治療をモニターするためのバイオマーカーを使用した方法またはシステム
本発明は、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態の活性をモニターするためのバイオマーカーに関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野、特に特定の化合物の活性のバイオマーカー、および前記化合物による治療のモニタリングに関する。
本発明はさらに具体的には、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態の活性をモニターするためのバイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
生物における分子過程の知識およびこれらの過程を研究する技術における最近の進歩は、疾患を分類および治療する方法およびシステムの改善をもたらした。疾患の治療のための方法を提供および／または改善し、治療の効果をモニターするための方法およびシステムを提供および／または改善するための研究が多くの分野において行われている。
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンは、特に、腫瘍疾患、免疫疾患、または免疫性成分が関与する病的状態、または線維性疾患の治療のための、貴重な薬理学的特性を有する画期的な活性成分である。
この化合物の化学構造を、式Ａとして下記に示す。
式Ａ
【０００３】
【化１】
この化合物のベース形態は、ＷＯ０１／２７０８１に記載されており、モノエタンスルホン酸塩の形態は、ＷＯ２００４／０１３０９９に記載されており、様々なさらなる塩の形態は、ＷＯ２００７／１４１２８３に示されている。免疫疾患または免疫性成分が関与する病的状態の治療のためのこの分子の使用は、ＷＯ２００４／０１７９４８に記載されており、腫瘍疾患の治療のための使用は、ＷＯ２００４／０９６２２４に記載されており、線維性疾患の治療のための使用は、ＷＯ２００６／０６７１６５に記載されている。
【０００４】
この化合物のモノエタンスルホン酸塩の形態は、この塩の形態を医薬品として開発するのに特に適しているものとしている特性を示す。３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノン−モノエタンスルホネートの化学構造を、式Ａ１として下記に示す。
式Ａ１
【０００５】
【化２】
前臨床試験によって、この化合物が、腫瘍血管新生を阻害する機序によって腫瘍増殖を抑制する、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）および繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）の高度に強力で経口的に生物が利用可能な阻害剤であることが示されてきた。この化合物は、内皮細胞および平滑筋細胞および周皮細胞におけるシグナル伝達を阻害し、腫瘍血管密度を減少させることがさらに示されてきた。
さらに、この化合物は、耐容性良好である用量で今までに試験された全てのモデルにおいてインビボで抗腫瘍効力を示す。下記の表１は、異種移植モデルおよび同種ラット腫瘍モデルにおけるインビボでの抗腫瘍効力試験の結果を示す。
【０００６】
【表１】
Ｔ／Ｃは、腫瘍サイズの減少を対照の％で表す。
【０００７】
したがってこの化合物は、例えば、血管形成または細胞の増殖が関与する疾患の治療に適している。
この化合物は、ＷＯ２００６／０６７１６５に記載されているように、線維性疾患の治療にさらに適している。
【０００８】
診断およびスクリーニングのための方法を開発することを目的とする多くの研究に関わらず、治療をモニターするための効率的な方法およびシステムが依然として求められている。モニタリングは必ずしも可能ではなく、あるいは患者から試料、例えば、生検試料を得て、試験施設においてこれらの試料を研究するなど、患者にとって都合が悪いことが多い複雑、高価および／または時間のかかる手順を必要とする。腫瘍細胞の放射線分析は、腫瘍治療の開始の数週間後にのみ可能となる。
したがって、ＷＯ２００８／１２７５２８によると、反応をモニターし、または患者における感受性を決定し、疾患および障害の治療において役立つ個人に合わせた遺伝的プロファイルの同定を可能にする方法および手順が提供されている。
【０００９】
ＷＯ２００８／１３４５２６によると、膀胱癌は、尿試料中の同定されたバイオマーカーのレベル上昇の存在についてスクリーニングによって検出し得る。この文献は、対象からの尿試料中で、この中で同定された膀胱癌についての少なくとも１つのバイオマーカー（α−１Ｂ−糖タンパク質、ハプトグロビン、血清トランスフェリン、またはα−１−アンチトリプシンなど）を検出することによる、膀胱癌（初期または後期膀胱癌など）の診断、予後、およびモニタリングのための方法をさらに記載している。バイオマーカーは、バイオマーカータンパク質を検出もしくは結合する作用剤、またはバイオマーカータンパク質もしくはその部分と特異的に反応性の抗体などのコード化核酸を検出もしくは結合する作用剤を使用して、検出、および任意選択で測定し得る。
したがって、特定の細胞表面分子の発現量は、疾患またはその治療を指示するものとして既に提案されてきた。
【００１０】
ＷＯ２００５／０８３１２３によると、個体からの試料中のＡＣ１３３の発現生成物の量、すなわちタンパク質またはそのｍＲＮＡの量は、疾患またはその治療の徴候を示す。この参考文献は、未治療の癌患者におけるＡＣ１３３の発現は、健常人と比較して有意により高いことをさらに記述する。例において、様々な腫瘍患者を治療するときにＡＣ１３３発現は有意に下落する一方、同じ治療の間に循環内皮細胞の総数は本質的に同じままであることをまた示す。本質的に、この参考文献は、循環内皮細胞の数は、必ずしも個体の状態の徴候を示すとは限らない一方、ＡＣ１３３発現生成物の総量は、前記状態の徴候を示すことをさらに記述する。同様に、ＷＯ２００４／０１９８６４は、ＡＣ１３３をマーカーとして同定し、血管形成を診断およびモニターするための定量的ＲＴ−ＰＣＲの使用を記載している。
【００１１】
しかし、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、上記の活性成分である３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするためのバイオマーカーを使用した方法またはシステムは、今までに記載または示唆されてこなかった。このような方法またはシステムはまた、従来技術から予測し得ない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための、バイオマーカーを使用した方法またはシステムを提供することである。
したがって本発明の１つの目的は、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための方法またはシステムを提供することであり、前記方法は、前記個体からの試料が前記治療の徴候を示す量のバイオマーカーを含むかどうかを決定することを含む。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、上記の方法またはシステムであり、バイオマーカーは、タンパク質の発現もしくは状態における変化、あるいは疾患の危険性もしくは進行と相関する、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する、特定の細胞の量における変化を示す。
本発明によるさらなる実施形態において、バイオマーカーは、薬力学的バイオマーカーである。
本発明によるさらなる実施形態において、治療のモニタリングは、奏効の程度のモニタリング、奏効期間のモニタリング、奏効率のモニタリング、安定化率のモニタリング、安定化期間のモニタリング、疾患の悪化までの時間のモニタリング、無増悪生存期間のモニタリングまたは全生存期間のモニタリングのいずれか１つ（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）を意味する。
【００１４】
本発明のさらなる目的は、前記量が定量化される、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記量を参照値と比較することを含む、上記の方法およびシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記発現生成物または特定の細胞の前記量と、前記治療の前に前記個体から得た試料中に存在する前記発現生成物または特定の細胞の量とを比較することを含む、上記の方法またはシステムである。
さらなる実施形態において、前記個体からのいくつかの試料は、治療の開始後に異なる時点で得る。これによって、一連の治療の長期間のモニタリングが可能となる。例えば、バイオマーカーの量が前記疾患またはその治療の徴候を示し続けるかを決定することができる。これは例えば、患者毎をベースとした適当な治療スケジュール、投与量およびタイプを確立するのに有用である。さらに、所与の時点での治療の継続が適当であるかどうかを決定することができる。
【００１５】
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の１カ月以内に得る、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の１週間以内に得る、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の２日以内に得る、上記の方法またはシステムである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがいくつかの特異的細胞表面抗原を示す細胞を含む、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、試料が血液試料である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーが内皮細胞のホスホ−チロシンレベルである、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の数およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の数から選択される、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、前記個体からの試料における、フローサイトメトリーを使用した内皮細胞のホスホ−チロシンレベルの減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記個体からの血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記個体からの血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の割合の増加が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の減少が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の増加が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、８日目および２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の減少が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
【００２０】
本発明のさらなる目的は、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による患者の治療が有効であるかを決定するための方法またはシステムであって、下記の要素：このような決定を要求する患者または医師；患者からの生体材料の試料の取得；個体の治療をモニターするための上記の方法またはシステムを使用した試料の分析；および患者または医師への試験結果の情報伝達を含む。
本発明はまた、本発明による方法またはシステムを行うための少なくとも１つの手段を含む診断キットを提供する。一態様において、キットは、ｍＲＮＡ、タンパク質のレベルまたは細胞もしくは試料レベルでのバイオマーカーセットの発現をモニターするための試薬または材料（抗体または核酸など）、および任意選択で患者の組織標本または患者の試料からの細胞の試験において使用するための１種または複数の活性成分、および任意選択で使用説明書を含み得る。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、上記で記載されているような化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための方法またはシステムにおけるバイオマーカーの使用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣ細胞のホスホ−チロシンレベルに対する異なる化合物の効果。横座標上で：１は、ＶＥＧＦで未処理および活性成分に未曝露のＩｇＧ対照であり；２は、ＶＥＧＦで未処理および活性成分に未曝露の対照であり；３は、ＶＥＧＦで処理されたが、活性成分に未曝露の対照であり；４は、ＶＥＧＦで処理し、１μＭの化合物Ａ１に曝露させ；５は、ＶＥＧＦで処理し、５μＭの化合物Ａ１に曝露させ；６は、ＶＥＧＦで処理し、１μＭの化合物ＡＧ１４７８に曝露させ；７は、ＶＥＧＦで処理し、５μＭの化合物ＡＧ１４７８に曝露させ；８は、ＶＥＧＦで処理し、１ｍＭの化合物５ＦＵに曝露させ；９は、ＶＥＧＦで処理し、５ｍＭの化合物５ＦＵに曝露させる。
【図２】化合物Ａ１による処理によるインビボでのＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+白血球細胞のホスホ−チロシンレベル。横座標上で：０は、未処理対照を表し；Ａ５０は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表し；Ａ１００は、１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表す。
【図３】化合物Ａ１による処理によるマウス末梢血中のＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞のフローサイトメトリー。横座標上で：０は、未処理対照を表し；Ａ５０は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表し；Ａ１００は、１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表す。
【図４】治療前、ならびに化合物Ａ１による処理後２日目、８日目および２９日目に採取した全血中のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の割合（象限）。
【図５】レスポンダーおよび非レスポンダーにおける、治療前、ならびに化合物Ａ１による処理後２日目、８日目および２９日目に採取した全血中のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の比。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の意義の範囲内で、バイオマーカーは、生物学的状態の指標として使用する。バイオマーカーは通常の生物学的過程、病原性過程、または治療的介入に対する薬理反応の指標として客観的に測定および評価される特徴である。これは１９９８年のＮＩＨの研究グループによって与えられた定義と一致している。
【００２４】
さらに具体的には、バイオマーカーは、疾患の危険性もしくは進行、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する変化を示す。提案されたバイオマーカーが確認されると、そのバイオマーカーを使用して、個体における疾患の危険性、疾患の存在を診断し、または個体における疾患の治療を調整（薬物治療または投与体制の選択）することができる。可能性がある薬物療法の評価において、バイオマーカーは、生存または不可逆的な病的状態などの自然のエンドポイントの代用として使用し得る。治療が健康の改善と直接関連を有するバイオマーカーを変化させる場合、そのバイオマーカーは、臨床的有用性を評価するための代用エンドポイントとしての役割を果たす。
【００２５】
本発明の方法またはシステムは、個体において少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップが、個体からの生体試料を採取し、次いで生体試料中のバイオマーカー（複数可）のレベルを測定することを含む、例えばインビトロの方法でよい。生体試料は、例えば、血清、新鮮な全血、末梢血単核球細胞、冷凍全血、新鮮な血漿、冷凍血漿、尿、唾液、皮膚、毛包、骨髄、または腫瘍組織の少なくとも１つを含むことができる。
【００２６】
本発明の範囲内で、分化クラスター分子ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７は、特定の細胞型の細胞マーカーとして特に重要である。
したがって、分化クラスター（または命名クラスター、ＣＤと略されることが多い）は、白血球上に存在する細胞表面分子の同定および調査のために使用されるプロトコルである。ＣＤ命名法は、１９８２年にパリで開催された第１回Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ａｎｄ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ（ＨＬＤＡ）において提案および確立された。このシステムは、白血球（白血球細胞）の表面分子上のエピトープに対して世界中の異なる試験施設によって作成された多くのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の分類を対象とした。それ以来、その使用は多くの他の細胞型に拡大されてきており、３２０超の特有なＣＤクラスターおよびサブクラスターが同定されてきた。提案された表面分子は、２つの特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が分子に結合していることが示されると、ＣＤ番号を割り当てられる。分子がよく特性決定されておらず、または１つのｍＡｂのみを有する場合、暫定的指標「ｗ」が通常与えられる（「ＣＤｗ１８６」におけるように）。ＣＤ分子は、多数の様式で作用することができ、細胞にとって重要な受容体またはリガンド（受容体を活性化する分子）として作用することが多い。シグナルカスケードが通常開始し、細胞の挙動（細胞シグナル伝達）を変化させる。いくつかのＣＤタンパク質は細胞シグナル伝達において役割を果たしていないが、細胞接着などの他の機能を有する。概ね２５０の異なるタンパク質がある。
【００２７】
ＣＤシステムは、細胞マーカーとして通常使用され、どのような分子がそれらの表面上に存在するかに基づいて細胞を定義することを可能にする。１つのＣＤ分子を使用して集団を定義することは一般ではない（数例は存在するが）一方、マーカーを合わせることは、免疫系内で非常に特定の定義を有する細胞型を可能にした。
ＣＤ分子は、フローサイトメトリーを含めた様々な方法を使用して、細胞選別において利用されている。細胞集団は通常、特定の細胞画分がＣＤ分子を発現している、または欠いていることを示す、「＋」または「−」の記号を使用して定義する。例えば、「ＣＤ３４＋、ＣＤ３１−」細胞は、ＣＤ３４を発現しているが、ＣＤ３１を発現していない細胞である。このＣＤの組合せは典型的には、完全に分化した内皮細胞と対立した幹細胞に相当する。下記の表２は、いくつかの造血幹細胞および白血球細胞のＣＤマーカーを示す。
【００２８】
【表２】
【００２９】
分化クラスターＣＤ３４分子は、人体内の特定の細胞上に存在する分子である。ＣＤ３４を発現している細胞（ＣＤ３４＋細胞）は通常、臍帯および骨髄中に、造血細胞、血管内皮前駆細胞、血管（リンパ管ではない（胸膜のリンパ管以外））の内皮細胞；肥満細胞、間質中および皮膚の真皮の付属器周辺の亜集団樹状細胞（第ＸＩＩＩａ因子陰性である）、ならびにいくつかの軟部組織腫瘍中の細胞として見出される。ＣＤ３４＋細胞は細胞表面糖タンパク質であり、細胞間接着因子として機能する。ＣＤ３４＋細胞はまた、骨髄細胞外マトリックスへの、または直接ストローマ細胞への幹細胞の結合を媒介し得る。ＣＤ３４＋細胞は、免疫磁気または免疫蛍光方法を使用して血液試料から単離し得る。抗体を使用して、研究および臨床骨髄移植のために造血前駆細胞幹細胞を定量化および精製する。したがって、それらのＣＤ３４＋発現によって、このような細胞を分類することができる。
【００３０】
分化クラスターＣＤ４５抗原は、最初に白血球共通抗原と称されたタンパク質である。この遺伝子がコードするタンパク質は、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）ファミリーのメンバーである。ＰＴＰは、細胞増殖、分化、有糸分裂周期、および癌化を含めた種々の細胞過程をレギュレートするシグナル伝達分子であることが知られている。このＰＴＰは、細胞外ドメイン、単一の膜貫通領域および２つのタンデム細胞質内触媒ドメインを含有し、したがって受容体型ＰＴＰに属する。この遺伝子は、造血細胞において特異的に発現している。このＰＴＰは、Ｔ細胞およびＢ細胞抗原受容体シグナル伝達の必要不可欠な制御因子であることが示されてきた。ＰＴＰは、抗原受容体複合体の成分との直接相互作用によって、または抗原受容体シグナル伝達に必要な様々なＳｒｃファミリーキナーゼを活性化させることによって機能する。このＰＴＰはまた、ＪＡＫキナーゼを抑制し、したがってサイトカイン受容体シグナル伝達の制御因子として機能する。別個のアイソフォームをコードする、この遺伝子の４種の選択的にスプライシングされた転写物変異体が報告されてきた。この変異体は、それらの細胞の活性化（同時刺激の形態）を助ける、赤血球以外の全ての分化した造血細胞および形質細胞上に様々な形態で存在するＩ型膜貫通タンパク質である。この変異体はリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、および急性非リンパ性白血病において発現している。
【００３１】
ＡＣ１３３ともまた称される分化クラスター分子ＣＤ１３３は、ヒトおよびげっ歯類においてＰｒｏｍｉｎｉｎ１（ＰＲＯＭ１）としてまた公知の糖タンパク質である。ＣＤ１３３は、細胞突起に特異的に局在化している５回膜貫通型糖タンパク質（５回膜貫通型、５−ＴＭ）の基本メンバーである。ＣＤ１３３は、造血幹細胞、血管内皮前駆細胞、神経膠芽腫、ニューロンおよびグリア幹細胞、ならびにいくつかの他の細胞型において発現している。
ＫＩＴまたはＣ−ｋｉｔ受容体ともまた称される分化クラスター分子ＣＤ１１７は、造血幹細胞および他の細胞型の表面上に発現しているサイトカイン受容体である。この受容体は、幹細胞因子（特定のタイプの細胞が増殖することをもたらす物質）に結合する。ＣＤ１１７は、骨髄において特定のタイプの造血（血液）前駆細胞を同定するために使用される重要な細胞表面マーカーである。特異的に造血幹細胞（ＨＳＣ）、多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、および骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）は、高いレベルのＣＤ１１７を発現する。リンパ球共通前駆細胞（ＣＬＰ）は、低い表面レベルのＣＤ１１７を発現する。ＣＤ１１７はまた、胸腺中の最初期胸腺細胞前駆体を同定する。さらに肥満細胞、皮膚のメラニン形成細胞、および消化管のカハール間質細胞は、ＣＤ１１７を発現する。ＣＤ１１７はまた、マウス前立腺幹細胞についてのマーカーである。
【００３２】
下記に示すように本発明によると、特定の細胞マーカーを示す細胞は、活性成分３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするためのバイオマーカーとして有用である。
【００３３】
特にこれには、奏効の程度、奏効期間、奏効率、安定化率、安定化期間、疾患の悪化までの時間、無増悪生存期間または全生存期間のモニタリング（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）が含まれる。
上記のように、本明細書に定義されているような本発明の治療は、それらの抗血管新生および／または血管透過性作用のために重要である。血管形成、および／または血管透過性の増加は、癌（白血病、カポジ肉腫、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、血管腫、急性および慢性ネフロパシー、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、喘息、リンパ浮腫、子宮内膜症、不正子宮出血、線維症、肝硬変、ならびに網膜血管増殖を伴う眼疾患（加齢黄斑変性症を含めた）を含めた広範囲の病態において存在する。
【００３４】
本明細書に定義されているような本発明の併用療法は、前記療法の個々の成分の同時、連続または別々の投与によって達成し得る。本明細書に定義されているような併用療法は、単独の療法として適用してもよく、あるいは本発明の併用療法に加えて、手術または放射線療法またはさらなる化学療法剤もしくは標的剤が関与し得る。本明細書に記載されているような併用療法の投与の前、間または後に、手術は、部分的もしくは完全な腫瘍切除のステップを含み得る。
本発明の併用療法は、癌およびカポジ肉腫などの疾患の予防および治療に特に有用であることが期待される。特に、本発明のこのような併用療法は有利なことには、例えば、結腸、膵臓、脳、膀胱、卵巣、乳房、前立腺、肺および皮膚の原発性および再発性の固形腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。本発明の併用療法は有利なことには、肺癌（悪性胸膜中皮腫、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含めた）、頭頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、肝細胞癌、乳癌、腎細胞癌および尿路癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、肉腫、皮膚癌、ならびに血液腫瘍（白血病、脊髄形成異常症、骨髄腫、リンパ腫）における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。
【００３５】
より特定すると、本発明のこのような併用療法は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた、ＶＥＧＦと関連する任意の形態の癌を阻害し、また、例えば、結腸（直腸を含めた）、膵臓、脳、腎臓、肝細胞癌、膀胱、卵巣、乳房、前立腺、肺、外陰部、皮膚の特定の腫瘍、特に悪性胸膜中皮腫およびＮＳＣＬＣを含めた、例えば、ＶＥＧＦと関連するそれらの原発性および再発性の固形腫瘍、特に、それらの増殖および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存しているそれらの腫瘍の増殖を阻害することが期待される。より特に、本発明の併用療法は有利なことには、悪性胸膜中皮腫における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。より特に、本発明の併用療法は有利なことには、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。
【００３６】
本発明の別の態様において、この治療は、ＶＥＧＦと関連するそれらの原発性および再発性の固形腫瘍、特にそれらの増殖および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存しているそれらの腫瘍の増殖を阻害することが期待される。
下記の研究は、本発明を例示することを意図する。これらの研究の記載中および本発明を通して使用される略語を、下記のリストで説明する。
【００３７】
略語のリスト
ＡＰＣ アロフィコシアニン
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＣＥＣ 循環内皮成熟細胞
ＣＥＰ 循環内皮前駆細胞
Ｃｙ５．５ シアニン５．５
ＥＧＦＲ 上皮増殖因子受容体
ＦＣＭ フローサイトメトリー
ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアネート
ＦＳＣ 前方散乱
ＨｅｐＧ２ ヒト肝細胞肝癌細胞系
ＨＵＶＥＣ ヒト臍帯静脈内皮細胞
ＰＢＬ 末梢血白血球
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＤ 進行性疾患
−ＰＥ フィコエリトリンで標識
ＰｅｒＣＰ ペリジニンクロロフィルタンパク質
ＰＹまたはｐＹ ホスホ−チロシン
ＲＥＳ レスポンダー（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）
ＳＳＣ 側方散乱
ＴＫＩ チロシンキナーゼ阻害剤
ＶＥＧＦＲ 血管内皮増殖因子受容体２
【００３８】
前臨床試験
下記のインビトロおよびインビボの実験を行い、肝細胞癌についての化合物Ａ１の抗腫瘍活性を評価し、血液試料中の新規な薬力学的バイオマーカー、すなわち、内皮細胞のホスホ−チロシンレベル、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数およびＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数を同定した。
【００３９】
ＨＵＶＥＣ細胞による実験（図１）
ＨＵＶＥＣ細胞を、化合物Ａ１（１μＭおよび５μＭ）、ＥＧＦＲ阻害剤ＡＧ１４７８（１μＭおよび５μＭ）、ならびに５ＦＵ（５−フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌｅ）、１ｍＭおよび５ｍＭ）に３時間曝露させ、細胞採取の前に２０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦを５分間加えた。採取した細胞をＰＢＳによって２度洗浄し、５０μＬの染色緩衝液中で遠心分離した（３００ｇ、５分）。吸引による上清の除去の後、細胞ペレットを２５０μＬの固定／透過処理溶液中で溶解し、２０分間氷上に保持した。ＰＹ−１００Ａｌｅｘａ４８８抗体およびホスファターゼ阻害剤を加えた。細胞を暗中氷上で３０分間保持し、Ｐｅｒｍ／洗浄緩衝液で２度洗浄し、５００μＬの染色緩衝液中で再び溶解した。次いで、細胞をフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ）によって検査した。データはＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ）から得て、ＷｉｎＭＤＩ２．９（フリーソフトウェア）によって分析した。
【００４０】
インビボ試験のためのマウス血液試料（図２および３）
ＨｅｐＧ２細胞を接種されたマウスを、腫瘍サイズによって３群に無作為化し、ビヒクル（対照）、化合物Ａ１（５０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）または化合物Ａ１（１００ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）で１４日間処理した。マウスを殺処分し、マウス全血試料を腹部大動脈または心臓からの吸引によって採取した。血液を溶血薬によって室温で１０分間溶血させた。遠心分離（５００ｇ、５分）後、細胞を１ｍＬの染色緩衝液で洗浄した。次いで、細胞を、１００μＬの染色緩衝液および５μＬのＶＥＧＦＲ２−ＰＥ抗体と共に暗中１５分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、５００μＬの固定／透過処理溶液中で２０分間インキュベートし、Ｐｅｒｍ／洗浄緩衝液によって２度洗浄した。次いで、抗体（ＰＹ−１００、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、各々５μＬ）およびホスファターゼ阻害剤の混合物を加え、暗中３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ）によって分析した。データはＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ）から得て、ＷｉｎＭＤＩ２．９（フリーソフトウェア）によって分析した。
【００４１】
抗体
ＰＹ−１００（ホスホ−チロシン）Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８複合体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、♯９４１４）
ＶＥＧＦＲ２−ＰＥ（ＢＤ ｐｈａｒｍ、５５５３０８）
ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ＢＤ Ｐｈａｍ、３４０９５３）
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８マウスＩｇＧκアイソタイプ対照（ＢＤ Ｐｈａｍ、５５７７０２）
緩衝液
ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ、固定／透過処理キット（カタログ５５４７１４）
１％熱失活ＦＣＳ、および０．０９％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを補充した染色緩衝液（ＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（Ｍｇ2+、Ｃａ２+を有さない）（ｐＨは７．４〜７．６に調節））
１０ｘ溶解緩衝液（ＮＨ4Ｃｌ８２．６ｇ、ＮａＨＣＯ3１１．９ｇ、ＥＤＴＡ２Ｎａ０．３７８ｇ、１ＬまでのＨ2Ｏ、ｐＨは７．３に調節）
【００４２】
結果
図１から分かるように、インビトロ試験において、ＨＵＶＥＣ細胞のホスホ−チロシンレベルは、化合物Ａ１によって抑制されたが、ＡＧ１４７８（ＥＧＦＲ−ＴＫＩ）によって抑制されず、５ＦＵによって抑制されなかった。
図２から分かるように、インビボの試験において、化合物Ａ１は、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数を減少させるようである。さらに、図３から分かるように、マウス末梢血中のＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞は、化合物Ａ１による処理によって抑制された。
【００４３】
結論
フローサイトメトリーを使用した内皮細胞のホスホ−チロシンレベルの減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
【００４４】
第Ｉ相臨床試験
さらなる試験、すなわち第Ｉ相試験を行い、進行固形腫瘍（ＳＴ）を有する患者における化合物Ａ１の抗腫瘍活性を調査し、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７陽性細胞がこの活性成分の活性のバイオマーカーとして有用であり得ることを確認した。
方法
全血は、治療前（１日目）に、ならびに治療後２日目、８日目および２９日目に採取した。全血から同定したＣＤ３４+ＣＤ４５dim末梢血細胞の亜集団は、フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７の細胞表面マーカーによってさらに同定した。全血（８００μＬ）を、４．５ｍＬの０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳで補充し、５分間遠心分離した（１５００ｒｐｍ）。吸引による上清の除去の後、４．５ｍＬの０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳを加え、遠心分離した。細胞ペレットを、５０μＬのヒトγ−グロブリンと混合した。抗体（ＣＤ３４−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１７−ＰＥ、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰおよびＣＤ１３３−ＡＰＣ）を加え、４Ｃで４５分間保持した。溶血薬（４．５ｍＬ）を加え、１０分間インキュベートした。遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）後、上清を２度洗浄した。次いで、０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳ（４．５ｍＬ）を加え、上清を遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）によって除去した。細胞ペレットをＢＳＡ−ＰＢＳで８００μＬまで満たし、フローサイトメトリーによって分析した。ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の割合（象限）を分析した。
抗体
ＣＤ３４ＦＩＴＣ、ＢＥＣＫＭＡＮＣＯＵＬＴＥＲ（カタログ番号ＩＭ１８７０）。
ＣＤ１１７ＰＥ、ＢＥＣＫＭＡＮＣＯＵＬＴＥＲ（カタログ番号ＩＭ２７３２）。
ＣＤ４５ＰｅｒＣＰ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（カタログ番号３４７４６４）。
ＣＤ１３３ＡＰＣ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（カタログ番号１３０−０９０−８５４）。
【００４５】
結果
化合物Ａ１による処理およびＣＤ１３３ＣＤ１１７細胞：フローサイトメトリー分析によって、化合物Ａ１による処理が、治療前と比較して、２９日目にＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の割合を有意に増加させ（ｐ＜０．００１）、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の割合を逆に減少させた（ｐ＜０．０１、図４Ａ）ことが明らかになった。２９日目のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞は、有意に増加し（図４Ｂ）、８日目および２９日目にＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞は、有意に減少した（図４Ｃ）。
【００４６】
化合物Ａ１の反応およびＣＤ１３３ＣＤ１１７細胞：ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞は、レスポンダーにおいて減少する傾向があった（安定疾患）が、有意ではなかった（図５Ａ）。治療後の非レスポンダーと比較したときに、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞はレスポンダーにおいて減少する傾向があった（安定疾患）（図５Ｂ）が、データは非常に小さな試料サイズ（ＲＥＳ、ｎ＝１２、ＰＤ、ｎ＝４）および限定されたエビデンス（ｅｖｉｄｅｎｃｅ）から得た。
【００４７】
結論
抗血管新生阻害剤化合物Ａ１のための血液試料中の薬力学的バイオマーカーは、
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞；
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞；
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞；および
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞
である。
【００４８】
抗血管新生阻害剤化合物Ａ１のための血液試料中の予測的バイオマーカーは、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞である。
【００４９】
さらなる実施形態
単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態で治療し得る疾患は、骨髄腫細胞の細胞増殖、移動もしくはアポトーシスが関与する疾患、血管形成または線維症である。
好ましい実施形態において、疾患は、腫瘍の存在を含む。
さらなる実施形態において、疾患は、進行性腫瘍である。
さらなる実施形態において、疾患は、例えば、特発性肺線維症などの線維性疾患である。
さらなる実施形態において、疾患は、癌（カポジ肉腫、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、血管腫、急性および慢性ネフロパシー、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、喘息、リンパ浮腫、子宮内膜症、不正子宮出血、線維症、肝硬変、ならびに網膜血管増殖を伴う眼疾患（加齢黄斑変性症を含めた）から選択される。
さらなる実施形態において、疾患は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、悪性胸膜中皮腫または腹膜中皮腫、頭頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、肝細胞癌、乳癌、腎細胞癌、尿路癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、肉腫、皮膚癌、ならびに血液腫瘍（白血病、脊髄形成異常症、骨髄腫、リンパ腫）から選択される。
【００５０】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンの本明細書の上記に既に記載されているもの以外の薬学的に許容される塩には、例えば、酸付加塩が含まれてもよい。このような酸付加塩には、例えば、薬学的に許容されるアニオンを与える無機酸または有機酸を有する塩が含まれる（ハロゲン化水素、または硫酸もしくはリン酸、またはトリフルオロ酢酸、クエン酸もしくはマレイン酸によってなど）。さらに、薬学的に許容される塩は、薬学的に許容されるカチオンを与える無機塩基または有機塩基によって形成し得る。無機塩基または有機塩基を有するこのような塩には、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩またはカリウム塩など）、およびアルカリ土類金属塩（カルシウム塩またはマグネシウム塩など）が含まれる。
【００５１】
本発明によると、化合物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体を使用して適宜に製剤し得る。本発明の範囲内で使用し得る適切な製剤は、これらの化合物に関連する文献および特許出願において既に記載されてきた。これらの製剤は、参照により本明細書中に組み込まれている。
【００５２】
本発明による一実施形態において、式Ａ１の化合物についての製剤は、好ましくは、脂質担体、増粘剤および流動促進剤／可溶化剤を含む活性物質の脂質懸濁液であり、最も好ましくは、脂質担体は、トウモロコシ油グリセリド、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｇｌｙｃｏｌｍｏｎｏｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）、エタノール、グリセロール、グリコフロール、マクロゴールグリセロールカプリロカプリレート、マクロゴールグリセロールリノレエート、中鎖部分グリセリド、中鎖トリグリセリド、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール６００、ポリオキシルヒマシ油、ポリオキシル水素化ヒマシ油、プロピレングリコールモノカプリレート、モノラウリン酸プロピレングリコール、精製ダイズ油、トリアセチン、クエン酸トリエチル、またはその混合物から選択され、増粘剤は、オレオゲル形成賦形剤（コロイド状シリカもしくはＢｅｎｔｏｎｉｔなど）、または高粘度の親油性もしくは両親媒性賦形剤（ポリオキシル水素化ヒマシ油、水素化植物油マクロゴールグリセロール−ヒドロキシステアレート、マクロゴールグリセロール−リシノレエートまたはハードファットなど）から選択され、流動促進剤／可溶化剤は、好ましくはマクロゴールグリセロール−ヒドロキシステアレートまたはマクロゴールグリセロール−リシノレエートから選択される１種または複数のマクロゴールグリセロールを任意選択でさらに含むレシチンから選択される。脂質懸濁液製剤は、文献から公知の製剤を生成する従来の方法によって、すなわち、均質化した懸濁液を得るために、所定の温度にて所定の順序で成分を混合することによって調製し得る。
【００５３】
上記の製剤は、好ましくは医薬カプセル剤、好ましくは軟質ゼラチンカプセル剤（カプセル殻は、可塑剤として、例えば、グリセロールを含むことを特徴とする）、または硬質ゼラチンカプセル剤もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセル剤（任意選択でシーリング（ｓｅａｌｉｎｇ）またはバンディング（ｂａｎｄｉｎｇ）を伴う）中に組み込んでもよい。カプセル医薬品剤形は、文献から公知のカプセル剤を生成する従来の方法によって調製し得る。軟質ゼラチンカプセル剤は、例えば、「回転金敷手順」などの、例えば、Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ， Ｂｏｙｌａｎｎ， Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、１９９０、第２巻、２６９頁ｆｆもしくはＬａｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．、「Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２版、４０４〜４１９頁、１９７６などに記載の文献から公知の軟質ゼラチンカプセル剤を生成する従来の方法、または例えば、Ｊｉｍｅｒｓｏｎ Ｒ． Ｆ． ｅｔ ａｌ．、「Ｓｏｆｔ ｇｅｌａｔｉｎ ｃａｐｓｕｌｅ ｕｐｄａｔｅ」、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ．、第１２巻、第８〜９号、１１３３〜４４頁、１９８６に記載されている手順などの他の手順によって調製し得る。
【００５４】
上記で定義した製剤または上記で定義したカプセル剤は、０．１ｍｇ〜２０ｍｇの活性物質／体重ｋｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜４ｍｇの活性物質／体重ｋｇの投与量範囲で使用し得る。
上記で定義したカプセル剤は、適切なガラス製容器もしくは軟質プラスチック製容器中に、またはアルミニウムパウチもしくは二重ポリ袋中にパッケージし得る。
【００５５】
投与量およびスケジュールは、特定の病態および患者の全体的な状態によって変化し得る。本発明の化合物Ａまたは薬学的に許容されるその塩による治療に加えて、１種または複数のさらなる化学療法剤が使用される場合、投与量およびスケジュールはまた変動し得る。スケジュール作成は、任意の特定の患者を治療している医師が決定することができる。
【００５６】
放射線療法は、臨床放射線療法における公知の診療によって投与し得る。電離放射線の線量は、臨床放射線療法において使用することが知られている線量である。使用される放射線療法には、例えば、γ線、Ｘ線の使用、および／または放射性同位体からの放射線の定方向送達が含まれる。マイクロ波およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ傷害要因はまた、本発明に含まれる。例えば、Ｘ線は、１．８〜２．０Ｇｙの１日線量で、１週間に５日、５〜６週間投与し得る。通常総分割線量は、４５〜６０Ｇｙの範囲内にある。単一のより高い線量、例えば、５〜１０Ｇｙを、一連の放射線療法の部分として投与し得る。単回線量を手術中に投与し得る。超分割放射線療法を使用してもよく、それによって低線量のＸ線を、ある期間に亘って定期的に、例えば、数日に亘り１時間当たり０．１Ｇｙ投与する。放射性同位体についての線量範囲は広範に変化し、同位体の半減期、放射された放射線の強度およびタイプ、ならびに細胞による取込みによって決まる。
【００５７】
特定の病態の治療上の処置または予防的治療のために必要な各治療の用量の規模は、治療を受けるホスト、投与経路および治療される病気の重症度によって必然的に変化する。したがって、最適な投与量は、任意の特定の患者を治療している医師が決定し得る。例えば、毒性を減少させるために、併用療法の成分の上記の用量を減少させることが必要または望ましいことがあり得る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野、特に特定の化合物の活性のバイオマーカー、および前記化合物による治療のモニタリングに関する。
本発明はさらに具体的には、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態の活性をモニターするためのバイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
生物における分子過程の知識およびこれらの過程を研究する技術における最近の進歩は、疾患を分類および治療する方法およびシステムの改善をもたらした。疾患の治療のための方法を提供および／または改善し、治療の効果をモニターするための方法およびシステムを提供および／または改善するための研究が多くの分野において行われている。
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンは、特に、腫瘍疾患、免疫疾患、または免疫性成分が関与する病的状態、または線維性疾患の治療のための、貴重な薬理学的特性を有する画期的な活性成分である。
この化合物の化学構造を、式Ａとして下記に示す。
式Ａ
【０００３】
【化１】
この化合物のベース形態は、ＷＯ０１／２７０８１に記載されており、モノエタンスルホン酸塩の形態は、ＷＯ２００４／０１３０９９に記載されており、様々なさらなる塩の形態は、ＷＯ２００７／１４１２８３に示されている。免疫疾患または免疫性成分が関与する病的状態の治療のためのこの分子の使用は、ＷＯ２００４／０１７９４８に記載されており、腫瘍疾患の治療のための使用は、ＷＯ２００４／０９６２２４に記載されており、線維性疾患の治療のための使用は、ＷＯ２００６／０６７１６５に記載されている。
【０００４】
この化合物のモノエタンスルホン酸塩の形態は、この塩の形態を医薬品として開発するのに特に適しているものとしている特性を示す。３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノン−モノエタンスルホネートの化学構造を、式Ａ１として下記に示す。
式Ａ１
【０００５】
【化２】
前臨床試験によって、この化合物が、腫瘍血管新生を阻害する機序によって腫瘍増殖を抑制する、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）および繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）の高度に強力で経口的に生物が利用可能な阻害剤であることが示されてきた。この化合物は、内皮細胞および平滑筋細胞および周皮細胞におけるシグナル伝達を阻害し、腫瘍血管密度を減少させることがさらに示されてきた。
さらに、この化合物は、耐容性良好である用量で今までに試験された全てのモデルにおいてインビボで抗腫瘍効力を示す。下記の表１は、異種移植モデルおよび同種ラット腫瘍モデルにおけるインビボでの抗腫瘍効力試験の結果を示す。
【０００６】
【表１】
Ｔ／Ｃは、腫瘍サイズの減少を対照の％で表す。
【０００７】
したがってこの化合物は、例えば、血管形成または細胞の増殖が関与する疾患の治療に適している。
この化合物は、ＷＯ２００６／０６７１６５に記載されているように、線維性疾患の治療にさらに適している。
【０００８】
診断およびスクリーニングのための方法を開発することを目的とする多くの研究に関わらず、治療をモニターするための効率的な方法およびシステムが依然として求められている。モニタリングは必ずしも可能ではなく、あるいは患者から試料、例えば、生検試料を得て、試験施設においてこれらの試料を研究するなど、患者にとって都合が悪いことが多い複雑、高価および／または時間のかかる手順を必要とする。腫瘍細胞の放射線分析は、腫瘍治療の開始の数週間後にのみ可能となる。
したがって、ＷＯ２００８／１２７５２８によると、反応をモニターし、または患者における感受性を決定し、疾患および障害の治療において役立つ個人に合わせた遺伝的プロファイルの同定を可能にする方法および手順が提供されている。
【０００９】
ＷＯ２００８／１３４５２６によると、膀胱癌は、尿試料中の同定されたバイオマーカーのレベル上昇の存在についてスクリーニングによって検出し得る。この文献は、対象からの尿試料中で、この中で同定された膀胱癌についての少なくとも１つのバイオマーカー（α−１Ｂ−糖タンパク質、ハプトグロビン、血清トランスフェリン、またはα−１−アンチトリプシンなど）を検出することによる、膀胱癌（初期または後期膀胱癌など）の診断、予後、およびモニタリングのための方法をさらに記載している。バイオマーカーは、バイオマーカータンパク質を検出もしくは結合する作用剤、またはバイオマーカータンパク質もしくはその部分と特異的に反応性の抗体などのコード化核酸を検出もしくは結合する作用剤を使用して、検出、および任意選択で測定し得る。
したがって、特定の細胞表面分子の発現量は、疾患またはその治療を指示するものとして既に提案されてきた。
【００１０】
ＷＯ２００５／０８３１２３によると、個体からの試料中のＡＣ１３３の発現生成物の量、すなわちタンパク質またはそのｍＲＮＡの量は、疾患またはその治療の徴候を示す。この参考文献は、未治療の癌患者におけるＡＣ１３３の発現は、健常人と比較して有意により高いことをさらに記述する。例において、様々な腫瘍患者を治療するときにＡＣ１３３発現は有意に下落する一方、同じ治療の間に循環内皮細胞の総数は本質的に同じままであることをまた示す。本質的に、この参考文献は、循環内皮細胞の数は、必ずしも個体の状態の徴候を示すとは限らない一方、ＡＣ１３３発現生成物の総量は、前記状態の徴候を示すことをさらに記述する。同様に、ＷＯ２００４／０１９８６４は、ＡＣ１３３をマーカーとして同定し、血管形成を診断およびモニターするための定量的ＲＴ−ＰＣＲの使用を記載している。
【００１１】
しかし、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、上記の活性成分である３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするためのバイオマーカーを使用した方法またはシステムは、今までに記載または示唆されてこなかった。このような方法またはシステムはまた、従来技術から予測し得ない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための、バイオマーカーを使用した方法またはシステムを提供することである。
したがって本発明の１つの目的は、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための方法またはシステムを提供することであり、前記方法は、前記個体からの試料が前記治療の徴候を示す量のバイオマーカーを含むかどうかを決定することを含む。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、上記の方法またはシステムであり、バイオマーカーは、タンパク質の発現もしくは状態における変化、あるいは疾患の危険性もしくは進行と相関する、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する、特定の細胞の量における変化を示す。
本発明によるさらなる実施形態において、バイオマーカーは、薬力学的バイオマーカーである。
本発明によるさらなる実施形態において、治療のモニタリングは、奏効の程度のモニタリング、奏効期間のモニタリング、奏効率のモニタリング、安定化率のモニタリング、安定化期間のモニタリング、疾患の悪化までの時間のモニタリング、無増悪生存期間のモニタリングまたは全生存期間のモニタリングのいずれか１つ（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）を意味する。
【００１４】
本発明のさらなる目的は、前記量が定量化される、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記量を参照値と比較することを含む、上記の方法およびシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記発現生成物または特定の細胞の前記量と、前記治療の前に前記個体から得た試料中に存在する前記発現生成物または特定の細胞の量とを比較することを含む、上記の方法またはシステムである。
さらなる実施形態において、前記個体からのいくつかの試料は、治療の開始後に異なる時点で得る。これによって、一連の治療の長期間のモニタリングが可能となる。例えば、バイオマーカーの量が前記疾患またはその治療の徴候を示し続けるかを決定することができる。これは例えば、患者毎をベースとした適当な治療スケジュール、投与量およびタイプを確立するのに有用である。さらに、所与の時点での治療の継続が適当であるかどうかを決定することができる。
【００１５】
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の１カ月以内に得る、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の１週間以内に得る、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記試料を前記治療の開始の２日以内に得る、上記の方法またはシステムである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがいくつかの特異的細胞表面抗原を示す細胞を含む、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、試料が血液試料である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーが内皮細胞のホスホ−チロシンレベルである、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の数およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の数から選択される、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記バイオマーカーがＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の数である、上記の方法またはシステムである。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、前記個体からの試料における、フローサイトメトリーを使用した内皮細胞のホスホ−チロシンレベルの減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記個体からの血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、前記個体からの血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の減少が治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の割合の増加が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の減少が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の増加が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後、例えば、８日目および２９日目に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の減少が、治療の徴候を示す、上記の方法またはシステムである。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
本発明のさらなる目的は、治療後に測定し、治療前と比較したＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の減少が、奏効の徴候を示す（安定疾患）、上記の方法またはシステムである。
【００２０】
本発明のさらなる目的は、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による患者の治療が有効であるかを決定するための方法またはシステムであって、下記の要素：このような決定を要求する患者または医師；患者からの生体材料の試料の取得；個体の治療をモニターするための上記の方法またはシステムを使用した試料の分析；および患者または医師への試験結果の情報伝達を含む。
本発明はまた、本発明による方法またはシステムを行うための少なくとも１つの手段を含む診断キットを提供する。一態様において、キットは、ｍＲＮＡ、タンパク質のレベルまたは細胞もしくは試料レベルでのバイオマーカーセットの発現をモニターするための試薬または材料（抗体または核酸など）、および任意選択で患者の組織標本または患者の試料からの細胞の試験において使用するための１種または複数の活性成分、および任意選択で使用説明書を含み得る。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、上記で記載されているような化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするための方法またはシステムにおけるバイオマーカーの使用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣ細胞のホスホ−チロシンレベルに対する異なる化合物の効果。横座標上で：１は、ＶＥＧＦで未処理および活性成分に未曝露のＩｇＧ対照であり；２は、ＶＥＧＦで未処理および活性成分に未曝露の対照であり；３は、ＶＥＧＦで処理されたが、活性成分に未曝露の対照であり；４は、ＶＥＧＦで処理し、１μＭの化合物Ａ１に曝露させ；５は、ＶＥＧＦで処理し、５μＭの化合物Ａ１に曝露させ；６は、ＶＥＧＦで処理し、１μＭの化合物ＡＧ１４７８に曝露させ；７は、ＶＥＧＦで処理し、５μＭの化合物ＡＧ１４７８に曝露させ；８は、ＶＥＧＦで処理し、１ｍＭの化合物５ＦＵに曝露させ；９は、ＶＥＧＦで処理し、５ｍＭの化合物５ＦＵに曝露させる。
【図２】化合物Ａ１による処理によるインビボでのＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+白血球細胞のホスホ−チロシンレベル。横座標上で：０は、未処理対照を表し；Ａ５０は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表し；Ａ１００は、１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表す。
【図３】化合物Ａ１による処理によるマウス末梢血中のＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞のフローサイトメトリー。横座標上で：０は、未処理対照を表し；Ａ５０は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表し；Ａ１００は、１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ１による処理を表す。
【図４】治療前、ならびに化合物Ａ１による処理後２日目、８日目および２９日目に採取した全血中のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の割合（象限）。
【図５】レスポンダーおよび非レスポンダーにおける、治療前、ならびに化合物Ａ１による処理後２日目、８日目および２９日目に採取した全血中のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の比。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の意義の範囲内で、バイオマーカーは、生物学的状態の指標として使用する。バイオマーカーは通常の生物学的過程、病原性過程、または治療的介入に対する薬理反応の指標として客観的に測定および評価される特徴である。これは１９９８年のＮＩＨの研究グループによって与えられた定義と一致している。
【００２４】
さらに具体的には、バイオマーカーは、疾患の危険性もしくは進行、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する変化を示す。提案されたバイオマーカーが確認されると、そのバイオマーカーを使用して、個体における疾患の危険性、疾患の存在を診断し、または個体における疾患の治療を調整（薬物治療または投与体制の選択）することができる。可能性がある薬物療法の評価において、バイオマーカーは、生存または不可逆的な病的状態などの自然のエンドポイントの代用として使用し得る。治療が健康の改善と直接関連を有するバイオマーカーを変化させる場合、そのバイオマーカーは、臨床的有用性を評価するための代用エンドポイントとしての役割を果たす。
【００２５】
本発明の方法またはシステムは、個体において少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップが、個体からの生体試料を採取し、次いで生体試料中のバイオマーカー（複数可）のレベルを測定することを含む、例えばインビトロの方法でよい。生体試料は、例えば、血清、新鮮な全血、末梢血単核球細胞、冷凍全血、新鮮な血漿、冷凍血漿、尿、唾液、皮膚、毛包、骨髄、または腫瘍組織の少なくとも１つを含むことができる。
【００２６】
本発明の範囲内で、分化クラスター分子ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７は、特定の細胞型の細胞マーカーとして特に重要である。
したがって、分化クラスター（または命名クラスター、ＣＤと略されることが多い）は、白血球上に存在する細胞表面分子の同定および調査のために使用されるプロトコルである。ＣＤ命名法は、１９８２年にパリで開催された第１回Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ａｎｄ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ（ＨＬＤＡ）において提案および確立された。このシステムは、白血球（白血球細胞）の表面分子上のエピトープに対して世界中の異なる試験施設によって作成された多くのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の分類を対象とした。それ以来、その使用は多くの他の細胞型に拡大されてきており、３２０超の特有なＣＤクラスターおよびサブクラスターが同定されてきた。提案された表面分子は、２つの特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が分子に結合していることが示されると、ＣＤ番号を割り当てられる。分子がよく特性決定されておらず、または１つのｍＡｂのみを有する場合、暫定的指標「ｗ」が通常与えられる（「ＣＤｗ１８６」におけるように）。ＣＤ分子は、多数の様式で作用することができ、細胞にとって重要な受容体またはリガンド（受容体を活性化する分子）として作用することが多い。シグナルカスケードが通常開始し、細胞の挙動（細胞シグナル伝達）を変化させる。いくつかのＣＤタンパク質は細胞シグナル伝達において役割を果たしていないが、細胞接着などの他の機能を有する。概ね２５０の異なるタンパク質がある。
【００２７】
ＣＤシステムは、細胞マーカーとして通常使用され、どのような分子がそれらの表面上に存在するかに基づいて細胞を定義することを可能にする。１つのＣＤ分子を使用して集団を定義することは一般ではない（数例は存在するが）一方、マーカーを合わせることは、免疫系内で非常に特定の定義を有する細胞型を可能にした。
ＣＤ分子は、フローサイトメトリーを含めた様々な方法を使用して、細胞選別において利用されている。細胞集団は通常、特定の細胞画分がＣＤ分子を発現している、または欠いていることを示す、「＋」または「−」の記号を使用して定義する。例えば、「ＣＤ３４＋、ＣＤ３１−」細胞は、ＣＤ３４を発現しているが、ＣＤ３１を発現していない細胞である。このＣＤの組合せは典型的には、完全に分化した内皮細胞と対立した幹細胞に相当する。下記の表２は、いくつかの造血幹細胞および白血球細胞のＣＤマーカーを示す。
【００２８】
【表２】
【００２９】
分化クラスターＣＤ３４分子は、人体内の特定の細胞上に存在する分子である。ＣＤ３４を発現している細胞（ＣＤ３４＋細胞）は通常、臍帯および骨髄中に、造血細胞、血管内皮前駆細胞、血管（リンパ管ではない（胸膜のリンパ管以外））の内皮細胞；肥満細胞、間質中および皮膚の真皮の付属器周辺の亜集団樹状細胞（第ＸＩＩＩａ因子陰性である）、ならびにいくつかの軟部組織腫瘍中の細胞として見出される。ＣＤ３４＋細胞は細胞表面糖タンパク質であり、細胞間接着因子として機能する。ＣＤ３４＋細胞はまた、骨髄細胞外マトリックスへの、または直接ストローマ細胞への幹細胞の結合を媒介し得る。ＣＤ３４＋細胞は、免疫磁気または免疫蛍光方法を使用して血液試料から単離し得る。抗体を使用して、研究および臨床骨髄移植のために造血前駆細胞幹細胞を定量化および精製する。したがって、それらのＣＤ３４＋発現によって、このような細胞を分類することができる。
【００３０】
分化クラスターＣＤ４５抗原は、最初に白血球共通抗原と称されたタンパク質である。この遺伝子がコードするタンパク質は、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）ファミリーのメンバーである。ＰＴＰは、細胞増殖、分化、有糸分裂周期、および癌化を含めた種々の細胞過程をレギュレートするシグナル伝達分子であることが知られている。このＰＴＰは、細胞外ドメイン、単一の膜貫通領域および２つのタンデム細胞質内触媒ドメインを含有し、したがって受容体型ＰＴＰに属する。この遺伝子は、造血細胞において特異的に発現している。このＰＴＰは、Ｔ細胞およびＢ細胞抗原受容体シグナル伝達の必要不可欠な制御因子であることが示されてきた。ＰＴＰは、抗原受容体複合体の成分との直接相互作用によって、または抗原受容体シグナル伝達に必要な様々なＳｒｃファミリーキナーゼを活性化させることによって機能する。このＰＴＰはまた、ＪＡＫキナーゼを抑制し、したがってサイトカイン受容体シグナル伝達の制御因子として機能する。別個のアイソフォームをコードする、この遺伝子の４種の選択的にスプライシングされた転写物変異体が報告されてきた。この変異体は、それらの細胞の活性化（同時刺激の形態）を助ける、赤血球以外の全ての分化した造血細胞および形質細胞上に様々な形態で存在するＩ型膜貫通タンパク質である。この変異体はリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、および急性非リンパ性白血病において発現している。
【００３１】
ＡＣ１３３ともまた称される分化クラスター分子ＣＤ１３３は、ヒトおよびげっ歯類においてＰｒｏｍｉｎｉｎ１（ＰＲＯＭ１）としてまた公知の糖タンパク質である。ＣＤ１３３は、細胞突起に特異的に局在化している５回膜貫通型糖タンパク質（５回膜貫通型、５−ＴＭ）の基本メンバーである。ＣＤ１３３は、造血幹細胞、血管内皮前駆細胞、神経膠芽腫、ニューロンおよびグリア幹細胞、ならびにいくつかの他の細胞型において発現している。
ＫＩＴまたはＣ−ｋｉｔ受容体ともまた称される分化クラスター分子ＣＤ１１７は、造血幹細胞および他の細胞型の表面上に発現しているサイトカイン受容体である。この受容体は、幹細胞因子（特定のタイプの細胞が増殖することをもたらす物質）に結合する。ＣＤ１１７は、骨髄において特定のタイプの造血（血液）前駆細胞を同定するために使用される重要な細胞表面マーカーである。特異的に造血幹細胞（ＨＳＣ）、多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、および骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）は、高いレベルのＣＤ１１７を発現する。リンパ球共通前駆細胞（ＣＬＰ）は、低い表面レベルのＣＤ１１７を発現する。ＣＤ１１７はまた、胸腺中の最初期胸腺細胞前駆体を同定する。さらに肥満細胞、皮膚のメラニン形成細胞、および消化管のカハール間質細胞は、ＣＤ１１７を発現する。ＣＤ１１７はまた、マウス前立腺幹細胞についてのマーカーである。
【００３２】
下記に示すように本発明によると、特定の細胞マーカーを示す細胞は、活性成分３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、好ましくはモノエタンスルホン酸塩の形態による個体の治療をモニターするためのバイオマーカーとして有用である。
【００３３】
特にこれには、奏効の程度、奏効期間、奏効率、安定化率、安定化期間、疾患の悪化までの時間、無増悪生存期間または全生存期間のモニタリング（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）が含まれる。
上記のように、本明細書に定義されているような本発明の治療は、それらの抗血管新生および／または血管透過性作用のために重要である。血管形成、および／または血管透過性の増加は、癌（白血病、カポジ肉腫、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、血管腫、急性および慢性ネフロパシー、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、喘息、リンパ浮腫、子宮内膜症、不正子宮出血、線維症、肝硬変、ならびに網膜血管増殖を伴う眼疾患（加齢黄斑変性症を含めた）を含めた広範囲の病態において存在する。
【００３４】
本明細書に定義されているような本発明の併用療法は、前記療法の個々の成分の同時、連続または別々の投与によって達成し得る。本明細書に定義されているような併用療法は、単独の療法として適用してもよく、あるいは本発明の併用療法に加えて、手術または放射線療法またはさらなる化学療法剤もしくは標的剤が関与し得る。本明細書に記載されているような併用療法の投与の前、間または後に、手術は、部分的もしくは完全な腫瘍切除のステップを含み得る。
本発明の併用療法は、癌およびカポジ肉腫などの疾患の予防および治療に特に有用であることが期待される。特に、本発明のこのような併用療法は有利なことには、例えば、結腸、膵臓、脳、膀胱、卵巣、乳房、前立腺、肺および皮膚の原発性および再発性の固形腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。本発明の併用療法は有利なことには、肺癌（悪性胸膜中皮腫、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含めた）、頭頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、肝細胞癌、乳癌、腎細胞癌および尿路癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、肉腫、皮膚癌、ならびに血液腫瘍（白血病、脊髄形成異常症、骨髄腫、リンパ腫）における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。
【００３５】
より特定すると、本発明のこのような併用療法は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた、ＶＥＧＦと関連する任意の形態の癌を阻害し、また、例えば、結腸（直腸を含めた）、膵臓、脳、腎臓、肝細胞癌、膀胱、卵巣、乳房、前立腺、肺、外陰部、皮膚の特定の腫瘍、特に悪性胸膜中皮腫およびＮＳＣＬＣを含めた、例えば、ＶＥＧＦと関連するそれらの原発性および再発性の固形腫瘍、特に、それらの増殖および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存しているそれらの腫瘍の増殖を阻害することが期待される。より特に、本発明の併用療法は有利なことには、悪性胸膜中皮腫における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。より特に、本発明の併用療法は有利なことには、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）における腫瘍の増殖を遅延させることが期待される。
【００３６】
本発明の別の態様において、この治療は、ＶＥＧＦと関連するそれらの原発性および再発性の固形腫瘍、特にそれらの増殖および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存しているそれらの腫瘍の増殖を阻害することが期待される。
下記の研究は、本発明を例示することを意図する。これらの研究の記載中および本発明を通して使用される略語を、下記のリストで説明する。
【００３７】
略語のリスト
ＡＰＣ アロフィコシアニン
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＣＥＣ 循環内皮成熟細胞
ＣＥＰ 循環内皮前駆細胞
Ｃｙ５．５ シアニン５．５
ＥＧＦＲ 上皮増殖因子受容体
ＦＣＭ フローサイトメトリー
ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアネート
ＦＳＣ 前方散乱
ＨｅｐＧ２ ヒト肝細胞肝癌細胞系
ＨＵＶＥＣ ヒト臍帯静脈内皮細胞
ＰＢＬ 末梢血白血球
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＤ 進行性疾患
−ＰＥ フィコエリトリンで標識
ＰｅｒＣＰ ペリジニンクロロフィルタンパク質
ＰＹまたはｐＹ ホスホ−チロシン
ＲＥＳ レスポンダー（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）
ＳＳＣ 側方散乱
ＴＫＩ チロシンキナーゼ阻害剤
ＶＥＧＦＲ 血管内皮増殖因子受容体２
【００３８】
前臨床試験
下記のインビトロおよびインビボの実験を行い、肝細胞癌についての化合物Ａ１の抗腫瘍活性を評価し、血液試料中の新規な薬力学的バイオマーカー、すなわち、内皮細胞のホスホ−チロシンレベル、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数およびＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数を同定した。
【００３９】
ＨＵＶＥＣ細胞による実験（図１）
ＨＵＶＥＣ細胞を、化合物Ａ１（１μＭおよび５μＭ）、ＥＧＦＲ阻害剤ＡＧ１４７８（１μＭおよび５μＭ）、ならびに５ＦＵ（５−フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌｅ）、１ｍＭおよび５ｍＭ）に３時間曝露させ、細胞採取の前に２０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦを５分間加えた。採取した細胞をＰＢＳによって２度洗浄し、５０μＬの染色緩衝液中で遠心分離した（３００ｇ、５分）。吸引による上清の除去の後、細胞ペレットを２５０μＬの固定／透過処理溶液中で溶解し、２０分間氷上に保持した。ＰＹ−１００Ａｌｅｘａ４８８抗体およびホスファターゼ阻害剤を加えた。細胞を暗中氷上で３０分間保持し、Ｐｅｒｍ／洗浄緩衝液で２度洗浄し、５００μＬの染色緩衝液中で再び溶解した。次いで、細胞をフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ）によって検査した。データはＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ）から得て、ＷｉｎＭＤＩ２．９（フリーソフトウェア）によって分析した。
【００４０】
インビボ試験のためのマウス血液試料（図２および３）
ＨｅｐＧ２細胞を接種されたマウスを、腫瘍サイズによって３群に無作為化し、ビヒクル（対照）、化合物Ａ１（５０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）または化合物Ａ１（１００ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）で１４日間処理した。マウスを殺処分し、マウス全血試料を腹部大動脈または心臓からの吸引によって採取した。血液を溶血薬によって室温で１０分間溶血させた。遠心分離（５００ｇ、５分）後、細胞を１ｍＬの染色緩衝液で洗浄した。次いで、細胞を、１００μＬの染色緩衝液および５μＬのＶＥＧＦＲ２−ＰＥ抗体と共に暗中１５分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、５００μＬの固定／透過処理溶液中で２０分間インキュベートし、Ｐｅｒｍ／洗浄緩衝液によって２度洗浄した。次いで、抗体（ＰＹ−１００、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、各々５μＬ）およびホスファターゼ阻害剤の混合物を加え、暗中３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ）によって分析した。データはＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ）から得て、ＷｉｎＭＤＩ２．９（フリーソフトウェア）によって分析した。
【００４１】
抗体
ＰＹ−１００（ホスホ−チロシン）Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８複合体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、♯９４１４）
ＶＥＧＦＲ２−ＰＥ（ＢＤ ｐｈａｒｍ、５５５３０８）
ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ＢＤ Ｐｈａｍ、３４０９５３）
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８マウスＩｇＧκアイソタイプ対照（ＢＤ Ｐｈａｍ、５５７７０２）
緩衝液
ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ、固定／透過処理キット（カタログ５５４７１４）
１％熱失活ＦＣＳ、および０．０９％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを補充した染色緩衝液（ＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（Ｍｇ2+、Ｃａ２+を有さない）（ｐＨは７．４〜７．６に調節））
１０ｘ溶解緩衝液（ＮＨ4Ｃｌ８２．６ｇ、ＮａＨＣＯ3１１．９ｇ、ＥＤＴＡ２Ｎａ０．３７８ｇ、１ＬまでのＨ2Ｏ、ｐＨは７．３に調節）
【００４２】
結果
図１から分かるように、インビトロ試験において、ＨＵＶＥＣ細胞のホスホ−チロシンレベルは、化合物Ａ１によって抑制されたが、ＡＧ１４７８（ＥＧＦＲ−ＴＫＩ）によって抑制されず、５ＦＵによって抑制されなかった。
図２から分かるように、インビボの試験において、化合物Ａ１は、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数を減少させるようである。さらに、図３から分かるように、マウス末梢血中のＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞は、化合物Ａ１による処理によって抑制された。
【００４３】
結論
フローサイトメトリーを使用した内皮細胞のホスホ−チロシンレベルの減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
血液試料からのフローサイトメトリーを使用したＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の減少を検出することは、抗血管新生阻害剤化合物Ａ１についての薬力学的バイオマーカーである。
【００４４】
第Ｉ相臨床試験
さらなる試験、すなわち第Ｉ相試験を行い、進行固形腫瘍（ＳＴ）を有する患者における化合物Ａ１の抗腫瘍活性を調査し、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７陽性細胞がこの活性成分の活性のバイオマーカーとして有用であり得ることを確認した。
方法
全血は、治療前（１日目）に、ならびに治療後２日目、８日目および２９日目に採取した。全血から同定したＣＤ３４+ＣＤ４５dim末梢血細胞の亜集団は、フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１３３およびＣＤ１１７の細胞表面マーカーによってさらに同定した。全血（８００μＬ）を、４．５ｍＬの０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳで補充し、５分間遠心分離した（１５００ｒｐｍ）。吸引による上清の除去の後、４．５ｍＬの０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳを加え、遠心分離した。細胞ペレットを、５０μＬのヒトγ−グロブリンと混合した。抗体（ＣＤ３４−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１７−ＰＥ、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰおよびＣＤ１３３−ＡＰＣ）を加え、４Ｃで４５分間保持した。溶血薬（４．５ｍＬ）を加え、１０分間インキュベートした。遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）後、上清を２度洗浄した。次いで、０．２％ＢＳＡ−ＰＢＳ（４．５ｍＬ）を加え、上清を遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）によって除去した。細胞ペレットをＢＳＡ−ＰＢＳで８００μＬまで満たし、フローサイトメトリーによって分析した。ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３＋／−ＣＤ１１７＋／−細胞の割合（象限）を分析した。
抗体
ＣＤ３４ＦＩＴＣ、ＢＥＣＫＭＡＮＣＯＵＬＴＥＲ（カタログ番号ＩＭ１８７０）。
ＣＤ１１７ＰＥ、ＢＥＣＫＭＡＮＣＯＵＬＴＥＲ（カタログ番号ＩＭ２７３２）。
ＣＤ４５ＰｅｒＣＰ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（カタログ番号３４７４６４）。
ＣＤ１３３ＡＰＣ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（カタログ番号１３０−０９０−８５４）。
【００４５】
結果
化合物Ａ１による処理およびＣＤ１３３ＣＤ１１７細胞：フローサイトメトリー分析によって、化合物Ａ１による処理が、治療前と比較して、２９日目にＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の割合を有意に増加させ（ｐ＜０．００１）、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の割合を逆に減少させた（ｐ＜０．０１、図４Ａ）ことが明らかになった。２９日目のＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞は、有意に増加し（図４Ｂ）、８日目および２９日目にＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞は、有意に減少した（図４Ｃ）。
【００４６】
化合物Ａ１の反応およびＣＤ１３３ＣＤ１１７細胞：ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞は、レスポンダーにおいて減少する傾向があった（安定疾患）が、有意ではなかった（図５Ａ）。治療後の非レスポンダーと比較したときに、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞はレスポンダーにおいて減少する傾向があった（安定疾患）（図５Ｂ）が、データは非常に小さな試料サイズ（ＲＥＳ、ｎ＝１２、ＰＤ、ｎ＝４）および限定されたエビデンス（ｅｖｉｄｅｎｃｅ）から得た。
【００４７】
結論
抗血管新生阻害剤化合物Ａ１のための血液試料中の薬力学的バイオマーカーは、
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞；
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞；
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞；および
ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞
である。
【００４８】
抗血管新生阻害剤化合物Ａ１のための血液試料中の予測的バイオマーカーは、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞である。
【００４９】
さらなる実施形態
単独で、あるいは任意選択でさらなる薬学的活性成分および／またはさらなる治療（例えば、放射線療法など）と組み合わせて使用されるとき、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩、特にそのモノエタンスルホン酸塩の形態で治療し得る疾患は、骨髄腫細胞の細胞増殖、移動もしくはアポトーシスが関与する疾患、血管形成または線維症である。
好ましい実施形態において、疾患は、腫瘍の存在を含む。
さらなる実施形態において、疾患は、進行性腫瘍である。
さらなる実施形態において、疾患は、例えば、特発性肺線維症などの線維性疾患である。
さらなる実施形態において、疾患は、癌（カポジ肉腫、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、血管腫、急性および慢性ネフロパシー、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、喘息、リンパ浮腫、子宮内膜症、不正子宮出血、線維症、肝硬変、ならびに網膜血管増殖を伴う眼疾患（加齢黄斑変性症を含めた）から選択される。
さらなる実施形態において、疾患は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、悪性胸膜中皮腫または腹膜中皮腫、頭頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、肝細胞癌、乳癌、腎細胞癌、尿路癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、肉腫、皮膚癌、ならびに血液腫瘍（白血病、脊髄形成異常症、骨髄腫、リンパ腫）から選択される。
【００５０】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンの本明細書の上記に既に記載されているもの以外の薬学的に許容される塩には、例えば、酸付加塩が含まれてもよい。このような酸付加塩には、例えば、薬学的に許容されるアニオンを与える無機酸または有機酸を有する塩が含まれる（ハロゲン化水素、または硫酸もしくはリン酸、またはトリフルオロ酢酸、クエン酸もしくはマレイン酸によってなど）。さらに、薬学的に許容される塩は、薬学的に許容されるカチオンを与える無機塩基または有機塩基によって形成し得る。無機塩基または有機塩基を有するこのような塩には、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩またはカリウム塩など）、およびアルカリ土類金属塩（カルシウム塩またはマグネシウム塩など）が含まれる。
【００５１】
本発明によると、化合物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体を使用して適宜に製剤し得る。本発明の範囲内で使用し得る適切な製剤は、これらの化合物に関連する文献および特許出願において既に記載されてきた。これらの製剤は、参照により本明細書中に組み込まれている。
【００５２】
本発明による一実施形態において、式Ａ１の化合物についての製剤は、好ましくは、脂質担体、増粘剤および流動促進剤／可溶化剤を含む活性物質の脂質懸濁液であり、最も好ましくは、脂質担体は、トウモロコシ油グリセリド、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｇｌｙｃｏｌｍｏｎｏｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）、エタノール、グリセロール、グリコフロール、マクロゴールグリセロールカプリロカプリレート、マクロゴールグリセロールリノレエート、中鎖部分グリセリド、中鎖トリグリセリド、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール６００、ポリオキシルヒマシ油、ポリオキシル水素化ヒマシ油、プロピレングリコールモノカプリレート、モノラウリン酸プロピレングリコール、精製ダイズ油、トリアセチン、クエン酸トリエチル、またはその混合物から選択され、増粘剤は、オレオゲル形成賦形剤（コロイド状シリカもしくはＢｅｎｔｏｎｉｔなど）、または高粘度の親油性もしくは両親媒性賦形剤（ポリオキシル水素化ヒマシ油、水素化植物油マクロゴールグリセロール−ヒドロキシステアレート、マクロゴールグリセロール−リシノレエートまたはハードファットなど）から選択され、流動促進剤／可溶化剤は、好ましくはマクロゴールグリセロール−ヒドロキシステアレートまたはマクロゴールグリセロール−リシノレエートから選択される１種または複数のマクロゴールグリセロールを任意選択でさらに含むレシチンから選択される。脂質懸濁液製剤は、文献から公知の製剤を生成する従来の方法によって、すなわち、均質化した懸濁液を得るために、所定の温度にて所定の順序で成分を混合することによって調製し得る。
【００５３】
上記の製剤は、好ましくは医薬カプセル剤、好ましくは軟質ゼラチンカプセル剤（カプセル殻は、可塑剤として、例えば、グリセロールを含むことを特徴とする）、または硬質ゼラチンカプセル剤もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセル剤（任意選択でシーリング（ｓｅａｌｉｎｇ）またはバンディング（ｂａｎｄｉｎｇ）を伴う）中に組み込んでもよい。カプセル医薬品剤形は、文献から公知のカプセル剤を生成する従来の方法によって調製し得る。軟質ゼラチンカプセル剤は、例えば、「回転金敷手順」などの、例えば、Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ， Ｂｏｙｌａｎｎ， Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、１９９０、第２巻、２６９頁ｆｆもしくはＬａｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．、「Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２版、４０４〜４１９頁、１９７６などに記載の文献から公知の軟質ゼラチンカプセル剤を生成する従来の方法、または例えば、Ｊｉｍｅｒｓｏｎ Ｒ． Ｆ． ｅｔ ａｌ．、「Ｓｏｆｔ ｇｅｌａｔｉｎ ｃａｐｓｕｌｅ ｕｐｄａｔｅ」、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ．、第１２巻、第８〜９号、１１３３〜４４頁、１９８６に記載されている手順などの他の手順によって調製し得る。
【００５４】
上記で定義した製剤または上記で定義したカプセル剤は、０．１ｍｇ〜２０ｍｇの活性物質／体重ｋｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜４ｍｇの活性物質／体重ｋｇの投与量範囲で使用し得る。
上記で定義したカプセル剤は、適切なガラス製容器もしくは軟質プラスチック製容器中に、またはアルミニウムパウチもしくは二重ポリ袋中にパッケージし得る。
【００５５】
投与量およびスケジュールは、特定の病態および患者の全体的な状態によって変化し得る。本発明の化合物Ａまたは薬学的に許容されるその塩による治療に加えて、１種または複数のさらなる化学療法剤が使用される場合、投与量およびスケジュールはまた変動し得る。スケジュール作成は、任意の特定の患者を治療している医師が決定することができる。
【００５６】
放射線療法は、臨床放射線療法における公知の診療によって投与し得る。電離放射線の線量は、臨床放射線療法において使用することが知られている線量である。使用される放射線療法には、例えば、γ線、Ｘ線の使用、および／または放射性同位体からの放射線の定方向送達が含まれる。マイクロ波およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ傷害要因はまた、本発明に含まれる。例えば、Ｘ線は、１．８〜２．０Ｇｙの１日線量で、１週間に５日、５〜６週間投与し得る。通常総分割線量は、４５〜６０Ｇｙの範囲内にある。単一のより高い線量、例えば、５〜１０Ｇｙを、一連の放射線療法の部分として投与し得る。単回線量を手術中に投与し得る。超分割放射線療法を使用してもよく、それによって低線量のＸ線を、ある期間に亘って定期的に、例えば、数日に亘り１時間当たり０．１Ｇｙ投与する。放射性同位体についての線量範囲は広範に変化し、同位体の半減期、放射された放射線の強度およびタイプ、ならびに細胞による取込みによって決まる。
【００５７】
特定の病態の治療上の処置または予防的治療のために必要な各治療の用量の規模は、治療を受けるホスト、投与経路および治療される病気の重症度によって必然的に変化する。したがって、最適な投与量は、任意の特定の患者を治療している医師が決定し得る。例えば、毒性を減少させるために、併用療法の成分の上記の用量を減少させることが必要または望ましいことがあり得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体からの試料が、治療の徴候を示す量でバイオマーカーを含むかどうかを決定することを含む、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による前記個体の前記治療をモニターするための方法またはシステム。
【請求項２】
化合物が、３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンのモノエタンスルホン酸塩の形態である、請求項１に記載の方法またはシステム。
【請求項３】
バイオマーカーが、タンパク質の発現もしくは状態における変化、あるいは疾患の危険性もしくは進行と相関する、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する、特定の細胞の量における変化を示す、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項４】
治療のモニタリングが、奏効の程度のモニタリング、奏効期間のモニタリング、奏効率のモニタリング、安定化率のモニタリング、安定化期間のモニタリング、疾患の悪化までの時間のモニタリング、無増悪生存期間のモニタリングまたは全生存期間のモニタリングのいずれか１つ（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）を意味する、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項５】
前記量が定量化される、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項６】
前記量を参照値と比較することを含む、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項７】
前記バイオマーカーが、いくつかの特異的細胞表面抗原を示す細胞を含む、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項８】
試料が、血液試料である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項９】
前記バイオマーカーが、内皮細胞のホスホ−チロシンレベルである、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１０】
前記バイオマーカーが、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１１】
前記バイオマーカーが、ＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１２】
前記バイオマーカーが、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の数およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の数から選択される、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１３】
前記バイオマーカーが、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１４】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による患者の治療が有効であるかを決定するための方法またはシステムであって、下記の要素：このような決定を要求する患者または医師；患者からの生体材料の試料の取得；請求項１または２に記載の、個体の治療をモニターするための方法またはシステムを使用した試料の分析；および患者または医師への試験結果の情報伝達を含む、方法またはシステム。
【請求項１５】
請求項１または２に記載の方法またはシステムを行うための少なくとも１つの手段を含む、診断キット。
【請求項１６】
ｍＲＮＡ、タンパク質のレベルまたは細胞もしくは試料レベルでのバイオマーカーセットの発現をモニターするための、抗体または核酸から選択される試薬または材料；任意選択で患者の組織標本または患者の試料からの細胞の試験において使用するための１種または複数の活性成分；および任意の使用説明書を含む、請求項１５に記載の診断キット。
【請求項１７】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による個体の治療をモニターするための、請求項１または２に記載の方法またはシステムにおけるバイオマーカーの使用。
【請求項１】
個体からの試料が、治療の徴候を示す量でバイオマーカーを含むかどうかを決定することを含む、化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による前記個体の前記治療をモニターするための方法またはシステム。
【請求項２】
化合物が、３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンのモノエタンスルホン酸塩の形態である、請求項１に記載の方法またはシステム。
【請求項３】
バイオマーカーが、タンパク質の発現もしくは状態における変化、あるいは疾患の危険性もしくは進行と相関する、または所与の治療に対する疾患の感受性と相関する、特定の細胞の量における変化を示す、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項４】
治療のモニタリングが、奏効の程度のモニタリング、奏効期間のモニタリング、奏効率のモニタリング、安定化率のモニタリング、安定化期間のモニタリング、疾患の悪化までの時間のモニタリング、無増悪生存期間のモニタリングまたは全生存期間のモニタリングのいずれか１つ（特に奏効期間に悪影響がないが、より少ないおよび／またはより問題とならない副作用を伴う）を意味する、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項５】
前記量が定量化される、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項６】
前記量を参照値と比較することを含む、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項７】
前記バイオマーカーが、いくつかの特異的細胞表面抗原を示す細胞を含む、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項８】
試料が、血液試料である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項９】
前記バイオマーカーが、内皮細胞のホスホ−チロシンレベルである、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１０】
前記バイオマーカーが、ＶＥＧＦＲ２+ＣＤ４５dimｐＹ+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１１】
前記バイオマーカーが、ＶＥＧＦＲ２+ｐＹ+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１２】
前記バイオマーカーが、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７-細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３-ＣＤ１１７+細胞の数、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+細胞の数およびＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１１７+細胞の数から選択される、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１３】
前記バイオマーカーが、ＣＤ３４+ＣＤ４５dimＣＤ１３３+ＣＤ１１７+細胞の数である、請求項１または２に記載の方法またはシステム。
【請求項１４】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による患者の治療が有効であるかを決定するための方法またはシステムであって、下記の要素：このような決定を要求する患者または医師；患者からの生体材料の試料の取得；請求項１または２に記載の、個体の治療をモニターするための方法またはシステムを使用した試料の分析；および患者または医師への試験結果の情報伝達を含む、方法またはシステム。
【請求項１５】
請求項１または２に記載の方法またはシステムを行うための少なくとも１つの手段を含む、診断キット。
【請求項１６】
ｍＲＮＡ、タンパク質のレベルまたは細胞もしくは試料レベルでのバイオマーカーセットの発現をモニターするための、抗体または核酸から選択される試薬または材料；任意選択で患者の組織標本または患者の試料からの細胞の試験において使用するための１種または複数の活性成分；および任意の使用説明書を含む、請求項１５に記載の診断キット。
【請求項１７】
化合物３−Ｚ−［１−（４−（Ｎ−（（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メチルカルボニル）−Ｎ−メチル−アミノ）−アニリノ）−１−フェニル−メチレン］−６−メトキシカルボニル−２−インドリノンまたは薬学的に許容されるその塩による個体の治療をモニターするための、請求項１または２に記載の方法またはシステムにおけるバイオマーカーの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１２−５２０４４６（Ｐ２０１２−５２０４４６Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５３４５０（Ｐ２０１１−５５３４５０）
【出願日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３０６３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０３０５８
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５０３３８５９２３）ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (976)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３０６３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０３０５８
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５０３３８５９２３）ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (976)
【Ｆターム（参考）】
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