新規な多量体ＣＤ４０リガンド、その製造方法及び医薬を製造するためのそれらの使用
本発明は式（Ｉ）
（式中、Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−（式中、ｉは０又は１を表し、Ｘａは特にリジン、アルギニン、オルニチン残基から選択され、Ｘｂは特にグリシン、アスパラギン、Ｌ−プロリン又はＤ−プロリン残基から選択され、Ｘｃ及びＸｄは特にチロシン、フェニルアラニン又は３−ニトロチロシン残基から選択され、Ｘｅ及びＸｆは特に下記のアミノ酸残基ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎは１〜１０の範囲である）又はＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ（ｍは３〜６の範囲である）から選択され、但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる））
の化合物に関する。
（式中、Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−（式中、ｉは０又は１を表し、Ｘａは特にリジン、アルギニン、オルニチン残基から選択され、Ｘｂは特にグリシン、アスパラギン、Ｌ−プロリン又はＤ−プロリン残基から選択され、Ｘｃ及びＸｄは特にチロシン、フェニルアラニン又は３−ニトロチロシン残基から選択され、Ｘｅ及びＸｆは特に下記のアミノ酸残基ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎは１〜１０の範囲である）又はＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ（ｍは３〜６の範囲である）から選択され、但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる））
の化合物に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の目的は、新規な多量体ＣＤ４０リガンド、それらの製造方法、並びに医薬製造のためのそれらの使用である。
本発明の目的は、免疫応答の活性化又は抑制可能な分子でもある。
【０００２】
免疫応答におけるＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌペアの重要性は、多くのグループを、これら２つの分子に対する抗体の、免疫システムの抑制又は活性化のための治療目的の使用に導いた。抗ＣＤ４０Ｌ抗体の投与は、マウスの実験的アレルギー性脳脊髄炎等の自己免疫疾病の治療（ヒト多発性硬化症のモデル）（Ｈｏｗａｒｄ等、１９９９）又はサルの腎臓同種移植の拒絶反応の治療（Ｋｉｒｋ等、１９９９）において好意的な結論を生みだしている。これら２つの場合において、抗体は免疫システムの有害な活性化を抑制する。反対にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用は、一方では、マウスでのペプチドベースの抗腫瘍ワクチンの免疫を強く改善することを可能にし（Ｄｉｅｈｌ等、１９９９）、他方では、マウス腫瘍に対する闘いにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞の効果を増加する（Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ等、１９９９；Ｌｏｄｅ等、２０００）ことを可能にした。マウスモデルにおける腫瘍の退行は、ＣＤ４０Ｌをコードするアデノウイルスによりトランスフォームした樹状細胞（ＤＣｓ）の注入後に見られる。最後に、ＣＤ４０ＬとＣＤ４０分子との相互作用による樹状細胞の活性化は、寄生虫であるＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ Ｃｒｕｚｉ（Ｃｈａｕｓｓａｂｅｌ等、１９９９）による感染からマウスを保護することを可能にする。これらすべての研究において、ＣＤ４０と六価の複合体を形成するために、三量体の形で結合しているＣＤ４０Ｌ分子の特定の結合価が、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌペアの作用を干渉することができる機能的抗体を産生することを困難にしている。ＣＤ４０Ｌをコードしているアデノウイルスコードの開発は、この欠点に部分的に対応している。しかし、それらの使用は、ヒトにおいて問題がないわけではない。最後に、システムの特定の結合価は、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を干渉することができる合成分子の発見を困難にさせる。
【０００３】
本発明の目的は、タンパク質間相互作用に干渉するためにデザインされた多量体リガンドを提供することである。
本発明の目的は、多価のタンパク質―タンパク質相互作用を干渉することのできる分子を製造することでもある。
本発明の目的は、新規な三量体ＣＤ４０リガンドを提供することによりＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌシステムに作用する合成分子を提供することである。
本発明の目的は、アジュバント又は免疫抑制剤として作用することのできる分子を提供することでもある。
【０００４】
本発明は、下記の式（Ｉ）に対応する化合物に関する。
【化１】
（式中、
− Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化２】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化３】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
シュードペプチド型結合は、特にＳｐａｔｏｌａの論文（１９８３）に記載され、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化５】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが、天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる）
【０００５】
従って、例えば、Ｈ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−基を下記の式の１つにより示すことができる。
【化６】
【０００６】
本発明の化合物は、Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ鎖がＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ鎖と異なる、式（Ｉ）に対応する。
Ｙ基を３つのＣＯＯＨ官能基により機能化する場合には、Ｙを−ＣＯ−基によりＲｃに結合し、Ｙを３つのアミン官能基により機能化する場合には、Ｙを−ＮＨ−基によりＲｃに結合する。
本発明の化合物もまた、下記の式により表すことができる。
【化７】
Ｙ、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ及びｉを、前記で定義している。
Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−基は、ＹにＨ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−を結合するための腕としての役割を果たす。
【０００７】
本発明の化合物は、Ｃ３シンメトリーをもち、新規な三量体ＣＤ４０リガンドに対応する化合物である。
本発明の枠内において、用語「アミノ酸」は、具体的には天然アミノ酸又は非天然アミノ酸、具体的にはアルファ、ベータ、ガンマ、デルタアミノ酸、又はω−アミノ酸を意味する。
用語「大員環」は、窒素、炭素又は酸素原子、合計数が９以上の原子を含む環を意味する。
用語「α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸」は、下記の式の１つに対応する化合物、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＯＯＨ（α位）又はＨ２Ｎ−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＨ２ＣＯＯＨ（β位）（式中、Ｒｂはリジン、アルギニン又はオルニチン残基に対応する）を意味する。
【０００８】
さらに正確には、Ｘａは下記の基から選択される。
【化８】
【化９】
【０００９】
Ｘｂは下記の基から選択される。
【化１０】
Ｘｃ及びＸｄは下記の基から選択される。
【化１１】
【００１０】
Ｘｅ及びＸｆは下記の基から選択される。
【化１２】
【化１３】
【００１１】
本発明による好ましい化合物は、前記式（Ｉ）で表される化合物であり、Ｘａがリジン残基ではない、及び／又はＸｂがグリシン残基ではない。
リジン残基の置換は、一方、ＣＤ４０へのリガンドの結合を最適化、すなわちＣＤ４０への前記リガンドの結合の親和性の増加を可能にし、他方、そのリガンドの親油性の改質を可能にする。
グリシン残基の置換は、Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ鎖の生物活性構造を安定化することを可能にする。
【００１２】
好ましい実施態様によると、本発明の化合物は式（Ｉ）で表される化合物であり、式中、Ｘａはリジン残基ではない。
従って、本発明の好ましい化合物は、Ｘａが式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎは１から１０まで変化する）のアミノ酸残基を表し、好ましくはＸａがアミノヘキサン酸残基を表すことを特徴とする。
このような化合物は、天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のリジン残基を式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝１〜１０）のアミノ酸残基と置換する化合物である。
【００１３】
本発明の好ましい化合物は、下記の式１つに対応する化合物である。
【化１４】
（式中、ｎは前記で定義している）
ｎ＝５に対応する好ましい化合物を下記の式で表している。
【化１５】
前記リガンドの効果的な機能のいくらかを保護しながら、前記化合物における前記リジン残基のアミノヘキサン酸による置換は本発明のリガンドの親油性の調節を可能にし、それらはＣＤ４０との相互作用に起因する（リンパ腫アポトーシス試験、実施例参照）。
【００１４】
好ましくは、本発明の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物である（式中、Ｘａはリジン残基ではなく、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄ残基はＣＤ４０Ｌの天然の配列の残基と同一である）。
本発明はまた、Ｘｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物に関する。
従って、本発明による好ましい化合物は、ＸｂがＤ−プロリン残基で表されることを特徴とする。このような化合物は下記の式で表される。
【化１６】
【００１５】
その化合物における天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のグリシン残基のＤ−プロリンによる置換は、天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６ループにより形成されたタイプＩＩフォールディングを安定化することにより、前記リガンドを安定化することを可能にする。従って、その安定化は、特に天然のＣＤ４０リガンドに対するＢリンパ種のより特異的なアポトーシスを誘発するための能力によって、より選択的なリガンドを得ることを可能にし、リンパ腫のアポトーシスの枠内において特に有用である。
好ましくは、本発明の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物（式中、Ｘｂはグリシン残基ではなく、Ｘａ、Ｘｃ及びＸｄ残基はＣＤ４０Ｌの天然の配列の残基と同一である）である。
本発明による好ましい化合物は、ＸｂがＬ−プロリン残基で表される化合物である。その化合物における天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のグリシン残基のＬ−プロリン残基による置換は、ＣＤ４０への天然のリガンドと同様の結合性を有するが、関連する生物学的特性を有しないリガンドを得ることを可能にする。従って、そのリガンドはＢリンパ種のアポトーシスの効果を有しない。
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物にも関し、
− Ｘａはリジン残基ではなく、及び
− Ｘｂはグリシン残基ではない。
好ましくは、その化合物は、
− Ｘａが好ましくは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（式中、ｎは１から１０まで変化する）のアミノ酸残基を表し、具体的にはアミノヘキサン酸残基を表し、
− Ｘｂが好ましくはＤ−プロリン残基を表すことを特徴としている。
その化合物は下記の一般式の１つに対応する。
【化１７】
【００１７】
本発明は、式（Ｉ）に対応するビオチンで標識された化合物にも関する。
これらの化合物は、ポリマーから本発明のリガンドを多量体にすることを可能にする機能化されたリガンドを調製するために使用される。このために、具体的には種々のビオチンに結合することのできるストレプトアビジンを使用することを可能にする。
従って、本発明は多量体形状、すなわち本発明の種々のリガンドが結合するポリマー分子に対応する本発明のリガンド、並びに標識としてこれらの多量体リガンドの使用にも関する。
これらの化合物もまた、具体的には樹状細胞による腫瘍の免疫療法の枠内において、これらの化合物によるグラフトされたカラムの使用によりＣＤ４０レセプターを精製し、又はこれらの標識された化合物を使用することにより細胞の表面上のＣＤ４０レセプターを容易に検出することを可能にする。
【００１８】
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、Yが下記の式（ＩＩ）に対応することを特徴とする。
【化１８】
（式中、
− ｊは０又は１；
− Ａは下記のいずれかから選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体を表し、
【化１９】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
− Ｂ１は下記から独立に選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体であり、
【化２０】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の側鎖を表し；
− Ｂ２はＢ１と同一であることができるか、又は下記の基から独立に選択され、
【化２１】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の側鎖を表し；
・Ｄは下記の基の１つを表し、
（＋）−ビオチニル−、（＋）−ビオチニル−Ｘｇ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−
ｑは２〜６の整数を表し；
Ｘｇは下記の基の１つの残基に対応し、
−ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
−ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
トラネキサム酸；
Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
４−カルボキシメチル−ピペラジン；
４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
４−アミノフェニル酢酸；
４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
４−アミノ安息香酸；
４−（２−アミノエトキシ）安息香酸）
【００１９】
式（ＩＩ）において、Ａは式（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）又は（１２）の基である；Ｂ１は式（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）又は（２０）の基であり、Ｂ２は式（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、（２０）、（２１）、（２２）、（２３）又は（２４）の基である。
Ｘｇは、Ｘｅ及びＸｆとして同様に定義している。
用語「Ｐｙｓ」はピペリジンサルフェニル基を表し、用語「Ｎｐｙｓ」はニトロピリジンサルフェニル基を表している。
ビオチンを下記の式により表す。
【化２２】
従って、ビオチニル基を下記の式により表す。
【化２３】
【００２０】
用語「プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の鎖」は、遺伝情報の２０アミノ酸の１つに対応する又は対応しない、タンパク質中に存在するアミノ酸の側鎖を表している。
式（ＩＩ）で表される化合物は下記の一般式の１つに対応する。
【化２４】
【００２１】
本発明はまた、下記の式の１つに対応する、化合物に関する。
【化２５】
（式中、Ｒａ、Ｒｃ及びｐを前記で定義している）
【００２２】
式（ＩＩＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ｃ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（５）で表される基であり、Ｂ１は式（１６）で表される基（ｎ＝０）である。
式（ＩＶ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ｃ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（６）の基であり、Ｂ１は式（１５）の基（ｎ＝０）である。
式（Ｖ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（５）の基（ｎ＝１）である。
式（ＶＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（１１）の基（Ｅ＝ＮＨ）である。
式（ＶＩＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（１０）の基（Ｅ＝ＮＨ）である。
【００２３】
これらの異なる化合物は、それらの構造がレセプター（Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄ）と接触する残基の位置を確認し、位置を決めることを可能にする明確な立体構造をもち、選択的な相互作用の形状及び距離をもつ、剛性の平らな環式構造の範囲にとって特に有用である。
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式（ＩＩＩ−ａ）で表される。
【化２６】
式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ）で表される化合物（式中、Ｒａはメチル基及びｐ＝３で表される）である。
【００２４】
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式（Ｖ−ａ）で表される。
【化２７】
式（Ｖ−ａ）で表される化合物は、式（Ｖ）の化合物（ｐ＝３）で表される。
【００２５】
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式の１つで表される。
【化２８】
（Ｒｃは前記で定義されている）
【００２６】
式（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）及び（ＩＩＩ−ｄ）で表される化合物は、それぞれビオチン、−ＣＯ−（ＣＨ２）２−ＳＨ及び
【化２９】
により標識された式（ＩＩＩ−ａ）に対応する化合物である。更に正確には、これらの化合物は式（ＩＩ−ｂ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物であり、Ａは式（５）の基であり、Ｂ１は式（１６）の基（ｎ＝０）であり、Ｂ２は式（２２）基（ｐ＝３）である。
式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物において、Ｄはビオチニル基である。
式（ＩＩＩ−ｃ）で表される化合物において、Ｄは−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＳＨ基（ｑ＝２）である。
式（ＩＩＩ−ｄ）で表される化合物において、Ｄは−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｓ−ｐｙｓ基（ｑ＝２）である。
本発明の好ましい化合物は、式（Ｉ）で表される化合物であり、
Ｒｃは、Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又はＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−（式中、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合を表す）又は、Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘａはリジン残基であり、ＸｂはＤ−プロリン残基であり、Ｘｃはチロシン残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）で表されるアミノ酸残基である。
【００２７】
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘａはリジン残基であり、Ｘｂはグリシン残基であり、ＸｃはＤＯＰＡ（３，４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン）残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）のアミノ酸残基である。
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘ’ａはリジン残基であり、Ｘ’ｂはＤ−プロリン残基であり、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合（ペプチド結合のＣＯＮＨ基はＣＨ２−Ｎ基により置換される）であり、Ｘｃはチロシン残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）のアミノ酸残基である。
【００２８】
その化合物は、下記の式の１つで表す。
【化３０】
【００２９】
その化合物もまた、下記の式の１つで表すことができる。
【化３１】
【００３０】
本発明の好ましい化合物は、下記の式の１つで表す。
【化３２】
【化３３】
【化３４】
【化３５】
【００３１】
式（ＩＩＩ−ｅ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（Ｖ−ｂ）で表される化合物は、式（Ｖ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（ＩＩＩ−ｆ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（ＩＩＩ−ｉ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
本発明は、また下記の式の１つに対応する化合物に関する。
【化３６】
【化３７】
【００３２】
化合物（ＩＩＩ−ｇ）は、式（ＩＩＩ−ｅ）で表されるビオチンで標識された化合物である。この化合物は、また式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物に対応し、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−基である。
化合物（ＩＩＩ−ｈ）は、式（ＩＩＩ−ｆ）で表されるビオチンで標識された化合物である。この化合物は、また式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物であり、ＲｃはＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−基である。
化合物（ＩＩＩ−ｊ）は、ビオチンで標識された化合物である。この化合物もまた、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物に対応し、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基である。
本発明は、また薬学的に許容可能なベクターと組み合わせて、活性成分として、式（Ｉ）に対応する、前記化合物を含むことを特徴とする医薬組成物に関する。
本発明は、また薬学的に許容可能なアジュバントと組み合わせて、活性成分として、式（Ｉ）に対応する、前記化合物を含むことを特徴とするワクチン組成物に関する。
【００３３】
本発明は、また免疫応答の抑制又は活性化を含む病状の治療を意図する薬の調製のための、式(Ｉ)に対応する、前記化合物の使用に関する。
免疫応答は、炎症性疾患（炎症性リウマチ）、自己免疫性疾患、通常の超過敏反応及び具体的にはアレルギー、組織不適合、ホストに対するグラフト（ｇｒａｆｔ）の反応の過程において、抑制されるに違いない。
免疫応答は、通常のワクチン接種、癌免疫療法、免疫抑制を誘発する細菌性疾患又はウィルス性疾患（はしか、ＡＩＤＳ、ヘルペス・ウイルス、サイトメガロ・ウイルス等）、細菌性疾患、ウィルス性疾患又は一次免疫不全又は二次免疫不全を示す個々人の従来にない病原体（プリオン）を含む疾患の治療において活性化されるに違いない。
本発明は、免疫応答、例えば組織不適合、アレルギー疾患又は自己免疫疾患の抑制を含む病状の治療を意図する薬の調製のための、前記使用にも関する。
【００３４】
免疫応答の抑制を含む疾病は、自己免疫疾病、糖尿病、多発性硬化症、播種性淋菌感染又は関節リウマチ、同種移植片、異種移植片の枠内での組織不適合、ホストに対するグラフトの反応、並びにアレルギー等の超過敏反応、具体的にはアレルギー性鼻炎及びアトピー性皮膚炎、又は肉芽腫を含む。
本発明の化合物を、免疫応答の抑制の枠内において使用し、静注経路、粘膜経路（経口、気道、鼻、膣）、皮下経路、皮内経路又は表面経路により投与することが可能である。
本発明は、また、医薬組成物に関し、免疫応答抑制を含む病状の治療のために、本発明の化合物を含み、その化合物を個々人へ１日当たり約１００ｎｇ〜約５ｍｇの割合で投与することができる量で医薬組成物に存在していることを特徴とする。
本発明は、免疫応答を高めることを含む病状、例えば癌、又は寄生性感染、細菌性感染、ウィルス性感染、又はプリオン等の非従来的な感染体に関連する感染の治療を意図する医薬の製造のための、前記使用に関する。
【００３５】
免疫応答の活性化を含む場合において、通常のワクチン接種、具体的にはインフルエンザに対するワクチン又は小児病に対するワクチン、癌免疫療法、具体的にはメラノーマ又は転移を伴う癌の枠内で、免疫抑制を誘発する細菌性疾患又はウィルス性疾患、具体的には、はしか、ＡＩＤＳ、ヘルペス・ウイルス又はサイトメガロ・ウイルス、又は一次免疫不全又は二次免疫不全を示す個々人を対象とするワクチンを含む。
本発明の化合物は、免疫応答の活性化の枠内で使用され、静注経路により、粘膜経路（経口、気道、鼻、膣）により、皮下経路、皮内経路又は表面経路により投与することが可能である。
本発明は、また医薬組成物に関し、免疫応答の活性化を含む病状の治療のために、本発明の化合物を含み、その化合物を個々人へ１日当たり約１００ｎｇ〜約５ｍｇの割合で投与することができる量で医薬組成物に存在していることを特徴とする。
【００３６】
本発明は、また
− Ｙのリニアー前駆体の形成工程であって、前駆体がＮ−保護アミノ酸残基（それらの３つは、アミン型のＲａ基を有し、Ｒａ基は請求項７で定義されている）と成長ペプチド鎖のアミン官能基との間の結合、及び固体支持体に付着している最初のアミノ酸残基脱保護の連続サイクルによって合成される、成長ペプチド鎖を形成するアミノ酸の連鎖形成により構成される形成工程、
− 前記Ｙの保護リニアーの前駆体の環化工程、
− 前記保護アミン官能基を遊離するための、前記保護用の基の開裂工程、
− 前記遊離されたアミン官能基の、請求項１で定義されたＲｃ基に対応するアミノ酸配列の連続のアッセンブリーにより、既に形成されているか、又はインサイチューで形成されるペプチドへの連結工程、
− 前記Ｒｃ基の官能化された側鎖に存在する全ての保護基の削除の後に、本発明の化合物を得るための、前記固体支持体からの分子の開裂工程、
を含むことを特徴とする、固体支持体上における、式（１）で表される化合物の製造方法に関する。
【００３７】
本発明で表される化合物は、下記の方法による固体支持体上の合成により得られる。Ｙ基はリニアーの前駆体の合成及び環化により固体支持体上に最初に構成される。従って、第１アミノ酸残基（それらの酸の作用は適切に保護されている（例えば、アリルエステル））は、アルデヒドにより機能化された樹脂（市販の樹脂）を使用し、還元アミン化反応による支持体に結合する。その後、リニアーの前駆体ＹはＮ−保護アミノ酸（例えば、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、Ｘａａはいくらかのアミノ酸又は成長ペプチド鎖を示す）を持つ連続カップリング環化（標準のペプチド合成方法）及び脱保護（Ｆｍｏｃ基の開環のためのＤＭＦ中の２０％ピペリジン）により組み立てられる。樹脂の洗浄方法及び濾過方法並びにＦｍｏｃ基の脱保護方法は、固相中のペプチド合成に一般に使用されている。アミノ型鎖を有する３つのアミノ酸は機能化され、アミン官能基は他（例えば、ＴＥＯＣ又はメチルトリチル）に直交する保護基により保護される。アッセンブリーの終わりに、最後のＮ−保護基は開裂され（Ｆｍｏｃ基の場合にはＤＭＦ中の２０％ピペリジン存在下）及びＣ末端エステルの保護基は開裂する。その後、リニアーの前駆体はカップリング試薬（標準のペプチド合成）及び例えばＤＩＥＡ又はコリジン等の第３塩基の存在下において「頭から尻尾（ｈｅａｄ ｔｏ ｔａｉｌ）」で環化する。環化反応の後に、カイザー試験（カイザーら、１９７０）等の比色試験を行うことができる。環化の終わりに、保護されたアミン官能基を有するアミノ酸の保護基は開裂し、適切に保護されているスペーサーアーム（例えば、Ｆｍｏｃ−Ａｈｘ（６−アミノヘキサン酸）−ＣＯＯＨ）は、カップリング試薬の存在下において３つの遊離アミン官能基にカップリングされる。このカップリングの終了後、スペーサーアームの保護基は開裂し、Ｒｃ基は標準のペプチド合成方法により組み立てられる。合成の最後に、すぐに最後の保護基は除去され、分子は例えばトリフルオロ酢酸での処理により樹脂から開裂し、エーテルから沈殿後に凍結乾燥し、例えばＣ１８カラムの逆相分取ＨＰＬＣにより精製する。
【００３８】
本発明はまた、下記の式に対応するビオチンで標識された化合物に関する
【化３８】
（式中、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化３９】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化４０】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４１】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化４２】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す））。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】実施例５の保護ペンタペプチド(1)のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４０】
【図２】実施例５の非環式ヘキサペプチド(2)のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４１】
【図３】実施例５の環化及び脱保護ヘキサペプチド（３）のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４２】
【図４】実施例５の化合物Ａ（Ｌ４１）のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４３】
【図５Ａ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ３６リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ３６リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。点曲線はＣＤ４０を発現しないＪｕｒｋａｔ細胞株のＬ３６リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。黒四角の実曲線はＢＬ４１の対照ペンタペプチド（Ｌ３７）（Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ）により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、白丸の実曲線はＪｕｒｋａｔの対照ペンタペプチド（Ｌ３７）により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４４】
【図５Ｂ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ４及びＬ４１リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ４リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。点曲線はＬ４１リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４５】
【図５Ｃ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ４及びＬ４０リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。数値は、ＢＬ４１細胞の３つの独立した実験の平均±平均偏差に対応する。白のヒストグラムはＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒のヒストグラムはＬ４５により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、灰色のヒストグラムはＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。Ｄ−プロリンをＬ−プロリンで置換した対照ペプチド（Ｌ４５）（Ｈ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ）は活性を有しない。
【００４６】
【図５Ｄ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされた、Ｌ４、Ｌ４３及びＬ４４リガンドにより誘導された、Ｒａｊｉ細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、点曲線はＬ４３により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒四角の曲線はＬ４４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４７】
【図６】Ｌ４０リガンドとＣＤ４０との直接相互作用の反応速度を測定したセンサ−グラムを示す（時間の関数としての応答）。ここで、Ｌ４０リガンドは４分間にわたり流速３０μＬ／ｍｉｎで濃度２５，１００及び２００ｎＭにより注入される。
【００４８】
【図７Ａ】ストレプトアビジン−ＦＩＴＣにより発色されたビオチニル化Ｌ４１リガンドを使用したＢＬ４１細胞のフローサイトメトリーでの標識を示す。ｙ軸はＬ４１リガンドとストレプトアビジンで標識された細胞の蛍光強度（ＦＬ１−Ｈ）に対応し、ｘ軸は細胞の大きさ（ＦＳＣ−Ｈ）に対応している。左側の濃度曲線はストレプトアビジンなしのビオチニル化されたリガンドで標識された細胞に対応し、右側の濃度曲線は蛍光色素ＦＩＴＣと結び付いたストレプトアビジンがあるビオチニル化されたリガンドで標識された細胞に対応する。黒色から灰色への色合いは、ｘ軸（ＦＳＣ）及びｙ軸（ＦＬ１）上のポイントでの減少する細胞濃度を示す。
【００４９】
【図７Ｂ】ビオチニル化されたＬ４１リガンド及びＣＤ４０に対する抗体を使用するＢＬ４１細胞の蛍光顕微鏡検査法での標識（ストレプトアビジンＡｌｅｘａ５４６及び蛍光色素Ａｌｅｘａ４８８で結び付いたマウス抗体のＦｃ部分に対するヤギ抗体によりそれぞれ発色する）を示す。図の左側の灰色の色合いはＣＤ４０に対する抗体の標識に対応し、図の右側の灰色の色合いはビオチニル化されたＬ４１リガンドの標識に対応する。
【００５０】
【図８Ａ】種々の濃度のＬ４及びＬ６２リガンドの存在下における１６時間の培養後５ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬでのＢｕｒｋｉｔｔ Ｒａｊｉリンパ腫（ＣＤ４０＋）及びＴ Ｊｕｒｋａｔ白血病（ＣＤ４０−）細胞のあるアポトーシスの百分比を示す。白ダイヤの曲線はＲａｊｉ細胞のＬ４により誘導された用量反応に対応し、白四角の曲線はＲａｊｉ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒三角の曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００５１】
【図８Ｂ】独立した実験において図８Ａと同じ条件下での種々のＬ６２及びＬ４０で処理されたＲａｊｉ， Ｊｕｒｋａｔ及びＢｕｒｋｉｔｔ ＢＬ４１リンパ腫（ＣＤ４０＋）細胞の特異的なアポトーシスの百分比を示す。白丸の実曲線はＲａｊｉ細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、白三角の実曲線はＲａｊｉ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の実曲線はＢＬ４１細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒三角の実曲線はＢＬ４１細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒四角の点曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の点曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００５２】
《略記リスト》
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡｃＯＨ 酢酸
ＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）
ホスホニウムヘキサフルオロフォスフェイト
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＣＭＡ クロロホルム、メタノール及び酢酸の混合物
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＤＢＵ １，８−ジアザビシクロ［５．４，０］ウンデセン−７−エン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＥＡ ジエチルアミン
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤｉＯＣ６ ３．３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン ヨウ化物
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
メチオダイド
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−
テトラメチルウラン ヘキサフルオロフォスフェイト
ＨＯＡｔ ７−アザベンゾトリアゾール
ＨｏＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩｐＯＨ イソプロパノール
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
ＯＡｌｌ −Ｏ−アリル
ＯＭｔｔ −Ｏ−メチルトリチル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
【実施例】
【００５３】
《実施例１：保護されたペンタペプチド及び脱保護されたペンタペプチドの合成》
Ｉ．保護されたペンタペプチドＬ４４’及び脱保護されたペンタペプチドＬ４４
脱保護されたペンタペプチドＬ４４は下記の式に対応する。
Ｈ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ４４’）の調製
１．４ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．３ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、１．３ｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び１．９ｍＬ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００５４】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｂは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｂに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作を２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ４４’を生成する。
【化４３】
ペプチドＬ４４’は、下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１４．９０９分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ４８Ｈ７３Ｎ５Ｏ１０Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：９０３．１２；実測値：９０２．５７
【００５５】
２）保護されたペンタペプチドＬ４４の調製：ＮＨ２−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
ペプチドＬ４４’を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ４４を生成する。
【化４４】
このペプチドＬ４４は、下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１０．２７２分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５０Ｎ５Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：６６７．８；実測値：６６８．２；Ｃ３５Ｈ４９Ｎ５Ｏ８Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：６９０．８；実測値：６９０．２３
【００５６】
ＩＩ．保護されたペンタペプチドＬ３７’及び脱保護されたペンタペプチドＬ３７
下記の式に対応する脱保護されたペンタペプチドＬ３７：
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＬ３７’の調製：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ
１．４ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．３ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、１．３ｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び１．９ｍＬ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００５７】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ａは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ａに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作を２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ３７’を生成する。
【化４５】
ペプチドＬ３７’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１５．６０５分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ５３Ｈ８２Ｎ６Ｏ１２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：１０１８．２５；実測値：１０１８．４０；Ｃ５３Ｈ８２Ｎ６Ｏ１２Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：１０３４．２５；実測値：１０３４．６４
【００５８】
２）脱保護されたペンタペプチドＬ３７の調製：ＮＨ２−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
ペプチドＬ３７’を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ３７を生成する。
【化４６】
このペプチドＬ３７は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．０６５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５１Ｎ６Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：６８３．８１；実測値：６８２．９１；Ｃ３５Ｈ５０Ｎ６Ｏ８Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：７０５．８１；実測値：７０５．２２；Ｃ３５Ｈ５０Ｎ６Ｏ８Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：７２１．８１；実測値：７２１．６７
脱保護されたＬ４５は、Ｌ３７及びＬ４４の合成方法と同様の方法により合成される。
【００５９】
ＩＩＩ．保護されたペンタペプチドＬ６３’及び脱保護されたペンタペプチドＬ６３
下記の式に対応する脱保護されたペンタペプチドＬ６３
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）脱保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３’）の調製
０．３ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、３４０ｍｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び４７８μｌ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００６０】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｃは、Ｄ−プロリン残基の結合後に得られる。
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈ（３当量）のＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ−４Ｃに添加する。その後、ＤＭＦ中に可溶化されたＮａＢＨ３ＣＮを系に添加し、混合物を１時間撹拌する。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。樹脂Ｒ−４Ｄが得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｄに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作をＤＣＭで２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ６３’を生成する。
【化４７】
ペプチドＬ６３’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１３．７７分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｈ＋の計算値：９８２．２８；実測値［Ｍ＋Ｈ＋］＝９８２．３８；Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｎａ＋の計算値：１００４．２８；実測値１００４．４４；Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｋ＋の計算値：１０２０．２８；実測値１０２０．４５
【００６１】
２）保護されたペンタペプチドＮＨ２−ＬｙｓΨ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３）の調製
ペプチドＬ６３を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ６３を生成する。
【化４８】
このペプチドＬ６３は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．７７分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５２Ｎ６Ｏ７Ｎａ＋の計算値：６９１．８２；実測値６８９．６８；Ｃ３５Ｈ５２Ｎ６Ｏ７Ｋ＋の計算値：７０７．８２；実測値７０７．１５
【００６２】
ＩＶ．保護されたペンタペプチドＬ６９’及び脱保護されたペンタペプチドＬ６９
脱保護されたペンタペプチドＬ６９は下記の式に対応する。
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ（Ａｃｅｔｏｎｉｄ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９’）の調製
０．３ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、３４０ｍｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び４７８μｌ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００６３】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｅは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｅに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作をＤＣＭで２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ６９’を生成する。
【化４９】
ペプチドＬ６９’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１２．８３分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ４９Ｈ７４Ｎ６Ｏ１３Ｎａ＋の計算値：９７８．１５；実測値９７９．５５；Ｃ４９Ｈ７４Ｎ６Ｏ１３Ｋ＋の計算値：９９４．１５；実測値９９５．８９
【００６４】
２）保護されたペンタペプチドＨ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９）の調製
ペプチドＬ６９を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ６９を生成する。
【化５０】
このペプチドＬ６９は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．１８分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３２Ｈ４６Ｎ６Ｏ９Ｋ＋の計算値：６９７．７４；実測値６９７．４０
【００６５】
《実施例２：式（Ｖ−ｂ）（Ｌ３６）の化合物の調製》
【化５１】
１３ｍｇ（１当量）の保護された環１をＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をシクロヘキサンで蒸発し、化合物２を生成する。
化合物２をＤＭＦ中に取り込む。５６ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＬ３７’
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（前記参照）、２５ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰ及び３０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、３５ｍｇのＬ３６リガンド（粗反応収率８６％）を生成する。１１ｍｇの純粋なＬ３６は、精製後ＲＰ−ＨＰＬＣにより得られる（精製後の収率２７％）。
Ｌ３６リガンドは下記を特徴とする。
ＨＬＰＣ：ｔＲ１０．１１５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１２６Ｈ１８７Ｎ２４Ｏ２４［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２４２２；実測値：２４２０．６８
【００６６】
《実施例３：Ｌ４０及びＬ４３の大員環の調製》
【化５２】
【００６７】
化合物１
Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（５．９９ｇ；１５．７５ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌを含むＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｎ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＭｅ（２．０９ｇ；１５ｍｍｏｌ），ＢＯＰ（６．９６ｇ；１５．７５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（７．６ｍＬ；４５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：９８％（６．８５ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝９．３分、純度＞９７％、２０分間にわたり３０〜１００。
【００６８】
化合物２
化合物１（４．６６ｇ；１０ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（１０ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：１００％（３．７１ｇ）、純度ＨＰＬＣ＞９７％、ＴＬＣ Ｒｆ０．３ＣＭＡ６０／１０／５。
ＨＣｌ塩（３．６８ｇ；１０ｍｍｏｌ）をＺ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ（２．３４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（４．６４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（３．４ｍＬ；２０ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：９７％（５．２ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝８．９分、純度＞８８％、２０分間にわたり３０−１００。
【００６９】
化合物３
化合物２（５．１ｇ；９．５ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（９．５ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：１００％（４．２ｇ）。
ＨＣｌ塩（４．２ｇ；９．５ｍｍｏｌ）をＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３．８ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（４．４２ｇ；１０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（４．２ｍＬ；２５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を放置する。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９３％（６．８ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．９分、純度９０％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７０】
化合物４
化合物３（６．８ｇ；８．９ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（８．９ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮し、白色固体を生成する。収率：９１％（５．４ｇ）；ＴＬＣＲｆ０．３ＣＭＡ６０／１０／５。
ＨＣｌ塩（５．４ｇ；８．１ｍｍｏｌ）をＺ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ（１．９ｇ；８．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（３．８ｇ；８．５ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（４．２ｍＬ；２５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で６時間攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：７８％（５．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．６７分、純度７７％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７１】
化合物５
化合物４（５．３ｇ；６．３ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（６．３ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。５時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９１％（４．７ｇ）。
ＨＣｌ塩（４．７ｇ；５．５ｍｍｏｌ）をＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（２．２ｇ；５．８ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（２．２ｇ；５．８ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（１．９ｍＬ；１１ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９０％（５．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１２．２６分、純度６０％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７２】
化合物６
化合物５（５．３ｇ；４．９ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解し、１ＮＮａＯＨソーダ（５．９ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。反応混合物を、室温に温める前に１時間０℃で維持する。６時間後、反応混合物を真空下で濃縮する。その後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を攪拌下で添加し、有機相を１Ｎ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。粗ペプチドを、ＣＭＡ１２０／１０／５を使用するシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにより精製する。収率：４４％（２．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１１．２８分、純度７８％、２０分を超える３０−１００。
【００７３】
化合物７
化合物６（１．５ｇ；１．４６ｍｍｏｌ）を室温でＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。４時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をジイソプロピルエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：８８％（１．１７ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１６．９分、純度７０％、２０分を超える５−６５。
【００７４】
化合物８
化合物７（８００ｍｇ；０．８７ｍｍｏｌ）を、室温でＥＤＣを含むＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ（２０１ｍｇ；１．０５ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ（１４２ｍｇ；１．０５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３７３ｍＬ；２．１９ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加する。反応混合物を２日間室温で撹拌し、反応混合物を真空下において濃縮する。
飽和重炭酸ナトリウム溶液、酢酸エチル（１００ｍＬ）を攪拌下で添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｎ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を生成する。収率：１００％（０．７８ｇ）；Ｍ＋Ｈ＋＝８９６。
【００７５】
化合物９
化合物８（６５０ｍｇ；０．７６ｍｍｏｌ）を室温で１時間ＴＦＡ（６ｍＬ）に溶解する。混合物のアミンを真空下で濃縮する。予想されるアミンをエーテル（５０ｍＬ）から沈殿する。それを集め、エーテルで洗浄し、真空乾燥する。収率：９８％（０．７０ｇ）；Ｍ＋Ｈ＋＝５９８．５（計算値＝５９７．６）。
【００７６】
《実施例４：式（ＩＩＩ−ｅ）（Ｌ４０）の化合物の調製》
化合物Ｌ４０は下記の式に対応する。
【化５３】
【化５４】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ３７’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９（実施例３参照）に添加し、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、４０ｍｇのＬ４０リガンドを生成する。
６ｍｇの純粋なＬ４０をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率２２％）。
Ｌ４０は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１０．２０３分（直線のグラジエント，５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ１９６Ｎ２７Ｏ２７［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２５９３．１６；実測値：２５９３．２４；Ｃ１３２Ｈ１９５Ｎ２７Ｏ２７Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：２６１６．１６； 実測値２６１６．７８。
【００７７】
《実施例５：式（ＩＩＩ−ｆ）（Ｌ４３）の化合物の調製》
化合物Ｌ４３は下記の式に対応する。
【化５５】
【化５６】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ４４’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９（実施例３参照）に添加し、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、２０ｍｇのＬ４３リガンドを生成する。
８ｍｇの純粋なＬ４３をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率３０％）。
Ｌ４３は下記を特徴とする。
ＨＬＰＣ：ｔＲ１３．９３５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ１９３Ｎ２４Ｏ２７［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２５４８．１１；実測値：２５４７．８８；Ｃ１３２Ｈ１９２Ｎ２４Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：２５７１．１１；実測値：２５７０．６２；Ｃ１３２Ｈ１９３２Ｎ２４Ｏ２７Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：２５８７．１１；実測値：２５８６．１３。
【００７８】
《実施例６：化合物Ｌ４１の調製》
化合物Ｌ４１は下記の式に対応する。
【化５７】
下記の式により表すこともできる。
【化５８】
化合物Ａ（Ｌ４１）の合成は下記に記載する。中間体１及び２は固相において行い、下記の段階を溶液中で行った。
【化５９】
【００７９】
１）ペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（１）の合成
このペプチドの合成を、下記の段階的な固相Ｆｍｏｃ方法により行った。ペプチドは２−クロロトリチル樹脂（Ｓｅｎｎ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、１．３ｍｍｏｌｅｓ／ｇ）上に集めた。合成のスケールは１．３ｍｍｏｌｅｓであった。
第１アミノ酸のカップリングを、２当量のＦｍｏｃ−Ａｈｘ−ＯＨ及び６当量のＤＩＥＡを含む無水ジクロロメタン中で３時間行う。樹脂の洗浄及び乾燥後に行った置換試験は、０．６ｍｍｏｌｅｓ／ｇの置換レベルを示す。
下記のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリングを、ＢＯＰ／ＨＯＢｔ及びＤＩＥＡの存在下において５当量のアミノ酸を含むＤＭＦ中で行う。二重のカップリングを体系的に行う。
Ｆｍｏｃ基の脱保護を、ピペリジンの２５％ＤＭＦ溶液を使用し、２０分間行う。
樹脂からペプチドの開裂を、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール／ジクロロメタン溶液（６０／４０）を使用し、室温で２時間行う。
樹脂を濾過し、濾過されたものを濃縮し、真空乾燥する。保護されたペプチドを、精製せずに直接使用する。合成の収率は定量的である。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える３０〜１００％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル、０．０８％ＴＦＡ）、流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用し、ＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、保護されたペプチドを分析する（図１）。純度レベルは９２％である。
【００８０】
２）環化ヘキサペプチドの合成（２）：
ヘキサペプチドＨ−（Ｄ）Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｉｏｔ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの合成は、下記の段階的な固相Ｆｍｏｃ方法、及び下記のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｉｏｔ）−ＯＨ（ビオチン−標識）を使用するペンタペプチドの合成において記載された同じ方法により行う。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える２０〜８０％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル、０．０８％ＴＦＡ）、流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用し、ＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、非環式ヘキサペプチドを分析する（図２）。
ヘキサペプチド（６６０ｍｇ；０．５５ｍｍｏｌ）を、室温で、ＥＤＣを含むＤＭＦ（７０ｍＬ）、ＨＣｌ（１２７ｍｇ；０．６６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８９ｍｇ；０．６６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１４０μｌ、０．８２ｍｍｏｌ）を溶解する。４８時間後、反応媒体を、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）を含む溶液から沈殿する。その後、環式ヘキサペプチドを１Ｎ ＫＨＳＯ４溶液で洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液を真空乾燥する（５４０ｍｇ；収率：８３％）。
Ｂｏｃ基の脱保護を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で１時間行う。その後、ペプチドをジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加により沈殿し、濾過し、真空乾燥する（５１０ｍｇ；収率：９５％）。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える５〜６５％Ｂのグラジエント（Ａ：水；０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル；０．０８％ＴＦＡ），流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用するＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、環式ヘキサペプチド及び脱保護されたヘキサペプチドを分析する（図３）。
【００８１】
３）中間体（１）及び（２）のカップリング
環式ヘキサペプチド及び脱保護されたヘキサペプチド（２）（６１ｍｇ；５０μｍｏｌ）を、室温で、ペンタペプチド（１）（１５７ｍｇ；１６５μｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２ｍＬ）、ＢＯＰ（７３ｍｇ；１６５μｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（８５μＬ）中に溶解する。４８時間後、反応媒体を、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）を含む溶液から沈殿する。その後、沈殿物を１Ｎ ＫＨＳＯ４溶液で洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液を真空乾燥する（１８０ｍｇ；収率：１００％）。
化合物（３）のＢｏｃ及びｔＢｕ基の脱保護を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で行う。その後、ペプチドをジエチルエーテル（５０ｍＬ）により沈殿し、濾過し、真空する（精製前１６０ｍｇ；収率：１００％）。
その後、水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、３０分間を超える５〜６５％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル−０．０８％ＴＦＡ）及び流速６ｍＬ／分を使用し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＨＰＬＣ、カラムＣ１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）の逆相ＨＰＬＣにより精製する。９７％より大きい純度を有するフラクションを混ぜ合わせ、凍結乾燥する（図４：精製後の化合物ＡのＨＰＬＣプロファイル；純度レベル＝９７．２％）。
ＨＰＬＣ精製収率は１７％である。
【００８２】
《実施例７式（ＩＩＩ−ｉ）（Ｌ６２）の化合物の調製》
化合物Ｌ６２は下記の式に対応する。
【化６０】
【化６１】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９に添加し（実施例３参照）、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２時間混合し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物を連続してＨ２Ｏ、１Ｎ ＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで洗浄する。
その後、固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。攪拌３０分後、溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、２０ｍｇのＬ６２リガンドを生成する。
２ｍｇの純粋なＬ６２をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率７％）。
Ｌ６２リガンドは下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１１．６分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ２０１Ｎ２７Ｏ２４Ｈ＋の計算値：２５５０．２１；実測値２５５１；Ｃ１３２Ｈ２０１Ｎ２７Ｏ２４Ｋ＋の計算値：２５９０．２１；実測値２５９０
【００８３】
《実施例８：式（ＩＩＩ―ｊ）（Ｌ６８）の化合物の製造》
化合物Ｌ６８は下記の式に対応する。
【化６２】
【化６３】
３９ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ（Ａｃｅｔｏｎｉｄ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９’）、１８ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰを、ＤＭＦ中の１５ｍｇ（１当量）のビオチン環（２）（実施例３を参照）に添加し、３０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１Ｎ ＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分攪拌後、溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、５０ｍｇのＬ６８リガンドを生成する。
９ｍｇの純粋なＬ６８をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後に得る（精製後の収率２１％）。
Ｌ６８リガンドは下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１１．１分（直線のグラジエント、５〜６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＨ＋の計算値：２８０４．３５；実測値２８０２．９６；Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＮａ＋の計算値：２８２７．３５；実測値２８２４．９１；Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＫ＋の計算値：２８４１．３５；実測値２８４１．９８
【００８４】
生物学的試験
これらの試験を３つの段階において実施する。最も有用なリガンドは簡易のリンパ腫細胞アポトーシス活性化試験を用いて最初に選択され、次に、ＣＤ４０との相互作用はＢＩＡコア技術で詳細に分析され、そして最後にビオチン化リガンドと膜性のＣＤ４０との相互作用は蛍光顕微鏡検査法及びフローサイトメトリーにより研究される。
リガンドのアゴニスト又はアンタゴニスト効果を２つの標準の生物学的試験を用いて試験した。最初の試験は、膜性のＣＤ４０分子の架橋中に、増殖を中止し、アポトーシスに入る、あるＢリンパ腫の特性に基づくものである（Ｔｏｎｇら、１９９９）。実際、抗ＣＤ４０抗体により、又は可溶性ＣＤ４０Ｌにより、ＣＤ９５分子と独立して架橋中において、あるＢリンパ腫はアポトーシスに入る。このアポトーシスの誘導は、増殖を減少する効果を有する。ＣＤ４０のアゴニストリガンドはアポトーシスの増加を誘導し、その結果、増殖の減少を誘導するであろう。この試験において、ＢＬ４１細胞はＣＤ４０リガンドとインキュベートされ、２４時間後、これら細胞の増殖の阻害はトリチウム化チミジンの取り込みの検討により測定されるか、又はアポトーシス細胞の割合はフローサイトメトリーの検討により測定される。第２試験において、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用による活性化（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９９６）後の形質転換Ｂ細胞（バーキットリンパ腫）による膜性のＣＤ９５分子の発現が研究されている。この試験において、ＣＤ４０Ｌパートナーは、トランスフェクションされた線維芽細胞（３Ｔ６−ＣＤ４０Ｌ）（Ｂｕｅｌｅｎｓら、１９９７）において発現される。ＢＬ４１バーキットリンパ腫細胞は、ＣＤ４０Ｌをトランスフェクションされ又はトランスフェクションされない線維芽細胞とインキュベートされる。４８時間後、ＣＤ９５の発現はフローサイトメトリーにより評価される。ＣＤ９５の発現はＣＤ４０Ｌの存在下において誘導され、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用を市販の抗ＣＤ４０Ｌ抗体は阻害する。
リガンドのアゴニストの効果を、リガンドとＢ細胞のインキュベーション後に、フローサイトメトリーを使用したＣＤ９５の発現又は増殖の阻害及び／又はアポトーシスによる死の増加のいずれかを測定することにより評価した。アンタゴニストの効果は、種々のリガンドの存在下におけるＣＤ４０Ｌにより誘導されるＣＤ９５の発現の減少を測定することにより評価される。
【００８５】
Ａ．リガンドのアゴニスト生物学的効果の研究
〔原理〕
リガンドのアンタゴニスト効果は、膜性のＣＤ４０分子の架橋中に、アポトーシスに入る、あるＢリンパ腫の特性に基づく簡易な生物学的試験生物学的試験を用いて試験される（Ｔｏｎｇら、１９９９）。実際、抗ＣＤ４０抗体により、又は可溶性のＣＤ４０ＬによるＣＤ４０分子の架橋中において、これらのＢリンパ腫はアポトーシスに入る。ＣＤ４０のアゴニストリガンドは、フローサイトメトリーの正確な分析により測定されるバーキットリンパ腫細胞のアポトーシスにおける増加を同様に誘導するであろう。
【００８６】
〔操作方法〕
ＢＬ４１バーキット又はＲａｊｉ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−８６）リンパ腫細胞（５．１０５／ｍＬ）、２つの類似の細胞株を、所望の濃度での種々のリガンドの存在下において培養する。１６時間後、細胞を４０ｎＭの３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン（ＤｉＯＣ６）で標識し（Ｐｅｔｉｔら，１９９５）、フローサイトメトリーを使用しアポトーシス細胞の割合を評価する。対照として、ＣＤ４０を発現せず、可溶性又は膜性のＪＣＤ４０リガンドの存在下において反応しない、Ｊｕｒｋａｔ Ｔリンパ腫細胞においてリガンドの効果を試験する。
【００８７】
〔結果〕
２５μＭにおいて８０％を超える特異的なアポトーシスを検出するので、Ｌ３６（Ｖ−ｂ）リガンドはＢＬ４１細胞のアポトーシスを強く誘導する。ビオチン化リガンドＬ４１は、非ビオチン化同族体Ｌ４（非−ビオチン化Ｌ４１）に相当する生物学的活性を有する（図５Ｂ）。１２．５μＭにおいて、Ｌ４０は３７．５％の特異的なアポトーシス及びＬ４は２４％を誘導するので、Ｌ４０リガンドはＬ４よりも効果的である（図５Ｃ）。最後に、Ｌ４３リガンドはその同族体Ｌ４よりも効果的ではない（図５Ｄ）。これらのリガンドはＪｕｒｋａｔ株の細胞のアポトーシスを誘導しないことを示すことができる。
さらに、図８Ａ及び図８Ｂによれば、最初の２つの残基（Ｌ６２）間の還元結合の導入は、効果的で、選択的なリガンドを得ることを可能にすることを示している。
【００８８】
Ｂ．リガンドとＣＤ４０との相互作用の研究
〔原理〕
ＢＩＡコア３０００は、２つの分子間の相互作用の研究を可能にする装置である。表面プラズモン共鳴に基づき、リアルタイムでの測定の実施と、それに続く「リガンド」（測定を担持しているマイクロチップ上に固定化されている）と「分析物」（注入された溶液において発見される）の相互作用の反応速度（結合及び解離）の理解を可能にする。分析物の種々の濃度における反応速度は、リガンドと分析物との相互作用のアフィニティー定数を計算することを可能にする。マイクロチップは種々の測定で４つのセルを含んでおり、非該当のタンパク質（調査される分析物に親和性を有しないが、リガンドに対して接近するタンパク質）が固定化される参照セルとリガンドが固定化されるセルとを直接に比較することを可能にする。
試験は２つの段階で実施される。リガンドとマイクロチップ上に固定化されたＣＤ４０との直接相互作用の測定及びリガンドＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の阻害の測定。
【００８９】
《１．ＣＤ４０におけるリガンドの相互作用》
〔操作方法〕
マウス免疫グロブリンの定常部分に対するウサギ抗体をマイクロチップ上に固定化した。１００ｎＭのアイソタイプＩｇＧ２ａのマウスモノクローナル抗体を、１分間で流速５μＬ／分で参照セルに固定化する。リガンドセルにおいて、マウスＩｇＧ２ａの重鎖の定常部分と会合する組換えＣＤ４０（ヒトＣＤ４０ｍｕＩｇ融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社、Ｂａｙｐｏｒｔ、ＭＮ）を同様の条件下で固定化する。
その後、ＣＤ４０リガンドを、２つのセル（参照及びリガンド）に種々の濃度で、分析物として、注入する。流速を４分間にわたり３０μＬ／分とし、会合を調べた。次に、分析物不存在下において、条件を同様とし、解離を調べた。
セルを再生するために（すなわち、非共有の方法で吸着されたすべてのタンパク質を除去する）、５０ｍＭＨＣｌ溶液を１分間にわたり５μＬ／分で注入する。その後、そのセルを新しい分析のために準備する。
【００９０】
〔結果〕
Ｌ４０及びＬ４１リガンドのＣＤ４０への直接会合の反応速度を測定（図６）し、Ｌ４０においては３．１ｘ１０−７Ｍ及びＬ４１においては２．８ｘ１０−８Ｍの解離定数を計算することを可能にした。情報として、同様の条件下でＬ４の計算された解離定数は９．４ｘ１０−８Ｍである。
【００９１】
《２．ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の阻害》
〔操作方法〕
マウス免疫グロブリンの定常部分に対するウサギ抗体をマイクロチップ上に固定化した。４０ｎＭのアイソタイプＩｇＧ２ａ（ＬＧ１１．２）のマウスモノクローナル抗体を、２分間で流速５μＬ／分で参照セルに固定化する。リガンドセルにおいて、マウスＩｇＧ２ａの重鎖の定常部分と会合する組換えＣＤ４０（ヒトＣＤ４０ｍｕＩｇ融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社、Ｂａｙｐｏｒｔ、ＭＮ）を同様の条件下で固定化する。
その後、３５ｎＭのＣＤ４０Ｌ（ヒトＣＤ１５４ｍｕＣＤ８融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社）を、種々の濃度でのリガンドの存在下において、２つのセル（参照及びリガンド）において、分析物として注入した。会合を調べるために、分析物の存在下で、流速を５分間にわたり１０μＬ／分とし、次に、分析物不存在下において、条件を同様とし、解離を調べた。
セルを再生すために、（すなわち、非共有の方法で吸着されたすべてのタンパク質を除去する）、１０ｍＭＨＣｌ溶液を１分間にわたり５μＬ／分で注入する。その後、そのセルを新しい分析のために準備した。
【００９２】
〔結果〕
ＣＤ４０のＣＤ４０Ｌへの会合を、種々の濃度のＬ４０又はＬ４３リガンドの存在下において調べた。１μＭにおいて、Ｌ４０リガンドはＣＤ４０へのＣＤ４０Ｌの結合を１００％阻害しており、同様の条件下においてＬ４３リガンドはそれを３０％阻害する。
【００９３】
Ｃ．ビオチン化リガンドと膜性のＣＤ４０との間の相互作用の研究
〔原理〕
膜性のＣＤ４０とリガンドとの相互作用の直接分析は、リガンドのビオチン化で可能である。ＣＤ４０へのこれらリガンドの結合は、ビオチンに特異的で高アフィニティーであるリガンドである、蛍光色素で標識されたストレプトアビジンを使用して発色される。目的は、モノクローナル抗ＣＤ４０抗体と同様の方法での、特異的なリガンドを使用するCＤ４０の検出である。これらの抗ＣＤ４０抗体と同じエピトープを認識しない特異的なリガンドは、抗ＣＤ４０抗体との共局在、すなわちＣＤ４０への特異性を確認するために、蛍光顕微鏡を使用する二重標識実験において、それらを使用することが可能である。
【００９４】
〔操作方法〕
フローサイトメトリーにおいて、１０６細胞を１００μＬのリン酸緩衝液中の２．５μＭのビオチン化リガンドと１５分間、４℃でインキュベートする。その後、細胞を蛍光染色フルオレセインイソチオシアネートで標識されたストレプトアビジンの存在下におき、１０分間にわたり４℃で１００μＬのリン酸緩衝液で５００倍に希釈する。その後、その標識細胞を、フローサイトメトリーを使用し分析する。
蛍光顕微鏡分析又は共焦点顕微鏡分析において、１０６細胞を４℃で一晩リン酸緩衝液中の１％パラホルムアルデヒドで固定する。次の日、２．５μＭビオチン化リガンド及び１００倍希釈されたＣＤ４０に対するモノクローナルマウス抗体の存在下の１％ウシ血清アルブミンを含む１００μＬのリン酸緩衝液中で、３０分間、４℃で置く。その後、５００倍に希釈した蛍光色素Ａｌｅｘａ５４６標識ストレプトアビジン及び５００倍に希釈した蛍光色素Ａｌｅｘａ４８８結合マウス抗体のＦｃ部分に対するヤギ抗体を含む１００μＬのリン酸緩衝液／ウシ血清アルブミン中で、１５分間、４℃インキュベートする。そのように標識された細胞を、その後、スライドとラメラとの間に配列する前に固定媒体に再懸濁し、顕微鏡下でそれらを観察した。
【００９５】
〔結果〕
ビオチン化Ｌ４１リガンドを、フローサイトメトリーを使用する標識に使用した。ＢＬ４１細胞の膜性のＣＤ４０との相互作用は、サイトメーターのＦＬ１チャネル中で検出される蛍光染色フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識されたストレプトアビジンを使用し、検出される（図７Ａ）。顕微鏡検査を使用する二重標識の結果は、標識はＣＤ４０に対する抗体のそれに対応するので、Ｌ４１リガンドはＣＤ４０に特異的であることを示す（図７Ｂ）。
【００９６】
《参考文献》
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【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の目的は、新規な多量体ＣＤ４０リガンド、それらの製造方法、並びに医薬製造のためのそれらの使用である。
本発明の目的は、免疫応答の活性化又は抑制可能な分子でもある。
【０００２】
免疫応答におけるＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌペアの重要性は、多くのグループを、これら２つの分子に対する抗体の、免疫システムの抑制又は活性化のための治療目的の使用に導いた。抗ＣＤ４０Ｌ抗体の投与は、マウスの実験的アレルギー性脳脊髄炎等の自己免疫疾病の治療（ヒト多発性硬化症のモデル）（Ｈｏｗａｒｄ等、１９９９）又はサルの腎臓同種移植の拒絶反応の治療（Ｋｉｒｋ等、１９９９）において好意的な結論を生みだしている。これら２つの場合において、抗体は免疫システムの有害な活性化を抑制する。反対にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用は、一方では、マウスでのペプチドベースの抗腫瘍ワクチンの免疫を強く改善することを可能にし（Ｄｉｅｈｌ等、１９９９）、他方では、マウス腫瘍に対する闘いにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞の効果を増加する（Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ等、１９９９；Ｌｏｄｅ等、２０００）ことを可能にした。マウスモデルにおける腫瘍の退行は、ＣＤ４０Ｌをコードするアデノウイルスによりトランスフォームした樹状細胞（ＤＣｓ）の注入後に見られる。最後に、ＣＤ４０ＬとＣＤ４０分子との相互作用による樹状細胞の活性化は、寄生虫であるＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ Ｃｒｕｚｉ（Ｃｈａｕｓｓａｂｅｌ等、１９９９）による感染からマウスを保護することを可能にする。これらすべての研究において、ＣＤ４０と六価の複合体を形成するために、三量体の形で結合しているＣＤ４０Ｌ分子の特定の結合価が、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌペアの作用を干渉することができる機能的抗体を産生することを困難にしている。ＣＤ４０Ｌをコードしているアデノウイルスコードの開発は、この欠点に部分的に対応している。しかし、それらの使用は、ヒトにおいて問題がないわけではない。最後に、システムの特定の結合価は、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を干渉することができる合成分子の発見を困難にさせる。
【０００３】
本発明の目的は、タンパク質間相互作用に干渉するためにデザインされた多量体リガンドを提供することである。
本発明の目的は、多価のタンパク質―タンパク質相互作用を干渉することのできる分子を製造することでもある。
本発明の目的は、新規な三量体ＣＤ４０リガンドを提供することによりＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌシステムに作用する合成分子を提供することである。
本発明の目的は、アジュバント又は免疫抑制剤として作用することのできる分子を提供することでもある。
【０００４】
本発明は、下記の式（Ｉ）に対応する化合物に関する。
【化１】
（式中、
− Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化２】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化３】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
シュードペプチド型結合は、特にＳｐａｔｏｌａの論文（１９８３）に記載され、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化５】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが、天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる）
【０００５】
従って、例えば、Ｈ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−基を下記の式の１つにより示すことができる。
【化６】
【０００６】
本発明の化合物は、Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ鎖がＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ鎖と異なる、式（Ｉ）に対応する。
Ｙ基を３つのＣＯＯＨ官能基により機能化する場合には、Ｙを−ＣＯ−基によりＲｃに結合し、Ｙを３つのアミン官能基により機能化する場合には、Ｙを−ＮＨ−基によりＲｃに結合する。
本発明の化合物もまた、下記の式により表すことができる。
【化７】
Ｙ、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、Ｘｄ、Ｘｅ、Ｘｆ及びｉを、前記で定義している。
Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−基は、ＹにＨ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−を結合するための腕としての役割を果たす。
【０００７】
本発明の化合物は、Ｃ３シンメトリーをもち、新規な三量体ＣＤ４０リガンドに対応する化合物である。
本発明の枠内において、用語「アミノ酸」は、具体的には天然アミノ酸又は非天然アミノ酸、具体的にはアルファ、ベータ、ガンマ、デルタアミノ酸、又はω−アミノ酸を意味する。
用語「大員環」は、窒素、炭素又は酸素原子、合計数が９以上の原子を含む環を意味する。
用語「α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸」は、下記の式の１つに対応する化合物、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＯＯＨ（α位）又はＨ２Ｎ−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＨ２ＣＯＯＨ（β位）（式中、Ｒｂはリジン、アルギニン又はオルニチン残基に対応する）を意味する。
【０００８】
さらに正確には、Ｘａは下記の基から選択される。
【化８】
【化９】
【０００９】
Ｘｂは下記の基から選択される。
【化１０】
Ｘｃ及びＸｄは下記の基から選択される。
【化１１】
【００１０】
Ｘｅ及びＸｆは下記の基から選択される。
【化１２】
【化１３】
【００１１】
本発明による好ましい化合物は、前記式（Ｉ）で表される化合物であり、Ｘａがリジン残基ではない、及び／又はＸｂがグリシン残基ではない。
リジン残基の置換は、一方、ＣＤ４０へのリガンドの結合を最適化、すなわちＣＤ４０への前記リガンドの結合の親和性の増加を可能にし、他方、そのリガンドの親油性の改質を可能にする。
グリシン残基の置換は、Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ鎖の生物活性構造を安定化することを可能にする。
【００１２】
好ましい実施態様によると、本発明の化合物は式（Ｉ）で表される化合物であり、式中、Ｘａはリジン残基ではない。
従って、本発明の好ましい化合物は、Ｘａが式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎは１から１０まで変化する）のアミノ酸残基を表し、好ましくはＸａがアミノヘキサン酸残基を表すことを特徴とする。
このような化合物は、天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のリジン残基を式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝１〜１０）のアミノ酸残基と置換する化合物である。
【００１３】
本発明の好ましい化合物は、下記の式１つに対応する化合物である。
【化１４】
（式中、ｎは前記で定義している）
ｎ＝５に対応する好ましい化合物を下記の式で表している。
【化１５】
前記リガンドの効果的な機能のいくらかを保護しながら、前記化合物における前記リジン残基のアミノヘキサン酸による置換は本発明のリガンドの親油性の調節を可能にし、それらはＣＤ４０との相互作用に起因する（リンパ腫アポトーシス試験、実施例参照）。
【００１４】
好ましくは、本発明の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物である（式中、Ｘａはリジン残基ではなく、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄ残基はＣＤ４０Ｌの天然の配列の残基と同一である）。
本発明はまた、Ｘｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物に関する。
従って、本発明による好ましい化合物は、ＸｂがＤ−プロリン残基で表されることを特徴とする。このような化合物は下記の式で表される。
【化１６】
【００１５】
その化合物における天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のグリシン残基のＤ−プロリンによる置換は、天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６ループにより形成されたタイプＩＩフォールディングを安定化することにより、前記リガンドを安定化することを可能にする。従って、その安定化は、特に天然のＣＤ４０リガンドに対するＢリンパ種のより特異的なアポトーシスを誘発するための能力によって、より選択的なリガンドを得ることを可能にし、リンパ腫のアポトーシスの枠内において特に有用である。
好ましくは、本発明の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物（式中、Ｘｂはグリシン残基ではなく、Ｘａ、Ｘｃ及びＸｄ残基はＣＤ４０Ｌの天然の配列の残基と同一である）である。
本発明による好ましい化合物は、ＸｂがＬ−プロリン残基で表される化合物である。その化合物における天然のＣＤ４０の１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片のグリシン残基のＬ−プロリン残基による置換は、ＣＤ４０への天然のリガンドと同様の結合性を有するが、関連する生物学的特性を有しないリガンドを得ることを可能にする。従って、そのリガンドはＢリンパ種のアポトーシスの効果を有しない。
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物にも関し、
− Ｘａはリジン残基ではなく、及び
− Ｘｂはグリシン残基ではない。
好ましくは、その化合物は、
− Ｘａが好ましくは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（式中、ｎは１から１０まで変化する）のアミノ酸残基を表し、具体的にはアミノヘキサン酸残基を表し、
− Ｘｂが好ましくはＤ−プロリン残基を表すことを特徴としている。
その化合物は下記の一般式の１つに対応する。
【化１７】
【００１７】
本発明は、式（Ｉ）に対応するビオチンで標識された化合物にも関する。
これらの化合物は、ポリマーから本発明のリガンドを多量体にすることを可能にする機能化されたリガンドを調製するために使用される。このために、具体的には種々のビオチンに結合することのできるストレプトアビジンを使用することを可能にする。
従って、本発明は多量体形状、すなわち本発明の種々のリガンドが結合するポリマー分子に対応する本発明のリガンド、並びに標識としてこれらの多量体リガンドの使用にも関する。
これらの化合物もまた、具体的には樹状細胞による腫瘍の免疫療法の枠内において、これらの化合物によるグラフトされたカラムの使用によりＣＤ４０レセプターを精製し、又はこれらの標識された化合物を使用することにより細胞の表面上のＣＤ４０レセプターを容易に検出することを可能にする。
【００１８】
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、Yが下記の式（ＩＩ）に対応することを特徴とする。
【化１８】
（式中、
− ｊは０又は１；
− Ａは下記のいずれかから選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体を表し、
【化１９】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
− Ｂ１は下記から独立に選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体であり、
【化２０】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の側鎖を表し；
− Ｂ２はＢ１と同一であることができるか、又は下記の基から独立に選択され、
【化２１】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の側鎖を表し；
・Ｄは下記の基の１つを表し、
（＋）−ビオチニル−、（＋）−ビオチニル−Ｘｇ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−
ｑは２〜６の整数を表し；
Ｘｇは下記の基の１つの残基に対応し、
−ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
−ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
トラネキサム酸；
Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
４−カルボキシメチル−ピペラジン；
４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
４−アミノフェニル酢酸；
４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
４−アミノ安息香酸；
４−（２−アミノエトキシ）安息香酸）
【００１９】
式（ＩＩ）において、Ａは式（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）又は（１２）の基である；Ｂ１は式（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）又は（２０）の基であり、Ｂ２は式（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、（２０）、（２１）、（２２）、（２３）又は（２４）の基である。
Ｘｇは、Ｘｅ及びＸｆとして同様に定義している。
用語「Ｐｙｓ」はピペリジンサルフェニル基を表し、用語「Ｎｐｙｓ」はニトロピリジンサルフェニル基を表している。
ビオチンを下記の式により表す。
【化２２】
従って、ビオチニル基を下記の式により表す。
【化２３】
【００２０】
用語「プロテイノジェニック（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）アミノ酸の鎖」は、遺伝情報の２０アミノ酸の１つに対応する又は対応しない、タンパク質中に存在するアミノ酸の側鎖を表している。
式（ＩＩ）で表される化合物は下記の一般式の１つに対応する。
【化２４】
【００２１】
本発明はまた、下記の式の１つに対応する、化合物に関する。
【化２５】
（式中、Ｒａ、Ｒｃ及びｐを前記で定義している）
【００２２】
式（ＩＩＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ｃ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（５）で表される基であり、Ｂ１は式（１６）で表される基（ｎ＝０）である。
式（ＩＶ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ｃ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（６）の基であり、Ｂ１は式（１５）の基（ｎ＝０）である。
式（Ｖ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（５）の基（ｎ＝１）である。
式（ＶＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（１１）の基（Ｅ＝ＮＨ）である。
式（ＶＩＩ）で表される化合物は、式（ＩＩ−ａ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物を表し、Ａは式（１０）の基（Ｅ＝ＮＨ）である。
【００２３】
これらの異なる化合物は、それらの構造がレセプター（Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄ）と接触する残基の位置を確認し、位置を決めることを可能にする明確な立体構造をもち、選択的な相互作用の形状及び距離をもつ、剛性の平らな環式構造の範囲にとって特に有用である。
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式（ＩＩＩ−ａ）で表される。
【化２６】
式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ）で表される化合物（式中、Ｒａはメチル基及びｐ＝３で表される）である。
【００２４】
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式（Ｖ−ａ）で表される。
【化２７】
式（Ｖ−ａ）で表される化合物は、式（Ｖ）の化合物（ｐ＝３）で表される。
【００２５】
有利な実施態様によると、本発明の化合物は下記の式の１つで表される。
【化２８】
（Ｒｃは前記で定義されている）
【００２６】
式（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）及び（ＩＩＩ−ｄ）で表される化合物は、それぞれビオチン、−ＣＯ−（ＣＨ２）２−ＳＨ及び
【化２９】
により標識された式（ＩＩＩ−ａ）に対応する化合物である。更に正確には、これらの化合物は式（ＩＩ−ｂ）に対応するＹを持つ式（Ｉ）で表される化合物であり、Ａは式（５）の基であり、Ｂ１は式（１６）の基（ｎ＝０）であり、Ｂ２は式（２２）基（ｐ＝３）である。
式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物において、Ｄはビオチニル基である。
式（ＩＩＩ−ｃ）で表される化合物において、Ｄは−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＳＨ基（ｑ＝２）である。
式（ＩＩＩ−ｄ）で表される化合物において、Ｄは−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｓ−ｐｙｓ基（ｑ＝２）である。
本発明の好ましい化合物は、式（Ｉ）で表される化合物であり、
Ｒｃは、Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又はＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−（式中、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合を表す）又は、Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘａはリジン残基であり、ＸｂはＤ−プロリン残基であり、Ｘｃはチロシン残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）で表されるアミノ酸残基である。
【００２７】
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘａはリジン残基であり、Ｘｂはグリシン残基であり、ＸｃはＤＯＰＡ（３，４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン）残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）のアミノ酸残基である。
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基はＲｃ基であり、ｉ＝０、Ｘ’ａはリジン残基であり、Ｘ’ｂはＤ−プロリン残基であり、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合（ペプチド結合のＣＯＮＨ基はＣＨ２−Ｎ基により置換される）であり、Ｘｃはチロシン残基であり、Ｘｄはチロシン残基であり、Ｘｅは式ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ｎ＝５）のアミノ酸残基である。
【００２８】
その化合物は、下記の式の１つで表す。
【化３０】
【００２９】
その化合物もまた、下記の式の１つで表すことができる。
【化３１】
【００３０】
本発明の好ましい化合物は、下記の式の１つで表す。
【化３２】
【化３３】
【化３４】
【化３５】
【００３１】
式（ＩＩＩ−ｅ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（Ｖ−ｂ）で表される化合物は、式（Ｖ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（ＩＩＩ−ｆ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
式（ＩＩＩ−ｉ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される化合物であり、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である。
本発明は、また下記の式の１つに対応する化合物に関する。
【化３６】
【化３７】
【００３２】
化合物（ＩＩＩ−ｇ）は、式（ＩＩＩ−ｅ）で表されるビオチンで標識された化合物である。この化合物は、また式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物に対応し、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−基である。
化合物（ＩＩＩ−ｈ）は、式（ＩＩＩ−ｆ）で表されるビオチンで標識された化合物である。この化合物は、また式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物であり、ＲｃはＡｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−基である。
化合物（ＩＩＩ−ｊ）は、ビオチンで標識された化合物である。この化合物もまた、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される化合物に対応し、ＲｃはＨ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−基である。
本発明は、また薬学的に許容可能なベクターと組み合わせて、活性成分として、式（Ｉ）に対応する、前記化合物を含むことを特徴とする医薬組成物に関する。
本発明は、また薬学的に許容可能なアジュバントと組み合わせて、活性成分として、式（Ｉ）に対応する、前記化合物を含むことを特徴とするワクチン組成物に関する。
【００３３】
本発明は、また免疫応答の抑制又は活性化を含む病状の治療を意図する薬の調製のための、式(Ｉ)に対応する、前記化合物の使用に関する。
免疫応答は、炎症性疾患（炎症性リウマチ）、自己免疫性疾患、通常の超過敏反応及び具体的にはアレルギー、組織不適合、ホストに対するグラフト（ｇｒａｆｔ）の反応の過程において、抑制されるに違いない。
免疫応答は、通常のワクチン接種、癌免疫療法、免疫抑制を誘発する細菌性疾患又はウィルス性疾患（はしか、ＡＩＤＳ、ヘルペス・ウイルス、サイトメガロ・ウイルス等）、細菌性疾患、ウィルス性疾患又は一次免疫不全又は二次免疫不全を示す個々人の従来にない病原体（プリオン）を含む疾患の治療において活性化されるに違いない。
本発明は、免疫応答、例えば組織不適合、アレルギー疾患又は自己免疫疾患の抑制を含む病状の治療を意図する薬の調製のための、前記使用にも関する。
【００３４】
免疫応答の抑制を含む疾病は、自己免疫疾病、糖尿病、多発性硬化症、播種性淋菌感染又は関節リウマチ、同種移植片、異種移植片の枠内での組織不適合、ホストに対するグラフトの反応、並びにアレルギー等の超過敏反応、具体的にはアレルギー性鼻炎及びアトピー性皮膚炎、又は肉芽腫を含む。
本発明の化合物を、免疫応答の抑制の枠内において使用し、静注経路、粘膜経路（経口、気道、鼻、膣）、皮下経路、皮内経路又は表面経路により投与することが可能である。
本発明は、また、医薬組成物に関し、免疫応答抑制を含む病状の治療のために、本発明の化合物を含み、その化合物を個々人へ１日当たり約１００ｎｇ〜約５ｍｇの割合で投与することができる量で医薬組成物に存在していることを特徴とする。
本発明は、免疫応答を高めることを含む病状、例えば癌、又は寄生性感染、細菌性感染、ウィルス性感染、又はプリオン等の非従来的な感染体に関連する感染の治療を意図する医薬の製造のための、前記使用に関する。
【００３５】
免疫応答の活性化を含む場合において、通常のワクチン接種、具体的にはインフルエンザに対するワクチン又は小児病に対するワクチン、癌免疫療法、具体的にはメラノーマ又は転移を伴う癌の枠内で、免疫抑制を誘発する細菌性疾患又はウィルス性疾患、具体的には、はしか、ＡＩＤＳ、ヘルペス・ウイルス又はサイトメガロ・ウイルス、又は一次免疫不全又は二次免疫不全を示す個々人を対象とするワクチンを含む。
本発明の化合物は、免疫応答の活性化の枠内で使用され、静注経路により、粘膜経路（経口、気道、鼻、膣）により、皮下経路、皮内経路又は表面経路により投与することが可能である。
本発明は、また医薬組成物に関し、免疫応答の活性化を含む病状の治療のために、本発明の化合物を含み、その化合物を個々人へ１日当たり約１００ｎｇ〜約５ｍｇの割合で投与することができる量で医薬組成物に存在していることを特徴とする。
【００３６】
本発明は、また
− Ｙのリニアー前駆体の形成工程であって、前駆体がＮ−保護アミノ酸残基（それらの３つは、アミン型のＲａ基を有し、Ｒａ基は請求項７で定義されている）と成長ペプチド鎖のアミン官能基との間の結合、及び固体支持体に付着している最初のアミノ酸残基脱保護の連続サイクルによって合成される、成長ペプチド鎖を形成するアミノ酸の連鎖形成により構成される形成工程、
− 前記Ｙの保護リニアーの前駆体の環化工程、
− 前記保護アミン官能基を遊離するための、前記保護用の基の開裂工程、
− 前記遊離されたアミン官能基の、請求項１で定義されたＲｃ基に対応するアミノ酸配列の連続のアッセンブリーにより、既に形成されているか、又はインサイチューで形成されるペプチドへの連結工程、
− 前記Ｒｃ基の官能化された側鎖に存在する全ての保護基の削除の後に、本発明の化合物を得るための、前記固体支持体からの分子の開裂工程、
を含むことを特徴とする、固体支持体上における、式（１）で表される化合物の製造方法に関する。
【００３７】
本発明で表される化合物は、下記の方法による固体支持体上の合成により得られる。Ｙ基はリニアーの前駆体の合成及び環化により固体支持体上に最初に構成される。従って、第１アミノ酸残基（それらの酸の作用は適切に保護されている（例えば、アリルエステル））は、アルデヒドにより機能化された樹脂（市販の樹脂）を使用し、還元アミン化反応による支持体に結合する。その後、リニアーの前駆体ＹはＮ−保護アミノ酸（例えば、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、Ｘａａはいくらかのアミノ酸又は成長ペプチド鎖を示す）を持つ連続カップリング環化（標準のペプチド合成方法）及び脱保護（Ｆｍｏｃ基の開環のためのＤＭＦ中の２０％ピペリジン）により組み立てられる。樹脂の洗浄方法及び濾過方法並びにＦｍｏｃ基の脱保護方法は、固相中のペプチド合成に一般に使用されている。アミノ型鎖を有する３つのアミノ酸は機能化され、アミン官能基は他（例えば、ＴＥＯＣ又はメチルトリチル）に直交する保護基により保護される。アッセンブリーの終わりに、最後のＮ−保護基は開裂され（Ｆｍｏｃ基の場合にはＤＭＦ中の２０％ピペリジン存在下）及びＣ末端エステルの保護基は開裂する。その後、リニアーの前駆体はカップリング試薬（標準のペプチド合成）及び例えばＤＩＥＡ又はコリジン等の第３塩基の存在下において「頭から尻尾（ｈｅａｄ ｔｏ ｔａｉｌ）」で環化する。環化反応の後に、カイザー試験（カイザーら、１９７０）等の比色試験を行うことができる。環化の終わりに、保護されたアミン官能基を有するアミノ酸の保護基は開裂し、適切に保護されているスペーサーアーム（例えば、Ｆｍｏｃ−Ａｈｘ（６−アミノヘキサン酸）−ＣＯＯＨ）は、カップリング試薬の存在下において３つの遊離アミン官能基にカップリングされる。このカップリングの終了後、スペーサーアームの保護基は開裂し、Ｒｃ基は標準のペプチド合成方法により組み立てられる。合成の最後に、すぐに最後の保護基は除去され、分子は例えばトリフルオロ酢酸での処理により樹脂から開裂し、エーテルから沈殿後に凍結乾燥し、例えばＣ１８カラムの逆相分取ＨＰＬＣにより精製する。
【００３８】
本発明はまた、下記の式に対応するビオチンで標識された化合物に関する
【化３８】
（式中、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化３９】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化４０】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４−（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３−（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４１】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化４２】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す））。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】実施例５の保護ペンタペプチド(1)のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４０】
【図２】実施例５の非環式ヘキサペプチド(2)のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４１】
【図３】実施例５の環化及び脱保護ヘキサペプチド（３）のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４２】
【図４】実施例５の化合物Ａ（Ｌ４１）のＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【００４３】
【図５Ａ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ３６リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ３６リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。点曲線はＣＤ４０を発現しないＪｕｒｋａｔ細胞株のＬ３６リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。黒四角の実曲線はＢＬ４１の対照ペンタペプチド（Ｌ３７）（Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ）により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、白丸の実曲線はＪｕｒｋａｔの対照ペンタペプチド（Ｌ３７）により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４４】
【図５Ｂ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ４及びＬ４１リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ４リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。点曲線はＬ４１リガンドにより誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４５】
【図５Ｃ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされたＬ４及びＬ４０リガンドにより誘導された、ＢＬ４１細胞のアポトーシスの百分比を示す。数値は、ＢＬ４１細胞の３つの独立した実験の平均±平均偏差に対応する。白のヒストグラムはＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒のヒストグラムはＬ４５により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、灰色のヒストグラムはＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。Ｄ−プロリンをＬ−プロリンで置換した対照ペプチド（Ｌ４５）（Ｈ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ）は活性を有しない。
【００４６】
【図５Ｄ】ＤｉＯＣ６で標識後、フローサイトメトリーを使用し、１６時間インキュベートされた、Ｌ４、Ｌ４３及びＬ４４リガンドにより誘導された、Ｒａｊｉ細胞のアポトーシスの百分比を示す。実曲線はＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、点曲線はＬ４３により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒四角の曲線はＬ４４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００４７】
【図６】Ｌ４０リガンドとＣＤ４０との直接相互作用の反応速度を測定したセンサ−グラムを示す（時間の関数としての応答）。ここで、Ｌ４０リガンドは４分間にわたり流速３０μＬ／ｍｉｎで濃度２５，１００及び２００ｎＭにより注入される。
【００４８】
【図７Ａ】ストレプトアビジン−ＦＩＴＣにより発色されたビオチニル化Ｌ４１リガンドを使用したＢＬ４１細胞のフローサイトメトリーでの標識を示す。ｙ軸はＬ４１リガンドとストレプトアビジンで標識された細胞の蛍光強度（ＦＬ１−Ｈ）に対応し、ｘ軸は細胞の大きさ（ＦＳＣ−Ｈ）に対応している。左側の濃度曲線はストレプトアビジンなしのビオチニル化されたリガンドで標識された細胞に対応し、右側の濃度曲線は蛍光色素ＦＩＴＣと結び付いたストレプトアビジンがあるビオチニル化されたリガンドで標識された細胞に対応する。黒色から灰色への色合いは、ｘ軸（ＦＳＣ）及びｙ軸（ＦＬ１）上のポイントでの減少する細胞濃度を示す。
【００４９】
【図７Ｂ】ビオチニル化されたＬ４１リガンド及びＣＤ４０に対する抗体を使用するＢＬ４１細胞の蛍光顕微鏡検査法での標識（ストレプトアビジンＡｌｅｘａ５４６及び蛍光色素Ａｌｅｘａ４８８で結び付いたマウス抗体のＦｃ部分に対するヤギ抗体によりそれぞれ発色する）を示す。図の左側の灰色の色合いはＣＤ４０に対する抗体の標識に対応し、図の右側の灰色の色合いはビオチニル化されたＬ４１リガンドの標識に対応する。
【００５０】
【図８Ａ】種々の濃度のＬ４及びＬ６２リガンドの存在下における１６時間の培養後５ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬでのＢｕｒｋｉｔｔ Ｒａｊｉリンパ腫（ＣＤ４０＋）及びＴ Ｊｕｒｋａｔ白血病（ＣＤ４０−）細胞のあるアポトーシスの百分比を示す。白ダイヤの曲線はＲａｊｉ細胞のＬ４により誘導された用量反応に対応し、白四角の曲線はＲａｊｉ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒三角の曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ４により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００５１】
【図８Ｂ】独立した実験において図８Ａと同じ条件下での種々のＬ６２及びＬ４０で処理されたＲａｊｉ， Ｊｕｒｋａｔ及びＢｕｒｋｉｔｔ ＢＬ４１リンパ腫（ＣＤ４０＋）細胞の特異的なアポトーシスの百分比を示す。白丸の実曲線はＲａｊｉ細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、白三角の実曲線はＲａｊｉ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の実曲線はＢＬ４１細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒三角の実曲線はＢＬ４１細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒四角の点曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ４０により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応し、黒丸の点曲線はＪｕｒｋａｔ細胞のＬ６２により誘導されたアポトーシスの用量反応に対応する。
【００５２】
《略記リスト》
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡｃＯＨ 酢酸
ＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）
ホスホニウムヘキサフルオロフォスフェイト
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＣＭＡ クロロホルム、メタノール及び酢酸の混合物
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＤＢＵ １，８−ジアザビシクロ［５．４，０］ウンデセン−７−エン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＥＡ ジエチルアミン
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤｉＯＣ６ ３．３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン ヨウ化物
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
メチオダイド
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−
テトラメチルウラン ヘキサフルオロフォスフェイト
ＨＯＡｔ ７−アザベンゾトリアゾール
ＨｏＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩｐＯＨ イソプロパノール
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
ＯＡｌｌ −Ｏ−アリル
ＯＭｔｔ −Ｏ−メチルトリチル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
【実施例】
【００５３】
《実施例１：保護されたペンタペプチド及び脱保護されたペンタペプチドの合成》
Ｉ．保護されたペンタペプチドＬ４４’及び脱保護されたペンタペプチドＬ４４
脱保護されたペンタペプチドＬ４４は下記の式に対応する。
Ｈ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ４４’）の調製
１．４ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．３ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、１．３ｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び１．９ｍＬ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００５４】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｂは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｂに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作を２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ４４’を生成する。
【化４３】
ペプチドＬ４４’は、下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１４．９０９分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ４８Ｈ７３Ｎ５Ｏ１０Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：９０３．１２；実測値：９０２．５７
【００５５】
２）保護されたペンタペプチドＬ４４の調製：ＮＨ２−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
ペプチドＬ４４’を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ４４を生成する。
【化４４】
このペプチドＬ４４は、下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１０．２７２分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５０Ｎ５Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：６６７．８；実測値：６６８．２；Ｃ３５Ｈ４９Ｎ５Ｏ８Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：６９０．８；実測値：６９０．２３
【００５６】
ＩＩ．保護されたペンタペプチドＬ３７’及び脱保護されたペンタペプチドＬ３７
下記の式に対応する脱保護されたペンタペプチドＬ３７：
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＬ３７’の調製：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ
１．４ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．３ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、１．３ｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び１．９ｍＬ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００５７】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ａは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ａに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作を２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ３７’を生成する。
【化４５】
ペプチドＬ３７’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１５．６０５分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ５３Ｈ８２Ｎ６Ｏ１２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：１０１８．２５；実測値：１０１８．４０；Ｃ５３Ｈ８２Ｎ６Ｏ１２Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：１０３４．２５；実測値：１０３４．６４
【００５８】
２）脱保護されたペンタペプチドＬ３７の調製：ＮＨ２−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
ペプチドＬ３７’を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ３７を生成する。
【化４６】
このペプチドＬ３７は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．０６５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５１Ｎ６Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：６８３．８１；実測値：６８２．９１；Ｃ３５Ｈ５０Ｎ６Ｏ８Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：７０５．８１；実測値：７０５．２２；Ｃ３５Ｈ５０Ｎ６Ｏ８Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：７２１．８１；実測値：７２１．６７
脱保護されたＬ４５は、Ｌ３７及びＬ４４の合成方法と同様の方法により合成される。
【００５９】
ＩＩＩ．保護されたペンタペプチドＬ６３’及び脱保護されたペンタペプチドＬ６３
下記の式に対応する脱保護されたペンタペプチドＬ６３
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）脱保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３’）の調製
０．３ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、３４０ｍｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び４７８μｌ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００６０】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｃは、Ｄ−プロリン残基の結合後に得られる。
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈ（３当量）のＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ−４Ｃに添加する。その後、ＤＭＦ中に可溶化されたＮａＢＨ３ＣＮを系に添加し、混合物を１時間撹拌する。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。樹脂Ｒ−４Ｄが得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｄに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作をＤＣＭで２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ６３’を生成する。
【化４７】
ペプチドＬ６３’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１３．７７分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｈ＋の計算値：９８２．２８；実測値［Ｍ＋Ｈ＋］＝９８２．３８；Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｎａ＋の計算値：１００４．２８；実測値１００４．４４；Ｃ５３Ｈ８４Ｎ６Ｏ１１Ｋ＋の計算値：１０２０．２８；実測値１０２０．４５
【００６１】
２）保護されたペンタペプチドＮＨ２−ＬｙｓΨ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３）の調製
ペプチドＬ６３を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ６３を生成する。
【化４８】
このペプチドＬ６３は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．７７分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３５Ｈ５２Ｎ６Ｏ７Ｎａ＋の計算値：６９１．８２；実測値６８９．６８；Ｃ３５Ｈ５２Ｎ６Ｏ７Ｋ＋の計算値：７０７．８２；実測値７０７．１５
【００６２】
ＩＶ．保護されたペンタペプチドＬ６９’及び脱保護されたペンタペプチドＬ６９
脱保護されたペンタペプチドＬ６９は下記の式に対応する。
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ
１）保護されたペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ（Ａｃｅｔｏｎｉｄ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９’）の調製
０．３ｇ（１当量）の２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｒ１−Ａ）（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）を注射器に入れ、蒸留されたＤＣＭにより撹拌下で２回洗浄する。その後、３４０ｍｇ（２当量）のＦｍｏｃ−６−アミノカプロン酸及び４７８μｌ（６当量）のＤＩＥＡのＤＣＭ中溶液を樹脂に添加する。３時間撹拌後、混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。その後、樹脂をメタノールに入れ、１時間の撹拌で膨張させる。その後、それを濾過し、ＤＭＦ、ＩｐＯＨ、ＤＣＭ、エーテルで洗浄する。Ｒ−２Ａを乾燥後に得る。
得られたＲ−２Ａを、撹拌下で２０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中に入れる。その後、樹脂を濾過し、Ｒ３−Ａを生成し、溶液を集める。集められた溶液をＵＶ試験することにより、樹脂Ｒ−２Ａ（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）の置換を決定することを可能とする。
【００６３】
〔アミノ酸のカップリングの一般方法〕
５当量のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ、５当量のＢＯＰ及び５当量のＨｏＢｔのＤＭＦ中溶液を１当量の樹脂Ｒ２−Ａに添加する。その後１５当量のＤＩＥＡを系に添加し、混合物を３０分撹拌する。この操作を２回繰り返す。カップリングをニンヒドリン試験により確認する。Ｆｍｏｃ基の脱保護を、撹拌下で３０分間、２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中で行う。第２カップリングを再び行うこともできる。
樹脂Ｒ−４Ｅは、ペプチドを合成するための種々の所望のアミノ酸の結合後に得られる。
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノールとＤＣＭ（６０／４０）との混合物を樹脂Ｒ４−Ｅに添加する。注射器を２時間撹拌し、その後濾過し、ＤＣＭで数回すすぎ洗いする。この操作をＤＣＭで２回繰り返す。その溶液を混ぜ合わせ、蒸発し、保護されたペプチドＬ６９’を生成する。
【化４９】
ペプチドＬ６９’は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１２．８３分（直線のグラジエント、３０−１００％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ４９Ｈ７４Ｎ６Ｏ１３Ｎａ＋の計算値：９７８．１５；実測値９７９．５５；Ｃ４９Ｈ７４Ｎ６Ｏ１３Ｋ＋の計算値：９９４．１５；実測値９９５．８９
【００６４】
２）保護されたペンタペプチドＨ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ−Ｔｙｒ−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９）の調製
ペプチドＬ６９を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、凍結乾燥し、Ｌ６９を生成する。
【化５０】
このペプチドＬ６９は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ９．１８分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ３２Ｈ４６Ｎ６Ｏ９Ｋ＋の計算値：６９７．７４；実測値６９７．４０
【００６５】
《実施例２：式（Ｖ−ｂ）（Ｌ３６）の化合物の調製》
【化５１】
１３ｍｇ（１当量）の保護された環１をＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をシクロヘキサンで蒸発し、化合物２を生成する。
化合物２をＤＭＦ中に取り込む。５６ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＬ３７’
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（前記参照）、２５ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰ及び３０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、３５ｍｇのＬ３６リガンド（粗反応収率８６％）を生成する。１１ｍｇの純粋なＬ３６は、精製後ＲＰ−ＨＰＬＣにより得られる（精製後の収率２７％）。
Ｌ３６リガンドは下記を特徴とする。
ＨＬＰＣ：ｔＲ１０．１１５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１２６Ｈ１８７Ｎ２４Ｏ２４［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２４２２；実測値：２４２０．６８
【００６６】
《実施例３：Ｌ４０及びＬ４３の大員環の調製》
【化５２】
【００６７】
化合物１
Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（５．９９ｇ；１５．７５ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌを含むＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｎ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＭｅ（２．０９ｇ；１５ｍｍｏｌ），ＢＯＰ（６．９６ｇ；１５．７５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（７．６ｍＬ；４５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：９８％（６．８５ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝９．３分、純度＞９７％、２０分間にわたり３０〜１００。
【００６８】
化合物２
化合物１（４．６６ｇ；１０ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（１０ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：１００％（３．７１ｇ）、純度ＨＰＬＣ＞９７％、ＴＬＣ Ｒｆ０．３ＣＭＡ６０／１０／５。
ＨＣｌ塩（３．６８ｇ；１０ｍｍｏｌ）をＺ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ（２．３４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（４．６４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（３．４ｍＬ；２０ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を得る。収率：９７％（５．２ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝８．９分、純度＞８８％、２０分間にわたり３０−１００。
【００６９】
化合物３
化合物２（５．１ｇ；９．５ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（９．５ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：１００％（４．２ｇ）。
ＨＣｌ塩（４．２ｇ；９．５ｍｍｏｌ）をＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３．８ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（４．４２ｇ；１０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（４．２ｍＬ；２５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を放置する。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９３％（６．８ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．９分、純度９０％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７０】
化合物４
化合物３（６．８ｇ；８．９ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（８．９ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。３時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮し、白色固体を生成する。収率：９１％（５．４ｇ）；ＴＬＣＲｆ０．３ＣＭＡ６０／１０／５。
ＨＣｌ塩（５．４ｇ；８．１ｍｍｏｌ）をＺ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ（１．９ｇ；８．５ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（３．８ｇ；８．５ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（４．２ｍＬ；２５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で６時間攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：７８％（５．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．６７分、純度７７％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７１】
化合物５
化合物４（５．３ｇ；６．３ｍｍｏｌ）を室温でＨＣｌ（６．３ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。５時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９１％（４．７ｇ）。
ＨＣｌ塩（４．７ｇ；５．５ｍｍｏｌ）をＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（２．２ｇ；５．８ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（２．２ｇ；５．８ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解する。ＤＩＥＡ（１．９ｍＬ；１１ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌する。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を攪拌下で添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｍ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：９０％（５．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１２．２６分、純度６０％、２０分間にわたり３０−１００。
【００７２】
化合物６
化合物５（５．３ｇ；４．９ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解し、１ＮＮａＯＨソーダ（５．９ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。反応混合物を、室温に温める前に１時間０℃で維持する。６時間後、反応混合物を真空下で濃縮する。その後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を攪拌下で添加し、有機相を１Ｎ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン中で粉砕する間に固まる残留物を残す。それを集め、ヘキサン、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、ＫＯＨにより真空乾燥する。粗ペプチドを、ＣＭＡ１２０／１０／５を使用するシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにより精製する。収率：４４％（２．３ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１１．２８分、純度７８％、２０分を超える３０−１００。
【００７３】
化合物７
化合物６（１．５ｇ；１．４６ｍｍｏｌ）を室温でＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で水素化する。４時間後、触媒を濾過により取り除き、濾過されたものを真空下で濃縮する。予想されるＨＣｌ塩をジイソプロピルエーテルから結晶化し、ＫＯＨにより真空乾燥する。収率：８８％（１．１７ｇ）；ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１６．９分、純度７０％、２０分を超える５−６５。
【００７４】
化合物８
化合物７（８００ｍｇ；０．８７ｍｍｏｌ）を、室温でＥＤＣを含むＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ（２０１ｍｇ；１．０５ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ（１４２ｍｇ；１．０５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３７３ｍＬ；２．１９ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加する。反応混合物を２日間室温で撹拌し、反応混合物を真空下において濃縮する。
飽和重炭酸ナトリウム溶液、酢酸エチル（１００ｍＬ）を攪拌下で添加する。有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水（２ｘ１００ｍＬ）、１Ｎ酒石酸水素カリウム水溶液（２ｘ１００ｍＬ）、水、食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、混合物を硫酸ナトリウムにより乾燥し、真空下で濃縮し、白色固体を生成する。収率：１００％（０．７８ｇ）；Ｍ＋Ｈ＋＝８９６。
【００７５】
化合物９
化合物８（６５０ｍｇ；０．７６ｍｍｏｌ）を室温で１時間ＴＦＡ（６ｍＬ）に溶解する。混合物のアミンを真空下で濃縮する。予想されるアミンをエーテル（５０ｍＬ）から沈殿する。それを集め、エーテルで洗浄し、真空乾燥する。収率：９８％（０．７０ｇ）；Ｍ＋Ｈ＋＝５９８．５（計算値＝５９７．６）。
【００７６】
《実施例４：式（ＩＩＩ−ｅ）（Ｌ４０）の化合物の調製》
化合物Ｌ４０は下記の式に対応する。
【化５３】
【化５４】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ３７’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９（実施例３参照）に添加し、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、４０ｍｇのＬ４０リガンドを生成する。
６ｍｇの純粋なＬ４０をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率２２％）。
Ｌ４０は下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１０．２０３分（直線のグラジエント，５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ１９６Ｎ２７Ｏ２７［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２５９３．１６；実測値：２５９３．２４；Ｃ１３２Ｈ１９５Ｎ２７Ｏ２７Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：２６１６．１６； 実測値２６１６．７８。
【００７７】
《実施例５：式（ＩＩＩ−ｆ）（Ｌ４３）の化合物の調製》
化合物Ｌ４３は下記の式に対応する。
【化５５】
【化５６】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ４４’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９（実施例３参照）に添加し、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１ＮＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、その固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分撹拌後、その溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、２０ｍｇのＬ４３リガンドを生成する。
８ｍｇの純粋なＬ４３をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率３０％）。
Ｌ４３は下記を特徴とする。
ＨＬＰＣ：ｔＲ１３．９３５分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ１９３Ｎ２４Ｏ２７［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値：２５４８．１１；実測値：２５４７．８８；Ｃ１３２Ｈ１９２Ｎ２４Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ＋］の計算値：２５７１．１１；実測値：２５７０．６２；Ｃ１３２Ｈ１９３２Ｎ２４Ｏ２７Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ＋］の計算値：２５８７．１１；実測値：２５８６．１３。
【００７８】
《実施例６：化合物Ｌ４１の調製》
化合物Ｌ４１は下記の式に対応する。
【化５７】
下記の式により表すこともできる。
【化５８】
化合物Ａ（Ｌ４１）の合成は下記に記載する。中間体１及び２は固相において行い、下記の段階を溶液中で行った。
【化５９】
【００７９】
１）ペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（１）の合成
このペプチドの合成を、下記の段階的な固相Ｆｍｏｃ方法により行った。ペプチドは２−クロロトリチル樹脂（Ｓｅｎｎ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、１．３ｍｍｏｌｅｓ／ｇ）上に集めた。合成のスケールは１．３ｍｍｏｌｅｓであった。
第１アミノ酸のカップリングを、２当量のＦｍｏｃ−Ａｈｘ−ＯＨ及び６当量のＤＩＥＡを含む無水ジクロロメタン中で３時間行う。樹脂の洗浄及び乾燥後に行った置換試験は、０．６ｍｍｏｌｅｓ／ｇの置換レベルを示す。
下記のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリングを、ＢＯＰ／ＨＯＢｔ及びＤＩＥＡの存在下において５当量のアミノ酸を含むＤＭＦ中で行う。二重のカップリングを体系的に行う。
Ｆｍｏｃ基の脱保護を、ピペリジンの２５％ＤＭＦ溶液を使用し、２０分間行う。
樹脂からペプチドの開裂を、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール／ジクロロメタン溶液（６０／４０）を使用し、室温で２時間行う。
樹脂を濾過し、濾過されたものを濃縮し、真空乾燥する。保護されたペプチドを、精製せずに直接使用する。合成の収率は定量的である。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える３０〜１００％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル、０．０８％ＴＦＡ）、流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用し、ＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、保護されたペプチドを分析する（図１）。純度レベルは９２％である。
【００８０】
２）環化ヘキサペプチドの合成（２）：
ヘキサペプチドＨ−（Ｄ）Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｉｏｔ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−（Ｄ）Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの合成は、下記の段階的な固相Ｆｍｏｃ方法、及び下記のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｉｏｔ）−ＯＨ（ビオチン−標識）を使用するペンタペプチドの合成において記載された同じ方法により行う。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える２０〜８０％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル、０．０８％ＴＦＡ）、流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用し、ＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、非環式ヘキサペプチドを分析する（図２）。
ヘキサペプチド（６６０ｍｇ；０．５５ｍｍｏｌ）を、室温で、ＥＤＣを含むＤＭＦ（７０ｍＬ）、ＨＣｌ（１２７ｍｇ；０．６６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８９ｍｇ；０．６６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１４０μｌ、０．８２ｍｍｏｌ）を溶解する。４８時間後、反応媒体を、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）を含む溶液から沈殿する。その後、環式ヘキサペプチドを１Ｎ ＫＨＳＯ４溶液で洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液を真空乾燥する（５４０ｍｇ；収率：８３％）。
Ｂｏｃ基の脱保護を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で１時間行う。その後、ペプチドをジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加により沈殿し、濾過し、真空乾燥する（５１０ｍｇ；収率：９５％）。
水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、２０分間を超える５〜６５％Ｂのグラジエント（Ａ：水；０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル；０．０８％ＴＦＡ），流速１．２ｍＬ／分及び２１０ｎｍにおける吸収を使用するＨＰＬＣ（カラムＣ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）により、環式ヘキサペプチド及び脱保護されたヘキサペプチドを分析する（図３）。
【００８１】
３）中間体（１）及び（２）のカップリング
環式ヘキサペプチド及び脱保護されたヘキサペプチド（２）（６１ｍｇ；５０μｍｏｌ）を、室温で、ペンタペプチド（１）（１５７ｍｇ；１６５μｍｏｌ）を含むＤＭＦ（２ｍＬ）、ＢＯＰ（７３ｍｇ；１６５μｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（８５μＬ）中に溶解する。４８時間後、反応媒体を、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）を含む溶液から沈殿する。その後、沈殿物を１Ｎ ＫＨＳＯ４溶液で洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液を真空乾燥する（１８０ｍｇ；収率：１００％）。
化合物（３）のＢｏｃ及びｔＢｕ基の脱保護を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で行う。その後、ペプチドをジエチルエーテル（５０ｍＬ）により沈殿し、濾過し、真空する（精製前１６０ｍｇ；収率：１００％）。
その後、水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物、３０分間を超える５〜６５％Ｂのグラジエント（Ａ：水、０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル−０．０８％ＴＦＡ）及び流速６ｍＬ／分を使用し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＨＰＬＣ、カラムＣ１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、ＳＰ ２５０／１０ ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００−７）の逆相ＨＰＬＣにより精製する。９７％より大きい純度を有するフラクションを混ぜ合わせ、凍結乾燥する（図４：精製後の化合物ＡのＨＰＬＣプロファイル；純度レベル＝９７．２％）。
ＨＰＬＣ精製収率は１７％である。
【００８２】
《実施例７式（ＩＩＩ−ｉ）（Ｌ６２）の化合物の調製》
化合物Ｌ６２は下記の式に対応する。
【化６０】
【化６１】
３５ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ψ（ＣＨ２Ｎ）ＤＰｒｏ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６３’）、１６ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰをＤＭＦ中の１０ｍｇ（１当量）の環９に添加し（実施例３参照）、２０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２時間混合し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物を連続してＨ２Ｏ、１Ｎ ＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで洗浄する。
その後、固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。攪拌３０分後、溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、２０ｍｇのＬ６２リガンドを生成する。
２ｍｇの純粋なＬ６２をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後得る（精製後の収率７％）。
Ｌ６２リガンドは下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１１．６分（直線のグラジエント、５−６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３２Ｈ２０１Ｎ２７Ｏ２４Ｈ＋の計算値：２５５０．２１；実測値２５５１；Ｃ１３２Ｈ２０１Ｎ２７Ｏ２４Ｋ＋の計算値：２５９０．２１；実測値２５９０
【００８３】
《実施例８：式（ＩＩＩ―ｊ）（Ｌ６８）の化合物の製造》
化合物Ｌ６８は下記の式に対応する。
【化６２】
【化６３】
３９ｍｇ（３．３当量）のペンタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−Ｄｏｐａ（Ａｃｅｔｏｎｉｄ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｈｘ−ＯＨ（Ｌ６９’）、１８ｍｇ（３．３当量）のＢＯＰを、ＤＭＦ中の１５ｍｇ（１当量）のビオチン環（２）（実施例３を参照）に添加し、３０μＬ（１０当量）のＤＩＥＡを添加する。反応混合物を室温で２５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（水溶液）から沈殿する。濾過後、沈殿物をＨ２Ｏ、１Ｎ ＫＨＳＯ４、Ｈ２Ｏ及びＡｃＯＥｔで連続して洗浄する。
その後、固形物を水の存在下においてＴＦＡで処理する。３０分攪拌後、溶液をエーテルから沈殿し、濾過し、５０ｍｇのＬ６８リガンドを生成する。
９ｍｇの純粋なＬ６８をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製後に得る（精製後の収率２１％）。
Ｌ６８リガンドは下記を特徴とする。
ＨＰＬＣ：ｔＲ１１．１分（直線のグラジエント、５〜６５％Ｂ、２０分）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＨ＋の計算値：２８０４．３５；実測値２８０２．９６；Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＮａ＋の計算値：２８２７．３５；実測値２８２４．９１；Ｃ１３６Ｈ２０４Ｎ３０Ｏ３２ＳＫ＋の計算値：２８４１．３５；実測値２８４１．９８
【００８４】
生物学的試験
これらの試験を３つの段階において実施する。最も有用なリガンドは簡易のリンパ腫細胞アポトーシス活性化試験を用いて最初に選択され、次に、ＣＤ４０との相互作用はＢＩＡコア技術で詳細に分析され、そして最後にビオチン化リガンドと膜性のＣＤ４０との相互作用は蛍光顕微鏡検査法及びフローサイトメトリーにより研究される。
リガンドのアゴニスト又はアンタゴニスト効果を２つの標準の生物学的試験を用いて試験した。最初の試験は、膜性のＣＤ４０分子の架橋中に、増殖を中止し、アポトーシスに入る、あるＢリンパ腫の特性に基づくものである（Ｔｏｎｇら、１９９９）。実際、抗ＣＤ４０抗体により、又は可溶性ＣＤ４０Ｌにより、ＣＤ９５分子と独立して架橋中において、あるＢリンパ腫はアポトーシスに入る。このアポトーシスの誘導は、増殖を減少する効果を有する。ＣＤ４０のアゴニストリガンドはアポトーシスの増加を誘導し、その結果、増殖の減少を誘導するであろう。この試験において、ＢＬ４１細胞はＣＤ４０リガンドとインキュベートされ、２４時間後、これら細胞の増殖の阻害はトリチウム化チミジンの取り込みの検討により測定されるか、又はアポトーシス細胞の割合はフローサイトメトリーの検討により測定される。第２試験において、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用による活性化（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９９６）後の形質転換Ｂ細胞（バーキットリンパ腫）による膜性のＣＤ９５分子の発現が研究されている。この試験において、ＣＤ４０Ｌパートナーは、トランスフェクションされた線維芽細胞（３Ｔ６−ＣＤ４０Ｌ）（Ｂｕｅｌｅｎｓら、１９９７）において発現される。ＢＬ４１バーキットリンパ腫細胞は、ＣＤ４０Ｌをトランスフェクションされ又はトランスフェクションされない線維芽細胞とインキュベートされる。４８時間後、ＣＤ９５の発現はフローサイトメトリーにより評価される。ＣＤ９５の発現はＣＤ４０Ｌの存在下において誘導され、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用を市販の抗ＣＤ４０Ｌ抗体は阻害する。
リガンドのアゴニストの効果を、リガンドとＢ細胞のインキュベーション後に、フローサイトメトリーを使用したＣＤ９５の発現又は増殖の阻害及び／又はアポトーシスによる死の増加のいずれかを測定することにより評価した。アンタゴニストの効果は、種々のリガンドの存在下におけるＣＤ４０Ｌにより誘導されるＣＤ９５の発現の減少を測定することにより評価される。
【００８５】
Ａ．リガンドのアゴニスト生物学的効果の研究
〔原理〕
リガンドのアンタゴニスト効果は、膜性のＣＤ４０分子の架橋中に、アポトーシスに入る、あるＢリンパ腫の特性に基づく簡易な生物学的試験生物学的試験を用いて試験される（Ｔｏｎｇら、１９９９）。実際、抗ＣＤ４０抗体により、又は可溶性のＣＤ４０ＬによるＣＤ４０分子の架橋中において、これらのＢリンパ腫はアポトーシスに入る。ＣＤ４０のアゴニストリガンドは、フローサイトメトリーの正確な分析により測定されるバーキットリンパ腫細胞のアポトーシスにおける増加を同様に誘導するであろう。
【００８６】
〔操作方法〕
ＢＬ４１バーキット又はＲａｊｉ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−８６）リンパ腫細胞（５．１０５／ｍＬ）、２つの類似の細胞株を、所望の濃度での種々のリガンドの存在下において培養する。１６時間後、細胞を４０ｎＭの３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン（ＤｉＯＣ６）で標識し（Ｐｅｔｉｔら，１９９５）、フローサイトメトリーを使用しアポトーシス細胞の割合を評価する。対照として、ＣＤ４０を発現せず、可溶性又は膜性のＪＣＤ４０リガンドの存在下において反応しない、Ｊｕｒｋａｔ Ｔリンパ腫細胞においてリガンドの効果を試験する。
【００８７】
〔結果〕
２５μＭにおいて８０％を超える特異的なアポトーシスを検出するので、Ｌ３６（Ｖ−ｂ）リガンドはＢＬ４１細胞のアポトーシスを強く誘導する。ビオチン化リガンドＬ４１は、非ビオチン化同族体Ｌ４（非−ビオチン化Ｌ４１）に相当する生物学的活性を有する（図５Ｂ）。１２．５μＭにおいて、Ｌ４０は３７．５％の特異的なアポトーシス及びＬ４は２４％を誘導するので、Ｌ４０リガンドはＬ４よりも効果的である（図５Ｃ）。最後に、Ｌ４３リガンドはその同族体Ｌ４よりも効果的ではない（図５Ｄ）。これらのリガンドはＪｕｒｋａｔ株の細胞のアポトーシスを誘導しないことを示すことができる。
さらに、図８Ａ及び図８Ｂによれば、最初の２つの残基（Ｌ６２）間の還元結合の導入は、効果的で、選択的なリガンドを得ることを可能にすることを示している。
【００８８】
Ｂ．リガンドとＣＤ４０との相互作用の研究
〔原理〕
ＢＩＡコア３０００は、２つの分子間の相互作用の研究を可能にする装置である。表面プラズモン共鳴に基づき、リアルタイムでの測定の実施と、それに続く「リガンド」（測定を担持しているマイクロチップ上に固定化されている）と「分析物」（注入された溶液において発見される）の相互作用の反応速度（結合及び解離）の理解を可能にする。分析物の種々の濃度における反応速度は、リガンドと分析物との相互作用のアフィニティー定数を計算することを可能にする。マイクロチップは種々の測定で４つのセルを含んでおり、非該当のタンパク質（調査される分析物に親和性を有しないが、リガンドに対して接近するタンパク質）が固定化される参照セルとリガンドが固定化されるセルとを直接に比較することを可能にする。
試験は２つの段階で実施される。リガンドとマイクロチップ上に固定化されたＣＤ４０との直接相互作用の測定及びリガンドＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の阻害の測定。
【００８９】
《１．ＣＤ４０におけるリガンドの相互作用》
〔操作方法〕
マウス免疫グロブリンの定常部分に対するウサギ抗体をマイクロチップ上に固定化した。１００ｎＭのアイソタイプＩｇＧ２ａのマウスモノクローナル抗体を、１分間で流速５μＬ／分で参照セルに固定化する。リガンドセルにおいて、マウスＩｇＧ２ａの重鎖の定常部分と会合する組換えＣＤ４０（ヒトＣＤ４０ｍｕＩｇ融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社、Ｂａｙｐｏｒｔ、ＭＮ）を同様の条件下で固定化する。
その後、ＣＤ４０リガンドを、２つのセル（参照及びリガンド）に種々の濃度で、分析物として、注入する。流速を４分間にわたり３０μＬ／分とし、会合を調べた。次に、分析物不存在下において、条件を同様とし、解離を調べた。
セルを再生するために（すなわち、非共有の方法で吸着されたすべてのタンパク質を除去する）、５０ｍＭＨＣｌ溶液を１分間にわたり５μＬ／分で注入する。その後、そのセルを新しい分析のために準備する。
【００９０】
〔結果〕
Ｌ４０及びＬ４１リガンドのＣＤ４０への直接会合の反応速度を測定（図６）し、Ｌ４０においては３．１ｘ１０−７Ｍ及びＬ４１においては２．８ｘ１０−８Ｍの解離定数を計算することを可能にした。情報として、同様の条件下でＬ４の計算された解離定数は９．４ｘ１０−８Ｍである。
【００９１】
《２．ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の阻害》
〔操作方法〕
マウス免疫グロブリンの定常部分に対するウサギ抗体をマイクロチップ上に固定化した。４０ｎＭのアイソタイプＩｇＧ２ａ（ＬＧ１１．２）のマウスモノクローナル抗体を、２分間で流速５μＬ／分で参照セルに固定化する。リガンドセルにおいて、マウスＩｇＧ２ａの重鎖の定常部分と会合する組換えＣＤ４０（ヒトＣＤ４０ｍｕＩｇ融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社、Ｂａｙｐｏｒｔ、ＭＮ）を同様の条件下で固定化する。
その後、３５ｎＭのＣＤ４０Ｌ（ヒトＣＤ１５４ｍｕＣＤ８融合タンパク質、ＡＮＣＥＬＬ社）を、種々の濃度でのリガンドの存在下において、２つのセル（参照及びリガンド）において、分析物として注入した。会合を調べるために、分析物の存在下で、流速を５分間にわたり１０μＬ／分とし、次に、分析物不存在下において、条件を同様とし、解離を調べた。
セルを再生すために、（すなわち、非共有の方法で吸着されたすべてのタンパク質を除去する）、１０ｍＭＨＣｌ溶液を１分間にわたり５μＬ／分で注入する。その後、そのセルを新しい分析のために準備した。
【００９２】
〔結果〕
ＣＤ４０のＣＤ４０Ｌへの会合を、種々の濃度のＬ４０又はＬ４３リガンドの存在下において調べた。１μＭにおいて、Ｌ４０リガンドはＣＤ４０へのＣＤ４０Ｌの結合を１００％阻害しており、同様の条件下においてＬ４３リガンドはそれを３０％阻害する。
【００９３】
Ｃ．ビオチン化リガンドと膜性のＣＤ４０との間の相互作用の研究
〔原理〕
膜性のＣＤ４０とリガンドとの相互作用の直接分析は、リガンドのビオチン化で可能である。ＣＤ４０へのこれらリガンドの結合は、ビオチンに特異的で高アフィニティーであるリガンドである、蛍光色素で標識されたストレプトアビジンを使用して発色される。目的は、モノクローナル抗ＣＤ４０抗体と同様の方法での、特異的なリガンドを使用するCＤ４０の検出である。これらの抗ＣＤ４０抗体と同じエピトープを認識しない特異的なリガンドは、抗ＣＤ４０抗体との共局在、すなわちＣＤ４０への特異性を確認するために、蛍光顕微鏡を使用する二重標識実験において、それらを使用することが可能である。
【００９４】
〔操作方法〕
フローサイトメトリーにおいて、１０６細胞を１００μＬのリン酸緩衝液中の２．５μＭのビオチン化リガンドと１５分間、４℃でインキュベートする。その後、細胞を蛍光染色フルオレセインイソチオシアネートで標識されたストレプトアビジンの存在下におき、１０分間にわたり４℃で１００μＬのリン酸緩衝液で５００倍に希釈する。その後、その標識細胞を、フローサイトメトリーを使用し分析する。
蛍光顕微鏡分析又は共焦点顕微鏡分析において、１０６細胞を４℃で一晩リン酸緩衝液中の１％パラホルムアルデヒドで固定する。次の日、２．５μＭビオチン化リガンド及び１００倍希釈されたＣＤ４０に対するモノクローナルマウス抗体の存在下の１％ウシ血清アルブミンを含む１００μＬのリン酸緩衝液中で、３０分間、４℃で置く。その後、５００倍に希釈した蛍光色素Ａｌｅｘａ５４６標識ストレプトアビジン及び５００倍に希釈した蛍光色素Ａｌｅｘａ４８８結合マウス抗体のＦｃ部分に対するヤギ抗体を含む１００μＬのリン酸緩衝液／ウシ血清アルブミン中で、１５分間、４℃インキュベートする。そのように標識された細胞を、その後、スライドとラメラとの間に配列する前に固定媒体に再懸濁し、顕微鏡下でそれらを観察した。
【００９５】
〔結果〕
ビオチン化Ｌ４１リガンドを、フローサイトメトリーを使用する標識に使用した。ＢＬ４１細胞の膜性のＣＤ４０との相互作用は、サイトメーターのＦＬ１チャネル中で検出される蛍光染色フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識されたストレプトアビジンを使用し、検出される（図７Ａ）。顕微鏡検査を使用する二重標識の結果は、標識はＣＤ４０に対する抗体のそれに対応するので、Ｌ４１リガンドはＣＤ４０に特異的であることを示す（図７Ｂ）。
【００９６】
《参考文献》
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- Ｔｏｎｇ， Ａ． Ｗ．， Ｂ． Ｓｅａｍｏｕｒ， Ｊ． Ｃｈｅｎ， Ｄ． Ｓｕ， Ｇ． Ｏｒｄｏｎｅｚ， Ｌ． Ｆｒａｓｅ， Ｇ． Ｎｅｔｔｏ， ａｎｄ Ｍ． Ｊ． Ｓｔｏｎｅ． ２０００． ＣＤ４０ ｌｉｇａｎｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ Ｆａｓ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ． Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ３６：５４３−５５８
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（式中、
− Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化２】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化３】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化５】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが、天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる）
で表される化合物。
【請求項２】
Ｘａがリジン残基ではないこと、及び／又はＸｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘａがリジン残基ではないことを特徴とする、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘａがリジン残基ではないこと、及びＸｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ビオチンで標識された、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙは下記の式（ＩＩ）
【化６】
（式中、
− ｊは０又は１；
− Ａは下記のいずれかから選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体を表し、
【化７】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
− Ｂ１はアミノ酸残基又は下記から独立に選択されるアミノ酸誘導体であり、
【化８】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニックアミノ酸の鎖を表し；
− Ｂ２はＢ１と同一であることができるか、又は下記の基から独立に選択され、
【化９】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニックアミノ酸の鎖を表し；
・Ｄは下記の基の１つを表し、
（＋）−ビオチニル−、（＋）−ビオチニル−Ｘｇ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−
ｑは２〜６の整数を表し；
Ｘｇは下記の基の１つの残基に対応し、
−ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
−ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
トラネキサム酸；
Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
４−カルボキシメチル−ピペラジン；
４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
４−アミノフェニル酢酸；
４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
４−アミノ安息香酸；
４（２−アミノエトキシ）安息香酸）
で表されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
下記の式
【化１０】
（式中、
Ｒａ、Ｒｃ及びｐは請求項１〜７のいずれか一項において定義されている）
の１つに対応する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
下記の式（ＩＩＩ−ａ）
【化１１】
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
下記の式（Ｖ−ａ）
【化１２】
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
下記の式
【化１３】
（式中、
Ｒｃは請求項１において定義されている）
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒｃが、
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は、
Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は、
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−（式中、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合を表す）又は、
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
下記の式
【化１４】
【化１５】
で表される１つに対応する、請求項１〜１０及び１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
下記の式
【化１６】
【化１７】
で表される１つに対応する、請求項１〜８、１１及び１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
薬学的に許容可能なベクターと組み合わせて、活性成分として、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容可能なアジュバントと組み合わせて、活性成分として、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項１７】
免疫応答の抑制又は活性化を含む病状の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１８】
免疫応答の抑制を含む病状、例えば組織不適合、アレルギー疾患又は自己免疫疾患の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
免疫応答を高めることを含む病状、例えば癌、又は寄生性感染、細菌性感染、ウィルス性感染、又はプリオン等の非従来的な感染体に関連する感染の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
機能化されたリガンドの製造又はＣＤ４０の製造のための、請求項６に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
− 請求項１で定義されたＹのリニアー前駆体の形成工程であって、前駆体がＮ−保護アミノ酸残基（それらの３つは、アミン型のＲａ基を有し、Ｒａ基は請求項７で定義されている）と成長ペプチド鎖のアミン官能基との間の結合、及び脱保護の連続サイクルによって合成され、最初のアミノ酸残基が固体支持体に付着している、成長ペプチド鎖を形成するアミノ酸の連鎖形成により構成される形成工程、
− 前記Ｙの保護リニアーの前駆体の環化工程、
− 前記保護アミン官能基を遊離するための、前記保護用の基の開裂工程、
− 前記遊離されたアミン官能基の、請求項１で定義されたＲｃ基に対応するアミノ酸配列の連続のアッセンブリーにより、既に形成されているか、又はインサイチューで形成されるペプチドへの連結工程、
− 前記Ｒｃ基の官能化された側鎖に存在する全ての保護基の削除の後に、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を得るための、前記固体支持体からの分子の開裂工程、
を含むことを特徴とする、固体支持体上における、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の製造方法。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（式中、
− Ｙは大員環を表し、この環は９〜３６の原子を含み、３つのアミン又はＣＯＯＨ官能基により機能化され、
− Ｒｃは式Ｈ−Ｘａ−Ｘｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−又はＨ−Ｘ’ａ−Ｌ−Ｘ’ｂ−Ｘｃ−Ｘｄ−Ｘｅ−（Ｘｆ）ｉ−の基を表し、
●ｉは０又は１を表し、
●Ｘａは下記のアミノ酸残基から選択され、
− リジン；
− アルギニン；
− オルニチン；
− α位又はβ位で置換を有する、リジン、アルギニン又はオルニチンに対応するβ−アミノ酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４−（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｂは、下記のアミノ酸残基から選択され、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基はメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化２】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化３】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
●Ｘｃは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）；
●Ｘｄは下記のアミノ酸残基から選択され、
− チロシン；
− フェニルアラニン；
− ３−ニトロ−チロシン；
− ４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン；
− ３、５−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
− ２、６−ジメチル−チロシン；
− ３、４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン；
●Ｘｅは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●Ｘｆは下記のアミノ酸残基から選択され、
− ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
− ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
− ８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
− トラネキサム酸；
− Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
− ４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
− ３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
− Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
− ４−カルボキシメチル−ピペラジン；
− ４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
− ３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
− ４−アミノフェニル酢酸；
− ４−（２アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
− トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
− シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
− ４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
− ４−アミノ安息香酸；
− ４（２−アミノエトキシ）安息香酸；
●−Ｌ−は、Ｘ’ａとＸ’ｂとの間のシュードペプチド結合を表し、特に下記のリストから選択され、
−Ｌ−は、
−Ψ（ＣＨ２ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）＝ＣＨ（Ｆｋ’））−；−Ψ（ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＮＨＣＯ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＯ−Ｏ）−；−Ψ（ＣＳ−ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（Ｓ−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ２−Ｓ）−；−Ψ（ＣＨ（ＣＮ）−ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ））−；−Ψ（ＣＯＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ２）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ））−；−Ψ（ＣＨ２Ｏ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＮＨＣＯＮＦｋ’）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮＨ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮＨ）−；
又は−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＳ−Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＮＨＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ２−ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＯＮ）−；−Ψ（ＣＨ（Ｆｋ）ＣＨ（Ｆｋ’）ＣＯＮ）−であり、ここでＸ’ｂはプロリンの側鎖を表すものとし、
Ｆｋ及びＦｋ’は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン基、１〜２０の炭素原子のアルキル基、又は５〜２０の炭素原子を含む環式構造のアリール基を表し、
●Ｘ’ａはリジン、アルギニン又はオルニチンの側鎖を表し、及び
●Ｘ’ｂは下記のアミノ酸残基の１つの側鎖を表し、
− グリシン；
− アスパラギン；
− Ｄ−アラニン；
− Ｄ−バリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｌ−プロリン；
− β位、γ位又はδ位における置換又は非置換Ｄ−プロリン；
− Ｎ−アルキル化された天然アミノ酸であり、アルキル基がメチル基、エチル基又はベンジル基；
− 下記の式で表される非環式ジアルキルアミノ酸
【化４】
（式中、Ｒは水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す）；
− 下記の式で表される環式ジアルキルアミノ酸
【化５】
（式中、ｋは１、２、３又は４を表す）；
但し、アミノ酸残基Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄのうちの少なくとも１つが、天然のＣＤ４０Ｌの１４３Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ１４６断片の配列において対応するアミノ酸とは異なる）
で表される化合物。
【請求項２】
Ｘａがリジン残基ではないこと、及び／又はＸｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘａがリジン残基ではないことを特徴とする、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘａがリジン残基ではないこと、及びＸｂがグリシン残基ではないことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ビオチンで標識された、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙは下記の式（ＩＩ）
【化６】
（式中、
− ｊは０又は１；
− Ａは下記のいずれかから選択されるアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体を表し、
【化７】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
− Ｂ１はアミノ酸残基又は下記から独立に選択されるアミノ酸誘導体であり、
【化８】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニックアミノ酸の鎖を表し；
− Ｂ２はＢ１と同一であることができるか、又は下記の基から独立に選択され、
【化９】
・ｎは０、１、２又は３を表し；
・ｐは０、１、２又は３を表し；
・ＥはＮＨ又はＯを表し；
・Ｒａは、Ｃ１−Ｃ８アルキル化された、プロテイノジェニックアミノ酸の鎖を表し；
・Ｄは下記の基の１つを表し、
（＋）−ビオチニル−、（＋）−ビオチニル−Ｘｇ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−、ＨＳ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−、Ｎｐｙｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯ−Ｘｇ−
ｑは２〜６の整数を表し；
Ｘｇは下記の基の１つの残基に対応し、
−ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ｎは１から１０まで変化する；
−ＮＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ｍは３から６まで変化する；
８−アミノ−３、６−ジオキサオクタン酸；
トラネキサム酸；
Ｎ−メチル−トラネキサム酸；
４（ピペリジン−４−イル）ブタン酸；
３（ピペリジン−４−イル）プロピオン酸；
Ｎ−（４−アミノブチル）−グリシン；
４−カルボキシメチル−ピペラジン；
４−（４−アミノフェニル）ブタン酸；
３−（４−アミノフェニル）プロパン酸；
４−アミノフェニル酢酸；
４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン；
トランス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸；
シス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
トランス−４−アミノシクロヘキサン酢酸；
４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン；
４−アミノ安息香酸；
４（２−アミノエトキシ）安息香酸）
で表されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
下記の式
【化１０】
（式中、
Ｒａ、Ｒｃ及びｐは請求項１〜７のいずれか一項において定義されている）
の１つに対応する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
下記の式（ＩＩＩ−ａ）
【化１１】
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
下記の式（Ｖ−ａ）
【化１２】
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
下記の式
【化１３】
（式中、
Ｒｃは請求項１において定義されている）
に対応する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒｃが、
Ｈ−Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は、
Ａｈｘ−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−又は、
Ｈ−Ｌｙｓ−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−（Ｄ）Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−（式中、−Ψ（ＣＨ２Ｎ）−はメチレンアミノ型のシュードペプチド結合を表す）又は、
Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＯＰＡ−Ｔｙｒ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−である、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
下記の式
【化１４】
【化１５】
で表される１つに対応する、請求項１〜１０及び１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
下記の式
【化１６】
【化１７】
で表される１つに対応する、請求項１〜８、１１及び１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
薬学的に許容可能なベクターと組み合わせて、活性成分として、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容可能なアジュバントと組み合わせて、活性成分として、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項１７】
免疫応答の抑制又は活性化を含む病状の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１８】
免疫応答の抑制を含む病状、例えば組織不適合、アレルギー疾患又は自己免疫疾患の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
免疫応答を高めることを含む病状、例えば癌、又は寄生性感染、細菌性感染、ウィルス性感染、又はプリオン等の非従来的な感染体に関連する感染の治療を意図する医薬の製造のための、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
機能化されたリガンドの製造又はＣＤ４０の製造のための、請求項６に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
− 請求項１で定義されたＹのリニアー前駆体の形成工程であって、前駆体がＮ−保護アミノ酸残基（それらの３つは、アミン型のＲａ基を有し、Ｒａ基は請求項７で定義されている）と成長ペプチド鎖のアミン官能基との間の結合、及び脱保護の連続サイクルによって合成され、最初のアミノ酸残基が固体支持体に付着している、成長ペプチド鎖を形成するアミノ酸の連鎖形成により構成される形成工程、
− 前記Ｙの保護リニアーの前駆体の環化工程、
− 前記保護アミン官能基を遊離するための、前記保護用の基の開裂工程、
− 前記遊離されたアミン官能基の、請求項１で定義されたＲｃ基に対応するアミノ酸配列の連続のアッセンブリーにより、既に形成されているか、又はインサイチューで形成されるペプチドへの連結工程、
− 前記Ｒｃ基の官能化された側鎖に存在する全ての保護基の削除の後に、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物を得るための、前記固体支持体からの分子の開裂工程、
を含むことを特徴とする、固体支持体上における、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図５ｃ】
【図５ｄ】
【図６】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【図８ａ】
【図８ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図５ｃ】
【図５ｄ】
【図６】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【図８ａ】
【図８ｂ】
【公表番号】特表２００８−５２４１７３（Ｐ２００８−５２４１７３Ａ）
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４６１１６（Ｐ２００７−５４６１１６）
【出願日】平成１７年１２月１５日（２００５．１２．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００３１４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６４１３３
【国際公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（５０５４０９２４７）サントル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシェ シアンティフィク (16)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月１５日（２００５．１２．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００３１４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６４１３３
【国際公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（５０５４０９２４７）サントル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシェ シアンティフィク (16)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
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