育毛養毛剤および育毛養毛用組成物
【課題】高い育毛効果を持ち、根本的な脱毛症治療に極めて有用な育毛養毛剤および育毛養毛用組成物を提供する。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
［式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]で表される、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤および育毛養毛用組成物。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
［式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]で表される、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤および育毛養毛用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛養毛剤および育毛養毛用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の発症原因，発症機序については多くの研究がなされているが，未だ不明な点が多い。従来、脱毛症に対処するための育毛養毛剤が種々提案されている。例えば、５α−リダクターゼ阻害や抗酸化といった作用を有する化合物・植物抽出物等が発毛促進効果を持つことが以前から報告されている（特許文献１、特許文献２）。
【０００３】
しかしながら、上記従来の育毛養毛剤の効果は非常に個人差が大きく，満足するものは見出されていない。そのため、高い育毛効果を持ち、根本的な脱毛症治療に極めて有用な育毛養毛剤の開発が望まれているのが、現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２８６１６５号公報
【特許文献２】特開２００５−２２５７６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記従来の事情に鑑みてなされたものであって、その課題は、高い育毛効果を持ち、根本的な脱毛症治療に極めて有用な育毛養毛剤および育毛養毛用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記課題を解決するために、下記構成を採用した育毛養毛剤および育毛養毛用組成物育毛養毛方法を提供する。
【０００７】
［１］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤。
［２］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【０００８】
【化１】
【０００９】
【化２】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し，Ｘはハロゲンを表し，ｎは０〜２０の整数を表す]で表される化合物，またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする、上記［１］に記載の育毛養毛剤。
［３］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体がＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドである、上記［１］または［２］に記載の育毛養毛剤。
［４］ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドである、上記［１］または［２］に記載の育毛養毛剤。
［５］ 上記［１］〜［４］のいずれか１つに記載の育毛養毛剤を含むことを特徴とする育毛養毛組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明にかかる育毛養毛剤および育毛養毛組成物は、高い育毛効果を持ち，根本的な脱毛症治療に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例４の対照群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図２】図２は、実施例４のＮ−(４−tert−ブチルベンジル) −４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図３】図３は、実施例４の４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図４】図４は、実施例４の比較群１における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
上述のように、本願発明に係る育毛養毛剤は、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有することを特徴とする。
上記ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体としては、具体的には、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
【化４】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]で表される化合物、またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種が好適である。
【００１５】
上記一般式（Ｉ）で表される化合物として、より具体的には、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−ブロモ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert-ブチルベンジル）−４−フルオロ−３−i−プロピル−１−エチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert-ブチルベンジル）−４−ヨード−１，３−ジエチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−メチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−エチルベンジル）−４−ブロモ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−i−プロピルベンジル）−４−フルオロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−n−プロピルベンジル）−４−ヨード−３−i−プロピル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−n−ブチルベンジル）−４−クロロ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−s−ブチルベンジル）−４−ブロモ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−s−ペンチルベンジル）−４−ヨード−３−i−プロピル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert−ペンチルベンジル）−４−フルオロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド等を挙げることができる。中でも、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドが好適である。
【００１６】
また、上記一般式（ＩＩ）で表される化合物として、より具体的には、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（フェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（フェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−エチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−１，３−ジエチル−Ｎ−［４−（ｐ−エチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−ｉ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−ｃ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−tert−ブチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−tert−ブチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（p−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（p−ｉ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド等を挙げることができる。中でも、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドが好適である。
【００１７】
本発明に係る育毛養毛剤は、水、アルコール、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）などの希釈溶媒、必要に応じて用いられる安定剤、保存剤などの成分に、有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を配合してなる。
【００１８】
本発明に係る育毛養毛剤は、通常、育毛養毛トニック、ヘアークリームなどの育毛養毛組成物に育毛養毛効果をもたらす有効成分として配合されて用いられるが、そのまま生体の皮膚に塗布する用い方も可能である。
そのまま皮膚に塗布する場合の育毛養毛剤中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、固形分換算で、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。前記含有量が、０．００１質量％未満であると、その配合効果が十分に発揮されないことがあり、１０質量％を超えると、使用感が悪くなるなどの不具合を生じる場合がある。一方、前記含有量が、より好ましい範囲内であると、その配合効果が十分に発揮され、かつ、安全性及び安定性に優れる点で、有利である。
育毛養毛組成物に育毛養毛効果をもたらす有効成分として配合されて用いられる場合では、育毛養毛剤中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量は、育毛養毛剤を配合した後の育毛養毛組成物中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量が０．００１〜１０質量％の範囲内に調整可能な範囲で、適宜に設定される。
【００１９】
（育毛養毛組成物）
本発明の育毛養毛組成物は、上記育毛養毛剤を含む組成物であり、育毛養毛トニック、ヘアークリームなどの剤形とされる。したがって、育毛養毛組成物には、その剤形に従来用いられていた成分に、上記育毛養毛剤が育毛養毛効果をもたらすための成分として配合される。
本発明の育毛養毛組成物中の育毛養毛剤の含有量は、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の固形分換算で、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明に係る育毛養毛剤および育毛養毛組成物の実施例を説明する。以下に説明する実施例は、本発明を説明する好適な例示であるが、本発明を限定するものではない。
【００２１】
本発明に係る育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体として、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、および４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドを用いた育毛養毛剤サンプルの育毛養毛効果を、以下の評価方法により評価した。評価に用いた各有効成分の溶媒には、ＤＭＳＯを用いた。使用濃度は各評価方法の説明中に記載した。
【００２２】
（実施例１）：ヒト由来表皮角化細胞の増殖促進作用の評価
Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染色液は培養細胞系の好気呼吸の指標に用いられる酸化還元指示薬であり，還元による呈色の変化量が細胞数に比例することが知られている。今回，当指示薬を用いてヒト由来表皮角化細胞の増殖促進作用の評価を行った。
培地は全て角化細胞用培地（クラボウ社製、商品名「Humedia-KG2，Ｃａｔ＃ KK-2150S」）を用い，培養条件は全て３７℃、５％ＣＯ２、湿度９９％以上とした。
【００２３】
２４−ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（住友ベークライト社製、Ｃａｔ＃ ＭＳ−８０２４０） にヒト由来表皮角化細胞（クラボウ社製、商品名「Neonatal human epidermal keratinocyte; NHEK, Ｃａｔ＃ ＫＫ−４００１」）を５０００cells/wellの細胞濃度で播種し、２４時間の培養後，Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０ｐｐｍ、０．０１ｐｐｍ、および０．１ｐｐｍの３通り、基剤には０．１質量％ＤＭＳＯを使用）を含んだ培地と交換し、更に２４時間培養後、各ｗｅｌｌに５０μＬ Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染色液（BIOSOURCE社製、Ｃａｔ＃ ＤＡＬ１１００）を加え、プレートリーダー（大日本住友製薬社製、商品名「ＰＯＷＥＲＳＣＡＮ ＨＴ」）により励起波長（５３０ｎｍ）および検出波長（５９０ｎｍ）での吸光度を計測した。計測３時間後、再度吸光度の計測を行い、３時間での変化を算出した。
【００２４】
計測後，同濃度のＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドを含んだ培地と再度交換し、７２時間後、同様にして３時間でのＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ 吸光度の変化を計測した。
【００２５】
吸光度変化の比（薬剤添加７２時間後／薬剤未添加時）より細胞賦活作用を評価した。例数は，各検体につきｎ＝３とした。評価結果を下記（表１）に示した。
【００２６】
【表１】
（表１）の結果から、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体であるＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドは表皮角化細胞の増殖促進作用を有することが示された。
【００２７】
次に、本発明に係る育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体として、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、および４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドを用いた育毛養毛剤サンプルの毛成長促進作用（実施例２，３）及び成長期への毛周期変換作用（実施例４）を評価した。
【００２８】
評価を行うための対照群として、各種薬剤の溶媒である５０％エタノールを塗布剤として用いた群を用意し、また、比較群１として、明らかに発毛促進作用を有することが知られているミノキシジル（１質量％）を塗布剤として用いた群を用意し、さらに比較群２として、ＧＳＫ−３β阻害作用を有することで知られるリチウム化合物（塩化リチウム：４質量％あるいは酢酸リチウム：４質量％）を塗布剤として用いた群を用意した。なお、リチウム化合物を比較群として採用した理由は、本発明の育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール化合物にＧＳＫ３β阻害作用があることが知られていることから、ＧＳＫ−３β阻害作用と育毛養毛作用との関連性の有無を確認するためである。
【００２９】
また、被験体としては、雄のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウス（７週齢，日本チャールスリバー社製）及び雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢，日本エスエルシー社製）を用いた。被験体にマウスを用いた理由は、一般的に認められているように、操作性が良好であることに加えて、他のほ乳類に比べて、マウス等の一部の齧歯類が毛周期の休止期および成長期の事前コントロールが容易である点にある。マウス等の一部の齧歯類では、電気バリカンによる除毛で、皮膚を目視できる状態にして確認した皮膚の色がピンク色である場合は、毛周期が休止期にあり、黒変している場合は、既に成長期にあると判断される。この電気バリカンによる除毛では、毛周期に対する影響はないが、さらに電気シェーバーによる除毛処理を行うと、休止期にある毛周期が成長期に誘導される。本発明に係る育毛養毛剤が慣用の育毛養毛剤と同様に成長期毛の毛成長に効果があることを確認するためには、バリカン除毛の後、さらに電気シェーバーによる除毛を行ったマウスを使えばよい。そして、より根本的な脱毛症の解決策と考えられる休止期状態からの発毛、すなわち休止期にある毛周期を成長期に誘導し、発毛に至らせる効果を確認するためには、バリカン除毛後の皮膚状態の目視確認により毛周期が休止期にあるマウスを使えばよい。
【００３０】
（実施例２）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の毛成長促進作用の評価
毛周期において休止期にある雄のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウス（７週齢，日本チャールスリバー社製）を用い，小川らの方法（フレグランスジャーナル，Vol.17,No.5,p20-29,1989. 参照）を参考にして実験を行った。当評価系は、成長期毛の伸長を促進する効果を評価するものである。
【００３１】
マウスの背部体毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカンで除毛し、背部皮膚が休止期を示すピンク色であることを目視により確認した。続いて、その部分をさらに電気シェーバーにて除毛することによって毛周期における成長期を誘導した。
除毛の翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、２０日間サンプル塗布を行い，除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求め，下記１１段階の評価にて，毛再生の速さを比較した。なお、成長期に誘導されたか否かは、シェーバー後１５日以降も毛再生が起こらないことにより確認されるので、そのような個体は評価より除外することになる。
【００３２】
ピラゾール化合物サンプルとしては，ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含む下記（表２）に示す３種のピラゾール化合物を５０％エタノールに０．１質量％の濃度で溶解したものを使用した。
また、比較群１として、明らかに発毛促進作用を有することが知られているミノキシジル（１質量％）塗布群を設けた。対照群として、各種薬剤の溶媒である５０％エタノール塗布群を設けた。さらに、ＧＳＫ−３β阻害作用を有することで知られるリチウム化合物（塩化リチウム、４質量％）を比較群２として評価した。
各群ともに１群８匹として実験に供した。薬剤の初回塗布から１０日後の平均発毛面積率スコアを下記評価基準により求めた。その結果を（表２）に示した。
【００３３】
（評価基準）
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００３４】
【表２】
【００３５】
（表２）に見るように、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（−４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」が顕著な毛成長促進効果を示した。なお、ＧＳＫ−３β阻害剤として知られているリチウムには、（表２）に見るように、毛成長促進作用は認められなかった。
【００３６】
（実施例３）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の毛成長促進作用の評価
上記実施例２における評価法と同様にして、下記（表３）に示す４種のピラゾール化合物、対照群（５０％エタノール）、および比較群１（ミノキシジル（１％））の毛成長促進作用を評価した。この実施例では、ピラゾール化合物サンプルとして、２種類のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含む下記（表３）に示す４種のピラゾール化合物を同時に評価することにより、カルボキサミドのピラゾール骨格への結合部位による比較を行った（ピラゾール骨格の３位と５位および１位と２位は等価とする）。結果を（表３）に示す。
【００３７】
【表３】
【００３８】
（表３）に示した通り、４種のピラゾール化合物の内、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（−４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」および「４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド」の２種類のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が毛成長促進作用を示した。
【００３９】
（実施例４）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の成長期への毛周期変換作用の評価
毛周期において休止期にある雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢，日本エスエルシー社製）を用い，小川らの方法（フレグランスジャーナル，Vol.17,No.5,p20-29,1989. 参照）を参考にして実験を行った。脱毛症の根本的な解決のためには，成長期毛の伸長を促すのみではなく，同時に休止期毛を成長期に移行させる「毛周期変換」が更に重要であると考えられるので、この実施例では、休止期から成長期への毛周期変換効果を評価する。
【００４０】
被験体のマウスの数は、下記（表４）に示す４群のそれぞれに８匹用意した。各マウスの背部体毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカンにて除毛し、背部皮膚が休止期を示すピンク色であることを目視により確認した。この除毛部分をさらに電気シェーバーにより除毛することはせず、毛周期は休止期のままとした。なお、対照群と、比較群１に用意した各８匹の内、それぞれ１匹が電気バリカンにて除毛後に目視にて確認した皮膚が黒変しており、既に成長期にあったので、被験体から除外した。したがって、対照群及び比較群１の被験体数は７匹となった。
【００４１】
上記電気バリカンのみによる除毛の翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、３０日間サンプル塗布を行い、毛周期が休止期にある除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求めた。求めた面積比を下記１１段階の評価基準に当てはめて、毛再生の早さを比較した。
【００４２】
使用サンプルは、下記（表４）に示すように、５０％エタノール（対照群）、ミノキシジル(１％)（比較群１）、及び酢酸リチウム(４％）（比較群２）の他、２種のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を５０％エタノールに０．１質量％の濃度で溶解したものを使用した。
【００４３】
各群のマウスに対して、薬剤の初回塗布から２０日後の平均発毛面積率スコアを下記評価基準により求めた。その結果を下記（表４）に示した。また、図１〜４に、比較群２を除いた４つの評価群毎の、初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示した。図１は対照群のマウス背部写真、図２はＮ−(４−tert−ブチルベンジル) −４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群のマウス背部写真、図３は４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群のマウス背部写真、図４は比較群１のマウス背部写真である。
【００４４】
（評価基準）
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００４５】
【表４】
【００４６】
（表４）および図１〜４に示した通り、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル)−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」および「４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド」は高い毛周期変換効果を示した。また，ＧＳＫ−３β阻害剤として知られているリチウムは、（表４）に示す通り効果を示さなかった。
【００４７】
以上のように、本願発明者らは、Ｃ３Ｈマウスを用いてピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含めた複数のピラゾール化合物の毛成長促進作用を評価し、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体であるＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドおよび４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドが顕著な効果を示すこと、それにより、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体は優れた毛成長促進作用を有することを確認した。
さらに、脱毛症の根本的な解決のためには成長期毛の伸長を促すのみではなく，同時に休止期毛を成長期に移行させることが更に重要であると考えられるため、上記２種のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が休止期から成長期への毛周期変換作用を有するか否か、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いて検討した。その結果、従来の育毛養毛剤の主成分として使用されているミノキシジルと比較して顕著に高い効果を示すことが、確認された。
【００４８】
上述のように優れた育毛養毛効果を有する本発明の育毛養毛剤を含む育毛養毛組成物の配合例を以下の（表５）および（表６）に示す。これらの育毛養毛組成物（育毛養毛トニック）においても、上記実施例１〜４のサンプルと同様の高い育毛養毛効果が得られることが確認された。
【００４９】
【表５】
【００５０】
【表６】
【産業上の利用可能性】
【００５１】
以上のように、本発明にかかる育毛養毛剤および育毛養毛組成物は、高い育毛効果を持ち，根本的な脱毛症治療に極めて有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛養毛剤および育毛養毛用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の発症原因，発症機序については多くの研究がなされているが，未だ不明な点が多い。従来、脱毛症に対処するための育毛養毛剤が種々提案されている。例えば、５α−リダクターゼ阻害や抗酸化といった作用を有する化合物・植物抽出物等が発毛促進効果を持つことが以前から報告されている（特許文献１、特許文献２）。
【０００３】
しかしながら、上記従来の育毛養毛剤の効果は非常に個人差が大きく，満足するものは見出されていない。そのため、高い育毛効果を持ち、根本的な脱毛症治療に極めて有用な育毛養毛剤の開発が望まれているのが、現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２８６１６５号公報
【特許文献２】特開２００５−２２５７６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記従来の事情に鑑みてなされたものであって、その課題は、高い育毛効果を持ち、根本的な脱毛症治療に極めて有用な育毛養毛剤および育毛養毛用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記課題を解決するために、下記構成を採用した育毛養毛剤および育毛養毛用組成物育毛養毛方法を提供する。
【０００７】
［１］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤。
［２］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【０００８】
【化１】
【０００９】
【化２】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し，Ｘはハロゲンを表し，ｎは０〜２０の整数を表す]で表される化合物，またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする、上記［１］に記載の育毛養毛剤。
［３］ ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体がＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドである、上記［１］または［２］に記載の育毛養毛剤。
［４］ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドである、上記［１］または［２］に記載の育毛養毛剤。
［５］ 上記［１］〜［４］のいずれか１つに記載の育毛養毛剤を含むことを特徴とする育毛養毛組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明にかかる育毛養毛剤および育毛養毛組成物は、高い育毛効果を持ち，根本的な脱毛症治療に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例４の対照群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図２】図２は、実施例４のＮ−(４−tert−ブチルベンジル) −４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図３】図３は、実施例４の４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【図４】図４は、実施例４の比較群１における初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
上述のように、本願発明に係る育毛養毛剤は、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有することを特徴とする。
上記ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体としては、具体的には、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
【化４】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]で表される化合物、またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種が好適である。
【００１５】
上記一般式（Ｉ）で表される化合物として、より具体的には、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−ブロモ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert-ブチルベンジル）−４−フルオロ−３−i−プロピル−１−エチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert-ブチルベンジル）−４−ヨード−１，３−ジエチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−メチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−エチルベンジル）−４−ブロモ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−i−プロピルベンジル）−４−フルオロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−n−プロピルベンジル）−４−ヨード−３−i−プロピル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−n−ブチルベンジル）−４−クロロ−１，３−ジメチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−s−ブチルベンジル）−４−ブロモ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−s−ペンチルベンジル）−４−ヨード−３−i−プロピル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４−tert−ペンチルベンジル）−４−フルオロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド等を挙げることができる。中でも、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドが好適である。
【００１６】
また、上記一般式（ＩＩ）で表される化合物として、より具体的には、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（フェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−フルオロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（フェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−エチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−１，３−ジエチル−Ｎ−［４−（ｐ−エチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−ｉ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−ｃ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−tert−ブチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−１，３−ジメチル−Ｎ−［４−（ｐ−tert−ブチルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ブロモ−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−ヨード−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（p−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド、４−クロロ−３−tert−ブチル−１−メチル−Ｎ−［４−（p−ｉ−プロピルフェニルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド等を挙げることができる。中でも、４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドが好適である。
【００１７】
本発明に係る育毛養毛剤は、水、アルコール、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）などの希釈溶媒、必要に応じて用いられる安定剤、保存剤などの成分に、有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を配合してなる。
【００１８】
本発明に係る育毛養毛剤は、通常、育毛養毛トニック、ヘアークリームなどの育毛養毛組成物に育毛養毛効果をもたらす有効成分として配合されて用いられるが、そのまま生体の皮膚に塗布する用い方も可能である。
そのまま皮膚に塗布する場合の育毛養毛剤中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、固形分換算で、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。前記含有量が、０．００１質量％未満であると、その配合効果が十分に発揮されないことがあり、１０質量％を超えると、使用感が悪くなるなどの不具合を生じる場合がある。一方、前記含有量が、より好ましい範囲内であると、その配合効果が十分に発揮され、かつ、安全性及び安定性に優れる点で、有利である。
育毛養毛組成物に育毛養毛効果をもたらす有効成分として配合されて用いられる場合では、育毛養毛剤中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量は、育毛養毛剤を配合した後の育毛養毛組成物中のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の含有量が０．００１〜１０質量％の範囲内に調整可能な範囲で、適宜に設定される。
【００１９】
（育毛養毛組成物）
本発明の育毛養毛組成物は、上記育毛養毛剤を含む組成物であり、育毛養毛トニック、ヘアークリームなどの剤形とされる。したがって、育毛養毛組成物には、その剤形に従来用いられていた成分に、上記育毛養毛剤が育毛養毛効果をもたらすための成分として配合される。
本発明の育毛養毛組成物中の育毛養毛剤の含有量は、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の固形分換算で、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明に係る育毛養毛剤および育毛養毛組成物の実施例を説明する。以下に説明する実施例は、本発明を説明する好適な例示であるが、本発明を限定するものではない。
【００２１】
本発明に係る育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体として、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、および４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドを用いた育毛養毛剤サンプルの育毛養毛効果を、以下の評価方法により評価した。評価に用いた各有効成分の溶媒には、ＤＭＳＯを用いた。使用濃度は各評価方法の説明中に記載した。
【００２２】
（実施例１）：ヒト由来表皮角化細胞の増殖促進作用の評価
Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染色液は培養細胞系の好気呼吸の指標に用いられる酸化還元指示薬であり，還元による呈色の変化量が細胞数に比例することが知られている。今回，当指示薬を用いてヒト由来表皮角化細胞の増殖促進作用の評価を行った。
培地は全て角化細胞用培地（クラボウ社製、商品名「Humedia-KG2，Ｃａｔ＃ KK-2150S」）を用い，培養条件は全て３７℃、５％ＣＯ２、湿度９９％以上とした。
【００２３】
２４−ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（住友ベークライト社製、Ｃａｔ＃ ＭＳ−８０２４０） にヒト由来表皮角化細胞（クラボウ社製、商品名「Neonatal human epidermal keratinocyte; NHEK, Ｃａｔ＃ ＫＫ−４００１」）を５０００cells/wellの細胞濃度で播種し、２４時間の培養後，Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０ｐｐｍ、０．０１ｐｐｍ、および０．１ｐｐｍの３通り、基剤には０．１質量％ＤＭＳＯを使用）を含んだ培地と交換し、更に２４時間培養後、各ｗｅｌｌに５０μＬ Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染色液（BIOSOURCE社製、Ｃａｔ＃ ＤＡＬ１１００）を加え、プレートリーダー（大日本住友製薬社製、商品名「ＰＯＷＥＲＳＣＡＮ ＨＴ」）により励起波長（５３０ｎｍ）および検出波長（５９０ｎｍ）での吸光度を計測した。計測３時間後、再度吸光度の計測を行い、３時間での変化を算出した。
【００２４】
計測後，同濃度のＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドを含んだ培地と再度交換し、７２時間後、同様にして３時間でのＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ 吸光度の変化を計測した。
【００２５】
吸光度変化の比（薬剤添加７２時間後／薬剤未添加時）より細胞賦活作用を評価した。例数は，各検体につきｎ＝３とした。評価結果を下記（表１）に示した。
【００２６】
【表１】
（表１）の結果から、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体であるＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドは表皮角化細胞の増殖促進作用を有することが示された。
【００２７】
次に、本発明に係る育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール−５−カルボキサミド誘導体として、Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド、および４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドを用いた育毛養毛剤サンプルの毛成長促進作用（実施例２，３）及び成長期への毛周期変換作用（実施例４）を評価した。
【００２８】
評価を行うための対照群として、各種薬剤の溶媒である５０％エタノールを塗布剤として用いた群を用意し、また、比較群１として、明らかに発毛促進作用を有することが知られているミノキシジル（１質量％）を塗布剤として用いた群を用意し、さらに比較群２として、ＧＳＫ−３β阻害作用を有することで知られるリチウム化合物（塩化リチウム：４質量％あるいは酢酸リチウム：４質量％）を塗布剤として用いた群を用意した。なお、リチウム化合物を比較群として採用した理由は、本発明の育毛養毛剤の有効成分であるピラゾール化合物にＧＳＫ３β阻害作用があることが知られていることから、ＧＳＫ−３β阻害作用と育毛養毛作用との関連性の有無を確認するためである。
【００２９】
また、被験体としては、雄のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウス（７週齢，日本チャールスリバー社製）及び雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢，日本エスエルシー社製）を用いた。被験体にマウスを用いた理由は、一般的に認められているように、操作性が良好であることに加えて、他のほ乳類に比べて、マウス等の一部の齧歯類が毛周期の休止期および成長期の事前コントロールが容易である点にある。マウス等の一部の齧歯類では、電気バリカンによる除毛で、皮膚を目視できる状態にして確認した皮膚の色がピンク色である場合は、毛周期が休止期にあり、黒変している場合は、既に成長期にあると判断される。この電気バリカンによる除毛では、毛周期に対する影響はないが、さらに電気シェーバーによる除毛処理を行うと、休止期にある毛周期が成長期に誘導される。本発明に係る育毛養毛剤が慣用の育毛養毛剤と同様に成長期毛の毛成長に効果があることを確認するためには、バリカン除毛の後、さらに電気シェーバーによる除毛を行ったマウスを使えばよい。そして、より根本的な脱毛症の解決策と考えられる休止期状態からの発毛、すなわち休止期にある毛周期を成長期に誘導し、発毛に至らせる効果を確認するためには、バリカン除毛後の皮膚状態の目視確認により毛周期が休止期にあるマウスを使えばよい。
【００３０】
（実施例２）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の毛成長促進作用の評価
毛周期において休止期にある雄のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウス（７週齢，日本チャールスリバー社製）を用い，小川らの方法（フレグランスジャーナル，Vol.17,No.5,p20-29,1989. 参照）を参考にして実験を行った。当評価系は、成長期毛の伸長を促進する効果を評価するものである。
【００３１】
マウスの背部体毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカンで除毛し、背部皮膚が休止期を示すピンク色であることを目視により確認した。続いて、その部分をさらに電気シェーバーにて除毛することによって毛周期における成長期を誘導した。
除毛の翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、２０日間サンプル塗布を行い，除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求め，下記１１段階の評価にて，毛再生の速さを比較した。なお、成長期に誘導されたか否かは、シェーバー後１５日以降も毛再生が起こらないことにより確認されるので、そのような個体は評価より除外することになる。
【００３２】
ピラゾール化合物サンプルとしては，ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含む下記（表２）に示す３種のピラゾール化合物を５０％エタノールに０．１質量％の濃度で溶解したものを使用した。
また、比較群１として、明らかに発毛促進作用を有することが知られているミノキシジル（１質量％）塗布群を設けた。対照群として、各種薬剤の溶媒である５０％エタノール塗布群を設けた。さらに、ＧＳＫ−３β阻害作用を有することで知られるリチウム化合物（塩化リチウム、４質量％）を比較群２として評価した。
各群ともに１群８匹として実験に供した。薬剤の初回塗布から１０日後の平均発毛面積率スコアを下記評価基準により求めた。その結果を（表２）に示した。
【００３３】
（評価基準）
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００３４】
【表２】
【００３５】
（表２）に見るように、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（−４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」が顕著な毛成長促進効果を示した。なお、ＧＳＫ−３β阻害剤として知られているリチウムには、（表２）に見るように、毛成長促進作用は認められなかった。
【００３６】
（実施例３）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の毛成長促進作用の評価
上記実施例２における評価法と同様にして、下記（表３）に示す４種のピラゾール化合物、対照群（５０％エタノール）、および比較群１（ミノキシジル（１％））の毛成長促進作用を評価した。この実施例では、ピラゾール化合物サンプルとして、２種類のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含む下記（表３）に示す４種のピラゾール化合物を同時に評価することにより、カルボキサミドのピラゾール骨格への結合部位による比較を行った（ピラゾール骨格の３位と５位および１位と２位は等価とする）。結果を（表３）に示す。
【００３７】
【表３】
【００３８】
（表３）に示した通り、４種のピラゾール化合物の内、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（−４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」および「４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド」の２種類のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が毛成長促進作用を示した。
【００３９】
（実施例４）：ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体の成長期への毛周期変換作用の評価
毛周期において休止期にある雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢，日本エスエルシー社製）を用い，小川らの方法（フレグランスジャーナル，Vol.17,No.5,p20-29,1989. 参照）を参考にして実験を行った。脱毛症の根本的な解決のためには，成長期毛の伸長を促すのみではなく，同時に休止期毛を成長期に移行させる「毛周期変換」が更に重要であると考えられるので、この実施例では、休止期から成長期への毛周期変換効果を評価する。
【００４０】
被験体のマウスの数は、下記（表４）に示す４群のそれぞれに８匹用意した。各マウスの背部体毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカンにて除毛し、背部皮膚が休止期を示すピンク色であることを目視により確認した。この除毛部分をさらに電気シェーバーにより除毛することはせず、毛周期は休止期のままとした。なお、対照群と、比較群１に用意した各８匹の内、それぞれ１匹が電気バリカンにて除毛後に目視にて確認した皮膚が黒変しており、既に成長期にあったので、被験体から除外した。したがって、対照群及び比較群１の被験体数は７匹となった。
【００４１】
上記電気バリカンのみによる除毛の翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、３０日間サンプル塗布を行い、毛周期が休止期にある除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求めた。求めた面積比を下記１１段階の評価基準に当てはめて、毛再生の早さを比較した。
【００４２】
使用サンプルは、下記（表４）に示すように、５０％エタノール（対照群）、ミノキシジル(１％)（比較群１）、及び酢酸リチウム(４％）（比較群２）の他、２種のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を５０％エタノールに０．１質量％の濃度で溶解したものを使用した。
【００４３】
各群のマウスに対して、薬剤の初回塗布から２０日後の平均発毛面積率スコアを下記評価基準により求めた。その結果を下記（表４）に示した。また、図１〜４に、比較群２を除いた４つの評価群毎の、初回塗布より３０日後のＣ５７ＢＬ／６マウス背部の画像を示した。図１は対照群のマウス背部写真、図２はＮ−(４−tert−ブチルベンジル) −４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群のマウス背部写真、図３は４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド（０．１％）を用いた群のマウス背部写真、図４は比較群１のマウス背部写真である。
【００４４】
（評価基準）
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００４５】
【表４】
【００４６】
（表４）および図１〜４に示した通り、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体である「Ｎ−（４−tert−ブチルベンジル)−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミド」および「４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミド」は高い毛周期変換効果を示した。また，ＧＳＫ−３β阻害剤として知られているリチウムは、（表４）に示す通り効果を示さなかった。
【００４７】
以上のように、本願発明者らは、Ｃ３Ｈマウスを用いてピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を含めた複数のピラゾール化合物の毛成長促進作用を評価し、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体であるＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドおよび４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドが顕著な効果を示すこと、それにより、ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体は優れた毛成長促進作用を有することを確認した。
さらに、脱毛症の根本的な解決のためには成長期毛の伸長を促すのみではなく，同時に休止期毛を成長期に移行させることが更に重要であると考えられるため、上記２種のピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が休止期から成長期への毛周期変換作用を有するか否か、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いて検討した。その結果、従来の育毛養毛剤の主成分として使用されているミノキシジルと比較して顕著に高い効果を示すことが、確認された。
【００４８】
上述のように優れた育毛養毛効果を有する本発明の育毛養毛剤を含む育毛養毛組成物の配合例を以下の（表５）および（表６）に示す。これらの育毛養毛組成物（育毛養毛トニック）においても、上記実施例１〜４のサンプルと同様の高い育毛養毛効果が得られることが確認された。
【００４９】
【表５】
【００５０】
【表６】
【産業上の利用可能性】
【００５１】
以上のように、本発明にかかる育毛養毛剤および育毛養毛組成物は、高い育毛効果を持ち，根本的な脱毛症治療に極めて有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤。
【請求項２】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【化１】
【化２】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]
で表される化合物、またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の育毛養毛剤。
【請求項３】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体がＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドである請求項１または２に記載の育毛養毛剤。
【請求項４】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドである請求項１または２に記載の育毛養毛剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の育毛養毛剤を含むことを特徴とする育毛養毛組成物。
【請求項１】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体を有効成分として有する育毛養毛剤。
【請求項２】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が、下記一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【化１】
【化２】
（式（Ｉ）（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は１〜２０の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の炭化水素基または水素原子を表し、Ｘはハロゲンを表し、ｎは０〜２０の整数を表す]
で表される化合物、またはその薬学的もしくは医学的に許容しうる塩からなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の育毛養毛剤。
【請求項３】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体がＮ−（４−tert−ブチルベンジル）−４−クロロ−３−エチル−１−メチルピラゾール−５−カルボキサミドである請求項１または２に記載の育毛養毛剤。
【請求項４】
ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体が４−クロロ−３−エチル−１−メチル−Ｎ−［４−（ｐ−トリルオキシ）ベンジル］ピラゾール−５−カルボキサミドである請求項１または２に記載の育毛養毛剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の育毛養毛剤を含むことを特徴とする育毛養毛組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１１−１３６９４４（Ｐ２０１１−１３６９４４Ａ）
【公開日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２９７８３９（Ｐ２００９−２９７８３９）
【出願日】平成２１年１２月２８日（２００９．１２．２８）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月２８日（２００９．１２．２８）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
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