歯の石灰化
歯表面にタンパク質破壊剤、並びに安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を接触させることを含めた、歯表面または表面下を石灰化する方法が提供される。１つの実施形態において、本発明は、エナメル質における病変を再石灰化する方法を提供する。この再石灰化方法は、該病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰおよび／またははＡＣＦＰとを接触させることを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯表面、特に歯エナメル質を石灰化する方法に関する。虫歯、歯の浸食及びフッ素沈着により生じた歯エナメル質の（表面下の病変を含めた）低石灰化病変を石灰化する方法も又提供される。
【背景技術】
【０００２】
背景
低石灰化病変の通常の原因は、カリエス及びフッ素沈着である。
【０００３】
虫歯は、通常、歯垢病原性細菌によって食事糖分の発酵由来で作り出された有機酸による歯の堅い組織の脱灰から始まる。虫歯は、依然として主要な公衆衛生の問題である。更に、修復された歯表面は、修復部の周りにそれ以上の虫歯が存在する可能性がある。虫歯の流行は、大部分の先進国におけるフッ化物の使用により減少したものの、この疾患は重要な公衆衛生の問題のままである。歯の浸食または腐食は、食事または逆流した酸による歯ミネラルの損失である。歯過敏症は、保護石灰化層であるセメント質の喪失により露出した象牙質細管が原因である。歯石は、歯表面上へのリン酸カルシウムミネラルの望ましくない堆積である。従って、これらの病態、虫歯、歯の浸食、歯過敏症及び歯石は全て、リン酸カルシウムレベルの不均衡によるものである。
【０００４】
エナメル質フッ素沈着（斑点形成）は、ほぼ１世紀前から認識されているが、フッ化物が病因であることは、１９４２年まで認識されていなかった（Ｂｌａｃｋ ａｎｄ ＭｃＫａｙ，１９１６）。フッ素沈着の特徴的な外観は、他のエナメル質障害から区別することができる（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９１）。エナメル質フッ素沈着病変（ＦＬＥ）の臨床的特徴は、周波条に続く細い不透明な線からチョーク様白色エナメル質までの範囲内にある連続体を示す（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｇｉａｍｂｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９５）。比較的高度に石灰化されているエナメル質外面と低石灰化表面下とがフッ素沈着病変において存在する状態は、初期のエナメル質「白斑」カリエス病変に似ている（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０）。症状がひどくなるにつれて、病変に関与するエナメル質の深さと低石灰化の程度の両方が増大する（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｇｉａｍｂｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９５）。フッ素沈着の進行は、フッ化物に曝される量、持続時間及びタイミングに非常により大きく異なり（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ａｏｂａ ａｎｄ Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，２００２）、そして血清フッ素濃度の上昇に関係していると考えられている。チョーク様「白斑」病変は又、抗生物質による処置または発熱の後等に子供の歯が発育する際にも形成される場合がある。このような病変は、歯エナメル質の低石灰化の領域を示している。
【０００５】
病変の重症度に依存して、フッ素沈着は、外面エナメル質の修復置換または微細磨耗により臨床的に処置されている（Ｄｅｎ Ｂｅｓｔｅｎ ａｎｄ Ｔｈａｒｉａｎｉ，１９９２；Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９６）。これらの処置は、歯組織の修復または除去を伴うため満足のいくものではない。望ましいのは、自然な外観及び構造を作り出すために低石灰化エナメル質を石灰化する処置である。
【０００６】
カゼインホスホペプチド及びアモルファスリン酸カルシウムの特定の複合体（「ＣＰＰ−ＡＣＰ」、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして市販）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの、そしてｉｎ ｓｉｔｕのエナメル質の表面下病変を再石灰化することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９８；Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．，２００３）。
【０００７】
メルボルン大学の名で出願された国際公開ＷＯ９８／４０４０６（内容全体が参考として本明細書に組み入れられている）は、アルカリｐＨにおいて生成されたカゼインホスホペプチド−アモルファスリン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＣＰＰ安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）について記載している。このような複合体は、エナメル質脱灰を予防し、動物及びヒトのｉｎ ｓｉｔｕカリエスモデルにおけるエナメル質表面下病変の再石灰化を促進することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９８）。
【０００８】
複合体の形成において活性であるＣＰＰは、それらがカゼインタンパク質の全長の一部であるか否かにかかわらず、複合体を形成する。全長のカゼインがトリプシン消化された後に単離され得る活性（ＣＰＰ）の例は、米国特許第５，０１５，６２８号（特許文献１）で特定されており、この例には、Ｂｏｓ αＳ１−カゼインＸ−５Ｐ（ｆ５９−７９）［１］、Ｂｏｓ β−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２５）［２］、Ｂｏｓ αＳ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ４６−７０）［３］、及びＢｏｓ αＳ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２１）［４］のペプチドが含まれる。各配列は以下の通りである：
【０００９】
【化１】
多くの場合、石灰化イオンが歯エナメル質に接近することは、エナメル質の表面上にわたって形成される唾液タンパク質の（ペリクルと呼ばれる）層により制限され得る。ペリクルのタンパク質も又、表面下のエナメル質病変において蓄積する可能性があり、それによってこれらの病変の石灰化を阻害する。このようなタンパク質の蓄積は、長期にわたって変色を示し、歯に醜い斑点を残す可能性があり得る。従って、変色を取り除き、再石灰化イオンのエナメル質への接近が制限されないようにするためには、これらのタンパク質を取り除く必要がある。これら及びその他の既知の処置の制限を克服するために、この目的に向けた研究が行われている。
【特許文献１】米国特許第５，０１５，６２８号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の要旨
一態様において、本発明は、歯表面にタンパク質破壊剤を接触させる、及び歯表面に安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を接触させることを含めた、歯表面または表面下を石灰化する方法を提供する。歯表面というのは、好ましくは歯エナメル質のことである。一実施形態において、歯表面は、カリエス、歯浸食またはフッ素沈着により生じる病変のようなエナメル質における病変である。
【００１１】
歯表面の石灰化は、安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰのような再石灰化物質を塗布する前に、歯表面からペリクルタンパク質を破壊することによって顕著に促進することができる。特に、安定化可溶型のＡＣＰ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＡＣＦＰ（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）によるエナメル質の石灰化は、アルカリ性漂白剤のようなタンパク質破壊剤によるエナメル質表面の前処置によって促進されることが見出だされている。
【００１２】
好ましくは、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定化されている。好ましくは、ホスホペプチド（以下に定義）は、カゼインホスホペプチドである。
【００１３】
好ましい実施形態において、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチドで安定化されたＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体の形態のものである。
【００１４】
好ましくは、ＡＣＰの相は、主に塩基相であり、ここでＡＣＰは、化学種Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＯＨ−を主に含む。ＡＣＰの塩基相は、以下の一般式を有する場合がある：［Ｃａ３（ＰＯ４）２］Ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）］（式中、ｘ≧１であり、好ましくはｘ＝１〜５であり、より好ましくはｘ＝１である）。好ましくは、上記化学式の２つの構成要素は、等しい割合で存在する。従って、一実施形態において、ＡＣＰの塩基相は、化学式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）を有する。
【００１５】
好ましくは、ＡＣＦＰの相は、主に塩基相であり、ここでＡＣＦＰは、化学種Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＦ−を主に含む。ＡＣＦＰの塩基相は、以下の一般式を有する場合がある：［Ｃａ３（ＰＯ４）２］ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆ］ｙ（式中、ｙ＝１の場合にｘ≧１であるか、またはｘ＝１の場合にｙ≧１であり、好ましくはｙ＝１且つｘ＝１〜３であり、より好ましくはｙ＝１且つｘ＝１である）。好ましくは、上記化学式の２つの構成要素は、等しい割合で存在する。従って、一実施形態において、ＡＣＦＰの塩基相は、化学式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆを有する。
【００１６】
一実施形態において、ＡＣＰ複合体は、本質的にホスホペプチド、カルシウム、リン酸塩、並びに水酸化イオン及び水からなる。
【００１７】
一実施形態において、ＡＣＦＰ複合体は、本質的にホスホペプチド、カルシウム、リン酸塩、フッ化物、並びに水酸化イオン及び水からなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
好適なタンパク質破壊剤は何れも、本発明の方法で使用可能である。この阻害剤は、歯の上のペリクルのような処理する表面にわたって形成されたタンパク質バリアを減縮することが求められる。好適な阻害剤の例には、漂白剤、界面活性剤、カオトロピック剤（例えば、尿素）、リン酸塩高濃縮物、プロテアーゼカクテル（例えば、エンドペプチダーゼ、プロテイナーゼ及びエキソペプチダーゼ）、並びにその他何れかのタンパク質可溶化剤、阻害剤または加水分解剤が含まれる。
【００１９】
好適な漂白剤の例には、次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）、及び過酸化カルバミド漂白剤が含まれる。好ましい実施形態において、漂白剤は、アルカリ性漂白剤である。更なる好ましい実施形態において、アルカリ性漂白剤はＮａＯＣｌである。タンパク質破壊剤は、タンパク質、特にペリクルのタンパク質を可溶化させて、歯表面から部分的または完全に取り除くために作用する。
【００２０】
本発明の更なる態様においては、歯表面を石灰化する方法であって、タンパク質破壊剤、及びＡＣＰまたはＡＣＦＰの供給源を提供することを含む方法が提供される。好ましい実施形態において、歯表面とはエナメル質である。
【００２１】
本発明の更なる態様においては、フッ素沈着を処置する方法であって、歯エナメル質におけるフッ素沈着病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２２】
本発明の更なる態様においては、虫歯を処置する方法であって、歯エナメル質におけるカリエス病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２３】
本発明の更なる態様においては、歯の浸食を処置する方法であって、浸食により生じた歯エナメル質における病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２４】
本発明の更なる態様においては、歯エナメル質上の白斑病変を低減させる方法であって、白斑病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２５】
本発明の更なる態様においては、歯エナメル質における病変部を再石灰化させる方法であって、病変部と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２６】
好ましくは、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、ホスホペプチドによって安定化させる。好ましい実施形態において、ホスホペプチドは、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰまたはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチドで安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ複合体の形態である。
【００２７】
一実施形態において、タンパク質破壊剤はＮａＯＣｌである。約１〜２０％の濃度のＮａＯＣｌが使用される場合がある。或いは、ＮａＯＣｌの濃度は１〜１０％である。好ましい実施形態において、約５％の濃度のＮａＯＣｌが使用される。
【００２８】
タンパク質破壊剤は、約１〜６０分、または約１〜３０分にわたり歯表面と接触させる場合がある。一実施形態において、タンパク質破壊剤は、約２０分にわたり歯表面と接触させる。
【００２９】
好ましくは、安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰは、約１分〜２時間、または５分〜６０分、または約１０分にわたり歯表面と接触させる。安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰは、１日〜数カ月にわたり歯表面に繰り返し塗布される場合がある。
【００３０】
一実施形態において、安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、歯表面とタンパク質破壊剤とを接触させた後に、歯表面と接触させる。
【００３１】
好ましい実施形態において、タンパク質破壊剤は、歯表面と安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰとを接触させる前に１〜６０分、１〜３０分、または１〜５分にわたり、歯表面と接触させる。
【００３２】
本発明の更なる態様においては、歯表面を石灰化する方法であって、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体をタンパク質破壊剤で前処置した歯表面に塗布することを含む方法が提供される。好ましくは、歯表面とは歯エナメル質である。好ましい実施形態において、歯表面は、白斑病変；フッ素病変；カリエス病変；または歯浸食により生じた病変からなる群から選択される病変を含む歯エナメル質である。更なる好ましい実施形態において、タンパク質破壊剤は漂白剤である。
【００３３】
一実施形態において、歯表面はこのような処置を必要としている。本発明には又、フッ素沈着、虫歯、象牙質過敏性または歯結石を患う対象を処置する方法も含まれる。
【００３４】
理論または作用様式によって拘束されることなく、歯エナメル質をタンパク質破壊剤で前処置することによって、部分的または完全にエナメル質の脱タンパク質が生じ、表面下のエナメル質へのカルシウム及びリン酸塩の拡散が促進されることが理解される。
【００３５】
更に、安定化ＡＣＦＰで歯エナメル質を処置することにより、フッ素リン灰石が生成され、これが通常の歯エナメル質よりも酸の攻撃に対して耐性を備えることが理解される。これにより、優れたカリエス耐性を有する歯エナメル質が得られる場合がある。従って、好ましい実施形態において、本発明の方法は、安定化ＡＣＦＰを含む。
【００３６】
本発明の説明において「ホスホペプチド」は、少なくとも１つのアミノ酸がリン酸化されたアミノ酸配列を意味する。好ましくは、ホスホペプチドは、１つ以上のアミノ酸配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−を含み、式中、Ａはホスホアミノ残基であり、Ｂはホスホアミノ残基を含む任意のアミノアシル残基であり、Ｃはグルタミン酸残基、アスパラギン酸残基またはホスホアミノ残基から選択される。ホスホアミノ残基は何れも、独立してホスホセリル残基である場合がある。望ましくは、Ｂは、その側鎖が比較的大きくなく、疎水性でもない残基である。これは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、ＧｌｎまたはＬｙｓである場合がある。
【００３７】
別の実施形態において、配列中のホスホアミノ酸の少なくとも２つは、好ましくは連続している。好ましくは、ホスホペプチドは、配列Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅを含み、式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、独立してホスホセリン、ホスホトレオニン、ホスホチロシン、ホスホヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギン酸であり、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも２つ、好ましくは３つは、ホスホアミノ酸である。好ましい実施形態において、ホスホアミノ酸残基は、ホスホセリン残基、最も好ましくは３つの連続したホスホセリン残基である。又、Ｄ及びＥが独立してグルタミン酸またはアスパラギン酸であることも好ましい。
【００３８】
又、本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」（またはその文法的な派生語）という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という用語と同等であり、交換可能に使用される場合があり、その他の要素または特徴が存在することを除外するものとはみなされないことも理解されるであろう。
【００３９】
一実施形態において、ＡＣＰまたはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）によって安定させられ、これは完全なカゼインまたはカゼインのフラグメントの形態であり、好ましくは、形成された複合体は化学式［ＣＰＰ（ＡＣＰ）８］ｎまたは［（ＣＰＰ）（ＡＣＦＰ）８］ｎ（式中、ｎは１以上、例えば６である）を有する。コア粒子が凝集し、水中で懸濁する大きな（例えば１００ｎｍ）コロイド粒子を形成する場合、形成された複合体はコロイド複合体である場合もある。従って、ＰＰは、カゼインタンパク質であってもよければ、ポリホスホペプチドであってもよい。
【００４０】
ＰＰは、任意の供給源に由来する場合があり、これは、完全長のカセインポリペプチドを含めた、更に大きなポリペプチドという状態で存在する場合もあれば、或いはトリプシンまたはその他の酵素の若しくは化学的なカゼイン消化物、またはホスフィチンのようなその他のホスホアミノ酸リッチタンパク質により、または化学合成若しくは組み換え合成により単離される場合もある（但し、上記の配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−または−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−を含むものとする）。このコア配列に隣接する配列は、任意の配列である場合がある。しかしながら、αＳ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αＳ２（４６−７０）［３］及びαＳ２（１−２１）［４］におけるそれらの隣接配列が好ましい。隣接配列は、１つ以上の残基の削除、付加または同類置換により、必要に応じて改変される場合がある。隣接領域のアミノ酸組成及び配列は、重要でない。
【００４１】
同類置換の例を以下の表１に示す。
【００４２】
【化２】
【００４３】
【化３】
隣接配列は又、非天然のアミノ酸残基も含む場合がある。遺伝子コードによってコード化されない一般的に見られるアミノ酸には、以下が含まれる：
Ｇｌｕ及びＡｓｐの２−アミノアジピン酸（Ａａｄ）；
Ｇｌｕ及びＡｓｐの２−アミノピメリン酸（Ａｐｍ）；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸の２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸の２−アミノヘプタン酸（Ａｈｅ）；
Ｇｌｙの２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；
Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅのシクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；
Ａｒｇ及びＬｙｓのホモアルギニン（Ｈａｒ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓの２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ及びＡｌａのＮ−エチルグリシン（ＥｔＧｌｙ）；
Ａｓｎ及びＧｌｎのＮ−エチルアスパラギン酸（ＥｔＡｓｎ）；
Ｌｙｓのヒドロキシルリシン（Ｈｙｌ）；
Ｌｙｓのアロヒドロキシルリシン（ＡＨｙｌ）；
Ｐｒｏ、Ｓｅｒ及びＴｈｒの３−（及び４−）ヒドロキシプロリン（３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ）；
Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＶａｌのアロイソロイシン（ＡＩｌｅ）；
Ａｌａのｐ−アミジノフェニルアラニン；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＡｌａのＮ−メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ、サルコシン）；
ＩｌｅのＮ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸のノルバリン（Ｎｖａ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸のノルロイシン（Ｎｌｅ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓのオルニチン（Ｏｒｎ）；
Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎのシトルリン（Ｃｉｔ）及びメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；
ＰｈｅのＮ−メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、トリメチルフェニルアラニン、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ）フェニルアラニン、トリフルオリルフェニルアラニン。
【００４４】
一実施形態において、ＰＰは、αＳ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αＳ２（４６−７０）［３］及びαＳ２（１−２１）［４］からなる群から選択される１つ以上のホスホペプチドである。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、安定化ＡＣＦＰまたはＡＣＰ複合体は、磨歯剤、口内洗浄剤、または虫歯、歯の腐食、歯の浸食またはフッ素沈着の予防及び／または処置に有用な口内用製剤のような経口組成物に組み込まれる。ＡＣＦＰまたはＡＣＰ複合体は、組成物を０．０１〜５０重量％、好ましくは１．０〜５０重量％含む場合がある。経口組成物に関しては、投与されるＣＰＰ−ＡＣＰ及び／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの量は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは１．０〜５０重量％である。特に好ましい実施形態において、本発明の経口組成物は、約２％のＣＰＰ−ＡＣＰ、ＣＰＰ−ＡＣＦＰまたはその両方の混合物を含む。上記の薬剤を含む本発明の経口組成物は、練り歯磨、歯磨粉及び液状歯磨のような磨歯剤、口内洗浄剤、トローチ、チューインガム、歯科用軟膏、歯肉マッサージクリーム、うがい錠剤、乳製品及びその他の食品を含めた、口内に適用可能な種々の形態で調製及び使用される場合がある。本発明による経口組成物は、特定の経口組成物の種類及び形状に応じて、周知の成分を更に含む場合もある。
【００４６】
本発明の特定の好ましい形態において、経口組成物は、口内洗浄剤またはリンス液のような実質的に液体の性質である場合がある。このような調剤品において、ビヒクルは一般的に、望ましくは以下に記載の湿潤剤を含む水アルコール混合物である。一般的に、水とアルコールの重量比は、約１：１〜約２０：１の範囲内にある。この種類の調剤品における水アルコール混合物の総重量は、一般的に調剤品の約７０〜約９９．９重量％の範囲内にある。アルコールは、一般的にエタノールまたはイソプロパノールである。エタノールが好ましい。
【００４７】
本発明のこのような液体及びその他の調剤品のｐＨは、一般的に約５〜約９、通常は約５．０〜７．０の範囲内にある。ｐＨは、酸（例えば、リン酸、クエン酸または安息香酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム）で制御することもできれば、または（クエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、または重炭酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等で）緩衝させることもできる。
【００４８】
本発明のその他の望ましい形態において、安定化ＡＣＰまたは安定化ＡＣＦＰ組成物は、歯磨粉、歯科用錠剤または練り歯磨（歯科用クリーム）またはジェル歯磨きのような、実質的に固体またはペースト状の性質である場合がある。このような固体またはペースト状の経口調剤品のビヒクルは一般的に、歯に許容される研磨剤を含む。研磨剤の例には、水溶性のメタリン酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム二水和物、リン酸二カルシウム無水物、ピロリン酸カルシウム、オルトリン酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、炭酸カルシウム、アルミナ水和物、か焼アルミナ、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸ジルコニウム、シリカ、ベントナイト、及びそれらの混合物がある。その他の好適な研磨剤には、メラミンホルムアルデヒド、フェノールホルムアルデヒド及び尿素ホルムアルデヒドのような粒子状熱硬化性樹脂、並びに架橋ポリエポキシド及びポリエステルが含まれる。好ましい研磨剤には、最高約５ミクロンの粒径、最高約１．１ミクロンの平均粒径、及び最高約５０，０００ｃｍ２／ｇの表面積を有する結晶シリカ、並びにシリカゲルまたはコロイドシリカ、及び複合アモルファスアルカリ金属アルミノケイ酸塩が含まれる。
【００４９】
透明ジェルが使用される場合、Ｓｙｌｏｉｄ ７２及びＳｙｌｏｉｄ ７４としてＳＹＬＯＩＤという商標で市販されるもの、またはＳａｎｔｏｃｅｌ １００としてＳＡＮＴＯＣＥＬという商標で市販されるもののようなコロイドシリカの研磨剤、アルカリ金属アルミノケイ酸塩複合体が特に有用である。なぜなら、これらは、磨歯剤で通常使用されるゲル化剤（水及び／または湿潤剤含有）液体系の屈折率に近い屈折率を有するためである。
【００５０】
所謂「非水溶性」研磨剤の多くは、性質上陰イオン性であり、少量の水溶性物質も含んでいる。従って、非水溶性メタリン酸ナトリウムは、例えばＴｈｏｒｐｅ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ９，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．５１０〜５１１に説明される通り、任意の好適な様式で形成される場合がある。マドレル塩及びクロール塩として知られる非水溶性メタリン酸ナトリウムの形態は、好適な材料の更なる例である。これらのメタリン酸塩は、水において極微小な溶解度を示し、そのため一般的には非水溶性メタリン酸塩（ＩＭＰ）と呼ばれる。通常は、最高４重量％までの数重量％で、少量の水溶性リン酸塩物質が不純物としてその中に存在する。非水溶性メタリン酸塩の場合に水溶性トリメタリン酸ナトリウムを含むと考えられる水溶性リン酸塩物質の量は、望ましい場合水による洗浄によって低減または排除される場合がある。非水溶性アルカリ金属メタリン酸塩は、一般的に物質の１％以下が３７ミクロンより大きいような粒径の粉末状で使用される。
【００５１】
研磨剤は一般的に、固体組成物またはペースト状組成物中に約１０〜約９９重量％の濃度で存在する。好ましくは、練り歯磨中に約１０〜約７５％の量で、歯磨粉中に約７０〜約９９％の量で存在する。練り歯磨において、研磨剤が本来的にシリカを含む場合には、一般的に約０〜３０重量％の量で存在する。その他の研磨剤は、一般的に約３０〜７５重量％の量で存在する。
【００５２】
練り歯磨において、液体ビヒクルは、一般的に調剤品の約１０〜約８０重量％の範囲内にある量の水及び湿潤剤を含む場合がある。グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール及びポリプロピレングリコールが、好適な湿潤剤／担体の例である。又、水、グリセリン及びソルビトールの液体混合物も有利である。屈折率が重要である透明ジェルにおいては、約２．５〜３０重量％の水、０〜約７０重量％のグリセリン、及び約２０〜８０重量％のソルビトールが、好ましくは使用される。
【００５３】
練り歯磨、クリーム及びジェルは、一般的に約０．１〜約１０重量％、好ましくは約０．５〜約５重量％の割合で天然または合成の増粘剤またはゲル化剤を含む。好適な増粘剤には、合成ヘクトライト、例えばＬａｐｏｒｔｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ が販売するＬａｐｏｎｉｔｅ（例えばＣＰ、ＳＰ ２００２、Ｄ）として入手可能な合成コロイドマグネシウムアルカリ金属ケイ酸塩複合体がある。Ｌａｐｏｎｉｔｅ Ｄは、約５８．００重量％のＳｉＯ２、約２５．４０重量％のＭｇＯ、約３．０５重量％のＮａ２Ｏ、約０．９８重量％のＬｉ２Ｏ、並びに若干の水及び少量の金属である。真の比重は２．５３であり、これは湿度８％において１．０ｇ／ｍｌの見掛けバルク密度を有する。
【００５４】
その他の好適な増粘剤には、アイルランド苔、イオタカラギーナン、トラガカント、デンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースが（例えば、Ｎａｔｒｏｓｏｌとして販売）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び微粉Ｓｙｌｏｉｄ（例えば２４４）のようなコロイドシリカが含まれる。又、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール及びヘキシレングリコールのような湿潤剤ポリオール、メチルセロソルブ及びエチルセロソルブのようなセロソルブ、オリーブオイル、蓖麻子油及びワセリンのような直鎖に少なくとも約１２個の炭素を含む植物油及びワックス、並びに酢酸アミル、酢酸エチル及び安息香酸ベンジルのようなエステルを例とする可溶化剤も含まれる場合がある。
【００５５】
従来のように、経口調剤品は通常、好適なラベルを貼ったパッケージで販売されるか、その他の方法で流通されることが理解されるであろう。従って、口内用リンス液の容器は、それが実質的に口内用リンス液または口内洗浄剤であることを記載し、その使用上の注意事項を有するラベルが貼られている。そして練り歯磨、クリームまたはジェルは通常、押出チューブ、一般的には内容量を計測するためのアルミニウム製、鉛合板製若しくはプラスチック製またはその他の絞り器、ポンプ若しくは圧力ディスペンサーの中にあり、それが実質的に練り歯磨、ジェルまたは歯用クリームであることを記載したラベルが貼られている。
【００５６】
本発明の組成物で有機界面活性剤を使用することで、予防作用を増大させ、口腔中に活性成分を完全に行きわたらせることを助け、本組成物をより美容上許容されるようにする場合がある。有機界面活性剤は、好ましくは本質的に陰イオン性、非イオン性または両性であり、好ましくは活性剤と相互に作用しない。組成物に洗浄性及び起泡性をもたらす洗浄材料を界面活性剤として使用することが好ましい。アニオン界面活性剤の好適な例には、水素化ココナッツオイル脂肪酸のモノサルフェート化されたモノグリセリドのナトリウム塩のような高級脂肪酸モノグリセリドモノサルフェートの水溶性塩；ラウリル硫酸ナトリウムのような高級アルキルサルフェート；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホネート；高級アルキルスルホ−アセテート；１，２−ジヒドロキシプロパンスルホネートの高級脂肪酸エステル；並びに脂肪酸、アルキル基またはアシル基等の中に１２〜１６個の炭素を有するもののような低級脂肪族アミノカルボン酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミドがある。最後に示したアミドの例には、Ｎ−ラウロイルサルコシン；及びＮ−ラウロイルサルコシン、Ｎ−マルミリストイルサルコシン、またはＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム、カリウム及びエタノールアミン塩があり、これらは、石鹸または類似の高級脂肪酸物質を実質的に含まないはずである。本発明の経口組成物におけるこれらのサルコナイト化合物の使用は、特に有利である。なぜなら、これらの物質は、酸溶液における歯エナメル質の溶解度が若干減少することに加えて、含水炭素破壊による口腔における酸形成を抑制する長期の顕著な効果を示すためである。使用に好適な水溶性非イオン性界面活性剤の例には、酸化エチレンと、これと反応し、長い疎水性鎖（例えば約１２〜２０個の炭素原子の脂肪族鎖）を有する種々の反応性水素含有化合物との縮合物である。この縮合物（「ｅｔｈｏｘａｍｅｒ」）は、脂肪酸、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、多価アルコール（例えば、モノステアリン酸ソルビタン）及びポリプロピレンオキシド（例えば、プルロニック物質）とポリ（酸化エチレン）の縮合物のような親水性ポリオキシエチレン部分を含む。
【００５７】
界面活性剤は、一般的に約０．１〜５重量％の量で存在する。界面活性剤は、本発明の活性剤の溶解を助け、それによって必要とされる可溶化湿潤剤の量を減らす場合があることは注目に値する。
【００５８】
漂白剤、防腐剤、シリコン、葉緑素化合物及び／または尿素のようなアンモニア化物質、リン酸ジアンモニウム、及びそれらの混合物のようなその他種々の物質が、本発明の経口調剤品に組み込まれる場合がある。これらのアジュバントは、存在する場合、望ましい特性及び特徴に実質的に悪影響を与えない量で調剤品に組み込まれる。
【００５９】
任意の好適な香料または甘味料も使用される場合がある。好適な香料成分の例には、例えば、スペアミント、ペパーミント、ウインターグリーン、ササフラス、クローブ、セージ、ユーカリ、マージョラム、シナモン、レモン及びオレンジのオイルのような香料オイル、並びにサリチル酸メチルが含まれる。好適な甘味料には、ショ糖、乳糖、マルトース、ソルビトール、キシリトール、シクラミン酸ナトリウム、ペリラルチン、ＡＭＰ（アスパルチル‐フェニルアラニン、メチルエステル）、サッカリン等が含まれる。好適には、香料及び甘味剤はそれぞれまたは一緒に、調剤品を約０．１〜５％以上含む。
【００６０】
本発明は又、タンパク質破壊剤を更に含む上記のようなＡＣＰまたはＡＣＦＰ組成物も提供する。一実施形態において、タンパク質破壊剤は漂白剤である。好ましい実施形態において、漂白剤はＮａＯＣｌである。
【００６１】
本発明の組成物は又、例えば、加熱されたガム基礎剤の中で攪拌するか、またはガム基礎剤の外面を覆うことにより、トローチ剤、またはチューイングガムまたはその他の製品に組み込んでもよい。これらの例には、望ましくは従来の可塑剤または柔軟剤、砂糖またはブドウ糖、ソルビトール等のようなその他の甘味料を含むジェルトン、ゴムラテックス、ビニライト樹脂等がある。
【００６２】
更なる態様において、本発明は、タンパク質破壊剤及び薬学的に許容される担体と共に、上記のようなＡＣＦＰ及び／またはＡＣＰ複合体の何れかを含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。このような組成物は、歯科用組成物、対齲蝕原性組成物及び治療組成物からなる群から選択される場合がある。歯科用組成物または治療組成物は、ジェル、液体、固体、粉末、クリームまたはトローチ剤の形態をとる場合がある。治療組成物は又、錠剤またはカプセルの形態をとる場合もある。一実施形態において、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体は、このような組成物の実質的に唯一の再石灰化活性成分である。例えば、以下を含むクリーム製剤が使用される場合がある：水、グリセリン；ＣＰＰ−ＡＣＰ；Ｄ−ソルビトール；二酸化ケイ素；カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）；プロピレングリコール；二酸化チタン：キシリトール；リン酸；グアーガム：酸化亜鉛；サッカリンナトリウム；エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート；酸化マグネシウム；ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート。
【００６３】
本発明は、虫歯、歯の浸食及びフッ素沈着の何れか１つ以上の処置または予防に使用するための説明書を備えた上記の製剤も更に含む。
【００６４】
一実施形態において、本組成物の活性成分は、本質的にタンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰからなる。理論または作用様式に拘束されることなく、安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ及びタンパク質破壊剤は、本発明の上記実施形態の治療効果または予防効果に重要であり、従って（必要に応じて担体、賦形剤等と共に）本質的にそれらの成分からなる実施形態は、本発明の適用範囲内に含まれると考えられる。
【００６５】
本発明は又、虫歯、フッ素沈着及び歯の浸食の１つ以上を処置または予防するためのキットであって、薬学的に許容される担体中に（ａ）タンパク質破壊剤及び（ｂ）ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含むキットに関する。望ましくは、このキットは、このような処置を必要としている患者の歯表面の石灰化に使用するための説明書を更に含む。一実施形態において、阻害剤及び複合体は、患者の処置に好適な量で存在する。
【００６６】
更なる態様においては、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着のそれぞれの１つ以上を処置または予防する方法であって、ＡＣＰまたはＡＣＦＰ複合体または組成物を投与した後に、対象の歯にタンパク質破壊剤を投与することを含む方法が提供される。複合体の全身投与が好ましい。この方法には、好ましくは上記のような製剤中での複合体の投与が含まれる。
【００６７】
更なる態様においては、第１組成物の製造におけるタンパク質破壊剤の使用、及び第２組成物の製造における安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）の使用が提供される。第１組成物及び第２組成物は、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着の１つ以上の処置及び／または予防のために使用される。ここで、第１組成物は、第１組成物は、第２組成物の前に歯表面に塗布される。
【００６８】
更なる態様においては、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着の１つ以上を処置及び／または予防するための、タンパク質破壊剤を含む第１組成物及び安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を含む第２組成物であって、第１組成物が第２組成物の前に歯表面に塗布されるものが提供される。
【００６９】
本明細書は、ヒトにおける適用に特異的に言及しているが、本発明は、獣医の目的においても有用であることは、明確に理解されるであろう。従って、全ての態様において、本発明は、牛、羊、馬及び家禽のような家畜に、猫及び犬のようなペット動物に、並びに動物園の動物に有用である。
【００７０】
本発明を以下の非限定的な例を参照して更に説明する。
【００７１】
石灰化組成物の１つの例には、（含有率の多いものから順に）以下を含む組成物がある。
【００７２】
水
グリセリン
ＣＰＰ−ＡＣＰ
Ｄ−ソルビトール
二酸化ケイ素
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）
プロピレングリコール
二酸化チタン
キシリトール
リン酸
グアーガム
酸化亜鉛
サッカリンナトリウム
エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート
酸化マグネシウム
ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート
プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート
このような組成物は、Ｔｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭの商品名でＧＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから販売されている。これは、タンパク質破壊剤の後に使用に好適であり、好適な時間に歯の上に保持されることを容易にするためにペースト状またはクリーム状である。或いは、この石灰化組成物は、次亜塩素酸ナトリウムのようなタンパク質破壊剤を含む場合がある。
【００７３】
本発明の有効性は、以下のように実証される場合がある。
【実施例】
【００７４】
ＦＬＥ（Ｔｈｙｌｓｔｒｕｐ Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ指数、ＴＦ＝３）を有する７本の前臼歯を、オーストラリア メルボルンのＲｏｙａｌ Ｄｅｎｔａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌの１０〜２８才の健康な患者から歯科矯正のために抜いた歯から選択した。抜いた歯について患者の同意を得た上、研究プロトコルは、メルボルン大学の人間研究倫理委員会によって承認された。全ての試料は、付着する柔組織を切除し、室温において１８％（ｗ／ｖ）の酢酸ホルマリン溶液中に保存した。
【００７５】
上記の歯を回転ゴムカップ及び軽石で洗浄し、そして二重脱イオン水（ＤＤＷ）中で濯いだ（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９８８）。水冷式ダイヤモンド刃を使って解剖学的歯冠を歯根から切断した。各々の歯冠を切断し、それぞれＦＬＥを含んでいる１対のエナメル質ブロックを得た。病変の上にわたってＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎ［米国イリノイ州シカゴ］）の長方形の片を置き、ネールバニッシュ（ＲｅｖｌｏｎＴＭ［米国ニューヨーク州］）で、周囲のエナメル質を被覆することによって、４×４ｍｍ２の窓をそれぞれの病変の上に作った。次いで、パラフィルムを慎重に取り除き、対照窓及び試験窓として半分に分けたエナメル質病変の窓を露出させた。対照窓をネールバニッシュで被覆した。各試料の２つの病変を無作為に以下の２つの再石灰化群の１つに割り当てた：第Ｉ群−５％（ｗ／ｖ）のＣＰＰ−ＡＣＦＰで処置、及び第ＩＩ群−５．２５％のＮａＯＣｌで前処置した直後に５％（ｗ／ｖ）のＣＰＰ−ＡＣＦＰで処置。
【００７６】
ＣＰＰ−ＡＣＦＰはＲｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．（オーストラリア メルボルン）から入手したもので、４７．６重量％のＣＰＰ、１５．７重量％のＣａ２＋、２２．９重量％のＰＯ４３−、及び１．２重量％のＦ−を含む。ＣＰＰ−ＡＣＦＰを蒸留及び脱イオンされた水に５％（ｗ／ｖ）に溶かし、そしてＨＣｌでｐＨ７．０に調整した。第１群では、各試料を、３７℃にてプラスチックバイアル瓶中にある２ｍｌの５％（ｗ／ｖ）濃度ＣＰＰ−ＡＣＦＰに入れた。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ溶液を１０日間毎日取り替えた。第２群では、各試料を５．２５％のＮａＯＣＩ溶液に２０分間入れ、濯いだ後、３７℃にてプラスチックバイアル瓶中にある２ｍｌの５％（ｗ／ｖ）濃度ＣＰＰ−ＡＣＦＰに入れた。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ溶液を１０日間毎日取り替えた。
【００７７】
彩度計（ミノルタ彩度計ＣＲ２４１、Ｍｉｎｏｌｔａ［日本］）を使用して、表面反射率を記録した。表面反射率測定は、１９７８年にＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｄｅ Ｌ’ＥｃｌａｉｒａｇｅによってＬ＊ａ＊ｂ＊色空間で確立された。そして測定は、３つの色次元で人間の色知覚に関係するものである（Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｌ’Ｅｃｌａｉｇｅ，１９７８）。Ｌ＊値は白色から黒色までの色勾配を表す。ａ＊値は緑から赤までの色勾配を表す。そしてｂ＊値は青から黄までの色勾配を表す（Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｌ’Ｅｃｌａｉｇｅ，１９７８）。この試験においては、明るい色が高い測定値を有し、暗い色が低い測定値を有するＬ＊値の測定のみを使用した。彩度計における試料が再現可能な位置にあるのを確実にするために、各試料のワックスモールド（ｗａｘ ｍｏｌｄ）を準備し、保存した。全ての試料を、各測定の前に歯科用トリプレットシリンジで６０秒間風乾させた。個々の試料を処置の前後に１０回置き換え、そして色反射率Ｌ＊値を記録した。
【００７８】
各試料を石灰化溶液から取り出し、６０秒間ＤＤＷで濯ぎ、そして吸取紙で乾燥するまで吸い取った。対照窓を覆うネールバニッシュをアセトンで緩徐に取り除いた。次いで、対照窓及び試験窓を、それらの窓の間の中線を通って切断することにより分離した。次いで、病変の窓が並列し、低温硬化メタクリレート樹脂（Ｐａｌａｄｕｒ、Ｈｅｒａｕｓ Ｋｕｌｚｅｒ［ドイツ］）に埋め込まれ状態で、２つの半片を置いた。次いで、２対のエナメル質の半片を切断し、マイクロラジオグラフィー及びマイクロ濃度測定画像解析に供し、Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）の記載の通り正確にミネラル含有量を決定した。
【００７９】
各病変のそれぞれの極小Ｘ線撮影イメージ（対照及び試験）の中線に近い欠損のない領域を選択し、６回スキャンした（Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。各スキャンにより、エナメル質表面から中央のエナメル質の範囲まで完全なフッ素病変を含むとみなされる２００の測定値を得た。（ＣＰＰ−ＡＣＦＰによって処理された）試験病変部を、対照（無処置）病変部と正確に同じ深さにおいてスキャンした。各スキャンから得られたグレー値を、各断片と共に含まれるアルミニウムステップウェッジ（ｓｔｅｐｗｅｄｇｅ）のイメージを使ってアルミニウムの同等の厚さ（ｔＡ）に変換した（Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。Ａｎｇｍａｒ，ｅｔ ａｌ．（１９６３）の化学式を使用して、以下のような各測定値に対するミネラルの体積率を得た：Ｖ＝（５２．７７（ｔＡ）−４．５４）／ｔＳ；式中、Ｖ＝割合としてのミネラルの体積；ｔＡ＝スキャンされたグレー値から得たアルミニウムの相対的な厚さ；ｔＳ＝断片の厚さ（８０μｍ）。
【００８０】
各病変に対する［（障害深さ（ｍｍ）に対する体積％ｍｉｎ］の濃度（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ）プロフィールから、ＤＺ値を台形積分（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）を使って計算した。対照窓における未処置フッ素沈着エナメル質のプロフィールの下にある領域と隣接した通常のエナメル質との間の違いをＤＺｆとした。そして、試験窓におけるＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置フッ素沈着エナメル質の下にある領域と隣接した通常のエナメル質との間の違いをＤＺｒとした。従って、フッ素病変の石灰化率（％Ｍ）は、（１−ＤＺｒ／（ＤＺｆ）×１００であった（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）。
【００８１】
マイクロラジオグラフィーの後、対照と石灰化ＦＬＥとの両方を含む断片を、前記のようにエネルギー分散型Ｘ線分析（ＥＤＡＸ）に供した（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）。
【００８２】
平均Ｌ値を、分散（ｖａｒｉａｎｃｅ）の一方向の分類分析（ＡＮＯＶＡ）を使用してシェッフェ多重比較で比較した。平均％Ｍ値も又一方向のＡＮＯＶＡを使って比較した。全体的な平均Ｌ＊値及び％Ｍ値を、１対のデータスチューデントｔ検定を使って分析した。
【００８３】
未処置のエナメル質フッ素病変のＬ＊値は、７９．１〜８７．８の範囲にあり、８３．６±３．６の平均値であった（表１）。５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰによる処置により、Ｌ＊値は、７４．６±４．１まで際立って減少した。それは、通常のエナメル質とあまり異なっていなかった（表１）。ＮａＯＣｌの前処置の後に５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置することにより、Ｌ＊値は、７２．６±５．６まで際立って減少した。それも又、通常のエナメル質とあまり異なっていなかった（表１）。２つの後処置（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ及びＮａＯＣｌ／ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）群に対するＬ＊値には、有意差がなかった。両方の処置群の表面エナメル質の外観は、両方ともが通常の半透明のエナメル質の外観を示しており、実質的に良くなっていた。
【００８４】
健全なエナメル質のミネラル含有量と前処置病変（ＤＺｆ）のミネラル含有量との間の差は、４２６〜１２０４８体積％ｍｉｎの間で変化した。表面反射率（Ｌ＊）と未処置のＦＬＥのＤＺｆとの間には、相関性は見出だされなかった。５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰによる処置は、フッ素病変のミネラル含有量を実質的に増やし、喪失したミネラルの３２．７％〜５５．５％（平均値４４．８±１０．６）を復元した（表２）。喪失したミネラルの１００％を復元させれば、ミネラル含有量に関して全部の病変を健全なエナメル質に変えるであろう。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置の前のＮａＯＣｌによる前処置は、喪失したミネラルの７３．６％〜９２．８％（平均値８０．１±７．８）のミネラル取り込み（ｕｐｔａｋｅ）を増加させた。横断切片の石灰化された病変についてのエネルギー分散型Ｘ線分析により、ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置によって形成されたミネラルが、フッ化物を含むリン灰石であったことを確認した。
【００８５】
【化４】
【００８６】
【化５】
診療所では、歯エナメル質の再石灰化処置を必要とする患者の一例として、以下の手順により患者を処置する。
【００８７】
１． ラバーダムを使用して隔離した、処置を必要とするエナメル領域を、５％のＮａＯＣｌ溶液で５分間にわたり前処置する。
【００８８】
２． 湿らせた綿棒を使用して、エナメル領域からＮａＯＣｌ溶液を除去する。
【００８９】
３． ＣＰＰ−ＡＣＰを含有するクリームであるＴｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭ（ＧＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をエナメル質表面にすぐに５分間で塗布する。その後、患者はこのＴｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭを４週間にわたり毎晩濯がずに塗布する。
【００９０】
本明細書に開示及び定義される本発明は、本文または図面に記載され、これらから明らかになる複数の個々の特徴の代替となる組み合わせ全てに適用されることが理解されるであろう。これらの種々の組み合わせは全て、本発明の代替となる種々の態様を構成する。
【００９１】
参考文献
【００９２】
【化６】
【００９３】
【化７】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯表面、特に歯エナメル質を石灰化する方法に関する。虫歯、歯の浸食及びフッ素沈着により生じた歯エナメル質の（表面下の病変を含めた）低石灰化病変を石灰化する方法も又提供される。
【背景技術】
【０００２】
背景
低石灰化病変の通常の原因は、カリエス及びフッ素沈着である。
【０００３】
虫歯は、通常、歯垢病原性細菌によって食事糖分の発酵由来で作り出された有機酸による歯の堅い組織の脱灰から始まる。虫歯は、依然として主要な公衆衛生の問題である。更に、修復された歯表面は、修復部の周りにそれ以上の虫歯が存在する可能性がある。虫歯の流行は、大部分の先進国におけるフッ化物の使用により減少したものの、この疾患は重要な公衆衛生の問題のままである。歯の浸食または腐食は、食事または逆流した酸による歯ミネラルの損失である。歯過敏症は、保護石灰化層であるセメント質の喪失により露出した象牙質細管が原因である。歯石は、歯表面上へのリン酸カルシウムミネラルの望ましくない堆積である。従って、これらの病態、虫歯、歯の浸食、歯過敏症及び歯石は全て、リン酸カルシウムレベルの不均衡によるものである。
【０００４】
エナメル質フッ素沈着（斑点形成）は、ほぼ１世紀前から認識されているが、フッ化物が病因であることは、１９４２年まで認識されていなかった（Ｂｌａｃｋ ａｎｄ ＭｃＫａｙ，１９１６）。フッ素沈着の特徴的な外観は、他のエナメル質障害から区別することができる（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９１）。エナメル質フッ素沈着病変（ＦＬＥ）の臨床的特徴は、周波条に続く細い不透明な線からチョーク様白色エナメル質までの範囲内にある連続体を示す（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｇｉａｍｂｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９５）。比較的高度に石灰化されているエナメル質外面と低石灰化表面下とがフッ素沈着病変において存在する状態は、初期のエナメル質「白斑」カリエス病変に似ている（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０）。症状がひどくなるにつれて、病変に関与するエナメル質の深さと低石灰化の程度の両方が増大する（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｇｉａｍｂｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９５）。フッ素沈着の進行は、フッ化物に曝される量、持続時間及びタイミングに非常により大きく異なり（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ａｏｂａ ａｎｄ Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，２００２）、そして血清フッ素濃度の上昇に関係していると考えられている。チョーク様「白斑」病変は又、抗生物質による処置または発熱の後等に子供の歯が発育する際にも形成される場合がある。このような病変は、歯エナメル質の低石灰化の領域を示している。
【０００５】
病変の重症度に依存して、フッ素沈着は、外面エナメル質の修復置換または微細磨耗により臨床的に処置されている（Ｄｅｎ Ｂｅｓｔｅｎ ａｎｄ Ｔｈａｒｉａｎｉ，１９９２；Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９９６）。これらの処置は、歯組織の修復または除去を伴うため満足のいくものではない。望ましいのは、自然な外観及び構造を作り出すために低石灰化エナメル質を石灰化する処置である。
【０００６】
カゼインホスホペプチド及びアモルファスリン酸カルシウムの特定の複合体（「ＣＰＰ−ＡＣＰ」、ＲｅｃａｌｄｅｎｔＴＭとして市販）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの、そしてｉｎ ｓｉｔｕのエナメル質の表面下病変を再石灰化することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９８；Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．，２００３）。
【０００７】
メルボルン大学の名で出願された国際公開ＷＯ９８／４０４０６（内容全体が参考として本明細書に組み入れられている）は、アルカリｐＨにおいて生成されたカゼインホスホペプチド−アモルファスリン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＣＰＰ安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）について記載している。このような複合体は、エナメル質脱灰を予防し、動物及びヒトのｉｎ ｓｉｔｕカリエスモデルにおけるエナメル質表面下病変の再石灰化を促進することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９８）。
【０００８】
複合体の形成において活性であるＣＰＰは、それらがカゼインタンパク質の全長の一部であるか否かにかかわらず、複合体を形成する。全長のカゼインがトリプシン消化された後に単離され得る活性（ＣＰＰ）の例は、米国特許第５，０１５，６２８号（特許文献１）で特定されており、この例には、Ｂｏｓ αＳ１−カゼインＸ−５Ｐ（ｆ５９−７９）［１］、Ｂｏｓ β−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２５）［２］、Ｂｏｓ αＳ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ４６−７０）［３］、及びＢｏｓ αＳ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２１）［４］のペプチドが含まれる。各配列は以下の通りである：
【０００９】
【化１】
多くの場合、石灰化イオンが歯エナメル質に接近することは、エナメル質の表面上にわたって形成される唾液タンパク質の（ペリクルと呼ばれる）層により制限され得る。ペリクルのタンパク質も又、表面下のエナメル質病変において蓄積する可能性があり、それによってこれらの病変の石灰化を阻害する。このようなタンパク質の蓄積は、長期にわたって変色を示し、歯に醜い斑点を残す可能性があり得る。従って、変色を取り除き、再石灰化イオンのエナメル質への接近が制限されないようにするためには、これらのタンパク質を取り除く必要がある。これら及びその他の既知の処置の制限を克服するために、この目的に向けた研究が行われている。
【特許文献１】米国特許第５，０１５，６２８号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の要旨
一態様において、本発明は、歯表面にタンパク質破壊剤を接触させる、及び歯表面に安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を接触させることを含めた、歯表面または表面下を石灰化する方法を提供する。歯表面というのは、好ましくは歯エナメル質のことである。一実施形態において、歯表面は、カリエス、歯浸食またはフッ素沈着により生じる病変のようなエナメル質における病変である。
【００１１】
歯表面の石灰化は、安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰのような再石灰化物質を塗布する前に、歯表面からペリクルタンパク質を破壊することによって顕著に促進することができる。特に、安定化可溶型のＡＣＰ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＡＣＦＰ（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）によるエナメル質の石灰化は、アルカリ性漂白剤のようなタンパク質破壊剤によるエナメル質表面の前処置によって促進されることが見出だされている。
【００１２】
好ましくは、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定化されている。好ましくは、ホスホペプチド（以下に定義）は、カゼインホスホペプチドである。
【００１３】
好ましい実施形態において、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチドで安定化されたＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体の形態のものである。
【００１４】
好ましくは、ＡＣＰの相は、主に塩基相であり、ここでＡＣＰは、化学種Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＯＨ−を主に含む。ＡＣＰの塩基相は、以下の一般式を有する場合がある：［Ｃａ３（ＰＯ４）２］Ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）］（式中、ｘ≧１であり、好ましくはｘ＝１〜５であり、より好ましくはｘ＝１である）。好ましくは、上記化学式の２つの構成要素は、等しい割合で存在する。従って、一実施形態において、ＡＣＰの塩基相は、化学式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）を有する。
【００１５】
好ましくは、ＡＣＦＰの相は、主に塩基相であり、ここでＡＣＦＰは、化学種Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＦ−を主に含む。ＡＣＦＰの塩基相は、以下の一般式を有する場合がある：［Ｃａ３（ＰＯ４）２］ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆ］ｙ（式中、ｙ＝１の場合にｘ≧１であるか、またはｘ＝１の場合にｙ≧１であり、好ましくはｙ＝１且つｘ＝１〜３であり、より好ましくはｙ＝１且つｘ＝１である）。好ましくは、上記化学式の２つの構成要素は、等しい割合で存在する。従って、一実施形態において、ＡＣＦＰの塩基相は、化学式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆを有する。
【００１６】
一実施形態において、ＡＣＰ複合体は、本質的にホスホペプチド、カルシウム、リン酸塩、並びに水酸化イオン及び水からなる。
【００１７】
一実施形態において、ＡＣＦＰ複合体は、本質的にホスホペプチド、カルシウム、リン酸塩、フッ化物、並びに水酸化イオン及び水からなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
好適なタンパク質破壊剤は何れも、本発明の方法で使用可能である。この阻害剤は、歯の上のペリクルのような処理する表面にわたって形成されたタンパク質バリアを減縮することが求められる。好適な阻害剤の例には、漂白剤、界面活性剤、カオトロピック剤（例えば、尿素）、リン酸塩高濃縮物、プロテアーゼカクテル（例えば、エンドペプチダーゼ、プロテイナーゼ及びエキソペプチダーゼ）、並びにその他何れかのタンパク質可溶化剤、阻害剤または加水分解剤が含まれる。
【００１９】
好適な漂白剤の例には、次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）、及び過酸化カルバミド漂白剤が含まれる。好ましい実施形態において、漂白剤は、アルカリ性漂白剤である。更なる好ましい実施形態において、アルカリ性漂白剤はＮａＯＣｌである。タンパク質破壊剤は、タンパク質、特にペリクルのタンパク質を可溶化させて、歯表面から部分的または完全に取り除くために作用する。
【００２０】
本発明の更なる態様においては、歯表面を石灰化する方法であって、タンパク質破壊剤、及びＡＣＰまたはＡＣＦＰの供給源を提供することを含む方法が提供される。好ましい実施形態において、歯表面とはエナメル質である。
【００２１】
本発明の更なる態様においては、フッ素沈着を処置する方法であって、歯エナメル質におけるフッ素沈着病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２２】
本発明の更なる態様においては、虫歯を処置する方法であって、歯エナメル質におけるカリエス病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２３】
本発明の更なる態様においては、歯の浸食を処置する方法であって、浸食により生じた歯エナメル質における病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２４】
本発明の更なる態様においては、歯エナメル質上の白斑病変を低減させる方法であって、白斑病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２５】
本発明の更なる態様においては、歯エナメル質における病変部を再石灰化させる方法であって、病変部と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む方法が提供される。
【００２６】
好ましくは、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、ホスホペプチドによって安定化させる。好ましい実施形態において、ホスホペプチドは、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰまたはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチドで安定化されたＡＣＰまたはＡＣＦＰ複合体の形態である。
【００２７】
一実施形態において、タンパク質破壊剤はＮａＯＣｌである。約１〜２０％の濃度のＮａＯＣｌが使用される場合がある。或いは、ＮａＯＣｌの濃度は１〜１０％である。好ましい実施形態において、約５％の濃度のＮａＯＣｌが使用される。
【００２８】
タンパク質破壊剤は、約１〜６０分、または約１〜３０分にわたり歯表面と接触させる場合がある。一実施形態において、タンパク質破壊剤は、約２０分にわたり歯表面と接触させる。
【００２９】
好ましくは、安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰは、約１分〜２時間、または５分〜６０分、または約１０分にわたり歯表面と接触させる。安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰは、１日〜数カ月にわたり歯表面に繰り返し塗布される場合がある。
【００３０】
一実施形態において、安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰは、歯表面とタンパク質破壊剤とを接触させた後に、歯表面と接触させる。
【００３１】
好ましい実施形態において、タンパク質破壊剤は、歯表面と安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰとを接触させる前に１〜６０分、１〜３０分、または１〜５分にわたり、歯表面と接触させる。
【００３２】
本発明の更なる態様においては、歯表面を石灰化する方法であって、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体をタンパク質破壊剤で前処置した歯表面に塗布することを含む方法が提供される。好ましくは、歯表面とは歯エナメル質である。好ましい実施形態において、歯表面は、白斑病変；フッ素病変；カリエス病変；または歯浸食により生じた病変からなる群から選択される病変を含む歯エナメル質である。更なる好ましい実施形態において、タンパク質破壊剤は漂白剤である。
【００３３】
一実施形態において、歯表面はこのような処置を必要としている。本発明には又、フッ素沈着、虫歯、象牙質過敏性または歯結石を患う対象を処置する方法も含まれる。
【００３４】
理論または作用様式によって拘束されることなく、歯エナメル質をタンパク質破壊剤で前処置することによって、部分的または完全にエナメル質の脱タンパク質が生じ、表面下のエナメル質へのカルシウム及びリン酸塩の拡散が促進されることが理解される。
【００３５】
更に、安定化ＡＣＦＰで歯エナメル質を処置することにより、フッ素リン灰石が生成され、これが通常の歯エナメル質よりも酸の攻撃に対して耐性を備えることが理解される。これにより、優れたカリエス耐性を有する歯エナメル質が得られる場合がある。従って、好ましい実施形態において、本発明の方法は、安定化ＡＣＦＰを含む。
【００３６】
本発明の説明において「ホスホペプチド」は、少なくとも１つのアミノ酸がリン酸化されたアミノ酸配列を意味する。好ましくは、ホスホペプチドは、１つ以上のアミノ酸配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−を含み、式中、Ａはホスホアミノ残基であり、Ｂはホスホアミノ残基を含む任意のアミノアシル残基であり、Ｃはグルタミン酸残基、アスパラギン酸残基またはホスホアミノ残基から選択される。ホスホアミノ残基は何れも、独立してホスホセリル残基である場合がある。望ましくは、Ｂは、その側鎖が比較的大きくなく、疎水性でもない残基である。これは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、ＧｌｎまたはＬｙｓである場合がある。
【００３７】
別の実施形態において、配列中のホスホアミノ酸の少なくとも２つは、好ましくは連続している。好ましくは、ホスホペプチドは、配列Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅを含み、式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、独立してホスホセリン、ホスホトレオニン、ホスホチロシン、ホスホヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギン酸であり、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも２つ、好ましくは３つは、ホスホアミノ酸である。好ましい実施形態において、ホスホアミノ酸残基は、ホスホセリン残基、最も好ましくは３つの連続したホスホセリン残基である。又、Ｄ及びＥが独立してグルタミン酸またはアスパラギン酸であることも好ましい。
【００３８】
又、本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」（またはその文法的な派生語）という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という用語と同等であり、交換可能に使用される場合があり、その他の要素または特徴が存在することを除外するものとはみなされないことも理解されるであろう。
【００３９】
一実施形態において、ＡＣＰまたはＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）によって安定させられ、これは完全なカゼインまたはカゼインのフラグメントの形態であり、好ましくは、形成された複合体は化学式［ＣＰＰ（ＡＣＰ）８］ｎまたは［（ＣＰＰ）（ＡＣＦＰ）８］ｎ（式中、ｎは１以上、例えば６である）を有する。コア粒子が凝集し、水中で懸濁する大きな（例えば１００ｎｍ）コロイド粒子を形成する場合、形成された複合体はコロイド複合体である場合もある。従って、ＰＰは、カゼインタンパク質であってもよければ、ポリホスホペプチドであってもよい。
【００４０】
ＰＰは、任意の供給源に由来する場合があり、これは、完全長のカセインポリペプチドを含めた、更に大きなポリペプチドという状態で存在する場合もあれば、或いはトリプシンまたはその他の酵素の若しくは化学的なカゼイン消化物、またはホスフィチンのようなその他のホスホアミノ酸リッチタンパク質により、または化学合成若しくは組み換え合成により単離される場合もある（但し、上記の配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−または−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−を含むものとする）。このコア配列に隣接する配列は、任意の配列である場合がある。しかしながら、αＳ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αＳ２（４６−７０）［３］及びαＳ２（１−２１）［４］におけるそれらの隣接配列が好ましい。隣接配列は、１つ以上の残基の削除、付加または同類置換により、必要に応じて改変される場合がある。隣接領域のアミノ酸組成及び配列は、重要でない。
【００４１】
同類置換の例を以下の表１に示す。
【００４２】
【化２】
【００４３】
【化３】
隣接配列は又、非天然のアミノ酸残基も含む場合がある。遺伝子コードによってコード化されない一般的に見られるアミノ酸には、以下が含まれる：
Ｇｌｕ及びＡｓｐの２−アミノアジピン酸（Ａａｄ）；
Ｇｌｕ及びＡｓｐの２−アミノピメリン酸（Ａｐｍ）；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸の２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸の２−アミノヘプタン酸（Ａｈｅ）；
Ｇｌｙの２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；
Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅのシクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；
Ａｒｇ及びＬｙｓのホモアルギニン（Ｈａｒ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓの２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ及びＡｌａのＮ−エチルグリシン（ＥｔＧｌｙ）；
Ａｓｎ及びＧｌｎのＮ−エチルアスパラギン酸（ＥｔＡｓｎ）；
Ｌｙｓのヒドロキシルリシン（Ｈｙｌ）；
Ｌｙｓのアロヒドロキシルリシン（ＡＨｙｌ）；
Ｐｒｏ、Ｓｅｒ及びＴｈｒの３−（及び４−）ヒドロキシプロリン（３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ）；
Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＶａｌのアロイソロイシン（ＡＩｌｅ）；
Ａｌａのｐ−アミジノフェニルアラニン；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＡｌａのＮ−メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ、サルコシン）；
ＩｌｅのＮ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸のノルバリン（Ｎｖａ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸のノルロイシン（Ｎｌｅ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓのオルニチン（Ｏｒｎ）；
Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎのシトルリン（Ｃｉｔ）及びメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；
ＰｈｅのＮ−メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、トリメチルフェニルアラニン、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ）フェニルアラニン、トリフルオリルフェニルアラニン。
【００４４】
一実施形態において、ＰＰは、αＳ１（５９−７９）［１］、β（１−２５）［２］、αＳ２（４６−７０）［３］及びαＳ２（１−２１）［４］からなる群から選択される１つ以上のホスホペプチドである。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、安定化ＡＣＦＰまたはＡＣＰ複合体は、磨歯剤、口内洗浄剤、または虫歯、歯の腐食、歯の浸食またはフッ素沈着の予防及び／または処置に有用な口内用製剤のような経口組成物に組み込まれる。ＡＣＦＰまたはＡＣＰ複合体は、組成物を０．０１〜５０重量％、好ましくは１．０〜５０重量％含む場合がある。経口組成物に関しては、投与されるＣＰＰ−ＡＣＰ及び／またはＣＰＰ−ＡＣＦＰの量は、組成物の０．０１〜５０重量％、好ましくは１．０〜５０重量％である。特に好ましい実施形態において、本発明の経口組成物は、約２％のＣＰＰ−ＡＣＰ、ＣＰＰ−ＡＣＦＰまたはその両方の混合物を含む。上記の薬剤を含む本発明の経口組成物は、練り歯磨、歯磨粉及び液状歯磨のような磨歯剤、口内洗浄剤、トローチ、チューインガム、歯科用軟膏、歯肉マッサージクリーム、うがい錠剤、乳製品及びその他の食品を含めた、口内に適用可能な種々の形態で調製及び使用される場合がある。本発明による経口組成物は、特定の経口組成物の種類及び形状に応じて、周知の成分を更に含む場合もある。
【００４６】
本発明の特定の好ましい形態において、経口組成物は、口内洗浄剤またはリンス液のような実質的に液体の性質である場合がある。このような調剤品において、ビヒクルは一般的に、望ましくは以下に記載の湿潤剤を含む水アルコール混合物である。一般的に、水とアルコールの重量比は、約１：１〜約２０：１の範囲内にある。この種類の調剤品における水アルコール混合物の総重量は、一般的に調剤品の約７０〜約９９．９重量％の範囲内にある。アルコールは、一般的にエタノールまたはイソプロパノールである。エタノールが好ましい。
【００４７】
本発明のこのような液体及びその他の調剤品のｐＨは、一般的に約５〜約９、通常は約５．０〜７．０の範囲内にある。ｐＨは、酸（例えば、リン酸、クエン酸または安息香酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム）で制御することもできれば、または（クエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、または重炭酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等で）緩衝させることもできる。
【００４８】
本発明のその他の望ましい形態において、安定化ＡＣＰまたは安定化ＡＣＦＰ組成物は、歯磨粉、歯科用錠剤または練り歯磨（歯科用クリーム）またはジェル歯磨きのような、実質的に固体またはペースト状の性質である場合がある。このような固体またはペースト状の経口調剤品のビヒクルは一般的に、歯に許容される研磨剤を含む。研磨剤の例には、水溶性のメタリン酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム二水和物、リン酸二カルシウム無水物、ピロリン酸カルシウム、オルトリン酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、炭酸カルシウム、アルミナ水和物、か焼アルミナ、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸ジルコニウム、シリカ、ベントナイト、及びそれらの混合物がある。その他の好適な研磨剤には、メラミンホルムアルデヒド、フェノールホルムアルデヒド及び尿素ホルムアルデヒドのような粒子状熱硬化性樹脂、並びに架橋ポリエポキシド及びポリエステルが含まれる。好ましい研磨剤には、最高約５ミクロンの粒径、最高約１．１ミクロンの平均粒径、及び最高約５０，０００ｃｍ２／ｇの表面積を有する結晶シリカ、並びにシリカゲルまたはコロイドシリカ、及び複合アモルファスアルカリ金属アルミノケイ酸塩が含まれる。
【００４９】
透明ジェルが使用される場合、Ｓｙｌｏｉｄ ７２及びＳｙｌｏｉｄ ７４としてＳＹＬＯＩＤという商標で市販されるもの、またはＳａｎｔｏｃｅｌ １００としてＳＡＮＴＯＣＥＬという商標で市販されるもののようなコロイドシリカの研磨剤、アルカリ金属アルミノケイ酸塩複合体が特に有用である。なぜなら、これらは、磨歯剤で通常使用されるゲル化剤（水及び／または湿潤剤含有）液体系の屈折率に近い屈折率を有するためである。
【００５０】
所謂「非水溶性」研磨剤の多くは、性質上陰イオン性であり、少量の水溶性物質も含んでいる。従って、非水溶性メタリン酸ナトリウムは、例えばＴｈｏｒｐｅ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ９，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．５１０〜５１１に説明される通り、任意の好適な様式で形成される場合がある。マドレル塩及びクロール塩として知られる非水溶性メタリン酸ナトリウムの形態は、好適な材料の更なる例である。これらのメタリン酸塩は、水において極微小な溶解度を示し、そのため一般的には非水溶性メタリン酸塩（ＩＭＰ）と呼ばれる。通常は、最高４重量％までの数重量％で、少量の水溶性リン酸塩物質が不純物としてその中に存在する。非水溶性メタリン酸塩の場合に水溶性トリメタリン酸ナトリウムを含むと考えられる水溶性リン酸塩物質の量は、望ましい場合水による洗浄によって低減または排除される場合がある。非水溶性アルカリ金属メタリン酸塩は、一般的に物質の１％以下が３７ミクロンより大きいような粒径の粉末状で使用される。
【００５１】
研磨剤は一般的に、固体組成物またはペースト状組成物中に約１０〜約９９重量％の濃度で存在する。好ましくは、練り歯磨中に約１０〜約７５％の量で、歯磨粉中に約７０〜約９９％の量で存在する。練り歯磨において、研磨剤が本来的にシリカを含む場合には、一般的に約０〜３０重量％の量で存在する。その他の研磨剤は、一般的に約３０〜７５重量％の量で存在する。
【００５２】
練り歯磨において、液体ビヒクルは、一般的に調剤品の約１０〜約８０重量％の範囲内にある量の水及び湿潤剤を含む場合がある。グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール及びポリプロピレングリコールが、好適な湿潤剤／担体の例である。又、水、グリセリン及びソルビトールの液体混合物も有利である。屈折率が重要である透明ジェルにおいては、約２．５〜３０重量％の水、０〜約７０重量％のグリセリン、及び約２０〜８０重量％のソルビトールが、好ましくは使用される。
【００５３】
練り歯磨、クリーム及びジェルは、一般的に約０．１〜約１０重量％、好ましくは約０．５〜約５重量％の割合で天然または合成の増粘剤またはゲル化剤を含む。好適な増粘剤には、合成ヘクトライト、例えばＬａｐｏｒｔｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ が販売するＬａｐｏｎｉｔｅ（例えばＣＰ、ＳＰ ２００２、Ｄ）として入手可能な合成コロイドマグネシウムアルカリ金属ケイ酸塩複合体がある。Ｌａｐｏｎｉｔｅ Ｄは、約５８．００重量％のＳｉＯ２、約２５．４０重量％のＭｇＯ、約３．０５重量％のＮａ２Ｏ、約０．９８重量％のＬｉ２Ｏ、並びに若干の水及び少量の金属である。真の比重は２．５３であり、これは湿度８％において１．０ｇ／ｍｌの見掛けバルク密度を有する。
【００５４】
その他の好適な増粘剤には、アイルランド苔、イオタカラギーナン、トラガカント、デンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースが（例えば、Ｎａｔｒｏｓｏｌとして販売）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び微粉Ｓｙｌｏｉｄ（例えば２４４）のようなコロイドシリカが含まれる。又、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール及びヘキシレングリコールのような湿潤剤ポリオール、メチルセロソルブ及びエチルセロソルブのようなセロソルブ、オリーブオイル、蓖麻子油及びワセリンのような直鎖に少なくとも約１２個の炭素を含む植物油及びワックス、並びに酢酸アミル、酢酸エチル及び安息香酸ベンジルのようなエステルを例とする可溶化剤も含まれる場合がある。
【００５５】
従来のように、経口調剤品は通常、好適なラベルを貼ったパッケージで販売されるか、その他の方法で流通されることが理解されるであろう。従って、口内用リンス液の容器は、それが実質的に口内用リンス液または口内洗浄剤であることを記載し、その使用上の注意事項を有するラベルが貼られている。そして練り歯磨、クリームまたはジェルは通常、押出チューブ、一般的には内容量を計測するためのアルミニウム製、鉛合板製若しくはプラスチック製またはその他の絞り器、ポンプ若しくは圧力ディスペンサーの中にあり、それが実質的に練り歯磨、ジェルまたは歯用クリームであることを記載したラベルが貼られている。
【００５６】
本発明の組成物で有機界面活性剤を使用することで、予防作用を増大させ、口腔中に活性成分を完全に行きわたらせることを助け、本組成物をより美容上許容されるようにする場合がある。有機界面活性剤は、好ましくは本質的に陰イオン性、非イオン性または両性であり、好ましくは活性剤と相互に作用しない。組成物に洗浄性及び起泡性をもたらす洗浄材料を界面活性剤として使用することが好ましい。アニオン界面活性剤の好適な例には、水素化ココナッツオイル脂肪酸のモノサルフェート化されたモノグリセリドのナトリウム塩のような高級脂肪酸モノグリセリドモノサルフェートの水溶性塩；ラウリル硫酸ナトリウムのような高級アルキルサルフェート；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホネート；高級アルキルスルホ−アセテート；１，２−ジヒドロキシプロパンスルホネートの高級脂肪酸エステル；並びに脂肪酸、アルキル基またはアシル基等の中に１２〜１６個の炭素を有するもののような低級脂肪族アミノカルボン酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミドがある。最後に示したアミドの例には、Ｎ−ラウロイルサルコシン；及びＮ−ラウロイルサルコシン、Ｎ−マルミリストイルサルコシン、またはＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム、カリウム及びエタノールアミン塩があり、これらは、石鹸または類似の高級脂肪酸物質を実質的に含まないはずである。本発明の経口組成物におけるこれらのサルコナイト化合物の使用は、特に有利である。なぜなら、これらの物質は、酸溶液における歯エナメル質の溶解度が若干減少することに加えて、含水炭素破壊による口腔における酸形成を抑制する長期の顕著な効果を示すためである。使用に好適な水溶性非イオン性界面活性剤の例には、酸化エチレンと、これと反応し、長い疎水性鎖（例えば約１２〜２０個の炭素原子の脂肪族鎖）を有する種々の反応性水素含有化合物との縮合物である。この縮合物（「ｅｔｈｏｘａｍｅｒ」）は、脂肪酸、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、多価アルコール（例えば、モノステアリン酸ソルビタン）及びポリプロピレンオキシド（例えば、プルロニック物質）とポリ（酸化エチレン）の縮合物のような親水性ポリオキシエチレン部分を含む。
【００５７】
界面活性剤は、一般的に約０．１〜５重量％の量で存在する。界面活性剤は、本発明の活性剤の溶解を助け、それによって必要とされる可溶化湿潤剤の量を減らす場合があることは注目に値する。
【００５８】
漂白剤、防腐剤、シリコン、葉緑素化合物及び／または尿素のようなアンモニア化物質、リン酸ジアンモニウム、及びそれらの混合物のようなその他種々の物質が、本発明の経口調剤品に組み込まれる場合がある。これらのアジュバントは、存在する場合、望ましい特性及び特徴に実質的に悪影響を与えない量で調剤品に組み込まれる。
【００５９】
任意の好適な香料または甘味料も使用される場合がある。好適な香料成分の例には、例えば、スペアミント、ペパーミント、ウインターグリーン、ササフラス、クローブ、セージ、ユーカリ、マージョラム、シナモン、レモン及びオレンジのオイルのような香料オイル、並びにサリチル酸メチルが含まれる。好適な甘味料には、ショ糖、乳糖、マルトース、ソルビトール、キシリトール、シクラミン酸ナトリウム、ペリラルチン、ＡＭＰ（アスパルチル‐フェニルアラニン、メチルエステル）、サッカリン等が含まれる。好適には、香料及び甘味剤はそれぞれまたは一緒に、調剤品を約０．１〜５％以上含む。
【００６０】
本発明は又、タンパク質破壊剤を更に含む上記のようなＡＣＰまたはＡＣＦＰ組成物も提供する。一実施形態において、タンパク質破壊剤は漂白剤である。好ましい実施形態において、漂白剤はＮａＯＣｌである。
【００６１】
本発明の組成物は又、例えば、加熱されたガム基礎剤の中で攪拌するか、またはガム基礎剤の外面を覆うことにより、トローチ剤、またはチューイングガムまたはその他の製品に組み込んでもよい。これらの例には、望ましくは従来の可塑剤または柔軟剤、砂糖またはブドウ糖、ソルビトール等のようなその他の甘味料を含むジェルトン、ゴムラテックス、ビニライト樹脂等がある。
【００６２】
更なる態様において、本発明は、タンパク質破壊剤及び薬学的に許容される担体と共に、上記のようなＡＣＦＰ及び／またはＡＣＰ複合体の何れかを含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。このような組成物は、歯科用組成物、対齲蝕原性組成物及び治療組成物からなる群から選択される場合がある。歯科用組成物または治療組成物は、ジェル、液体、固体、粉末、クリームまたはトローチ剤の形態をとる場合がある。治療組成物は又、錠剤またはカプセルの形態をとる場合もある。一実施形態において、ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ複合体は、このような組成物の実質的に唯一の再石灰化活性成分である。例えば、以下を含むクリーム製剤が使用される場合がある：水、グリセリン；ＣＰＰ−ＡＣＰ；Ｄ−ソルビトール；二酸化ケイ素；カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）；プロピレングリコール；二酸化チタン：キシリトール；リン酸；グアーガム：酸化亜鉛；サッカリンナトリウム；エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート；酸化マグネシウム；ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート。
【００６３】
本発明は、虫歯、歯の浸食及びフッ素沈着の何れか１つ以上の処置または予防に使用するための説明書を備えた上記の製剤も更に含む。
【００６４】
一実施形態において、本組成物の活性成分は、本質的にタンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／または安定化ＡＣＦＰからなる。理論または作用様式に拘束されることなく、安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰ及びタンパク質破壊剤は、本発明の上記実施形態の治療効果または予防効果に重要であり、従って（必要に応じて担体、賦形剤等と共に）本質的にそれらの成分からなる実施形態は、本発明の適用範囲内に含まれると考えられる。
【００６５】
本発明は又、虫歯、フッ素沈着及び歯の浸食の１つ以上を処置または予防するためのキットであって、薬学的に許容される担体中に（ａ）タンパク質破壊剤及び（ｂ）ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含むキットに関する。望ましくは、このキットは、このような処置を必要としている患者の歯表面の石灰化に使用するための説明書を更に含む。一実施形態において、阻害剤及び複合体は、患者の処置に好適な量で存在する。
【００６６】
更なる態様においては、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着のそれぞれの１つ以上を処置または予防する方法であって、ＡＣＰまたはＡＣＦＰ複合体または組成物を投与した後に、対象の歯にタンパク質破壊剤を投与することを含む方法が提供される。複合体の全身投与が好ましい。この方法には、好ましくは上記のような製剤中での複合体の投与が含まれる。
【００６７】
更なる態様においては、第１組成物の製造におけるタンパク質破壊剤の使用、及び第２組成物の製造における安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）の使用が提供される。第１組成物及び第２組成物は、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着の１つ以上の処置及び／または予防のために使用される。ここで、第１組成物は、第１組成物は、第２組成物の前に歯表面に塗布される。
【００６８】
更なる態様においては、虫歯、歯の腐食、歯の浸食及びフッ素沈着の１つ以上を処置及び／または予防するための、タンパク質破壊剤を含む第１組成物及び安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を含む第２組成物であって、第１組成物が第２組成物の前に歯表面に塗布されるものが提供される。
【００６９】
本明細書は、ヒトにおける適用に特異的に言及しているが、本発明は、獣医の目的においても有用であることは、明確に理解されるであろう。従って、全ての態様において、本発明は、牛、羊、馬及び家禽のような家畜に、猫及び犬のようなペット動物に、並びに動物園の動物に有用である。
【００７０】
本発明を以下の非限定的な例を参照して更に説明する。
【００７１】
石灰化組成物の１つの例には、（含有率の多いものから順に）以下を含む組成物がある。
【００７２】
水
グリセリン
ＣＰＰ−ＡＣＰ
Ｄ−ソルビトール
二酸化ケイ素
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）
プロピレングリコール
二酸化チタン
キシリトール
リン酸
グアーガム
酸化亜鉛
サッカリンナトリウム
エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート
酸化マグネシウム
ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート
プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート
このような組成物は、Ｔｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭの商品名でＧＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから販売されている。これは、タンパク質破壊剤の後に使用に好適であり、好適な時間に歯の上に保持されることを容易にするためにペースト状またはクリーム状である。或いは、この石灰化組成物は、次亜塩素酸ナトリウムのようなタンパク質破壊剤を含む場合がある。
【００７３】
本発明の有効性は、以下のように実証される場合がある。
【実施例】
【００７４】
ＦＬＥ（Ｔｈｙｌｓｔｒｕｐ Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ指数、ＴＦ＝３）を有する７本の前臼歯を、オーストラリア メルボルンのＲｏｙａｌ Ｄｅｎｔａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌの１０〜２８才の健康な患者から歯科矯正のために抜いた歯から選択した。抜いた歯について患者の同意を得た上、研究プロトコルは、メルボルン大学の人間研究倫理委員会によって承認された。全ての試料は、付着する柔組織を切除し、室温において１８％（ｗ／ｖ）の酢酸ホルマリン溶液中に保存した。
【００７５】
上記の歯を回転ゴムカップ及び軽石で洗浄し、そして二重脱イオン水（ＤＤＷ）中で濯いだ（Ｆｅｊｅｒｓｋｏｖ，ｅｔ ａｌ．，１９８８）。水冷式ダイヤモンド刃を使って解剖学的歯冠を歯根から切断した。各々の歯冠を切断し、それぞれＦＬＥを含んでいる１対のエナメル質ブロックを得た。病変の上にわたってＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎ［米国イリノイ州シカゴ］）の長方形の片を置き、ネールバニッシュ（ＲｅｖｌｏｎＴＭ［米国ニューヨーク州］）で、周囲のエナメル質を被覆することによって、４×４ｍｍ２の窓をそれぞれの病変の上に作った。次いで、パラフィルムを慎重に取り除き、対照窓及び試験窓として半分に分けたエナメル質病変の窓を露出させた。対照窓をネールバニッシュで被覆した。各試料の２つの病変を無作為に以下の２つの再石灰化群の１つに割り当てた：第Ｉ群−５％（ｗ／ｖ）のＣＰＰ−ＡＣＦＰで処置、及び第ＩＩ群−５．２５％のＮａＯＣｌで前処置した直後に５％（ｗ／ｖ）のＣＰＰ−ＡＣＦＰで処置。
【００７６】
ＣＰＰ−ＡＣＦＰはＲｅｃａｌｄｅｎｔ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．（オーストラリア メルボルン）から入手したもので、４７．６重量％のＣＰＰ、１５．７重量％のＣａ２＋、２２．９重量％のＰＯ４３−、及び１．２重量％のＦ−を含む。ＣＰＰ−ＡＣＦＰを蒸留及び脱イオンされた水に５％（ｗ／ｖ）に溶かし、そしてＨＣｌでｐＨ７．０に調整した。第１群では、各試料を、３７℃にてプラスチックバイアル瓶中にある２ｍｌの５％（ｗ／ｖ）濃度ＣＰＰ−ＡＣＦＰに入れた。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ溶液を１０日間毎日取り替えた。第２群では、各試料を５．２５％のＮａＯＣＩ溶液に２０分間入れ、濯いだ後、３７℃にてプラスチックバイアル瓶中にある２ｍｌの５％（ｗ／ｖ）濃度ＣＰＰ−ＡＣＦＰに入れた。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ溶液を１０日間毎日取り替えた。
【００７７】
彩度計（ミノルタ彩度計ＣＲ２４１、Ｍｉｎｏｌｔａ［日本］）を使用して、表面反射率を記録した。表面反射率測定は、１９７８年にＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｄｅ Ｌ’ＥｃｌａｉｒａｇｅによってＬ＊ａ＊ｂ＊色空間で確立された。そして測定は、３つの色次元で人間の色知覚に関係するものである（Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｌ’Ｅｃｌａｉｇｅ，１９７８）。Ｌ＊値は白色から黒色までの色勾配を表す。ａ＊値は緑から赤までの色勾配を表す。そしてｂ＊値は青から黄までの色勾配を表す（Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｌ’Ｅｃｌａｉｇｅ，１９７８）。この試験においては、明るい色が高い測定値を有し、暗い色が低い測定値を有するＬ＊値の測定のみを使用した。彩度計における試料が再現可能な位置にあるのを確実にするために、各試料のワックスモールド（ｗａｘ ｍｏｌｄ）を準備し、保存した。全ての試料を、各測定の前に歯科用トリプレットシリンジで６０秒間風乾させた。個々の試料を処置の前後に１０回置き換え、そして色反射率Ｌ＊値を記録した。
【００７８】
各試料を石灰化溶液から取り出し、６０秒間ＤＤＷで濯ぎ、そして吸取紙で乾燥するまで吸い取った。対照窓を覆うネールバニッシュをアセトンで緩徐に取り除いた。次いで、対照窓及び試験窓を、それらの窓の間の中線を通って切断することにより分離した。次いで、病変の窓が並列し、低温硬化メタクリレート樹脂（Ｐａｌａｄｕｒ、Ｈｅｒａｕｓ Ｋｕｌｚｅｒ［ドイツ］）に埋め込まれ状態で、２つの半片を置いた。次いで、２対のエナメル質の半片を切断し、マイクロラジオグラフィー及びマイクロ濃度測定画像解析に供し、Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）の記載の通り正確にミネラル含有量を決定した。
【００７９】
各病変のそれぞれの極小Ｘ線撮影イメージ（対照及び試験）の中線に近い欠損のない領域を選択し、６回スキャンした（Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。各スキャンにより、エナメル質表面から中央のエナメル質の範囲まで完全なフッ素病変を含むとみなされる２００の測定値を得た。（ＣＰＰ−ＡＣＦＰによって処理された）試験病変部を、対照（無処置）病変部と正確に同じ深さにおいてスキャンした。各スキャンから得られたグレー値を、各断片と共に含まれるアルミニウムステップウェッジ（ｓｔｅｐｗｅｄｇｅ）のイメージを使ってアルミニウムの同等の厚さ（ｔＡ）に変換した（Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。Ａｎｇｍａｒ，ｅｔ ａｌ．（１９６３）の化学式を使用して、以下のような各測定値に対するミネラルの体積率を得た：Ｖ＝（５２．７７（ｔＡ）−４．５４）／ｔＳ；式中、Ｖ＝割合としてのミネラルの体積；ｔＡ＝スキャンされたグレー値から得たアルミニウムの相対的な厚さ；ｔＳ＝断片の厚さ（８０μｍ）。
【００８０】
各病変に対する［（障害深さ（ｍｍ）に対する体積％ｍｉｎ］の濃度（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ）プロフィールから、ＤＺ値を台形積分（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）を使って計算した。対照窓における未処置フッ素沈着エナメル質のプロフィールの下にある領域と隣接した通常のエナメル質との間の違いをＤＺｆとした。そして、試験窓におけるＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置フッ素沈着エナメル質の下にある領域と隣接した通常のエナメル質との間の違いをＤＺｒとした。従って、フッ素病変の石灰化率（％Ｍ）は、（１−ＤＺｒ／（ＤＺｆ）×１００であった（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）。
【００８１】
マイクロラジオグラフィーの後、対照と石灰化ＦＬＥとの両方を含む断片を、前記のようにエネルギー分散型Ｘ線分析（ＥＤＡＸ）に供した（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９７）。
【００８２】
平均Ｌ値を、分散（ｖａｒｉａｎｃｅ）の一方向の分類分析（ＡＮＯＶＡ）を使用してシェッフェ多重比較で比較した。平均％Ｍ値も又一方向のＡＮＯＶＡを使って比較した。全体的な平均Ｌ＊値及び％Ｍ値を、１対のデータスチューデントｔ検定を使って分析した。
【００８３】
未処置のエナメル質フッ素病変のＬ＊値は、７９．１〜８７．８の範囲にあり、８３．６±３．６の平均値であった（表１）。５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰによる処置により、Ｌ＊値は、７４．６±４．１まで際立って減少した。それは、通常のエナメル質とあまり異なっていなかった（表１）。ＮａＯＣｌの前処置の後に５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置することにより、Ｌ＊値は、７２．６±５．６まで際立って減少した。それも又、通常のエナメル質とあまり異なっていなかった（表１）。２つの後処置（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ及びＮａＯＣｌ／ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）群に対するＬ＊値には、有意差がなかった。両方の処置群の表面エナメル質の外観は、両方ともが通常の半透明のエナメル質の外観を示しており、実質的に良くなっていた。
【００８４】
健全なエナメル質のミネラル含有量と前処置病変（ＤＺｆ）のミネラル含有量との間の差は、４２６〜１２０４８体積％ｍｉｎの間で変化した。表面反射率（Ｌ＊）と未処置のＦＬＥのＤＺｆとの間には、相関性は見出だされなかった。５％ＣＰＰ−ＡＣＦＰによる処置は、フッ素病変のミネラル含有量を実質的に増やし、喪失したミネラルの３２．７％〜５５．５％（平均値４４．８±１０．６）を復元した（表２）。喪失したミネラルの１００％を復元させれば、ミネラル含有量に関して全部の病変を健全なエナメル質に変えるであろう。ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置の前のＮａＯＣｌによる前処置は、喪失したミネラルの７３．６％〜９２．８％（平均値８０．１±７．８）のミネラル取り込み（ｕｐｔａｋｅ）を増加させた。横断切片の石灰化された病変についてのエネルギー分散型Ｘ線分析により、ＣＰＰ−ＡＣＦＰ処置によって形成されたミネラルが、フッ化物を含むリン灰石であったことを確認した。
【００８５】
【化４】
【００８６】
【化５】
診療所では、歯エナメル質の再石灰化処置を必要とする患者の一例として、以下の手順により患者を処置する。
【００８７】
１． ラバーダムを使用して隔離した、処置を必要とするエナメル領域を、５％のＮａＯＣｌ溶液で５分間にわたり前処置する。
【００８８】
２． 湿らせた綿棒を使用して、エナメル領域からＮａＯＣｌ溶液を除去する。
【００８９】
３． ＣＰＰ−ＡＣＰを含有するクリームであるＴｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭ（ＧＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をエナメル質表面にすぐに５分間で塗布する。その後、患者はこのＴｏｏｔｈ ＭｏｕｓｓｅＴＭを４週間にわたり毎晩濯がずに塗布する。
【００９０】
本明細書に開示及び定義される本発明は、本文または図面に記載され、これらから明らかになる複数の個々の特徴の代替となる組み合わせ全てに適用されることが理解されるであろう。これらの種々の組み合わせは全て、本発明の代替となる種々の態様を構成する。
【００９１】
参考文献
【００９２】
【化６】
【００９３】
【化７】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
歯表面または表面下を石灰化する方法であって、該歯表面または表面下と、タンパク質破壊剤及び安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）とを接触させることを含む、方法。
【請求項２】
該歯表面が歯エナメル質である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該歯表面が歯エナメル質における病変である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該病変が虫歯、歯の浸食またはフッ素沈着により生じる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
該ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰが、ホスホペプチドで安定化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
該ホスホペプチドがカゼインホスホペプチドである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
該ＡＣＰまたはＡＣＦＰが塩基相にある、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
該タンパク質破壊剤が、漂白剤、界面活性剤、カオトロピック剤、プロテアーゼ、及びプロテアーゼの混合物からなる群の１つ以上から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
該漂白剤が次亜塩素酸ナトリウムまたは過酸化カルバミド漂白剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
歯エナメル質における病変を再石灰化する方法であって、該病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１１】
フッ素沈着を処置する方法であって、歯エナメル質におけるフッ素沈着病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１２】
虫歯を処置する方法であって、歯エナメル質におけるカリエス病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１３】
歯の浸食を処置する方法であって、浸食により生じた歯エナメル質における病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１４】
歯エナメル質上の白斑病変を低減させる方法であって、白斑病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１５】
虫歯、フッ素沈着及び歯の浸食の１つ以上を処置または予防するためのキットであって、薬学的に許容される担体中に（ａ）タンパク質破壊剤及び（ｂ）ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む、キット。
【請求項１】
歯表面または表面下を石灰化する方法であって、該歯表面または表面下と、タンパク質破壊剤及び安定化アモルファスリン酸カルシウム（ＡＣＰ）または安定化アモルファスフッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）とを接触させることを含む、方法。
【請求項２】
該歯表面が歯エナメル質である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該歯表面が歯エナメル質における病変である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該病変が虫歯、歯の浸食またはフッ素沈着により生じる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
該ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰが、ホスホペプチドで安定化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
該ホスホペプチドがカゼインホスホペプチドである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
該ＡＣＰまたはＡＣＦＰが塩基相にある、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
該タンパク質破壊剤が、漂白剤、界面活性剤、カオトロピック剤、プロテアーゼ、及びプロテアーゼの混合物からなる群の１つ以上から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
該漂白剤が次亜塩素酸ナトリウムまたは過酸化カルバミド漂白剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
歯エナメル質における病変を再石灰化する方法であって、該病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１１】
フッ素沈着を処置する方法であって、歯エナメル質におけるフッ素沈着病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１２】
虫歯を処置する方法であって、歯エナメル質におけるカリエス病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１３】
歯の浸食を処置する方法であって、浸食により生じた歯エナメル質における病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１４】
歯エナメル質上の白斑病変を低減させる方法であって、白斑病変と、タンパク質破壊剤及び安定化ＡＣＰ及び／またはＡＣＦＰとを接触させることを含む、方法。
【請求項１５】
虫歯、フッ素沈着及び歯の浸食の１つ以上を処置または予防するためのキットであって、薬学的に許容される担体中に（ａ）タンパク質破壊剤及び（ｂ）ＣＰＰ−ＡＣＰまたはＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む、キット。
【公表番号】特表２００８−５４２４０３（Ｐ２００８−５４２４０３Ａ）
【公表日】平成２０年１１月２７日（２００８．１１．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１５０００（Ｐ２００８−５１５０００）
【出願日】平成１８年６月７日（２００６．６．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００６／０００７８５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３０９１３
【国際公開日】平成１８年１２月１４日（２００６．１２．１４）
【出願人】（５０７１７０２６２）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (8)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１１月２７日（２００８．１１．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月７日（２００６．６．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００６／０００７８５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３０９１３
【国際公開日】平成１８年１２月１４日（２００６．１２．１４）
【出願人】（５０７１７０２６２）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (8)
【Ｆターム（参考）】
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