癌転移抑制用トリテルペン誘導体及び該トリテルペン誘導体を用いた癌転移抑制用組成物
【課題】 悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマなどの腫瘍細胞の転移に対し優れた抑制作用を有する癌転移抑制物質及びこれを含有する組成物を提供すること。
【解決手段】 式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【解決手段】 式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリテルペン誘導体の用途に関するものであり、詳しくは、特定機能に基づき発現する癌転移抑制能を有する癌転移抑制用トリテルペン誘導体、及び該化合物を用いた医薬品、健康機能食品等の癌転移抑制用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞が原発巣から遠く離れた組織や臓器に移転する過程は、（ｉ）癌細胞が原発巣から離脱する、（ｉｉ）基底膜を破り周囲の組織へ浸潤する、（ｉｉｉ）血管やリンパ管に進入し血液やリンパ液の流れによって遠隔の組織に運ばれる、（ｉｖ）再び血管やリンパ管から組織に侵入・増殖し新たに転移巣を形成する、といった流れをたどる（例えば、非特許文献１参照。）。癌は原発巣にとどまる限り、外科手術等で対処し易いが、転移を起こすと一般に予後が悪く、転移を起こし易い癌は悪性と考えられる。
【０００３】
悪性黒色腫はごく初期であれば外科手術による切除で治癒する例も多いが、病状の進行に伴い、放射線療法や化学療法が併用されることになる。悪性黒色腫は転移を起こし易く、癌のなかでもこれらの治療の効果が低いとされている。抗癌剤としては、ダカルバジン等があり、免疫療法も期待され試みられているが、未だ確立した治療法とはなっていないのが実情である。
【０００４】
このように、癌の転移は最も解明の進んでいない分野の一つであり、転移の過程の一部に直接作用して効果を示す癌転移抑制薬は実用化されていない。
【非特許文献１】"α-Melanocyte-stimulating hormone blocks invasion of reconstituted basement membrane (Matrigel) by murine B16 melanoma cells"; Jun Murata, Koichi Ayukawa, Masaru Ogasawara, Hideaki Fujii, Ikuo Saiki; Invasion Metastasis (1997), 17, pp.82-93.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記事情に鑑み開発されたものであり、その目的は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマなどの腫瘍細胞の転移に対し優れた抑制作用を有する癌転移抑制物質及びこれを含有する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明者等は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合が促進されると癌細胞の運動能が抑制され、これにより極めて高い癌転移抑制効果が奏されることを見出すと同時に、特定のトリテルペン誘導体がかかる機能に基づく癌転移抑制能を有することを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩に係わる。
【化１】
【０００８】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【０００９】
本発明において、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体は、癌細胞の運動能抑制機能を有することを特徴とするものであり、該癌細胞の運動能抑制機能は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合を促進することにより癌細胞の運動能を抑制するものであることを特徴とする。
【００１０】
本発明の一態様において、前記癌細胞は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマから選択される少なくとも１つである。
【００１１】
本発明はまた、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌転移抑制剤に係わる。
【００１２】
また、本発明は、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する健康機能食品に係わる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマ等の転移抑制に特に有効な癌転移抑制用医薬品並びに健康食品の提供が可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明に係る癌転移抑制用トリテルペン誘導体は、以下に示す式（Ｉ）又は（ＩＩ）により表される。
【化３】
【００１５】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。Ｒ´の具体例としては、フェニル（C６Ｈ５−）、トリル（ＣＨ３Ｃ６Ｈ５−）、ベンジル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２−）、フェネチル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ２−）、スチリル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ＝ＣＨ−）、ナフチル（Ｃ１０Ｈ７−）等を挙げることができる。
【化４】
【００１６】
上述したように、本発明に係る癌転移抑制用トリテルペン誘導体およびその薬学的に許容される塩（以下において、「本発明のトリテルペン誘導体」という。）による癌転移抑制作用は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合が促進されることにより癌細胞の運動能が抑制されることに基づき発現するものであり、本発明による癌細胞の運動能抑制作用は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマ等の癌細胞に対して特に有効に作用する。
【００１７】
本発明のトリテルペン誘導体はそのまま、あるいは慣用の担体等と共に、癌転移抑制を目的とする医療処置のための医薬として（以下、「癌転移抑制剤」という。）、あるいは食品分野において、健康機能食品等として用いられる。
【００１８】
まず、医薬用途に係る本発明の癌転移抑制剤について説明する。本発明の癌転移抑制剤は、例えば、経口投与、非経口投与することができ、非経口投与としては、注射、経皮投与、直腸投与、眼内投与等により投与され得、これらの投与経路に応じて、適切な薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤等と組み合わされ製剤化することができる。経口投与に適した剤型としては、特に限定されるものではないが、固体、半固体、液体等の状態のものが含まれ、具体的には、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤等を挙げることができる。本発明の癌転移抑制剤の投与量は、投与形態、投与経路、対象とする疫病の程度や段階等に応じて適宜設定、調節することができるが、通常は、活性成分として、一日当たり質量で約０．０００１〜５０００ｍｇ、好ましくは０．００１〜５００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１００ｍｇであり、一回投与量として０．０１ｍｇ、０．２ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇおよび５００ｍｇ等が設定されるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
本発明の癌転移抑制剤を錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤等に製剤化する手段としては、公知の製剤化方法を用いることができ、本発明のトリテルペン誘導体を賦形剤、潤滑剤等と混合し、更に必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤等と混合することにより行うことができる。これらの添加成分の具体例としては、でん粉、乳糖のような糖類、ヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、ゼラチン、タルク、ステアリン酸マグネシウム等を挙げることができる。
【００２０】
注射による投与としては、皮下、皮内、静脈内、筋肉内等に投与することができ、かかる投与方法において用いられる注射用製剤の製剤化方法としては、通常用いられる方法を用いることができる。具体的には、本発明のトリテルペン誘導体を、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、プロピレングリコールのような水性又は非水性の溶媒中に溶解又は懸濁し、あるいは乳化させ、更に必要により、可溶化剤、浸透圧調節剤、乳化剤、安定剤及び保存料のような従来用いられている添加剤と共に製剤化することができる。
【００２１】
経皮投与としては、対象となる皮膚の状態等に応じて軟膏剤、乳化剤、パスタ剤、ハップ剤、リニメント剤、ローション剤、懸濁剤等として投与することができ、かかる投与方法において用いられる経皮投与用製剤の製剤化方法としては、通常用いられる方法を用いることができる。例えば、軟膏剤は、本発明のトリテルペン誘導体を公知の方法によりワセリン、パラフィン等の疎水性基材、又は親水ワセリン、ポリエチレングリコール等の親水性基材と練り合わせることにより製剤化することができる。
【００２２】
直腸投与としては、例えば坐薬として投与することができ、坐薬の製剤化方法としては、通常用いられる方法が用いられ得る。具体的には、本発明のトリテルペン誘導体を、体温で融解するが室温では固化しているカカオバター、カーボンワックス、ポリエチレングリコール等の賦形剤と混合し、成形することにより、製剤化することができる。
【００２３】
次に、健康機能食品として用いられる本発明の癌転移抑制用組成物について説明する。
本発明のトリテルペン誘導体は、いわゆる健康機能食品への用途としても有用であり、例えば、菓子、清涼飲料等の飲料、野菜又は果実加工品、畜肉製品、調味料等として広く適用可能である。その形態としては、特に限定されるものではなく、例えば粉末、固形、溶液等であり得る。上述したような食品類に本発明のトリテルペン誘導体を配合する場合には、本発明のトリテルペン誘導体を精製された化学物質として配合する場合のほか、本発明のトリテルペン誘導体を含有するキク科等の植物やその加工品として、あるいは適当な溶媒によるそれらの抽出物、また更にその抽出物を適当な方法により分画したものとして配合することができる。かかる健康機能食品中への本発明のトリテルペン誘導体の配合量としては、目的や製品形態等に応じて適宜設定することができる。一般的には、ドリンク剤等の溶液又は懸濁液等の場合、例えば、３０ｍｌ中、活性成分として０．００１〜１００ｍｇであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ、より好ましくは０．１〜５ｍｇである。また、タブレット等粉末固形製品の場合は、例えば、３００ｍｇ中、活性成分として０．００１〜５０ｍｇであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ、より好ましくは０．１〜２ｍｇである。
【００２４】
本発明のトリテルペン誘導体を健康機能食品として利用する場合、甘味料、酸味料、保存料、香料、着色料、賦形剤、安定剤、湿潤剤、吸収促進剤、ｐH調整剤等の種々の添加成分を配合することができる。これら添加成分の具体例としては、キノコ抽出液、人参抽出液のような各種食品抽出エキス溶液、キノコ抽出物、人参抽出物のような各種食品抽出エキス、ハチミツ、環状オリゴ糖、還元麦芽糖、トレハロース、乳糖、ショ糖脂肪酸エステル等を挙げることができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
［トリテルペン誘導体の調製］
本発明に係るトリテルペン誘導体１乃至３の調製例を以下に示す。
【００２７】
（調製例１）トリテルペン誘導体１（ルペオール）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体１（ルペオール；式（Ｉ）中、Ｒが水酸基の化合物）を、以下に示す手段により抽出、単離した。
タンポポ根生薬（蒲公英根、ウチダ和漢薬）３５０ｇを破砕した後、エタノール５Ｌを用いて抽出を行い、これを濾過した。この抽出操作を更に４回繰り返した後、得られた濾液を減圧乾固し、粗抽出物（２４．６ｇ）を得た。
【００２８】
得られた粗抽出物をクロロホルム−メタノール−蒸留水（４：４：３、１Ｌ）で分液操作を行い、クロロホルム層と水層に分離した。本発明者等が選抜、樹立したマウスメラノーマ細胞 B16由来 α-MSH 高感受性株Ｂ１６ ２Ｆ２ 分化誘導活性が検出されたクロロホルム層について、その画分を減圧乾固した（７．５ｇ）。さらに、得られた抽出物を、ｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：１）の溶媒を用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：１）、（１：３）、クロロホルム−メタノール（３：１）、（１：１）で順次溶出した後、その活性を調べた。活性は主にｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：３）を用いて溶出された画分に検出されたため（１．２ｇ）、更にこの画分を、クロロホルム−メタノール（１：９）を用いてＣｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８（ナカライテスク株式会社）による逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィに付して精製し、無色針状物質のルペオール（８９．６ｍｇ）を得た。
【００２９】
得られたルペオールの物性値と各種スペクトルの結果を以下に示す。
【００３０】
融点213 - 214℃; [α]２５Ｄ＋26.6°(c 1.00, クロロホルム); IR (KBr) νmax 3600-3100, 3000-2800, 1639, 1454, 1379, 1295, 1187, 1041, 883 cm-1; １H-NMR (CDCl3) δ 4.69, 4.57 (each 1H, br. s, H2-29), 3.20 (1H, dd, J=10.8, 4.4 Hz, 3α-H), 2.38 (1H, m, H2-2), 1.69 (3H, s, H3-30), 1.04 (3H, s), 0.98 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.85 (3H, s), 0.80 (3H, s), 0.77 (3H, s); 13Ｃ-NMR (CDCl3) δ 150.9 (s, C-20), 109.3 (t, C-29), 79.0 (d, C-3), 55.3 (d, C-5), 50.5 (d, C-9), 48.3 (d, C-19), 48.0 (d, C-18), 43.0 (s, C-14), 42.9 (s, C-17) 40.8 (s, C-8), 40.0 (t, C-16), 38.9 (s, C-4), 55.3 (d, C-5), 38.8 (t, C-1), 38.1 (d, C-13), 37.2 (s, C-10), 36.6 (t, C-22), 34.3 (t, C-7), 29.9 (t, C-15), 28.0 (q, C-23), 27.5 (t, C-2), 27.4 (t, C-21), 25.2 (t, C-12), 21.0 (t, C-11), 19.3 (q, C-30), 18.3 (t, C-6), 18.0 (q, C-28), 16.1 (q, C-25), 16.0 (q, C-26), 15.4 (q, C-24), 14.6 (q, C-27); EIMS m/z 426 (4), 370 (2), 316 (10), 257 (8), 207 (58), 189 (50), 135 (45), 109 (100); HREIMS m/z 426.3866 (C30H50O1 calcd: 426.3861)。
【００３１】
ルペオールの化学構造については、ＨＲＥＩＭＳの結果からトリテルペン化合物と考えられ、１H-NMRで特徴的なδ 3.20ppmに典型的な水酸基の付け根に相当する３αプロトン由来のダブルタブレット（J = 10.8, 4.4 Hz）プロトンが現れることから、３位β−水酸基の存在が示唆され、また13Ｃ-NMRでの多重度測定の結果などから、ルパン型五環性トリテルペン化合物のルペオール［= lup-20(29)-en-3β-ol］であると推定された。そこで、試薬としてのルペオールと、混融試験ならびにＩＲ及び１H-NMR、13Ｃ-NMRスペクトルを直接比較し、その化学構造を確認した。
【００３２】
（調製例２）トリテルペン誘導体２（ルペニルパルミテート）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体２（ルペニルパルミテート；式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２）１４ＣＨ３（Ｒ´が炭素数１５のアルキル基）であるパルミチン酸エステル）を、以下に示す手段により合成、精製した。
【００３３】
ルペオール（３０ｍｇ）とパルミチン酸（４０ｍｇ）を、室温（２５℃）において乾燥テトラヒドロフラン３ｍＬに溶解させた後、濃硫酸０．５ｍＬを加え、これを１時間静置した。得られた反応液を氷冷下において飽和食塩水に注入し、クロロホルムを用いて抽出を２回繰り返した。得られたクロロホルム溶液を、重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下において溶媒を除去し、ルペニルパルミテート（無色柱状結晶物質、６５ｍｇ）を得た。
【００３４】
なお、式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３（Ｒ´がメチル基）であるエステル誘導体（ルペニルアセテート）は、ルペオールを無水酢酸−ピリジンを用いてアセチル化することにより得ることができ、その他の本発明に係るエステル誘導体（式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯＲ´）は、市販されている炭素数２〜２３のアルキル酸、アリール酸、ベンジル酸の遊離酸化合物あるいはメチルエステル体化合物とルペオールを、前述の濃硫酸処理によってエステル結合させることにより得ることができる。
【００３５】
ルペニルパルミテートの物理データを以下に示す。
【００３６】
融点 94-96℃；[α]25D +52.7°(c 0.30, クロロホルム)； IR (KBr) νmax 3000-2800, 1728, 1640, 1465, 1380, 1320, 1255, 1179, 1147, 1116, 1038, 977, 879 cm-1 ； 1H-NMR (CDCl3) δ 4.69, 4.57 (each 1H, br s, H2-29), 4.49 (1H, dd, J=10.8, 5.6 Hz, 3(H), 2.38 (1H, m, H2-2), 2.29 (2H, t, J=7.2 Hz, H2-2’), 1.69(3H, s, H3-30), 1.30-1.20 (パルミチン酸部分アルキル鎖プロトン), 1.05 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.87 (3H, t, J=8.4 Hz, H3-16’), 0.85 (6H, s), 0.80 (3H, s); 13C-NMR (CDCl3) δ 179.6 (s, C-1’), 150.8 (s, C-20), 109.4 (t, C-29), 80.6 (d, C-3), 55.4 (d, C-5), 50.4 (d, C-9), 48.3 (d, C-19), 48.0 (d, C-18), 43.0 (s, C-14), 42.9 (s, C-17), 40.9 (s, C-8), 40.0 (t, C-16), 38.4 (t, C-1), 38.0 (d, C-13), 37.1 (s, C-10), 35.6 (t, C-22), 34.8 (t, C-2’), 34.2 (t, C-7), 31.9 (t, C-15’), 29.9 (t, C-15), 29.7-29.6 (12C, each t, C-3’〜 C-14’), 28.0 (q, C-23), 27.5 (t, C-21), 25.2 (2C, each t, C-2, C-12), 21.0 (t, C-11), 19.3 (q, C-30), 18.2 (t, C-6), 18.0 (q, C-28), 16.6 (q, C-16’), 16.2 (q, C-25), 16.0 (q, C-26), 14.5 (C-27), 14.0 (C-24); EIMS m/z 664 (25), 649 (13), 408 (40), 368 (40), 256 (55), 236 (60), 189 (70), 149 (85), 123 (90), 109 (92), 95 (100); HREIMS m/z 664.6125 (C46H80O2, calcd: 664.6158)。
【００３７】
（調製例３）トリテルペン誘導体３（ルペオン）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体３（ルペオン；式（ＩＩ）で表される化合物）を、以下に示す手段により合成、精製した。
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）にルペオール（１００ｍｇ）を溶解させた溶液に、クロロクロム酸ピリジニウム（５０ｍｇ）を添加し、室温で２時間攪拌した。反応産物をジエチルエーテル(５ｍＬ）に溶解し、フロリジルカラムに通過させ、１０倍容量のジエチルエーテルで溶出した。得られた溶出液から減圧濃縮により溶媒を除去し、ルペオン（無色針状結晶物質、６０ｍｇ）を得た。試薬としてのルペオンと、混融試験ならびにＩＲ及び１H-NMR、13Ｃ-NMRスペクトルを直接比較し、その化学構造を確認した。
【００３８】
（実施例１）
B16 2F2を、１０％牛胎児血清を添加したダルベッコ変法イーグル培地で培養した。ボイデンチャンバーは、２４ウェル培養プレートに上室として８μｍポアサイズのポリカーボネートフィルター付きのインサートを用いた型を使用した（コーニング社製；商品名 COSTARTRANSWELL)。B16 2F2細胞を０．１％牛血清アルブミン添加ダルベッコ変法イーグル培地で１×１０６cells/mLに調製し、前記調製例１で製造したルペオールを最終濃度１〜２０μＭとなるように添加し、５×１０５cells/ mLの細胞懸濁液を準備した。また、チャンバーの下室ウェルには予め上室と同濃度のルペオールを含む０．１％牛血清アルブミン添加ダルベッコ変法イーグル培地６００μLを入れた後、上室をセットした。上室にB16 2F2細胞５×１０５cells/ mLを１００μL入れ、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下に６時間インキュベートした。その後、フィルターを取り出し、フィルター下面に遊走したB16 2F2細胞を固定後、ヘマトキシリン染色液にて染色し、顕微鏡下で遊走細胞数を算定した。
【００３９】
図１に結果を示す。なお、図１において、Migration Index (%)は、無添加の区での遊走細胞数を１００とした場合の百分率を表し、以下において、本発明のトリテルペン誘導体が有するB16 2F2細胞遊走阻害能は、このMigration Index (%)により評価される。また、図１中、＊印は無添加の区と比較して危険率０．０１未満で有意な差があることを示す。
【００４０】
図１より、本発明のトリテルペン誘導体は、癌細胞の運動能抑制機能を有することが明らかとなった。
【００４１】
（実施例２）
実施例１に対し、本発明のトリテルペン誘導体として、ルペオールに替えて前記調製例に従い製造したルペオン、ルペニルアセテートを使用した以外は実施例１と同様にして実験を行った。その結果、ルペオン、ルペニルアセテート１０μMの濃度におけるMigration Indexは、各々２９．２％、３９．７％であり、この場合も優れたB16 2F2細胞遊走阻害能を有することが明らかとなった。
【００４２】
（実施例３）
１０μMルペオールを用い、ヒト由来メラノーマ、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、アストロサイトーマ、肺腺癌、腎腺癌、繊維肉腫、骨肉腫、胃癌由来、子宮頸癌、膵臓癌、膀胱癌の遊走能に対する阻害能を、実施例１と同様に評価した。データは、４穴の平均値により示した。その結果、前記癌細胞の中で、メラノーマ（Migration Index = 40.8%)、神経芽細胞腫（Migration Index = 39.7%)、神経膠芽腫（Migration Index = 39.8%)、及びアストロサイトーマ（Migration Index = 43.3%)に対して特に優れた遊走阻害能を発現することが明らかとなった。
【００４３】
（実施例４）
B16 2F2細胞を、１０％牛胎児血清添加ダルベッコ変法イーグル培地で１×１０６cells/mL（１ｍL)に調製し、ルペオールを最終濃度１０μＭとなるように添加した。３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下に１２時間インキュベートした。B16 2F2細胞を固定後、Alexa-Fluora 488-Phalloidin溶液にて染色し、蛍光顕微鏡下で細胞内アクチンポリマー（＝ストレスファイバー）を観察した。図２に結果を示す。
【００４４】
図２において、未処理のB16 2F2細胞ではアクチンの重合（図中の白矢印）が認められるのに対し、ルペオール処理したB16 2F2細胞ではアクチンポリマーは観察されず、アクチンポリマーの脱重合が認められた。この結果より、ルペオールによるB16 2F2細胞の運動能抑制機能は、アクチンポリマーの脱重合が促進されることに基づくものであることが考察される。
【００４５】
（実施例５）
本発明に係る注射剤用癌転移抑制剤は、例えば、以下の手段により調製することができる。
【００４６】
成分 配合量
本発明のトリテルペン誘導体 １０ ｍｇ
ポリオキシエチレン水素化ひまし油６０ ４００ ｍｇ
エタノール １ｍLとするのに必要な量
常法により本発明のトリテルペン誘導体及びポリオキシエチレン水素化ひまし油６０をエタノールに溶解させ、上記成分組成からなる溶液を調整する。得られる溶液は、適量の生理食塩水で希釈して、静脈内注入により投与することができる。
【００４７】
（実施例６）
本発明に係る健康機能食品（タブレット）は、例えば、以下の成分組成において製造することができる。
【００４８】
本発明のトリテルペン誘導体 ０．５ ｍｇ
還元麦芽糖 ８７．８ ｍｇ
トレハロース ４１．２ ｍｇ
乳糖 １６．５ ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル ６．２ ｍｇ
デキストリン １４７．８ ｍｇ
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ルペオールによるB16 2F2細胞遊走阻害能の評価結果を示すグラフ。
【図２】ルペオールによるアクチンポリマーの脱重合性を示す顕微鏡写真。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリテルペン誘導体の用途に関するものであり、詳しくは、特定機能に基づき発現する癌転移抑制能を有する癌転移抑制用トリテルペン誘導体、及び該化合物を用いた医薬品、健康機能食品等の癌転移抑制用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞が原発巣から遠く離れた組織や臓器に移転する過程は、（ｉ）癌細胞が原発巣から離脱する、（ｉｉ）基底膜を破り周囲の組織へ浸潤する、（ｉｉｉ）血管やリンパ管に進入し血液やリンパ液の流れによって遠隔の組織に運ばれる、（ｉｖ）再び血管やリンパ管から組織に侵入・増殖し新たに転移巣を形成する、といった流れをたどる（例えば、非特許文献１参照。）。癌は原発巣にとどまる限り、外科手術等で対処し易いが、転移を起こすと一般に予後が悪く、転移を起こし易い癌は悪性と考えられる。
【０００３】
悪性黒色腫はごく初期であれば外科手術による切除で治癒する例も多いが、病状の進行に伴い、放射線療法や化学療法が併用されることになる。悪性黒色腫は転移を起こし易く、癌のなかでもこれらの治療の効果が低いとされている。抗癌剤としては、ダカルバジン等があり、免疫療法も期待され試みられているが、未だ確立した治療法とはなっていないのが実情である。
【０００４】
このように、癌の転移は最も解明の進んでいない分野の一つであり、転移の過程の一部に直接作用して効果を示す癌転移抑制薬は実用化されていない。
【非特許文献１】"α-Melanocyte-stimulating hormone blocks invasion of reconstituted basement membrane (Matrigel) by murine B16 melanoma cells"; Jun Murata, Koichi Ayukawa, Masaru Ogasawara, Hideaki Fujii, Ikuo Saiki; Invasion Metastasis (1997), 17, pp.82-93.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記事情に鑑み開発されたものであり、その目的は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマなどの腫瘍細胞の転移に対し優れた抑制作用を有する癌転移抑制物質及びこれを含有する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明者等は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合が促進されると癌細胞の運動能が抑制され、これにより極めて高い癌転移抑制効果が奏されることを見出すと同時に、特定のトリテルペン誘導体がかかる機能に基づく癌転移抑制能を有することを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩に係わる。
【化１】
【０００８】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【０００９】
本発明において、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体は、癌細胞の運動能抑制機能を有することを特徴とするものであり、該癌細胞の運動能抑制機能は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合を促進することにより癌細胞の運動能を抑制するものであることを特徴とする。
【００１０】
本発明の一態様において、前記癌細胞は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマから選択される少なくとも１つである。
【００１１】
本発明はまた、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌転移抑制剤に係わる。
【００１２】
また、本発明は、前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する健康機能食品に係わる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマ等の転移抑制に特に有効な癌転移抑制用医薬品並びに健康食品の提供が可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明に係る癌転移抑制用トリテルペン誘導体は、以下に示す式（Ｉ）又は（ＩＩ）により表される。
【化３】
【００１５】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。Ｒ´の具体例としては、フェニル（C６Ｈ５−）、トリル（ＣＨ３Ｃ６Ｈ５−）、ベンジル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２−）、フェネチル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ２−）、スチリル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ＝ＣＨ−）、ナフチル（Ｃ１０Ｈ７−）等を挙げることができる。
【化４】
【００１６】
上述したように、本発明に係る癌転移抑制用トリテルペン誘導体およびその薬学的に許容される塩（以下において、「本発明のトリテルペン誘導体」という。）による癌転移抑制作用は、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合が促進されることにより癌細胞の運動能が抑制されることに基づき発現するものであり、本発明による癌細胞の運動能抑制作用は、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマ等の癌細胞に対して特に有効に作用する。
【００１７】
本発明のトリテルペン誘導体はそのまま、あるいは慣用の担体等と共に、癌転移抑制を目的とする医療処置のための医薬として（以下、「癌転移抑制剤」という。）、あるいは食品分野において、健康機能食品等として用いられる。
【００１８】
まず、医薬用途に係る本発明の癌転移抑制剤について説明する。本発明の癌転移抑制剤は、例えば、経口投与、非経口投与することができ、非経口投与としては、注射、経皮投与、直腸投与、眼内投与等により投与され得、これらの投与経路に応じて、適切な薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤等と組み合わされ製剤化することができる。経口投与に適した剤型としては、特に限定されるものではないが、固体、半固体、液体等の状態のものが含まれ、具体的には、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤等を挙げることができる。本発明の癌転移抑制剤の投与量は、投与形態、投与経路、対象とする疫病の程度や段階等に応じて適宜設定、調節することができるが、通常は、活性成分として、一日当たり質量で約０．０００１〜５０００ｍｇ、好ましくは０．００１〜５００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１００ｍｇであり、一回投与量として０．０１ｍｇ、０．２ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇおよび５００ｍｇ等が設定されるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
本発明の癌転移抑制剤を錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤等に製剤化する手段としては、公知の製剤化方法を用いることができ、本発明のトリテルペン誘導体を賦形剤、潤滑剤等と混合し、更に必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤等と混合することにより行うことができる。これらの添加成分の具体例としては、でん粉、乳糖のような糖類、ヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、ゼラチン、タルク、ステアリン酸マグネシウム等を挙げることができる。
【００２０】
注射による投与としては、皮下、皮内、静脈内、筋肉内等に投与することができ、かかる投与方法において用いられる注射用製剤の製剤化方法としては、通常用いられる方法を用いることができる。具体的には、本発明のトリテルペン誘導体を、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、プロピレングリコールのような水性又は非水性の溶媒中に溶解又は懸濁し、あるいは乳化させ、更に必要により、可溶化剤、浸透圧調節剤、乳化剤、安定剤及び保存料のような従来用いられている添加剤と共に製剤化することができる。
【００２１】
経皮投与としては、対象となる皮膚の状態等に応じて軟膏剤、乳化剤、パスタ剤、ハップ剤、リニメント剤、ローション剤、懸濁剤等として投与することができ、かかる投与方法において用いられる経皮投与用製剤の製剤化方法としては、通常用いられる方法を用いることができる。例えば、軟膏剤は、本発明のトリテルペン誘導体を公知の方法によりワセリン、パラフィン等の疎水性基材、又は親水ワセリン、ポリエチレングリコール等の親水性基材と練り合わせることにより製剤化することができる。
【００２２】
直腸投与としては、例えば坐薬として投与することができ、坐薬の製剤化方法としては、通常用いられる方法が用いられ得る。具体的には、本発明のトリテルペン誘導体を、体温で融解するが室温では固化しているカカオバター、カーボンワックス、ポリエチレングリコール等の賦形剤と混合し、成形することにより、製剤化することができる。
【００２３】
次に、健康機能食品として用いられる本発明の癌転移抑制用組成物について説明する。
本発明のトリテルペン誘導体は、いわゆる健康機能食品への用途としても有用であり、例えば、菓子、清涼飲料等の飲料、野菜又は果実加工品、畜肉製品、調味料等として広く適用可能である。その形態としては、特に限定されるものではなく、例えば粉末、固形、溶液等であり得る。上述したような食品類に本発明のトリテルペン誘導体を配合する場合には、本発明のトリテルペン誘導体を精製された化学物質として配合する場合のほか、本発明のトリテルペン誘導体を含有するキク科等の植物やその加工品として、あるいは適当な溶媒によるそれらの抽出物、また更にその抽出物を適当な方法により分画したものとして配合することができる。かかる健康機能食品中への本発明のトリテルペン誘導体の配合量としては、目的や製品形態等に応じて適宜設定することができる。一般的には、ドリンク剤等の溶液又は懸濁液等の場合、例えば、３０ｍｌ中、活性成分として０．００１〜１００ｍｇであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ、より好ましくは０．１〜５ｍｇである。また、タブレット等粉末固形製品の場合は、例えば、３００ｍｇ中、活性成分として０．００１〜５０ｍｇであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ、より好ましくは０．１〜２ｍｇである。
【００２４】
本発明のトリテルペン誘導体を健康機能食品として利用する場合、甘味料、酸味料、保存料、香料、着色料、賦形剤、安定剤、湿潤剤、吸収促進剤、ｐH調整剤等の種々の添加成分を配合することができる。これら添加成分の具体例としては、キノコ抽出液、人参抽出液のような各種食品抽出エキス溶液、キノコ抽出物、人参抽出物のような各種食品抽出エキス、ハチミツ、環状オリゴ糖、還元麦芽糖、トレハロース、乳糖、ショ糖脂肪酸エステル等を挙げることができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
［トリテルペン誘導体の調製］
本発明に係るトリテルペン誘導体１乃至３の調製例を以下に示す。
【００２７】
（調製例１）トリテルペン誘導体１（ルペオール）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体１（ルペオール；式（Ｉ）中、Ｒが水酸基の化合物）を、以下に示す手段により抽出、単離した。
タンポポ根生薬（蒲公英根、ウチダ和漢薬）３５０ｇを破砕した後、エタノール５Ｌを用いて抽出を行い、これを濾過した。この抽出操作を更に４回繰り返した後、得られた濾液を減圧乾固し、粗抽出物（２４．６ｇ）を得た。
【００２８】
得られた粗抽出物をクロロホルム−メタノール−蒸留水（４：４：３、１Ｌ）で分液操作を行い、クロロホルム層と水層に分離した。本発明者等が選抜、樹立したマウスメラノーマ細胞 B16由来 α-MSH 高感受性株Ｂ１６ ２Ｆ２ 分化誘導活性が検出されたクロロホルム層について、その画分を減圧乾固した（７．５ｇ）。さらに、得られた抽出物を、ｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：１）の溶媒を用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：１）、（１：３）、クロロホルム−メタノール（３：１）、（１：１）で順次溶出した後、その活性を調べた。活性は主にｎ-ヘキサン−クロロホルム（１：３）を用いて溶出された画分に検出されたため（１．２ｇ）、更にこの画分を、クロロホルム−メタノール（１：９）を用いてＣｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８（ナカライテスク株式会社）による逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィに付して精製し、無色針状物質のルペオール（８９．６ｍｇ）を得た。
【００２９】
得られたルペオールの物性値と各種スペクトルの結果を以下に示す。
【００３０】
融点213 - 214℃; [α]２５Ｄ＋26.6°(c 1.00, クロロホルム); IR (KBr) νmax 3600-3100, 3000-2800, 1639, 1454, 1379, 1295, 1187, 1041, 883 cm-1; １H-NMR (CDCl3) δ 4.69, 4.57 (each 1H, br. s, H2-29), 3.20 (1H, dd, J=10.8, 4.4 Hz, 3α-H), 2.38 (1H, m, H2-2), 1.69 (3H, s, H3-30), 1.04 (3H, s), 0.98 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.85 (3H, s), 0.80 (3H, s), 0.77 (3H, s); 13Ｃ-NMR (CDCl3) δ 150.9 (s, C-20), 109.3 (t, C-29), 79.0 (d, C-3), 55.3 (d, C-5), 50.5 (d, C-9), 48.3 (d, C-19), 48.0 (d, C-18), 43.0 (s, C-14), 42.9 (s, C-17) 40.8 (s, C-8), 40.0 (t, C-16), 38.9 (s, C-4), 55.3 (d, C-5), 38.8 (t, C-1), 38.1 (d, C-13), 37.2 (s, C-10), 36.6 (t, C-22), 34.3 (t, C-7), 29.9 (t, C-15), 28.0 (q, C-23), 27.5 (t, C-2), 27.4 (t, C-21), 25.2 (t, C-12), 21.0 (t, C-11), 19.3 (q, C-30), 18.3 (t, C-6), 18.0 (q, C-28), 16.1 (q, C-25), 16.0 (q, C-26), 15.4 (q, C-24), 14.6 (q, C-27); EIMS m/z 426 (4), 370 (2), 316 (10), 257 (8), 207 (58), 189 (50), 135 (45), 109 (100); HREIMS m/z 426.3866 (C30H50O1 calcd: 426.3861)。
【００３１】
ルペオールの化学構造については、ＨＲＥＩＭＳの結果からトリテルペン化合物と考えられ、１H-NMRで特徴的なδ 3.20ppmに典型的な水酸基の付け根に相当する３αプロトン由来のダブルタブレット（J = 10.8, 4.4 Hz）プロトンが現れることから、３位β−水酸基の存在が示唆され、また13Ｃ-NMRでの多重度測定の結果などから、ルパン型五環性トリテルペン化合物のルペオール［= lup-20(29)-en-3β-ol］であると推定された。そこで、試薬としてのルペオールと、混融試験ならびにＩＲ及び１H-NMR、13Ｃ-NMRスペクトルを直接比較し、その化学構造を確認した。
【００３２】
（調製例２）トリテルペン誘導体２（ルペニルパルミテート）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体２（ルペニルパルミテート；式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２）１４ＣＨ３（Ｒ´が炭素数１５のアルキル基）であるパルミチン酸エステル）を、以下に示す手段により合成、精製した。
【００３３】
ルペオール（３０ｍｇ）とパルミチン酸（４０ｍｇ）を、室温（２５℃）において乾燥テトラヒドロフラン３ｍＬに溶解させた後、濃硫酸０．５ｍＬを加え、これを１時間静置した。得られた反応液を氷冷下において飽和食塩水に注入し、クロロホルムを用いて抽出を２回繰り返した。得られたクロロホルム溶液を、重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下において溶媒を除去し、ルペニルパルミテート（無色柱状結晶物質、６５ｍｇ）を得た。
【００３４】
なお、式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３（Ｒ´がメチル基）であるエステル誘導体（ルペニルアセテート）は、ルペオールを無水酢酸−ピリジンを用いてアセチル化することにより得ることができ、その他の本発明に係るエステル誘導体（式（Ｉ）中、Ｒが−Ｏ−ＣＯＲ´）は、市販されている炭素数２〜２３のアルキル酸、アリール酸、ベンジル酸の遊離酸化合物あるいはメチルエステル体化合物とルペオールを、前述の濃硫酸処理によってエステル結合させることにより得ることができる。
【００３５】
ルペニルパルミテートの物理データを以下に示す。
【００３６】
融点 94-96℃；[α]25D +52.7°(c 0.30, クロロホルム)； IR (KBr) νmax 3000-2800, 1728, 1640, 1465, 1380, 1320, 1255, 1179, 1147, 1116, 1038, 977, 879 cm-1 ； 1H-NMR (CDCl3) δ 4.69, 4.57 (each 1H, br s, H2-29), 4.49 (1H, dd, J=10.8, 5.6 Hz, 3(H), 2.38 (1H, m, H2-2), 2.29 (2H, t, J=7.2 Hz, H2-2’), 1.69(3H, s, H3-30), 1.30-1.20 (パルミチン酸部分アルキル鎖プロトン), 1.05 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.87 (3H, t, J=8.4 Hz, H3-16’), 0.85 (6H, s), 0.80 (3H, s); 13C-NMR (CDCl3) δ 179.6 (s, C-1’), 150.8 (s, C-20), 109.4 (t, C-29), 80.6 (d, C-3), 55.4 (d, C-5), 50.4 (d, C-9), 48.3 (d, C-19), 48.0 (d, C-18), 43.0 (s, C-14), 42.9 (s, C-17), 40.9 (s, C-8), 40.0 (t, C-16), 38.4 (t, C-1), 38.0 (d, C-13), 37.1 (s, C-10), 35.6 (t, C-22), 34.8 (t, C-2’), 34.2 (t, C-7), 31.9 (t, C-15’), 29.9 (t, C-15), 29.7-29.6 (12C, each t, C-3’〜 C-14’), 28.0 (q, C-23), 27.5 (t, C-21), 25.2 (2C, each t, C-2, C-12), 21.0 (t, C-11), 19.3 (q, C-30), 18.2 (t, C-6), 18.0 (q, C-28), 16.6 (q, C-16’), 16.2 (q, C-25), 16.0 (q, C-26), 14.5 (C-27), 14.0 (C-24); EIMS m/z 664 (25), 649 (13), 408 (40), 368 (40), 256 (55), 236 (60), 189 (70), 149 (85), 123 (90), 109 (92), 95 (100); HREIMS m/z 664.6125 (C46H80O2, calcd: 664.6158)。
【００３７】
（調製例３）トリテルペン誘導体３（ルペオン）の調製
本発明に係るトリテルペン誘導体３（ルペオン；式（ＩＩ）で表される化合物）を、以下に示す手段により合成、精製した。
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）にルペオール（１００ｍｇ）を溶解させた溶液に、クロロクロム酸ピリジニウム（５０ｍｇ）を添加し、室温で２時間攪拌した。反応産物をジエチルエーテル(５ｍＬ）に溶解し、フロリジルカラムに通過させ、１０倍容量のジエチルエーテルで溶出した。得られた溶出液から減圧濃縮により溶媒を除去し、ルペオン（無色針状結晶物質、６０ｍｇ）を得た。試薬としてのルペオンと、混融試験ならびにＩＲ及び１H-NMR、13Ｃ-NMRスペクトルを直接比較し、その化学構造を確認した。
【００３８】
（実施例１）
B16 2F2を、１０％牛胎児血清を添加したダルベッコ変法イーグル培地で培養した。ボイデンチャンバーは、２４ウェル培養プレートに上室として８μｍポアサイズのポリカーボネートフィルター付きのインサートを用いた型を使用した（コーニング社製；商品名 COSTARTRANSWELL)。B16 2F2細胞を０．１％牛血清アルブミン添加ダルベッコ変法イーグル培地で１×１０６cells/mLに調製し、前記調製例１で製造したルペオールを最終濃度１〜２０μＭとなるように添加し、５×１０５cells/ mLの細胞懸濁液を準備した。また、チャンバーの下室ウェルには予め上室と同濃度のルペオールを含む０．１％牛血清アルブミン添加ダルベッコ変法イーグル培地６００μLを入れた後、上室をセットした。上室にB16 2F2細胞５×１０５cells/ mLを１００μL入れ、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下に６時間インキュベートした。その後、フィルターを取り出し、フィルター下面に遊走したB16 2F2細胞を固定後、ヘマトキシリン染色液にて染色し、顕微鏡下で遊走細胞数を算定した。
【００３９】
図１に結果を示す。なお、図１において、Migration Index (%)は、無添加の区での遊走細胞数を１００とした場合の百分率を表し、以下において、本発明のトリテルペン誘導体が有するB16 2F2細胞遊走阻害能は、このMigration Index (%)により評価される。また、図１中、＊印は無添加の区と比較して危険率０．０１未満で有意な差があることを示す。
【００４０】
図１より、本発明のトリテルペン誘導体は、癌細胞の運動能抑制機能を有することが明らかとなった。
【００４１】
（実施例２）
実施例１に対し、本発明のトリテルペン誘導体として、ルペオールに替えて前記調製例に従い製造したルペオン、ルペニルアセテートを使用した以外は実施例１と同様にして実験を行った。その結果、ルペオン、ルペニルアセテート１０μMの濃度におけるMigration Indexは、各々２９．２％、３９．７％であり、この場合も優れたB16 2F2細胞遊走阻害能を有することが明らかとなった。
【００４２】
（実施例３）
１０μMルペオールを用い、ヒト由来メラノーマ、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、アストロサイトーマ、肺腺癌、腎腺癌、繊維肉腫、骨肉腫、胃癌由来、子宮頸癌、膵臓癌、膀胱癌の遊走能に対する阻害能を、実施例１と同様に評価した。データは、４穴の平均値により示した。その結果、前記癌細胞の中で、メラノーマ（Migration Index = 40.8%)、神経芽細胞腫（Migration Index = 39.7%)、神経膠芽腫（Migration Index = 39.8%)、及びアストロサイトーマ（Migration Index = 43.3%)に対して特に優れた遊走阻害能を発現することが明らかとなった。
【００４３】
（実施例４）
B16 2F2細胞を、１０％牛胎児血清添加ダルベッコ変法イーグル培地で１×１０６cells/mL（１ｍL)に調製し、ルペオールを最終濃度１０μＭとなるように添加した。３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下に１２時間インキュベートした。B16 2F2細胞を固定後、Alexa-Fluora 488-Phalloidin溶液にて染色し、蛍光顕微鏡下で細胞内アクチンポリマー（＝ストレスファイバー）を観察した。図２に結果を示す。
【００４４】
図２において、未処理のB16 2F2細胞ではアクチンの重合（図中の白矢印）が認められるのに対し、ルペオール処理したB16 2F2細胞ではアクチンポリマーは観察されず、アクチンポリマーの脱重合が認められた。この結果より、ルペオールによるB16 2F2細胞の運動能抑制機能は、アクチンポリマーの脱重合が促進されることに基づくものであることが考察される。
【００４５】
（実施例５）
本発明に係る注射剤用癌転移抑制剤は、例えば、以下の手段により調製することができる。
【００４６】
成分 配合量
本発明のトリテルペン誘導体 １０ ｍｇ
ポリオキシエチレン水素化ひまし油６０ ４００ ｍｇ
エタノール １ｍLとするのに必要な量
常法により本発明のトリテルペン誘導体及びポリオキシエチレン水素化ひまし油６０をエタノールに溶解させ、上記成分組成からなる溶液を調整する。得られる溶液は、適量の生理食塩水で希釈して、静脈内注入により投与することができる。
【００４７】
（実施例６）
本発明に係る健康機能食品（タブレット）は、例えば、以下の成分組成において製造することができる。
【００４８】
本発明のトリテルペン誘導体 ０．５ ｍｇ
還元麦芽糖 ８７．８ ｍｇ
トレハロース ４１．２ ｍｇ
乳糖 １６．５ ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル ６．２ ｍｇ
デキストリン １４７．８ ｍｇ
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ルペオールによるB16 2F2細胞遊走阻害能の評価結果を示すグラフ。
【図２】ルペオールによるアクチンポリマーの脱重合性を示す顕微鏡写真。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【請求項２】
前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体が、癌細胞の運動能抑制機能を有することを特徴とする、請求項1に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記癌細胞の運動能抑制機能が、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合を促進することにより癌細胞の運動能を抑制するものである、請求項２に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
前記癌細胞が、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマから選択される少なくとも１つである、請求項２または３に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌転移抑制剤。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する健康機能食品。
【請求項１】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
式中、Ｒは水酸基、または−Ｏ−ＣＯ−Ｒ´を表し、Ｒ´は炭素数１〜２３のアルキル基、または炭素数６〜２３の含芳香環基を表す。
【化２】
【請求項２】
前記癌転移抑制用トリテルペン誘導体が、癌細胞の運動能抑制機能を有することを特徴とする、請求項1に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記癌細胞の運動能抑制機能が、癌細胞内におけるアクチンポリマーの脱重合を促進することにより癌細胞の運動能を抑制するものである、請求項２に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
前記癌細胞が、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫およびアストロサイトーマから選択される少なくとも１つである、請求項２または３に記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌転移抑制剤。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の癌転移抑制用トリテルペン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する健康機能食品。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００６−１５１９０２（Ｐ２００６−１５１９０２Ａ）
【公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−３４７０５４（Ｐ２００４−３４７０５４）
【出願日】平成１６年１１月３０日（２００４．１１．３０）
【出願人】（５９１１０８１７８）秋田県 (126)
【出願人】（３９８０５０２６１）株式会社坂本バイオ (11)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月３０日（２００４．１１．３０）
【出願人】（５９１１０８１７８）秋田県 (126)
【出願人】（３９８０５０２６１）株式会社坂本バイオ (11)
【Ｆターム（参考）】
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