眼の疾患の処置のためのチューブリン結合薬剤を投与するための組成物および方法
【課題】眼組織での悪性または非悪性の血管増殖性障害の処置のための、脈管標的化因子（特に、チューブリン結合薬剤）の投与。
【解決手段】本発明は、眼の新生血管形成、眼の腫瘍、ならびに糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、網膜芽細胞腫および黄斑変性のような状態の処置のための、脈管標的化薬剤、特に、チューブリン結合薬剤の投与に関する。本発明は、眼の疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、以下の工程：ａ）薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を含有する投薬を調製する工程；ｂ）この薬学的に有効な投薬量を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程、を包含する。
【解決手段】本発明は、眼の新生血管形成、眼の腫瘍、ならびに糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、網膜芽細胞腫および黄斑変性のような状態の処置のための、脈管標的化薬剤、特に、チューブリン結合薬剤の投与に関する。本発明は、眼の疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、以下の工程：ａ）薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を含有する投薬を調製する工程；ｂ）この薬学的に有効な投薬量を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程、を包含する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼の疾患の処置のための、脈管標的化因子（特に、チューブリン結合薬剤）の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
眼は、基本的に、一生の間で最も重要な器官のうちの１つである。視覚に有害に影響し得る加齢、疾患および他の因子が原因で、眼の健康を維持する能力は、すべて重要となる。失明の主要な原因は、眼に薬物または治療因子を導入できないこと、およびこれらの薬物または因子を治療上有効な濃度で維持できないことである。薬物の経口接種または眼以外の部位での薬物の注入は、その薬物を全身に提供する。しかし、そのような全身投与は、眼に特異的には有効レベルのその薬物を提供せず、従って、有効な眼内濃度を達成するために、しばしば受容可能でない高レベルの因子を投与することが必要となり得る。
【０００３】
斑は、微細で詳細な視覚を担う光感覚細胞の上昇した濃度を含む網膜領域である（ヒトの眼の一般的解剖学的図が、図１に示される）。黄斑変性は、斑の光感覚細胞が機能を失うようにするほとんど理解されていない群の疾患に与えられた、不明確な歴史的名称である。黄斑変性の結果は、重要な中心視力および詳細な視力の喪失である。黄斑変性に罹患した患者は、その視野の中心に空白の斑点を経験し、しばしば、小さい印刷物を読む能力を失う（出典：Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｓｅ、ＣＡ：ｗｗｗ．ｅｙｅｓｉｇｈｔ．ｏｒｇ）。
【０００４】
１２００万人を超えるアメリカ人が、なんらかの形態の黄斑変性を有する。５５歳と６４歳との間のアメリカ人の６人中１人が、黄斑変性に罹患しており、そしてその疾患の発症率は、年齢とともに増加する。黄斑変性に罹患した推定１２００万人の患者のうち毎年１２０万人が、深刻な中心視力の喪失に悩まされている。毎年２００，０００人の個体が、一方の眼または両方の眼の中心視力すべてを失う。
【０００５】
黄斑変性の正確な原因は不明であるが、斑の構造により、どのようにこの疾患が開始され得るかに関する手がかりが見出される。斑は、大量のエネルギーを消費する非常に活性な光受容体を含む。このエネルギーを生成するには、豊富な酸素および栄養素の供給が必要とされる。斑は、その供給脈管（脈絡膜としてもまた公知である）を通る最高速度の１つの血流を有する。この豊富な血管供給を妨げるいかなることも、斑の機能不全を引き起こし得る。酸素が枯渇した斑は、内皮細胞増殖および新生脈管形成をシグナル伝達するサイトカインを生成することによって応答する。
【０００６】
基本的な２つの型の黄斑変性（乾燥形態および湿潤形態）が存在する。黄斑変性の原因の約８５％〜９０％は、乾燥型である。この疾患の乾燥形態において、網膜の悪化は、結晶腔として公知である斑の下の黄色沈着物の形成に関連する。結晶腔の沈着物は、斑を含む網膜細胞の厚さの減少と相関する。中心視力の喪失量は、結晶腔に誘導される網膜肥厚の位置および重篤度と直接関連する。黄斑変性の乾燥形態は、この疾患の湿潤形態よりもゆっくり進行する傾向がある。乾燥形態の黄斑変性についての有効な処置は存在しない。乾燥形態の黄斑変性に罹患している少数の個体は、湿潤形態の黄斑変性へと進行する。図２は、正常な斑および乾燥形態の黄斑変性を示す。
【０００７】
湿潤形態の黄斑変性は、重篤な視力喪失をほぼ常にもたらす、迅速に進行する疾患である。湿潤型黄斑変性と関連する視力喪失は、網膜下新生脈管形成の結果である。網膜下血管の迅速な増殖は、その上にある網膜細胞層が曲がり、栄養素が豊富な脈絡膜から剥離するのを引き起こす。湿潤型黄斑変性の極端な症例において、増殖中に脈管が網膜に浸透し、そして硝子体液に浸潤する。湿潤形態の新生脈管形成についてのいくつかの処置が存在するが、いずれも満足するにはほど遠い。図３は、正常な網膜および湿潤型黄斑変性を示す。
【０００８】
黄斑変性についての現行の標準的処置は、レーザー光凝固である。レーザー光凝固を実施する眼科医は、蛍光血管造影法を用いて異常な脈管を位置決めし、そしてレーザー切除技術を用いてその脈管を選択的に焼く。レーザー手術の副作用は、異常な脈管のすぐ上に存在する網膜層の破壊である。レーザー光凝固で処置された患者は、処置の直後に測定可能な視力喪失を有し、これは、容認できない負の副作用である。概して、レーザー手術は、この疾患を遅くすることにほんの中程度にしか有効ではない、その場しのぎの処置として見なされる。
【０００９】
光力学的治療が、黄斑変性についての処置技術の現在の水準である。米国食品医薬品局は、湿潤型の加齢性黄斑変性を処置するための注射用ベルテポルフィン（Ｃｉｂａ Ｖｉｓｉｏｎ＆ＱＬＴにより開発されたＶｉｓｕｄｙｎｅＴＭ）を承認した。光力学的治療で処置されている患者は、光反応性化合物（ベルテポルフィン）を注射され、すぐに、非破壊性眼科レーザーで処置される。この手術を実施する眼科医は、異常な脈管を同定し、そしてレーザービームをその異常な脈管へと向ける。ベルテポルフィンは、レーザーにより活性化された場合に、活性化した分子の近傍にあるすべての細胞を有効に焦がす、一過性のエネルギーバーストを生じる（出典：ＨＨＳ Ｎｅｗｓ，米国保険社会福祉省、２０００年４月１３日）。
【００１０】
電離放射線は、増殖中の脈管を殺傷するために使用される（増殖中の細胞は、静止細胞よりも放射線感受性である）。電離放射線は、通常、眼の大部分に曝露するに十分な大きさのビームの状態で投与される。１９９３年に、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｅｌｆａｓｔ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｉｒｅｌａｎｄのグループが、湿潤型黄斑変性に罹患している少数の患者に対してＸ線を試したと報告した。その正の結果は、欧州の他の研究チームにより行われたＸ線を用いたいくつかの同様の研究によって支持されている。
【００１１】
別の消耗性眼疾患は、未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。ＲＯＰは、有意な割合の未熟児において生じる眼の疾患である。満期産（２８週〜４０週）の最後の１２週間は、胎児の眼の発生において特に活性な月である。網膜血液供給（脈絡膜）の出生前発生が、１６週目に視神経にて始まり、そして半径方向様式で網膜の前部領域の方へと出産（４０週）まで進行する。出産が未熟である場合、網膜脈環構造は、十分に発生するに十分な時間を有さず、網膜の前方縁が、酸素欠乏になる。網膜前部酸素付加の欠如が、ＲＯＰの潜在的な原因である（出典：Ｔｈｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｏｆ Ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＭＩ）。
【００１２】
未熟児において、網膜前部の有意な部分が、十分な血液供給欠乏である。酸素が欠乏した網膜前部は、新生脈管の増殖のためのシグナル伝達によって応答する。網膜前部と網膜後部との間の一帯における異常な新生脈管形成は、重篤な病理学的結果を伴う事象のカスケードを開始する。新生脈管が化学的シグナルに応答して成長するので、動静脈シャントが、脈管形成した網膜後部と脈管がない網膜前部との間の一帯において形成される。これらの脈管シャントは、徐々に拡大し、より厚くなり、そしてより上昇する。その新生脈管は、浸潤性線維芽細胞により達成され、この浸潤性線維芽細胞は、繊維性瘢痕組織を生成する。結局、網膜および硝子体ゲルに付着した瘢痕組織の環が、形成される。この瘢痕組織の環は、眼の内側の周囲に３６０°拡大し得る。この瘢痕組織が接触する場合、この瘢痕組織は、網膜を引っ張り、そして網膜剥離を生じる。十分な瘢痕組織が形成される場合、網膜は、完全に剥離され得る。未熟児は、ＲＯＰを発症する危険がある。なぜなら、未熟児は、子宮の保護環境の外に取り出されており、種々の脈管形成刺激（医薬、高レベルの酸素、ならびに光の変動および温度の変動を含む）に曝されているからである。これらの因子のうちのいくつかまたはすべては、ＲＯＰの発症に対して効果を有し得る。幸運なことに、ほとんどの未熟児は、ＲＯＰを発症せず、ＲＯＰに罹患するほとんどの乳児は、自然に改善する。ＲＯＰが発症する場合、ＲＯＰは、出生時の妊娠年齢に関わらず、受胎後３４週目と４０週目との間に通常生じる。
【００１３】
寒冷療法と呼ばれる技術が、ＲＯＰの処置のために有益な効果を有することが示されている。寒冷療法は、眼の外壁（強膜）上に氷点下のプローブを配置することを包含する。このプローブは、強膜と硝子体との間の網膜表面上に氷結晶化の一帯を生じる。寒冷療法の複数の適用が、脈管のない領域全体（これは、新生脈管の縁の前方である）を処置するために実施される。縁自体の処置は、回避される。なぜなら、この縁は、出血する傾向があり、凍結すると、硝子体の出血を引き起こすからである。
【００１４】
寒冷療法の作用機構は、完全には理解されていない。実用的な仮説は、寒冷療法が、おそらく、脈管のない網膜層前部に損傷を与えることである。この損傷は、残りの生細胞への酸素の拡散の促進を可能にする網膜の肥厚を生じる。さらに、寒冷処置された網膜は、より少数の生細胞を有し、従って、酸素の需要の減少を有する。減少した酸素需要は、脈管形成刺激を低下させ、新生脈管形成を停止させる。寒冷療法は、未処置の眼の４３％から処置した眼の２１％へと、網膜剥離の危険を減少させることが見出された。しかし、寒冷療法は、潜在的な合併症を有する；この手順は、しばしば、未熟児にとって危険があり得る全身麻酔下で実施される。
【００１５】
本明細書中で上記されるレーザー光凝固は、ＲＯＰの処置において類似の原理を使用する。このレーザー処置は、血液供給を未だ有さない網膜前部に適用される。この処置の目的は、異常な脈管が網膜剥離を生じるに十分な瘢痕組織を下に配置する前に、その異常な脈管を排除することである。さらに、脈管のない網膜前部は、レーザーにより縁が薄くなり、酸素需要が減少し、そして寒冷療法とそっくりに、脈管形成刺激が低下される。レーザー療法は、網膜に指向されるが眼の壁の厚さ全体には指向されないという点で、寒冷療法よりも優れている。レーザー療法は、より少数の組織にしか関わらず痛くないので、処置後の炎症が非常に低減される。寒冷療法と比較した場合、レーザー療法は、優れている。なぜなら、麻酔の必要性が減少するからである。
【００１６】
レーザー療法または寒冷療法が、ＲＯＰの進行を停止する際に不成功である場合、いくつかの外科処置が利用可能である。線維−脈管瘢痕組織からの小さな牽引に起因して、浅い網膜剥離が存在する場合、強膜折込みと呼ばれる処置が、有益であり得る。強膜折込みは、眼球赤道の周囲にシリコンバンドを配置する工程、およびそのシリコンバンドを締めて、眼の内側にわずかなへこみを生じる工程を包含する。このバンドは、硝子体ゲルの牽引を軽減し、繊維性瘢痕組織および網膜を引っ張る（ｐｕｌｌ ｏｎ）。これにより、網膜が眼の壁上に平らになり、正常な機能を回復することが可能になる。強膜折込みを有した乳児は、特に斑が剥離しなかった場合に、眼において良好な視力を維持し得る。この取り囲むバンドは、通常は、数ヶ月または数年後に除去される必要がある。なぜなら、眼は成長し続け、徐々に増加する眼球圧縮および誘導性近視を生じるからである。
【００１７】
後期段階ＲＯＰにおいて、網膜上の瘢痕組織に起因して完全に網膜が剥離して、強膜折込みは、牽引を軽減するに不十分である。これらの乳児のために、硝子体切除が、考慮され得る。硝子体切除は、眼の中にいくつかの小さな切開を作製する工程、および吸引デバイス／切断デバイスを使用して硝子体ゲルを除去する工程を包含する。硝子体が生理食塩水で置換され、眼の形態が維持される。眼は、硝子体ゲルを含まずに不明確にその形状および圧力を維持することができる。硝子体が除去された後、網膜上の瘢痕組織は、剥がされ得るかまたは切除され得、それにより、網膜が弛緩して眼の壁に対してよりかかるようにされる。網膜が手術後に再付着されるのには、数週間かかり得る。処置の間、網膜円孔および網膜中に涙が生じる場合、網膜は通常、再付着しない。眼の水晶体は、しばしば、瘢痕組織の完全な解剖が可能なように除去されなければならないが、水晶体を保存し得るいくつかの新規な技術が、試行されている。
【００１８】
しかし、ＲＯＰについての硝子体切除手術の成功率は、制限されている。公開された解剖学的成功率（これは、眼の壁に再付着した網膜を得ることを意味する）は、手術を受ける患者のうちの２５％〜５０％の範囲である。機能的成功率（これは、良く見える能力を意味する）は、有意に低い。「成功する」硝子体切除手術（解剖学的成功）を有する眼のうち、ほんの約１／４が、物体に手を伸ばして掴むために十分に、またはパターンを認識するために十分に、良く見ることができる。
【００１９】
別の消耗性眼疾患が、真性糖尿病に罹患する患者において生じる。約１４００万人のアメリカ人が、真性糖尿病を有する。多数の全身性合併症（例えば、腎不全、高血圧、および心血管疾患）を引き起こすことに加えて、糖尿病は、労働年齢のアメリカ人の間で失明の主要な原因のうちの１つである。実際、糖尿病を有する患者に対する失明リスクは、一般的人口の失明リスクより２５倍高い。糖尿病性の眼の問題を有する多くの患者は、視力を脅かす疾患の存在に関わらず、無症候性である。糖尿病性眼疾患が未処置のままにされると、この疾患は、深刻な視力喪失をもたらし得る。糖尿病に起因する視力減少は、いくつかの機構により引き起こされ得、個体のニーズに処置を調整する必要がある。（出典：Ｔｈｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｃａｒｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ」：ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｈｅａｌｔｈ／ｄｉｓｅａｓｅｓ．ｈｔｍ）。
【００２０】
多くの糖尿病患者は、その血糖が特に高いかまたは特に低い場合に、不鮮明な視覚に気付く。この不鮮明な視覚は、眼の水晶体の形状変化から生じ、通常は、その血糖が正常に戻った場合に逆転する。糖尿病は、患者の血糖レベルに影響するだけではなく、血管にも影響する、疾患である。糖尿病に関係する症状（血圧の上昇を含む）は、網膜に関係する毛細血管を含む微小循環系に対して損傷を引き起こす。毛細血管の損傷は、分離された網膜の領域への血流の減少を生じる。さらに、損傷した血管は、漏出する傾向があり、これにより、網膜内での膨張が生じる。
【００２１】
糖尿病性眼疾患の２つの主要なカテゴリーが存在する。第１のカテゴリーは、バックグラウンドの糖尿病性網膜症または非増殖性網膜症と呼ばれる。これは、本質的には、糖尿病性網膜症の最初期段階である。この段階は、小網膜血管に対する損傷により特徴付けられ、これにより、網膜中への流体（血液）の浸出が生じる。この段階の間のほとんどの視力喪失は、斑中へのこの流体蓄積に起因する。この流体蓄積は、黄斑水腫（ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ）と呼ばれる。この流体蓄積は、一時的視力減少または永続的視力減少を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の第２のカテゴリーは、増殖性糖尿病性網膜症と呼ばれる。増殖性網膜症は、網膜毛細血管床（脈絡膜）により維持される糖尿病誘導性損傷の最終結果である。脈絡膜に対する損傷は、網膜における酸素枯渇を引き起こす。網膜組織は、新生脈管形成を刺激する脈管形成サイトカインを生成することによって、その低酸素性環境に応答する。以前に記載されたように、網膜の新生脈管形成は、眼における出血、網膜瘢痕組織、網膜剥離を引き起こし、これらの症状のうちのいずれか１つは、視力減少または失明を引き起こし得る。糖尿病患者はまた、しばしば、血管新生緑内障にも罹患し、このことは、ルベオーシス（角度の閉鎖を引き起こす虹彩上で成長する血管）を示す。
【００２２】
糖尿病性網膜症は、Ｉ型糖尿病患者（４０歳より前の糖尿病の発症）およびＩＩ型糖尿病患者（４０歳より後の発症）の両方において生じ得るが、糖尿病性網膜症は、Ｉ型患者においてより一般的でありかつより重篤である傾向にある。ＩＩ型糖尿病患者は、しばしば、その患者が多年糖尿病を有するまで、診断されないが、糖尿病が発見された時点でＩＩ型患者において糖尿病網膜症が存在し得る。
【００２３】
糖尿病性網膜症の処置は、複数の要因（網膜症の型および程度、関係する眼の要因（例えば、白内障または硝子体出血）、および患者の医療歴を含む）に依存する。処置の選択肢としては、ＲＯＰについて議論されたのと同じ選択肢（すなわち、レーザー光凝固、寒冷療法（凍結）、および硝子体切除手術）が挙げられる。糖尿病性網膜症に起因する時期は、ほんとんどの場合において予防可能である。
【００２４】
いかなる型の眼内癌性腫瘍も、ほとんど一般的ではない。しかし、眼の腫瘍は、ブドウ膜（眼）癌が一般的に他の身体領域への転移しそして他の身体領域から転移する点で、非常に深刻である。眼の最も一般的な主要な悪性腫瘍であるブドウ膜黒色腫は、１年あたり一般の集団において１００万人中７人において発症する（肺癌の発生率の１／１０未満である）。網膜芽細胞腫は、血友病とほぼ同じ程度の頻度で小児疾患として生じる。これらの２つの眼内腫瘍は、非常に異なり、解剖学的近さによってのみ関連する。眼性癌についての処置の選択は、その癌が眼のどこにあるか、どの程度遠くまでその癌が伝播しているか、ならびにその患者の全身の健康および年齢に依存する（出典：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ；ＯｎｃｏＬｉｎｋ：ｃａｎｃｅｒ．ｍｅｄ．ｕｐｅｎｎ．ｅｄｕ）。
【００２５】
網膜芽細胞腫は、若齢の小児において生じる一方または両方の眼の癌である。米国において、１年あたり約３５０件の新規に診断される症例が存在する。網膜芽細胞腫は、米国において生まれる１５，０００〜３０，０００人の生存乳児につき１人に発症する。網膜芽細胞腫は、すべての人種の小児ならびに少年および少女の両方に発症する。
【００２６】
網膜芽細胞腫は、網膜（眼にものを見えるようにする眼の光感受性層）に起源する。網膜芽細胞腫の処置は、各患者について個別化し、その小児の年齢、一方の眼もしくは両方の眼に関与していること、および癌が他の身体部分に伝播しているか否かに依存する。未処置のままにされると、その小児は死亡する。網膜芽細胞腫についての処置としては、摘出、外部ビーム照射、放射性プラーク、レーザー療法、寒冷療法、および化学的減少（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）が挙げられる。
【００２７】
摘出が、網膜芽細胞腫についての処置の最も一般的形態である。摘出の間に、眼が外科的に除去される。この除去は、癌を完全に除去することが唯一の方法であるので、必要である。眼全体を除去することなく眼内から癌を除去することは、不可能である。部分的摘出は、いくつかの他の眼性癌について可能であるが、それは危険があり、そして網膜芽細胞腫患者についての癌の伝播になお寄与し得る。
【００２８】
両方の眼が関与する場合、時々、より関与している方、すなわち「悪い方」の眼が、摘出され、一方、もう一方の眼は、視覚保存処置（例えば、下記に記載される、外部ビーム照射、プラーク療法、寒冷療法、レーザー処置、および化学的減少（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ））のうちの１つで処置され得る。
【００２９】
外部ビーム照射が、１９００年初期以来、眼および視力を保存するための方法として使用されている。網膜芽細胞腫は、放射線に感受性であり、しばしば、この処置は成功する。この照射処置は、３〜４週間の長さにわたって１週間につき５回、外来患者ベースで実施される。あつらえられた石膏型が、処置の間に頭が動くのを防ぐために作製され、時々、鎮静薬が、処置前に処方される。
【００３０】
腫瘍は、通常、外部ビーム照射処置後に、小さくなり（後退）そして瘢痕形成したように見えるが、めったに完全には消失しない。実際、腫瘍は、収縮するにつれてより明瞭にさえなり得る。なぜなら、ピンクがかった灰色の腫瘍塊が、白色カルシウムで置換される。処置直後に、皮膚が火傷し得るか、小さい髪片が、ビームの出口位置から頭後ろで失われ得る。外部ビーム照射後、長期間の効果としては、白内障、放射線網膜症（失明および網膜浸出液）、視力の減損、および一時的骨抑制（正常には増殖しない頭部側面の骨）が挙げられる。照射はまた、身体のどの細胞にも異常な遺伝子を保有する小児について、眼の外側に他の腫瘍を発症する小児リスクを増加し得る。
【００３１】
放射性プラークは、網膜芽細胞腫に照射するために１９３０年代に開発された、放射性物質のディスクである。今日、同位体ヨウ素１２５が使用され、このプラークは、各小児にあつらえ作製される。小児は、この手術のために通常入院しなければならず、２回の別個の手術（１回は、プラークを挿入するため、１回はプラークを除去するため）を、３〜７日間にわたって受けなければならない。
【００３２】
レーザー療法は、時に、光凝固またはレーザー高熱（これらは、２つの異なる技術である）と呼ばれ、網膜芽細胞腫に対する非侵襲性処置である。レーザーは、比較的小さい網膜芽細胞腫を効果的に破壊する。この型の処置は、通常は、眼の中の癌上とその周囲とに、瞳孔と通して光を集束することによって実施される。近年、レーザーの新規な送達システム（ジオペキシ（ｄｉｏｐｅｘｙ）プローブと呼ばれる）は、瞳孔を通してではなく眼の壁を通して光を投げかけることによって、その癌の処置を可能にしている。レーザー処置は、局所麻酔または全身麻酔下で行われ、通常は、その処置に関連するいかなる手術後の疼痛も有さず、そしていかなる手術後の投薬も必要としない。レーザーは、単独でか、または外部ビーム照射、プラーク、または寒冷療法に加えて、使用され得る。
【００３３】
寒冷療法はまた、網膜芽細胞腫に罹患している患者に対して行われ得る。寒冷療法は、局所麻酔または全身麻酔のもとで行われ、より小さな網膜芽細胞腫の腫瘍を凍結する。ペン様プローブを、腫瘍に隣接した強膜に配置し、その腫瘍を凍結する。寒冷療法は、通常、ガン細胞の全てを実質的に破壊するためには、多数回反復されなければならない。寒冷療法の有害な副作用は、瞼および眼が１〜５日間腫脹することである；ときおり、この腫脹は、非常に甚だしいので、小児は、数日間彼らの瞼を開ける（眼を開ける）ことができない。点眼剤または軟膏は、しばしば、腫脹を低減するために与えられる。
【００３４】
全身化学療法（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）は、化学療法を使用した網膜芽細胞腫の処置である。化学療法は、一般的に、小児に対して静脈内に投与され、血流を通って、成功する場合は、数週間以内に腫瘍の縮小を生じる。１以上の薬物を使用する化学療法は、１回、２回またはそれ以上行われ得る。薬物および施設に依存して、小児は、このプロセスの間に入院しても、入院しなくてもよい。化学療法の後、小児は再検査され、残りの腫瘍は、寒冷療法、レーザー、または放射性プラークを使用して処置される。小児は、３週間毎に、麻酔下で、眼を再試験しながら、２０回ほど処置することが必要であり得る。
【００３５】
まれではあるが、網膜芽細胞腫が即座に処置されれば、網膜芽細胞腫は、眼の外側から脳、中枢神経系（脳および脊髄）、および骨へと拡がり得る（転移し得る）。この場合、化学療法が、小児腫瘍遺伝子学者により定められており、転移性疾患の最初の診断の後に数ヶ月から数年にわたって、末梢血管を通ってまたは脳へと投与される。
【００３６】
網膜芽細胞腫および黒色腫以外の腫瘍は、眼で発生し、これらはしばしば、他の場所での疾患の前兆である。脈絡膜転移は、眼内悪性疾患を最も頻繁に生じやすく、全身性悪性疾患の最初の徴候であり得る。脈絡膜転移は、無着色性黒色腫（ｎｏｎｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ）に似ている。それらは、蛍光眼底血管造影像上で黒色腫に類似の外観を有し、超音波記録上でわずかなエコーグラム差異を示す。しかし、脈絡膜転移は、より急速に増殖し、大きな滲出性網膜剥離を引き起こす可能性がより高い。
【００３７】
概して、生存についての予後は、一旦転移性疾患が眼において見いだされると乏しい。しかし、全身性癌患者における生存が改善されるにつれて、よい生活の質を維持する際に、眼の転移の首尾よい処置がますます重要な役割を果たしている。
【００３８】
原発性眼球リンパ腫症は、最も興味をそそられる眼内腫瘍のうちの１つである。その原発性中枢神経型リンパ腫およびリンパ性組織が存在しない場合の腫瘍が網膜下色素上皮腔において増殖する傾向との関係は、この非常に攻撃的なリンパ腫の実際の２つ魅力的な局面である。原発性眼球リンパ腫の臨床的発現は、良性のブドウ膜の実体を模倣することが有名であり、従って、数ヶ月間、正確な診断が遅れる。眼球リンパ腫における新生物細胞は、網膜色素上皮とブルーフ膜との間の空間に拘束され続け得る。リンパ腫のこれらの凝集と関連する硝子体（ｖｉｔｒｉｔｉｓ）は、しばしば、反応性リンパ球からなり、硝子体生検は、非診断的であり得る。これは、実際に、外科医が腫瘍細胞をとっていなかった場合に、眼内細胞学を解明することが困難であるという誤解をもたらした。眼内生検からのポジティブな収穫は、いくつかの場合において、外科医が網膜下色素上皮腔における網膜切開術を介した吸入生検を行う場合に増大され得る。原発性眼球リンパ腫は、白血球共通抗原についてポジティブに染まる、大きく、細胞学的に異型の細胞からなる。吸引は、通常、多量の壊死による細片と関連づけられる。免疫表現型分析は、過去、問題をはらんでいた。いくつかの初期の研究では、いずれの表面マーカーも見いだすことができず、眼球リンパ腫がホルモン非産生細胞腫瘍（ｎｕｌｌｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ）であったと結論づけた。ヒアルロニダーゼを用いた細胞の前処置は、免疫病理学研究の収穫を増大させた。
【００３９】
眼の癌の別の形態は、脈絡膜黒色腫である。脈絡膜黒色腫は、眼の原発性癌である。眼の脈絡膜の色素細胞から発生し、どこか他の場所で発生して眼へと拡がった癌ではない。いくつかの脈絡膜黒色腫は、他の癌より生命を脅かすものであるが、ほとんど全てが悪性であるかのように処置されるべきである。いくつかの脈絡膜黒色腫は、不活発のままであるようであり、増殖しない。大部分はゆっくりと時間がたつにつれて拡がり、失明をもたらす。これらの腫瘍は、身体の他の部分に拡がり得、最終的には死をもたらす。眼の黒色腫が肝臓に転移した多くの症例が、報告された（情報源：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ）。
【００４０】
長年にわたり、脈絡膜黒色腫に有用な処置は、摘出であった。腫瘍が身体の他の部分に拡がっていない場合、眼の除去は、一般に、患者から腫瘍を完全に除去する。第二次世界大戦以来、脈絡膜黒色腫については、放射線処置が使用されてきた。過去２０年間、この処置方法は、改良されてきている。適切な線量率および適切な物理的形態での照射は、眼の除去を必要とするに十分な正常な組織へ損傷を生じることなく、増殖している腫瘍細胞を排除することが意図される。細胞が死ぬにつれて、腫瘍は縮小するが、通常、完全には消失しない。中間の脈絡膜黒色腫を照射するために最も見込みのある広く利用可能な方法は、一方の側面に接着した放射活性のペレットで小さなプラークを構成する工程を包含する。しかし、照射は、通常、嘔吐および脱毛のような有害な副作用が伴う。
【００４１】
サイクロトロンからの高エネルギー粒子（ヘリウムイオンまたは陽子ビームの照射）をまた使用して、腫瘍を照射し得る。まず、小さな金属クリップを強膜に縫いつけるための手術が行われ、その結果、この粒子ビームが正確に照準され得る。連続する数日間にわたって処置が施される。これらの処置に必要な器具は、世界中でいくつかの医療センターでのみ利用可能である。良好な結果が幾人かの患者で報告されたが、この方法で処置された多くの患者が、数年のみ追従した。よって、より一般的に使用されるプラークと比較した放射線治療のこれらの形態の長期での結果は、知られていない。
【００４２】
数年にわたって、他の処置が、少数の患者について使用された。白色光またはレーザー光を使用する光凝固術が、小さな腫瘍を焼くために使用され、そして寒冷療法が、腫瘍を凍結することによってこれらを殺傷するために使用された。これらの技術は、非常に小さな腫瘍についてのみ作用すると考えられている。幾人かの医者は、レーザーまたは寒冷療法を照射と組み合わせたが、このような処置は実験的であった。幾人かの患者は、彼らの眼から腫瘍を取り除くために、眼壁（ｅｙｅ ｗａｌｌ）切除または関連手順を受けた。これらの処置法は、ほとんどの医者によって実験的であると考えられており、そして少数の腫瘍についてのみ使用された。腫瘍を破壊するか、視覚を保護するか、または正常な寿命を確保することを保障し得る処置は、利用可能ではない。
【００４３】
別の眼の癌は、眼内黒色腫であり、この癌細胞中に稀な癌が、ブドウ膜と呼ばれる眼の一部において見出される。ブドウ膜は、色素を含むメラノサイトと呼ばれる細胞を含む。これらの細胞が癌性になる場合、この癌は、黒色腫と呼ばれる。ブドウ膜は、虹彩（眼の着色部分）、毛様体（眼中の筋肉）、および脈絡膜（眼の背後の組織層）を含む。虹彩は、開閉して眼に入る光量を変化させる。毛様体は、眼の内側のレンズの形状を変化させ、その結果、焦点が合う。脈絡膜層は、網膜の次にあり、映像を作製する眼の一部である。虹彩に始まる黒色腫がある場合、これは、虹彩上に黒点様に見え得る。黒色腫が毛様体または脈絡膜にある場合、ぼやけた視野を有し得るか、または症状を有し得ない。そしてこの癌は、気づかれる前に増殖し得る（出典：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｏｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ）。
【００４４】
眼内黒色腫からの回復（予後）の変化は、癌が眼内にある場合そしてこの癌が広がっている場合、癌のサイズおよび癌の細胞型に依存する。眼内黒色腫を有する患者全てに対する、処置が存在する。３つの処置型（すなわち、手術（癌の除去）、放射線療法（癌細胞を「殺傷」するための高用量ｘ線または他の高エネルギー線）、および光凝固術（腫瘍を養う血管を破壊する）が、一般に投与される。
【００４５】
手術は、眼内黒色種の最も一般的な処置である。医者は、以下の操作のうち１つを使用して癌を除去し得る：
−虹彩切除−虹彩の一部のみの除去；
−虹彩トラベクレクトミー−虹彩の一部および角膜（眼の前を被う清浄層）周辺の支持組織の除去；
−虹彩毛様体切除−虹彩および毛様体の一部の除去；
−脈絡膜切除−脈絡膜の一部の除去；
−摘出−眼全体の除去。
【００４６】
放射線療法をまた使用して、癌細胞を殺傷しそして腫瘍を縮小させるために、癌細胞が存在する領域にｘ線または他の高エネルギー線を適用し得る。放射線は、単独でかまたは手術と組み合わせて使用され得る。光凝固術処置もまた使用され得、ここで、光の極小ビーム（通常レーザー由来）が眼に適用され、血管を破壊し得そして腫瘍を殺傷し得る。
【００４７】
眼の疾患の処置について提唱される治療法の圧倒的大多数（特に、網膜下新生血管形成および眼の腫瘍）は、最初手術または放射線処置を利用する。患者が投薬単独または手術後の投薬で処置される場合、薬物投与は、一般に注射または経口のいずれかでの全身性である。前記したように、眼の疾患に対する手術または放射線処置は、両方とも痛みを伴い、しばしば長い回復期を必要とし、そして有害な副作用が続き得る。さらに、薬物の経口摂取または眼以外の部位での注射を介する全身性投与が、効果的な眼内濃度を達成するために、しばしば受容し得ない高レベルの薬物の投与を必要とする効果的ではない量でしばしば提供される。よって、癌疾患（例えば、角膜および網膜の新生血管形成）の処置に首尾よい非全身性治療の必要性が多く存在する。さらに、有害な副作用なく薬物および医薬を眼に送達することは、主要な難題を残す。本発明は、最小限の副作用を有する癌疾患の処置のためのチューブリン結合薬剤の効果的な非全身性投与を提供する治療を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００４８】
（発明の要旨）
本発明は、眼組織での悪性または非悪性の血管増殖性障害の処置のための、脈管標的化因子（「ＶＴＡ」）（特に、チューブリン結合薬剤）の投与を指向する。
【００４９】
眼組織の新生血管形成は、血管増殖によって特徴付けられる病原性状態であり、種々の程度の視力機能不全を有する種々の眼の疾患において生じる。悪性でない血管増殖性障害（例えば、湿性の黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症または早熟網膜症に関連する新生血管形成の薬理学的コントロールに対するＶＴＡの投与は、ほとんどの治療オプションが利用可能ではない患者に対して潜在的に有利である。別の実施形態において、本発明は、悪性の血管増殖性障害（例えば、眼の腫瘍）に関連する新生血管形成の薬理学的コントロールに対するＶＴＡの投与を提供する。
【００５０】
血液網膜関門（ＢＲＢ）は、網膜の毛細血管と網膜組織との間の特定の物質についての輸送バリアを形成する、堅固に連結した、特殊化した非有窓性の内皮細胞から構成される。固体腫瘍に関連する血管に酷似する、網膜症に関連する角膜および網膜の新生血管は、異常である。チューブリン結合薬剤、チューブリン重合のインヒビターおよび脈管標的化因子は、異常な血管を攻撃し得る。なぜなら、これらの血管は、血管網膜関門と構造的類似性を共有しないからである。チューブリン結合薬剤は、血管が腫瘍−脈管構造と構造的類似性を共有する疾患に酷似する疾患の進行を停止し得る。チューブリン結合薬剤の眼への局所（非全身性）送達は、硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）注射、トノン下注射、点眼イオン導入法、ならびにインプラントおよび／または挿入物を使用して達成され得る。全身性投与は、疾患器官もしくは疾患組織または罹患器官もしくは罹患組織（この場合、これらは眼である）から測定可能な距離だけ隔てた部位でチューブリン結合薬剤を血流へ投与することによって達成され得る。全身性投与の好ましい様式は、非経口投与または経口投与が挙げられる。
【００５１】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の添付の説明に記載される。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価な方法および材料のいずれかが、本発明の実施または試験に使用され得、好ましい方法および材料は、ここで記載される。本発明の他の特徴、目的および利点は、この記載から逸脱する。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形はまた、その文脈が他で明らかに示されないかぎり、複数形を含む。他で規定されない限り、本明細書中で使用される技術用語および科学用語の全ては、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書中に列挙される特許および刊行物の全てが、本明細書中に参考として援用される。
【００５２】
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
眼の疾患を処置するための方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を含有する投薬を調製する工程；
ｂ）該薬学的に有効な投薬量を、該処置を必要とする被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目９）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記被験体が、哺乳動物である、項目１に記載の方法。
（項目１４）
眼の疾患を処置するための薬学的医薬であって、眼の新生血管形成を減少させるために治療的に有効な量のチューブリン結合薬剤を、該処置を必要とする被験体への投与のために薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤またはアジュバントと組み合わせて含有する、薬学的医薬。
（項目１５）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１６）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１７）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管新生を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１８）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１９）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２０）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２１）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２２）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目２０に記載の薬学的医薬。
（項目２３）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２４）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２５）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目２３に記載の薬学的医薬。
（項目２６）
前記被験体が、哺乳動物である、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２７）
被験体において眼の新生血管形成を処置または予防する方法であって、該方法は、該被験体に、薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を投与する工程を包含する、方法。
（項目２８）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記眼の新生血管形成が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目２７に記載の方法。
（項目３１）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３２）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３３）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３５）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記被験体が、哺乳動物である、項目３０に記載の方法。
（項目３８）
眼の腫瘍を処置または予防する方法であって、該方法は、薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を、該処置または予防を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目３９）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記眼の腫瘍が、網膜芽細胞腫、原発性眼リンパ腫、脈絡膜黒色腫、および眼内黒色腫を含み得る、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４３）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４４）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４６）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４７）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記被験体が、哺乳動物である、項目３８に記載の方法。
（項目４９）
眼の疾患を罹患する被験体に投与するための、治療有効量のチューブリン結合薬剤を含有する、薬学的組成物。
（項目５０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５１）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５２）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍を含み得る、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５３）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目４９に記載の薬学的医薬。
（項目５４）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目４９に記載の薬学的医薬。
（項目５５）
前記治療有効量のチューブリン結合薬剤が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５６）
前記組成物が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５７）
非全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目５５に記載の薬学的組成物。
（項目５８）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５９）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、非経口投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目６０）
全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目５８に記載の薬学的組成物。
（項目６１）
前記被験体が、哺乳動物である、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目６２）
治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグ、および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含有する、薬学的投薬形態であって、該薬学的投薬形態は、該投薬形態を被験体に投与することによって、該被験体における眼の疾患を処置するためのものである、薬学的投薬形態。
（項目６３）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６４）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６５）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６６）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６７）
前記組成物が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６８）
非全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目６６に記載の薬学的投薬形態。
（項目６９）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目７０）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、非経口投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目７１）
全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目６９に記載の薬学的投薬形態。
（項目７２）
前記被験体が、哺乳動物である、項目６４に記載の薬学的投薬形態。
（項目７３）
眼の疾患を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とする被験体の眼に、該眼において、眼房水組織の約１ｎＭ〜約１００ｍＭの間の範囲の、チューブリン結合薬剤の濃度を達成するために十分な投薬量で、チューブリン結合薬剤を投与することによる、方法。
（項目７４）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７６）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７７）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目７３に記載の方法。
（項目７８）
前記チューブリン結合薬剤が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に投与される、項目７３に記載の方法。
（項目７９）
眼の疾患を罹患する被験体の目に局所投与するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、該投与を必要とする被験体に投与するための、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントと組み合わせて、チューブリン結合薬剤を含有する、薬学的組成物。
（項目８０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８１）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８２）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８３）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８４）
前記組成物が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８５）
眼の疾患を罹患する被験体の眼に局所投与するための薬学的組成物であって、該組成物は、懸濁液、エマルジョン、または溶液中に、以下：
（ａ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量の、ＣＡ４Ｐ；
（ｂ）約５ｍｇ／ｍｌのカルボキシメチルセルロース；および
（ｃ）約９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、
を含有する、薬学的組成物。
（項目８６）
前記組成物が、約６．６〜８．６の範囲の最終ｐＨ、約２９１〜４９２ｍ浸透圧モル／ｋｇ Ｈ２Ｏの範囲の浸透圧、および約５０〜６６ｍＰａ・ｓの範囲の粘度を有する、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８７）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８８）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８９）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目９０）
前記組成物が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目９１）
眼の疾患および眼の腫瘍を処置または予防するための薬学的組成物であって、該組成物は、該処置または予防を必要とする被験体への投与のための、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントと組み合わせて、治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、薬学的組成物。
（項目９２）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９３）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量で、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９４）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９５）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量で、前記被験体に全身投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
本発明は、添付の図面を参照してより理解される。
【図１】図１は、哺乳動物の眼の正面および横からの解剖図である
【図２Ａ】図２Ａは、正常な黄斑を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、乾燥型の黄斑変性を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、湿性の黄斑変性を示す。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、ビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ投与２８日後での血管増殖阻害を示す角膜部分の拡大写真である。
【図４】図４Ａおよび図４Ｂは、ビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ全身性投与２８日後での角膜に対する変化（血管増殖の阻害）の顕微鏡組織学を示す。
【図５】図５Ａは、網膜芽細胞腫の動物モデルにおける眼の腫瘍の新生血管形成に対する単回用量のＣＡ４Ｐの効果を示す。図５Ｂは、反復用量のＣＡ４Ｐに続く網膜芽細胞腫の動物モデルにおける腫瘍退行の程度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
（発明の詳細な説明）
ヒトの眼は、構造的に独特ないくつかの特性を有する：ヒトの眼は環境に曝され、ひどく衰弱し、脈絡膜において高速の血流を有し、さらに前房および硝子体液は、完全に無血管でありかつ循環系から分離されている。眼の珍しい構造は、眼の状態、疾患、腫瘍および障害の処置のための、１つ以上の非全身性投与法によるチューブリン結合薬剤の送達について十分な機会を提供する。眼の単純化した解剖図を、図１に示す。
【００５５】
以前に記載したように、眼組織の新生血管形成は、種々の癌疾患において生じかつ種々の程度の視力機能不全に関連する病原性状態である。新生血管形成の病理学的コントロールは、湿性の黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症または早熟網膜症のような疾患を罹患する患者に潜在的に役立つ。
【００５６】
チューブリン結合薬剤は、有糸分裂中に細胞中のチューブリン結合補因子または補因子−チューブリン複合体に結合することによってチューブリンアセンブリを阻害し、そして分裂を阻止し、よって、細胞の増殖を阻止する。チューブリン結合薬剤は、チューブリン重合を阻害する広範なクラスの化合物を含み、これは、一般に、癌化学療法および他の非癌適用（例えば、眼の疾患）に有用な腫瘍選択的脈管標的化因子として機能する。
【００５７】
上記したように、眼の疾患を処置するための薬物の全身性投与の不利益の１つは、全身性投与が一般に効果的なレベルの薬物を眼に特異的に提供しないことである。全身性に投与された薬物は、眼に到達する前でさえ身体内で代謝され得るので、効果的な眼内濃度を達成するために、高レベルの薬物が、投与される必要性があり得る。眼の疾患を罹患する患者の眼への直接的な薬物の非全身性投与または局所投与は、投与されるべき薬物の効果的な濃度を可能にし、そして非常にその患者のためになる。
【００５８】
本発明に従うチューブリン結合薬剤の非全身性投与によって処置可能な眼の徴候としては、角膜、網膜または脈絡膜の新生血管形成によって特徴付けられる悪性でない血管増殖性疾患、ならびに悪性の血管増殖性疾患（例えば、眼の腫瘍および癌）が挙げられる。角膜の新生血管形成は、以下において生じる：トラコーマ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ウイルス介在性角膜炎、微生物性角結膜炎、角膜移植および火傷。これは、感染（トラコーマ、ヘルペス、リーシュマニア症、オンコセルカ症（ｏｎｃｈｏｃｅｒｏｉａｓｉｓ）、移植、火傷（熱、アルカリ）、外傷、栄養不全およびコンタクトレンズ誘導性損傷。網膜および／または角膜の新生血管形成は、黄斑変性、糖尿病網膜症および早熟網膜症において生じる。前房の新生血管形成は、緑内障において生じる。
【００５９】
本発明によって企図されるチューブリン結合薬剤の非全身性投与方法としては、以下が挙げられる：硝子体内（注射）、結膜下投与、眼周囲投与、トノン下注射、イオン導入法送達、点眼、ゲルまたは軟膏での局所投与、および眼挿入物または移植物を介して。
【００６０】
チューブリン結合薬剤は、眼の硝子体液への直接的な注射を介して硝子体内投与され得る。チューブリン結合薬剤はまた、結膜下注射によって結膜の下に、および眼周囲での注射を介して眼の周囲に、投与され得る。
【００６１】
チューブリン結合薬剤はまた、平滑チップＣｏｎｎｏｒ Ｃａｎｎｕｌａを用いてトノン下腔（トノン嚢の下）への注射によって投与され得る。適切な技術を用いて、チューブリン結合薬剤の投薬量を投与する医療専門家は、眼球を穿刺することおよび視神経を損傷することを避け得る。送達後、注射部位は麻痺し、そしてこの空間は、薬物の貯留部として働く。トノン腔下への投与は、硝子体注射より侵襲性ではない。
【００６２】
本発明の別の実施形態において、チューブリン結合薬剤は、薬物の徐放性および長期に渡る治療的に効果的な薬物濃度の維持を提供するために、生体適合性、生分解性、および／または生体侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）である、チューブリン結合薬剤を含む眼の移植物または挿入物として処方され得る。哺乳動物の眼への移植または挿入のための、薬物を含有する生体侵食性の眼のインプラントは、例えば、米国特許第５，９０４，１４４号および同第５，７６６，２４２号に記載される（これらはその全体が本明細書中に参考として援用される）。眼のインプラントは、一般に、眼内の所望の位置に置かれるカプセルを含む。このカプセルは、眼への連続的な制御された送達のために、１つ以上の医薬を含んでも、生物学的に活性な分子を生成する細胞を含んでもよい。この実施形態において使用され得る薬物の量は、その薬物の効果的な投与量、および眼上または眼内の挿入物またはインプラントからの放出速度に依存して変化する。
【００６３】
強膜は露出されるので、イオン導入法プローブが、眼の表面上に適用され得る。イオン導入法は、細胞膜を横切るイオン性化合物の流れを駆動するために電流を使用する。この技術は、現在、イオン性薬物の経皮送達に利用される。イオン導入法が薬物輸送を駆動する２つの主な機構は、以下である：（ａ）イオン導入法（ここで、荷電したイオンは、同一の電荷の電極から反発される）、および（ｂ）電気浸透（電場が適用される場合、対イオンの選択的通路に応答して、荷電した「ポア」を介して生じる溶媒の対流）。
【００６４】
チューブリン結合薬剤はまた、滅菌点眼形態での眼への局所投与のために処方され得る。
【００６５】
本発明に従うと、好ましいチューブリン結合薬剤は、潜在的な脈管標的化因子であるコンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ４（「ＣＡ４」）である。ＣＡ４は、水に実質的に不溶性である。この特徴は、この化合物の薬学的調製物の処方を干渉する。よって、コンブレタスタチンＡ４のより好ましいプロドラッグ形態（「ＣＡ４Ｐ」）は、ＣＡ４の一般に不十分な可溶性を補正するために利用される。しかし、本発明は、この局面に限定されず、そしてＣＡ４の処方物は、ＣＡ４Ｐと同等かまたはそれよりよく働き得る。
【００６６】
コンブレタスタチンは、熱帯および亜熱帯の低木および樹木であるコンブレタスタチン科に由来し、これは、潜在的に有用な生物学的特性を有する新たな物質の、事実上未踏のリザーバを示す。らい病（Ｗａｔｔら、「Ｔｈｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ａｎｄ Ｐｏｉｓｏｎｏｕｓ Ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒｎ Ａｆｒｉｃａ」、Ｅ＆Ｓ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，１９６２，１９４頁を参照のこと）（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ ｓｐ．ｒｏｏｔ）および癌（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ ｌａｔｉｆｏｌｉｕｍ）の処置としての多様な用途に対する、アフリカおよびインドの原始的な医療実践において公知である２５種（全体の１０％）を有するコンブレタスタチン属を、例示する。
【００６７】
コンブレタスタチンは、抗腫瘍性物質であることが見出された。多くのコンブレタスタチンが、単離され、構造的に解明され、そして合成された。米国特許第５，４０９，９５３号および同第５，５９，７８６号は、Ａ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３およびＢ−４と称されるコンブレタスタチンの単離および合成を記載する。これらの特許の開示は、これらの全体が本明細書中に参考として援用される。関連のコンブレタスタチン（コンブレタスタチンＡ４と示される）は、Ｐｅｔｔｉｔに対する米国特許第４，９９６，２３７号に記載され、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【００６８】
ＣＡ４Ｐは、米国特許第５，５６１，１２２号（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載される天然のコンブレタスタチンＡ４サブタイプの誘導体である。好ましいＣＡ４Ｐ化合物は、ＣＡ４構造中の−ＯＨ基にリン酸二ナトリウムを置換し、そしてこの−ＯＨ基は、ＣＡ４Ｐをインビボで水に不溶性のＣＡ４に戻す代謝性変換を可能にする。しかし、本発明はホスフェート誘導体に限定されず、そして他のプロドラッグ部分が、ＣＡ４化合物中の−ＯＨ基を置換し得る。さらにＣＡ４Ｐの二ナトリウム塩以外のホスフェートプロドラッグ塩が、本発明の目的について実質的に同一の方法で行われることが予想される。他のホスフェートプロドラッグ塩の例は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ０２／２２６２６およびＷＯ９９／３５１５０（これらの開示は本明細書中に援用される）に記載される。
【００６９】
ＣＡ４Ｐは、新脈管形成によって形成される腫瘍特異的血管を選択的に標的化および破壊することによって固体腫瘍を減少させる新たなクラスの薬物（抗腫瘍性脈管標的化因子）において最初である。抗腫瘍脈管標的化および新脈管形成阻害は、癌処置の慣用的なアプローチとは根本的に異なる関連の癌治療である。癌細胞に対する直接的な攻撃を含む伝統的な方法とは対照的に、これらの新たな薬物は、腫瘍の寿命支持系、新脈管形成の結果として形成する新たに出現する血管のネットワーク、以前から存在する血管からの新たな血管の出芽を標的化する。前臨床的な研究は、これらの治療の使用が腫瘍を減少させ得そして最終的には消失させ得ることを示した。さらに、ＣＡ４Ｐがインビトロおよびインビボでの動物細胞モデルにおいて使用された場合、血管毒性に対する著しい特異性を示した（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．４２（４）：８９５−９０３，１９９８；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７（１０）：１８３９−１８３４ １９９７）。
【００７０】
新脈管形成インヒビターおよび抗腫瘍脈管標的化因子（例えば、コンブレタスタチン）は両方とも、腫瘍の血管を標的化するが、これらは、そのアプローチおよび最終結果において異なる。新脈管形成阻害について、その目的は、腫瘍を養いかつ維持する腫瘍特異的血管の形成を阻害することによって腫瘍増殖を阻止する。一方、抗腫瘍脈管標的化について、その目的は、既存の血管を選択的に攻撃および破壊すること、これらの血管の迅速かつ不可逆な活動停止を作製することによって腫瘍を除去することである。このような効果は、抗新脈管形成薬では観察されない。抗脈管標的化活性のみが、腫瘍増殖を支持する既存の血管を破壊し得る。コンブレタスタチンはまた、新たな腫瘍脈管構造を産生および裏打ちする内皮細胞の増殖を阻害する能力（抗脈管形成活性）を有する。よって、コンブレタスタチンが抗腫瘍脈管標的化因子および抗脈管形成薬の両方として振舞い得ると、考えられている。前臨床的な研究において、両方の治療薬が、罹患していない正常組織に関連する血管を残すことが示されている。本発明は、ＣＡ４Ｐ投与の単独および／または眼の疾患の処置に対する医薬分野の現在の状態との組合せ投与を企図する。
【００７１】
新脈管形成によって形成される脈管構造はまた、眼の疾患（例えば、黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症および早熟網膜症）を含む癌以外の疾患において観察された。実験的な眼モデルにおいてこのような脈管構造を低減させる予備的研究が、Ｄｏｎａｌｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｐｈ．Ｄ．，Ｄ．Ｓｃ．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｏｒｉｄａ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙの研究室から実施され、彼は、ＣＡ４Ｐが実験的な動物モデルの眼において予め形成された血管の退行速度を加速することを示した。図３Ａ、図３Ｂ、図４Ａおよび図４Ｂは、この実験において研究されたウサギの眼において予め形成された血管の退行を示す。
【００７２】
ＣＡ４およびＣＡ４Ｐは、抗腫瘍脈管標的化因子としての使用および新脈管形成のインヒビターとしての使用を含む、種々の疾患および徴候の処置のための、現在行われている臨床試験である。さらに、ＣＡ４Ｐは、網膜下の新生血管形成のような眼の疾患を処置する能力を示した。
【００７３】
本発明はまた、以下に記載されるようなコンブレタスタチンの合成アナログの使用を企図する：Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１１（２００１）８７１−８７４、３０７３−３０７６、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００２），４５：１６９７−１７１１、ＷＯ０２／５０００７、ＷＯ０１／１２５７９、ＷＯ００／３５８６５、ＷＯ００／４８５９０、ＷＯ０１／１２５７９、米国特許第５，５２５，６３２号、同第５，６７４，９０６号および同第５，７３１，３５３号。
【００７４】
ＶＴＡとして投与され得る他のチューブリン結合薬剤としては、以下の薬剤およびそれらのプロドラッグが挙げられる：２，３−二置換ベンゾ［ｂ］チオフェン（米国特許第５，８８６，０２５号；同第６，１６２，９３０号、および同第６，３５０，７７７号）、２，３−二置換ベンゾ［ｂ］フラン（ＷＯ９８／３９３２３）、２，３−二置換インドール（ＷＯ０１／１９７９４）、二置換ジヒドロナフタレン（ＷＯ０１／６８６５４）またはコルヒチンアナログ（ＷＯ９９／０２１６６）。さらに、血管標的化因子のさらなる非細胞傷害性プロドラッグ（これは、脈管増殖の部位において増強されたレベルで選択的に誘導される内皮の酵素の作用によって実質的に細胞傷害性薬物に変換される）は、ＷＯ００／４８６０６に開示される。
【００７５】
本発明に従って投与され得るさらなる既知のチューブリン結合薬剤としては、以下が挙げられる：タキサン、ビンブラスチン（ビンカアルカロイド）、コルヒチン（コルヒチノイド）、ドラスタチン、ポドフィロトキシン、ステガナシン（ｓｔｅｇａｎａｃｉｎ）、アンフェチニル（ａｍｐｔｅｔｈｉｎｉｌｅ）、フラボノイド、リゾキシン、キュラシン（ｃｕｒａｃｉｎ）Ａ、エポチロン（ｅｐｈｏｔｈｉｌｏｎｅ）Ａ、エポチロンＢ、ウェルウィスタチン（ｗｅｌｗｉｓｔａｔｉｎ）、フェンスタチン（ｐｈｅｎｓｔａｔｉｎ）、２−ストリキナゾリン（ｓｔｒｙｌｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ）−４（３Ｈ）−オン、スチルベン、２−アリール−１、８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン、および５，６−ジヒドロインドール（ｉｎｄｏｌｏ）（２，１−ａ）イソキノリン。
【００７６】
チューブリン結合薬剤をその必要のある被験体の眼へ投与および送達することについて、ヒトの眼がいくつかの構造的に独特な特性を有することを考慮することは重要である：ヒトの眼は環境に曝され、ヒトの眼はひどく衰弱し、ヒトの眼は脈絡膜において高速の血流を有し、さらに前房および硝子体液は、完全に無血管でありかつ循環系から分離されている。眼の珍しい構造は、代替の薬物送達法について十分な機会を提供する。この点において、投与の４つの非全身性様式が、本発明によって企図される：硝子体内投与（注射）、トノン下注射、イオン導入法送達、インプラント／挿入物および点眼送達。
【００７７】
眼の炎症および体内分布の研究、ならびにＣＡ４Ｐ投与後の角膜、脈絡膜または網膜の新生血管形成の動物モデルにおける血管増殖の阻害の研究は、以下の実施例の節に記載される。
【００７８】
従って、血管新生網膜症および眼の腫瘍は、種々の理由のためにそれ自体ＣＡ４Ｐ治療および他のチューブリン結合薬剤についての生存可能な標的である。すなわち：
・チューブリン結合薬剤は、網膜症に関連する異常な新生血管を攻撃し得る。なぜなら、これらの血管は、ＢＲＢと構造的類似性を共有しないからである。チューブリン結合薬剤は、血管が固体腫瘍構造と構造的類似性を共有する疾患に酷似する疾患の進行を停止し得る。さらに、チューブリン結合薬剤は、種々の前臨床的な研究において観察されるような新生血管の退行を生じ得る。
・網膜下新生血管形成について１００％効果的な処置が存在しないので、チューブリン結合薬剤は、当該分野の処置の現在の状態と組み合わせて使用される場合に、効果的な薬物であり得る。
・網膜症について現在最も改善された処置は、痛みを伴い得かつ長期の回復期を必要とし得る外科的介入を含む。チューブリン結合薬剤の非全身性投与または全身性投与は、処置の非手術形態である。
・全身的にかまたは非全身的に送達される場合、ＣＡ４Ｐは、角膜、網膜または脈絡膜の新脈管形成の動物モデルにおいて、および眼の腫瘍を有する動物モデルにおいて、脈管標的化因子としての裏付けを示す。
【００７９】
記載されるように、ＣＡ４Ｐならびに他の脈管標的化因子およびチューブリン結合薬剤は、角膜、網膜または脈絡膜の新脈管形成ならびに他の疾患および腫瘍のモデルにおいて、全身的に送達される場合の裏づけを示す。全身性投与の好ましい様式としては、非経口投与および経口投与が挙げられる。非経口投与は、１つ以上の皮膚層または筋膜の下またはこれらを介する注射による薬物の投与経路である。規定による非経口投与経路としては、経口−胃腸管（腸管）以外の任意の経路が挙げられる。非経口投与としては、静脈内経路、筋肉内経路および皮下経路が挙げられる。
【００８０】
本発明の薬学的組成物は、その意図される投与経路に適合可能であるように処方される。点眼局所投与のための薬学的組成物としては、点眼液、点眼ゲル、スプレー、軟膏、灌流および挿入物が挙げられる。チューブリン結合薬剤の局所的送達処方物は、所望の治療効果を達成するために十分長期間安定のままであるべきである。さらに、この因子は、眼の表面構造を透過しかつ疾患の部位において有意な量で蓄積しなければならない。さらに、局所的送達因子は、過剰量の局所毒性を引き起こすべきではない。
【００８１】
点眼剤の形態にある眼用溶液（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、一般に、水性媒体からなる。種々の極性の程度を有する広範な薬物に適応させるために、緩衝液、有機キャリア、無機キャリア、乳化剤、湿潤剤などが添加され得る。眼用の局所的処方物のための薬学的に受容可能な緩衝液としては、とりわけ、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩衝液、グルクロン酸緩衝液（ｇｌｕｃｏｒｏｎａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ）などが挙げられる。薬物キャリアとしては、水、低級アルカノールと水の混合物、植物油、ポリアルキレングリコール、石油ベースのゼリー、エチルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびミリスチン酸イソプロピル（ｉｓｏｐｒｏｐｌｙｌ ｍｙｒｉｓｔｒａｔｅ）が挙げられ得る。眼用スプレーは、一般的に、点眼剤と同じ結果を生じ、類似の様式にて処方され得る。いくつかの眼用薬物は、眼障壁を横切る透過性が乏しく、点眼剤としてもスプレーとしても投与できない。従って、軟膏が使用されて、接触時間を延長させ得、薬物吸収量を増大させ得る。眼の薬物溶液を用いた連続的かつ一定の灌流は、結膜嚢中にポリエチレンチュービングを入れることにより達成され得る。灌流液の流速は、眼の連続的灌注を生じるように、ミニポンプシステムを介して調節可能である。挿入物は、概して、上側結膜円蓋に配置されるか、またはあまり頻繁ではないが、切開された角膜（ｏｐｅｎ ｃｏｒｎｅａ）に取り付けるよりむしろ、下側結膜嚢に配置されることを除いて、角膜上に置かれるソフトコンタクトレンズに類似である。挿入物は、概して、涙中に溶解するか、または薬物を放出すると同時に崩壊する生物学的に可溶性の材料から作製される。
【００８２】
１つの実施形態において、活性化合物は、眼に移植されるインプラントまたは挿入物上に被覆される。本発明によって企図されるこのようなインプラントの１つの例は、Ｏｃｕｌｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ製のインプラントである。このＯｃｕｌｅｘインプラントは、ミクロカプセル化された薬物治療剤が眼内部に移植され得る生体分解性ミクロサイズポリマーシステムから構成される、生体分解性のＢＤＤＴＭ薬物送達デバイスである。このインプラントは、数日から数ヶ月〜数年もの長期の所定の時間にわたって、所望の薬物を、投薬が必要な眼の領域に直接放出させる。
【００８３】
投与の容易さおよび投薬の均一性のために投薬単位形態において局所的組成物を処方することが特に有利である。本明細書中で使用される場合、投薬単位形態とは、処置される被験体に一単位の投薬として適した物理的に別個の単位をいう；各単位は、必要な薬学的キャリアとともに、所望の治療効果を生成するように計算された所定の活性化合物の量を含む。本発明の投薬単位形態の仕様（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は、活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のためにこのような活性化合物を作るという技術に本質的な制限により示され、そしてこれらに直接依存する。本発明に従って処方物を生成するための方法に関するさらなる既知の情報は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｅｒ，ＰＡ，１５ｔｈＥｄ．（１９７５）のような当該分野における標準的参考文献中に見いだされ得る。
【００８４】
先に議論された非全身的投与経路に加えて、全身的投与経路の例としては、非経口投与（例えば、静脈内）、皮内投与、皮下投与、経口投与（例えば、吸入）、経粘膜投与、および直腸投与が挙げられる。非経口投与または皮下投与に使用される溶液または懸濁液としては、以下の成分が挙げられ得る：滅菌希釈液（例えば、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または重硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性を調節するための薬剤。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。非経口調製物は、硝子またはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアル中に封入され得る。
【００８５】
注射可能な使用に適切な薬学的組成物としては、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および滅菌注射可能溶液または分散液の用時調製のための滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与のために、適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は、滅菌でなければならず、容易にシリンジから出る程度に流動性であるべきである。この組成物は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物を含むキャリアは溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散の場合に必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖類）、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含めることは好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に含めることによりもたらされ得る。
【００８６】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物（例えば、脈管標的化薬剤）を、必要であれば、適切な溶媒（上記で列挙した成分の１以上の組み合わせ）中に必要な量で組み込み、続いて滅菌濾過することにより調製され得る。一般に、分散液は、活性化合物を、ベースの分散媒体および上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクル中に組み込むことにより調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌散剤の場合、調製の方法は、予め滅菌濾過したその溶液からその活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥および凍結乾燥である。
【００８７】
経口用組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る。経口治療剤投与のために、活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、錠剤、トローチ、またはカプセル剤の形態において使用され得る。経口用組成物はまた、うがい薬として使用するための液体キャリアを使用して調製され得る。ここで液体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、うがいによりゆすがれ（ｓｗｉｓｈｅｄ）、はき出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント物質は、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または類似の性質の化合物を含み得る：微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンのような結合剤；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはトウモロコシデンプン）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅ）；滑り剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、二酸化ケイ素コロイド）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；または矯味矯臭剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料）。
【００８８】
吸入による投与のために、化合物は、適切なプロペラント（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む加圧容器またはディスペンサー（すなわち、ネブライザ）からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【００８９】
全身投与はまた、経粘膜手段または経皮手段によってであり得る。経粘膜投与または経皮投与のために、透過されるべき障壁に適切な浸透剤が、処方物中で使用される。このような浸透剤は、一般に、当該分野で公知であり、これらの浸透剤としては、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用を介して達成され得る。経皮投与については、一般的に当該分野で公知であるように、活性化合物は、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲルまたはクリームに処方される。
【００９０】
化合物はまた、（例えば、従来の坐剤の基材（例えば、ココアバターおよび他のグリセリド）を用いて）坐剤または直腸送達のための保持浣腸（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｅｎｅｍａ）の形態において調製され得る。
【００９１】
上記のチューブリン結合薬剤に加えて、本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（例えば、水、グルコース、ラクトース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースならびに当該分野で一般的に公知の他の薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤が挙げられるが、これらに限定されない）とともに、チューブリン結合薬剤を含む薬学的組成物および処方物の使用を包含する。
【００９２】
本明細書中で使用される場合、用語「薬理学的に有効な量」、「薬学的に有効な投薬量」、または「治療的に有効な量」は、研究者または臨床医により調査されている組織、システム、動物またはヒトの、生物学的または医学的応答を誘発する薬物あるいは薬剤の量を意味する。被験体の眼に投与する（非全身投与）ためのＣＡ４Ｐの投薬量は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの範囲内である。眼において達成されるＣＡ４Ｐの濃度は、治療的に適切であるべきであり、約１ナノモル濃度〜１００ミリモル濃度の範囲内である。眼におけるより好ましいＣＡ４Ｐ濃度は、約１マイクロモル濃度〜１００マイクロモル濃度の範囲内である。ＣＡ４Ｐが全身投与される場合、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲内のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量が、有利には、非経口的に投与される。
【００９３】
本発明に従うチューブリン結合薬剤の全身的投与および非全身的投与は、哺乳動物（特に、ヒト）への投与のために処方されることが意図される。しかし、本発明は、この点において限定されず、処方物は、同様に、動物に投与するための獣医学的ガイドラインに従って調製され得る。
【００９４】
本発明は、以下の実施例を参照することにより、さらに明確にされる。多くの改変（材料および方法の両方）が本発明の目的および意図から逸脱することなく実施され得ることは、当業者に明らかである。
【実施例】
【００９５】
（実施例１．３つの投与経路を使用して眼に局所的に投与した場合の、ＣＡ４Ｐの眼の刺激の研究および平均許容可能量（ＭＴＤ）の決定）
（ｉ）硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）投与
試験物品であるＣＡ４Ｐを、ウサギにおける硝子体内投与の後に眼内刺激を引き起こす潜在性について評価した。全身麻酔の後、８羽のウサギの右目に、０．２ｍｌ用量のＣＡ４Ｐを投与した。０．９％ 塩化ナトリウム（米国局方）溶液の０．２ｍｌ用量を、それらのウサギの左目に投与して、ネガティブコントロールとした。４種類の異なる濃度のＣＡ４Ｐを試験した。４種類の濃度の各々（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）を、２羽のウサギの右目に投薬した。処置の約４８時間後、生体顕微鏡（ｂｉｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｌｉｔ−ｌａｍｐ）および倒像検眼鏡を使用して眼を調べた。スコアを記録し、ウサギを安楽死させた。安楽死の直後、硝子体液のサンプルを取り出し、血球計算板を用いて白血球数を決定した。２００細胞／ｍｍ３以下の数を、許容可能とみなした。
【００９６】
コントロールの眼は、生体顕微鏡および倒像検眼鏡試験に基づいて、眼の組織において有意な変化がなかった。試験処置した眼に関しては、刺激の証拠が、１ｍｇ／ｍｌ濃度において１匹の動物で認められ、１００ｍｇ／ｍｌ濃度においては両方について認められた。硝子体液中の平均細胞数は、０．１ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については９細胞／ｍｍ３であり；１ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については９６２細胞／ｍｍ３であり；１０ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については１０細胞／ｍｍ３であり；１００ｍｇ／ｍｌ濃度を投薬された眼については４０９細胞／ｍｍ３であり、コントロールの眼については５細胞／ｍｍ３であった。
【００９７】
研究条件下で、コントロールは、予測通りに反応し、眼の試験および硝子体分析において有意な反応が認められなかった。試験処置した動物について、両方の動物に、１００ｍｇ／ｍｌ濃度を投薬すると、両方の眼の試験において刺激および炎症が示され、硝子体の白血球分析から炎症の証拠が示された。低用量レベルの全て（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌおよび１０ｍｇ／ｍｌ）について、刺激の明らかな証拠も、炎症の明らかな証拠もなかった。
【００９８】
（ｉｉ）トノン下投与
試験物品であるＣＡ４Ｐを、一次性の眼の刺激について評価した。適切なＣＡ４Ｐ濃度（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）の２回の０．１ｍｌ注射を、２羽のウサギの右目のトノン腔下に注入した。緩衝化生理食塩水溶液の０．２ｍｌ部分を、左目のトノン腔下に注入して、ネガティブコントロールとした。サンプル点眼の２４時間後、４８時間後および７２時間後に、眼の反応を評価した。３日目に、ウサギを安楽死させ、眼を取り出した。標本を固定し、包埋し、そして組織学を行った。眼の組織における組織病理学的変化を記録した。トノン腔下変化の試験を強調した。
【００９９】
この研究の条件下で、対応するネガティブコントロールの眼と比較して、０．１ｍｇ／ｍｌおよび１．０ｍｇ／ｍｌ濃度で処置した眼においては刺激は認められなかった。対応するネガティブコントロールの眼と比較して、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ濃度で処置した眼においてわずかな刺激が認められた。
【０１００】
（ｉｉｉ）局所的点眼（ｔｏｐｉｃａｌ ｄｒｏｐ）
試験物品であるＣＡ４Ｐを、一次性の眼の刺激について評価した。ＣＡ４Ｐ希釈液（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）の単一の０．２ｍｌ用量を、左目の下側結膜嚢に入れて、比較コントロールとした。反対側の眼に、緩衝化生理食塩水溶液を与えた。サンプル点眼の２４時間後、４８時間後、および７２時間後に、眼の反応を評価した。
【０１０１】
この研究の条件下で、試験物品希釈液の全ての肉眼で見える反応を、コントロールの反応と比較して、有意でないと見なした。顕微鏡的には、緩衝化生理食塩水溶液コントロール物品と比較して、試験物品を刺激物質と見なさなかった。
【０１０２】
結果のまとめを、以下の表に示す：
【０１０３】
【表１３】
（実施例２．異なる投与経路を用いて、眼に局所的に投与した場合の、ＣＡ４Ｐの体内分布の評価）
眼の新生血管形成の処置において有効であるために、非全身的な薬物投与方法は、眼の関連構造に浸透し、そして治療的に意味のある量の薬物を疾患部位に送達しなければならない。種々の非全身的注射の方法が、ＣＡ４Ｐの有意な体内分布を生じることを確認するために、放射標識された薬物の体内分布試験を実行した。
【０１０４】
（方法：）
以下に記載する場合を除いて、各体内分布について以下の実験プロトコルに従った。
【０１０５】
１４Ｃ−ＣＡ４Ｐ（ＯＸｉＧＥＮＥ Ｉｎｃ．，Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，ＭＡ）を、１００ｕｌ容量の生理食塩水に再懸濁し、そして麻酔した雄性Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄウサギ（４月齢、１．８〜２．５ｋｇ、サンプルあたりｎ＝３）の右眼に３０Ｇ針を用いて注射した。３つの異なる濃度の１４Ｃ−ＣＡ４Ｐを、それぞれ適用した１、５、および５ｕＣｉの用量の放射活性に対応して試験（１、１０、１００ｍｇ／ｍｌ）した。ブランクコントロール群もまた含めた。ウサギを、１、６、２４、および４８時間で麻酔し、血液を採取した。血液採集後、これらの動物をＰｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ注射によって安楽死させ、全ての試験動物から処置した右眼を摘出した。眼組織サンプルを、角膜、房水、硝子体、脈絡膜、または網膜から解剖し、２０ｍｌのガラスシンチレーションバイアルに入れ、ボルテックスし、そして５００ｕｌ消化流体と共に２４時間インキュベートした。血漿を、遠心分離（１，８００ｇで１０分間）によって全血から分離した。眼の組織サンプルと血漿の両方を、放射活性をカウントする前２４時間にわたって、１６ｍｌのＨｉｏｎｉｃ ＦｌｕｏｒＴＭ シンチレーション流体と共に室温でインキュベートした。各サンプルをＢｅｔａｍａｔｉｃ Ｖカウンター（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔ Ｑｕｅｎｔｉｎ ｅｎ Ｙｖｅｌｉｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）において５分間カウントした。１分あたりのカウント（「ｃｐｍ」）の、１分あたりの崩壊（「ｄｐｍ」）への換算を、１４Ｃ標準から得た較正曲線および１４Ｃ標準でスパイクしたそれぞれのブランクマトリクスからのクエンチ曲線を用いて、βカウンターによって自動的に実行した。薬物の濃度を、ＣＡ４Ｐ（組織のｎｇ−Ｅｑ／ｇ）ｎｇ等量（測定したｄｐｍ値、組織標本の重量、および薬物の比活性（０．３７ｍＣｉ／ｍｇ）から計算し、その後コントロールの眼組織から対応するバックグランドを引いた）によって決定した。１ｕＭ ＣＡ４Ｐの組織濃度は、４４０ｎＥｑ／組織と等しい。
【０１０６】
（結果：）
（ｉ）硝子体内投与
表１は、硝子体内投与後の体内分布の結果を示す。全ての実験した組織において、眼浸透の程度は、眼の表面に配置されたＣＡ４Ｐ濃度に依存した。眼において最も高い薬物濃度（「Ｃｍａｘ」）は、投与後１時間以内に達成した。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、全ての試験した濃度において網膜に送達された。高濃度の薬物もまた、硝子体および強膜において見出された。眼の房水または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１０７】
（表１：硝子体内注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１０８】
【表１】
（ｉｉ）トノン下（ｓｕｂ−Ｔｅｎｏｎ）投与
（１）体内分布
表２は、トノン下注射後の体内分布の結果を示す。全ての実験した組織において、眼浸透の程度は、眼の表面に配置されたＣＡ４Ｐ濃度に依存した。眼において最も高い薬物濃度は、投与後１時間以内であった。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、１００ｍｇ／ｍｌおよび１０ｍｇ／ｍｌの投与用量で、網膜および脈絡膜に送達された。高濃度の薬物もまた、強膜において見出された。硝子体、房水または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１０９】
（表２：トノン下注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１０】
【表２】
（ｉｉｉ）結膜下投与
結膜下注射を、０．１、１、１０および１００ｍｇ／ｍｌの用量で投与した。１４Ｃ−ＣＡ４Ｐ溶液を、０．２４％ １０Ｎ ＫＯＨおよび０．０１％塩化ベンザルコニウムと共に処方し、そして１００ｕｌの容量で注射した。動物を、右眼の単回結膜下注射により、５ｕＣｉの適用用量で処置した。送達後、眼を２〜５秒間、穏やかに閉じさせた。以下の表３に、実験の結果を示す。
【０１１１】
眼において最も高い薬物濃度は、投与後１時間以内であった。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、１００、１０および１ｍｇ／ｍｌの投与用量で、角膜、網膜および脈絡膜に送達された。硝子体または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１１２】
（表３：結膜下注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１３】
【表３】
（ｉｖ）眼周囲投与
表４は、眼周囲注射後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、その眼の表面上に配置されたＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、全ての投与用量にて、網膜および脈絡膜に送達した。高濃度の薬物はまた、強膜においても観察された。相対的に少量の薬物が、硝子体または血漿において見出された。
【０１１４】
（表４：眼周囲注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１５】
【表４】
（ｖ）局所処方物
局所ゲルおよび局所溶液を、眼の表面へのＣＡ４Ｐの局所送達に適切な局所処方物として使用するために開発した。局所溶液（１％、３％、および１０％）を、０．９％ ＮａＣｌ（Ａｇｕｅｔｔａｎｔ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）中に直接調製し、そして０．２μｍのフィルターを用いて滅菌した（ｐＨ：６．４〜８．５、浸透圧モル濃度：２９０〜４５９ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ Ｈ２Ｏ）。低粘度の局所ゲル（１％、３％、および１０％）を、０．９％ ＮａＣｌを用いて、０．５％カルボキシメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｉｍｉｅ，Ｓｔ．Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）中で調製した。各ゲルの物理化学的仕様を、表５に示す。
【０１１６】
（表５：局所ＣＡ４Ｐゲル処方物）
【０１１７】
【表５】
局所処方物を、５０μｌの容量中、５μＣｉの適用用量にて、右眼表面に適用した。強膜の代わりに、角膜をサンプリングした。サンプルを、０．５時間、１．６時間、および２４時間で採取した。
【０１１８】
表６は、各局所ＣＡ４Ｐゲル処方物の投与後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、各ゲル処方物中のＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、３つ全てのゲル処方物を用いて、角膜、網膜および脈絡膜に送達した。相対的に少量の薬物が、血漿において見出された。
【０１１９】
（表６：ゲルの局所投与後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１２０】
【表６】
表７は、各局所ＣＡ４Ｐ溶液処方物の投与後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、各溶液処方物中のＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、３つ全ての溶液処方物を用いて角膜に送達し、一方、１０ｍｇ／ｍｌ用量が、網膜および脈絡膜への、有意な量の薬物送達を生じた。
【０１２１】
（表７．溶液処方物の局所投与後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１２２】
【表７】
これらの試験から、任意の種々の方法によるＣＡ４Ｐの非全身送達は、角膜、網膜、または脈絡膜において治療学的に適切な薬物濃度を達成するのに有効であることが明らかである。これらの組織の各々は、眼の潜在的な新生血管形成部位である。
【０１２３】
（実施例３．イオン浸透法によるＣＡ４Ｐの眼投与）
ＣＡ４Ｐは、生理学的ｐＨにてイオン化可能であり、そのため、イオン浸透送達に従う。ＣＡ４Ｐの経強膜（ｔｒａｎｓｃｌｅｒａｌ）イオン浸透送達の有効性を、塩化銀被覆銀箔電流分布成分で裏打ちされた１８０μｌのシリコーンレセプタクルシェル、コネクタリードワイヤ、およびヒドロゲル含浸ポリビニルアセタールマトリクスの単層（これに、ＣＡ４Ｐ（１０ｍｇ／ｍｌ）を投与した）から構成される、接眼ウサギ眼用塗布器（ｏｃｕｌａｒ ｒａｂｂｉｔ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ）（ＩＯＭＥＤ
Ｉｎｃ．，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）を使用して、評価した。塗布器の接触面面積は、０．５４ｃｍ２であった。この塗布器を、縁部（その先端部は、角強膜の接合部から１〜２ｍｍ遠位にある）の上盲嚢（ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｕｌ−ｄｅ−ｓａｃ）において、ニュージーランド白色ウサギ（３〜３．５ｋｇ、各処置について、ｎ＝６）の右眼の強膜に配置した。直流のアノードイオン浸透を、２ｍＡ、３ｍＡ、および４ｍＡにて２０分間、Ｐｈｏｒｅｓｏｒ ＩＩＴＭＰＭ７００（ＩＯＭＥＤ Ｉｎｃ．，Ｓａｌｔ
Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）電源を使用する、各塗布器を用いて行った。受動的イオン浸透（０ｍＡで２０分間）を、コントロールとして使用した。処置後、その動物を安楽死させ、そして眼を、処置の３０分間後に摘出し、水道水でリンスし、そして−７０℃にて凍結した。網膜組織および脈絡膜（ｃｈｏｉｒｏｄａｌ）組織を、これらのサンプルから部検した。
【０１２４】
ＣＰ４Ａ、ＣＡ、および内部標準ジエチルスチルベストロール（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）を、クロマトグラフィータンデム質量分析法（「ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ」）を使用して、約１００ｍｇの組織から定量した。メタノール抽出物のアリコートを、ＨＰＬＣカラムを備えたＳＣＩＥＸ ＡＰＩＯ ３０００ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ装置に注入した。ＣＡ４３のｍ／ｚ３１５→２８５生成物イオンおよびＣＡ４Ｐのｍ／ｚ３９５→７９生成物イオンのピーク領域を、内部標準のｍ／ｚ２６７→２３７生成物イオンのピーク領域に対して測定した。各実行の直前に調製された強化較正標準から作成した、加重（１／Ｘ）線形最小二乗回帰解析を使用して、定量を行った。この最初のコンブレタスタチン量は、定量範囲よりも有意に多く、そのため、解析後に外挿しなければならなかった。表８が示すように、脈絡膜および網膜への全コンブレタスタチンの送達は、受動的送達と比較した場合、イオン浸透法によって約１５倍増加される。これらのレベルは、チューブリン結合を阻害するために治療学的に適切な濃度であると考えられる濃度（２〜３μＭ）の数千倍超過を表わす。しかし、この網膜／脈絡膜への送達は、電流依存性ではないようであった。
【０１２５】
（表８．網膜／脈絡膜へのコンブレタスタチン送達のイオン浸透増強（平均±標準偏差））
【０１２６】
【表８】
（実施例４．ＣＡ４Ｐの全身投与による角膜の新生血管形成の処置）
病原性の眼の新脈管形成を刺激するために、眼の新生血管形成を、３０μｇの投薬量にて、ウサギの眼に角膜内注射によって脂質ヒドロペルオキシド（ＬＨＰ）を投与することによって、誘導した。数日〜１４日後に、眼血管が、ＬＨＰ侵襲（ｉｎｓｕｌｔ）に起因して、この注射された眼に形成された。被験体を、２つの群に分けた；１つの群の被験体は、５日間にわたる１日１回、４０ｍｇ／ｋｇの投薬量での静脈内投与による、所定のコンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムを受け、一方、コンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムを含まないビヒクルを、同じ期間にわたる水の投薬としての静脈内投与によって、他の群に投与した。両方の群の眼を、７日後に試験した。コンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムで処置した群において、４０％以上の血管の減少が観察されたが、他の群においては、観察されなかった。
【０１２７】
（実施例５．ＣＡ４Ｐの全身投与による角膜の新生血管形成の処置）
ＣＡ４Ｐが角膜の新生血管形成を阻害する能力を評価するために、ウサギの角膜モデルを使用した。このモデルにおいて、新生血管形成を、リノール酸ヒドロペルオキシド（「ＬＨＰ」）注射（Ｕｅｄａら、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９７，１：１７４−１８４）によって誘導した。角膜支質におけるＬＨＰの注射は、この角膜内の脈管形成サイトカインの局在産生を刺激する。周囲叢（ｃｉｒｃｕｍｌｉｍｂａｌ ｐｌｅｘｕｓ）の血管は、ＬＨＰ注射部位の方に移動することによって、脈管形成刺激に応答した。全身に送達されたＣＡ４Ｐの治療学的効果を、これらの成長する血管の長さを測定することによって評価した。
【０１２８】
（実験方法）
以下の表９に概略されるように、成体雄ニューヨークウサギ（２．７〜３．０ｋｇ）に、上縁から５ｍｍのところに、ＬＨＰ（６０μｇ）の１０μｌ懸濁液を注射して、角膜の脈管形成を誘導した。血管は、０．２５ｍｍ／日の速度で成長した。群２および群４に、それぞれ、血管成長の３日後および１０日後に、ＣＡ４Ｐ（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内（「ＩＰ」）注射した。処置群１および３に、ＬＨＰ注射後３日目および１０日目に、生理食塩水コントロールを注射した。この角膜の表面写真を、ＬＨＰ注射後、０日目、３日目、６日目、１２日目、１７日目、および２８日目に撮影した。各写真撮影の後、角膜血管を、手術用顕微鏡下で観察し、Ｃａｓｔｒｏｖｉｅｊｏカリパスを使用して、最も顕著な血管の長さを測定した。
【０１２９】
最長血管の測定に加えて、２８日目に組織学分析を行って、溶解した細胞外マトリクスの量、血管壁の厚さ、および血管の分枝の程度を評価した。安楽死させた動物から眼球を摘出し、その硝子体を、各眼から取り出し、その後、４％パラホルムアルデヒドで４５分間、および０．２Ｍカコジル酸緩衝液（ｐＨ７．４）で一晩、固定化した。眼をパラフィン中に包埋し、３μｍ厚に切り出し、そして溶血素およびエオシンで染色した。
【０１３０】
（表９．実験計画）
【０１３１】
【表９】
（結果）
表１０および表１１は、処置の介入時間および処置回数の関数として、血管の長さに対するＣＡ４Ｐの効果を要約している。ＣＡ４Ｐ処置を用いて、最初の脈管刺激から３日以内に介入した場合（表１０、群２）、薬物は、新生脈管成長の完全な阻害を引き起こした。対照的に、ビヒクルコントロール群における血管は、成長し続けた。この効果を、脈管形成阻害または脈管形成効果として定性化し得る。ＣＡ４Ｐ処置を用いて、脈管刺激の１０日後に介入した場合（表１１、群２）、その効果は、同じであった。
【０１３２】
（表１０：初期介入：３日目に処置を開始する）
【０１３３】
【表１０】
（表１１：後期介入：１０日目に処置を開始する）
【０１３４】
【表１１】
図３Ｂは、２８日目でのＣＡ４Ｐで処置した眼の表面写真を示す。この写真は、図３Ａに示したビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ投与後２８日目における血管成長の阻害をさらに示す。
【０１３５】
図４Ａおよび図４Ｂで示される顕微鏡写真（倍率４００×）は、２８日目に同じサンプルから得られた、染色した組織化学的検体の例である。ビヒクルで処置した動物（図４Ａ）において、血管は、丸く見え、多数現れた。対照的に、ＣＡ４Ｐで処置した動物（図４Ｂ）において、血管は、狭くより少数現れた。さらに、血管後退の証拠が、ＣＡ４Ｐの介入の後期段階の間で観察された（データは示さず）。ＣＡ４Ｐは、確立した血管の幅を減少させ得、血管からの分枝の出芽を有意に阻害し得たようであった。これは、さらなる脈管標的化効果を示す。
【０１３６】
（実施例６．ＣＡ４Ｐの全身投与による、黄斑変性の動物モデルにおける脈絡膜の新生血管形成の処置）
脈絡膜の新生血管形成は、加齢性黄斑変性または湿潤性黄斑変性を有する患者における重篤な視覚損失の主要な原因である。脈絡膜においてＣＡ４Ｐが血管成長を阻害する能力を調査するために、脈絡膜の新生血管形成のマウスモデルを試験した。このモデルにおいて、研究者らは、クリプトンレーザを使用して、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスのブルーフ膜上に創傷を作製した。各眼は、いくらかの火傷を受けた。この火傷は、脈絡膜内に新生血管形成を誘導する、古典的な創傷治癒応答を誘発した。このクリプトンレーザ光凝固方法は、Ｔｏｂｅら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９８，１５３（５）：１６４１−６において記載されている。動物の部分集合（ｎ＝１９）において、ＣＡ４Ｐを、用量１００ｍｇ／ｋｇ／日にてＩＰ注射によって、全身投与した。組織病理学およびフルオレセイン血管造影法を用いて、火傷の周辺の新生血管形成を同定した。電子顕微鏡検査法を用いて、脈絡膜の新生血管損傷内における有窓新生血管の管腔直径を測定した。表１２は、平均血管管腔面積に対するＣＡ４Ｐ処置の結果を示す。ＣＡ４Ｐで処置した動物は、生理食塩水で処置した動物（ｎ＝３３）と比較した場合、約５０％少ない血管管腔面積（ｍｍ２）を有した。これらの結果の統計学的分析は、高度な有意性を示した。
【０１３７】
（表１２．ＣＡ４Ｐで処置したマウスおよびビヒクルで処置したマウスの平均管腔面積）
【０１３８】
【表１２】
（実施例７．ＣＡ４Ｐの全身投与による、未熟児網膜症のマウスモデルにおける網膜の新生血管形成の処置）
哺乳動物の眼の内部網膜は、表在網膜の毛細血管床から酸素を受け取る。この毛細血管床は、内境界膜の下に位置され、この膜は、内部網膜と外部の無血管硝子体との間で境界面として働く。網膜の新生血管形成および網膜症の病理は、虚血（これは、網膜の内境界膜を越えて硝子体内に、新生血管形成の成長を誘導する）から生じ、重篤な視覚損失を引き起こし、しばしば網膜剥離の原因となる。酸素誘導性網膜新生血管形成の十分に特徴付けされたマウスモデルは、早熟で産まれた乳児によって示される未熟児網膜症（「ＲＯＰ」）を綿密に模倣し、種々の他の虚血誘導性未児網膜症（糖尿病性網膜症が挙げられる）に共通な特徴を示す（Ｓｍｉｔｈら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ，１９９４，３５：１０１−１１）。このモデルにおいて、新生期のマウスを、持続性高酸素条件下（７５％酸素で７日間）に曝した。この条件は、表在網膜の毛細血管床の発達を阻害する。マウスの子を、純粋な酸素環境から離し、環境酸素の相対的低酸素中に置いた場合、発達不十分な表在網膜の毛細血管床は、十分な量の酸素を角膜に送達することができない。この網膜は、重篤な病理学的結果を引き起こす脈管形成サイトカインを生成することによって、酸素不足に応答する。脈管形成サイトカインの局在生成は、発達不十分の表在網膜の毛細血管床が、内境界膜を破壊する新たな血管を出芽するのを引き起こし得る。硝子体における異常な血管の成長は、重篤な瘢痕組織の形成および牽引誘導性網膜剥離を引き起こす。
【０１３９】
高酸素条件からの除去直後に、ＣＡ４Ｐで新生マウスを処置することは、ＲＯＰのために有効な処置方法であることが予期される。網膜の新生血管形成を、既存の方法（Ｍａｊｋａら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ，Ｓｃｉ．２００１，４２：２１０−１５）に従って、処置した眼および未処置の眼の網膜組織切片における穿通性内皮細胞の化学染色された核の数を計数することによって、定量し得る。内境界膜を穿通する核の数は、ＣＡ４Ｐの眼において有意に減少されると予測される。
【０１４０】
（実施例８．ＣＡ４Ｐの結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｃｔｉｖａｌ）投与による、網膜芽細胞腫のマウスモデルにおける眼の腫瘍の処置）
網膜芽細胞腫のマウストランスジェニックモデルを使用した。このモデルにおいて、ＳＶ−４０ラージＴ抗原陽性マウスは、ヒト小児網膜芽細胞腫に似ている左右の網膜芽細胞腫を発症する。このモデルにおいて、腫瘍が、最初に４週齢で現れ、そして安定でかつ再現可能な様式で発達する（Ｈａｙｄｅｎら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００２；１２０（３）：３５３−９）。１つの実験において、１２週齢の動物（ｎ＝４８）を、右眼のみにおいて、ＣＡ４Ｐの単回の２０μｌ結膜下注射（１００ｍｇ／ｍｌ）で処置した。コントロールマウス（ｎ＝８）を、平衡塩溶液（「ＢＳＳ」）で処置した。眼を、処置後１日、３日、７日、１４日、２１日、および２８日に摘出することによってサンプリングした（ｎ＝８（眼／サンプリング））。サンプルを固定し、パラフィン包埋し、連続的に切り出し、そしてヘマトキシリン、エオシン、およびＰＡＳで事前に染色した。各組織サンプルを、組織病理学的腫瘍血管応答について試験した。図５Ａに例示されるように、腫瘍内新生血管形成の有意な減少が、１日目、３日目、および７日目に見られた。
【０１４１】
別々の投薬実験において、動物（ｎ＝４８）を、２０μｌの容量において１００ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌまたは０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度にて、隔週での６回の連続的なＣＡ４Ｐの結膜下注射で処置した（ｎ＝６（眼／サンプリング））。コントロール群（ｎ＝６）は、ＢＳＳの連続的な結膜下注射を受けた。眼を、処置後２８日目に摘出し、そして腫瘍容量の減少について試験した。図５Ｂは、コントロールと比較した、腫瘍血管容量に対するＣＡ４Ｐの用量依存性効果を例示する。腫瘍内血管分布は、１０ｍｇ／ｍｌより高い処置用量レベルでは存在せず、毒性の証拠は、いかなる時点においてもいかなる処置用量においても注目されなかった。
【０１４２】
（他の実施形態）
本発明は、その詳細な説明とともに記載されてきたが、前出の記載は、例示を意図しており、本発明の範囲を制限することを意図していないことが理解されるべきであり、本発明は、添付の特許請求の範囲の範囲によって規定される。
【０１４３】
図面は、必ずしも一定の比例に拡大縮小して描かれるわけではなく、本質的には、単に概念上のものであることもまた、理解されるべきである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼の疾患の処置のための、脈管標的化因子（特に、チューブリン結合薬剤）の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
眼は、基本的に、一生の間で最も重要な器官のうちの１つである。視覚に有害に影響し得る加齢、疾患および他の因子が原因で、眼の健康を維持する能力は、すべて重要となる。失明の主要な原因は、眼に薬物または治療因子を導入できないこと、およびこれらの薬物または因子を治療上有効な濃度で維持できないことである。薬物の経口接種または眼以外の部位での薬物の注入は、その薬物を全身に提供する。しかし、そのような全身投与は、眼に特異的には有効レベルのその薬物を提供せず、従って、有効な眼内濃度を達成するために、しばしば受容可能でない高レベルの因子を投与することが必要となり得る。
【０００３】
斑は、微細で詳細な視覚を担う光感覚細胞の上昇した濃度を含む網膜領域である（ヒトの眼の一般的解剖学的図が、図１に示される）。黄斑変性は、斑の光感覚細胞が機能を失うようにするほとんど理解されていない群の疾患に与えられた、不明確な歴史的名称である。黄斑変性の結果は、重要な中心視力および詳細な視力の喪失である。黄斑変性に罹患した患者は、その視野の中心に空白の斑点を経験し、しばしば、小さい印刷物を読む能力を失う（出典：Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｓｅ、ＣＡ：ｗｗｗ．ｅｙｅｓｉｇｈｔ．ｏｒｇ）。
【０００４】
１２００万人を超えるアメリカ人が、なんらかの形態の黄斑変性を有する。５５歳と６４歳との間のアメリカ人の６人中１人が、黄斑変性に罹患しており、そしてその疾患の発症率は、年齢とともに増加する。黄斑変性に罹患した推定１２００万人の患者のうち毎年１２０万人が、深刻な中心視力の喪失に悩まされている。毎年２００，０００人の個体が、一方の眼または両方の眼の中心視力すべてを失う。
【０００５】
黄斑変性の正確な原因は不明であるが、斑の構造により、どのようにこの疾患が開始され得るかに関する手がかりが見出される。斑は、大量のエネルギーを消費する非常に活性な光受容体を含む。このエネルギーを生成するには、豊富な酸素および栄養素の供給が必要とされる。斑は、その供給脈管（脈絡膜としてもまた公知である）を通る最高速度の１つの血流を有する。この豊富な血管供給を妨げるいかなることも、斑の機能不全を引き起こし得る。酸素が枯渇した斑は、内皮細胞増殖および新生脈管形成をシグナル伝達するサイトカインを生成することによって応答する。
【０００６】
基本的な２つの型の黄斑変性（乾燥形態および湿潤形態）が存在する。黄斑変性の原因の約８５％〜９０％は、乾燥型である。この疾患の乾燥形態において、網膜の悪化は、結晶腔として公知である斑の下の黄色沈着物の形成に関連する。結晶腔の沈着物は、斑を含む網膜細胞の厚さの減少と相関する。中心視力の喪失量は、結晶腔に誘導される網膜肥厚の位置および重篤度と直接関連する。黄斑変性の乾燥形態は、この疾患の湿潤形態よりもゆっくり進行する傾向がある。乾燥形態の黄斑変性についての有効な処置は存在しない。乾燥形態の黄斑変性に罹患している少数の個体は、湿潤形態の黄斑変性へと進行する。図２は、正常な斑および乾燥形態の黄斑変性を示す。
【０００７】
湿潤形態の黄斑変性は、重篤な視力喪失をほぼ常にもたらす、迅速に進行する疾患である。湿潤型黄斑変性と関連する視力喪失は、網膜下新生脈管形成の結果である。網膜下血管の迅速な増殖は、その上にある網膜細胞層が曲がり、栄養素が豊富な脈絡膜から剥離するのを引き起こす。湿潤型黄斑変性の極端な症例において、増殖中に脈管が網膜に浸透し、そして硝子体液に浸潤する。湿潤形態の新生脈管形成についてのいくつかの処置が存在するが、いずれも満足するにはほど遠い。図３は、正常な網膜および湿潤型黄斑変性を示す。
【０００８】
黄斑変性についての現行の標準的処置は、レーザー光凝固である。レーザー光凝固を実施する眼科医は、蛍光血管造影法を用いて異常な脈管を位置決めし、そしてレーザー切除技術を用いてその脈管を選択的に焼く。レーザー手術の副作用は、異常な脈管のすぐ上に存在する網膜層の破壊である。レーザー光凝固で処置された患者は、処置の直後に測定可能な視力喪失を有し、これは、容認できない負の副作用である。概して、レーザー手術は、この疾患を遅くすることにほんの中程度にしか有効ではない、その場しのぎの処置として見なされる。
【０００９】
光力学的治療が、黄斑変性についての処置技術の現在の水準である。米国食品医薬品局は、湿潤型の加齢性黄斑変性を処置するための注射用ベルテポルフィン（Ｃｉｂａ Ｖｉｓｉｏｎ＆ＱＬＴにより開発されたＶｉｓｕｄｙｎｅＴＭ）を承認した。光力学的治療で処置されている患者は、光反応性化合物（ベルテポルフィン）を注射され、すぐに、非破壊性眼科レーザーで処置される。この手術を実施する眼科医は、異常な脈管を同定し、そしてレーザービームをその異常な脈管へと向ける。ベルテポルフィンは、レーザーにより活性化された場合に、活性化した分子の近傍にあるすべての細胞を有効に焦がす、一過性のエネルギーバーストを生じる（出典：ＨＨＳ Ｎｅｗｓ，米国保険社会福祉省、２０００年４月１３日）。
【００１０】
電離放射線は、増殖中の脈管を殺傷するために使用される（増殖中の細胞は、静止細胞よりも放射線感受性である）。電離放射線は、通常、眼の大部分に曝露するに十分な大きさのビームの状態で投与される。１９９３年に、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｅｌｆａｓｔ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｉｒｅｌａｎｄのグループが、湿潤型黄斑変性に罹患している少数の患者に対してＸ線を試したと報告した。その正の結果は、欧州の他の研究チームにより行われたＸ線を用いたいくつかの同様の研究によって支持されている。
【００１１】
別の消耗性眼疾患は、未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。ＲＯＰは、有意な割合の未熟児において生じる眼の疾患である。満期産（２８週〜４０週）の最後の１２週間は、胎児の眼の発生において特に活性な月である。網膜血液供給（脈絡膜）の出生前発生が、１６週目に視神経にて始まり、そして半径方向様式で網膜の前部領域の方へと出産（４０週）まで進行する。出産が未熟である場合、網膜脈環構造は、十分に発生するに十分な時間を有さず、網膜の前方縁が、酸素欠乏になる。網膜前部酸素付加の欠如が、ＲＯＰの潜在的な原因である（出典：Ｔｈｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｏｆ Ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＭＩ）。
【００１２】
未熟児において、網膜前部の有意な部分が、十分な血液供給欠乏である。酸素が欠乏した網膜前部は、新生脈管の増殖のためのシグナル伝達によって応答する。網膜前部と網膜後部との間の一帯における異常な新生脈管形成は、重篤な病理学的結果を伴う事象のカスケードを開始する。新生脈管が化学的シグナルに応答して成長するので、動静脈シャントが、脈管形成した網膜後部と脈管がない網膜前部との間の一帯において形成される。これらの脈管シャントは、徐々に拡大し、より厚くなり、そしてより上昇する。その新生脈管は、浸潤性線維芽細胞により達成され、この浸潤性線維芽細胞は、繊維性瘢痕組織を生成する。結局、網膜および硝子体ゲルに付着した瘢痕組織の環が、形成される。この瘢痕組織の環は、眼の内側の周囲に３６０°拡大し得る。この瘢痕組織が接触する場合、この瘢痕組織は、網膜を引っ張り、そして網膜剥離を生じる。十分な瘢痕組織が形成される場合、網膜は、完全に剥離され得る。未熟児は、ＲＯＰを発症する危険がある。なぜなら、未熟児は、子宮の保護環境の外に取り出されており、種々の脈管形成刺激（医薬、高レベルの酸素、ならびに光の変動および温度の変動を含む）に曝されているからである。これらの因子のうちのいくつかまたはすべては、ＲＯＰの発症に対して効果を有し得る。幸運なことに、ほとんどの未熟児は、ＲＯＰを発症せず、ＲＯＰに罹患するほとんどの乳児は、自然に改善する。ＲＯＰが発症する場合、ＲＯＰは、出生時の妊娠年齢に関わらず、受胎後３４週目と４０週目との間に通常生じる。
【００１３】
寒冷療法と呼ばれる技術が、ＲＯＰの処置のために有益な効果を有することが示されている。寒冷療法は、眼の外壁（強膜）上に氷点下のプローブを配置することを包含する。このプローブは、強膜と硝子体との間の網膜表面上に氷結晶化の一帯を生じる。寒冷療法の複数の適用が、脈管のない領域全体（これは、新生脈管の縁の前方である）を処置するために実施される。縁自体の処置は、回避される。なぜなら、この縁は、出血する傾向があり、凍結すると、硝子体の出血を引き起こすからである。
【００１４】
寒冷療法の作用機構は、完全には理解されていない。実用的な仮説は、寒冷療法が、おそらく、脈管のない網膜層前部に損傷を与えることである。この損傷は、残りの生細胞への酸素の拡散の促進を可能にする網膜の肥厚を生じる。さらに、寒冷処置された網膜は、より少数の生細胞を有し、従って、酸素の需要の減少を有する。減少した酸素需要は、脈管形成刺激を低下させ、新生脈管形成を停止させる。寒冷療法は、未処置の眼の４３％から処置した眼の２１％へと、網膜剥離の危険を減少させることが見出された。しかし、寒冷療法は、潜在的な合併症を有する；この手順は、しばしば、未熟児にとって危険があり得る全身麻酔下で実施される。
【００１５】
本明細書中で上記されるレーザー光凝固は、ＲＯＰの処置において類似の原理を使用する。このレーザー処置は、血液供給を未だ有さない網膜前部に適用される。この処置の目的は、異常な脈管が網膜剥離を生じるに十分な瘢痕組織を下に配置する前に、その異常な脈管を排除することである。さらに、脈管のない網膜前部は、レーザーにより縁が薄くなり、酸素需要が減少し、そして寒冷療法とそっくりに、脈管形成刺激が低下される。レーザー療法は、網膜に指向されるが眼の壁の厚さ全体には指向されないという点で、寒冷療法よりも優れている。レーザー療法は、より少数の組織にしか関わらず痛くないので、処置後の炎症が非常に低減される。寒冷療法と比較した場合、レーザー療法は、優れている。なぜなら、麻酔の必要性が減少するからである。
【００１６】
レーザー療法または寒冷療法が、ＲＯＰの進行を停止する際に不成功である場合、いくつかの外科処置が利用可能である。線維−脈管瘢痕組織からの小さな牽引に起因して、浅い網膜剥離が存在する場合、強膜折込みと呼ばれる処置が、有益であり得る。強膜折込みは、眼球赤道の周囲にシリコンバンドを配置する工程、およびそのシリコンバンドを締めて、眼の内側にわずかなへこみを生じる工程を包含する。このバンドは、硝子体ゲルの牽引を軽減し、繊維性瘢痕組織および網膜を引っ張る（ｐｕｌｌ ｏｎ）。これにより、網膜が眼の壁上に平らになり、正常な機能を回復することが可能になる。強膜折込みを有した乳児は、特に斑が剥離しなかった場合に、眼において良好な視力を維持し得る。この取り囲むバンドは、通常は、数ヶ月または数年後に除去される必要がある。なぜなら、眼は成長し続け、徐々に増加する眼球圧縮および誘導性近視を生じるからである。
【００１７】
後期段階ＲＯＰにおいて、網膜上の瘢痕組織に起因して完全に網膜が剥離して、強膜折込みは、牽引を軽減するに不十分である。これらの乳児のために、硝子体切除が、考慮され得る。硝子体切除は、眼の中にいくつかの小さな切開を作製する工程、および吸引デバイス／切断デバイスを使用して硝子体ゲルを除去する工程を包含する。硝子体が生理食塩水で置換され、眼の形態が維持される。眼は、硝子体ゲルを含まずに不明確にその形状および圧力を維持することができる。硝子体が除去された後、網膜上の瘢痕組織は、剥がされ得るかまたは切除され得、それにより、網膜が弛緩して眼の壁に対してよりかかるようにされる。網膜が手術後に再付着されるのには、数週間かかり得る。処置の間、網膜円孔および網膜中に涙が生じる場合、網膜は通常、再付着しない。眼の水晶体は、しばしば、瘢痕組織の完全な解剖が可能なように除去されなければならないが、水晶体を保存し得るいくつかの新規な技術が、試行されている。
【００１８】
しかし、ＲＯＰについての硝子体切除手術の成功率は、制限されている。公開された解剖学的成功率（これは、眼の壁に再付着した網膜を得ることを意味する）は、手術を受ける患者のうちの２５％〜５０％の範囲である。機能的成功率（これは、良く見える能力を意味する）は、有意に低い。「成功する」硝子体切除手術（解剖学的成功）を有する眼のうち、ほんの約１／４が、物体に手を伸ばして掴むために十分に、またはパターンを認識するために十分に、良く見ることができる。
【００１９】
別の消耗性眼疾患が、真性糖尿病に罹患する患者において生じる。約１４００万人のアメリカ人が、真性糖尿病を有する。多数の全身性合併症（例えば、腎不全、高血圧、および心血管疾患）を引き起こすことに加えて、糖尿病は、労働年齢のアメリカ人の間で失明の主要な原因のうちの１つである。実際、糖尿病を有する患者に対する失明リスクは、一般的人口の失明リスクより２５倍高い。糖尿病性の眼の問題を有する多くの患者は、視力を脅かす疾患の存在に関わらず、無症候性である。糖尿病性眼疾患が未処置のままにされると、この疾患は、深刻な視力喪失をもたらし得る。糖尿病に起因する視力減少は、いくつかの機構により引き起こされ得、個体のニーズに処置を調整する必要がある。（出典：Ｔｈｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｃａｒｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ」：ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｈｅａｌｔｈ／ｄｉｓｅａｓｅｓ．ｈｔｍ）。
【００２０】
多くの糖尿病患者は、その血糖が特に高いかまたは特に低い場合に、不鮮明な視覚に気付く。この不鮮明な視覚は、眼の水晶体の形状変化から生じ、通常は、その血糖が正常に戻った場合に逆転する。糖尿病は、患者の血糖レベルに影響するだけではなく、血管にも影響する、疾患である。糖尿病に関係する症状（血圧の上昇を含む）は、網膜に関係する毛細血管を含む微小循環系に対して損傷を引き起こす。毛細血管の損傷は、分離された網膜の領域への血流の減少を生じる。さらに、損傷した血管は、漏出する傾向があり、これにより、網膜内での膨張が生じる。
【００２１】
糖尿病性眼疾患の２つの主要なカテゴリーが存在する。第１のカテゴリーは、バックグラウンドの糖尿病性網膜症または非増殖性網膜症と呼ばれる。これは、本質的には、糖尿病性網膜症の最初期段階である。この段階は、小網膜血管に対する損傷により特徴付けられ、これにより、網膜中への流体（血液）の浸出が生じる。この段階の間のほとんどの視力喪失は、斑中へのこの流体蓄積に起因する。この流体蓄積は、黄斑水腫（ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ）と呼ばれる。この流体蓄積は、一時的視力減少または永続的視力減少を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の第２のカテゴリーは、増殖性糖尿病性網膜症と呼ばれる。増殖性網膜症は、網膜毛細血管床（脈絡膜）により維持される糖尿病誘導性損傷の最終結果である。脈絡膜に対する損傷は、網膜における酸素枯渇を引き起こす。網膜組織は、新生脈管形成を刺激する脈管形成サイトカインを生成することによって、その低酸素性環境に応答する。以前に記載されたように、網膜の新生脈管形成は、眼における出血、網膜瘢痕組織、網膜剥離を引き起こし、これらの症状のうちのいずれか１つは、視力減少または失明を引き起こし得る。糖尿病患者はまた、しばしば、血管新生緑内障にも罹患し、このことは、ルベオーシス（角度の閉鎖を引き起こす虹彩上で成長する血管）を示す。
【００２２】
糖尿病性網膜症は、Ｉ型糖尿病患者（４０歳より前の糖尿病の発症）およびＩＩ型糖尿病患者（４０歳より後の発症）の両方において生じ得るが、糖尿病性網膜症は、Ｉ型患者においてより一般的でありかつより重篤である傾向にある。ＩＩ型糖尿病患者は、しばしば、その患者が多年糖尿病を有するまで、診断されないが、糖尿病が発見された時点でＩＩ型患者において糖尿病網膜症が存在し得る。
【００２３】
糖尿病性網膜症の処置は、複数の要因（網膜症の型および程度、関係する眼の要因（例えば、白内障または硝子体出血）、および患者の医療歴を含む）に依存する。処置の選択肢としては、ＲＯＰについて議論されたのと同じ選択肢（すなわち、レーザー光凝固、寒冷療法（凍結）、および硝子体切除手術）が挙げられる。糖尿病性網膜症に起因する時期は、ほんとんどの場合において予防可能である。
【００２４】
いかなる型の眼内癌性腫瘍も、ほとんど一般的ではない。しかし、眼の腫瘍は、ブドウ膜（眼）癌が一般的に他の身体領域への転移しそして他の身体領域から転移する点で、非常に深刻である。眼の最も一般的な主要な悪性腫瘍であるブドウ膜黒色腫は、１年あたり一般の集団において１００万人中７人において発症する（肺癌の発生率の１／１０未満である）。網膜芽細胞腫は、血友病とほぼ同じ程度の頻度で小児疾患として生じる。これらの２つの眼内腫瘍は、非常に異なり、解剖学的近さによってのみ関連する。眼性癌についての処置の選択は、その癌が眼のどこにあるか、どの程度遠くまでその癌が伝播しているか、ならびにその患者の全身の健康および年齢に依存する（出典：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ；ＯｎｃｏＬｉｎｋ：ｃａｎｃｅｒ．ｍｅｄ．ｕｐｅｎｎ．ｅｄｕ）。
【００２５】
網膜芽細胞腫は、若齢の小児において生じる一方または両方の眼の癌である。米国において、１年あたり約３５０件の新規に診断される症例が存在する。網膜芽細胞腫は、米国において生まれる１５，０００〜３０，０００人の生存乳児につき１人に発症する。網膜芽細胞腫は、すべての人種の小児ならびに少年および少女の両方に発症する。
【００２６】
網膜芽細胞腫は、網膜（眼にものを見えるようにする眼の光感受性層）に起源する。網膜芽細胞腫の処置は、各患者について個別化し、その小児の年齢、一方の眼もしくは両方の眼に関与していること、および癌が他の身体部分に伝播しているか否かに依存する。未処置のままにされると、その小児は死亡する。網膜芽細胞腫についての処置としては、摘出、外部ビーム照射、放射性プラーク、レーザー療法、寒冷療法、および化学的減少（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）が挙げられる。
【００２７】
摘出が、網膜芽細胞腫についての処置の最も一般的形態である。摘出の間に、眼が外科的に除去される。この除去は、癌を完全に除去することが唯一の方法であるので、必要である。眼全体を除去することなく眼内から癌を除去することは、不可能である。部分的摘出は、いくつかの他の眼性癌について可能であるが、それは危険があり、そして網膜芽細胞腫患者についての癌の伝播になお寄与し得る。
【００２８】
両方の眼が関与する場合、時々、より関与している方、すなわち「悪い方」の眼が、摘出され、一方、もう一方の眼は、視覚保存処置（例えば、下記に記載される、外部ビーム照射、プラーク療法、寒冷療法、レーザー処置、および化学的減少（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ））のうちの１つで処置され得る。
【００２９】
外部ビーム照射が、１９００年初期以来、眼および視力を保存するための方法として使用されている。網膜芽細胞腫は、放射線に感受性であり、しばしば、この処置は成功する。この照射処置は、３〜４週間の長さにわたって１週間につき５回、外来患者ベースで実施される。あつらえられた石膏型が、処置の間に頭が動くのを防ぐために作製され、時々、鎮静薬が、処置前に処方される。
【００３０】
腫瘍は、通常、外部ビーム照射処置後に、小さくなり（後退）そして瘢痕形成したように見えるが、めったに完全には消失しない。実際、腫瘍は、収縮するにつれてより明瞭にさえなり得る。なぜなら、ピンクがかった灰色の腫瘍塊が、白色カルシウムで置換される。処置直後に、皮膚が火傷し得るか、小さい髪片が、ビームの出口位置から頭後ろで失われ得る。外部ビーム照射後、長期間の効果としては、白内障、放射線網膜症（失明および網膜浸出液）、視力の減損、および一時的骨抑制（正常には増殖しない頭部側面の骨）が挙げられる。照射はまた、身体のどの細胞にも異常な遺伝子を保有する小児について、眼の外側に他の腫瘍を発症する小児リスクを増加し得る。
【００３１】
放射性プラークは、網膜芽細胞腫に照射するために１９３０年代に開発された、放射性物質のディスクである。今日、同位体ヨウ素１２５が使用され、このプラークは、各小児にあつらえ作製される。小児は、この手術のために通常入院しなければならず、２回の別個の手術（１回は、プラークを挿入するため、１回はプラークを除去するため）を、３〜７日間にわたって受けなければならない。
【００３２】
レーザー療法は、時に、光凝固またはレーザー高熱（これらは、２つの異なる技術である）と呼ばれ、網膜芽細胞腫に対する非侵襲性処置である。レーザーは、比較的小さい網膜芽細胞腫を効果的に破壊する。この型の処置は、通常は、眼の中の癌上とその周囲とに、瞳孔と通して光を集束することによって実施される。近年、レーザーの新規な送達システム（ジオペキシ（ｄｉｏｐｅｘｙ）プローブと呼ばれる）は、瞳孔を通してではなく眼の壁を通して光を投げかけることによって、その癌の処置を可能にしている。レーザー処置は、局所麻酔または全身麻酔下で行われ、通常は、その処置に関連するいかなる手術後の疼痛も有さず、そしていかなる手術後の投薬も必要としない。レーザーは、単独でか、または外部ビーム照射、プラーク、または寒冷療法に加えて、使用され得る。
【００３３】
寒冷療法はまた、網膜芽細胞腫に罹患している患者に対して行われ得る。寒冷療法は、局所麻酔または全身麻酔のもとで行われ、より小さな網膜芽細胞腫の腫瘍を凍結する。ペン様プローブを、腫瘍に隣接した強膜に配置し、その腫瘍を凍結する。寒冷療法は、通常、ガン細胞の全てを実質的に破壊するためには、多数回反復されなければならない。寒冷療法の有害な副作用は、瞼および眼が１〜５日間腫脹することである；ときおり、この腫脹は、非常に甚だしいので、小児は、数日間彼らの瞼を開ける（眼を開ける）ことができない。点眼剤または軟膏は、しばしば、腫脹を低減するために与えられる。
【００３４】
全身化学療法（ｃｈｅｍｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）は、化学療法を使用した網膜芽細胞腫の処置である。化学療法は、一般的に、小児に対して静脈内に投与され、血流を通って、成功する場合は、数週間以内に腫瘍の縮小を生じる。１以上の薬物を使用する化学療法は、１回、２回またはそれ以上行われ得る。薬物および施設に依存して、小児は、このプロセスの間に入院しても、入院しなくてもよい。化学療法の後、小児は再検査され、残りの腫瘍は、寒冷療法、レーザー、または放射性プラークを使用して処置される。小児は、３週間毎に、麻酔下で、眼を再試験しながら、２０回ほど処置することが必要であり得る。
【００３５】
まれではあるが、網膜芽細胞腫が即座に処置されれば、網膜芽細胞腫は、眼の外側から脳、中枢神経系（脳および脊髄）、および骨へと拡がり得る（転移し得る）。この場合、化学療法が、小児腫瘍遺伝子学者により定められており、転移性疾患の最初の診断の後に数ヶ月から数年にわたって、末梢血管を通ってまたは脳へと投与される。
【００３６】
網膜芽細胞腫および黒色腫以外の腫瘍は、眼で発生し、これらはしばしば、他の場所での疾患の前兆である。脈絡膜転移は、眼内悪性疾患を最も頻繁に生じやすく、全身性悪性疾患の最初の徴候であり得る。脈絡膜転移は、無着色性黒色腫（ｎｏｎｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ）に似ている。それらは、蛍光眼底血管造影像上で黒色腫に類似の外観を有し、超音波記録上でわずかなエコーグラム差異を示す。しかし、脈絡膜転移は、より急速に増殖し、大きな滲出性網膜剥離を引き起こす可能性がより高い。
【００３７】
概して、生存についての予後は、一旦転移性疾患が眼において見いだされると乏しい。しかし、全身性癌患者における生存が改善されるにつれて、よい生活の質を維持する際に、眼の転移の首尾よい処置がますます重要な役割を果たしている。
【００３８】
原発性眼球リンパ腫症は、最も興味をそそられる眼内腫瘍のうちの１つである。その原発性中枢神経型リンパ腫およびリンパ性組織が存在しない場合の腫瘍が網膜下色素上皮腔において増殖する傾向との関係は、この非常に攻撃的なリンパ腫の実際の２つ魅力的な局面である。原発性眼球リンパ腫の臨床的発現は、良性のブドウ膜の実体を模倣することが有名であり、従って、数ヶ月間、正確な診断が遅れる。眼球リンパ腫における新生物細胞は、網膜色素上皮とブルーフ膜との間の空間に拘束され続け得る。リンパ腫のこれらの凝集と関連する硝子体（ｖｉｔｒｉｔｉｓ）は、しばしば、反応性リンパ球からなり、硝子体生検は、非診断的であり得る。これは、実際に、外科医が腫瘍細胞をとっていなかった場合に、眼内細胞学を解明することが困難であるという誤解をもたらした。眼内生検からのポジティブな収穫は、いくつかの場合において、外科医が網膜下色素上皮腔における網膜切開術を介した吸入生検を行う場合に増大され得る。原発性眼球リンパ腫は、白血球共通抗原についてポジティブに染まる、大きく、細胞学的に異型の細胞からなる。吸引は、通常、多量の壊死による細片と関連づけられる。免疫表現型分析は、過去、問題をはらんでいた。いくつかの初期の研究では、いずれの表面マーカーも見いだすことができず、眼球リンパ腫がホルモン非産生細胞腫瘍（ｎｕｌｌｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ）であったと結論づけた。ヒアルロニダーゼを用いた細胞の前処置は、免疫病理学研究の収穫を増大させた。
【００３９】
眼の癌の別の形態は、脈絡膜黒色腫である。脈絡膜黒色腫は、眼の原発性癌である。眼の脈絡膜の色素細胞から発生し、どこか他の場所で発生して眼へと拡がった癌ではない。いくつかの脈絡膜黒色腫は、他の癌より生命を脅かすものであるが、ほとんど全てが悪性であるかのように処置されるべきである。いくつかの脈絡膜黒色腫は、不活発のままであるようであり、増殖しない。大部分はゆっくりと時間がたつにつれて拡がり、失明をもたらす。これらの腫瘍は、身体の他の部分に拡がり得、最終的には死をもたらす。眼の黒色腫が肝臓に転移した多くの症例が、報告された（情報源：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ）。
【００４０】
長年にわたり、脈絡膜黒色腫に有用な処置は、摘出であった。腫瘍が身体の他の部分に拡がっていない場合、眼の除去は、一般に、患者から腫瘍を完全に除去する。第二次世界大戦以来、脈絡膜黒色腫については、放射線処置が使用されてきた。過去２０年間、この処置方法は、改良されてきている。適切な線量率および適切な物理的形態での照射は、眼の除去を必要とするに十分な正常な組織へ損傷を生じることなく、増殖している腫瘍細胞を排除することが意図される。細胞が死ぬにつれて、腫瘍は縮小するが、通常、完全には消失しない。中間の脈絡膜黒色腫を照射するために最も見込みのある広く利用可能な方法は、一方の側面に接着した放射活性のペレットで小さなプラークを構成する工程を包含する。しかし、照射は、通常、嘔吐および脱毛のような有害な副作用が伴う。
【００４１】
サイクロトロンからの高エネルギー粒子（ヘリウムイオンまたは陽子ビームの照射）をまた使用して、腫瘍を照射し得る。まず、小さな金属クリップを強膜に縫いつけるための手術が行われ、その結果、この粒子ビームが正確に照準され得る。連続する数日間にわたって処置が施される。これらの処置に必要な器具は、世界中でいくつかの医療センターでのみ利用可能である。良好な結果が幾人かの患者で報告されたが、この方法で処置された多くの患者が、数年のみ追従した。よって、より一般的に使用されるプラークと比較した放射線治療のこれらの形態の長期での結果は、知られていない。
【００４２】
数年にわたって、他の処置が、少数の患者について使用された。白色光またはレーザー光を使用する光凝固術が、小さな腫瘍を焼くために使用され、そして寒冷療法が、腫瘍を凍結することによってこれらを殺傷するために使用された。これらの技術は、非常に小さな腫瘍についてのみ作用すると考えられている。幾人かの医者は、レーザーまたは寒冷療法を照射と組み合わせたが、このような処置は実験的であった。幾人かの患者は、彼らの眼から腫瘍を取り除くために、眼壁（ｅｙｅ ｗａｌｌ）切除または関連手順を受けた。これらの処置法は、ほとんどの医者によって実験的であると考えられており、そして少数の腫瘍についてのみ使用された。腫瘍を破壊するか、視覚を保護するか、または正常な寿命を確保することを保障し得る処置は、利用可能ではない。
【００４３】
別の眼の癌は、眼内黒色腫であり、この癌細胞中に稀な癌が、ブドウ膜と呼ばれる眼の一部において見出される。ブドウ膜は、色素を含むメラノサイトと呼ばれる細胞を含む。これらの細胞が癌性になる場合、この癌は、黒色腫と呼ばれる。ブドウ膜は、虹彩（眼の着色部分）、毛様体（眼中の筋肉）、および脈絡膜（眼の背後の組織層）を含む。虹彩は、開閉して眼に入る光量を変化させる。毛様体は、眼の内側のレンズの形状を変化させ、その結果、焦点が合う。脈絡膜層は、網膜の次にあり、映像を作製する眼の一部である。虹彩に始まる黒色腫がある場合、これは、虹彩上に黒点様に見え得る。黒色腫が毛様体または脈絡膜にある場合、ぼやけた視野を有し得るか、または症状を有し得ない。そしてこの癌は、気づかれる前に増殖し得る（出典：Ｔｈｅ Ｅｙｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｏｋ：ｗｗｗ．ｅｙｅｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ）。
【００４４】
眼内黒色腫からの回復（予後）の変化は、癌が眼内にある場合そしてこの癌が広がっている場合、癌のサイズおよび癌の細胞型に依存する。眼内黒色腫を有する患者全てに対する、処置が存在する。３つの処置型（すなわち、手術（癌の除去）、放射線療法（癌細胞を「殺傷」するための高用量ｘ線または他の高エネルギー線）、および光凝固術（腫瘍を養う血管を破壊する）が、一般に投与される。
【００４５】
手術は、眼内黒色種の最も一般的な処置である。医者は、以下の操作のうち１つを使用して癌を除去し得る：
−虹彩切除−虹彩の一部のみの除去；
−虹彩トラベクレクトミー−虹彩の一部および角膜（眼の前を被う清浄層）周辺の支持組織の除去；
−虹彩毛様体切除−虹彩および毛様体の一部の除去；
−脈絡膜切除−脈絡膜の一部の除去；
−摘出−眼全体の除去。
【００４６】
放射線療法をまた使用して、癌細胞を殺傷しそして腫瘍を縮小させるために、癌細胞が存在する領域にｘ線または他の高エネルギー線を適用し得る。放射線は、単独でかまたは手術と組み合わせて使用され得る。光凝固術処置もまた使用され得、ここで、光の極小ビーム（通常レーザー由来）が眼に適用され、血管を破壊し得そして腫瘍を殺傷し得る。
【００４７】
眼の疾患の処置について提唱される治療法の圧倒的大多数（特に、網膜下新生血管形成および眼の腫瘍）は、最初手術または放射線処置を利用する。患者が投薬単独または手術後の投薬で処置される場合、薬物投与は、一般に注射または経口のいずれかでの全身性である。前記したように、眼の疾患に対する手術または放射線処置は、両方とも痛みを伴い、しばしば長い回復期を必要とし、そして有害な副作用が続き得る。さらに、薬物の経口摂取または眼以外の部位での注射を介する全身性投与が、効果的な眼内濃度を達成するために、しばしば受容し得ない高レベルの薬物の投与を必要とする効果的ではない量でしばしば提供される。よって、癌疾患（例えば、角膜および網膜の新生血管形成）の処置に首尾よい非全身性治療の必要性が多く存在する。さらに、有害な副作用なく薬物および医薬を眼に送達することは、主要な難題を残す。本発明は、最小限の副作用を有する癌疾患の処置のためのチューブリン結合薬剤の効果的な非全身性投与を提供する治療を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００４８】
（発明の要旨）
本発明は、眼組織での悪性または非悪性の血管増殖性障害の処置のための、脈管標的化因子（「ＶＴＡ」）（特に、チューブリン結合薬剤）の投与を指向する。
【００４９】
眼組織の新生血管形成は、血管増殖によって特徴付けられる病原性状態であり、種々の程度の視力機能不全を有する種々の眼の疾患において生じる。悪性でない血管増殖性障害（例えば、湿性の黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症または早熟網膜症に関連する新生血管形成の薬理学的コントロールに対するＶＴＡの投与は、ほとんどの治療オプションが利用可能ではない患者に対して潜在的に有利である。別の実施形態において、本発明は、悪性の血管増殖性障害（例えば、眼の腫瘍）に関連する新生血管形成の薬理学的コントロールに対するＶＴＡの投与を提供する。
【００５０】
血液網膜関門（ＢＲＢ）は、網膜の毛細血管と網膜組織との間の特定の物質についての輸送バリアを形成する、堅固に連結した、特殊化した非有窓性の内皮細胞から構成される。固体腫瘍に関連する血管に酷似する、網膜症に関連する角膜および網膜の新生血管は、異常である。チューブリン結合薬剤、チューブリン重合のインヒビターおよび脈管標的化因子は、異常な血管を攻撃し得る。なぜなら、これらの血管は、血管網膜関門と構造的類似性を共有しないからである。チューブリン結合薬剤は、血管が腫瘍−脈管構造と構造的類似性を共有する疾患に酷似する疾患の進行を停止し得る。チューブリン結合薬剤の眼への局所（非全身性）送達は、硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）注射、トノン下注射、点眼イオン導入法、ならびにインプラントおよび／または挿入物を使用して達成され得る。全身性投与は、疾患器官もしくは疾患組織または罹患器官もしくは罹患組織（この場合、これらは眼である）から測定可能な距離だけ隔てた部位でチューブリン結合薬剤を血流へ投与することによって達成され得る。全身性投与の好ましい様式は、非経口投与または経口投与が挙げられる。
【００５１】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の添付の説明に記載される。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価な方法および材料のいずれかが、本発明の実施または試験に使用され得、好ましい方法および材料は、ここで記載される。本発明の他の特徴、目的および利点は、この記載から逸脱する。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形はまた、その文脈が他で明らかに示されないかぎり、複数形を含む。他で規定されない限り、本明細書中で使用される技術用語および科学用語の全ては、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書中に列挙される特許および刊行物の全てが、本明細書中に参考として援用される。
【００５２】
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
眼の疾患を処置するための方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を含有する投薬を調製する工程；
ｂ）該薬学的に有効な投薬量を、該処置を必要とする被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目９）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記被験体が、哺乳動物である、項目１に記載の方法。
（項目１４）
眼の疾患を処置するための薬学的医薬であって、眼の新生血管形成を減少させるために治療的に有効な量のチューブリン結合薬剤を、該処置を必要とする被験体への投与のために薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤またはアジュバントと組み合わせて含有する、薬学的医薬。
（項目１５）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１６）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１７）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管新生を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１８）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目１９）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２０）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２１）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２２）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目２０に記載の薬学的医薬。
（項目２３）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２４）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２５）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目２３に記載の薬学的医薬。
（項目２６）
前記被験体が、哺乳動物である、項目１４に記載の薬学的医薬。
（項目２７）
被験体において眼の新生血管形成を処置または予防する方法であって、該方法は、該被験体に、薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を投与する工程を包含する、方法。
（項目２８）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記眼の新生血管形成が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目２７に記載の方法。
（項目３１）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３２）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３３）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３５）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記被験体が、哺乳動物である、項目３０に記載の方法。
（項目３８）
眼の腫瘍を処置または予防する方法であって、該方法は、薬学的に有効な投薬量のチューブリン結合薬剤を、該処置または予防を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目３９）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記眼の腫瘍が、網膜芽細胞腫、原発性眼リンパ腫、脈絡膜黒色腫、および眼内黒色腫を含み得る、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４３）
前記薬学的に有効な投薬量が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、眼に非全身的に投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４４）
非全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記薬学的に有効な投薬量が、前記被験体に全身投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４６）
前記薬学的に有効な投薬量が、非経口投与される、項目３８に記載の方法。
（項目４７）
全身的に投与される、前記薬学的に有効な投薬量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記被験体が、哺乳動物である、項目３８に記載の方法。
（項目４９）
眼の疾患を罹患する被験体に投与するための、治療有効量のチューブリン結合薬剤を含有する、薬学的組成物。
（項目５０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４である、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５１）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５２）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍を含み得る、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５３）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目４９に記載の薬学的医薬。
（項目５４）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目４９に記載の薬学的医薬。
（項目５５）
前記治療有効量のチューブリン結合薬剤が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５６）
前記組成物が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５７）
非全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目５５に記載の薬学的組成物。
（項目５８）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目５９）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、非経口投与される、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目６０）
全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目５８に記載の薬学的組成物。
（項目６１）
前記被験体が、哺乳動物である、項目４９に記載の薬学的組成物。
（項目６２）
治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグ、および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含有する、薬学的投薬形態であって、該薬学的投薬形態は、該投薬形態を被験体に投与することによって、該被験体における眼の疾患を処置するためのものである、薬学的投薬形態。
（項目６３）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６４）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６５）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６６）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６７）
前記組成物が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目６８）
非全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目６６に記載の薬学的投薬形態。
（項目６９）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目７０）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、非経口投与される、項目６２に記載の薬学的投薬形態。
（項目７１）
全身的に投与される、前記治療有効量が、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、項目６９に記載の薬学的投薬形態。
（項目７２）
前記被験体が、哺乳動物である、項目６４に記載の薬学的投薬形態。
（項目７３）
眼の疾患を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とする被験体の眼に、該眼において、眼房水組織の約１ｎＭ〜約１００ｍＭの間の範囲の、チューブリン結合薬剤の濃度を達成するために十分な投薬量で、チューブリン結合薬剤を投与することによる、方法。
（項目７４）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７６）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目７３に記載の方法。
（項目７７）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目７３に記載の方法。
（項目７８）
前記チューブリン結合薬剤が、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に投与される、項目７３に記載の方法。
（項目７９）
眼の疾患を罹患する被験体の目に局所投与するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、該投与を必要とする被験体に投与するための、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントと組み合わせて、チューブリン結合薬剤を含有する、薬学的組成物。
（項目８０）
前記チューブリン結合薬剤が、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグである、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８１）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８２）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８３）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８４）
前記組成物が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目７９に記載の薬学的組成物。
（項目８５）
眼の疾患を罹患する被験体の眼に局所投与するための薬学的組成物であって、該組成物は、懸濁液、エマルジョン、または溶液中に、以下：
（ａ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の量の、ＣＡ４Ｐ；
（ｂ）約５ｍｇ／ｍｌのカルボキシメチルセルロース；および
（ｃ）約９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、
を含有する、薬学的組成物。
（項目８６）
前記組成物が、約６．６〜８．６の範囲の最終ｐＨ、約２９１〜４９２ｍ浸透圧モル／ｋｇ Ｈ２Ｏの範囲の浸透圧、および約５０〜６６ｍＰａ・ｓの範囲の粘度を有する、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８７）
前記眼の疾患が、網膜の新生血管形成、脈絡膜の新生血管形成、および眼の腫瘍の新生血管形成を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８８）
前記眼の疾患が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および網膜芽細胞腫を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目８９）
前記眼の疾患が、角膜の新生血管形成および黄斑変性を含み得る、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目９０）
前記組成物が、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目８５に記載の薬学的組成物。
（項目９１）
眼の疾患および眼の腫瘍を処置または予防するための薬学的組成物であって、該組成物は、該処置または予防を必要とする被験体への投与のための、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントと組み合わせて、治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグを含有する、薬学的組成物。
（項目９２）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、硝子体内注射、結膜下注射、眼周囲注射、トノン下注射を介して、点眼薬によって、眼ゲルによって、眼軟膏によって、イオン導入法によって、ならびに眼移植物および／または眼挿入物によって、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９３）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量で、前記被験体の眼に非全身的に投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９４）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、前記被験体に全身投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
（項目９５）
前記治療有効量のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグが、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量で、前記被験体に全身投与される、項目９１に記載の薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
本発明は、添付の図面を参照してより理解される。
【図１】図１は、哺乳動物の眼の正面および横からの解剖図である
【図２Ａ】図２Ａは、正常な黄斑を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、乾燥型の黄斑変性を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、湿性の黄斑変性を示す。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、ビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ投与２８日後での血管増殖阻害を示す角膜部分の拡大写真である。
【図４】図４Ａおよび図４Ｂは、ビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ全身性投与２８日後での角膜に対する変化（血管増殖の阻害）の顕微鏡組織学を示す。
【図５】図５Ａは、網膜芽細胞腫の動物モデルにおける眼の腫瘍の新生血管形成に対する単回用量のＣＡ４Ｐの効果を示す。図５Ｂは、反復用量のＣＡ４Ｐに続く網膜芽細胞腫の動物モデルにおける腫瘍退行の程度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
（発明の詳細な説明）
ヒトの眼は、構造的に独特ないくつかの特性を有する：ヒトの眼は環境に曝され、ひどく衰弱し、脈絡膜において高速の血流を有し、さらに前房および硝子体液は、完全に無血管でありかつ循環系から分離されている。眼の珍しい構造は、眼の状態、疾患、腫瘍および障害の処置のための、１つ以上の非全身性投与法によるチューブリン結合薬剤の送達について十分な機会を提供する。眼の単純化した解剖図を、図１に示す。
【００５５】
以前に記載したように、眼組織の新生血管形成は、種々の癌疾患において生じかつ種々の程度の視力機能不全に関連する病原性状態である。新生血管形成の病理学的コントロールは、湿性の黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症または早熟網膜症のような疾患を罹患する患者に潜在的に役立つ。
【００５６】
チューブリン結合薬剤は、有糸分裂中に細胞中のチューブリン結合補因子または補因子−チューブリン複合体に結合することによってチューブリンアセンブリを阻害し、そして分裂を阻止し、よって、細胞の増殖を阻止する。チューブリン結合薬剤は、チューブリン重合を阻害する広範なクラスの化合物を含み、これは、一般に、癌化学療法および他の非癌適用（例えば、眼の疾患）に有用な腫瘍選択的脈管標的化因子として機能する。
【００５７】
上記したように、眼の疾患を処置するための薬物の全身性投与の不利益の１つは、全身性投与が一般に効果的なレベルの薬物を眼に特異的に提供しないことである。全身性に投与された薬物は、眼に到達する前でさえ身体内で代謝され得るので、効果的な眼内濃度を達成するために、高レベルの薬物が、投与される必要性があり得る。眼の疾患を罹患する患者の眼への直接的な薬物の非全身性投与または局所投与は、投与されるべき薬物の効果的な濃度を可能にし、そして非常にその患者のためになる。
【００５８】
本発明に従うチューブリン結合薬剤の非全身性投与によって処置可能な眼の徴候としては、角膜、網膜または脈絡膜の新生血管形成によって特徴付けられる悪性でない血管増殖性疾患、ならびに悪性の血管増殖性疾患（例えば、眼の腫瘍および癌）が挙げられる。角膜の新生血管形成は、以下において生じる：トラコーマ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ウイルス介在性角膜炎、微生物性角結膜炎、角膜移植および火傷。これは、感染（トラコーマ、ヘルペス、リーシュマニア症、オンコセルカ症（ｏｎｃｈｏｃｅｒｏｉａｓｉｓ）、移植、火傷（熱、アルカリ）、外傷、栄養不全およびコンタクトレンズ誘導性損傷。網膜および／または角膜の新生血管形成は、黄斑変性、糖尿病網膜症および早熟網膜症において生じる。前房の新生血管形成は、緑内障において生じる。
【００５９】
本発明によって企図されるチューブリン結合薬剤の非全身性投与方法としては、以下が挙げられる：硝子体内（注射）、結膜下投与、眼周囲投与、トノン下注射、イオン導入法送達、点眼、ゲルまたは軟膏での局所投与、および眼挿入物または移植物を介して。
【００６０】
チューブリン結合薬剤は、眼の硝子体液への直接的な注射を介して硝子体内投与され得る。チューブリン結合薬剤はまた、結膜下注射によって結膜の下に、および眼周囲での注射を介して眼の周囲に、投与され得る。
【００６１】
チューブリン結合薬剤はまた、平滑チップＣｏｎｎｏｒ Ｃａｎｎｕｌａを用いてトノン下腔（トノン嚢の下）への注射によって投与され得る。適切な技術を用いて、チューブリン結合薬剤の投薬量を投与する医療専門家は、眼球を穿刺することおよび視神経を損傷することを避け得る。送達後、注射部位は麻痺し、そしてこの空間は、薬物の貯留部として働く。トノン腔下への投与は、硝子体注射より侵襲性ではない。
【００６２】
本発明の別の実施形態において、チューブリン結合薬剤は、薬物の徐放性および長期に渡る治療的に効果的な薬物濃度の維持を提供するために、生体適合性、生分解性、および／または生体侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）である、チューブリン結合薬剤を含む眼の移植物または挿入物として処方され得る。哺乳動物の眼への移植または挿入のための、薬物を含有する生体侵食性の眼のインプラントは、例えば、米国特許第５，９０４，１４４号および同第５，７６６，２４２号に記載される（これらはその全体が本明細書中に参考として援用される）。眼のインプラントは、一般に、眼内の所望の位置に置かれるカプセルを含む。このカプセルは、眼への連続的な制御された送達のために、１つ以上の医薬を含んでも、生物学的に活性な分子を生成する細胞を含んでもよい。この実施形態において使用され得る薬物の量は、その薬物の効果的な投与量、および眼上または眼内の挿入物またはインプラントからの放出速度に依存して変化する。
【００６３】
強膜は露出されるので、イオン導入法プローブが、眼の表面上に適用され得る。イオン導入法は、細胞膜を横切るイオン性化合物の流れを駆動するために電流を使用する。この技術は、現在、イオン性薬物の経皮送達に利用される。イオン導入法が薬物輸送を駆動する２つの主な機構は、以下である：（ａ）イオン導入法（ここで、荷電したイオンは、同一の電荷の電極から反発される）、および（ｂ）電気浸透（電場が適用される場合、対イオンの選択的通路に応答して、荷電した「ポア」を介して生じる溶媒の対流）。
【００６４】
チューブリン結合薬剤はまた、滅菌点眼形態での眼への局所投与のために処方され得る。
【００６５】
本発明に従うと、好ましいチューブリン結合薬剤は、潜在的な脈管標的化因子であるコンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ４（「ＣＡ４」）である。ＣＡ４は、水に実質的に不溶性である。この特徴は、この化合物の薬学的調製物の処方を干渉する。よって、コンブレタスタチンＡ４のより好ましいプロドラッグ形態（「ＣＡ４Ｐ」）は、ＣＡ４の一般に不十分な可溶性を補正するために利用される。しかし、本発明は、この局面に限定されず、そしてＣＡ４の処方物は、ＣＡ４Ｐと同等かまたはそれよりよく働き得る。
【００６６】
コンブレタスタチンは、熱帯および亜熱帯の低木および樹木であるコンブレタスタチン科に由来し、これは、潜在的に有用な生物学的特性を有する新たな物質の、事実上未踏のリザーバを示す。らい病（Ｗａｔｔら、「Ｔｈｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ａｎｄ Ｐｏｉｓｏｎｏｕｓ Ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｅａｓｔｅｒｎ Ａｆｒｉｃａ」、Ｅ＆Ｓ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，１９６２，１９４頁を参照のこと）（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ ｓｐ．ｒｏｏｔ）および癌（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ ｌａｔｉｆｏｌｉｕｍ）の処置としての多様な用途に対する、アフリカおよびインドの原始的な医療実践において公知である２５種（全体の１０％）を有するコンブレタスタチン属を、例示する。
【００６７】
コンブレタスタチンは、抗腫瘍性物質であることが見出された。多くのコンブレタスタチンが、単離され、構造的に解明され、そして合成された。米国特許第５，４０９，９５３号および同第５，５９，７８６号は、Ａ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３およびＢ−４と称されるコンブレタスタチンの単離および合成を記載する。これらの特許の開示は、これらの全体が本明細書中に参考として援用される。関連のコンブレタスタチン（コンブレタスタチンＡ４と示される）は、Ｐｅｔｔｉｔに対する米国特許第４，９９６，２３７号に記載され、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【００６８】
ＣＡ４Ｐは、米国特許第５，５６１，１２２号（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載される天然のコンブレタスタチンＡ４サブタイプの誘導体である。好ましいＣＡ４Ｐ化合物は、ＣＡ４構造中の−ＯＨ基にリン酸二ナトリウムを置換し、そしてこの−ＯＨ基は、ＣＡ４Ｐをインビボで水に不溶性のＣＡ４に戻す代謝性変換を可能にする。しかし、本発明はホスフェート誘導体に限定されず、そして他のプロドラッグ部分が、ＣＡ４化合物中の−ＯＨ基を置換し得る。さらにＣＡ４Ｐの二ナトリウム塩以外のホスフェートプロドラッグ塩が、本発明の目的について実質的に同一の方法で行われることが予想される。他のホスフェートプロドラッグ塩の例は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ０２／２２６２６およびＷＯ９９／３５１５０（これらの開示は本明細書中に援用される）に記載される。
【００６９】
ＣＡ４Ｐは、新脈管形成によって形成される腫瘍特異的血管を選択的に標的化および破壊することによって固体腫瘍を減少させる新たなクラスの薬物（抗腫瘍性脈管標的化因子）において最初である。抗腫瘍脈管標的化および新脈管形成阻害は、癌処置の慣用的なアプローチとは根本的に異なる関連の癌治療である。癌細胞に対する直接的な攻撃を含む伝統的な方法とは対照的に、これらの新たな薬物は、腫瘍の寿命支持系、新脈管形成の結果として形成する新たに出現する血管のネットワーク、以前から存在する血管からの新たな血管の出芽を標的化する。前臨床的な研究は、これらの治療の使用が腫瘍を減少させ得そして最終的には消失させ得ることを示した。さらに、ＣＡ４Ｐがインビトロおよびインビボでの動物細胞モデルにおいて使用された場合、血管毒性に対する著しい特異性を示した（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．４２（４）：８９５−９０３，１９９８；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７（１０）：１８３９−１８３４ １９９７）。
【００７０】
新脈管形成インヒビターおよび抗腫瘍脈管標的化因子（例えば、コンブレタスタチン）は両方とも、腫瘍の血管を標的化するが、これらは、そのアプローチおよび最終結果において異なる。新脈管形成阻害について、その目的は、腫瘍を養いかつ維持する腫瘍特異的血管の形成を阻害することによって腫瘍増殖を阻止する。一方、抗腫瘍脈管標的化について、その目的は、既存の血管を選択的に攻撃および破壊すること、これらの血管の迅速かつ不可逆な活動停止を作製することによって腫瘍を除去することである。このような効果は、抗新脈管形成薬では観察されない。抗脈管標的化活性のみが、腫瘍増殖を支持する既存の血管を破壊し得る。コンブレタスタチンはまた、新たな腫瘍脈管構造を産生および裏打ちする内皮細胞の増殖を阻害する能力（抗脈管形成活性）を有する。よって、コンブレタスタチンが抗腫瘍脈管標的化因子および抗脈管形成薬の両方として振舞い得ると、考えられている。前臨床的な研究において、両方の治療薬が、罹患していない正常組織に関連する血管を残すことが示されている。本発明は、ＣＡ４Ｐ投与の単独および／または眼の疾患の処置に対する医薬分野の現在の状態との組合せ投与を企図する。
【００７１】
新脈管形成によって形成される脈管構造はまた、眼の疾患（例えば、黄斑変性、増殖性糖尿病網膜症および早熟網膜症）を含む癌以外の疾患において観察された。実験的な眼モデルにおいてこのような脈管構造を低減させる予備的研究が、Ｄｏｎａｌｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｐｈ．Ｄ．，Ｄ．Ｓｃ．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｏｒｉｄａ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙの研究室から実施され、彼は、ＣＡ４Ｐが実験的な動物モデルの眼において予め形成された血管の退行速度を加速することを示した。図３Ａ、図３Ｂ、図４Ａおよび図４Ｂは、この実験において研究されたウサギの眼において予め形成された血管の退行を示す。
【００７２】
ＣＡ４およびＣＡ４Ｐは、抗腫瘍脈管標的化因子としての使用および新脈管形成のインヒビターとしての使用を含む、種々の疾患および徴候の処置のための、現在行われている臨床試験である。さらに、ＣＡ４Ｐは、網膜下の新生血管形成のような眼の疾患を処置する能力を示した。
【００７３】
本発明はまた、以下に記載されるようなコンブレタスタチンの合成アナログの使用を企図する：Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１１（２００１）８７１−８７４、３０７３−３０７６、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００２），４５：１６９７−１７１１、ＷＯ０２／５０００７、ＷＯ０１／１２５７９、ＷＯ００／３５８６５、ＷＯ００／４８５９０、ＷＯ０１／１２５７９、米国特許第５，５２５，６３２号、同第５，６７４，９０６号および同第５，７３１，３５３号。
【００７４】
ＶＴＡとして投与され得る他のチューブリン結合薬剤としては、以下の薬剤およびそれらのプロドラッグが挙げられる：２，３−二置換ベンゾ［ｂ］チオフェン（米国特許第５，８８６，０２５号；同第６，１６２，９３０号、および同第６，３５０，７７７号）、２，３−二置換ベンゾ［ｂ］フラン（ＷＯ９８／３９３２３）、２，３−二置換インドール（ＷＯ０１／１９７９４）、二置換ジヒドロナフタレン（ＷＯ０１／６８６５４）またはコルヒチンアナログ（ＷＯ９９／０２１６６）。さらに、血管標的化因子のさらなる非細胞傷害性プロドラッグ（これは、脈管増殖の部位において増強されたレベルで選択的に誘導される内皮の酵素の作用によって実質的に細胞傷害性薬物に変換される）は、ＷＯ００／４８６０６に開示される。
【００７５】
本発明に従って投与され得るさらなる既知のチューブリン結合薬剤としては、以下が挙げられる：タキサン、ビンブラスチン（ビンカアルカロイド）、コルヒチン（コルヒチノイド）、ドラスタチン、ポドフィロトキシン、ステガナシン（ｓｔｅｇａｎａｃｉｎ）、アンフェチニル（ａｍｐｔｅｔｈｉｎｉｌｅ）、フラボノイド、リゾキシン、キュラシン（ｃｕｒａｃｉｎ）Ａ、エポチロン（ｅｐｈｏｔｈｉｌｏｎｅ）Ａ、エポチロンＢ、ウェルウィスタチン（ｗｅｌｗｉｓｔａｔｉｎ）、フェンスタチン（ｐｈｅｎｓｔａｔｉｎ）、２−ストリキナゾリン（ｓｔｒｙｌｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ）−４（３Ｈ）−オン、スチルベン、２−アリール−１、８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン、および５，６−ジヒドロインドール（ｉｎｄｏｌｏ）（２，１−ａ）イソキノリン。
【００７６】
チューブリン結合薬剤をその必要のある被験体の眼へ投与および送達することについて、ヒトの眼がいくつかの構造的に独特な特性を有することを考慮することは重要である：ヒトの眼は環境に曝され、ヒトの眼はひどく衰弱し、ヒトの眼は脈絡膜において高速の血流を有し、さらに前房および硝子体液は、完全に無血管でありかつ循環系から分離されている。眼の珍しい構造は、代替の薬物送達法について十分な機会を提供する。この点において、投与の４つの非全身性様式が、本発明によって企図される：硝子体内投与（注射）、トノン下注射、イオン導入法送達、インプラント／挿入物および点眼送達。
【００７７】
眼の炎症および体内分布の研究、ならびにＣＡ４Ｐ投与後の角膜、脈絡膜または網膜の新生血管形成の動物モデルにおける血管増殖の阻害の研究は、以下の実施例の節に記載される。
【００７８】
従って、血管新生網膜症および眼の腫瘍は、種々の理由のためにそれ自体ＣＡ４Ｐ治療および他のチューブリン結合薬剤についての生存可能な標的である。すなわち：
・チューブリン結合薬剤は、網膜症に関連する異常な新生血管を攻撃し得る。なぜなら、これらの血管は、ＢＲＢと構造的類似性を共有しないからである。チューブリン結合薬剤は、血管が固体腫瘍構造と構造的類似性を共有する疾患に酷似する疾患の進行を停止し得る。さらに、チューブリン結合薬剤は、種々の前臨床的な研究において観察されるような新生血管の退行を生じ得る。
・網膜下新生血管形成について１００％効果的な処置が存在しないので、チューブリン結合薬剤は、当該分野の処置の現在の状態と組み合わせて使用される場合に、効果的な薬物であり得る。
・網膜症について現在最も改善された処置は、痛みを伴い得かつ長期の回復期を必要とし得る外科的介入を含む。チューブリン結合薬剤の非全身性投与または全身性投与は、処置の非手術形態である。
・全身的にかまたは非全身的に送達される場合、ＣＡ４Ｐは、角膜、網膜または脈絡膜の新脈管形成の動物モデルにおいて、および眼の腫瘍を有する動物モデルにおいて、脈管標的化因子としての裏付けを示す。
【００７９】
記載されるように、ＣＡ４Ｐならびに他の脈管標的化因子およびチューブリン結合薬剤は、角膜、網膜または脈絡膜の新脈管形成ならびに他の疾患および腫瘍のモデルにおいて、全身的に送達される場合の裏づけを示す。全身性投与の好ましい様式としては、非経口投与および経口投与が挙げられる。非経口投与は、１つ以上の皮膚層または筋膜の下またはこれらを介する注射による薬物の投与経路である。規定による非経口投与経路としては、経口−胃腸管（腸管）以外の任意の経路が挙げられる。非経口投与としては、静脈内経路、筋肉内経路および皮下経路が挙げられる。
【００８０】
本発明の薬学的組成物は、その意図される投与経路に適合可能であるように処方される。点眼局所投与のための薬学的組成物としては、点眼液、点眼ゲル、スプレー、軟膏、灌流および挿入物が挙げられる。チューブリン結合薬剤の局所的送達処方物は、所望の治療効果を達成するために十分長期間安定のままであるべきである。さらに、この因子は、眼の表面構造を透過しかつ疾患の部位において有意な量で蓄積しなければならない。さらに、局所的送達因子は、過剰量の局所毒性を引き起こすべきではない。
【００８１】
点眼剤の形態にある眼用溶液（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、一般に、水性媒体からなる。種々の極性の程度を有する広範な薬物に適応させるために、緩衝液、有機キャリア、無機キャリア、乳化剤、湿潤剤などが添加され得る。眼用の局所的処方物のための薬学的に受容可能な緩衝液としては、とりわけ、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩衝液、グルクロン酸緩衝液（ｇｌｕｃｏｒｏｎａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ）などが挙げられる。薬物キャリアとしては、水、低級アルカノールと水の混合物、植物油、ポリアルキレングリコール、石油ベースのゼリー、エチルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびミリスチン酸イソプロピル（ｉｓｏｐｒｏｐｌｙｌ ｍｙｒｉｓｔｒａｔｅ）が挙げられ得る。眼用スプレーは、一般的に、点眼剤と同じ結果を生じ、類似の様式にて処方され得る。いくつかの眼用薬物は、眼障壁を横切る透過性が乏しく、点眼剤としてもスプレーとしても投与できない。従って、軟膏が使用されて、接触時間を延長させ得、薬物吸収量を増大させ得る。眼の薬物溶液を用いた連続的かつ一定の灌流は、結膜嚢中にポリエチレンチュービングを入れることにより達成され得る。灌流液の流速は、眼の連続的灌注を生じるように、ミニポンプシステムを介して調節可能である。挿入物は、概して、上側結膜円蓋に配置されるか、またはあまり頻繁ではないが、切開された角膜（ｏｐｅｎ ｃｏｒｎｅａ）に取り付けるよりむしろ、下側結膜嚢に配置されることを除いて、角膜上に置かれるソフトコンタクトレンズに類似である。挿入物は、概して、涙中に溶解するか、または薬物を放出すると同時に崩壊する生物学的に可溶性の材料から作製される。
【００８２】
１つの実施形態において、活性化合物は、眼に移植されるインプラントまたは挿入物上に被覆される。本発明によって企図されるこのようなインプラントの１つの例は、Ｏｃｕｌｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ製のインプラントである。このＯｃｕｌｅｘインプラントは、ミクロカプセル化された薬物治療剤が眼内部に移植され得る生体分解性ミクロサイズポリマーシステムから構成される、生体分解性のＢＤＤＴＭ薬物送達デバイスである。このインプラントは、数日から数ヶ月〜数年もの長期の所定の時間にわたって、所望の薬物を、投薬が必要な眼の領域に直接放出させる。
【００８３】
投与の容易さおよび投薬の均一性のために投薬単位形態において局所的組成物を処方することが特に有利である。本明細書中で使用される場合、投薬単位形態とは、処置される被験体に一単位の投薬として適した物理的に別個の単位をいう；各単位は、必要な薬学的キャリアとともに、所望の治療効果を生成するように計算された所定の活性化合物の量を含む。本発明の投薬単位形態の仕様（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は、活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のためにこのような活性化合物を作るという技術に本質的な制限により示され、そしてこれらに直接依存する。本発明に従って処方物を生成するための方法に関するさらなる既知の情報は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｅｒ，ＰＡ，１５ｔｈＥｄ．（１９７５）のような当該分野における標準的参考文献中に見いだされ得る。
【００８４】
先に議論された非全身的投与経路に加えて、全身的投与経路の例としては、非経口投与（例えば、静脈内）、皮内投与、皮下投与、経口投与（例えば、吸入）、経粘膜投与、および直腸投与が挙げられる。非経口投与または皮下投与に使用される溶液または懸濁液としては、以下の成分が挙げられ得る：滅菌希釈液（例えば、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または重硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性を調節するための薬剤。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。非経口調製物は、硝子またはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアル中に封入され得る。
【００８５】
注射可能な使用に適切な薬学的組成物としては、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および滅菌注射可能溶液または分散液の用時調製のための滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与のために、適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は、滅菌でなければならず、容易にシリンジから出る程度に流動性であるべきである。この組成物は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物を含むキャリアは溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散の場合に必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖類）、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含めることは好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に含めることによりもたらされ得る。
【００８６】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物（例えば、脈管標的化薬剤）を、必要であれば、適切な溶媒（上記で列挙した成分の１以上の組み合わせ）中に必要な量で組み込み、続いて滅菌濾過することにより調製され得る。一般に、分散液は、活性化合物を、ベースの分散媒体および上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクル中に組み込むことにより調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌散剤の場合、調製の方法は、予め滅菌濾過したその溶液からその活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥および凍結乾燥である。
【００８７】
経口用組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る。経口治療剤投与のために、活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、錠剤、トローチ、またはカプセル剤の形態において使用され得る。経口用組成物はまた、うがい薬として使用するための液体キャリアを使用して調製され得る。ここで液体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、うがいによりゆすがれ（ｓｗｉｓｈｅｄ）、はき出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント物質は、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または類似の性質の化合物を含み得る：微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンのような結合剤；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはトウモロコシデンプン）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅ）；滑り剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、二酸化ケイ素コロイド）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；または矯味矯臭剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料）。
【００８８】
吸入による投与のために、化合物は、適切なプロペラント（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む加圧容器またはディスペンサー（すなわち、ネブライザ）からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【００８９】
全身投与はまた、経粘膜手段または経皮手段によってであり得る。経粘膜投与または経皮投与のために、透過されるべき障壁に適切な浸透剤が、処方物中で使用される。このような浸透剤は、一般に、当該分野で公知であり、これらの浸透剤としては、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用を介して達成され得る。経皮投与については、一般的に当該分野で公知であるように、活性化合物は、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲルまたはクリームに処方される。
【００９０】
化合物はまた、（例えば、従来の坐剤の基材（例えば、ココアバターおよび他のグリセリド）を用いて）坐剤または直腸送達のための保持浣腸（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｅｎｅｍａ）の形態において調製され得る。
【００９１】
上記のチューブリン結合薬剤に加えて、本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（例えば、水、グルコース、ラクトース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースならびに当該分野で一般的に公知の他の薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤が挙げられるが、これらに限定されない）とともに、チューブリン結合薬剤を含む薬学的組成物および処方物の使用を包含する。
【００９２】
本明細書中で使用される場合、用語「薬理学的に有効な量」、「薬学的に有効な投薬量」、または「治療的に有効な量」は、研究者または臨床医により調査されている組織、システム、動物またはヒトの、生物学的または医学的応答を誘発する薬物あるいは薬剤の量を意味する。被験体の眼に投与する（非全身投与）ためのＣＡ４Ｐの投薬量は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの範囲内である。眼において達成されるＣＡ４Ｐの濃度は、治療的に適切であるべきであり、約１ナノモル濃度〜１００ミリモル濃度の範囲内である。眼におけるより好ましいＣＡ４Ｐ濃度は、約１マイクロモル濃度〜１００マイクロモル濃度の範囲内である。ＣＡ４Ｐが全身投与される場合、約０．１ｍｇ／ｍ２〜約１２０ｍｇ／ｍ２の範囲内のコンブレタスタチンＡ４プロドラッグの量が、有利には、非経口的に投与される。
【００９３】
本発明に従うチューブリン結合薬剤の全身的投与および非全身的投与は、哺乳動物（特に、ヒト）への投与のために処方されることが意図される。しかし、本発明は、この点において限定されず、処方物は、同様に、動物に投与するための獣医学的ガイドラインに従って調製され得る。
【００９４】
本発明は、以下の実施例を参照することにより、さらに明確にされる。多くの改変（材料および方法の両方）が本発明の目的および意図から逸脱することなく実施され得ることは、当業者に明らかである。
【実施例】
【００９５】
（実施例１．３つの投与経路を使用して眼に局所的に投与した場合の、ＣＡ４Ｐの眼の刺激の研究および平均許容可能量（ＭＴＤ）の決定）
（ｉ）硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）投与
試験物品であるＣＡ４Ｐを、ウサギにおける硝子体内投与の後に眼内刺激を引き起こす潜在性について評価した。全身麻酔の後、８羽のウサギの右目に、０．２ｍｌ用量のＣＡ４Ｐを投与した。０．９％ 塩化ナトリウム（米国局方）溶液の０．２ｍｌ用量を、それらのウサギの左目に投与して、ネガティブコントロールとした。４種類の異なる濃度のＣＡ４Ｐを試験した。４種類の濃度の各々（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）を、２羽のウサギの右目に投薬した。処置の約４８時間後、生体顕微鏡（ｂｉｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｌｉｔ−ｌａｍｐ）および倒像検眼鏡を使用して眼を調べた。スコアを記録し、ウサギを安楽死させた。安楽死の直後、硝子体液のサンプルを取り出し、血球計算板を用いて白血球数を決定した。２００細胞／ｍｍ３以下の数を、許容可能とみなした。
【００９６】
コントロールの眼は、生体顕微鏡および倒像検眼鏡試験に基づいて、眼の組織において有意な変化がなかった。試験処置した眼に関しては、刺激の証拠が、１ｍｇ／ｍｌ濃度において１匹の動物で認められ、１００ｍｇ／ｍｌ濃度においては両方について認められた。硝子体液中の平均細胞数は、０．１ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については９細胞／ｍｍ３であり；１ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については９６２細胞／ｍｍ３であり；１０ｍｇ／ｍｌ濃度を与えられた眼については１０細胞／ｍｍ３であり；１００ｍｇ／ｍｌ濃度を投薬された眼については４０９細胞／ｍｍ３であり、コントロールの眼については５細胞／ｍｍ３であった。
【００９７】
研究条件下で、コントロールは、予測通りに反応し、眼の試験および硝子体分析において有意な反応が認められなかった。試験処置した動物について、両方の動物に、１００ｍｇ／ｍｌ濃度を投薬すると、両方の眼の試験において刺激および炎症が示され、硝子体の白血球分析から炎症の証拠が示された。低用量レベルの全て（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌおよび１０ｍｇ／ｍｌ）について、刺激の明らかな証拠も、炎症の明らかな証拠もなかった。
【００９８】
（ｉｉ）トノン下投与
試験物品であるＣＡ４Ｐを、一次性の眼の刺激について評価した。適切なＣＡ４Ｐ濃度（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）の２回の０．１ｍｌ注射を、２羽のウサギの右目のトノン腔下に注入した。緩衝化生理食塩水溶液の０．２ｍｌ部分を、左目のトノン腔下に注入して、ネガティブコントロールとした。サンプル点眼の２４時間後、４８時間後および７２時間後に、眼の反応を評価した。３日目に、ウサギを安楽死させ、眼を取り出した。標本を固定し、包埋し、そして組織学を行った。眼の組織における組織病理学的変化を記録した。トノン腔下変化の試験を強調した。
【００９９】
この研究の条件下で、対応するネガティブコントロールの眼と比較して、０．１ｍｇ／ｍｌおよび１．０ｍｇ／ｍｌ濃度で処置した眼においては刺激は認められなかった。対応するネガティブコントロールの眼と比較して、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ濃度で処置した眼においてわずかな刺激が認められた。
【０１００】
（ｉｉｉ）局所的点眼（ｔｏｐｉｃａｌ ｄｒｏｐ）
試験物品であるＣＡ４Ｐを、一次性の眼の刺激について評価した。ＣＡ４Ｐ希釈液（０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび１００ｍｇ／ｍｌ）の単一の０．２ｍｌ用量を、左目の下側結膜嚢に入れて、比較コントロールとした。反対側の眼に、緩衝化生理食塩水溶液を与えた。サンプル点眼の２４時間後、４８時間後、および７２時間後に、眼の反応を評価した。
【０１０１】
この研究の条件下で、試験物品希釈液の全ての肉眼で見える反応を、コントロールの反応と比較して、有意でないと見なした。顕微鏡的には、緩衝化生理食塩水溶液コントロール物品と比較して、試験物品を刺激物質と見なさなかった。
【０１０２】
結果のまとめを、以下の表に示す：
【０１０３】
【表１３】
（実施例２．異なる投与経路を用いて、眼に局所的に投与した場合の、ＣＡ４Ｐの体内分布の評価）
眼の新生血管形成の処置において有効であるために、非全身的な薬物投与方法は、眼の関連構造に浸透し、そして治療的に意味のある量の薬物を疾患部位に送達しなければならない。種々の非全身的注射の方法が、ＣＡ４Ｐの有意な体内分布を生じることを確認するために、放射標識された薬物の体内分布試験を実行した。
【０１０４】
（方法：）
以下に記載する場合を除いて、各体内分布について以下の実験プロトコルに従った。
【０１０５】
１４Ｃ−ＣＡ４Ｐ（ＯＸｉＧＥＮＥ Ｉｎｃ．，Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，ＭＡ）を、１００ｕｌ容量の生理食塩水に再懸濁し、そして麻酔した雄性Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄウサギ（４月齢、１．８〜２．５ｋｇ、サンプルあたりｎ＝３）の右眼に３０Ｇ針を用いて注射した。３つの異なる濃度の１４Ｃ−ＣＡ４Ｐを、それぞれ適用した１、５、および５ｕＣｉの用量の放射活性に対応して試験（１、１０、１００ｍｇ／ｍｌ）した。ブランクコントロール群もまた含めた。ウサギを、１、６、２４、および４８時間で麻酔し、血液を採取した。血液採集後、これらの動物をＰｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ注射によって安楽死させ、全ての試験動物から処置した右眼を摘出した。眼組織サンプルを、角膜、房水、硝子体、脈絡膜、または網膜から解剖し、２０ｍｌのガラスシンチレーションバイアルに入れ、ボルテックスし、そして５００ｕｌ消化流体と共に２４時間インキュベートした。血漿を、遠心分離（１，８００ｇで１０分間）によって全血から分離した。眼の組織サンプルと血漿の両方を、放射活性をカウントする前２４時間にわたって、１６ｍｌのＨｉｏｎｉｃ ＦｌｕｏｒＴＭ シンチレーション流体と共に室温でインキュベートした。各サンプルをＢｅｔａｍａｔｉｃ Ｖカウンター（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔ Ｑｕｅｎｔｉｎ ｅｎ Ｙｖｅｌｉｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）において５分間カウントした。１分あたりのカウント（「ｃｐｍ」）の、１分あたりの崩壊（「ｄｐｍ」）への換算を、１４Ｃ標準から得た較正曲線および１４Ｃ標準でスパイクしたそれぞれのブランクマトリクスからのクエンチ曲線を用いて、βカウンターによって自動的に実行した。薬物の濃度を、ＣＡ４Ｐ（組織のｎｇ−Ｅｑ／ｇ）ｎｇ等量（測定したｄｐｍ値、組織標本の重量、および薬物の比活性（０．３７ｍＣｉ／ｍｇ）から計算し、その後コントロールの眼組織から対応するバックグランドを引いた）によって決定した。１ｕＭ ＣＡ４Ｐの組織濃度は、４４０ｎＥｑ／組織と等しい。
【０１０６】
（結果：）
（ｉ）硝子体内投与
表１は、硝子体内投与後の体内分布の結果を示す。全ての実験した組織において、眼浸透の程度は、眼の表面に配置されたＣＡ４Ｐ濃度に依存した。眼において最も高い薬物濃度（「Ｃｍａｘ」）は、投与後１時間以内に達成した。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、全ての試験した濃度において網膜に送達された。高濃度の薬物もまた、硝子体および強膜において見出された。眼の房水または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１０７】
（表１：硝子体内注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１０８】
【表１】
（ｉｉ）トノン下（ｓｕｂ−Ｔｅｎｏｎ）投与
（１）体内分布
表２は、トノン下注射後の体内分布の結果を示す。全ての実験した組織において、眼浸透の程度は、眼の表面に配置されたＣＡ４Ｐ濃度に依存した。眼において最も高い薬物濃度は、投与後１時間以内であった。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、１００ｍｇ／ｍｌおよび１０ｍｇ／ｍｌの投与用量で、網膜および脈絡膜に送達された。高濃度の薬物もまた、強膜において見出された。硝子体、房水または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１０９】
（表２：トノン下注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１０】
【表２】
（ｉｉｉ）結膜下投与
結膜下注射を、０．１、１、１０および１００ｍｇ／ｍｌの用量で投与した。１４Ｃ−ＣＡ４Ｐ溶液を、０．２４％ １０Ｎ ＫＯＨおよび０．０１％塩化ベンザルコニウムと共に処方し、そして１００ｕｌの容量で注射した。動物を、右眼の単回結膜下注射により、５ｕＣｉの適用用量で処置した。送達後、眼を２〜５秒間、穏やかに閉じさせた。以下の表３に、実験の結果を示す。
【０１１１】
眼において最も高い薬物濃度は、投与後１時間以内であった。薬物の治療関連濃度（＞１ｕＭ）は、１００、１０および１ｍｇ／ｍｌの投与用量で、角膜、網膜および脈絡膜に送達された。硝子体または血漿において、薬物は相対的にほとんど見出されなかった。
【０１１２】
（表３：結膜下注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１３】
【表３】
（ｉｖ）眼周囲投与
表４は、眼周囲注射後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、その眼の表面上に配置されたＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、全ての投与用量にて、網膜および脈絡膜に送達した。高濃度の薬物はまた、強膜においても観察された。相対的に少量の薬物が、硝子体または血漿において見出された。
【０１１４】
（表４：眼周囲注射後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１１５】
【表４】
（ｖ）局所処方物
局所ゲルおよび局所溶液を、眼の表面へのＣＡ４Ｐの局所送達に適切な局所処方物として使用するために開発した。局所溶液（１％、３％、および１０％）を、０．９％ ＮａＣｌ（Ａｇｕｅｔｔａｎｔ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）中に直接調製し、そして０．２μｍのフィルターを用いて滅菌した（ｐＨ：６．４〜８．５、浸透圧モル濃度：２９０〜４５９ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ Ｈ２Ｏ）。低粘度の局所ゲル（１％、３％、および１０％）を、０．９％ ＮａＣｌを用いて、０．５％カルボキシメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｉｍｉｅ，Ｓｔ．Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）中で調製した。各ゲルの物理化学的仕様を、表５に示す。
【０１１６】
（表５：局所ＣＡ４Ｐゲル処方物）
【０１１７】
【表５】
局所処方物を、５０μｌの容量中、５μＣｉの適用用量にて、右眼表面に適用した。強膜の代わりに、角膜をサンプリングした。サンプルを、０．５時間、１．６時間、および２４時間で採取した。
【０１１８】
表６は、各局所ＣＡ４Ｐゲル処方物の投与後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、各ゲル処方物中のＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、３つ全てのゲル処方物を用いて、角膜、網膜および脈絡膜に送達した。相対的に少量の薬物が、血漿において見出された。
【０１１９】
（表６：ゲルの局所投与後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１２０】
【表６】
表７は、各局所ＣＡ４Ｐ溶液処方物の投与後の体内分布の結果を示す。試験した全ての組織において、眼浸透の程度は、各溶液処方物中のＣＡ４Ｐの濃度に依存した。眼内の薬物の最高濃度は、投与後の最初の１時間内にあった。治療学的に適切な濃度（＞１μＭ）の薬物を、３つ全ての溶液処方物を用いて角膜に送達し、一方、１０ｍｇ／ｍｌ用量が、網膜および脈絡膜への、有意な量の薬物送達を生じた。
【０１２１】
（表７．溶液処方物の局所投与後のＣＡ４Ｐの体内分布）
【０１２２】
【表７】
これらの試験から、任意の種々の方法によるＣＡ４Ｐの非全身送達は、角膜、網膜、または脈絡膜において治療学的に適切な薬物濃度を達成するのに有効であることが明らかである。これらの組織の各々は、眼の潜在的な新生血管形成部位である。
【０１２３】
（実施例３．イオン浸透法によるＣＡ４Ｐの眼投与）
ＣＡ４Ｐは、生理学的ｐＨにてイオン化可能であり、そのため、イオン浸透送達に従う。ＣＡ４Ｐの経強膜（ｔｒａｎｓｃｌｅｒａｌ）イオン浸透送達の有効性を、塩化銀被覆銀箔電流分布成分で裏打ちされた１８０μｌのシリコーンレセプタクルシェル、コネクタリードワイヤ、およびヒドロゲル含浸ポリビニルアセタールマトリクスの単層（これに、ＣＡ４Ｐ（１０ｍｇ／ｍｌ）を投与した）から構成される、接眼ウサギ眼用塗布器（ｏｃｕｌａｒ ｒａｂｂｉｔ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ）（ＩＯＭＥＤ
Ｉｎｃ．，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）を使用して、評価した。塗布器の接触面面積は、０．５４ｃｍ２であった。この塗布器を、縁部（その先端部は、角強膜の接合部から１〜２ｍｍ遠位にある）の上盲嚢（ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｕｌ−ｄｅ−ｓａｃ）において、ニュージーランド白色ウサギ（３〜３．５ｋｇ、各処置について、ｎ＝６）の右眼の強膜に配置した。直流のアノードイオン浸透を、２ｍＡ、３ｍＡ、および４ｍＡにて２０分間、Ｐｈｏｒｅｓｏｒ ＩＩＴＭＰＭ７００（ＩＯＭＥＤ Ｉｎｃ．，Ｓａｌｔ
Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）電源を使用する、各塗布器を用いて行った。受動的イオン浸透（０ｍＡで２０分間）を、コントロールとして使用した。処置後、その動物を安楽死させ、そして眼を、処置の３０分間後に摘出し、水道水でリンスし、そして−７０℃にて凍結した。網膜組織および脈絡膜（ｃｈｏｉｒｏｄａｌ）組織を、これらのサンプルから部検した。
【０１２４】
ＣＰ４Ａ、ＣＡ、および内部標準ジエチルスチルベストロール（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）を、クロマトグラフィータンデム質量分析法（「ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ」）を使用して、約１００ｍｇの組織から定量した。メタノール抽出物のアリコートを、ＨＰＬＣカラムを備えたＳＣＩＥＸ ＡＰＩＯ ３０００ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ装置に注入した。ＣＡ４３のｍ／ｚ３１５→２８５生成物イオンおよびＣＡ４Ｐのｍ／ｚ３９５→７９生成物イオンのピーク領域を、内部標準のｍ／ｚ２６７→２３７生成物イオンのピーク領域に対して測定した。各実行の直前に調製された強化較正標準から作成した、加重（１／Ｘ）線形最小二乗回帰解析を使用して、定量を行った。この最初のコンブレタスタチン量は、定量範囲よりも有意に多く、そのため、解析後に外挿しなければならなかった。表８が示すように、脈絡膜および網膜への全コンブレタスタチンの送達は、受動的送達と比較した場合、イオン浸透法によって約１５倍増加される。これらのレベルは、チューブリン結合を阻害するために治療学的に適切な濃度であると考えられる濃度（２〜３μＭ）の数千倍超過を表わす。しかし、この網膜／脈絡膜への送達は、電流依存性ではないようであった。
【０１２５】
（表８．網膜／脈絡膜へのコンブレタスタチン送達のイオン浸透増強（平均±標準偏差））
【０１２６】
【表８】
（実施例４．ＣＡ４Ｐの全身投与による角膜の新生血管形成の処置）
病原性の眼の新脈管形成を刺激するために、眼の新生血管形成を、３０μｇの投薬量にて、ウサギの眼に角膜内注射によって脂質ヒドロペルオキシド（ＬＨＰ）を投与することによって、誘導した。数日〜１４日後に、眼血管が、ＬＨＰ侵襲（ｉｎｓｕｌｔ）に起因して、この注射された眼に形成された。被験体を、２つの群に分けた；１つの群の被験体は、５日間にわたる１日１回、４０ｍｇ／ｋｇの投薬量での静脈内投与による、所定のコンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムを受け、一方、コンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムを含まないビヒクルを、同じ期間にわたる水の投薬としての静脈内投与によって、他の群に投与した。両方の群の眼を、７日後に試験した。コンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウムで処置した群において、４０％以上の血管の減少が観察されたが、他の群においては、観察されなかった。
【０１２７】
（実施例５．ＣＡ４Ｐの全身投与による角膜の新生血管形成の処置）
ＣＡ４Ｐが角膜の新生血管形成を阻害する能力を評価するために、ウサギの角膜モデルを使用した。このモデルにおいて、新生血管形成を、リノール酸ヒドロペルオキシド（「ＬＨＰ」）注射（Ｕｅｄａら、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９７，１：１７４−１８４）によって誘導した。角膜支質におけるＬＨＰの注射は、この角膜内の脈管形成サイトカインの局在産生を刺激する。周囲叢（ｃｉｒｃｕｍｌｉｍｂａｌ ｐｌｅｘｕｓ）の血管は、ＬＨＰ注射部位の方に移動することによって、脈管形成刺激に応答した。全身に送達されたＣＡ４Ｐの治療学的効果を、これらの成長する血管の長さを測定することによって評価した。
【０１２８】
（実験方法）
以下の表９に概略されるように、成体雄ニューヨークウサギ（２．７〜３．０ｋｇ）に、上縁から５ｍｍのところに、ＬＨＰ（６０μｇ）の１０μｌ懸濁液を注射して、角膜の脈管形成を誘導した。血管は、０．２５ｍｍ／日の速度で成長した。群２および群４に、それぞれ、血管成長の３日後および１０日後に、ＣＡ４Ｐ（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内（「ＩＰ」）注射した。処置群１および３に、ＬＨＰ注射後３日目および１０日目に、生理食塩水コントロールを注射した。この角膜の表面写真を、ＬＨＰ注射後、０日目、３日目、６日目、１２日目、１７日目、および２８日目に撮影した。各写真撮影の後、角膜血管を、手術用顕微鏡下で観察し、Ｃａｓｔｒｏｖｉｅｊｏカリパスを使用して、最も顕著な血管の長さを測定した。
【０１２９】
最長血管の測定に加えて、２８日目に組織学分析を行って、溶解した細胞外マトリクスの量、血管壁の厚さ、および血管の分枝の程度を評価した。安楽死させた動物から眼球を摘出し、その硝子体を、各眼から取り出し、その後、４％パラホルムアルデヒドで４５分間、および０．２Ｍカコジル酸緩衝液（ｐＨ７．４）で一晩、固定化した。眼をパラフィン中に包埋し、３μｍ厚に切り出し、そして溶血素およびエオシンで染色した。
【０１３０】
（表９．実験計画）
【０１３１】
【表９】
（結果）
表１０および表１１は、処置の介入時間および処置回数の関数として、血管の長さに対するＣＡ４Ｐの効果を要約している。ＣＡ４Ｐ処置を用いて、最初の脈管刺激から３日以内に介入した場合（表１０、群２）、薬物は、新生脈管成長の完全な阻害を引き起こした。対照的に、ビヒクルコントロール群における血管は、成長し続けた。この効果を、脈管形成阻害または脈管形成効果として定性化し得る。ＣＡ４Ｐ処置を用いて、脈管刺激の１０日後に介入した場合（表１１、群２）、その効果は、同じであった。
【０１３２】
（表１０：初期介入：３日目に処置を開始する）
【０１３３】
【表１０】
（表１１：後期介入：１０日目に処置を開始する）
【０１３４】
【表１１】
図３Ｂは、２８日目でのＣＡ４Ｐで処置した眼の表面写真を示す。この写真は、図３Ａに示したビヒクルコントロールの眼と比較した、ＣＡ４Ｐ投与後２８日目における血管成長の阻害をさらに示す。
【０１３５】
図４Ａおよび図４Ｂで示される顕微鏡写真（倍率４００×）は、２８日目に同じサンプルから得られた、染色した組織化学的検体の例である。ビヒクルで処置した動物（図４Ａ）において、血管は、丸く見え、多数現れた。対照的に、ＣＡ４Ｐで処置した動物（図４Ｂ）において、血管は、狭くより少数現れた。さらに、血管後退の証拠が、ＣＡ４Ｐの介入の後期段階の間で観察された（データは示さず）。ＣＡ４Ｐは、確立した血管の幅を減少させ得、血管からの分枝の出芽を有意に阻害し得たようであった。これは、さらなる脈管標的化効果を示す。
【０１３６】
（実施例６．ＣＡ４Ｐの全身投与による、黄斑変性の動物モデルにおける脈絡膜の新生血管形成の処置）
脈絡膜の新生血管形成は、加齢性黄斑変性または湿潤性黄斑変性を有する患者における重篤な視覚損失の主要な原因である。脈絡膜においてＣＡ４Ｐが血管成長を阻害する能力を調査するために、脈絡膜の新生血管形成のマウスモデルを試験した。このモデルにおいて、研究者らは、クリプトンレーザを使用して、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスのブルーフ膜上に創傷を作製した。各眼は、いくらかの火傷を受けた。この火傷は、脈絡膜内に新生血管形成を誘導する、古典的な創傷治癒応答を誘発した。このクリプトンレーザ光凝固方法は、Ｔｏｂｅら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９８，１５３（５）：１６４１−６において記載されている。動物の部分集合（ｎ＝１９）において、ＣＡ４Ｐを、用量１００ｍｇ／ｋｇ／日にてＩＰ注射によって、全身投与した。組織病理学およびフルオレセイン血管造影法を用いて、火傷の周辺の新生血管形成を同定した。電子顕微鏡検査法を用いて、脈絡膜の新生血管損傷内における有窓新生血管の管腔直径を測定した。表１２は、平均血管管腔面積に対するＣＡ４Ｐ処置の結果を示す。ＣＡ４Ｐで処置した動物は、生理食塩水で処置した動物（ｎ＝３３）と比較した場合、約５０％少ない血管管腔面積（ｍｍ２）を有した。これらの結果の統計学的分析は、高度な有意性を示した。
【０１３７】
（表１２．ＣＡ４Ｐで処置したマウスおよびビヒクルで処置したマウスの平均管腔面積）
【０１３８】
【表１２】
（実施例７．ＣＡ４Ｐの全身投与による、未熟児網膜症のマウスモデルにおける網膜の新生血管形成の処置）
哺乳動物の眼の内部網膜は、表在網膜の毛細血管床から酸素を受け取る。この毛細血管床は、内境界膜の下に位置され、この膜は、内部網膜と外部の無血管硝子体との間で境界面として働く。網膜の新生血管形成および網膜症の病理は、虚血（これは、網膜の内境界膜を越えて硝子体内に、新生血管形成の成長を誘導する）から生じ、重篤な視覚損失を引き起こし、しばしば網膜剥離の原因となる。酸素誘導性網膜新生血管形成の十分に特徴付けされたマウスモデルは、早熟で産まれた乳児によって示される未熟児網膜症（「ＲＯＰ」）を綿密に模倣し、種々の他の虚血誘導性未児網膜症（糖尿病性網膜症が挙げられる）に共通な特徴を示す（Ｓｍｉｔｈら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ，１９９４，３５：１０１−１１）。このモデルにおいて、新生期のマウスを、持続性高酸素条件下（７５％酸素で７日間）に曝した。この条件は、表在網膜の毛細血管床の発達を阻害する。マウスの子を、純粋な酸素環境から離し、環境酸素の相対的低酸素中に置いた場合、発達不十分な表在網膜の毛細血管床は、十分な量の酸素を角膜に送達することができない。この網膜は、重篤な病理学的結果を引き起こす脈管形成サイトカインを生成することによって、酸素不足に応答する。脈管形成サイトカインの局在生成は、発達不十分の表在網膜の毛細血管床が、内境界膜を破壊する新たな血管を出芽するのを引き起こし得る。硝子体における異常な血管の成長は、重篤な瘢痕組織の形成および牽引誘導性網膜剥離を引き起こす。
【０１３９】
高酸素条件からの除去直後に、ＣＡ４Ｐで新生マウスを処置することは、ＲＯＰのために有効な処置方法であることが予期される。網膜の新生血管形成を、既存の方法（Ｍａｊｋａら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ，Ｓｃｉ．２００１，４２：２１０−１５）に従って、処置した眼および未処置の眼の網膜組織切片における穿通性内皮細胞の化学染色された核の数を計数することによって、定量し得る。内境界膜を穿通する核の数は、ＣＡ４Ｐの眼において有意に減少されると予測される。
【０１４０】
（実施例８．ＣＡ４Ｐの結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｃｔｉｖａｌ）投与による、網膜芽細胞腫のマウスモデルにおける眼の腫瘍の処置）
網膜芽細胞腫のマウストランスジェニックモデルを使用した。このモデルにおいて、ＳＶ−４０ラージＴ抗原陽性マウスは、ヒト小児網膜芽細胞腫に似ている左右の網膜芽細胞腫を発症する。このモデルにおいて、腫瘍が、最初に４週齢で現れ、そして安定でかつ再現可能な様式で発達する（Ｈａｙｄｅｎら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００２；１２０（３）：３５３−９）。１つの実験において、１２週齢の動物（ｎ＝４８）を、右眼のみにおいて、ＣＡ４Ｐの単回の２０μｌ結膜下注射（１００ｍｇ／ｍｌ）で処置した。コントロールマウス（ｎ＝８）を、平衡塩溶液（「ＢＳＳ」）で処置した。眼を、処置後１日、３日、７日、１４日、２１日、および２８日に摘出することによってサンプリングした（ｎ＝８（眼／サンプリング））。サンプルを固定し、パラフィン包埋し、連続的に切り出し、そしてヘマトキシリン、エオシン、およびＰＡＳで事前に染色した。各組織サンプルを、組織病理学的腫瘍血管応答について試験した。図５Ａに例示されるように、腫瘍内新生血管形成の有意な減少が、１日目、３日目、および７日目に見られた。
【０１４１】
別々の投薬実験において、動物（ｎ＝４８）を、２０μｌの容量において１００ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌまたは０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度にて、隔週での６回の連続的なＣＡ４Ｐの結膜下注射で処置した（ｎ＝６（眼／サンプリング））。コントロール群（ｎ＝６）は、ＢＳＳの連続的な結膜下注射を受けた。眼を、処置後２８日目に摘出し、そして腫瘍容量の減少について試験した。図５Ｂは、コントロールと比較した、腫瘍血管容量に対するＣＡ４Ｐの用量依存性効果を例示する。腫瘍内血管分布は、１０ｍｇ／ｍｌより高い処置用量レベルでは存在せず、毒性の証拠は、いかなる時点においてもいかなる処置用量においても注目されなかった。
【０１４２】
（他の実施形態）
本発明は、その詳細な説明とともに記載されてきたが、前出の記載は、例示を意図しており、本発明の範囲を制限することを意図していないことが理解されるべきであり、本発明は、添付の特許請求の範囲の範囲によって規定される。
【０１４３】
図面は、必ずしも一定の比例に拡大縮小して描かれるわけではなく、本質的には、単に概念上のものであることもまた、理解されるべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００９−１３２７３８（Ｐ２００９−１３２７３８Ａ）
【公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−６３６６４（Ｐ２００９−６３６６４）
【出願日】平成２１年３月１６日（２００９．３．１６）
【分割の表示】特願２００３−５１１８０８（Ｐ２００３−５１１８０８）の分割
【原出願日】平成１４年７月１５日（２００２．７．１５）
【出願人】（５０３２２４７９２）オキシジーン， インコーポレイテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１６日（２００９．３．１６）
【分割の表示】特願２００３−５１１８０８（Ｐ２００３−５１１８０８）の分割
【原出願日】平成１４年７月１５日（２００２．７．１５）
【出願人】（５０３２２４７９２）オキシジーン， インコーポレイテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]