本願明細書にて、アルデヒド、アルカンおよびアルケンといった炭化水素を製造するための組成物および方法が記載される。いくつかの炭化水素はバイオ燃料にて使用され得る。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその変異体を生じさせる工程、および該宿主細胞からアルデヒドを単離する工程を含む、方法。
【請求項２】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２に対して少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを生じさせる工程、および該宿主細胞からアルデヒドを単離する工程を含む、方法。
【請求項３】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、付加、挿入または欠失を有する配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを製造する工程を含み、該ポリペプチドは還元酵素活性を有する、方法。
【請求項４】
ポリペプチドが、１つまたはそれ以上の保存的なアミノ酸置換を有する配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０または８２のアミノ酸配列を含む、請求項３記載の方法。
【請求項５】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させる工程、および該宿主細胞からアルデヒドを単離する工程を含む、方法。
【請求項６】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９もしくは８１のヌクレオチド配列の相補物またはそのフラグメントにハイブリダイズするポリヌクレオチドを発現させる工程を含み、該ポリヌクレオチドは、配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０または８２を含むポリペプチドと同じ生物学的活性を有するポリペプチドをコードする、方法。
【請求項７】
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドがラン藻に由来する、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞を、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む組換えベクターで形質転換する工程、および該宿主細胞からアルデヒドを単離する工程を含む、方法。
【請求項９】
組換えベクターが前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
宿主細胞が、哺乳動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、真菌細胞、糸状菌細胞および細菌細胞からなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
宿主細胞が大腸菌細胞である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
大腸菌細胞が大腸菌細胞Ｂ株、Ｃ株、Ｋ株またはＷ株である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
宿主細胞が前記組換えベクターのヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドを生じる、請求項８記載の方法。
【請求項１４】
アルデヒドが宿主細胞によって分泌される、請求項１０記載の方法。
【請求項１５】
アルデヒドがＣ_１３−Ｃ_２１アルデヒドを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
アルデヒドがテトラデカナール、ヘキサデカナール、ヘキサデセナール、オクタデカナール、オクタデセナール、メチルテトラデカナール、メチルテトラデセナール、メチルヘキサデカナール、メチルヘキサデセナール、メチルオクタデカナールおよびメチルオクタデセナールからなる群より選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
宿主細胞を前記ポリペプチドまたは前記ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドのための少なくとも１つの生物学的基質の存在下で培養する工程をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
基質が脂肪酸誘導体である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
脂肪酸誘導体がＣ_１４−Ｃ_２２脂肪酸誘導体である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
脂肪酸誘導体がテトラデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデセノイル−ＡＣＰ、オクタデセノイル−ＡＣＰおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
遺伝子組換え微生物であって、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの上流に該微生物のゲノムＤＮＡに安定に組込まれた外来性調節配列を含み、ここで、該微生物は野生型微生物と比較して増加したレベルのアルデヒドを生じる、微生物。
【請求項２２】
微生物がラン藻である、請求項２１記載の微生物。
【請求項２３】
遺伝子発現に適切な条件下で請求項２１記載の微生物を培養する工程を含む、アルデヒドを製造するための方法。
【請求項２４】
請求項１〜２０および２３のいずれか１項記載の方法によって製造されたアルデヒド。
【請求項２５】
約−１５．４またはそれ以上のδ^１３Ｃを有する、請求項２４記載のアルデヒド。
【請求項２６】
少なくとも約１．００３のｆ_Ｍ^１４Ｃを有する、請求項２４記載のアルデヒド。
【請求項２７】
アルデヒドの製造方法であって、基質を、（ｉ）配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその変異体、または（ｉｉ）配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドまたはその変異体と接触させる工程を含む、方法。
【請求項２８】
アルデヒドがＣ_１３−Ｃ_２１アルデヒドを含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
アルデヒドがテトラデカナール、ヘキサデカナール、ヘキサデセナール、オクタデカナール、オクタデセナール、メチルテトラデカナール、メチルテトラデセナール、メチルヘキサデカナール、メチルヘキサデセナール、メチルオクタデカナールおよびメチルオクタデセナールからなる群より選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
基質がテトラデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデセノイル−ＡＣＰ、オクタデセノイル−ＡＣＰおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
アルデヒドを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３もしくは６４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを生じさせる工程を含み、該ポリペプチドは、還元酵素活性を有する、方法。
【請求項３２】
ポリペプチドがラン藻由来である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
宿主細胞が、哺乳動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、真菌細胞、糸状菌細胞および細菌細胞からなる群より選択される、請求項３１または３２記載の方法。
【請求項３４】
宿主細胞が大腸菌細胞である、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
アルデヒドが宿主細胞によって分泌される、請求項３１記載の方法。
【請求項３６】
アルデヒドがＣ_１３−Ｃ_２１アルデヒドを含む、請求項３１記載の方法。
【請求項３７】
アルデヒドがテトラデカナール、ヘキサデカナール、ヘキサデセナール、オクタデカナール、オクタデセナール、メチルテトラデカナール、メチルテトラデセナール、メチルヘキサデカナール、メチルヘキサデセナール、メチルオクタデカナールおよびメチルオクタデセナールからなる群より選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
宿主細胞を前記ポリペプチドのための少なくとも１つの生物学的基質の存在下で培養する工程をさらに含む、請求項３１〜３７のいずれか１項記載の方法。
【請求項３９】
基質が脂肪酸誘導体である、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
脂肪酸誘導体がテトラデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデセノイル−ＡＣＰ、オクタデセノイル−ＡＣＰおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
アルデヒドを製造するための方法であって、基質と、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを接触させる工程を含み、該ポリペプチドは、還元酵素活性を有する、方法。
【請求項４２】
アルデヒドがＣ_１３−Ｃ_２１アルデヒドを含む、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
アルデヒドがテトラデカナール、ヘキサデカナール、ヘキサデセナール、オクタデカナール、オクタデセナール、メチルテトラデカナール、メチルテトラデセナール、メチルヘキサデカナール、メチルヘキサデセナール、メチルオクタデカナールおよびメチルオクタデセナールからなる群より選択される、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
基質が脂肪酸誘導体である、請求項４１記載の方法。
【請求項４５】
基質がテトラデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデカノイル−ＡＣＰ、ヘキサデセノイル−ＡＣＰ、オクタデセノイル−ＡＣＰおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
脂肪アルコールを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその変異体を生じさせる工程、および該宿主細胞から脂肪アルコールを単離する工程を含む、方法。
【請求項４７】
脂肪アルコールを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０もしくは８２に対して少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを生じさせる工程、および該宿主細胞から脂肪アルコールを単離する工程を含む、方法。
【請求項４８】
脂肪アルコールを製造するための方法であって、宿主細胞にて、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させる工程、および該宿主細胞から脂肪アルコールを単離する工程を含む、方法。
【請求項４９】
脂肪アルコールを製造するための方法であって、配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む組換えベクターで宿主細胞を形質転換する工程、および該宿主細胞から脂肪アルコールを単離する工程を含む、方法。
【請求項５０】
組換えアルコール脱水素酵素をコードする遺伝子を宿主細胞にて発現させる工程をさらに含む、請求項４６〜４９のいずれか１項記載の方法。
【請求項５１】
脂肪アルコールが宿主細胞によって分泌される、請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
脂肪アルコールがＣ_６−Ｃ_２６脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５３】
脂肪アルコールが、１−デカノール、１−ドデカノール、１−ミリスチルアルコール、１−ヘキサデカノール、オクタデセノール、テトラデセノールまたはヘキサデセノールである、請求項５０記載の方法。
【請求項５４】
脂肪アルコールが直鎖脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５５】
脂肪アルコールが分枝脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５６】
脂肪アルコールが環状部分を含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５７】
脂肪アルコールが不飽和脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５８】
脂肪アルコールが一不飽和脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項５９】
脂肪アルコールが飽和脂肪アルコールを含む、請求項５０記載の方法。
【請求項６０】
配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１の５００ヌクレオチド以下からなる単離核酸。
【請求項６１】
配列番号６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９または８１のヌクレオチドの９０％以下からなる単離核酸。
【請求項６２】
核酸が還元酵素活性を有するポリペプチドをコードする、請求項６０または６１記載の核酸。
【請求項６３】
配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０または８２の２００アミノ酸以下からなる単離ポリペプチド。
【請求項６４】
配列番号６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０または８２のアミノ酸の９０％以下からなる単離ポリペプチド。
【請求項６５】
ポリペプチドが還元酵素活性を有する、請求項６３または６４記載の単離ポリペプチド。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９Ａ】

【図２９Ｂ】

【図２９Ｃ】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８−１】

【図３８−２】

【図３８−３】

【図３８−４】

【図３９−１】

【図３９−２】

【図３９−３】

【図３９−４】

【図３９−５】

【図３９−６】

【図３９−７】

【図４０−１】

【図４０−２】

【図４０−３】

【図４０−４】

【図４０−５】

【図４０−６】

【図４０−７】

【図４０−８】

【図４０−９】

【図４０−１０】

【図４０−１１】

【図４０−１２】

【図４０−１３】

【図４０−１４】

【図４０−１５】

【図４０−１６】

【図４０−１７】

【図４０−１８】

【図４０−１９】

【公表番号】特表２０１１−５２０４５５（Ｐ２０１１−５２０４５５Ａ）
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０９７９６（Ｐ２０１１−５０９７９６）
【出願日】平成２１年５月１８日（２００９．５．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４４４０９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４０６９６
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５０８３４３２０５）エルエス９・インコーポレイテッド (7)
【氏名又は名称原語表記】ＬＳ９，　Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】