【課題】本発明は、心臓ならびに他の組織におけるマイクロＲＮＡの関与について詳述する。
【解決手段】
本発明は、心臓組織の線維症の重要なレギュレーターである、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃと呼ばれるマイクロＲＮＡファミリーの特定に関する。本発明者らは、ｍｉＲ−２９ファミリーのメンバーが、ストレスに応答して心臓組織では下方制御され、ストレス及び線維症の両方に耐性のあるマウスの心臓組織では上方制御されることを示す。心臓肥大、骨格筋線維症、その他の線維症関連疾患、及びコラーゲン喪失関連疾患を含めた繊維化疾患の治療薬として、ｍｉＲ−２９ファミリーのｍｉＲＮＡの発現及び活性をモジュレートする方法も提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）心臓線維症、心臓肥大、又は心不全を有する対象を特定する工程と、
（ｂ）前記対象にｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は機能の作動薬を投与する工程と
を含む、その必要がある対象の心臓線維症、心臓肥大、又は心不全を治療する方法。
【請求項２】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、又はこれらの組合せの成熟配列を含むポリヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ポリヌクレオチドが、配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号２０の配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が、非経口投与又は直接注射によって心臓組織に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
非経口投与が静脈内又は皮下投与である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が、経口、経皮、持続放出、制御放出、遅延放出、坐薬、カテーテル又は舌下投与によって投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
第２の治療薬を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第２の治療薬が、β遮断薬、イオノトロープ、利尿薬、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩ拮抗薬、ＢＮＰ、Ｃａ^＋＋遮断薬、エンドセリン受容体拮抗薬、及びＨＤＡＣ阻害薬からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第２の治療薬が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬と同時に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記第２の治療薬が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬の前又は後に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
心臓線維症、心臓肥大又は心不全の１つ又は複数の症状が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬の投与の後に対象内で改善される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つ又は複数の改善された症状が、高い運動能力、高い心臓駆出容積、低い左心室拡張末期圧、低い肺毛細血管楔入圧、高い心拍出量、高い心係数、低い肺動脈圧、低い左心室収縮末期及び拡張末期径、低下した心臓線維症、心筋での少ないコラーゲン沈着、低い左心室及び右心室壁応力、低い壁張力、高い生活の質、及び低い疾患関連罹患率又は死亡率、又はこれらの組合せである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬の投与が、対象での心臓肥大から心不全への移行を遅延させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）病的な心臓肥大又は心不全を発症する危険性がある対象を特定する工程と、
（ｂ）前記対象の心臓細胞でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は活性を促進する工程と
を含む、その必要がある対象で病的な肥大又は心不全を予防する方法。
【請求項１５】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は活性を促進させる工程が、心臓細胞に、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬又はｍｉＲ−２９ａ〜ｃをコードする発現ベクターを送達する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、又はこれらの組合せの成熟配列を含むポリヌクレオチドである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
発現ベクターが、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０からなる群から選択された配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
危険性のある対象が、長期にわたって管理されていない高血圧、矯正されていない弁膜症、慢性アンギナ、最近の心筋梗塞、心疾患に対する先天的素因、及び病的な肥大からなる群から選択された１つ又は複数の危険因子を示す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
危険性のある対象が、心臓肥大に対する遺伝的素因を有すると診断された、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
危険性のある対象が、心臓肥大の家族歴を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
トランスジェニック非ヒト哺乳類であって、その細胞が、機能性ｍｉＲ２９ａ、ｍｉＲ２９ｂ、及び／又はｍｉＲ２９ｃを発現することができない哺乳類。
【請求項２２】
マウスである、請求項２１に記載のトランスジェニック哺乳類。
【請求項２３】
トランスジェニック非ヒト哺乳類であって、その細胞が、前記非ヒト哺乳類の細胞で活性な異種プロモーターの制御下にあるｍｉＲ−９ａ〜ｃコード領域を含む哺乳類。
【請求項２４】
マウスである、請求項２３に記載のトランスジェニック哺乳類。
【請求項２５】
前記プロモーターが組織特異的プロモーターである、請求項２３に記載のトランスジェニック哺乳類。
【請求項２６】
組織特異的プロモーターが筋特異的プロモーター又は線維芽細胞特異的プロモーターである、請求項２５に記載のトランスジェニック哺乳類。
【請求項２７】
組織特異的プロモーターが心筋特異的プロモーターである、請求項２５に記載のトランスジェニック哺乳類。
【請求項２８】
ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、及び／又はｍｉＲ−２９ｃの天然の対立遺伝子の一方又は両方を欠くトランスジェニック非ヒト哺乳類細胞。
【請求項２９】
前記天然のｍｉＲ−２９ａ〜ｃ対立遺伝子のすべてを欠く、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
対象の心臓細胞でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は活性を促進させる工程を含む、その必要がある前記対象の心筋梗塞を治療する方法。
【請求項３１】
対象の心臓細胞でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は活性を促進する工程を含む、その必要がある対象の心臓肥大及び拡張型心筋症を予防する方法。
【請求項３２】
対象の心臓細胞でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現又は活性を促進する工程を含む、その必要がある対象での心臓肥大の進行を阻害する方法。
【請求項３３】
（ａ）組織線維症の危険性を有する、又は危険性がある対象を特定する工程と、
（ｂ）前記対象の骨格筋又は線維芽細胞でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現及び／又は活性を増大させる工程と
を含む、対象の組織線維症を治療又は予防する方法。
【請求項３４】
前記組織線維症が、心臓線維症、強皮症、骨格筋線維症、肝線維症、腎臓線維症、肺線維症、又は糖尿病性線維症である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現及び／又は活性を増大させる工程が、対象にｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬を投与する工程を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が、配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現及び／又は活性を増大させる工程が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃをコードする発現ベクターを前記対象に投与する工程を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
発現ベクターがウイルス発現ベクターである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ウイルス発現ベクターがアデノウイルス発現ベクターである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
発現ベクターが非ウイルス発現ベクターである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
非ウイルス発現ベクターが脂質ビヒクル内に含まれる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬が脂質ビヒクル内に含まれる、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
非ｍｉＲ−２９ａ〜ｃ抗線維化治療薬を対象に投与する工程をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４４】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃのモジュレーターを特定するための方法であって、
（ａ）細胞を候補化合物に接触させる工程と、
（ｂ）ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性又は発現を評価する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）の活性又は発現を、候補化合物の不在下でのｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性又は発現と比較する工程と
を含み、測定したｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性又は発現の間の差から、前記候補化合物がｍｉＲ−２９のモジュレーターであることが示される方法。
【請求項４５】
細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで候補化合物に接触させる、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
細胞を、ｉｎ ｖｉｖｏで候補化合物に接触させる、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃのモジュレーターが、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃのモジュレーターが、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの拮抗薬である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
候補化合物が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、又は小分子である、請求項４４に記載の方法。
【請求項５０】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性又は発現を評価する工程が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現を評価する工程を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項５１】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの発現を評価する工程が、ノーザンブロット又はＲＴ−ＰＣＲを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性又は発現を評価する工程が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性を評価する工程を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項５３】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの活性を評価する工程が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃによって調節された遺伝子の発現又は活性を評価する工程を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃによって調節された遺伝子が、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１Ａ３、及び／又はＦＢＮ１である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの作動薬を含む医薬品組成物。
【請求項５６】
前記作動薬が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃをコードする発現ベクターである、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項５７】
前記作動薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−２９ｃの成熟配列を含むポリヌクレオチドである、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項５８】
前記ポリヌクレオチドが配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号２０の配列を含む、請求項５７に記載の医薬品組成物。
【請求項５９】
前記作動薬が脂質送達ビヒクルに含まれる、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項６０】
注射用に配合される、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項６１】
非経口投与用のキットと組み合わせた、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項６２】
非経口投与が静脈内又は皮下投与である、請求項６１に記載の医薬品組成物。
【請求項６３】
カテーテル投与用のキットと組み合わせた、請求項５５に記載の医薬品組成物。
【請求項６４】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの拮抗薬を含む、医薬品組成物。
【請求項６５】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの拮抗薬が、ｍｉＲ−２９ａ〜ｃのアンタゴｍｉｒである、請求項６４に記載の医薬品組成物。
【請求項６６】
ｍｉＲ−２９ａ〜ｃの拮抗薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、又はこれらの組合せの成熟配列に相補的な配列を含む、請求項６４に記載の医薬品組成物。
【請求項６７】
局所投与のために処方される、請求項６４に記載の医薬品組成物。
【請求項６８】
ゲル、クリーム、ローション、又は軟膏である、請求項６７に記載の医薬品組成物。
【請求項６９】
組織でコラーゲン沈着を誘発させる方法であって、前記組織をｍｉＲ−２９ａ〜ｃの拮抗薬に接触させる工程を含む方法。
【請求項７０】
前記拮抗薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、又はｍｉＲ−２９ｃの拮抗薬である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記拮抗薬がｍｉＲ−２９ａ〜ｃのアンタゴｍｉｒである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記拮抗薬が、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、又はこれらの組合せの成熟配列に相補的な配列を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記拮抗薬が、配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号２０に相補的な配列を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
前記組織が顔面組織である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
前記顔面組織が、額の組織、唇、頬、顎、眉毛、瞼、目の下、又は口の付近である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記組織が、手の組織、首の組織、腕の組織、足の組織、胃の組織、又は乳房組織である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７７】
前記組織が、創傷、植皮、瘢痕組織、皺、弛緩した皮膚、日光による損傷、化学的損傷、熱損傷、低温損傷、及び／又は伸展裂創を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７８】
接触させる工程が、前記組織への注射、前記組織を供給する脈間構造への注射、又は局所適用を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７９】
局所適用が、軟膏、クリーム、ゲル、膏薬、又は香膏の使用を含む請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
圧迫包帯又はドレッシングの使用をさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記拮抗薬を、前記組織に複数回接触させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項８２】
前記拮抗薬を、前記組織に２，３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００回接触させる、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記拮抗薬を、前記組織に２、３、４、５、又は６日、１、２、３、又は４週、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１１カ月、又は１、２、３、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、又は２５年以上接触させる、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記組織を第２の薬剤に接触させる工程をさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８５】
前記第２の薬剤が、局所ビタミンＡ、局所ビタミンＣ、又はビタミンＥである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記組織に第２の治療を施す工程をさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８７】
前記第２の治療が、化学的剥離、レーザー治療、削皮術、又は皮膚擦傷法を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記組織が、エーラー−ダンロス症候群又はビタミンＣ欠乏症に罹っている対象にある、請求項６９に記載の方法。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【公表番号】特表２０１０−５３５２４７（Ｐ２０１０−５３５２４７Ａ）
【公表日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２０２０６（Ｐ２０１０−５２０２０６）
【出願日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７１８３９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１８４９３
【国際公開日】平成２１年２月５日（２００９．２．５）
【出願人】（５０１１００５８２）ボード　オブ　リージェンツ，　ザ　ユニバーシティー　オブ　テキサス　システム (19)
【Ｆターム（参考）】