細胞透過のための過剰に荷電されたタンパク質
本発明は、過剰に荷電されたタンパク質または過剰に荷電されたタンパク質と作用物質（例えば、核酸、ペプチド、タンパク質、小分子）の複合体を細胞に送達するための組成物、調製物、システムおよび関連方法を提供する。そのようなシステムおよび方法は、過剰に荷電されたタンパク質の使用を含む。例えば、過剰に正に荷電されたタンパク質を（典型的には正味負電荷を有する）核酸と静電相互作用によって会合させることができる。いくつかの実施形態において、そのようなシステムおよび方法は、そのタンパク質を「過剰に荷電させる」（例えば、過剰に正に荷電されたタンパク質を生じさせる）ためにタンパク質の一次配列を改変することを含む。いくつかの実施形態において、過剰に荷電されたタンパク質と送達すべき１つ以上の作用物質とを含む複合体は、治療薬として有用である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
過剰に荷電されたタンパク質の調製物であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味負電荷または正電荷を有し、かつ細胞への透過のために十分な量で存在し、かつそのために調合されるものである、調製物。
【請求項２】
医薬的に許容され得る調製物である、請求項１に記載の調製物。
【請求項３】
過剰に荷電されたタンパク質、もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する方法であって、
該過剰に荷電されたタンパク質、または過剰に荷電されたタンパク質および該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を、該細胞と、該過剰に荷電されたタンパク質、または該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質の該細胞への透過を可能にするために十分な条件下で接触させ、それによって過剰に荷電されたタンパク質、もしくは該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する工程、
を含む、方法。
【請求項４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質が前記細胞を透過したことを、標識の検出、該細胞における生物学的変化の検出、または該過剰に荷電されたタンパク質もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を投与した被験体における応答、例えば障害の処置、の検出のうちの１つ以上によってさらに確認する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の核の作用物質（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｇｅｎｔ）と、
を含む、複合体。
【請求項６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、全体の正味正電荷を有する、請求項５に記載の複合体。
【請求項７】
前記全体の正味正電荷が、約＋５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記全体の正味正電荷が、約＋１０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項９】
前記全体の正味正電荷が、約＋１５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１０】
前記全体の正味正電荷が、約＋２０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１１】
前記全体の正味正電荷が、約＋２５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１２】
前記全体の正味正電荷が、約＋３０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１３】
前記全体の正味正電荷が、約＋３５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１４】
前記全体の正味正電荷が、約＋４０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１５】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質よりもより正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１６】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１７】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋１０より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１８】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１９】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項２０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に正に荷電されたＧＦＰである、請求項５に記載の複合体。
【請求項２３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１０】
の過剰に正に荷電されたＧＦＰ（＋３６ ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約２０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約３０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約４０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約５０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２９】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約１００アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約４０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約５０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約６０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１１】
の、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３９】
前記核酸が、ＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４０】
前記核酸が、ＤＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４１】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４２】
前記ＲＮＡｉ剤が、短い干渉性ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記核酸が、ＲＮＡｉを誘導する実体を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４４】
前記核酸が、アンチセンスＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４５】
前記核酸が、リボザイムまたはデオキシリボザイムを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４６】
前記核酸が、三重らせん形成を誘導するＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が、ＲＮＡアプタマーを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸が、ベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸が、ｍＲＮＡの発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が、タンパク質の発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５１】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：１である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５２】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：２である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５３】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：３である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５４】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：４である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５５】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：５である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５６】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上のペプチドまたはタンパク質と、
を含む、複合体。
【請求項５７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の小分子と、
を含む、複合体。
【請求項５８】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のポリヌクレオチドとを含む複合体。
【請求項５９】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のペプチドまたはタンパク質とを含む複合体。
【請求項６０】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上の小分子とを含む複合体。
【請求項６１】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、該対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６２】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６３】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６４】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６５】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６６】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも２つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６７】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも３つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６８】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも５つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６９】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１０のアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７０】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが、少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７１】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基のアミノ最末端とカルボキシ最末端の間の距離が、約１０アミノ酸である、請求項６１または７０に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７２】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも６０％が、該タンパク質の表面に位置する、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７３】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも７０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７４】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも８０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７５】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７６】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９５％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基が、対応する未修飾タンパク質の対応するアミノ酸残基と異なり；最高ＡｖＮＡＰＳＡスコアを有する該対応する未修飾タンパク質の少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基がリシンに変異され；および該少なくとも５つのアミノ酸残基が正に荷電される、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７８】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体と、
医薬的に許容され得る賦形剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項７９】
疾患、障害もしくは状態に罹患しやすいか、疾患、障害もしくは状態に罹患しているか、または疾患、障害もしくは状態の１つ以上の症状を示す被験体を提供する工程；および
請求項１〜７７のいずれか一項に記載の過剰に荷電されたタンパク質もしくは複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を、該被験体に、少なくとも１つの症状が改善されるように投与する工程、
を含む、方法。
【請求項８０】
前記投与する工程が、前記過剰に荷電されたタンパク質または複合体が前記被験体の細胞を透過するために十分な条件下で行われる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの異常に上昇したレベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを低下させる核酸を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの発現に関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記複合体が、発現した前記ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを低下させる核酸を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉを誘導する実体、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患、障害または状態が、異常に低いｍＲＮＡまたはタンパク質レベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを上昇させる核酸を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記核酸が、発現ベクターを構成する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記投与する工程が、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、心室内、局所、吸入および粘膜送達からなる群より選択される投与経路を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
請求項７９〜８９のいずれか一項に記載の方法を行うためのキット。
【請求項９１】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項９２】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電されたタンパク質を場合によっては選択する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９３】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電させるべきタンパク質を選択する工程；
変更すべき１つまたは複数の残基のセットを得て、過剰に荷電されたタンパク質を生成する工程；
該変更された残基のセットを有する過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項１】
過剰に荷電されたタンパク質の調製物であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味負電荷または正電荷を有し、かつ細胞への透過のために十分な量で存在し、かつそのために調合されるものである、調製物。
【請求項２】
医薬的に許容され得る調製物である、請求項１に記載の調製物。
【請求項３】
過剰に荷電されたタンパク質、もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する方法であって、
該過剰に荷電されたタンパク質、または過剰に荷電されたタンパク質および該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を、該細胞と、該過剰に荷電されたタンパク質、または該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質の該細胞への透過を可能にするために十分な条件下で接触させ、それによって過剰に荷電されたタンパク質、もしくは該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する工程、
を含む、方法。
【請求項４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質が前記細胞を透過したことを、標識の検出、該細胞における生物学的変化の検出、または該過剰に荷電されたタンパク質もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を投与した被験体における応答、例えば障害の処置、の検出のうちの１つ以上によってさらに確認する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の核の作用物質（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｇｅｎｔ）と、
を含む、複合体。
【請求項６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、全体の正味正電荷を有する、請求項５に記載の複合体。
【請求項７】
前記全体の正味正電荷が、約＋５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記全体の正味正電荷が、約＋１０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項９】
前記全体の正味正電荷が、約＋１５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１０】
前記全体の正味正電荷が、約＋２０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１１】
前記全体の正味正電荷が、約＋２５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１２】
前記全体の正味正電荷が、約＋３０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１３】
前記全体の正味正電荷が、約＋３５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１４】
前記全体の正味正電荷が、約＋４０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１５】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質よりもより正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１６】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１７】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋１０より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１８】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１９】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項２０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に正に荷電されたＧＦＰである、請求項５に記載の複合体。
【請求項２３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１０】
の過剰に正に荷電されたＧＦＰ（＋３６ ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約２０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約３０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約４０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約５０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２９】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約１００アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約４０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約５０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約６０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１１】
の、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３９】
前記核酸が、ＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４０】
前記核酸が、ＤＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４１】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４２】
前記ＲＮＡｉ剤が、短い干渉性ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記核酸が、ＲＮＡｉを誘導する実体を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４４】
前記核酸が、アンチセンスＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４５】
前記核酸が、リボザイムまたはデオキシリボザイムを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４６】
前記核酸が、三重らせん形成を誘導するＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が、ＲＮＡアプタマーを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸が、ベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸が、ｍＲＮＡの発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が、タンパク質の発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５１】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：１である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５２】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：２である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５３】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：３である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５４】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：４である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５５】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：５である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５６】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上のペプチドまたはタンパク質と、
を含む、複合体。
【請求項５７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の小分子と、
を含む、複合体。
【請求項５８】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のポリヌクレオチドとを含む複合体。
【請求項５９】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のペプチドまたはタンパク質とを含む複合体。
【請求項６０】
サイクロン（番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上の小分子とを含む複合体。
【請求項６１】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、該対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６２】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６３】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６４】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６５】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６６】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも２つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６７】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも３つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６８】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも５つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６９】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１０のアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７０】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが、少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７１】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基のアミノ最末端とカルボキシ最末端の間の距離が、約１０アミノ酸である、請求項６１または７０に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７２】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも６０％が、該タンパク質の表面に位置する、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７３】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも７０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７４】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも８０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７５】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７６】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９５％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基が、対応する未修飾タンパク質の対応するアミノ酸残基と異なり；最高ＡｖＮＡＰＳＡスコアを有する該対応する未修飾タンパク質の少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基がリシンに変異され；および該少なくとも５つのアミノ酸残基が正に荷電される、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７８】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体と、
医薬的に許容され得る賦形剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項７９】
疾患、障害もしくは状態に罹患しやすいか、疾患、障害もしくは状態に罹患しているか、または疾患、障害もしくは状態の１つ以上の症状を示す被験体を提供する工程；および
請求項１〜７７のいずれか一項に記載の過剰に荷電されたタンパク質もしくは複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を、該被験体に、少なくとも１つの症状が改善されるように投与する工程、
を含む、方法。
【請求項８０】
前記投与する工程が、前記過剰に荷電されたタンパク質または複合体が前記被験体の細胞を透過するために十分な条件下で行われる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの異常に上昇したレベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを低下させる核酸を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの発現に関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記複合体が、発現した前記ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを低下させる核酸を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉを誘導する実体、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患、障害または状態が、異常に低いｍＲＮＡまたはタンパク質レベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質レベルを上昇させる核酸を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記核酸が、発現ベクターを構成する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記投与する工程が、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、心室内、局所、吸入および粘膜送達からなる群より選択される投与経路を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
請求項７９〜８９のいずれか一項に記載の方法を行うためのキット。
【請求項９１】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項９２】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電されたタンパク質を場合によっては選択する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９３】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電させるべきタンパク質を選択する工程；
変更すべき１つまたは複数の残基のセットを得て、過剰に荷電されたタンパク質を生成する工程；
該変更された残基のセットを有する過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【図１Ａ】
【図２Ａ】
【図３Ｃ】
【図２４】
【図２７】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３４】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３２】
【図３３】
【図３５】
【図２Ａ】
【図３Ｃ】
【図２４】
【図２７】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３４】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３２】
【図３３】
【図３５】
【公表番号】特表２０１１−５２３３５３（Ｐ２０１１−５２３３５３Ａ）
【公表日】平成２３年８月１１日（２０１１．８．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０７５８８（Ｐ２０１１−５０７５８８）
【出願日】平成２１年４月２８日（２００９．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４１９８４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３４８０８
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０２０７２１３４）プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ (92)
【氏名又は名称原語表記】Ｐｒｅｓｉｄｅｎｔ ａｎｄ Ｆｅｌｌｏｗｓ ｏｆ Ｈａｒｖａｒｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年８月１１日（２０１１．８．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月２８日（２００９．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４１９８４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３４８０８
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０２０７２１３４）プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ (92)
【氏名又は名称原語表記】Ｐｒｅｓｉｄｅｎｔ ａｎｄ Ｆｅｌｌｏｗｓ ｏｆ Ｈａｒｖａｒｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ
【Ｆターム（参考）】
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