注射による皮膚反応を減少させるための、アドレナリン受容体アゴニストと充填剤との注射可能な組合せ
本発明は、充填剤またはボツリヌス毒素と、アドレナリン受容体アゴニストとを含む注射可能な組成物、および注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避するためのその使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外科および皮膚科の分野に属する。
【０００２】
本発明は、アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジン、および充填剤、好ましくはヒアルロン酸を含む、注射可能な組成物に関する。本発明は、美容処置に起因する表面の挫傷および出血を予防および／または処置する際のその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
表面の挫傷および、それよりも程度は低いにせよ、出血は、皮膚充填剤、ボツリヌス毒素およびレーザーリサーフェシングを含む多くの美容処置の珍しい結果ではなく、平均して約１／３の確率と報告されている。
【０００４】
より著しい挫傷は、脂肪吸引、豊胸術／胸のリフト、フェイスリフトおよび腹部形成術などの外科的処置によって起こる。
【０００５】
斑状出血、挫傷、炎症の発症に即時作用を有する血液成分の漏出、発赤および浮腫を誘導する血管損傷または血管壁破壊を伴う充填剤の皮下注射または皮内注射が原因の二次的な即時反応の管理が、特に関心対象である。
【０００６】
発赤、紅斑、挫傷および出血は一般に大きな問題と見なされていないが、大抵の医師は、処置の前にそれを自分の患者に警告することによって、患者にこの可能性に対する覚悟をさせる。特に、医師は多くの場合、処置の前後にアスピリンまたはその他の抗凝固薬を使用することに対して警告し、処置の直後に広範囲にアイスパックを使用し、治癒を促進するために使用されるハーブであるアルニカをごく一般的に推奨する。この種の欠点は、一部の患者を、特に美容処置に対して失望させる可能性がある。特に、挫傷／出血という結果に関して、医師は、患者にとって最も重大な関心事の一つが、挫傷が起こった場合の休止時間であり、患者は仕事および社会活動に戻るよりも家にいることを好むと報告している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、美容処置または外科的処置の間に、特に充填剤が注入される時に起こる挫傷／出血を軽減する必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、アドレナリン受容体アゴニストを充填剤とともに注射することにより、注射が原因の皮膚反応の発生を減少させることを出願者が実証したことに基づく。
【０００９】
本発明は、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物と、充填剤またはボツリヌス毒素との組合せ、好ましくはヒアルロン酸との組合せを提供する。前記組合せは、必要とする個体に全身投与される。
【００１０】
本発明は、必要とする個体における、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物の、ボツリヌス毒素または充填剤との組合せ、好ましくはヒアルロン酸との組合せの使用を提供する。
【００１１】
本発明は、それを必要とする個体に一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物を提供することにより、挫傷および、それよりも程度は低いにせよ、出血を、特に皮膚充填剤および好ましくはヒアルロン酸を含む美容処置において低下させる、減少させる、または回避するための方法を提供する。
【００１２】
第１の態様において、本発明は、
充填剤またはボツリヌス毒素と、
アドレナリン受容体アゴニストと
を含む組成物に関する。
【００１３】
本明細書から明らかなように、本発明は、皮膚欠損、特に皮膚の加齢が原因のもの（深いしわ、小じわ、皮膚陥凹など）または皮膚の損傷（瘢痕など）の予防および処置に関する。
【００１４】
これまでに、皮膚欠損の処置は大きな関心事となってきた。結果として、皮内または皮下に化合物を注入することが提案された。
【００１５】
最初の可能性として、筋肉の麻痺または収縮を誘発することが可能なボツリヌス毒素が局所的に注射され得る。
【００１６】
あるいは、好ましい実施形態では、充填剤が注射され得る。充填剤は、一般に皮膚組織に充填することが可能な生体材料として定義される。前記充填剤を水性媒体中に含み、充填性を示す注射用の特許請求の範囲に記載される組成物は、「皮膚充填剤」と定義され得る。
【００１７】
この文脈において、ポリアクリルアミドゲル、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）粒子またはシリコーンのような同様の化合物を使用することができる。
【００１８】
最も好ましい化合物は、ヒアルロン酸、コラーゲン、アルギン酸塩、デキストラン、エラスチンまたはポリウレタンゲルなどの吸収性分子である。
【００１９】
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸塩は、結合組織、上皮組織、および神経組織の至る所に広く分布している非硫酸化グリコサミノグリカンである。それは、細胞外マトリックスの主な構成要素の一つである。それは細胞増殖および遊走に大きく貢献している。それは、皮膚の水和および皮膚の弾性に重要な役割を果たす。ヒアルロン酸のレベルは、量および質の両方において加齢とともに低下し、皮膚の乾燥およびしわを引き起こす。
【００２０】
ヒアルロン酸は、水中で非常に粘性のある溶液を形成する、天然に存在する生体高分子である。従って、ヒアルロン酸は医薬品として広く使用されている。さらに、この化合物は、免疫原性反応が観察されていないことから、非常に安心であると考えられている。今までのところ、認められた有害事象はほとんどない。
【００２１】
従って、有利には、充填剤は、ヒアルロン酸またはその製薬学的に許容される塩もしくは誘導体、特にナトリウム塩またはカリウム塩である。ヒアルロン酸は、様々な形態、すなわち、その塩、エステルまたはアミドなどのその誘導体、線状の形態または架橋された形態で用いることができる。特に、分子量（一般に５００ｋＤａ〜５０００ｋＤａの間に含まれる）、および架橋の程度は、用途によって、特に充填する小じわの深さによって決まる。
【００２２】
特許請求の範囲に記載される組成物の第２の構成要素は、アドレナリン受容体アゴニストである。アドレナリン受容体アゴニストは、アドレナリン受容体と結合し、それを活性化させることが知られている。
【００２３】
当技術分野で周知のように、アドレナリン受容体は、α受容体とβ受容体との両方を包含する。αアドレナリン受容体の中で、α１受容体とα２受容体は、１９７０年代に識別された。同じ１０年の間に、α２受容体は、血管平滑筋で生じ、血管収縮反応の媒介を示すことが見出された（「Ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ α１− ａｎｄ α２−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ」ＪＲ Ｄｏｃｈｅｒｔｙ；Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ３６１（１９９８）１−１５）。よって、αアドレナリン作動性受容体活性化作用（ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ａｇｏｎｉｓｍ）、有利にはα２アドレナリン作動性受容体活性化作用を示す分子は、末梢血管収縮活性を有する。
【００２４】
特許請求の範囲に記載される組成物中で使用されるアゴニストは、α受容体および／またはβ受容体に対するものであってよい。しかし、それらの起こり得る副作用のために、βアドレナリン作動性受容体活性化作用を示す分子は、特許請求を放棄することが有利である。本出願の残りの部分において、βアドレナリン受容体に対して親和性を有さない分子は、「αアドレナリン受容体アゴニスト」と名付けられることになる。
【００２５】
α受容体の中で、アゴニストは、α１受容体とα２受容体との両方のアゴニストであってもよいし、あるいは、α１またはα２に特異的であってもよい。好ましくは、選択された分子は、α１受容体に対するよりも高い親和性をα２受容体に対して示し、一般に、本出願の残りの部分において、「α２アドレナリン受容体アゴニスト」と名付けられることになる。
【００２６】
好ましい実施形態では、アドレナリン受容体アゴニストは、アドレナリン受容体アゴニストα２、好ましくはブリモニジンである。
【００２７】
α２アドレナリン受容体のアゴニストは、高血圧症、鬱血性心不全、狭心症、痙攣、緑内障、下痢を含む多数の状態に対して、かつ、オピエート離脱症状の抑制のために、治療的に使用されている（Ｊ．Ｐ．Ｈｅｉｂｌｅ ａｎｄ Ｒ．Ｒ．Ｒｕｆｆｏｌｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ａ− Ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ，ｐ．１８０−２０６ ｉｎ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．８，Ｐ．Ｌｏｍａｘ ａｎｄ Ｅ．Ｓ．Ｖｅｓｅｌｌ Ｅｄ．，Ｋａｒｇｅｒ，１９９１）。
【００２８】
クロニジンなどのアドレナリン受容体アゴニストは主として経口使用されているが、パッチ製剤が知られている。α２アゴニストは、患者のコアおよび末梢の両方において血管収縮を媒介することが知られている。特にα２アドレナリン受容体アゴニストは、寒さまたはストレスによる刺激に応答して、末梢細動脈の血管収縮を引き起こすことが知られている。
【００２９】
多数の特許が、眼の症状および眼疾患を処置するためにブリモニジンを使用することを記載している。カナダ特許第ＣＡ２３２６６９０号では、眼疾患を処置するための、眼にだけ使用するための局所用点眼薬の使用が記載されている。
【００３０】
既に上に述べたように、本発明の状況において最も好ましい化合物は、（５−ブロモ−キノキサリン−６−イル）−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−アミン（一般にブリモニジンと称される）およびその製薬学的に許容される塩、特に酒石酸塩である。
【００３１】
α２アドレナリン受容体アゴニストであることが知られており、本発明の枠組みで使用することのできるその他の化合物は、クロニジン、アポクロニジンである。
【００３２】
より一般には、αアドレナリン受容体アゴニストであるその他の化合物は、シネフリン、オクトドリン、バソプレシンおよび類似体、オルニプレシン、ミドドリン、フェニレフリン、キシロメタゾリン、オキシメタゾリン、ノルエピネフリン、メトキサミンである。
【００３３】
β受容体に対しても親和性を有するが、特定の条件下で使用することのできる化合物は、エピネフリン、エフェドリン、エチレフリンである。
【００３４】
当然、全てのこれらの化合物の製薬学的に許容される塩も包含される。
【００３５】
本発明によれば、用語「製薬学的に許容される塩（類）」は、本明細書において、哺乳動物における局所使用に関し安全かつ効果的であり、所望の生物学的活性を有する本発明の化合物の塩を意味する。製薬学的に許容される塩には、本発明の化合物中に存在する酸性基または塩基性基の塩が含まれる。
【００３６】
製薬学的に許容される酸性塩としては、限定されるものではないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカリン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））の塩が挙げられる。本発明の特定の化合物は、様々なアミノ酸とともに製薬学的に許容される塩を形成することができる。
【００３７】
適した塩基性塩としては、限定されるものではないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、およびジエタノールアミンの塩が挙げられる。製薬学的に許容される塩についての概説は、ＢＥＲＧＥ ＥＴ ＡＬ．，６６ Ｊ．ＰＨＡＲＭ．Ｓｃｉ．１−１９（１９７７）を参照されたい。
【００３８】
第１の実施形態によれば、特許請求の範囲に記載される組成物は、充填剤またはその混合物、およびアドレナリン受容体アゴニストまたはその混合物、有利にはヒアルロン酸およびブリモニジンだけを含有する。
【００３９】
代替的な実施形態によれば、特許請求の範囲に記載される組成物は、１つ以上のさらなる構成成分も含有する。
【００４０】
１つ以上のその他の構成成分は、有効成分、例えば麻酔薬であってよい。好ましい麻酔薬は、リドカインまたはその製薬学的に許容される塩である。その他の有効成分は、例えば増殖因子、ペプチドなどである。
【００４１】
また、特許請求の範囲に記載される組成物は、その他の製薬学的に許容される構成成分、例えば担体、賦形剤、防腐剤などを含有することができる。
【００４２】
一実施形態では、本発明の化合物は、それを必要とする患者に全身経路により、好ましくは注射により投与される。従って、本発明の状況において、化合物は、製薬学的に許容される担体中で皮膚の罹患部位に送達される。本明細書において、製薬学的に許容される担体は、医薬品または薬物の皮膚、皮内、もしくは経皮送達のために皮膚に適用することのできる任意の製薬学的に許容される製剤である。製薬学的に許容される担体と本発明の化合物との組合せを、本発明の注射可能な製剤と呼ぶ。
【００４３】
本発明の枠組みにおいて、組成物は、製薬学的に許容される注射可能な製剤である。本発明の状況において、「製薬学的に許容される注射可能な製剤」により、全身送達に製薬学的に許容される任意の製剤が意味される。好ましくは、組成物は、皮下経路または皮内経路により表面、中間、または深部の真皮に投与される。一般に、特許請求の範囲に記載される組成物は、溶液またはゲル、好ましくは水性の溶液またはゲルにある。
【００４４】
特許請求の範囲に記載される組成物は、治療上有効な量のアドレナリン受容体アゴニストおよび充填剤からなるか、またはそれらを含む。本明細書において、「治療上有効な量の本発明の化合物」とは、本発明の状況において所望の効果を得るために効果的な最小量の化合物を意味する。
【００４５】
一般に、特許請求の範囲に記載される組成物は、
該組成物の１重量％〜２．５重量％に相当する充填剤、好ましくはＨＡと、
該組成物の０．０００１重量％〜１重量％に相当するアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンと、
所望により、該組成物の０．０１重量％〜３重量％に相当する麻酔薬と
を含む。
【００４６】
既に上に述べたように、特許請求の範囲に記載される組成物は、被験体または患者に、特に顔面部皮膚への注射（額、眼、鼻唇溝など）により投与されることが意味される。本明細書において、用語「被験体」または「患者」は、同等に用いられ、本発明の化合物または製剤をこれから投与されるかまたは既に投与された任意の動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味する。用語「哺乳動物」は、本明細書において、任意の哺乳動物を包含する。
【００４７】
従って、本発明は、全身投与量の化合物を患者に送達するための製剤も提供する。実施する上での、そして処置の順序について、活性化合物の量は、次の通りである。
−充填剤、好ましくはＨＡについて、０．０５ｍｇ／体重ｋｇ〜２ｍｇ／体重ｋｇ。これは５ｍｇ〜１００ｍｇに相当する。
−アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンについて、５．１０−３μｇ〜０．８ｍｇ／体重ｋｇ。これは０．５μｇ〜４０ｍｇに相当する。
【００４８】
好ましい実施形態では、注射用の特許請求の範囲に記載される組成物の体積は、０．１〜１０ｍｌ、一般に０．５〜４ｍｌで変化する。好ましくは、前記体積は、単回用量シリンジとして提示される。前記注射は、例えば４〜１８ヶ月後に繰り返すことができる。
【００４９】
本発明の別の態様は、本発明の全身製剤をラベルと使用説明書とともに適した容器中に含む製造品である。容器は、有利には単回用量シリンジである。
【００５０】
好ましくは、説明書は、本発明の製剤とともに包装され、それは例えば、パンフレットまたは包装ラベルである。ラベル表示される説明書は、患者を処置するために十分な量および時間で本発明の製剤を投与するための方法を説明する。好ましくは、ラベルには、投薬量および投与説明書、製剤の組成、臨床薬理学、薬剤耐性、薬物動態、吸収、バイオアベイラビリティ、および禁忌症が含まれる。
【００５１】
特許請求の範囲に記載される注射可能な組成物は、次に、前記組成物を含むシリンジを含むキットに組み込むことができる。前記キットにおいて、２つの有効成分、すなわち充填剤とアドレナリン受容体アゴニストは、一つのシリンジに含まれる一つの混合物として提示されてもよいし、または即時混合するための２つの別々のシリンジに含めてもよい。
【００５２】
特許請求の範囲に記載される組成物は、有利には有効成分を保持するために適した条件で滅菌される。
【００５３】
既に上に述べたように、特許請求の範囲に記載される組成物は、皮膚欠損、特に深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕の予防および／または処置にささげられる。それは、美容または治療上の処置に関する。
【００５４】
本発明によれば、特許請求の範囲に記載される組合せの主な利点が、特に皮膚充填剤の注射に関連する紅斑、斑状出血、挫傷または出血を低下させるか、減少させるか、または回避することであることが示された。
【００５５】
特許請求の範囲に記載される組成物のその他の利点になり得る点は、次の通りである。
−組成物が麻酔薬、例えばリドカインをさらに含む場合、前記麻酔薬の効率が改善される。αアドレナリン受容体アゴニストによりもたらされる血管収縮作用は、広い範囲での麻酔薬の拡散を制限し、そのため麻酔薬を厳密な注射部位で効率的にする。
−炎症を減少させることにより、おそらく充填剤の分解が遅くなったことが原因で、充填剤がより長く持続する。充填剤が炎症性であればあるほど、組織反応はより重度となり、炎症性種のレベルはより高くなる、従って充填剤をより速く分解する。血管収縮分子を充填剤の中に導入することにより、炎症性種の誘引（ａｔｔｒａｃｔｉｏｎ）を注射部位に制限できる。
−浮腫および腫脹の減少が観察される。先の利点と同じ理由で、充填剤の血管収縮活性は、注射に反応して液体の激しい流入を制限する、そのため注射部位の近くの液体の集中を妨げる。
【００５６】
より一般的には、特許請求の範囲に記載される組成物は、次には注射が原因の全ての望ましくない皮膚反応（即時および／または二次的）を低下させる、減少させるまたは回避することを意図する。それには、実際に斑状出血、挫傷または出血が含まれるが、おそらく発赤、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および炎症も含まれる。
【００５７】
２つの有効成分を含有する特許請求の範囲に記載される組成物は、同時に、別々にまたは順次に使用されてよい。言い換えれば、本発明は、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして知られている生成物を、充填剤、好ましくはヒアルロン酸と組み合わせる部品のキットを提供する。
【００５８】
上記に加えて、以下の実施例は、特定の実施形態を説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を制限するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】充填剤単独（試験１）と比較した、特許請求の範囲に記載される組成物（試験２）についての０日目〜８日目の刺激性一次指標（Ｉｒｒｉｔａｔｉｎｇ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＩＰＩ）の変化を示す図である。
【図２】充填剤単独（試験１）と比較した、特許請求の範囲に記載される組成物（試験２）についての８日目の炎症性反応の総スコアを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
ウサギにおける充填剤の皮内注射の後にブリモニジンが刺激作用を生じる可能性を評価するために、リドカインおよびＲＡＤＡＣＴ０１４という名称の血管収縮薬（ブリモニジン）を含有するヒアルロン酸に基づく皮膚充填剤の皮内テストを実施した。
【００６１】
２匹の成体ウサギに、皮内経路により、０．２ｍＬの試験生成物ＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２）、ＮａＣｌ ０．９％（試験５：陰性対照）および１０ＬＤＥＥＰ０１０（ＲＡＤＡＣＴ０１４と同じヒアルロン酸充填剤であるが、リドカインもブリモニジンも含まない；試験１：陽性対照）を投与した。
【００６２】
ブリモニジンを含有する充填剤（バッチＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２））によって得た結果を、ブリモニジンを含まない皮膚充填剤（陽性対照：試験１）と比較する。
【００６３】
これらの部位を、注射後０日から８日まで、組織反応の肉眼的証拠、例えば紅斑、浮腫および壊死などについて調べ（図１）、８日目に犠牲にした後に顕微鏡的な組織応答の観察を行った（図２）。
【００６４】
研究は、ＩＳＯ１０９９３基準：医療用具の生物学的評価、第１０部：刺激作用および遅延型過敏症のための試験の要件に従って行った。
【００６５】
［材料および方法］
（対照架橋ヒアルロン酸充填剤：１０ＬＤＥＥＰ０１０の調製）
架橋ヒアルロン酸充填剤１０ＬＤＥＥＰ０１０（試験１）は、約２〜４×１０６Ｄａの高分子量を特徴とする細菌由来のヒアルロン酸ナトリウムを２５％のＢＤＤＥで架橋することによって得た。架橋の終わりに、０３％の濃度に達するように塩酸リドカインを架橋ヒアルロン酸に添加した。リドカインの均質なブレンドは、混合物をメッシュに通して押出することによって得られる。得られたゲルを２０ｍｇ／ｍＬの濃度で１ｍＬシリンジに充填し、蒸気滅菌した。
【００６６】
（ブリモニジンを含有する対照架橋ヒアルロン酸充填剤：ＲＡＤＡＣＴ０１４の調製）
同一の架橋条件を、同一のヒアルロン酸に適用してリドカインを含まない充填剤を得た。並行して、８ｇのＮａＯＨおよび４２ｇの精製水を用いて４Ｎ水酸化ナトリウム溶液を調製した。ブリモニジンおよびリドカインを含有する別の溶液を、０．２２ｇの酒石酸ブリモニジンおよび０．３３ｇの塩酸リドカインを９．４５ｍＬのリン酸緩衝液に溶解することによって得た。ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを６に調整した。次に、ブリモニジンおよびリドカイン溶液を０．２２μｍで濾過した。
【００６７】
ブリモニジンおよびリドカインを含有する充填剤は、ＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２）と呼ばれ、２つの活性剤および５０ｇの前の架橋ヒアルロン酸ゲルを含有する溶液５ｇを、３つのステップ、すなわち５分間の機械的混合、それに続いて１５分間の休止、その後さらに５分間の混合に分けて穏やかに混合することによって得た。得られたゲルを１ｍＬシリンジに充填し、蒸気滅菌した。ヒアルロニダーゼ消化の後の活性剤の終濃度は、ブリモニジンについてＨＰＬＣ−ＭＳ−ＭＳにより０．１６％、リドカインについてＨＰＬＣにより０．２９％と決定した。
【００６８】
（即時有害事象の減少の調査）
ＲＡＤＡＣＴ０１４による刺激作用の減少の可能性を、ＩＳＯ１０９９３−１０の要件：医療用具の生物学的評価−刺激作用および遅延型過敏症のための試験の要件に従って実施された動物実験において評価した。
【００６９】
（実験プロトコール）
０日目（Ｄ０）に、２匹の成体ウサギに、皮内経路により、２７Ｇ針を用いて注入された０．２ｍＬの試験生成物（試験１：１０ＬＤＥＥＰ０１０および試験２：ＲＡＤＡＣＴ０１４）ならびに陰性対照（試験５：生理食塩水）を投与した。これらの条件において、各生成物について４つの部位が注射された。
【００７０】
次に、注射された部位を、紅斑、浮腫、潰瘍および壊死などの組織反応の肉眼的証拠について、０日目から８日目まで１日２回調べ、次の基準をもつスコアとした。
【００７１】
【表１】
【００７２】
８日目に、動物を安楽死させ、注射部位を収集し、組織学的解析のために固定した。顕微鏡分析を実施して、次の基準を評価した。
【００７３】
【表２】
【００７４】
（結果の活用）
この実験において、浮腫も壊死も生じなかった。さらに、１０ＬＤＥＥＰ０１０だけが軽微な持続性の潰瘍を２日目から８日目まで示した。
【００７５】
１．刺激性一次指標（ＩＰＩ）
試験生成物のＩＰＩは、以下のように、観察時間ごとに決定される。
ＩＰＩ試験＝Σ（浮腫スコア＋紅斑スコア）／観察数−ＩＰＩ陰性対照
陰性対照は、試験５、すなわち生理食塩水である
各観察時間に対してＩＰＩ陰性対照は０と見積もる。
得られた結果を図１に示す。
１０ＬＤＥＥＰ０１０（試験１）は、実験の間、刺激作用指標の最大値を示した。指標は０日目と１日目の間に増加し、その後安定した状態を保った。この生成物は非常に刺激性である。
試験２の生成物は、ＲＡＤＡＣＴ０１４と呼ばれ、ブリモニジンを含有しており、ＩＰＩの最低値を示した。指標は０日目と２日目の間に増加し、その後７日目まで安定し、最終的に８日目減少した。
ＲＡＤＡＣＴ０１４は、３日目から皮膚充填剤の炎症効果の減少を明白かつ持続的な方法で示しており、従って刺激作用に関してブリモニジンのプラスの効果を実証している。
【００７６】
２．組織学的解析
炎症の総スコアを、局所耐性−代表的な細胞種および量に従って組織学的観察から決定した。図２は、各々の生成物の炎症の総スコアを表す。８日目に、中等度（１０ＬＤＥＥＰ０１０）から限られた（ＲＡＤＡＣＴ０１４）炎症性浸潤が示され、主な細胞集団はマクロファージと少数の好酸球であった。陰性対照（生理食塩水、試験５）について特異的反応は観察されなかった。
【００７７】
３．結論
この実験は、皮膚区画に注射された皮膚充填剤（試験１：１０ＬＤｅｅｐ０１０）が多少の炎症応答と軽微な潰瘍を誘発することを示した。活性分子（ブリモニジン）をこの種類の皮膚充填剤（ＲＡＤＡＣＴ０１４）に組み込むことにより、炎症応答を減らすことが可能である。肉眼的証拠（紅斑、浮腫、潰瘍および壊死）および組織学的分析の両方が、充填剤と組み合わせたブリモニジン分子によりもたらされる利点を実証する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外科および皮膚科の分野に属する。
【０００２】
本発明は、アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジン、および充填剤、好ましくはヒアルロン酸を含む、注射可能な組成物に関する。本発明は、美容処置に起因する表面の挫傷および出血を予防および／または処置する際のその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
表面の挫傷および、それよりも程度は低いにせよ、出血は、皮膚充填剤、ボツリヌス毒素およびレーザーリサーフェシングを含む多くの美容処置の珍しい結果ではなく、平均して約１／３の確率と報告されている。
【０００４】
より著しい挫傷は、脂肪吸引、豊胸術／胸のリフト、フェイスリフトおよび腹部形成術などの外科的処置によって起こる。
【０００５】
斑状出血、挫傷、炎症の発症に即時作用を有する血液成分の漏出、発赤および浮腫を誘導する血管損傷または血管壁破壊を伴う充填剤の皮下注射または皮内注射が原因の二次的な即時反応の管理が、特に関心対象である。
【０００６】
発赤、紅斑、挫傷および出血は一般に大きな問題と見なされていないが、大抵の医師は、処置の前にそれを自分の患者に警告することによって、患者にこの可能性に対する覚悟をさせる。特に、医師は多くの場合、処置の前後にアスピリンまたはその他の抗凝固薬を使用することに対して警告し、処置の直後に広範囲にアイスパックを使用し、治癒を促進するために使用されるハーブであるアルニカをごく一般的に推奨する。この種の欠点は、一部の患者を、特に美容処置に対して失望させる可能性がある。特に、挫傷／出血という結果に関して、医師は、患者にとって最も重大な関心事の一つが、挫傷が起こった場合の休止時間であり、患者は仕事および社会活動に戻るよりも家にいることを好むと報告している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、美容処置または外科的処置の間に、特に充填剤が注入される時に起こる挫傷／出血を軽減する必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、アドレナリン受容体アゴニストを充填剤とともに注射することにより、注射が原因の皮膚反応の発生を減少させることを出願者が実証したことに基づく。
【０００９】
本発明は、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物と、充填剤またはボツリヌス毒素との組合せ、好ましくはヒアルロン酸との組合せを提供する。前記組合せは、必要とする個体に全身投与される。
【００１０】
本発明は、必要とする個体における、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物の、ボツリヌス毒素または充填剤との組合せ、好ましくはヒアルロン酸との組合せの使用を提供する。
【００１１】
本発明は、それを必要とする個体に一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして公知の生成物を提供することにより、挫傷および、それよりも程度は低いにせよ、出血を、特に皮膚充填剤および好ましくはヒアルロン酸を含む美容処置において低下させる、減少させる、または回避するための方法を提供する。
【００１２】
第１の態様において、本発明は、
充填剤またはボツリヌス毒素と、
アドレナリン受容体アゴニストと
を含む組成物に関する。
【００１３】
本明細書から明らかなように、本発明は、皮膚欠損、特に皮膚の加齢が原因のもの（深いしわ、小じわ、皮膚陥凹など）または皮膚の損傷（瘢痕など）の予防および処置に関する。
【００１４】
これまでに、皮膚欠損の処置は大きな関心事となってきた。結果として、皮内または皮下に化合物を注入することが提案された。
【００１５】
最初の可能性として、筋肉の麻痺または収縮を誘発することが可能なボツリヌス毒素が局所的に注射され得る。
【００１６】
あるいは、好ましい実施形態では、充填剤が注射され得る。充填剤は、一般に皮膚組織に充填することが可能な生体材料として定義される。前記充填剤を水性媒体中に含み、充填性を示す注射用の特許請求の範囲に記載される組成物は、「皮膚充填剤」と定義され得る。
【００１７】
この文脈において、ポリアクリルアミドゲル、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）粒子またはシリコーンのような同様の化合物を使用することができる。
【００１８】
最も好ましい化合物は、ヒアルロン酸、コラーゲン、アルギン酸塩、デキストラン、エラスチンまたはポリウレタンゲルなどの吸収性分子である。
【００１９】
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸塩は、結合組織、上皮組織、および神経組織の至る所に広く分布している非硫酸化グリコサミノグリカンである。それは、細胞外マトリックスの主な構成要素の一つである。それは細胞増殖および遊走に大きく貢献している。それは、皮膚の水和および皮膚の弾性に重要な役割を果たす。ヒアルロン酸のレベルは、量および質の両方において加齢とともに低下し、皮膚の乾燥およびしわを引き起こす。
【００２０】
ヒアルロン酸は、水中で非常に粘性のある溶液を形成する、天然に存在する生体高分子である。従って、ヒアルロン酸は医薬品として広く使用されている。さらに、この化合物は、免疫原性反応が観察されていないことから、非常に安心であると考えられている。今までのところ、認められた有害事象はほとんどない。
【００２１】
従って、有利には、充填剤は、ヒアルロン酸またはその製薬学的に許容される塩もしくは誘導体、特にナトリウム塩またはカリウム塩である。ヒアルロン酸は、様々な形態、すなわち、その塩、エステルまたはアミドなどのその誘導体、線状の形態または架橋された形態で用いることができる。特に、分子量（一般に５００ｋＤａ〜５０００ｋＤａの間に含まれる）、および架橋の程度は、用途によって、特に充填する小じわの深さによって決まる。
【００２２】
特許請求の範囲に記載される組成物の第２の構成要素は、アドレナリン受容体アゴニストである。アドレナリン受容体アゴニストは、アドレナリン受容体と結合し、それを活性化させることが知られている。
【００２３】
当技術分野で周知のように、アドレナリン受容体は、α受容体とβ受容体との両方を包含する。αアドレナリン受容体の中で、α１受容体とα２受容体は、１９７０年代に識別された。同じ１０年の間に、α２受容体は、血管平滑筋で生じ、血管収縮反応の媒介を示すことが見出された（「Ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ α１− ａｎｄ α２−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ」ＪＲ Ｄｏｃｈｅｒｔｙ；Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ３６１（１９９８）１−１５）。よって、αアドレナリン作動性受容体活性化作用（ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ａｇｏｎｉｓｍ）、有利にはα２アドレナリン作動性受容体活性化作用を示す分子は、末梢血管収縮活性を有する。
【００２４】
特許請求の範囲に記載される組成物中で使用されるアゴニストは、α受容体および／またはβ受容体に対するものであってよい。しかし、それらの起こり得る副作用のために、βアドレナリン作動性受容体活性化作用を示す分子は、特許請求を放棄することが有利である。本出願の残りの部分において、βアドレナリン受容体に対して親和性を有さない分子は、「αアドレナリン受容体アゴニスト」と名付けられることになる。
【００２５】
α受容体の中で、アゴニストは、α１受容体とα２受容体との両方のアゴニストであってもよいし、あるいは、α１またはα２に特異的であってもよい。好ましくは、選択された分子は、α１受容体に対するよりも高い親和性をα２受容体に対して示し、一般に、本出願の残りの部分において、「α２アドレナリン受容体アゴニスト」と名付けられることになる。
【００２６】
好ましい実施形態では、アドレナリン受容体アゴニストは、アドレナリン受容体アゴニストα２、好ましくはブリモニジンである。
【００２７】
α２アドレナリン受容体のアゴニストは、高血圧症、鬱血性心不全、狭心症、痙攣、緑内障、下痢を含む多数の状態に対して、かつ、オピエート離脱症状の抑制のために、治療的に使用されている（Ｊ．Ｐ．Ｈｅｉｂｌｅ ａｎｄ Ｒ．Ｒ．Ｒｕｆｆｏｌｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ａ− Ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ，ｐ．１８０−２０６ ｉｎ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．８，Ｐ．Ｌｏｍａｘ ａｎｄ Ｅ．Ｓ．Ｖｅｓｅｌｌ Ｅｄ．，Ｋａｒｇｅｒ，１９９１）。
【００２８】
クロニジンなどのアドレナリン受容体アゴニストは主として経口使用されているが、パッチ製剤が知られている。α２アゴニストは、患者のコアおよび末梢の両方において血管収縮を媒介することが知られている。特にα２アドレナリン受容体アゴニストは、寒さまたはストレスによる刺激に応答して、末梢細動脈の血管収縮を引き起こすことが知られている。
【００２９】
多数の特許が、眼の症状および眼疾患を処置するためにブリモニジンを使用することを記載している。カナダ特許第ＣＡ２３２６６９０号では、眼疾患を処置するための、眼にだけ使用するための局所用点眼薬の使用が記載されている。
【００３０】
既に上に述べたように、本発明の状況において最も好ましい化合物は、（５−ブロモ−キノキサリン−６−イル）−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−アミン（一般にブリモニジンと称される）およびその製薬学的に許容される塩、特に酒石酸塩である。
【００３１】
α２アドレナリン受容体アゴニストであることが知られており、本発明の枠組みで使用することのできるその他の化合物は、クロニジン、アポクロニジンである。
【００３２】
より一般には、αアドレナリン受容体アゴニストであるその他の化合物は、シネフリン、オクトドリン、バソプレシンおよび類似体、オルニプレシン、ミドドリン、フェニレフリン、キシロメタゾリン、オキシメタゾリン、ノルエピネフリン、メトキサミンである。
【００３３】
β受容体に対しても親和性を有するが、特定の条件下で使用することのできる化合物は、エピネフリン、エフェドリン、エチレフリンである。
【００３４】
当然、全てのこれらの化合物の製薬学的に許容される塩も包含される。
【００３５】
本発明によれば、用語「製薬学的に許容される塩（類）」は、本明細書において、哺乳動物における局所使用に関し安全かつ効果的であり、所望の生物学的活性を有する本発明の化合物の塩を意味する。製薬学的に許容される塩には、本発明の化合物中に存在する酸性基または塩基性基の塩が含まれる。
【００３６】
製薬学的に許容される酸性塩としては、限定されるものではないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカリン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））の塩が挙げられる。本発明の特定の化合物は、様々なアミノ酸とともに製薬学的に許容される塩を形成することができる。
【００３７】
適した塩基性塩としては、限定されるものではないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、およびジエタノールアミンの塩が挙げられる。製薬学的に許容される塩についての概説は、ＢＥＲＧＥ ＥＴ ＡＬ．，６６ Ｊ．ＰＨＡＲＭ．Ｓｃｉ．１−１９（１９７７）を参照されたい。
【００３８】
第１の実施形態によれば、特許請求の範囲に記載される組成物は、充填剤またはその混合物、およびアドレナリン受容体アゴニストまたはその混合物、有利にはヒアルロン酸およびブリモニジンだけを含有する。
【００３９】
代替的な実施形態によれば、特許請求の範囲に記載される組成物は、１つ以上のさらなる構成成分も含有する。
【００４０】
１つ以上のその他の構成成分は、有効成分、例えば麻酔薬であってよい。好ましい麻酔薬は、リドカインまたはその製薬学的に許容される塩である。その他の有効成分は、例えば増殖因子、ペプチドなどである。
【００４１】
また、特許請求の範囲に記載される組成物は、その他の製薬学的に許容される構成成分、例えば担体、賦形剤、防腐剤などを含有することができる。
【００４２】
一実施形態では、本発明の化合物は、それを必要とする患者に全身経路により、好ましくは注射により投与される。従って、本発明の状況において、化合物は、製薬学的に許容される担体中で皮膚の罹患部位に送達される。本明細書において、製薬学的に許容される担体は、医薬品または薬物の皮膚、皮内、もしくは経皮送達のために皮膚に適用することのできる任意の製薬学的に許容される製剤である。製薬学的に許容される担体と本発明の化合物との組合せを、本発明の注射可能な製剤と呼ぶ。
【００４３】
本発明の枠組みにおいて、組成物は、製薬学的に許容される注射可能な製剤である。本発明の状況において、「製薬学的に許容される注射可能な製剤」により、全身送達に製薬学的に許容される任意の製剤が意味される。好ましくは、組成物は、皮下経路または皮内経路により表面、中間、または深部の真皮に投与される。一般に、特許請求の範囲に記載される組成物は、溶液またはゲル、好ましくは水性の溶液またはゲルにある。
【００４４】
特許請求の範囲に記載される組成物は、治療上有効な量のアドレナリン受容体アゴニストおよび充填剤からなるか、またはそれらを含む。本明細書において、「治療上有効な量の本発明の化合物」とは、本発明の状況において所望の効果を得るために効果的な最小量の化合物を意味する。
【００４５】
一般に、特許請求の範囲に記載される組成物は、
該組成物の１重量％〜２．５重量％に相当する充填剤、好ましくはＨＡと、
該組成物の０．０００１重量％〜１重量％に相当するアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンと、
所望により、該組成物の０．０１重量％〜３重量％に相当する麻酔薬と
を含む。
【００４６】
既に上に述べたように、特許請求の範囲に記載される組成物は、被験体または患者に、特に顔面部皮膚への注射（額、眼、鼻唇溝など）により投与されることが意味される。本明細書において、用語「被験体」または「患者」は、同等に用いられ、本発明の化合物または製剤をこれから投与されるかまたは既に投与された任意の動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味する。用語「哺乳動物」は、本明細書において、任意の哺乳動物を包含する。
【００４７】
従って、本発明は、全身投与量の化合物を患者に送達するための製剤も提供する。実施する上での、そして処置の順序について、活性化合物の量は、次の通りである。
−充填剤、好ましくはＨＡについて、０．０５ｍｇ／体重ｋｇ〜２ｍｇ／体重ｋｇ。これは５ｍｇ〜１００ｍｇに相当する。
−アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンについて、５．１０−３μｇ〜０．８ｍｇ／体重ｋｇ。これは０．５μｇ〜４０ｍｇに相当する。
【００４８】
好ましい実施形態では、注射用の特許請求の範囲に記載される組成物の体積は、０．１〜１０ｍｌ、一般に０．５〜４ｍｌで変化する。好ましくは、前記体積は、単回用量シリンジとして提示される。前記注射は、例えば４〜１８ヶ月後に繰り返すことができる。
【００４９】
本発明の別の態様は、本発明の全身製剤をラベルと使用説明書とともに適した容器中に含む製造品である。容器は、有利には単回用量シリンジである。
【００５０】
好ましくは、説明書は、本発明の製剤とともに包装され、それは例えば、パンフレットまたは包装ラベルである。ラベル表示される説明書は、患者を処置するために十分な量および時間で本発明の製剤を投与するための方法を説明する。好ましくは、ラベルには、投薬量および投与説明書、製剤の組成、臨床薬理学、薬剤耐性、薬物動態、吸収、バイオアベイラビリティ、および禁忌症が含まれる。
【００５１】
特許請求の範囲に記載される注射可能な組成物は、次に、前記組成物を含むシリンジを含むキットに組み込むことができる。前記キットにおいて、２つの有効成分、すなわち充填剤とアドレナリン受容体アゴニストは、一つのシリンジに含まれる一つの混合物として提示されてもよいし、または即時混合するための２つの別々のシリンジに含めてもよい。
【００５２】
特許請求の範囲に記載される組成物は、有利には有効成分を保持するために適した条件で滅菌される。
【００５３】
既に上に述べたように、特許請求の範囲に記載される組成物は、皮膚欠損、特に深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕の予防および／または処置にささげられる。それは、美容または治療上の処置に関する。
【００５４】
本発明によれば、特許請求の範囲に記載される組合せの主な利点が、特に皮膚充填剤の注射に関連する紅斑、斑状出血、挫傷または出血を低下させるか、減少させるか、または回避することであることが示された。
【００５５】
特許請求の範囲に記載される組成物のその他の利点になり得る点は、次の通りである。
−組成物が麻酔薬、例えばリドカインをさらに含む場合、前記麻酔薬の効率が改善される。αアドレナリン受容体アゴニストによりもたらされる血管収縮作用は、広い範囲での麻酔薬の拡散を制限し、そのため麻酔薬を厳密な注射部位で効率的にする。
−炎症を減少させることにより、おそらく充填剤の分解が遅くなったことが原因で、充填剤がより長く持続する。充填剤が炎症性であればあるほど、組織反応はより重度となり、炎症性種のレベルはより高くなる、従って充填剤をより速く分解する。血管収縮分子を充填剤の中に導入することにより、炎症性種の誘引（ａｔｔｒａｃｔｉｏｎ）を注射部位に制限できる。
−浮腫および腫脹の減少が観察される。先の利点と同じ理由で、充填剤の血管収縮活性は、注射に反応して液体の激しい流入を制限する、そのため注射部位の近くの液体の集中を妨げる。
【００５６】
より一般的には、特許請求の範囲に記載される組成物は、次には注射が原因の全ての望ましくない皮膚反応（即時および／または二次的）を低下させる、減少させるまたは回避することを意図する。それには、実際に斑状出血、挫傷または出血が含まれるが、おそらく発赤、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および炎症も含まれる。
【００５７】
２つの有効成分を含有する特許請求の範囲に記載される組成物は、同時に、別々にまたは順次に使用されてよい。言い換えれば、本発明は、一定量のアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンとして知られている生成物を、充填剤、好ましくはヒアルロン酸と組み合わせる部品のキットを提供する。
【００５８】
上記に加えて、以下の実施例は、特定の実施形態を説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を制限するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】充填剤単独（試験１）と比較した、特許請求の範囲に記載される組成物（試験２）についての０日目〜８日目の刺激性一次指標（Ｉｒｒｉｔａｔｉｎｇ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＩＰＩ）の変化を示す図である。
【図２】充填剤単独（試験１）と比較した、特許請求の範囲に記載される組成物（試験２）についての８日目の炎症性反応の総スコアを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
ウサギにおける充填剤の皮内注射の後にブリモニジンが刺激作用を生じる可能性を評価するために、リドカインおよびＲＡＤＡＣＴ０１４という名称の血管収縮薬（ブリモニジン）を含有するヒアルロン酸に基づく皮膚充填剤の皮内テストを実施した。
【００６１】
２匹の成体ウサギに、皮内経路により、０．２ｍＬの試験生成物ＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２）、ＮａＣｌ ０．９％（試験５：陰性対照）および１０ＬＤＥＥＰ０１０（ＲＡＤＡＣＴ０１４と同じヒアルロン酸充填剤であるが、リドカインもブリモニジンも含まない；試験１：陽性対照）を投与した。
【００６２】
ブリモニジンを含有する充填剤（バッチＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２））によって得た結果を、ブリモニジンを含まない皮膚充填剤（陽性対照：試験１）と比較する。
【００６３】
これらの部位を、注射後０日から８日まで、組織反応の肉眼的証拠、例えば紅斑、浮腫および壊死などについて調べ（図１）、８日目に犠牲にした後に顕微鏡的な組織応答の観察を行った（図２）。
【００６４】
研究は、ＩＳＯ１０９９３基準：医療用具の生物学的評価、第１０部：刺激作用および遅延型過敏症のための試験の要件に従って行った。
【００６５】
［材料および方法］
（対照架橋ヒアルロン酸充填剤：１０ＬＤＥＥＰ０１０の調製）
架橋ヒアルロン酸充填剤１０ＬＤＥＥＰ０１０（試験１）は、約２〜４×１０６Ｄａの高分子量を特徴とする細菌由来のヒアルロン酸ナトリウムを２５％のＢＤＤＥで架橋することによって得た。架橋の終わりに、０３％の濃度に達するように塩酸リドカインを架橋ヒアルロン酸に添加した。リドカインの均質なブレンドは、混合物をメッシュに通して押出することによって得られる。得られたゲルを２０ｍｇ／ｍＬの濃度で１ｍＬシリンジに充填し、蒸気滅菌した。
【００６６】
（ブリモニジンを含有する対照架橋ヒアルロン酸充填剤：ＲＡＤＡＣＴ０１４の調製）
同一の架橋条件を、同一のヒアルロン酸に適用してリドカインを含まない充填剤を得た。並行して、８ｇのＮａＯＨおよび４２ｇの精製水を用いて４Ｎ水酸化ナトリウム溶液を調製した。ブリモニジンおよびリドカインを含有する別の溶液を、０．２２ｇの酒石酸ブリモニジンおよび０．３３ｇの塩酸リドカインを９．４５ｍＬのリン酸緩衝液に溶解することによって得た。ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを６に調整した。次に、ブリモニジンおよびリドカイン溶液を０．２２μｍで濾過した。
【００６７】
ブリモニジンおよびリドカインを含有する充填剤は、ＲＡＤＡＣＴ０１４（試験２）と呼ばれ、２つの活性剤および５０ｇの前の架橋ヒアルロン酸ゲルを含有する溶液５ｇを、３つのステップ、すなわち５分間の機械的混合、それに続いて１５分間の休止、その後さらに５分間の混合に分けて穏やかに混合することによって得た。得られたゲルを１ｍＬシリンジに充填し、蒸気滅菌した。ヒアルロニダーゼ消化の後の活性剤の終濃度は、ブリモニジンについてＨＰＬＣ−ＭＳ−ＭＳにより０．１６％、リドカインについてＨＰＬＣにより０．２９％と決定した。
【００６８】
（即時有害事象の減少の調査）
ＲＡＤＡＣＴ０１４による刺激作用の減少の可能性を、ＩＳＯ１０９９３−１０の要件：医療用具の生物学的評価−刺激作用および遅延型過敏症のための試験の要件に従って実施された動物実験において評価した。
【００６９】
（実験プロトコール）
０日目（Ｄ０）に、２匹の成体ウサギに、皮内経路により、２７Ｇ針を用いて注入された０．２ｍＬの試験生成物（試験１：１０ＬＤＥＥＰ０１０および試験２：ＲＡＤＡＣＴ０１４）ならびに陰性対照（試験５：生理食塩水）を投与した。これらの条件において、各生成物について４つの部位が注射された。
【００７０】
次に、注射された部位を、紅斑、浮腫、潰瘍および壊死などの組織反応の肉眼的証拠について、０日目から８日目まで１日２回調べ、次の基準をもつスコアとした。
【００７１】
【表１】
【００７２】
８日目に、動物を安楽死させ、注射部位を収集し、組織学的解析のために固定した。顕微鏡分析を実施して、次の基準を評価した。
【００７３】
【表２】
【００７４】
（結果の活用）
この実験において、浮腫も壊死も生じなかった。さらに、１０ＬＤＥＥＰ０１０だけが軽微な持続性の潰瘍を２日目から８日目まで示した。
【００７５】
１．刺激性一次指標（ＩＰＩ）
試験生成物のＩＰＩは、以下のように、観察時間ごとに決定される。
ＩＰＩ試験＝Σ（浮腫スコア＋紅斑スコア）／観察数−ＩＰＩ陰性対照
陰性対照は、試験５、すなわち生理食塩水である
各観察時間に対してＩＰＩ陰性対照は０と見積もる。
得られた結果を図１に示す。
１０ＬＤＥＥＰ０１０（試験１）は、実験の間、刺激作用指標の最大値を示した。指標は０日目と１日目の間に増加し、その後安定した状態を保った。この生成物は非常に刺激性である。
試験２の生成物は、ＲＡＤＡＣＴ０１４と呼ばれ、ブリモニジンを含有しており、ＩＰＩの最低値を示した。指標は０日目と２日目の間に増加し、その後７日目まで安定し、最終的に８日目減少した。
ＲＡＤＡＣＴ０１４は、３日目から皮膚充填剤の炎症効果の減少を明白かつ持続的な方法で示しており、従って刺激作用に関してブリモニジンのプラスの効果を実証している。
【００７６】
２．組織学的解析
炎症の総スコアを、局所耐性−代表的な細胞種および量に従って組織学的観察から決定した。図２は、各々の生成物の炎症の総スコアを表す。８日目に、中等度（１０ＬＤＥＥＰ０１０）から限られた（ＲＡＤＡＣＴ０１４）炎症性浸潤が示され、主な細胞集団はマクロファージと少数の好酸球であった。陰性対照（生理食塩水、試験５）について特異的反応は観察されなかった。
【００７７】
３．結論
この実験は、皮膚区画に注射された皮膚充填剤（試験１：１０ＬＤｅｅｐ０１０）が多少の炎症応答と軽微な潰瘍を誘発することを示した。活性分子（ブリモニジン）をこの種類の皮膚充填剤（ＲＡＤＡＣＴ０１４）に組み込むことにより、炎症応答を減らすことが可能である。肉眼的証拠（紅斑、浮腫、潰瘍および壊死）および組織学的分析の両方が、充填剤と組み合わせたブリモニジン分子によりもたらされる利点を実証する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
充填剤またはボツリヌス毒素と、
α−アドレナリン受容体アゴニストと
を含む注射可能な組成物。
【請求項２】
前記アドレナリン受容体アゴニストが、α２−アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記充填剤が、ヒアルロン酸である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、麻酔薬、好ましくはリドカインをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、
前記組成物の１重量％〜２．５重量％に相当する充填剤、好ましくはＨＡと、
前記組成物の０．０００１重量％〜１重量％に相当するアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンと、
任意選択的に、前記組成物の０．０１重量％〜３重量％に相当する麻酔薬と
を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
シリンジを含み、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含有するキット。
【請求項７】
皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置する際に用いるための、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物または請求項６に記載のキット。
【請求項８】
それを必要とする個人に請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を注入することによる、皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置するための美容方法。
【請求項９】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避する際に用いるための、請求項７に記載の組成物またはキット。
【請求項１０】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避するための、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置するための、同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避するための、同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１】
充填剤またはボツリヌス毒素と、
α−アドレナリン受容体アゴニストと
を含む注射可能な組成物。
【請求項２】
前記アドレナリン受容体アゴニストが、α２−アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記充填剤が、ヒアルロン酸である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、麻酔薬、好ましくはリドカインをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、
前記組成物の１重量％〜２．５重量％に相当する充填剤、好ましくはＨＡと、
前記組成物の０．０００１重量％〜１重量％に相当するアドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはブリモニジンと、
任意選択的に、前記組成物の０．０１重量％〜３重量％に相当する麻酔薬と
を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
シリンジを含み、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含有するキット。
【請求項７】
皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置する際に用いるための、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物または請求項６に記載のキット。
【請求項８】
それを必要とする個人に請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を注入することによる、皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置するための美容方法。
【請求項９】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避する際に用いるための、請求項７に記載の組成物またはキット。
【請求項１０】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避するための、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
皮膚欠損、特に、深いしわ、小じわ、皮膚陥凹および瘢痕を予防または処置するための、同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
注射が原因の皮膚反応、特に発赤、斑状出血、挫傷、出血、紅斑、浮腫、壊死、潰瘍、腫脹および／または炎症を低下させる、減少させる、または回避するための、同時、個別または順次の使用のための複合製剤としての、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５２８１３２（Ｐ２０１２−５２８１３２Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１２日（２０１２．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１２４０６（Ｐ２０１２−５１２４０６）
【出願日】平成２２年５月２８日（２０１０．５．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５７４９３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３６５９４
【国際公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【出願人】（５１１２８８６９２）
【出願人】（５９９０４５６０４）ガルデルマ・リサーチ・アンド・デヴェロップメント (117)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月１２日（２０１２．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月２８日（２０１０．５．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５７４９３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３６５９４
【国際公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【出願人】（５１１２８８６９２）
【出願人】（５９９０４５６０４）ガルデルマ・リサーチ・アンド・デヴェロップメント (117)
【Ｆターム（参考）】
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