糖尿病及び過食症を治療するためのＧＬＰ−１ペプチド及び短時間作用型インスリンペプチドを含む、非経口投与用の可溶性医薬組成物
食事関連インスリンペプチド及びインスリン分泌性ペプチドを含む非経口投与用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は医薬組成物の分野に関する。より具体的には、本発明は医薬的に活性な２つの異なるペプチドを含む医薬組成物に関する。
【発明の背景】
【０００２】
糖尿病は、グルコースの利用能が部分的または完全に失われている代謝障害である。全人口の約５％が糖尿病を患っており、この病気は流行病にまで広がっている。１９２０年代にインスリンが導入されて以来、糖尿病の治療を改良するための努力が続けられている。糖尿病患者は数十年間にわたり長期治療を受けるので、安全であり、便利であり且つ生活の質を向上させるインスリン製剤が特に要望されている。
【０００３】
糖尿病の治療において、多種類のインスリン製剤、例えばレギュラーインスリン、イソフェンインスリン（ＮＰＨと呼ぶ）、インスリン亜鉛懸濁液(例えば、セミレンテ（登録商標）、レンテ（登録商標）及びウルトラレンテ（登録商標）)及び二相性イソフェンインスリンが示唆され、使用されている。市販されているインスリン製剤の幾つかは作用が即効性であるという特徴を有し、他の製剤は比較的遅効性であるが作用時間は多少長い。即効性インスリン製剤は通常インスリン溶液であり、遅効性インスリン製剤は亜鉛塩及び／またはプロタミンを添加すると沈殿する結晶質及び／または非晶質形態のインスリンを含有する懸濁液であり得る。
【０００４】
通常、インスリン製剤は皮下注射により投与されている。患者にとって重要なことは、注射からの時間の関数としてのグルコース代謝に対するインスリンの作用であるインスリン製剤の作用プロファイルである。このプロファイル中、特に開始時間、最大値及び全作用時間が重要である。患者は異なる作用プロファイルを有する各種インスリン製剤を望んでおり、且つ必要としている。
【０００５】
ヒトインスリンは２つのポリペプチド鎖、すなわち２１個のアミノ酸残基を含有する所謂Ａ鎖及び３０個のアミノ酸を含有する所謂Ｂ鎖から構成されている。Ａ鎖及びＢ鎖は２つのシスチンジスルフィド架橋により相互接続している。他の多くの種に由来するインスリンは同様の構造を有しているが、同一位置に同一アミノ酸残基を含んでいないことがある。最近１０年で、多数のヒトインスリンアナログが開発された。これらは特定の作用プロファイル、すなわち即効性または持続作用のために設計されている。
【０００６】
糖尿病の治療において非常に重要となると予想される別のペプチドは、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）である。ヒトＧＬＰ−１は、なかんずく遠位回腸、膵臓及び脳中のＬ細胞において合成される、プレプログルカゴンに由来する３７アミノ酸残基ペプチドである。ＧＬＰ−１は、グルコース代謝、胃腸分泌及び代謝において調節機能を有する重要な消化管ホルモンである。ＧＬＰ−１は、グルコース依存的にインスリン分泌を刺激し、インスリン生合成を刺激し、β細胞レスキューを促進し、グルカゴン分泌、胃排出及び摂食を抑制する。このペプチドの断片及びアナログを指すために簡単なシステムを使用している。例えば、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）は、天然アミノ酸残基の８位（Ａｌａ）をＧｌｙで置換することにより、ＧＬＰ−１（７−３７）から形式的に誘導されたＧＬＰ−１（７−３７）のアナログを示す。また、Ｌｙｓ３４（Ｎε−テトラデカノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）は、３４位のＬｙｓ残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されているＧＬＰ−１（７−３７）を示す。国際特許出願公開第９８／０８８７１号パンフレット及び国際特許出願公開第９９／４３７０６号パンフレットは、親油性置換基を有するＧＬＰ−１アナログの安定な誘導体を開示している。これらのＧＬＰ−１アナログの安定な誘導体は、対応のＧＬＰ−１アナログに比して長い作用プロファイルを有している。
【０００７】
２型糖尿病患者は世界中で急速に増えつつあるので、より有効な薬物を簡単に投与することが非常に要望されている。血糖を非常に効果的に且つ安全に下げるためにＧＬＰ−１の複合効果が期待される。しかしながら、一部の患者でしか、主食と一緒の非常に少量のインスリンの効果が得られないことがあり得る。インスリンペプチド及びＧＬＰ−１ペプチドを含む配合製剤は、２つの薬物の比が一定で非常に効率的な治療であり、同一患者に投与するときの注射の量が少なくてすむであろう。食事と一緒には低量のインスリンしか与えられないが、製剤中のＧＬＰ−１対応物が残りの日中および夜間の糖をコントロールし、ＧＬＰ−１は低血糖を誘発しないので、非常に安全な治療でもあり得る。
【０００８】
よって、１つの配合製剤で食事関連インスリン及びＧＬＰ−１ペプチドを含む安定な医薬組成物が強く要望されている。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の１目的は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用の可溶性医薬組成物を提供することである。本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは約７．０〜約９．０である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは約７．０〜約８．０である。
【００１０】
本発明の別の目的は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む可溶性医薬組成物を有効量非経口投与することを含む高血糖症の治療方法を提供することである。
【定義】
【００１１】
以下は、本明細書中で使用される用語の詳細な定義である。
【００１２】
本明細書中で使用される用語“有効量”は、治療なしと比較して患者の治療が有効であるのに十分な用量を意味する。
【００１３】
本明細書中で使用される用語“薬剤”は、医薬活性化合物を患者に投与するのに適した医薬組成物を意味する。
【００１４】
本明細書中で使用される用語“医薬組成物”は、活性化合物またはその塩と共に医薬用賦形剤、例えば緩衝剤、保存剤及び張性調節剤を含む製品を意味し、この医薬組成物は該医薬組成物をヒトに投与することにより病気または障害を治療または予防、或いはその重篤度を緩和するのに有用である。よって、医薬組成物は当業界で医薬調製物としても公知である。
【００１５】
本明細書中で使用される用語“可溶性医薬組成物”は、配合組成物中に実質的に可溶性のインスリン分泌性ペプチド及び配合組成物中に実質的に可溶性の食事関連インスリンペプチドを意味する。よって、予め溶解させた可溶性医薬組成物は実質的に可溶性であり、復元させようとする可溶性医薬組成物は処方復元液中に溶解させると実質的に可溶性である。復元させようとする医薬組成物のｐＨは室温において処方復元液中で復元することにより生ずる復元組成物について測定したｐＨ値であると理解されたい。
【００１６】
本明細書中で使用される用語“医薬的に許容され得る”は、通常の医薬適用に適していること、すなわち患者等に副作用を生じさせないことを意味する。
【００１７】
本明細書中で使用される用語“緩衝剤”は、さもなければ化学反応のために生ずるであろう組成物のｐＨが経時的に変化する傾向を抑える医薬組成物中の化合物を指す。緩衝剤には、リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳ、グリシン及びクエン酸ナトリウムのような化学物質が含まれる。
【００１８】
本明細書中で使用される用語“保存剤”は、微生物活性（増殖及び代謝）を防ぐまたは遅らすために医薬組成物に添加される化合物を指す。医薬的に許容され得る保存剤の例は、フェノール、ｍ−クレゾール及びフェノールとｍ−クレゾールの混合物である。
【００１９】
本明細書中で使用される用語“等張剤”は、ヒト血漿の浸透圧力に近づくように医薬組成物の浸透圧を調節するのに役立つ医薬組成物中の化合物を指す。等張剤には、ＮａＣｌ、グリセロール、マンニトール等が含まれる。
【００２０】
本明細書中で使用される用語“安定化剤”は、ペプチドを安定化させるため、すなわちペプチド含有医薬組成物の保存期間及び／または使用時間を延長させるために前記医薬組成物に添加される化学物質を指す。医薬組成物中に使用される安定化剤の例は、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、ポリエチレングリコール及びカルボキシメチルセルロースである。
【００２１】
本明細書中で使用される用語“病気の治療”は、病気、状態または障害を有する患者の管理及びケアを意味する。治療の目的は病気、状態または障害と戦うことである。治療は、病気、状態または障害を解消またはコントロールするため及び病気、状態または障害に関連する症状または合併症を緩和するための活性化合物の投与を含む。
【００２２】
本明細書中で使用される用語“病気の予防”は、病気の発症前に発病するリスクのある人の管理及びケアとして定義される。予防の目的は、病気、状態または障害の発現と戦うことであり、症状または合併症の発現を防ぐまたは遅らすため、関連する病気、状態または障害の発現を防ぐまたは遅らすための活性化合物の投与を含む。
【００２３】
本明細書中で使用される用語“インスリンペプチド”は、ヒトインスリンまたは化学的に修飾されているヒトインスリン（例えば、そのアナログまたは誘導体）であるペプチドを意味する。
【００２４】
本明細書中で使用される用語“ヒトインスリン”は、構造及び特性が公知のヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基間のジスルフィド架橋により連結されている２本のポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖及びＢ鎖を有する。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチドであり、Ｂ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、２本の鎖は３個のジスルフィド架橋により連結されている。第１の架橋はＡ鎖の６位と１１位のシステイン間、第２の架橋はＡ鎖の７位のシステインとＢ鎖の７位のシステイン間、第３の架橋はＡ鎖の２０位のシステインとＢ鎖の１９位のシステイン間にある。
【００２５】
ペプチドを言及して本明細書中で使用される用語“アナログ”は、ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されている及び／または１つ以上のアミノ酸残基がペプチドから欠失している及び／または１つ以上のアミノ酸残基がペプチドに付加されている修飾ペプチドを意味する。アミノ酸残基の付加または欠失はペプチドのＮ末端及び／またはペプチドのＣ末端で起こり得る。
【００２６】
親ペプチドに関連して本明細書中で使用される用語“誘導体”は、親タンパク質またはそのアナログ中に存在しない置換基が少なくとも１個ある化学的に修飾されている親タンパク質またはそのアナログ、すなわち共有的に修飾されている親タンパク質を意味する。典型的な修飾はアミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、ＰＥＧ化等である。ヒトインスリンの誘導体の例はスレオニンメチルエステルＢ３０ヒトインスリン及びＮεＢ２９−テトラデカノイルデス（Ｂ３０）ヒトインスリンである。
【００２７】
本明細書中で使用される用語“食事関連インスリンペプチド”は、糖尿病の標準モデルにおいて８時間未満の時間作用を有するインスリンペプチドを意味する。好ましくは、食事関連ヒトインスリンは約５時間未満の時間作用を有する。好ましくは、食事関連インスリンは０〜約４時間の時間作用を有する。好ましくは、食事関連インスリンはアクトラピッド（登録商標）、ノボログ（登録商標）及びヒュマログ（登録商標）の市販医薬組成物で見られるのと同程度の時間作用を有する。インスリンの時間作用に関連する用語“約”は±３０分を意味する。
【００２８】
本明細書中で使用される用語“ＧＬＰ−１化合物”は、ＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、そのインスリン分泌性アナログ及びそのインスリン分泌性誘導体を意味する。ＧＬＰ−１アナログの非限定例はＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド及びＶａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）である。ＧＬＰ−１誘導体の非限定例はデスアミノ−Ｈｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３４（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、デスアミノ−Ｈｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３４（Ｎε−オクタノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３８（Ｎε−（ω−カルボキシペンタデカノイル））−ＧＬＰ−１（７−３８）、Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３６）及びＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。
【００２９】
本明細書中で使用される用語“安定なＧＬＰ−１化合物”は、化学的に修飾されているＧＬＰ−１（７−３７）、すなわち以下の方法により測定してヒトにおいて少なくとも１０時間のインビボ血漿消失半減期を示すアナログまたは誘導体を意味する。ヒトにおけるペプチドの血漿消失半減期の測定方法は次の通りである。化合物を等張性緩衝液（ｐＨ７．４）、ＰＢＳまたは他の適当な緩衝剤中に溶解させる。用量を末梢に、好ましくは腹部及び上部大腿に注射する。活性化合物を測定するために血液サンプルを頻繁に、末端消失部分をカバーするのに十分な期間（例えば、投与前、投与から１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、２４（２日目）、３６（２日目）、４８（３日目）、６０（３日目）、７２（４日目）及び８４（４日目）時間後）採取する。活性化合物の濃度はWilkenら, Diabetologia, 43(51):A143(2000)に記載されているように測定する。各被験者についての濃度−時間データから誘導薬物動態学的パラメーターを市販ソフトウェアＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン２．１（米国ノースカロライナ州ケアリーに所在のPharsight）を用いて計算する。末端消失速度定数は濃度−時間曲線の末端対数−線形部分に対する対数−直線回帰により推定し、消失半減期を計算するために使用される。
【００３０】
本明細書中で使用される用語“ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物”は、天然ＧＬＰ−１アゴニストのＧＬＰ−１（７−３７）に比して血漿ペプチダーゼのジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）に対してより耐性であるＧＬＰ−１化合物を意味する。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するＧＬＰ−１化合物の耐性は以下の分解アッセイにより調べることができる。ＧＬＰ−１化合物のアリコート（５ナノモル）を０．１Ｍ トリエチルアミン−ＨＣｌ緩衝剤（ｐＨ７．４）（１００μｌ）中で５ｍＵの酵素活性に相当する１μｌの精製ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと一緒に３７℃で１０〜１８０分間インキュベートする。１０％トリフルオロ酢酸（５μｌ）を添加して酵素反応を停止させ、ペプチド分解産物を分離し、ＨＰＬＣ分析により定量する。この分析を実施するための１方法は以下の通りである。混合物をSiegelら, Regul.Pept., 79:93-102(1999)及びMentleinら, Eur.J.Biochem., 214:829-35(1993)に従ってＶｙｄａｃ Ｃ１８広孔（３０ｎｍの孔、５μｍの粒子）２５０×４．６ｍｍカラムにかけ、０．１％トリフルオロ酢酸中アセトニトリルの直線段階勾配（３分間０％アセトニトリル、１７分間０〜２４％アセトニトリル、１分間２４〜４８％アセトニトリル）で１ｍｌ／分の流速で溶離させる。ペプチド及びその分解産物を２２０ｎｍ（ペプチド結合）または２８０ｎｍ（芳香族アミノ酸）での吸光度によりモニターし、このピーク面積を標準物質のピーク面積に対して積分することにより定量する。ＧＬＰ−１化合物のジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる加水分解速度をＧＬＰ−１化合物の１０％未満しか加水分解されないインキュベーション時間で推定する。
【００３１】
ペプチドまたは化合物を言及して本明細書中で使用される用語“インスリン分泌性”は、高い血漿糖レベルに応答してインスリンの分泌を刺激する能力を意味する。インスリン分泌性ペプチド及び化合物はＧＬＰ−１受容体のアゴニストである。化合物のインスリン分泌性は当業界で公知のインビトロまたはインビボアッセイにより調べることができる。ペプチドのような化合物のインスリン分泌性を調べるためには以下のインビトロアッセイが使用され得る。インスリン分泌性化合物は、好ましくは５ｎＭ未満、より好ましくは５００ｐＭ未満のＥＣ５０値を示す。
【００３２】
クローン化ヒトＧＬＰ−１受容体（ＢＨＫ ４６７−１２Ａ）を発現する子ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞を１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００μｌ／ｍｌのストレプトマイシン、１０％ウシ胎児血清及び１ｍｇ／ｍｌのジェネテシンＧ−４１８（Life Technologies）を添加したＤＭＥＭ培地において増殖させる。血漿膜は、緩衝剤（更に５ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（Sigma）、５ｍｇ／Ｌのペプスタチン（Sigma）、１００ｍｇ／Ｌのバシトラシン（Sigma）及び１６ｍｇ／Ｌのアプロチニン（カリフォルニア州ラホヤに所在のCalbiochem-Novabiochem)を含有する１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、３０ｍＭ ＮａＣｌ及び１ｍＭ ジチオトレイトール，ｐＨ７．４）中でホモジナイズすることにより作成する。ホモジネートを４１％ｗ／ｖ スクロース層の上で遠心させた。２層間の白色帯を緩衝剤で希釈し、遠心した。血漿膜は使用するまで−８０℃で保存した。
【００３３】
機能的受容体アッセイは、インスリン分泌性ペプチドまたはインスリン分泌性化合物による刺激に対する応答としてｃＡＭＰを測定することにより実施する。インキュベーションは、総容量が１４０ｍｌの９６ウェル微量測定プレートにおいて５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１．５ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．７ｍＭ ＡＴＰ、２０ｍＭ ＧＴＰ、２ｍＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、０．０１％ｗ／ｖ トゥイーン２０，ｐＨ７．４の最終濃度で実施する。化合物を緩衝剤中に溶解し、希釈する。実験毎にＧＴＰを新たに作成する。各ウェルに膜２．５μｇを添加し、混合物を振とうしながら室温、暗所で９０分間インキュベートする。０．５Ｍ ＨＣｌ（２５ｍｌ）を添加して反応を停止する。形成されたｃＡＭＰをシンチレーションプロキシミティアッセイ（ＲＰＡ ５４２，英国アマシャム）により測定する。化合物について用量−応答曲線をプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてＥＣ５０値を算出する。
【００３４】
本明細書中で使用される用語“インスリン分泌性化合物のプロドラッグ”は、患者に投与後インスリン分泌性化合物に変換される化学的に修飾されている化合物を意味する。前記プロドラッグは通常インスリン分泌性化合物のアミノ酸延長形態またはエステルである。
【００３５】
本明細書中で使用される用語“エキセンディン−４化合物”は、エキセンディン−４（１−３９）（配列番号２）、そのインスリン分泌性断片、そのインスリン分泌性アナログ及びそのインスリン分泌性誘導体と定義される。エキセンディン−４のインスリン分泌性断片は、全配列がエキセンディン−４（配列番号２）の配列中に見られ得、少なくとも１つの末端アミノ酸が欠失しているインスリン分泌性ペプチドである。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性断片の例はエキセンディン−４（１−３８）及びエキセンディン−４（１−３１）である。化合物のインスリン分泌性は当業界で公知のインビボまたはインビトロアッセイにより調べることができる。例えば、化合物を動物に投与し、インスリン濃度を経時的にモニターしてもよい。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性アナログは、前記アナログがインスリン分泌性であるかまたはインスリン分泌性化合物のプロドラッグである条件で、１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されている及び／または１つ以上のアミノ酸残基が欠失している及び／または１つ以上のアミノ酸残基が付加されている分子を指す。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性アナログの例は、２位及び３位のアミノ酸残基がそれぞれセリン及びアスパラギン酸で置換されているＳｅｒ２Ａｓｐ３−エキセンディン−４（１−３９）である（この特定アナログは当業界でエキセンディン−３としても公知）。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性誘導体及びそのアナログは、当業者がこれらのペプチドの誘導体であると見なすもの、すなわち前記誘導体がインスリン分泌性であるかまたはインスリン分泌性化合物のプロドラッグである条件で親ペプチド分子中に存在しない置換基を少なくとも１個有しているものである。置換基の例はアミド、炭水化物、アルキル基、エステル及び親油性置換基である。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性誘導体及びそのアナログの例はＴｙｒ３１−エキセンディン−４（１−３１）−アミドである。
【００３６】
本明細書中で使用される用語“安定なエキセンディン−４化合物”は化学的に修飾されたエキセンディン−４（１−３９）、すなわち“安定なＧＬＰ−１化合物”の定義中で説明した方法により測定してヒトにおいて少なくとも１０時間のインビボ血漿消失半減期を示すアナログまたは誘導体を意味する。
【００３７】
用語“ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物”は、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物の定義中で説明したアッセイにより測定してエキセンディン−４（配列番号２）よりも血漿ペプチダーゼのジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）に対してより耐性であるエキセンディン−４化合物を意味する。
【００３８】
本明細書中で使用される用語“等電点”は、ペプチドのようなマクロ分子の全正味電荷がゼロであるｐＨ値を意味する。ペプチドの場合、幾つかの帯電基が存在していてもよいが、等電点ではこれら全ての電荷の合計はゼロである。等電点を越えるｐＨ値ではペプチドの全正味電荷は負であり、等電点以下のｐＨ値ではペプチドの全正味電荷は正である。
【００３９】
医薬組成物に言及して本明細書中で使用される用語“復元された”は、活性医薬成分を含む固体材料に水を添加することにより形成される水性組成物を意味する。復元用医薬組成物は許容できる半減期を有する液体組成物を生成できない場合に適用される。復元された医薬組成物の例は、凍結乾燥組成物に水を添加すると生ずる溶液である。この溶液は多くの場合非経口投与用であり、よって固体材料を復元するために通常注射用蒸留水が使用される。
【００４０】
医薬組成物中のペプチドの濃度に関連して本明細書中で使用される用語“約”は±１０％を意味する。よって、濃度“約５ｍｇ／ｍｌのインスリン”は４．５ｍｇ／ｍｌのインスリン〜５．５ｍｇ／ｍｌのインスリンの濃度を意味する。
【発明の説明】
【００４１】
一つの側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用医薬組成物に関する。本発明の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは７．０〜９．０である。本発明の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは７．０〜８．０である。本発明の別の実施形態では、前記組成物は溶液である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は固体である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は水溶液（例えば、緩衝剤または注射用蒸留水）で復元される。
【００４２】
本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は注射または注入による投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は皮下投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は筋肉内投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は静脈内投与に適している。
【００４３】
更なる実施形態で、本発明は、食事関連インスリンペプチドが４時間未満の時間作用を有する医薬組成物に関する。別の側面において、本発明は、前記インスリンペプチドがヒトインスリン、ヒトインスリンのアナログ、ヒトインスリンの誘導体またはヒトインスリンアナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記インスリンペプチドはヒトインスリンである。
【００４４】
更なる側面において、本発明は、インスリンペプチドがヒトインスリンアナログである医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＬｙｓＢ２８，ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはデス（Ｂ３０）ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記インスリンペプチドはヒトインスリンアナログの誘導体である。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中の食事関連インスリンペプチドの濃度は約１．６〜約５．６ｍｇ／ｍｌ、約２．６〜約４．６ｍｇ／ｍｌまたは約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中の食事関連インスリンペプチドの濃度は約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌ、約３．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌまたは約５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌである。
【００４５】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は２つの異なるインスリンペプチドを含む。
【００４６】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログはＡｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１９Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｅｕ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｈｉｓ３７−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、そのアナログ及びこれらの誘導体からなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは２２位にＧｌｕ残基を有する。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは８位にＬ−ヒスチジン残基を有する。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは８位にＶａｌ残基を有する。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体はＧＬＰ−１（７−３６）−アミドである。
【００４７】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがリシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記親油性置換基は８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する。本発明の別の実施形態では、スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは血漿安定性のＧＬＰ−１化合物である。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体はＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは２７〜４３アミノ酸残基、好ましくは２８〜３８アミノ酸残基、更に好ましくは３０〜３４アミノ酸残基を有する。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約２〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５〜約１２ｍｇ／ｍｌまたは約８〜約１１ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約５〜約７．５ｍｇ／ｍｌである。
【００４８】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがエキセンディン−４（配列番号２）、エキセンディン−４アナログ、エキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはエキセンディン−４（配列番号２）である。本発明の別の実施形態では、エキセンディン−４アナログはエキセンディン−３またはＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である。本発明の別の実施形態では、エキセンディン−４アナログの誘導体はアシル化エキセンディン−４アナログまたはペグ化エキセンディン−４アナログである。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドがリシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているエキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である。本発明の別の実施形態では、前記親油性置換基は８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有している。本発明の別の実施形態では、スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは血漿安定性のエキセンディン−４化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは３０〜４８アミノ酸残基、３３〜４５アミノ酸残基、好ましくは３５〜４３アミノ酸残基、更に好ましくは３７〜４１アミノ酸残基を有する。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約５μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．ｌ〜約３ｍｇ／ｍｌまたは約０．２〜約１ｍｇ／ｍｌである。
【００４９】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドの等電点が３．０〜７．０、４．０〜６．０、好ましくは４．２〜５．５、更に好ましくは４．３〜５．２である医薬組成物に関する。
【００５０】
一つの側面において、本発明は更に亜鉛を含む医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、亜鉛／インスリンペプチドのモル比は１／６〜１／２（モル／モル）、好ましくは３／１２〜５／１２（モル／モル）である。
【００５１】
別の側面において、本発明は、食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。
【００５２】
別の側面において、本発明は、インスリンペプチドがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである。
【００５３】
別の側面において、本発明は、インスリンペプチドがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、ＺＰ−１０の濃度は約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌである。
【００５４】
本発明の別の実施形態では、保存剤はフェノール、ｍ−クレゾールまたはその混合物である。
【００５５】
本発明の別の側面において、医薬組成物は緩衝剤を含む。本発明の１実施形態では、緩衝剤はリン酸塩、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、グリシン、Ｎ−グリシルグリシン、クエン酸塩またはその混合物である。
【００５６】
本発明の別の側面において、医薬組成物は等張剤を含む。１実施形態では、等張剤は塩ではない。別の実施形態では、等張剤はマンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコールまたはその混合物から選択される。
【００５７】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤、安定化剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用可溶性医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、安定化剤はＬ−ヒスチジン、イミダゾール及びＬ−アルギニンからなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、安定化剤はポリエチレングリコールである。
【００５８】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤、界面活性剤及び任意に等張剤を含む可溶性医薬組成物に関する。１実施形態では、界面活性剤はポロキサマーである。別の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。別の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー４０７、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３１及びポロキサマー３３８からなる群から選択される。別の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０（トゥイーン２０）である。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約５〜約３０００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約１０〜約５００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約２０〜約３００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約５０〜約２００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、医薬組成物は２つの異なる界面活性剤を含む。別の実施形態では、医薬組成物はポロキサマー１８８及びポリソルベート２０（トゥイーン２０）を含む。本発明の別の実施形態では、界面活性剤は洗剤、エトキシル化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン誘導体（例えば、アルキル化及びアルコキシル化誘導体（例：トゥイーン２０またはトゥイーン８０のようなトゥイーン））、モノグリセリドまたはそのエトキシル化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、グリセロール、コール酸またはその誘導体、レシチン及びアルコール；リン脂質、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）及びスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）；ＤＳＳ（ドクサートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドクサートカルシウム（ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドクサートカリウム（ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）；ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、胆汁酸及びその塩、及びグリシンまたはタウリンコンジュゲート；ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート；アニオン性（アルキル−アリール−スルホネート）１価界面活性剤；パルミトイルリソホスファチジル−Ｌ−セリン；リソリン脂質（例えば、エタノールアミン、コリン、セリンまたはスレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェートエステル）、リソホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシ（アルキルエーテル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体（例えば、リソホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、並びにコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトールである極性ヘッド基の修飾物、正帯電したＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リソホスファチジルセリン及びリソホスファチジルスレオニンのラウロイル及びミリストイル誘導体）；双イオン性界面活性剤（例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−コールアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリソホスファチジルコリン、鶏卵リソレシチン）；カチオン性界面活性剤（例えば、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウムのような第４級アンモニウム塩基）；ノニオン性界面活性剤；ポリエチレンオキシド/ポリプロピレンオキシドブロックコポリマー（プルロニック／テトロニック、トリトンＸ−１００、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド）またはポリマー界面活性剤（トゥイーン４０、トゥイーン８０、Ｂｒｉｊ−３５）；フシジン酸誘導体（例えば、タウロ−ジヒドロフシジン酸ナトリウム等）；長鎖脂肪酸及びその塩Ｃ６−Ｃ１２（例えば、オレイン酸及びカプリル酸）、アシルカルニチン及び誘導体、リシン、アルギニンまたはヒスチジンのＮα−アシル化誘導体、リシンまたはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リシン、アルギニンまたはヒスチジンと中性または酸性アミノ酸の組合せからなるジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの帯電アミノ酸の組合せからなるトリペプチドのＮα−アシル化誘導体；イミダゾリン誘導体類から選択される界面活性剤；またはその混合物から選択される。これらの特定界面活性剤の各々が本発明の代替実施形態を構成する。本発明の更なる実施形態では、界面活性剤はポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）である。本発明の更なる実施形態では、医薬組成物は約１〜約５００ｐｐｍ、好ましくは約１０〜約１２０ｐｐｍの濃度の界面活性剤を含む。
【００５９】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む高血糖症の治療方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む過食または過食症の治療方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む２型糖尿病、グルコース許容値低下、１型糖尿病、肥満、高血圧、症候群Ｘ、異脂肪症、認識障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の冠動脈障害、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療または予防方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む２型糖尿病の進行を遅らすまたは防ぐ方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む摂食を抑える、β細胞アポトーシスを低下させる、β細胞及びβ細胞塊の機能を向上させる及び／またはβ細胞に対するグルコース感受性を回復させる方法に関する。本発明の医薬組成物を（例えば、ペンまたは注射器を用いて）注射により投与するときには、通常１日３回、好ましくは食事前に投与する。大量の注射は患者にとって不快であるので、各回の投与量が約５００μｌ未満または約２００μｌ未満であることが好ましい。本発明の医薬組成物をポンプによる投与するときには、通常１日あたり少なくとも１０回以上連続的または非連続的に投与される。本発明の１実施形態では、治療方法は約３０〜約６００μｌ／日、例えば約６０〜約３６０μｌ／日である有効量の医薬組成物の投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は皮下注射により投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法はポンプにより投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含み、前記医薬組成物の不連続投与はパルス間の期間より短い期間のパルス投与による。
【００６０】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用医薬組成物を製造するためのインスリン分泌性ペプチド及び食事関連インスリンペプチドの使用に関する。本発明の１実施形態では、前記使用は皮下注射により投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用はポンプにより投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含み、前記医薬組成物の不連続投与はパルス間の期間より短い期間のパルス投与による。
【００６１】
別の側面において、本発明は、非経口投与により高血糖症を治療するためのインスリンペプチド、インスリン分泌性ペプチド、医薬的に許容され得る緩衝剤、医薬的に許容され得る保存剤、界面活性剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を製造するためのインスリンペプチド及びインスリン分泌性ペプチドの使用に関する。
【実施例１】
【００６２】
混合物のインビボでのブタデーター
インスリンアスパート（insulin aspart）のＴｙｒ Ａ１４を１２５Ｉで標識して、インスリンアスパート(ＡｓｐＢ２８-ヒトインスリン)及びリラグルチド(Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）)の混合物をブタに皮下投与するために調製した。この研究計画は、注入部位からのインスリンアスパートの消失を外部ガンマー計数により調べると同時にリラグルチド(Liraglutide)血漿濃度の時間経過を最長７２時間モニターすることであった。
【００６３】
アスパート組成物（基準）：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６４】
混合アスパート：リラグルチド（１：１）組成物：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、６００μＭのリラグルチド、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６５】
混合アスパート：リラグルチド（１：５）組成物：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、３０００μＭのリラグルチド、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６６】
６匹の体重が８０〜１００ｋｇの正常な健康ブタ（Dansk Landrace,ＬＤＹ）を研究に含めた。各ブタの首の片側に１００μｌのインスリンアスパート組成物（基準）、反対側には１００μｌの混合アスパート／リラグルチド組成物を投与した。インスリンアスパート基準については６匹のブタで、１：１及び１：５混合物については３匹ずつのブタで、放射線標識したインスリンアスパートの消失経過を両注入部位で測定した。同時に、リラグルチド血漿濃度の時間経過をモニターするために血液サンプルを７２時間にわたり血液サンプルを採取した。
【００６７】
標準偏差を含む平均消失曲線
平均消失曲線を図１に示す。１：５混合物を投与後皮下組織からのインスリンアスパートの消失対時間は基準及び１：１混合物のいずれよりも僅かに遅かった。注射後の残存放射能の７５％、５０％及び２５％の平均（ＳＤ）時間を計算した。下表１を参照されたい。
【表１】
【００６８】
リラグルチドの薬物動態
血漿濃度時間データに基づいて薬物動態を算出した。１：５組成物からのリラグルチドはＡＵＣを５倍上昇させ、このことからリラグルチドの相対バイオアベイラビリティーが変化しないことが確認されたので、ＡＵＣに基づいてリラグルチドの吸収は使用した混合物と無関係であるとの結論を得た。
【００６９】
上記ＰＫパラメーターに基づいて、食事時（朝食、昼食及び夕食）に０．２ナノモル／ｋｇのリラグルチドをアスパートと同時に投与することを示すシミュレーションを実施した。食事時に約０．２ナノモル／ｋｇのリラグルチドを投与すると満足なリラグルチド血漿レベルが得られ、１：１が最も可能性があるアスパート：リラグルチド比であると示唆される。
【００７０】
図２及び３は、上記した混合物を皮下投与後のリラグルチドの血漿レベルを示している。
【表２】
【実施例２】
【００７１】
２つの医薬組成物を本明細書の記載に従って製造した。両医薬組成物とも食事関連インスリンＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（アスパート）及びインスリン分泌性ペプチドＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）（リラグルチド）を含んでいた。両医薬組成物とも、アスパート濃度は０．６ｍＭであり、リラグルチド濃度は１．２ｍＭである。さらに、両組成物は１０ｍＭのＮａＣｌ、８ｍＭのリン酸緩衝剤、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノールを含んでいた。ポロキサマー１８８非含有の組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有の医薬組成物（白菱形）のそれぞれ８日間及び７日間の濁度測定値を示す（図４）。
【実施例３】
【００７２】
２つの医薬組成物を本明細書の記載に従って製造した。両医薬組成物とも食事関連インスリンＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（アスパート）及びインスリン分泌性ペプチドＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）（リラグルチド）を含んでいた。両医薬組成物とも、アスパート濃度は０．６ｍＭであり、リラグルチド濃度は１．２ｍＭである。さらに、両組成物は０．３５ｍＭの５−［６−（５−シアノ−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾル−４−イル）ナフタレン−２−イルオキシ］ペンタン酸、１０ｍＭのビシン緩衝剤、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノールを含んでいた。ポロキサマー１８８非含有の医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有の医薬組成物（白菱形）の濁度測定を１３日間実施した（図５）。
【化１】
【実施例４】
【００７３】
以下の医薬組成物を製造する。
【００７４】
Ｆ１：１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、３ Ｚｎ／ｈｅｘ、０．６ｍＭのアスパート、８ｍＭのビシン、５０ｐｐｍのポロキサマー１８８（ｐＨ７．７）。
【００７５】
Ｆ２：１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、３ Ｚｎ／ｈｅｘ、０．６ｍＭのアスパート、８ｍＭのビシン（ｐＨ７．７）。
【００７６】
医薬組成物の物理的安定性を促進ストレス試験を用いて評価する。ストレス試験はローテーション試験として実施する。各組成物の５カートリッジ（ガラス容器）に空気（５０μｌ）を加える。カートリッジを３０回転／分の回数で毎日４時間回転させる。２２日回転後試験を停止させる。毎日または必要に応じてカートリッジを精査する。組成物の濁度をＨＡＣＨ比濁計２１００ＡＮを用いて濁度測定することにより調べる。液体の濁度測定は“比濁計濁度単位”（ＮＴＵ）で特定する。タンパク質の物理的不安定性は濁度測定値が高いことにより特徴づけられる。
【００７７】
実験では、Ｆ２組成物ではＮＴＵ測定値がＦ１組成物のＮＴＵトレースに比して非常に急速に上昇することを示している。
【実施例５】
【００７８】
チオフラビン（ＴｈＴ）フィブリル化アッセイ：原理及び例
ペプチドの物理的安定性が低いとアミロイドフィブリルが形成される恐れがある。これはサンプル中で秩序ある糸様の高分子構造として見られ、最終的にはゲルが形成される。アミロイドフィブリル化は従来サンプルを肉眼で精査することにより調べられてきた。しかしながら、この種の測定は非常に主観的であり、観察者に依存する。従って、小分子インジケータープローブの使用が非常に有利である。チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はそのようなプローブであり、フィブリルと結合したとき明確な蛍光特徴を有する［Naikiら, Anal.Biochem.177, 244-249(1989)；LeVine, Methods Enzymol., 309:274-284(1999)］。
【００７９】
フィブリル形成の時間経過は以下の式のシグモイド曲線により説明され得る［Nielsenら, Biochemistry, 40:6036-6046(2001)］：
【数１】
【００８０】
ここで、Ｆは時間ｔでのＴｈＴ蛍光である。定数ｔ０は最大蛍光の５０％に達するのに要する時間である。フィブリル形成を説明する２つの重要なパラメーターはｔ０−２τにより算出される時間差及び見かけ速度定数ｋａｐｐ＝１／τである。
【００８１】
フィブリル化の一般的な開始メカニズムとしてペプチドの部分的に折り畳まれた中間体の形成が示唆されている。中間体の幾つかが核となって鋳型が形成され、この鋳型に基づいて更に中間体が合体することがあり、フィブリル化が進行する。時間差は核の臨界的塊が構築される間隔に相当し、見かけ速度定数はフィブリル自体が形成される速度である。
【００８２】
サンプル作成
サンプルは各アッセイ前に新たに作成した。各サンプル組成物は説明文に記載されている。サンプルのｐＨは適当量の濃ＮａＯＨ及びＨＣｌＯ４を用いて所望値に調節した。チオフラビンＴをＨ２Ｏ中のストックト溶液からサンプルに１μＭの最終濃度まで添加した。
【００８３】
２００μｌのサンプルアリコートを９６ウェル微量測定プレート（Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ−Ｐｌａｔｅ（商標）９６，白色ポリスチレン）に導入した。通常、（１つの試験条件に対応する）８個ずつの各サンプルをウェルの１カラムに入れた。このプレートをＳｃｏｔｃｈ Ｐａｄ（Qiagen）でシールした。
【００８４】
インキュベーション及び蛍光測定
所与温度でのインキュベーション、振とう及びＴｈＴ蛍光発光の測定はＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ蛍光プレートリーダー（Thermo Labsystems）を用いて実施した。温度を３７℃に調節した。提示した全てのデータにおいて軌道振動を１ｍｍの振幅で９６０ｒｐｍに調節した。４４４ｎｍフィルターを介する励起及び４８５ｎｍフィルターを介する発光を用いて蛍光を測定した。
【００８５】
各ランは、プレートをアッセイ温度で１０分間インキュベートすることにより開始した。プレートを通常４５時間２０分毎に測定した。各測定の間、プレートを振とうし、上記したように加熱した。
【００８６】
データ処理
更に処理し、曲線を描くために測定ポイントをマイクロソフト・エクセルフォーマットに保存し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてフィッティングを実施した。フィブリルの非存在下でのＴｈＴからのバックグラウンド発光は無視できる程度であった。データポイントは通常８サンプルの平均であり、標準偏差誤差バーも示した。同一実験で得たデータのみ（すなわち、同一プレート上のサンプル）同一グラフに示し、実験間のフィブリル化の相対尺度を確保する。
【００８７】
データ組が式（１）に当てはめられ得る。しかしながら、この場合完全シグモイド曲線が測定中必ずしも得られないので、フィブリル化の程度を異なる時点での８つのサンプルの平均と標準偏差としてまとめたＴｈＴ蛍光として表示する
【実施例６】
【００８８】
水中にインスリンアスパート及びリラグルチドを１：２の混合比で含み、ｐＨ７．７に調節されている組成物は図６に示すように物理的に非常に不安定である。ＴｈＴ蛍光信号は即座に上昇し、１０時間アッセイ時間前にプラトーに達する。しかしながら、ポロキサマー１８８の添加はこの組成物を安定化させる。５０ｐｐｍ及び２００ｐｐｍのポロキサマー１８８では、インスリンアスパート−リラグルチド混合組成物はＴｈＴ蛍光をバックグラウンドレベル以上に上昇させない。よって、これらのサンプルは物理的に完全に安定であり、フィブリル化しない。
【実施例７】
【００８９】
ポリソルベート２０も水中で処方されたインスリンアスパート−リラグルチドの１：２混合物を安定化できる。図７参照。２００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させるとフィブリル化が完全に抑制される。
【実施例８】
【００９０】
リン酸ナトリウム緩衝剤中でインスリンアスパート及びリラグルチドを１：２の混合比で処方したとき、サンプルは物理的に非常に不安定である。図８参照。５０ｐｐｍまたは２００ｐｐｍのポロキサマー１８８を存在させると、フィブリル化の開始までの時間差が長くなる。ポロキサマー１８８の非存在下ではフィブリル化が即座に生ずるが、５０ｐｐｍまたは２００ｐｐｍのポロキサマー１８８の存在下では１５時間以上長い。最高濃度のポロキサマー１８８を有するサンプルは４０時間のアッセイ時間後最低のＴｈＴ信号を示す。
【実施例９】
【００９１】
ポリソルベート２０も、リン酸ナトリウム緩衝剤中で処方したインスリンアスパート−リラグルチドの１：２混合物を安定化させる。図９参照。１００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させると、ポリソルベート２０なしのサンプルに比して時間差が５時間以上長くなる。２００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させると、サンプルのフィブリル化が完全に抑制される。
【実施例１０】
【００９２】
インスリンアスパート及びリラグルチドが１：５の比で混合されている組成物も物理的に非常に不安定である。これらの組成物は、１００ｐｐｍのポロキサマー１８８または２００ｐｐｍのポリソルベート２０の存在により安定化される。これは、ポロキサマー１８８またはポリソルベート２０の存在下でのフィブリル化開始までの時間差のポロキサマー１８８またはポリソルベート２０なしの類似組成物に比した延長したことから観察される。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】放射標識したインスリンアスパートの消失を示す平均消失曲線である。
【図２】混合物を皮下注射後のリラグルチドの血漿レベル（対数目盛）である。
【図３】混合物を皮下注射後のリラグルチドの血漿レベル（等分目盛）である。
【図４】アスパート及びリラグルチドを含有する２つの医薬組成物、すなわちポロキサマー１８８非含有医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５００ｐｐｍ）含有医薬組成物（白菱形）の濁度測定値である。
【図５】アスパート及びリラグルチドを含有する２つの医薬組成物、すなわちポロキサマー１８８非含有医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有医薬組成物（白菱形）の濁度測定値である。
【図６】全てのサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．７）を含有している。サンプルの２つにポロキサマー１８８が添加されている。
【図７】両方のサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．７）を含有している。１つのサンプルにポリソルベート２０が添加されている。
【図８】全てのサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、８ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．７）、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコールを含有している。２つのサンプルにポロキサマー１８８が添加されている。
【図９】０．６ｍＭのインスリンアスパート，０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、８ｍＭのリン酸ナトリウム、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール（ｐＨ７．７）を含有している。サンプルの２つにポリソルベート２０が添加されている。
【発明の分野】
【０００１】
本発明は医薬組成物の分野に関する。より具体的には、本発明は医薬的に活性な２つの異なるペプチドを含む医薬組成物に関する。
【発明の背景】
【０００２】
糖尿病は、グルコースの利用能が部分的または完全に失われている代謝障害である。全人口の約５％が糖尿病を患っており、この病気は流行病にまで広がっている。１９２０年代にインスリンが導入されて以来、糖尿病の治療を改良するための努力が続けられている。糖尿病患者は数十年間にわたり長期治療を受けるので、安全であり、便利であり且つ生活の質を向上させるインスリン製剤が特に要望されている。
【０００３】
糖尿病の治療において、多種類のインスリン製剤、例えばレギュラーインスリン、イソフェンインスリン（ＮＰＨと呼ぶ）、インスリン亜鉛懸濁液(例えば、セミレンテ（登録商標）、レンテ（登録商標）及びウルトラレンテ（登録商標）)及び二相性イソフェンインスリンが示唆され、使用されている。市販されているインスリン製剤の幾つかは作用が即効性であるという特徴を有し、他の製剤は比較的遅効性であるが作用時間は多少長い。即効性インスリン製剤は通常インスリン溶液であり、遅効性インスリン製剤は亜鉛塩及び／またはプロタミンを添加すると沈殿する結晶質及び／または非晶質形態のインスリンを含有する懸濁液であり得る。
【０００４】
通常、インスリン製剤は皮下注射により投与されている。患者にとって重要なことは、注射からの時間の関数としてのグルコース代謝に対するインスリンの作用であるインスリン製剤の作用プロファイルである。このプロファイル中、特に開始時間、最大値及び全作用時間が重要である。患者は異なる作用プロファイルを有する各種インスリン製剤を望んでおり、且つ必要としている。
【０００５】
ヒトインスリンは２つのポリペプチド鎖、すなわち２１個のアミノ酸残基を含有する所謂Ａ鎖及び３０個のアミノ酸を含有する所謂Ｂ鎖から構成されている。Ａ鎖及びＢ鎖は２つのシスチンジスルフィド架橋により相互接続している。他の多くの種に由来するインスリンは同様の構造を有しているが、同一位置に同一アミノ酸残基を含んでいないことがある。最近１０年で、多数のヒトインスリンアナログが開発された。これらは特定の作用プロファイル、すなわち即効性または持続作用のために設計されている。
【０００６】
糖尿病の治療において非常に重要となると予想される別のペプチドは、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）である。ヒトＧＬＰ−１は、なかんずく遠位回腸、膵臓及び脳中のＬ細胞において合成される、プレプログルカゴンに由来する３７アミノ酸残基ペプチドである。ＧＬＰ−１は、グルコース代謝、胃腸分泌及び代謝において調節機能を有する重要な消化管ホルモンである。ＧＬＰ−１は、グルコース依存的にインスリン分泌を刺激し、インスリン生合成を刺激し、β細胞レスキューを促進し、グルカゴン分泌、胃排出及び摂食を抑制する。このペプチドの断片及びアナログを指すために簡単なシステムを使用している。例えば、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）は、天然アミノ酸残基の８位（Ａｌａ）をＧｌｙで置換することにより、ＧＬＰ−１（７−３７）から形式的に誘導されたＧＬＰ−１（７−３７）のアナログを示す。また、Ｌｙｓ３４（Ｎε−テトラデカノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）は、３４位のＬｙｓ残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されているＧＬＰ−１（７−３７）を示す。国際特許出願公開第９８／０８８７１号パンフレット及び国際特許出願公開第９９／４３７０６号パンフレットは、親油性置換基を有するＧＬＰ−１アナログの安定な誘導体を開示している。これらのＧＬＰ−１アナログの安定な誘導体は、対応のＧＬＰ−１アナログに比して長い作用プロファイルを有している。
【０００７】
２型糖尿病患者は世界中で急速に増えつつあるので、より有効な薬物を簡単に投与することが非常に要望されている。血糖を非常に効果的に且つ安全に下げるためにＧＬＰ−１の複合効果が期待される。しかしながら、一部の患者でしか、主食と一緒の非常に少量のインスリンの効果が得られないことがあり得る。インスリンペプチド及びＧＬＰ−１ペプチドを含む配合製剤は、２つの薬物の比が一定で非常に効率的な治療であり、同一患者に投与するときの注射の量が少なくてすむであろう。食事と一緒には低量のインスリンしか与えられないが、製剤中のＧＬＰ−１対応物が残りの日中および夜間の糖をコントロールし、ＧＬＰ−１は低血糖を誘発しないので、非常に安全な治療でもあり得る。
【０００８】
よって、１つの配合製剤で食事関連インスリン及びＧＬＰ−１ペプチドを含む安定な医薬組成物が強く要望されている。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の１目的は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用の可溶性医薬組成物を提供することである。本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは約７．０〜約９．０である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは約７．０〜約８．０である。
【００１０】
本発明の別の目的は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む可溶性医薬組成物を有効量非経口投与することを含む高血糖症の治療方法を提供することである。
【定義】
【００１１】
以下は、本明細書中で使用される用語の詳細な定義である。
【００１２】
本明細書中で使用される用語“有効量”は、治療なしと比較して患者の治療が有効であるのに十分な用量を意味する。
【００１３】
本明細書中で使用される用語“薬剤”は、医薬活性化合物を患者に投与するのに適した医薬組成物を意味する。
【００１４】
本明細書中で使用される用語“医薬組成物”は、活性化合物またはその塩と共に医薬用賦形剤、例えば緩衝剤、保存剤及び張性調節剤を含む製品を意味し、この医薬組成物は該医薬組成物をヒトに投与することにより病気または障害を治療または予防、或いはその重篤度を緩和するのに有用である。よって、医薬組成物は当業界で医薬調製物としても公知である。
【００１５】
本明細書中で使用される用語“可溶性医薬組成物”は、配合組成物中に実質的に可溶性のインスリン分泌性ペプチド及び配合組成物中に実質的に可溶性の食事関連インスリンペプチドを意味する。よって、予め溶解させた可溶性医薬組成物は実質的に可溶性であり、復元させようとする可溶性医薬組成物は処方復元液中に溶解させると実質的に可溶性である。復元させようとする医薬組成物のｐＨは室温において処方復元液中で復元することにより生ずる復元組成物について測定したｐＨ値であると理解されたい。
【００１６】
本明細書中で使用される用語“医薬的に許容され得る”は、通常の医薬適用に適していること、すなわち患者等に副作用を生じさせないことを意味する。
【００１７】
本明細書中で使用される用語“緩衝剤”は、さもなければ化学反応のために生ずるであろう組成物のｐＨが経時的に変化する傾向を抑える医薬組成物中の化合物を指す。緩衝剤には、リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳ、グリシン及びクエン酸ナトリウムのような化学物質が含まれる。
【００１８】
本明細書中で使用される用語“保存剤”は、微生物活性（増殖及び代謝）を防ぐまたは遅らすために医薬組成物に添加される化合物を指す。医薬的に許容され得る保存剤の例は、フェノール、ｍ−クレゾール及びフェノールとｍ−クレゾールの混合物である。
【００１９】
本明細書中で使用される用語“等張剤”は、ヒト血漿の浸透圧力に近づくように医薬組成物の浸透圧を調節するのに役立つ医薬組成物中の化合物を指す。等張剤には、ＮａＣｌ、グリセロール、マンニトール等が含まれる。
【００２０】
本明細書中で使用される用語“安定化剤”は、ペプチドを安定化させるため、すなわちペプチド含有医薬組成物の保存期間及び／または使用時間を延長させるために前記医薬組成物に添加される化学物質を指す。医薬組成物中に使用される安定化剤の例は、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、ポリエチレングリコール及びカルボキシメチルセルロースである。
【００２１】
本明細書中で使用される用語“病気の治療”は、病気、状態または障害を有する患者の管理及びケアを意味する。治療の目的は病気、状態または障害と戦うことである。治療は、病気、状態または障害を解消またはコントロールするため及び病気、状態または障害に関連する症状または合併症を緩和するための活性化合物の投与を含む。
【００２２】
本明細書中で使用される用語“病気の予防”は、病気の発症前に発病するリスクのある人の管理及びケアとして定義される。予防の目的は、病気、状態または障害の発現と戦うことであり、症状または合併症の発現を防ぐまたは遅らすため、関連する病気、状態または障害の発現を防ぐまたは遅らすための活性化合物の投与を含む。
【００２３】
本明細書中で使用される用語“インスリンペプチド”は、ヒトインスリンまたは化学的に修飾されているヒトインスリン（例えば、そのアナログまたは誘導体）であるペプチドを意味する。
【００２４】
本明細書中で使用される用語“ヒトインスリン”は、構造及び特性が公知のヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基間のジスルフィド架橋により連結されている２本のポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖及びＢ鎖を有する。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチドであり、Ｂ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、２本の鎖は３個のジスルフィド架橋により連結されている。第１の架橋はＡ鎖の６位と１１位のシステイン間、第２の架橋はＡ鎖の７位のシステインとＢ鎖の７位のシステイン間、第３の架橋はＡ鎖の２０位のシステインとＢ鎖の１９位のシステイン間にある。
【００２５】
ペプチドを言及して本明細書中で使用される用語“アナログ”は、ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されている及び／または１つ以上のアミノ酸残基がペプチドから欠失している及び／または１つ以上のアミノ酸残基がペプチドに付加されている修飾ペプチドを意味する。アミノ酸残基の付加または欠失はペプチドのＮ末端及び／またはペプチドのＣ末端で起こり得る。
【００２６】
親ペプチドに関連して本明細書中で使用される用語“誘導体”は、親タンパク質またはそのアナログ中に存在しない置換基が少なくとも１個ある化学的に修飾されている親タンパク質またはそのアナログ、すなわち共有的に修飾されている親タンパク質を意味する。典型的な修飾はアミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、ＰＥＧ化等である。ヒトインスリンの誘導体の例はスレオニンメチルエステルＢ３０ヒトインスリン及びＮεＢ２９−テトラデカノイルデス（Ｂ３０）ヒトインスリンである。
【００２７】
本明細書中で使用される用語“食事関連インスリンペプチド”は、糖尿病の標準モデルにおいて８時間未満の時間作用を有するインスリンペプチドを意味する。好ましくは、食事関連ヒトインスリンは約５時間未満の時間作用を有する。好ましくは、食事関連インスリンは０〜約４時間の時間作用を有する。好ましくは、食事関連インスリンはアクトラピッド（登録商標）、ノボログ（登録商標）及びヒュマログ（登録商標）の市販医薬組成物で見られるのと同程度の時間作用を有する。インスリンの時間作用に関連する用語“約”は±３０分を意味する。
【００２８】
本明細書中で使用される用語“ＧＬＰ−１化合物”は、ＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、そのインスリン分泌性アナログ及びそのインスリン分泌性誘導体を意味する。ＧＬＰ−１アナログの非限定例はＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド及びＶａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）である。ＧＬＰ−１誘導体の非限定例はデスアミノ−Ｈｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３４（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、デスアミノ−Ｈｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３４（Ｎε−オクタノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３８（Ｎε−（ω−カルボキシペンタデカノイル））−ＧＬＰ−１（７−３８）、Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３６）及びＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。
【００２９】
本明細書中で使用される用語“安定なＧＬＰ−１化合物”は、化学的に修飾されているＧＬＰ−１（７−３７）、すなわち以下の方法により測定してヒトにおいて少なくとも１０時間のインビボ血漿消失半減期を示すアナログまたは誘導体を意味する。ヒトにおけるペプチドの血漿消失半減期の測定方法は次の通りである。化合物を等張性緩衝液（ｐＨ７．４）、ＰＢＳまたは他の適当な緩衝剤中に溶解させる。用量を末梢に、好ましくは腹部及び上部大腿に注射する。活性化合物を測定するために血液サンプルを頻繁に、末端消失部分をカバーするのに十分な期間（例えば、投与前、投与から１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、２４（２日目）、３６（２日目）、４８（３日目）、６０（３日目）、７２（４日目）及び８４（４日目）時間後）採取する。活性化合物の濃度はWilkenら, Diabetologia, 43(51):A143(2000)に記載されているように測定する。各被験者についての濃度−時間データから誘導薬物動態学的パラメーターを市販ソフトウェアＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン２．１（米国ノースカロライナ州ケアリーに所在のPharsight）を用いて計算する。末端消失速度定数は濃度−時間曲線の末端対数−線形部分に対する対数−直線回帰により推定し、消失半減期を計算するために使用される。
【００３０】
本明細書中で使用される用語“ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物”は、天然ＧＬＰ−１アゴニストのＧＬＰ−１（７−３７）に比して血漿ペプチダーゼのジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）に対してより耐性であるＧＬＰ−１化合物を意味する。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するＧＬＰ−１化合物の耐性は以下の分解アッセイにより調べることができる。ＧＬＰ−１化合物のアリコート（５ナノモル）を０．１Ｍ トリエチルアミン−ＨＣｌ緩衝剤（ｐＨ７．４）（１００μｌ）中で５ｍＵの酵素活性に相当する１μｌの精製ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと一緒に３７℃で１０〜１８０分間インキュベートする。１０％トリフルオロ酢酸（５μｌ）を添加して酵素反応を停止させ、ペプチド分解産物を分離し、ＨＰＬＣ分析により定量する。この分析を実施するための１方法は以下の通りである。混合物をSiegelら, Regul.Pept., 79:93-102(1999)及びMentleinら, Eur.J.Biochem., 214:829-35(1993)に従ってＶｙｄａｃ Ｃ１８広孔（３０ｎｍの孔、５μｍの粒子）２５０×４．６ｍｍカラムにかけ、０．１％トリフルオロ酢酸中アセトニトリルの直線段階勾配（３分間０％アセトニトリル、１７分間０〜２４％アセトニトリル、１分間２４〜４８％アセトニトリル）で１ｍｌ／分の流速で溶離させる。ペプチド及びその分解産物を２２０ｎｍ（ペプチド結合）または２８０ｎｍ（芳香族アミノ酸）での吸光度によりモニターし、このピーク面積を標準物質のピーク面積に対して積分することにより定量する。ＧＬＰ−１化合物のジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる加水分解速度をＧＬＰ−１化合物の１０％未満しか加水分解されないインキュベーション時間で推定する。
【００３１】
ペプチドまたは化合物を言及して本明細書中で使用される用語“インスリン分泌性”は、高い血漿糖レベルに応答してインスリンの分泌を刺激する能力を意味する。インスリン分泌性ペプチド及び化合物はＧＬＰ−１受容体のアゴニストである。化合物のインスリン分泌性は当業界で公知のインビトロまたはインビボアッセイにより調べることができる。ペプチドのような化合物のインスリン分泌性を調べるためには以下のインビトロアッセイが使用され得る。インスリン分泌性化合物は、好ましくは５ｎＭ未満、より好ましくは５００ｐＭ未満のＥＣ５０値を示す。
【００３２】
クローン化ヒトＧＬＰ−１受容体（ＢＨＫ ４６７−１２Ａ）を発現する子ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞を１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００μｌ／ｍｌのストレプトマイシン、１０％ウシ胎児血清及び１ｍｇ／ｍｌのジェネテシンＧ−４１８（Life Technologies）を添加したＤＭＥＭ培地において増殖させる。血漿膜は、緩衝剤（更に５ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（Sigma）、５ｍｇ／Ｌのペプスタチン（Sigma）、１００ｍｇ／Ｌのバシトラシン（Sigma）及び１６ｍｇ／Ｌのアプロチニン（カリフォルニア州ラホヤに所在のCalbiochem-Novabiochem)を含有する１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、３０ｍＭ ＮａＣｌ及び１ｍＭ ジチオトレイトール，ｐＨ７．４）中でホモジナイズすることにより作成する。ホモジネートを４１％ｗ／ｖ スクロース層の上で遠心させた。２層間の白色帯を緩衝剤で希釈し、遠心した。血漿膜は使用するまで−８０℃で保存した。
【００３３】
機能的受容体アッセイは、インスリン分泌性ペプチドまたはインスリン分泌性化合物による刺激に対する応答としてｃＡＭＰを測定することにより実施する。インキュベーションは、総容量が１４０ｍｌの９６ウェル微量測定プレートにおいて５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１．５ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．７ｍＭ ＡＴＰ、２０ｍＭ ＧＴＰ、２ｍＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、０．０１％ｗ／ｖ トゥイーン２０，ｐＨ７．４の最終濃度で実施する。化合物を緩衝剤中に溶解し、希釈する。実験毎にＧＴＰを新たに作成する。各ウェルに膜２．５μｇを添加し、混合物を振とうしながら室温、暗所で９０分間インキュベートする。０．５Ｍ ＨＣｌ（２５ｍｌ）を添加して反応を停止する。形成されたｃＡＭＰをシンチレーションプロキシミティアッセイ（ＲＰＡ ５４２，英国アマシャム）により測定する。化合物について用量−応答曲線をプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてＥＣ５０値を算出する。
【００３４】
本明細書中で使用される用語“インスリン分泌性化合物のプロドラッグ”は、患者に投与後インスリン分泌性化合物に変換される化学的に修飾されている化合物を意味する。前記プロドラッグは通常インスリン分泌性化合物のアミノ酸延長形態またはエステルである。
【００３５】
本明細書中で使用される用語“エキセンディン−４化合物”は、エキセンディン−４（１−３９）（配列番号２）、そのインスリン分泌性断片、そのインスリン分泌性アナログ及びそのインスリン分泌性誘導体と定義される。エキセンディン−４のインスリン分泌性断片は、全配列がエキセンディン−４（配列番号２）の配列中に見られ得、少なくとも１つの末端アミノ酸が欠失しているインスリン分泌性ペプチドである。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性断片の例はエキセンディン−４（１−３８）及びエキセンディン−４（１−３１）である。化合物のインスリン分泌性は当業界で公知のインビボまたはインビトロアッセイにより調べることができる。例えば、化合物を動物に投与し、インスリン濃度を経時的にモニターしてもよい。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性アナログは、前記アナログがインスリン分泌性であるかまたはインスリン分泌性化合物のプロドラッグである条件で、１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されている及び／または１つ以上のアミノ酸残基が欠失している及び／または１つ以上のアミノ酸残基が付加されている分子を指す。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性アナログの例は、２位及び３位のアミノ酸残基がそれぞれセリン及びアスパラギン酸で置換されているＳｅｒ２Ａｓｐ３−エキセンディン−４（１−３９）である（この特定アナログは当業界でエキセンディン−３としても公知）。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性誘導体及びそのアナログは、当業者がこれらのペプチドの誘導体であると見なすもの、すなわち前記誘導体がインスリン分泌性であるかまたはインスリン分泌性化合物のプロドラッグである条件で親ペプチド分子中に存在しない置換基を少なくとも１個有しているものである。置換基の例はアミド、炭水化物、アルキル基、エステル及び親油性置換基である。エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌性誘導体及びそのアナログの例はＴｙｒ３１−エキセンディン−４（１−３１）−アミドである。
【００３６】
本明細書中で使用される用語“安定なエキセンディン−４化合物”は化学的に修飾されたエキセンディン−４（１−３９）、すなわち“安定なＧＬＰ−１化合物”の定義中で説明した方法により測定してヒトにおいて少なくとも１０時間のインビボ血漿消失半減期を示すアナログまたは誘導体を意味する。
【００３７】
用語“ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物”は、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物の定義中で説明したアッセイにより測定してエキセンディン−４（配列番号２）よりも血漿ペプチダーゼのジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）に対してより耐性であるエキセンディン−４化合物を意味する。
【００３８】
本明細書中で使用される用語“等電点”は、ペプチドのようなマクロ分子の全正味電荷がゼロであるｐＨ値を意味する。ペプチドの場合、幾つかの帯電基が存在していてもよいが、等電点ではこれら全ての電荷の合計はゼロである。等電点を越えるｐＨ値ではペプチドの全正味電荷は負であり、等電点以下のｐＨ値ではペプチドの全正味電荷は正である。
【００３９】
医薬組成物に言及して本明細書中で使用される用語“復元された”は、活性医薬成分を含む固体材料に水を添加することにより形成される水性組成物を意味する。復元用医薬組成物は許容できる半減期を有する液体組成物を生成できない場合に適用される。復元された医薬組成物の例は、凍結乾燥組成物に水を添加すると生ずる溶液である。この溶液は多くの場合非経口投与用であり、よって固体材料を復元するために通常注射用蒸留水が使用される。
【００４０】
医薬組成物中のペプチドの濃度に関連して本明細書中で使用される用語“約”は±１０％を意味する。よって、濃度“約５ｍｇ／ｍｌのインスリン”は４．５ｍｇ／ｍｌのインスリン〜５．５ｍｇ／ｍｌのインスリンの濃度を意味する。
【発明の説明】
【００４１】
一つの側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用医薬組成物に関する。本発明の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは７．０〜９．０である。本発明の実施形態では、前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨは７．０〜８．０である。本発明の別の実施形態では、前記組成物は溶液である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は固体である。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は水溶液（例えば、緩衝剤または注射用蒸留水）で復元される。
【００４２】
本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は注射または注入による投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は皮下投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は筋肉内投与に適している。本発明の別の実施形態では、前記医薬組成物は静脈内投与に適している。
【００４３】
更なる実施形態で、本発明は、食事関連インスリンペプチドが４時間未満の時間作用を有する医薬組成物に関する。別の側面において、本発明は、前記インスリンペプチドがヒトインスリン、ヒトインスリンのアナログ、ヒトインスリンの誘導体またはヒトインスリンアナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記インスリンペプチドはヒトインスリンである。
【００４４】
更なる側面において、本発明は、インスリンペプチドがヒトインスリンアナログである医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＬｙｓＢ２８，ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記ヒトインスリンアナログはデス（Ｂ３０）ヒトインスリンである。本発明の別の実施形態では、前記インスリンペプチドはヒトインスリンアナログの誘導体である。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中の食事関連インスリンペプチドの濃度は約１．６〜約５．６ｍｇ／ｍｌ、約２．６〜約４．６ｍｇ／ｍｌまたは約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中の食事関連インスリンペプチドの濃度は約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌ、約３．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌまたは約５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌである。
【００４５】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は２つの異なるインスリンペプチドを含む。
【００４６】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログはＡｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１９Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｅｕ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｈｉｓ３７−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、そのアナログ及びこれらの誘導体からなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは２２位にＧｌｕ残基を有する。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは８位にＬ−ヒスチジン残基を有する。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは８位にＶａｌ残基を有する。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体はＧＬＰ−１（７−３６）−アミドである。
【００４７】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがリシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、前記親油性置換基は８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する。本発明の別の実施形態では、スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは血漿安定性のＧＬＰ−１化合物である。本発明の別の実施形態では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体はＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは２７〜４３アミノ酸残基、好ましくは２８〜３８アミノ酸残基、更に好ましくは３０〜３４アミノ酸残基を有する。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約２〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５〜約１２ｍｇ／ｍｌまたは約８〜約１１ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約５〜約７．５ｍｇ／ｍｌである。
【００４８】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドがエキセンディン−４（配列番号２）、エキセンディン−４アナログ、エキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはエキセンディン−４（配列番号２）である。本発明の別の実施形態では、エキセンディン−４アナログはエキセンディン−３またはＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である。本発明の別の実施形態では、エキセンディン−４アナログの誘導体はアシル化エキセンディン−４アナログまたはペグ化エキセンディン−４アナログである。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドがリシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているエキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である。本発明の別の実施形態では、前記親油性置換基は８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有している。本発明の別の実施形態では、スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドはジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは血漿安定性のエキセンディン−４化合物である。本発明の別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは３０〜４８アミノ酸残基、３３〜４５アミノ酸残基、好ましくは３５〜４３アミノ酸残基、更に好ましくは３７〜４１アミノ酸残基を有する。本発明の別の実施形態では、医薬組成物中のインスリン分泌性ペプチドの濃度は約５μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．ｌ〜約３ｍｇ／ｍｌまたは約０．２〜約１ｍｇ／ｍｌである。
【００４９】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチドの等電点が３．０〜７．０、４．０〜６．０、好ましくは４．２〜５．５、更に好ましくは４．３〜５．２である医薬組成物に関する。
【００５０】
一つの側面において、本発明は更に亜鉛を含む医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、亜鉛／インスリンペプチドのモル比は１／６〜１／２（モル／モル）、好ましくは３／１２〜５／１２（モル／モル）である。
【００５１】
別の側面において、本発明は、食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。
【００５２】
別の側面において、本発明は、インスリンペプチドがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約１〜約２５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度は約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである。
【００５３】
別の側面において、本発明は、インスリンペプチドがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンであり、インスリン分泌性ペプチドがＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンの濃度は約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、ＺＰ−１０の濃度は約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌである。
【００５４】
本発明の別の実施形態では、保存剤はフェノール、ｍ−クレゾールまたはその混合物である。
【００５５】
本発明の別の側面において、医薬組成物は緩衝剤を含む。本発明の１実施形態では、緩衝剤はリン酸塩、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、グリシン、Ｎ−グリシルグリシン、クエン酸塩またはその混合物である。
【００５６】
本発明の別の側面において、医薬組成物は等張剤を含む。１実施形態では、等張剤は塩ではない。別の実施形態では、等張剤はマンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコールまたはその混合物から選択される。
【００５７】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤、安定化剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用可溶性医薬組成物に関する。本発明の１実施形態では、安定化剤はＬ−ヒスチジン、イミダゾール及びＬ−アルギニンからなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、安定化剤はポリエチレングリコールである。
【００５８】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤、界面活性剤及び任意に等張剤を含む可溶性医薬組成物に関する。１実施形態では、界面活性剤はポロキサマーである。別の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。別の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー４０７、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３１及びポロキサマー３３８からなる群から選択される。別の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０（トゥイーン２０）である。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約５〜約３０００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約１０〜約５００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約２０〜約３００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は約５０〜約２００ｍｇ／Ｌである。別の実施形態では、医薬組成物は２つの異なる界面活性剤を含む。別の実施形態では、医薬組成物はポロキサマー１８８及びポリソルベート２０（トゥイーン２０）を含む。本発明の別の実施形態では、界面活性剤は洗剤、エトキシル化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン誘導体（例えば、アルキル化及びアルコキシル化誘導体（例：トゥイーン２０またはトゥイーン８０のようなトゥイーン））、モノグリセリドまたはそのエトキシル化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、グリセロール、コール酸またはその誘導体、レシチン及びアルコール；リン脂質、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）及びスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）；ＤＳＳ（ドクサートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドクサートカルシウム（ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドクサートカリウム（ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）；ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、胆汁酸及びその塩、及びグリシンまたはタウリンコンジュゲート；ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート；アニオン性（アルキル−アリール−スルホネート）１価界面活性剤；パルミトイルリソホスファチジル−Ｌ−セリン；リソリン脂質（例えば、エタノールアミン、コリン、セリンまたはスレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェートエステル）、リソホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシ（アルキルエーテル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体（例えば、リソホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、並びにコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトールである極性ヘッド基の修飾物、正帯電したＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リソホスファチジルセリン及びリソホスファチジルスレオニンのラウロイル及びミリストイル誘導体）；双イオン性界面活性剤（例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−コールアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリソホスファチジルコリン、鶏卵リソレシチン）；カチオン性界面活性剤（例えば、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウムのような第４級アンモニウム塩基）；ノニオン性界面活性剤；ポリエチレンオキシド/ポリプロピレンオキシドブロックコポリマー（プルロニック／テトロニック、トリトンＸ−１００、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド）またはポリマー界面活性剤（トゥイーン４０、トゥイーン８０、Ｂｒｉｊ−３５）；フシジン酸誘導体（例えば、タウロ−ジヒドロフシジン酸ナトリウム等）；長鎖脂肪酸及びその塩Ｃ６−Ｃ１２（例えば、オレイン酸及びカプリル酸）、アシルカルニチン及び誘導体、リシン、アルギニンまたはヒスチジンのＮα−アシル化誘導体、リシンまたはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リシン、アルギニンまたはヒスチジンと中性または酸性アミノ酸の組合せからなるジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの帯電アミノ酸の組合せからなるトリペプチドのＮα−アシル化誘導体；イミダゾリン誘導体類から選択される界面活性剤；またはその混合物から選択される。これらの特定界面活性剤の各々が本発明の代替実施形態を構成する。本発明の更なる実施形態では、界面活性剤はポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）である。本発明の更なる実施形態では、医薬組成物は約１〜約５００ｐｐｍ、好ましくは約１０〜約１２０ｐｐｍの濃度の界面活性剤を含む。
【００５９】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む高血糖症の治療方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む過食または過食症の治療方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む２型糖尿病、グルコース許容値低下、１型糖尿病、肥満、高血圧、症候群Ｘ、異脂肪症、認識障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の冠動脈障害、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療または予防方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む２型糖尿病の進行を遅らすまたは防ぐ方法に関する。別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を有効量非経口投与することを含む摂食を抑える、β細胞アポトーシスを低下させる、β細胞及びβ細胞塊の機能を向上させる及び／またはβ細胞に対するグルコース感受性を回復させる方法に関する。本発明の医薬組成物を（例えば、ペンまたは注射器を用いて）注射により投与するときには、通常１日３回、好ましくは食事前に投与する。大量の注射は患者にとって不快であるので、各回の投与量が約５００μｌ未満または約２００μｌ未満であることが好ましい。本発明の医薬組成物をポンプによる投与するときには、通常１日あたり少なくとも１０回以上連続的または非連続的に投与される。本発明の１実施形態では、治療方法は約３０〜約６００μｌ／日、例えば約６０〜約３６０μｌ／日である有効量の医薬組成物の投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は皮下注射により投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法はポンプにより投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記方法は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含み、前記医薬組成物の不連続投与はパルス間の期間より短い期間のパルス投与による。
【００６０】
別の側面において、本発明は、インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む非経口投与用医薬組成物を製造するためのインスリン分泌性ペプチド及び食事関連インスリンペプチドの使用に関する。本発明の１実施形態では、前記使用は皮下注射により投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用はポンプにより投与するための医薬組成物を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含む。本発明の別の実施形態では、前記使用は不連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによる投与を含み、前記医薬組成物の不連続投与はパルス間の期間より短い期間のパルス投与による。
【００６１】
別の側面において、本発明は、非経口投与により高血糖症を治療するためのインスリンペプチド、インスリン分泌性ペプチド、医薬的に許容され得る緩衝剤、医薬的に許容され得る保存剤、界面活性剤及び任意に等張剤を含む医薬組成物を製造するためのインスリンペプチド及びインスリン分泌性ペプチドの使用に関する。
【実施例１】
【００６２】
混合物のインビボでのブタデーター
インスリンアスパート（insulin aspart）のＴｙｒ Ａ１４を１２５Ｉで標識して、インスリンアスパート(ＡｓｐＢ２８-ヒトインスリン)及びリラグルチド(Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）)の混合物をブタに皮下投与するために調製した。この研究計画は、注入部位からのインスリンアスパートの消失を外部ガンマー計数により調べると同時にリラグルチド(Liraglutide)血漿濃度の時間経過を最長７２時間モニターすることであった。
【００６３】
アスパート組成物（基準）：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６４】
混合アスパート：リラグルチド（１：１）組成物：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、６００μＭのリラグルチド、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６５】
混合アスパート：リラグルチド（１：５）組成物：
６００μＭのアスパート（トレーサー付き）、３０００μＭのリラグルチド、３００μＭのＺｎ（Ａｃ）２，ｐＨ７．４、３０ｍＭのフェノール、１．６％のグリセロール。
【００６６】
６匹の体重が８０〜１００ｋｇの正常な健康ブタ（Dansk Landrace,ＬＤＹ）を研究に含めた。各ブタの首の片側に１００μｌのインスリンアスパート組成物（基準）、反対側には１００μｌの混合アスパート／リラグルチド組成物を投与した。インスリンアスパート基準については６匹のブタで、１：１及び１：５混合物については３匹ずつのブタで、放射線標識したインスリンアスパートの消失経過を両注入部位で測定した。同時に、リラグルチド血漿濃度の時間経過をモニターするために血液サンプルを７２時間にわたり血液サンプルを採取した。
【００６７】
標準偏差を含む平均消失曲線
平均消失曲線を図１に示す。１：５混合物を投与後皮下組織からのインスリンアスパートの消失対時間は基準及び１：１混合物のいずれよりも僅かに遅かった。注射後の残存放射能の７５％、５０％及び２５％の平均（ＳＤ）時間を計算した。下表１を参照されたい。
【表１】
【００６８】
リラグルチドの薬物動態
血漿濃度時間データに基づいて薬物動態を算出した。１：５組成物からのリラグルチドはＡＵＣを５倍上昇させ、このことからリラグルチドの相対バイオアベイラビリティーが変化しないことが確認されたので、ＡＵＣに基づいてリラグルチドの吸収は使用した混合物と無関係であるとの結論を得た。
【００６９】
上記ＰＫパラメーターに基づいて、食事時（朝食、昼食及び夕食）に０．２ナノモル／ｋｇのリラグルチドをアスパートと同時に投与することを示すシミュレーションを実施した。食事時に約０．２ナノモル／ｋｇのリラグルチドを投与すると満足なリラグルチド血漿レベルが得られ、１：１が最も可能性があるアスパート：リラグルチド比であると示唆される。
【００７０】
図２及び３は、上記した混合物を皮下投与後のリラグルチドの血漿レベルを示している。
【表２】
【実施例２】
【００７１】
２つの医薬組成物を本明細書の記載に従って製造した。両医薬組成物とも食事関連インスリンＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（アスパート）及びインスリン分泌性ペプチドＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）（リラグルチド）を含んでいた。両医薬組成物とも、アスパート濃度は０．６ｍＭであり、リラグルチド濃度は１．２ｍＭである。さらに、両組成物は１０ｍＭのＮａＣｌ、８ｍＭのリン酸緩衝剤、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノールを含んでいた。ポロキサマー１８８非含有の組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有の医薬組成物（白菱形）のそれぞれ８日間及び７日間の濁度測定値を示す（図４）。
【実施例３】
【００７２】
２つの医薬組成物を本明細書の記載に従って製造した。両医薬組成物とも食事関連インスリンＡｓｐＢ２８−ヒトインスリン（アスパート）及びインスリン分泌性ペプチドＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）（リラグルチド）を含んでいた。両医薬組成物とも、アスパート濃度は０．６ｍＭであり、リラグルチド濃度は１．２ｍＭである。さらに、両組成物は０．３５ｍＭの５−［６−（５−シアノ−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾル−４−イル）ナフタレン−２−イルオキシ］ペンタン酸、１０ｍＭのビシン緩衝剤、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノールを含んでいた。ポロキサマー１８８非含有の医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有の医薬組成物（白菱形）の濁度測定を１３日間実施した（図５）。
【化１】
【実施例４】
【００７３】
以下の医薬組成物を製造する。
【００７４】
Ｆ１：１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、３ Ｚｎ／ｈｅｘ、０．６ｍＭのアスパート、８ｍＭのビシン、５０ｐｐｍのポロキサマー１８８（ｐＨ７．７）。
【００７５】
Ｆ２：１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、３ Ｚｎ／ｈｅｘ、０．６ｍＭのアスパート、８ｍＭのビシン（ｐＨ７．７）。
【００７６】
医薬組成物の物理的安定性を促進ストレス試験を用いて評価する。ストレス試験はローテーション試験として実施する。各組成物の５カートリッジ（ガラス容器）に空気（５０μｌ）を加える。カートリッジを３０回転／分の回数で毎日４時間回転させる。２２日回転後試験を停止させる。毎日または必要に応じてカートリッジを精査する。組成物の濁度をＨＡＣＨ比濁計２１００ＡＮを用いて濁度測定することにより調べる。液体の濁度測定は“比濁計濁度単位”（ＮＴＵ）で特定する。タンパク質の物理的不安定性は濁度測定値が高いことにより特徴づけられる。
【００７７】
実験では、Ｆ２組成物ではＮＴＵ測定値がＦ１組成物のＮＴＵトレースに比して非常に急速に上昇することを示している。
【実施例５】
【００７８】
チオフラビン（ＴｈＴ）フィブリル化アッセイ：原理及び例
ペプチドの物理的安定性が低いとアミロイドフィブリルが形成される恐れがある。これはサンプル中で秩序ある糸様の高分子構造として見られ、最終的にはゲルが形成される。アミロイドフィブリル化は従来サンプルを肉眼で精査することにより調べられてきた。しかしながら、この種の測定は非常に主観的であり、観察者に依存する。従って、小分子インジケータープローブの使用が非常に有利である。チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はそのようなプローブであり、フィブリルと結合したとき明確な蛍光特徴を有する［Naikiら, Anal.Biochem.177, 244-249(1989)；LeVine, Methods Enzymol., 309:274-284(1999)］。
【００７９】
フィブリル形成の時間経過は以下の式のシグモイド曲線により説明され得る［Nielsenら, Biochemistry, 40:6036-6046(2001)］：
【数１】
【００８０】
ここで、Ｆは時間ｔでのＴｈＴ蛍光である。定数ｔ０は最大蛍光の５０％に達するのに要する時間である。フィブリル形成を説明する２つの重要なパラメーターはｔ０−２τにより算出される時間差及び見かけ速度定数ｋａｐｐ＝１／τである。
【００８１】
フィブリル化の一般的な開始メカニズムとしてペプチドの部分的に折り畳まれた中間体の形成が示唆されている。中間体の幾つかが核となって鋳型が形成され、この鋳型に基づいて更に中間体が合体することがあり、フィブリル化が進行する。時間差は核の臨界的塊が構築される間隔に相当し、見かけ速度定数はフィブリル自体が形成される速度である。
【００８２】
サンプル作成
サンプルは各アッセイ前に新たに作成した。各サンプル組成物は説明文に記載されている。サンプルのｐＨは適当量の濃ＮａＯＨ及びＨＣｌＯ４を用いて所望値に調節した。チオフラビンＴをＨ２Ｏ中のストックト溶液からサンプルに１μＭの最終濃度まで添加した。
【００８３】
２００μｌのサンプルアリコートを９６ウェル微量測定プレート（Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ−Ｐｌａｔｅ（商標）９６，白色ポリスチレン）に導入した。通常、（１つの試験条件に対応する）８個ずつの各サンプルをウェルの１カラムに入れた。このプレートをＳｃｏｔｃｈ Ｐａｄ（Qiagen）でシールした。
【００８４】
インキュベーション及び蛍光測定
所与温度でのインキュベーション、振とう及びＴｈＴ蛍光発光の測定はＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ蛍光プレートリーダー（Thermo Labsystems）を用いて実施した。温度を３７℃に調節した。提示した全てのデータにおいて軌道振動を１ｍｍの振幅で９６０ｒｐｍに調節した。４４４ｎｍフィルターを介する励起及び４８５ｎｍフィルターを介する発光を用いて蛍光を測定した。
【００８５】
各ランは、プレートをアッセイ温度で１０分間インキュベートすることにより開始した。プレートを通常４５時間２０分毎に測定した。各測定の間、プレートを振とうし、上記したように加熱した。
【００８６】
データ処理
更に処理し、曲線を描くために測定ポイントをマイクロソフト・エクセルフォーマットに保存し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてフィッティングを実施した。フィブリルの非存在下でのＴｈＴからのバックグラウンド発光は無視できる程度であった。データポイントは通常８サンプルの平均であり、標準偏差誤差バーも示した。同一実験で得たデータのみ（すなわち、同一プレート上のサンプル）同一グラフに示し、実験間のフィブリル化の相対尺度を確保する。
【００８７】
データ組が式（１）に当てはめられ得る。しかしながら、この場合完全シグモイド曲線が測定中必ずしも得られないので、フィブリル化の程度を異なる時点での８つのサンプルの平均と標準偏差としてまとめたＴｈＴ蛍光として表示する
【実施例６】
【００８８】
水中にインスリンアスパート及びリラグルチドを１：２の混合比で含み、ｐＨ７．７に調節されている組成物は図６に示すように物理的に非常に不安定である。ＴｈＴ蛍光信号は即座に上昇し、１０時間アッセイ時間前にプラトーに達する。しかしながら、ポロキサマー１８８の添加はこの組成物を安定化させる。５０ｐｐｍ及び２００ｐｐｍのポロキサマー１８８では、インスリンアスパート−リラグルチド混合組成物はＴｈＴ蛍光をバックグラウンドレベル以上に上昇させない。よって、これらのサンプルは物理的に完全に安定であり、フィブリル化しない。
【実施例７】
【００８９】
ポリソルベート２０も水中で処方されたインスリンアスパート−リラグルチドの１：２混合物を安定化できる。図７参照。２００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させるとフィブリル化が完全に抑制される。
【実施例８】
【００９０】
リン酸ナトリウム緩衝剤中でインスリンアスパート及びリラグルチドを１：２の混合比で処方したとき、サンプルは物理的に非常に不安定である。図８参照。５０ｐｐｍまたは２００ｐｐｍのポロキサマー１８８を存在させると、フィブリル化の開始までの時間差が長くなる。ポロキサマー１８８の非存在下ではフィブリル化が即座に生ずるが、５０ｐｐｍまたは２００ｐｐｍのポロキサマー１８８の存在下では１５時間以上長い。最高濃度のポロキサマー１８８を有するサンプルは４０時間のアッセイ時間後最低のＴｈＴ信号を示す。
【実施例９】
【００９１】
ポリソルベート２０も、リン酸ナトリウム緩衝剤中で処方したインスリンアスパート−リラグルチドの１：２混合物を安定化させる。図９参照。１００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させると、ポリソルベート２０なしのサンプルに比して時間差が５時間以上長くなる。２００ｐｐｍのポリソルベート２０を存在させると、サンプルのフィブリル化が完全に抑制される。
【実施例１０】
【００９２】
インスリンアスパート及びリラグルチドが１：５の比で混合されている組成物も物理的に非常に不安定である。これらの組成物は、１００ｐｐｍのポロキサマー１８８または２００ｐｐｍのポリソルベート２０の存在により安定化される。これは、ポロキサマー１８８またはポリソルベート２０の存在下でのフィブリル化開始までの時間差のポロキサマー１８８またはポリソルベート２０なしの類似組成物に比した延長したことから観察される。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】放射標識したインスリンアスパートの消失を示す平均消失曲線である。
【図２】混合物を皮下注射後のリラグルチドの血漿レベル（対数目盛）である。
【図３】混合物を皮下注射後のリラグルチドの血漿レベル（等分目盛）である。
【図４】アスパート及びリラグルチドを含有する２つの医薬組成物、すなわちポロキサマー１８８非含有医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５００ｐｐｍ）含有医薬組成物（白菱形）の濁度測定値である。
【図５】アスパート及びリラグルチドを含有する２つの医薬組成物、すなわちポロキサマー１８８非含有医薬組成物（×）及びポロキサマー１８８（５０ｐｐｍ）含有医薬組成物（白菱形）の濁度測定値である。
【図６】全てのサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、４０ｍＭのフェノール、１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．７）を含有している。サンプルの２つにポロキサマー１８８が添加されている。
【図７】両方のサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．７）を含有している。１つのサンプルにポリソルベート２０が添加されている。
【図８】全てのサンプルが０．６ｍＭのインスリンアスパート、０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、８ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．７）、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコールを含有している。２つのサンプルにポロキサマー１８８が添加されている。
【図９】０．６ｍＭのインスリンアスパート，０．３ｍＭのＺｎ（Ａｃ）２、１．２ｍＭのリラグルチド、８ｍＭのリン酸ナトリウム、４０ｍＭのフェノール、１４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール（ｐＨ７．７）を含有している。サンプルの２つにポリソルベート２０が添加されている。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む、非経口投与用の可溶性医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨが、約７．０〜約９．０である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨが、約７．０〜約８．０である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物が溶液である請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記組成物が固体である請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
水溶液、例えば緩衝剤または注射用蒸留水で復元される請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
注射または注入により投与するのに適している請求項１〜６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記食事関連インスリンペプチドが４時間未満の時間作用を有する請求項１〜７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記食事関連インスリンペプチドが、ヒトインスリン、ヒトインスリンのアナログ、ヒトインスリンの誘導体、またはヒトインスリンアナログの誘導体である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンアナログである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＬｙｓＢ２８，ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記食事関連ヒトインスリンアナログが、デス（Ｂ３０）ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンアナログの誘導体である請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記食事関連インスリンペプチドの濃度が、約１．６〜約５．６ｍｇ／ｍｌ、約２．６〜約４．６ｍｇ／ｍｌまたは約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項１〜１６の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記食事関連インスリンペプチドの濃度が、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌ、約３．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌまたは約５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌである請求項１〜１６の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
２つの異なる前記インスリンペプチドを含む請求項１〜１８の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である請求項１〜１９の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログが、Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１９Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｅｕ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｈｉｓ３７−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、そのアナログ及びこれらの誘導体からなる群から選択される請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体がＧＬＰ−１（７−３６）−アミドである請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記インスリン分泌性ペプチドが、リシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体、またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である請求項１〜２０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記親油性置換基が、８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される請求項２３〜２４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物である請求項１〜２０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記インスリン分泌性ペプチドが、血漿安定性のＧＬＰ−１化合物である請求項１〜２０及び２６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体が、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜２０、２４〜２５及び２７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記インスリン分泌性ペプチドが、２７〜４３個のアミノ酸残基、好ましくは２８〜３８個のアミノ酸残基、更に好ましくは３０〜３４個のアミノ酸残基を有する請求項２０〜２８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記インスリン分泌性ペプチドの濃度が、約１〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約２〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５〜約１２ｍｇ／ｍｌまたは約８〜約１１ｍｇ／ｍｌである請求項２０〜２９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記インスリン分泌性ペプチドが、エキセンディン−４（配列番号２）、エキセンディン−４アナログ、エキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である請求項１〜１９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記インスリン分泌性ペプチドが、エキセンディン−４（配列番号２）である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記エキセンディン−４アナログが、エキセンディン−３またはＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記エキセンディン−４アナログの誘導体が、アシル化エキセンディン−４アナログまたはペグ化エキセンディン−４アナログである請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記インスリン分泌性ペプチドが、リシン残基、例えば１個のリシンを有し、該リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているエキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記親油性置換基が、８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記スペーサーが存在しており、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される請求項３５〜３６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物である請求項１〜１９、３１及び３５〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記インスリン分泌性ペプチドが、血漿安定性のエキセンディン−４化合物である請求項１〜１９、３１及び３４〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記インスリン分泌性ペプチドが、３０〜４８個のアミノ酸残基、３３〜４５個のアミノ酸残基、好ましくは３５〜４３個のアミノ酸残基、更に好ましくは３７〜４１個のアミノ酸残基を有する請求項３１〜３９の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記インスリン分泌性ペプチドの濃度が、約５μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌまたは約０．２〜約１ｍｇ／ｍｌである請求項２０〜２９及び３１〜４０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記インスリン分泌性ペプチドの等電点が、３．０〜７．０、４．０〜６．０、好ましくは４．２〜５．５、更に好ましくは４．３〜５．２である請求項１〜４１の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項４３】
亜鉛を含む請求項１〜４２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
亜鉛／インスリンペプチドのモル比が、１／６〜１／２（モル／モル）、好ましくは３／１２〜５／１２（モル／モル）である請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜１０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ヒトインスリンの濃度が約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記インスリンペプチドがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度が約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度が約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記インスリンペプチドがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンの濃度が、約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記ＺＰ−１０の濃度が、約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌである請求項５０〜５１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記保存剤がフェノール、ｍ−クレゾールまたはその混合物である請求項１〜５２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記医薬組成物が緩衝剤を含む請求項１〜５３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記緩衝剤がリン酸塩、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、グリシン、Ｎ−グリシルグリシン、クエン酸塩またはその混合物である請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記医薬組成物が等張剤を含む請求項１〜５５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記等張剤が塩でない請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記等張剤がマンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコールまたはその混合物から選択される請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
更に安定化剤を含む、請求項１〜５８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記安定化剤が、Ｌ−ヒスチジン、イミダゾール及びＬ−アルギニンからなる群から選択される請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記安定化剤がポリエチレングリコールである請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
更に界面活性剤を含む、請求項１〜６１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記界面活性剤がポロキサマーである請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
前記界面活性剤がポロキサマー１８８である請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
前記界面活性剤がポロキサマー４０７、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３１及びポロキサマー３３８からなる群から選択される請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
前記界面活性剤がポリソルベート２０（トゥイーン２０）である請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項６７】
前記界面活性剤の濃度が約５〜約３０００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６８】
前記界面活性剤の濃度が約１０〜約５００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
前記界面活性剤の濃度が約２０〜約３００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
前記界面活性剤の濃度が約５０〜約２００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
２つの異なる前記界面活性剤を含む請求項６２〜７０の何れか１項に記載医薬組成物。
【請求項７２】
ポロキサマー１８８及びポリソルベート２０（トゥイーン２０）を含む請求項７１に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
有効量の請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を非経口投与することを含む高血糖症の治療方法。
【請求項７４】
前記医薬組成物の有効量が、約３０〜約６００μｌ／日、例えば約６０〜約３６０μｌ／日である請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記投与が皮下注射によるものである、請求項７３〜７４の何れか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記投与がポンプによるものである、請求項７３〜７５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７７】
前記投与が、非連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによるものである請求項７３〜７６の何れか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記医薬組成物の非連続投与が、パルス間の期間よりも短い期間のパルス投与によるものである請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【請求項８０】
前記医薬組成物が皮下注射用である、請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
前記投与がポンプによるものである、請求項７９〜８０の何れか１項に記載の使用。
【請求項８２】
前記投与が、非連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによるものである請求項７９〜８１の何れか１項に記載の使用。
【請求項８３】
前記医薬組成物の非連続投与が、パルス間の期間よりも短い期間のパルス投与によるものである請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
高血糖症を治療するための請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【請求項８５】
過食または過食症を治療するための請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【請求項１】
インスリン分泌性ペプチド、食事関連インスリンペプチド、医薬的に許容され得る保存剤及び任意に等張剤を含む、非経口投与用の可溶性医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨが、約７．０〜約９．０である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物または前記医薬組成物の復元溶液のｐＨが、約７．０〜約８．０である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物が溶液である請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記組成物が固体である請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
水溶液、例えば緩衝剤または注射用蒸留水で復元される請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
注射または注入により投与するのに適している請求項１〜６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記食事関連インスリンペプチドが４時間未満の時間作用を有する請求項１〜７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記食事関連インスリンペプチドが、ヒトインスリン、ヒトインスリンのアナログ、ヒトインスリンの誘導体、またはヒトインスリンアナログの誘導体である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンアナログである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＬｙｓＢ２８，ＰｒｏＢ２９−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記食事関連ヒトインスリンアナログがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記食事関連ヒトインスリンアナログが、デス（Ｂ３０）ヒトインスリンである請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンアナログの誘導体である請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記食事関連インスリンペプチドの濃度が、約１．６〜約５．６ｍｇ／ｍｌ、約２．６〜約４．６ｍｇ／ｍｌまたは約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項１〜１６の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記食事関連インスリンペプチドの濃度が、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌ、約３．５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌまたは約５〜約８．７５ｍｇ／ｍｌである請求項１〜１６の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
２つの異なる前記インスリンペプチドを含む請求項１〜１８の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号１）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である請求項１〜１９の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログが、Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ａｒｇ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１９Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｅｕ１６Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｙｒ１８Ｇｌｕ２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｈｉｓ３７−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５Ｉｌｅ３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｔｒｐ１６Ｇｌｕ２２Ｖａｌ２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、そのアナログ及びこれらの誘導体からなる群から選択される請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体がＧＬＰ−１（７−３６）−アミドである請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記インスリン分泌性ペプチドが、リシン残基、例えば１個のリシンを有し、前記リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体、またはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である請求項１〜２０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記親油性置換基が、８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記スペーサーが存在し、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される請求項２３〜２４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物である請求項１〜２０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記インスリン分泌性ペプチドが、血漿安定性のＧＬＰ−１化合物である請求項１〜２０及び２６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体が、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜２０、２４〜２５及び２７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記インスリン分泌性ペプチドが、２７〜４３個のアミノ酸残基、好ましくは２８〜３８個のアミノ酸残基、更に好ましくは３０〜３４個のアミノ酸残基を有する請求項２０〜２８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記インスリン分泌性ペプチドの濃度が、約１〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約２〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５〜約１２ｍｇ／ｍｌまたは約８〜約１１ｍｇ／ｍｌである請求項２０〜２９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記インスリン分泌性ペプチドが、エキセンディン−４（配列番号２）、エキセンディン−４アナログ、エキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である請求項１〜１９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記インスリン分泌性ペプチドが、エキセンディン−４（配列番号２）である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記エキセンディン−４アナログが、エキセンディン−３またはＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記エキセンディン−４アナログの誘導体が、アシル化エキセンディン−４アナログまたはペグ化エキセンディン−４アナログである請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記インスリン分泌性ペプチドが、リシン残基、例えば１個のリシンを有し、該リシンのε−アミノ基に親油性置換基が任意にスペーサーを介して結合しているエキセンディン−４の誘導体またはエキセンディン−４アナログの誘導体である請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記親油性置換基が、８〜４０個の炭素原子、好ましくは８〜２４個、例えば１２〜１８個の炭素原子を有する請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記スペーサーが存在しており、且つ該スペーサーがアミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される請求項３５〜３６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記インスリン分泌性ペプチドが、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護エキセンディン−４化合物である請求項１〜１９、３１及び３５〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記インスリン分泌性ペプチドが、血漿安定性のエキセンディン−４化合物である請求項１〜１９、３１及び３４〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記インスリン分泌性ペプチドが、３０〜４８個のアミノ酸残基、３３〜４５個のアミノ酸残基、好ましくは３５〜４３個のアミノ酸残基、更に好ましくは３７〜４１個のアミノ酸残基を有する請求項３１〜３９の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記インスリン分泌性ペプチドの濃度が、約５μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌまたは約０．２〜約１ｍｇ／ｍｌである請求項２０〜２９及び３１〜４０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記インスリン分泌性ペプチドの等電点が、３．０〜７．０、４．０〜６．０、好ましくは４．２〜５．５、更に好ましくは４．３〜５．２である請求項１〜４１の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項４３】
亜鉛を含む請求項１〜４２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
亜鉛／インスリンペプチドのモル比が、１／６〜１／２（モル／モル）、好ましくは３／１２〜５／１２（モル／モル）である請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記食事関連インスリンペプチドがヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜１０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ヒトインスリンの濃度が約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記インスリンペプチドがＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度が約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度が約５〜約１５ｍｇ／ｍｌであり、前記ＡｓｐＢ２８−ヒトインスリンの濃度が約３．４〜約３．８ｍｇ／ｍｌである請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記インスリンペプチドがＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンであり、前記インスリン分泌性ペプチドがＺＰ−１０（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２，配列番号３）である請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンの濃度が、約３．２〜約４．０ｍｇ／ｍｌである請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記ＺＰ−１０の濃度が、約０．１〜約３ｍｇ／ｍｌである請求項５０〜５１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記保存剤がフェノール、ｍ−クレゾールまたはその混合物である請求項１〜５２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記医薬組成物が緩衝剤を含む請求項１〜５３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記緩衝剤がリン酸塩、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、グリシン、Ｎ−グリシルグリシン、クエン酸塩またはその混合物である請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記医薬組成物が等張剤を含む請求項１〜５５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記等張剤が塩でない請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記等張剤がマンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコールまたはその混合物から選択される請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
更に安定化剤を含む、請求項１〜５８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記安定化剤が、Ｌ−ヒスチジン、イミダゾール及びＬ−アルギニンからなる群から選択される請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記安定化剤がポリエチレングリコールである請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
更に界面活性剤を含む、請求項１〜６１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記界面活性剤がポロキサマーである請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
前記界面活性剤がポロキサマー１８８である請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
前記界面活性剤がポロキサマー４０７、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３１及びポロキサマー３３８からなる群から選択される請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
前記界面活性剤がポリソルベート２０（トゥイーン２０）である請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項６７】
前記界面活性剤の濃度が約５〜約３０００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６８】
前記界面活性剤の濃度が約１０〜約５００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
前記界面活性剤の濃度が約２０〜約３００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
前記界面活性剤の濃度が約５０〜約２００ｍｇ／Ｌである請求項６２〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
２つの異なる前記界面活性剤を含む請求項６２〜７０の何れか１項に記載医薬組成物。
【請求項７２】
ポロキサマー１８８及びポリソルベート２０（トゥイーン２０）を含む請求項７１に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
有効量の請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を非経口投与することを含む高血糖症の治療方法。
【請求項７４】
前記医薬組成物の有効量が、約３０〜約６００μｌ／日、例えば約６０〜約３６０μｌ／日である請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記投与が皮下注射によるものである、請求項７３〜７４の何れか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記投与がポンプによるものである、請求項７３〜７５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７７】
前記投与が、非連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによるものである請求項７３〜７６の何れか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記医薬組成物の非連続投与が、パルス間の期間よりも短い期間のパルス投与によるものである請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【請求項８０】
前記医薬組成物が皮下注射用である、請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
前記投与がポンプによるものである、請求項７９〜８０の何れか１項に記載の使用。
【請求項８２】
前記投与が、非連続量の医薬組成物をデリバリーするポンプによるものである請求項７９〜８１の何れか１項に記載の使用。
【請求項８３】
前記医薬組成物の非連続投与が、パルス間の期間よりも短い期間のパルス投与によるものである請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
高血糖症を治療するための請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【請求項８５】
過食または過食症を治療するための請求項１〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物を製造するための、前記インスリンペプチド及び前記インスリン分泌性ペプチドの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２００７−５１０６７５（Ｐ２００７−５１０６７５Ａ）
【公表日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３８６５８（Ｐ２００６−５３８６５８）
【出願日】平成１６年１１月１２日（２００４．１１．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００７８８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４６７１６
【国際公開日】平成１７年５月２６日（２００５．５．２６）
【出願人】（３９１０３２０７１）ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ (148)
【氏名又は名称原語表記】ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ ＡＫＴＩＥ ＳＥＬＳＸＡＢ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月１２日（２００４．１１．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００７８８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４６７１６
【国際公開日】平成１７年５月２６日（２００５．５．２６）
【出願人】（３９１０３２０７１）ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ (148)
【氏名又は名称原語表記】ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ ＡＫＴＩＥ ＳＥＬＳＸＡＢ
【Ｆターム（参考）】
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