、水分保持、柔軟性、弾力性の確保に重要な役割を果たしている。したがって、紫外線の照射や、乾燥等、ある種の外的因子の影響、加齢等によりＩ型コラーゲンの産生量が減少すると、真皮の構造が変化し、保湿機能の低下、肌の弾力性の低下、張りや艶の低下等の皮膚の老化症状を呈するようになる。
【０００８】
従来、コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、五斂子抽出物（特許文献４参照）、加水分解カゼイン、ブナの芽、エリスリナ、可溶性卵殻膜、カッコン、西洋キヅタよりなる群から選ばれる植物及び動物由来の抽出物等が知られている（特許文献５参照）。
【０００９】
表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、基底層、有棘層、顆粒層及び角質層から構成されている。基底層で分裂、増殖した細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層になり、最終的には垢として角質層から脱落する。特に、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−１の作用により、蛋白分子間がグルタミル−リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。
【００１０】
しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈するようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するものとして、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム等が知られている（特許文献６参照）。
【００１１】
皮膚の真皮及び表皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚では、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があって、みずみずしい状態が維持される。
【００１２】
ところが、紫外線、著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、エラスチンの分解及び変質が起こる。また、外的因子の影響や加齢に伴う線維芽細胞の増殖率低下も、天然保湿因子であるヒアルロン酸の産生量の低下を生じる。その結果、皮膚の弾力性や保湿機能は低下し、角質は異常剥離を引き起こし、肌は張りや艶を失い、荒れ、しわ、くすみ等の老化症状を呈するようになる。
【００１３】
このような皮膚の老化に伴う、しわ、くすみ、きめの消失、及び弾力性の低下等には、ヒアルロン酸の減少、変性が関与している。近年、紫外線等がこの変化を誘導する因子とされており、皮膚のしわ形成等の大きな要因となると考えられる。したがって、ヒアルロン酸産生の促進は、皮膚の老化を防止及び改善する上で重要である。従来、ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、ラカシシュからの抽出物等が知られている（特許文献７参照）。
【００１４】
一酸化窒素については、その生理学的作用又は薬理学的作用が注目されており、様々な研究が行われてきている。一酸化窒素は、生体内において、Ｌ−アルギニンと分子状酸素とを基質とし、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、テトラヒドロビオプテリンを補酵素として、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）により生成される。ＮＯＳには、酵素学的にもタンパク質分子としても異なる３種のアイソフォームが存在し、それぞれ誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、血管内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）が知られている。
【００１５】
これらＮＯＳのうちｅＮＯＳは、血管内皮細胞に局在しており細胞膜に結合している。このｅＮＯＳが活性化されると、一酸化窒素が継続的に産生され、その一酸化窒素は直ちに血管平滑筋に取り込まれ、グアニル酸シクラーゼを活性化する。これによりサイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）が産生され、ｃＧＭＰ依存性タンパク質リン酸化酵素の活性化を介して、血管平滑筋が弛緩されることにより、血圧が低く保たれる。また、ｅＮＯＳにより産生された一酸化窒素は、血液中の血小板に作用することにより、血小板の凝集を阻害するとともに、凝固した血液の血管壁への接着を阻害する（非特許文献２参照）。
【００１６】
したがって、生体内、特に血管内皮細胞における一酸化窒素の産生を促進することで、血流障害、動脈硬化、高脂血症、虚血性心疾患や各種臓器での循環不全等の血管内皮機能低下に起因する疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、従来、一酸化窒素産生促進作用を有するものとして、フェネチルニコチンアミド誘導体又はその製薬学的に許容される塩等が知られている（特許文献８参照）。
【特許文献１】特開２００４−２５０３４４号公報
【特許文献２】特開２００２−４７１８０号公報
【特許文献３】特開２０００−１６９３５号公報
【特許文献４】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献５】特開２００４−１８４７１号公報
【特許文献６】特開２００４−５１５９６号公報
【特許文献７】特開２００７−２１０９７７号公報
【特許文献８】特開２００７−２７７０９６号公報
【非特許文献１】「薬理学アトラス」，福原武彦監訳，文光堂，1995年，p.184
【非特許文献２】中根正樹，「ＮＯ研究の新しい展開」，実験医学，１９９９年，第１７巻，第８号，ｐ．９１４−９１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有する物質を見出し、当該物質を有効成分とする抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生促進剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記目的を達成するために、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とし、本発明の皮膚化粧料は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合したことを特徴とする。
【００１９】
また、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有する抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生促進剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明について説明する。
〔抗炎症剤，ＴＮＦ−α産生抑制剤，シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤，抗老化剤，Ｉ型コラーゲン産生促進剤，ＩＶ型コラーゲン産生促進剤，トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤，ヒアルロン酸産生促進剤，一酸化窒素産生促進剤〕
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン（Maltulosyl Arginine）及び／又はフルクトシルアルギニン（Fructosyl Arginine）を有効成分として含有する。また、本発明のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニン（Maltulosyl Arginine）を有効成分として含有する。
【００２２】
マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンは、糖質とアミノ酸との反応により生成されるアマドリ化合物の一種である。なお、本発明において、マルツロシルアルギニンには、Ｎα−［４−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、Ｎα−［４−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、Ｎα−［４−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、及びＮα−［４−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニンのアノマー炭素の配置が異なる構造を有する４種のものが含まれる。
【００２３】
また、本発明において、フルクトシルアルギニンには、Ｎα−［１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、及びＮα−［１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニンのアノマー炭素の配置が異なる構造を有する２種のものが含まれる。
【００２４】
マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、アルギニンと、マルトース又はグルコースとを、酸の共存下でメイラード反応させることにより製造することができる。なお、本発明において、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、それらを含む天然物、又は天然物の加工物であってそれらを含むものから単離・精製することにより得られるものであってもよい。上記天然物の加工物としては、例えば、生薬が修治されたもの；天然物（植物、動物、担子菌類等を含む）に抽出処理、乾燥処理、加熱処理、熱湯処理、水蒸気処理、燻蒸処理、燻製処理、発酵処理等が施されたもの等が挙げられる。
【００２５】
具体的には、まず、マルツロシルアルギニンを製造する場合、アルギニンとマルトースとを反応溶媒としての酸に溶解させ、フルクトシルアルギニンを製造する場合、アルギニンとグルコースとを反応溶媒としての酸に溶解させる。
【００２６】
アルギニンとマルトース又はグルコースとの反応溶媒への添加量は、アルギニン１００質量部に対してマルトース又はグルコース１〜１０００質量部であるのが好ましく、５０〜３００質量部であるのが好ましい。
【００２７】
上記酸としては、アルギニンとマルトース又はグルコースとのメイラード反応の進行を妨げない限り特に限定されるものではないが、一般に酢酸、酪酸等の有機酸を用いることができる。なお、水溶液中で両者を反応させると、その反応効率が低下するおそれがあるため、氷酢酸等の無水状態で液状を示す酸を反応溶媒として用いるのが好ましい。
【００２８】
上記反応の温度条件としては、常温から沸点までの任意の温度であればよいが、反応速度、反応効率の点から６０〜８０℃の温度条件であるのが好ましい。また、反応時間は、反応温度や反応溶媒として用いる酸の種類によって異なるが、通常５〜３００分程度であり、１０〜６０分であるのが好ましい。
【００２９】
反応終了後、不溶性の物質をろ過又は遠心分離して除去し、得られた濾液又は上清から反応溶媒を留去することにより、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを含む粗精製物を得ることができる。
【００３０】
このようにして得られる粗精製物を精製処理に供することで、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを得ることができる。精製は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。
【００３１】
例えば、上記粗精製物を、陽イオン交換樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、陽イオン交換樹脂の約２〜６倍容量の水、陽イオン交換樹脂の約４〜８倍容量のアンモニア水溶液の順で溶出させ、アンモニア水溶液で溶出される画分を得る。
【００３２】
さらに、上記のようにして得られたアンモニア水溶液画分を、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、逆−逆相クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等に基づく、ペーパークロマトグラフィー（ＰＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、オープンカラムクロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取ＨＰＬＣ、分取リサイクルＨＰＬＣ等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製することにより、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを得ることができる。
【００３３】
このようにして得られたマルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用及びＩ型コラーゲン産生促進作用を有するため、抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤及びＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分として用いることができる。また、マルツロシルアルギニンは、さらにシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有するため、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤及び一酸化窒素産生促進剤の有効成分としても用いることができる。
【００３４】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤及びＩ型コラーゲン産生促進剤においては、マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンのいずれか一方のみを上記有効成分として用いてもよいし、両者を混合して上記有効成分として用いてもよい。両者を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００３５】
ここで、マルツロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、例えば、ＴＮＦ−α産生抑制作用及び／又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用に基づいて発揮される。ただし、マルツロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００３６】
また、フルクロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、ＴＮＦ−α産生抑制作用に基づいて発揮される。ただし、フルクトシルアルギニンが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００３７】
さらに、マルツロシルアルギニンが有する抗老化作用は、例えば、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、マルツロシルアルギニンが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００３８】
さらにまた、フルクトシルアルギニンが有する抗老化作用は、例えば、Ｉ型コラーゲン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、フルクトシルアルギニンが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００３９】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンのみからなるものであってもよいし、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを製剤化したものであってもよい。また、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンのみからなるものであってもよいし、マルツロシルアルギニンを製剤化したものであってもよい。
【００４０】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンは、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４１】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、必要に応じて、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を有する他の物質（天然抽出物等を含む）を配合して有効成分として用いることができる。
【００４２】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤の投与方法としては、一般に経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００４３】
また、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４４】
本発明の抗炎症剤は、マルツロシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、並びにフルクトシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にもＴＮＦ−α産生抑制作用及び／又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４５】
本発明のＴＮＦ−α産生抑制剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用を通じて、ＴＮＦ−αの産生を抑制し、これにより接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のＴＮＦ−α産生抑制剤は、これらの用途以外にもＴＮＦ−α産生抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４６】
本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、マルツロシルアルギニンが有するシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を通じて、シクロオキシゲナーゼ−２の活性を阻害し、これにより接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、これらの用途以外にもシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４７】
本発明の抗老化剤は、マルツロシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用、並びにフルクトシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用を通じて、Ｉ型コラーゲンの産生を促進し、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４９】
本発明のＩＶ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するＩＶ型コラーゲン産生促進作用を通じて、ＩＶ型コラーゲンの産生を促進し、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＩＶ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩＶ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５０】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を通じて、トランスグルタミナーゼ−１の産生を促進し、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、これらの用途以外にもトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５１】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するヒアルロン酸産生促進作用を通じて、ヒアルロン酸の産生を促進し、しわ形成、くすみ、きめの消失、及び弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、これらの用途以外にもヒアルロン酸産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５２】
本発明の一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有する一酸化窒素産生促進作用を通じて、特に血管内皮細胞における一酸化窒素の産生を促進し、血流障害、動脈硬化、高脂血症、虚血性心疾患や各種臓器での循環不全等の血管内皮機能低下に起因する疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の一酸化窒素産生促進剤は、これらの用途以外にも一酸化窒素産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５３】
〔皮膚化粧料〕
マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンは、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用及びＩ型コラーゲン産生促進作用を有しており、さらにマルツロシルアルギニンは、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有しており、皮膚に適用した場合の使用感又は安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合、皮膚化粧料には、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンをそのまま配合してもよいし、上記のようにして製剤化した抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤を配合してもよい。マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニン；上記抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤を配合することにより、皮膚化粧料に抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を付与することができる。
【００５４】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合し得る皮膚化粧料の種類は特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられる。
【００５５】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、皮膚化粧料中のマルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンの濃度が約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、約０．００１〜１質量％である。
【００５６】
本発明の皮膚化粧料は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有する抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用又はＩ型コラーゲン産生促進作用；マルツロシルアルギニンがさらに有するシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００５７】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤又は皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００５８】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００５９】
〔製造例１〕マルツロシルアルギニンの製造
マルトース（２．０ｇ）とアルギニン（１．０ｇ）とを精密分析用酢酸（１０ｍＬ）に溶解させ、沸騰水浴上にて１時間加熱攪拌した。得られた溶液を濃縮し、乾燥した後、陽イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ，ローム・アンド・ハース社製）を充填したカラムに供し、水、４容量％アンモニア水溶液の順で溶出させ、アンモニア水溶液画分として粗マルツロシルアルギニン（２．８５ｇ）を得た。
【００６０】
このようにして得られた画分を、順相カラムクロマトグラフィー（ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＮＨ、富士シリシア化学社製）にて７０％アセトニトリルを溶媒として分画し、マルツロシルアルギニン画分（２．７５ｇ）を得た。このようにして得られたマルツロシルアルギニン画分（１．５９ｇ）を下記条件の分取リサイクルＨＰＬＣにて精製し、マルツロシルアルギニン（１．０８ｇ）を得た（試料１）。
【００６１】
＜ＨＰＬＣ条件＞
固定相：ＪＡＩＧＥＬ ＧＳ−３１０（日本分析工業社製）
カラム長：５００ｍｍ
カラム径：２１．５ｍｍ
温度：室温
移動相：水
移動相流速：５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＲＩ
【００６２】
〔製造例２〕フルクトシルアルギニンの製造
グルトース（１．０ｇ）とアルギニン（１．０ｇ）とを精密分析用酢酸（１０ｍＬ）に溶解させ、沸騰水浴上にて１時間加熱攪拌した。得られた溶液を濃縮し、乾燥した後、陽イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ，ローム・アンド・ハース社製）を充填したカラムに供し、水、４容量％アンモニア水溶液の順にて溶出させ、アンモニア水溶液画分として粗フルクトシルアルギニン（１．０７ｇ）を得た。
【００６３】
このようにして得られた画分を、順相カラムクロマトグラフィー（ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＮＨ、富士シリシア化学社製）にて７０％アセトニトリルを溶媒として分画し、フルクトシルアルギニン画分（１．０３ｇ）を得た。このようにして得られたフルクトシルアルギニン画分（１．０３ｇ）を下記条件の分取リサイクルＨＰＬＣにて精製し、フルクトシルアルギニン（３１５ｍｇ）を得た（試料２）。
【００６４】
＜ＨＰＬＣ条件＞
固定相：ＪＡＩＧＥＬ ＧＳ−３１０（日本分析工業社製）
カラム長：５００ｍｍ
カラム径：２１．５ｍｍ
温度：室温
移動相：水
移動相流速：５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＲＩ
【００６５】
〔試験例１〕ＴＮＦ−α産生抑制作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）及び製造例２で得られたフルクトシルアルギニン（試料２）について、以下のようにしてＴＮＦ−α産生抑制作用を試験した。
【００６６】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。
【００６７】
培養終了後、培地を抜き、終濃度２％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１及び試料２，試料濃度は下記表１を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（LPS，E.coli0111;B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、２４時間培養した。培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ−α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定し、測定結果から下記式によりＴＮＦ−α産生抑制率（％）を算出した。
【００６８】
ＴＮＦ−α産生抑制率(％)＝{(Ｂ−Ａ)／Ｂ}×１００
式中、Ａは試料溶液添加時のＴＮＦ−α量を表し、Ｂは試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量を表す。
結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
表１に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）及びフルクトシルアルギニン（試料２）は、ＴＮＦ−α産生抑制作用を有することが確認された。
【００７１】
〔試験例２〕シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を試験した。
【００７２】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、１８時間培養した。
【００７３】
培養終了後、すでに存在するＣＯＸ−１及び少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化して失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌアスピリン含有培地に交換し、４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表２を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，E.coli 0111；B4，DIFCO社製）を５０μＬ添加し、２４時間培養した。
【００７４】
培養終了後、各ウェルの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量を、ＰＧＥ２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Cayman Chemical社製）を用いて定量した。定量結果から、下記式によりシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率（％）を算出した。
【００７５】
ＣＯＸ−２活性阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｃ)／(Ｂ−Ｃ)}×１００
式中、Ａは「試料添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表し、Ｂは「試料無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表し、Ｃは「試料無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表す。
結果を表２に示す。
【００７６】
【表２】
【００７７】
表２に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有することが確認された。
【００７８】
〔試験例３〕Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）及び製造例２で得られたフルクトシルアルギニン（試料２）について、以下のようにしてＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７９】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００８０】
培養終了後、培地を抜き、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した試料溶液（試料１及び試料２，試料濃度は下記表３を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
【００８１】
Ｉ型コラーゲン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のＩ型コラーゲン量」を表し、Ｂは「試料無添加時のＩ型コラーゲン量」を表す。
結果を表３に示す。
【００８２】
【表３】
【００８３】
表３に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）及びフルクトシルアルギニン（試料２）は、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【００８４】
〔試験例４〕ＩＶ型コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてＩＶ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００８５】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００８６】
培養終了後、培地を抜き、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表４を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のＩＶ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式に基づいてＩＶ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
【００８７】
ＩＶ型コラーゲン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のＩＶ型コラーゲン量」を表し、Ｂは「試料無添加時のＩＶ型コラーゲン量」を表す。
結果を表４に示す。
【００８８】
【表４】
【００８９】
表４に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れたＩＶ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【００９０】
〔試験例５〕トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
【００９１】
ヒト正常新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞用培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭを用いて希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。
【００９２】
培養終了後、ＫＧＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表５を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させて細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量を、モノクロナール抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）を算出した。
【００９３】
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表５に示す。
【００９４】
【表５】
【００９５】
表５に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れたトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認された。
【００９６】
〔試験例６〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
【００９７】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００９８】
培養終了後、０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表６を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を間接的ＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりヒアルロン酸産生促進率（％）を算出した。
【００９９】
ヒアルロン酸産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のヒアルロン酸量」を表し、Ｂは「試料添加時のヒアルロン酸量」を表す。
結果を表６に示す。
【０１００】
【表６】
【０１０１】
表６に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、ヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認された。
【０１０２】
〔試験例７〕一酸化窒素産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにして一酸化窒素産生促進作用を試験した。
【０１０３】
ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）を、ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞増殖培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＭｖＧ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をアルギニン（ＮＯの基質）及びフェノールレッドフリーのＨｕＭｅｄｉａ−ＭｖＧ（特別培地）を用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈した後、９６ウェルプレートに０．２ｍＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１０４】
培養終了後、培地を除去し、特別培地に溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表７を参照）を０．２ｍＬずつ添加し、さらに２４時間培養した。培養終了後、４００μＬのＰＢＳ（−）にて洗浄した後、２５ｍＭのアルギニン及び１０μＭのDiaminofluorescein-2を含む特別培地を０．２ｍＬずつ添加し、１分後に励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５１５ｎｍにおける蛍光強度を測定した。測定結果から、下記式により一酸化窒素（ＮＯ）産生促進率（％）を算出した。
【０１０５】
ＮＯ産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の蛍光強度」を表し、Ｂは「試料無添加時の蛍光強度」を表す。
結果を表７に示す。
【０１０６】
【表７】
【０１０７】
表７に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れた一酸化窒素産生促進作用を有することが確認された。
【０１０８】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
マルツロシルアルギニン（製造例１） ０．１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．０ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１０９】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
フルクトシルアルギニン（製造例２） ０．１ｇ
グリセリン ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【０１１０】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、各種炎症性皮膚疾患の予防、治療又は改善に、本発明の抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びヒアルロン酸産生促進剤は、皮膚の老化症状の予防又は改善に、本発明の一酸化窒素産生促進剤は、血流障害の予防又は改善に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤、抗老化剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因の一つとして、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（以下「ＴＮＦ−α」という）によるものが知られている。
【０００３】
ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症などの慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においてはＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。ＴＮＦ−α産生抑制作用を有するものとしては、ヒルガオ科ヨウサイからの抽出物等が知られている（特許文献１参照）。
【０００４】
また、炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害等の症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、炎症は、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊等の共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏等の中枢神経系も関与する、全身反応も引き起こす場合もある。このような炎症の個々の反応には、プロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２が関与することが明らかとなっている。
【０００５】
このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ阻害剤が用いられている（非特許文献１参照）。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ阻害剤としては、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチン等が知られている（特許文献２参照）。また、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する化合物としては、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン、その塩又はその水和物等が知られている（特許文献３参照）。
【０００６】
皮膚の構造は、大きく分けて、表皮、基底膜、真皮、皮下組織からなる。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在しており、その機能は多岐にわたり、表皮の真皮への接着、表皮の極性の決定、表皮の分化・増殖の制御、さらには真皮細胞が産生する因子や血成分由来の栄養供給の制御に関与している。そのため、基底膜は、皮膚の構造、恒常性の維持にとってきわめて重要な役割を果たしている。したがって、基底膜の構造が変化すると、しわ、たるみ等の皮膚の老化症状を呈するようになる。特に、基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンの産生量が減少すると、基底膜の構造が変化し、しわ、たるみ等の皮膚の老化症状を呈するようになる。
【０００７】
また、皮膚の真皮は、繊維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、ヒアルロン酸、Ｉ型コラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。そのため、真皮は、皮膚の張りや艶に必要な、水分保持、柔軟性、弾力性の確保に重要な役割を果たしている。したがって、紫外線の照射や、乾燥等、ある種の外的因子の影響、加齢等によりＩ型コラーゲンの産生量が減少すると、真皮の構造が変化し、保湿機能の低下、肌の弾力性の低下、張りや艶の低下等の皮膚の老化症状を呈するようになる。
【０００８】
従来、コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、五斂子抽出物（特許文献４参照）、加水分解カゼイン、ブナの芽、エリスリナ、可溶性卵殻膜、カッコン、西洋キヅタよりなる群から選ばれる植物及び動物由来の抽出物等が知られている（特許文献５参照）。
【０００９】
表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、基底層、有棘層、顆粒層及び角質層から構成されている。基底層で分裂、増殖した細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層になり、最終的には垢として角質層から脱落する。特に、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−１の作用により、蛋白分子間がグルタミル−リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。
【００１０】
しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈するようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するものとして、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム等が知られている（特許文献６参照）。
【００１１】
皮膚の真皮及び表皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚では、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があって、みずみずしい状態が維持される。
【００１２】
ところが、紫外線、著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、エラスチンの分解及び変質が起こる。また、外的因子の影響や加齢に伴う線維芽細胞の増殖率低下も、天然保湿因子であるヒアルロン酸の産生量の低下を生じる。その結果、皮膚の弾力性や保湿機能は低下し、角質は異常剥離を引き起こし、肌は張りや艶を失い、荒れ、しわ、くすみ等の老化症状を呈するようになる。
【００１３】
このような皮膚の老化に伴う、しわ、くすみ、きめの消失、及び弾力性の低下等には、ヒアルロン酸の減少、変性が関与している。近年、紫外線等がこの変化を誘導する因子とされており、皮膚のしわ形成等の大きな要因となると考えられる。したがって、ヒアルロン酸産生の促進は、皮膚の老化を防止及び改善する上で重要である。従来、ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、ラカシシュからの抽出物等が知られている（特許文献７参照）。
【００１４】
一酸化窒素については、その生理学的作用又は薬理学的作用が注目されており、様々な研究が行われてきている。一酸化窒素は、生体内において、Ｌ−アルギニンと分子状酸素とを基質とし、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、テトラヒドロビオプテリンを補酵素として、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）により生成される。ＮＯＳには、酵素学的にもタンパク質分子としても異なる３種のアイソフォームが存在し、それぞれ誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、血管内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）が知られている。
【００１５】
これらＮＯＳのうちｅＮＯＳは、血管内皮細胞に局在しており細胞膜に結合している。このｅＮＯＳが活性化されると、一酸化窒素が継続的に産生され、その一酸化窒素は直ちに血管平滑筋に取り込まれ、グアニル酸シクラーゼを活性化する。これによりサイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）が産生され、ｃＧＭＰ依存性タンパク質リン酸化酵素の活性化を介して、血管平滑筋が弛緩されることにより、血圧が低く保たれる。また、ｅＮＯＳにより産生された一酸化窒素は、血液中の血小板に作用することにより、血小板の凝集を阻害するとともに、凝固した血液の血管壁への接着を阻害する（非特許文献２参照）。
【００１６】
したがって、生体内、特に血管内皮細胞における一酸化窒素の産生を促進することで、血流障害、動脈硬化、高脂血症、虚血性心疾患や各種臓器での循環不全等の血管内皮機能低下に起因する疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、従来、一酸化窒素産生促進作用を有するものとして、フェネチルニコチンアミド誘導体又はその製薬学的に許容される塩等が知られている（特許文献８参照）。
【特許文献１】特開２００４−２５０３４４号公報
【特許文献２】特開２００２−４７１８０号公報
【特許文献３】特開２０００−１６９３５号公報
【特許文献４】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献５】特開２００４−１８４７１号公報
【特許文献６】特開２００４−５１５９６号公報
【特許文献７】特開２００７−２１０９７７号公報
【特許文献８】特開２００７−２７７０９６号公報
【非特許文献１】「薬理学アトラス」，福原武彦監訳，文光堂，1995年，p.184
【非特許文献２】中根正樹，「ＮＯ研究の新しい展開」，実験医学，１９９９年，第１７巻，第８号，ｐ．９１４−９１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有する物質を見出し、当該物質を有効成分とする抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生促進剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記目的を達成するために、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とし、本発明の皮膚化粧料は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合したことを特徴とする。
【００１９】
また、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有する抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生促進剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤及び皮膚化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明について説明する。
〔抗炎症剤，ＴＮＦ−α産生抑制剤，シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤，抗老化剤，Ｉ型コラーゲン産生促進剤，ＩＶ型コラーゲン産生促進剤，トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤，ヒアルロン酸産生促進剤，一酸化窒素産生促進剤〕
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン（Maltulosyl Arginine）及び／又はフルクトシルアルギニン（Fructosyl Arginine）を有効成分として含有する。また、本発明のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニン（Maltulosyl Arginine）を有効成分として含有する。
【００２２】
マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンは、糖質とアミノ酸との反応により生成されるアマドリ化合物の一種である。なお、本発明において、マルツロシルアルギニンには、Ｎα−［４−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、Ｎα−［４−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、Ｎα−［４−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、及びＮα−［４−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニンのアノマー炭素の配置が異なる構造を有する４種のものが含まれる。
【００２３】
また、本発明において、フルクトシルアルギニンには、Ｎα−［１−デオキシ−β−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニン、及びＮα−［１−デオキシ−α−Ｄ−フルクトピラノース−１−イル］−Ｌ−アルギニンのアノマー炭素の配置が異なる構造を有する２種のものが含まれる。
【００２４】
マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、アルギニンと、マルトース又はグルコースとを、酸の共存下でメイラード反応させることにより製造することができる。なお、本発明において、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、それらを含む天然物、又は天然物の加工物であってそれらを含むものから単離・精製することにより得られるものであってもよい。上記天然物の加工物としては、例えば、生薬が修治されたもの；天然物（植物、動物、担子菌類等を含む）に抽出処理、乾燥処理、加熱処理、熱湯処理、水蒸気処理、燻蒸処理、燻製処理、発酵処理等が施されたもの等が挙げられる。
【００２５】
具体的には、まず、マルツロシルアルギニンを製造する場合、アルギニンとマルトースとを反応溶媒としての酸に溶解させ、フルクトシルアルギニンを製造する場合、アルギニンとグルコースとを反応溶媒としての酸に溶解させる。
【００２６】
アルギニンとマルトース又はグルコースとの反応溶媒への添加量は、アルギニン１００質量部に対してマルトース又はグルコース１〜１０００質量部であるのが好ましく、５０〜３００質量部であるのが好ましい。
【００２７】
上記酸としては、アルギニンとマルトース又はグルコースとのメイラード反応の進行を妨げない限り特に限定されるものではないが、一般に酢酸、酪酸等の有機酸を用いることができる。なお、水溶液中で両者を反応させると、その反応効率が低下するおそれがあるため、氷酢酸等の無水状態で液状を示す酸を反応溶媒として用いるのが好ましい。
【００２８】
上記反応の温度条件としては、常温から沸点までの任意の温度であればよいが、反応速度、反応効率の点から６０〜８０℃の温度条件であるのが好ましい。また、反応時間は、反応温度や反応溶媒として用いる酸の種類によって異なるが、通常５〜３００分程度であり、１０〜６０分であるのが好ましい。
【００２９】
反応終了後、不溶性の物質をろ過又は遠心分離して除去し、得られた濾液又は上清から反応溶媒を留去することにより、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを含む粗精製物を得ることができる。
【００３０】
このようにして得られる粗精製物を精製処理に供することで、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを得ることができる。精製は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。
【００３１】
例えば、上記粗精製物を、陽イオン交換樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、陽イオン交換樹脂の約２〜６倍容量の水、陽イオン交換樹脂の約４〜８倍容量のアンモニア水溶液の順で溶出させ、アンモニア水溶液で溶出される画分を得る。
【００３２】
さらに、上記のようにして得られたアンモニア水溶液画分を、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、逆−逆相クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等に基づく、ペーパークロマトグラフィー（ＰＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、オープンカラムクロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取ＨＰＬＣ、分取リサイクルＨＰＬＣ等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製することにより、マルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンを得ることができる。
【００３３】
このようにして得られたマルツロシルアルギニン又はフルクトシルアルギニンは、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用及びＩ型コラーゲン産生促進作用を有するため、抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤及びＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分として用いることができる。また、マルツロシルアルギニンは、さらにシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有するため、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤及び一酸化窒素産生促進剤の有効成分としても用いることができる。
【００３４】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤及びＩ型コラーゲン産生促進剤においては、マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンのいずれか一方のみを上記有効成分として用いてもよいし、両者を混合して上記有効成分として用いてもよい。両者を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００３５】
ここで、マルツロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、例えば、ＴＮＦ−α産生抑制作用及び／又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用に基づいて発揮される。ただし、マルツロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００３６】
また、フルクロシルアルギニンが有する抗炎症作用は、ＴＮＦ−α産生抑制作用に基づいて発揮される。ただし、フルクトシルアルギニンが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００３７】
さらに、マルツロシルアルギニンが有する抗老化作用は、例えば、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、マルツロシルアルギニンが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００３８】
さらにまた、フルクトシルアルギニンが有する抗老化作用は、例えば、Ｉ型コラーゲン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、フルクトシルアルギニンが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００３９】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、抗老化剤又はＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンのみからなるものであってもよいし、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを製剤化したものであってもよい。また、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンのみからなるものであってもよいし、マルツロシルアルギニンを製剤化したものであってもよい。
【００４０】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンは、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４１】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤は、必要に応じて、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を有する他の物質（天然抽出物等を含む）を配合して有効成分として用いることができる。
【００４２】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤の投与方法としては、一般に経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００４３】
また、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４４】
本発明の抗炎症剤は、マルツロシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、並びにフルクトシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にもＴＮＦ−α産生抑制作用及び／又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４５】
本発明のＴＮＦ−α産生抑制剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有するＴＮＦ−α産生抑制作用を通じて、ＴＮＦ−αの産生を抑制し、これにより接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のＴＮＦ−α産生抑制剤は、これらの用途以外にもＴＮＦ−α産生抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４６】
本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、マルツロシルアルギニンが有するシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を通じて、シクロオキシゲナーゼ−２の活性を阻害し、これにより接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、これらの用途以外にもシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４７】
本発明の抗老化剤は、マルツロシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用、並びにフルクトシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有するＩ型コラーゲン産生促進作用を通じて、Ｉ型コラーゲンの産生を促進し、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４９】
本発明のＩＶ型コラーゲン産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するＩＶ型コラーゲン産生促進作用を通じて、ＩＶ型コラーゲンの産生を促進し、しみ、しわ形成等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＩＶ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩＶ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５０】
本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を通じて、トランスグルタミナーゼ−１の産生を促進し、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤は、これらの用途以外にもトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５１】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有するヒアルロン酸産生促進作用を通じて、ヒアルロン酸の産生を促進し、しわ形成、くすみ、きめの消失、及び弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防又は改善することができる。ただし、本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、これらの用途以外にもヒアルロン酸産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５２】
本発明の一酸化窒素産生促進剤は、マルツロシルアルギニンが有する一酸化窒素産生促進作用を通じて、特に血管内皮細胞における一酸化窒素の産生を促進し、血流障害、動脈硬化、高脂血症、虚血性心疾患や各種臓器での循環不全等の血管内皮機能低下に起因する疾患等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の一酸化窒素産生促進剤は、これらの用途以外にも一酸化窒素産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５３】
〔皮膚化粧料〕
マルツロシルアルギニン及びフルクトシルアルギニンは、抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用及びＩ型コラーゲン産生促進作用を有しており、さらにマルツロシルアルギニンは、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及び一酸化窒素産生促進作用を有しており、皮膚に適用した場合の使用感又は安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合、皮膚化粧料には、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンをそのまま配合してもよいし、上記のようにして製剤化した抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤を配合してもよい。マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニン；上記抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又は一酸化窒素産生促進剤を配合することにより、皮膚化粧料に抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を付与することができる。
【００５４】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合し得る皮膚化粧料の種類は特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられる。
【００５５】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、皮膚化粧料中のマルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンの濃度が約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、約０．００１〜１質量％である。
【００５６】
本発明の皮膚化粧料は、マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンが有する抗炎症作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、抗老化作用又はＩ型コラーゲン産生促進作用；マルツロシルアルギニンがさらに有するシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又は一酸化窒素産生促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００５７】
なお、本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、一酸化窒素産生促進剤又は皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００５８】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００５９】
〔製造例１〕マルツロシルアルギニンの製造
マルトース（２．０ｇ）とアルギニン（１．０ｇ）とを精密分析用酢酸（１０ｍＬ）に溶解させ、沸騰水浴上にて１時間加熱攪拌した。得られた溶液を濃縮し、乾燥した後、陽イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ，ローム・アンド・ハース社製）を充填したカラムに供し、水、４容量％アンモニア水溶液の順で溶出させ、アンモニア水溶液画分として粗マルツロシルアルギニン（２．８５ｇ）を得た。
【００６０】
このようにして得られた画分を、順相カラムクロマトグラフィー（ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＮＨ、富士シリシア化学社製）にて７０％アセトニトリルを溶媒として分画し、マルツロシルアルギニン画分（２．７５ｇ）を得た。このようにして得られたマルツロシルアルギニン画分（１．５９ｇ）を下記条件の分取リサイクルＨＰＬＣにて精製し、マルツロシルアルギニン（１．０８ｇ）を得た（試料１）。
【００６１】
＜ＨＰＬＣ条件＞
固定相：ＪＡＩＧＥＬ ＧＳ−３１０（日本分析工業社製）
カラム長：５００ｍｍ
カラム径：２１．５ｍｍ
温度：室温
移動相：水
移動相流速：５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＲＩ
【００６２】
〔製造例２〕フルクトシルアルギニンの製造
グルトース（１．０ｇ）とアルギニン（１．０ｇ）とを精密分析用酢酸（１０ｍＬ）に溶解させ、沸騰水浴上にて１時間加熱攪拌した。得られた溶液を濃縮し、乾燥した後、陽イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ，ローム・アンド・ハース社製）を充填したカラムに供し、水、４容量％アンモニア水溶液の順にて溶出させ、アンモニア水溶液画分として粗フルクトシルアルギニン（１．０７ｇ）を得た。
【００６３】
このようにして得られた画分を、順相カラムクロマトグラフィー（ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＮＨ、富士シリシア化学社製）にて７０％アセトニトリルを溶媒として分画し、フルクトシルアルギニン画分（１．０３ｇ）を得た。このようにして得られたフルクトシルアルギニン画分（１．０３ｇ）を下記条件の分取リサイクルＨＰＬＣにて精製し、フルクトシルアルギニン（３１５ｍｇ）を得た（試料２）。
【００６４】
＜ＨＰＬＣ条件＞
固定相：ＪＡＩＧＥＬ ＧＳ−３１０（日本分析工業社製）
カラム長：５００ｍｍ
カラム径：２１．５ｍｍ
温度：室温
移動相：水
移動相流速：５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＲＩ
【００６５】
〔試験例１〕ＴＮＦ−α産生抑制作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）及び製造例２で得られたフルクトシルアルギニン（試料２）について、以下のようにしてＴＮＦ−α産生抑制作用を試験した。
【００６６】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。
【００６７】
培養終了後、培地を抜き、終濃度２％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１及び試料２，試料濃度は下記表１を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（LPS，E.coli0111;B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、２４時間培養した。培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ−α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定し、測定結果から下記式によりＴＮＦ−α産生抑制率（％）を算出した。
【００６８】
ＴＮＦ−α産生抑制率(％)＝{(Ｂ−Ａ)／Ｂ}×１００
式中、Ａは試料溶液添加時のＴＮＦ−α量を表し、Ｂは試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量を表す。
結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
表１に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）及びフルクトシルアルギニン（試料２）は、ＴＮＦ−α産生抑制作用を有することが確認された。
【００７１】
〔試験例２〕シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を試験した。
【００７２】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、１８時間培養した。
【００７３】
培養終了後、すでに存在するＣＯＸ−１及び少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化して失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌアスピリン含有培地に交換し、４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表２を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，E.coli 0111；B4，DIFCO社製）を５０μＬ添加し、２４時間培養した。
【００７４】
培養終了後、各ウェルの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量を、ＰＧＥ２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Cayman Chemical社製）を用いて定量した。定量結果から、下記式によりシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率（％）を算出した。
【００７５】
ＣＯＸ−２活性阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｃ)／(Ｂ−Ｃ)}×１００
式中、Ａは「試料添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表し、Ｂは「試料無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表し、Ｃは「試料無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を表す。
結果を表２に示す。
【００７６】
【表２】
【００７７】
表２に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有することが確認された。
【００７８】
〔試験例３〕Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）及び製造例２で得られたフルクトシルアルギニン（試料２）について、以下のようにしてＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７９】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００８０】
培養終了後、培地を抜き、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した試料溶液（試料１及び試料２，試料濃度は下記表３を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
【００８１】
Ｉ型コラーゲン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のＩ型コラーゲン量」を表し、Ｂは「試料無添加時のＩ型コラーゲン量」を表す。
結果を表３に示す。
【００８２】
【表３】
【００８３】
表３に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）及びフルクトシルアルギニン（試料２）は、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【００８４】
〔試験例４〕ＩＶ型コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてＩＶ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００８５】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００８６】
培養終了後、培地を抜き、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表４を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のＩＶ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式に基づいてＩＶ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
【００８７】
ＩＶ型コラーゲン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のＩＶ型コラーゲン量」を表し、Ｂは「試料無添加時のＩＶ型コラーゲン量」を表す。
結果を表４に示す。
【００８８】
【表４】
【００８９】
表４に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れたＩＶ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【００９０】
〔試験例５〕トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
【００９１】
ヒト正常新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞用培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭを用いて希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。
【００９２】
培養終了後、ＫＧＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表５を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させて細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量を、モノクロナール抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）を算出した。
【００９３】
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表５に示す。
【００９４】
【表５】
【００９５】
表５に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れたトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認された。
【００９６】
〔試験例６〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにしてヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
【００９７】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００９８】
培養終了後、０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表６を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を間接的ＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりヒアルロン酸産生促進率（％）を算出した。
【００９９】
ヒアルロン酸産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のヒアルロン酸量」を表し、Ｂは「試料添加時のヒアルロン酸量」を表す。
結果を表６に示す。
【０１００】
【表６】
【０１０１】
表６に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、ヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認された。
【０１０２】
〔試験例７〕一酸化窒素産生促進作用試験
製造例１で得られたマルツロシルアルギニン（試料１）について、以下のようにして一酸化窒素産生促進作用を試験した。
【０１０３】
ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）を、ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞増殖培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＭｖＧ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をアルギニン（ＮＯの基質）及びフェノールレッドフリーのＨｕＭｅｄｉａ−ＭｖＧ（特別培地）を用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈した後、９６ウェルプレートに０．２ｍＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１０４】
培養終了後、培地を除去し、特別培地に溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表７を参照）を０．２ｍＬずつ添加し、さらに２４時間培養した。培養終了後、４００μＬのＰＢＳ（−）にて洗浄した後、２５ｍＭのアルギニン及び１０μＭのDiaminofluorescein-2を含む特別培地を０．２ｍＬずつ添加し、１分後に励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５１５ｎｍにおける蛍光強度を測定した。測定結果から、下記式により一酸化窒素（ＮＯ）産生促進率（％）を算出した。
【０１０５】
ＮＯ産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の蛍光強度」を表し、Ｂは「試料無添加時の蛍光強度」を表す。
結果を表７に示す。
【０１０６】
【表７】
【０１０７】
表７に示すように、マルツロシルアルギニン（試料１）は、優れた一酸化窒素産生促進作用を有することが確認された。
【０１０８】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
マルツロシルアルギニン（製造例１） ０．１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．０ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１０９】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
フルクトシルアルギニン（製造例２） ０．１ｇ
グリセリン ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【０１１０】
本発明の抗炎症剤、ＴＮＦ−α産生抑制剤及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、各種炎症性皮膚疾患の予防、治療又は改善に、本発明の抗老化剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ＩＶ型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びヒアルロン酸産生促進剤は、皮膚の老化症状の予防又は改善に、本発明の一酸化窒素産生促進剤は、血流障害の予防又は改善に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項２】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＴＮＦ−α産生抑制剤。
【請求項３】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤。
【請求項４】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項５】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項６】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＩＶ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項７】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤。
【請求項８】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項９】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする一酸化窒素産生促進剤。
【請求項１０】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項１】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項２】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＴＮＦ−α産生抑制剤。
【請求項３】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤。
【請求項４】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項５】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項６】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするＩＶ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項７】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤。
【請求項８】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項９】
マルツロシルアルギニンを有効成分として含有することを特徴とする一酸化窒素産生促進剤。
【請求項１０】
マルツロシルアルギニン及び／又はフルクトシルアルギニンを配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【公開番号】特開２０１０−９００７６（Ｐ２０１０−９００７６Ａ）
【公開日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２６３４６１（Ｐ２００８−２６３４６１）
【出願日】平成２０年１０月１０日（２００８．１０．１０）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１０日（２００８．１０．１０）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]