アテローム性動脈硬化症の治療
本発明は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩を、単独で、又はその他の抗アテローム性動脈硬化症薬と組み合わせて、その治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療するためのこれらの使用に関している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩を、単独で又はその他の抗アテローム性動脈硬化症薬と組合わせて、その治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによるアテローム性動脈硬化症を予防及び治療するためのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
心血管疾患は、特に米国及び西欧諸国において、罹患率及び死亡率の主因である。心血管疾患で最も高頻度に見られる、アテローム性動脈硬化症は、心臓発作、脳卒中及び血管循環問題の本質的原因である。アテローム性動脈硬化症は、多くの細胞型、生化学的事象及び分子的因子に関連している複雑な疾患である。病気に対する遺伝的素因、性別、喫煙及びダイエットのような生活習慣、年齢、高血圧、及び高コレステロール血症を含む高脂血症を含む、幾つかの原因因子が、心血管疾患の発症に関係している。これらの因子の幾つか、特に高脂血症及び高コレステロール血症（高血中コレステロール濃度）がアテローム性動脈硬化症に関連する重要な危険因子をもたらしている。
【０００３】
コレステロールは、カイロミクロンとして一般に知られている、リポタンパク質粒子、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬｓ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬｓ）、及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬｓ）内に遊離及びエステル化したコレステロールとして、血中に存在している。血中総コレステロールの濃度は、（１）消化管からのコレステロールの吸収、（２）炭水化物、タンパク質、脂肪及びエタノールのような食品成分からのコレステロールの合成、及び（３）組織、特に肝臓による血液からのコレステロールの除去、及びそれに続くコレステロールの胆汁酸、ステロイドホルモン、及び胆汁性コレステロールへの変換、による影響を受ける。コレステロールの蓄積による、マクロファージ泡沫細胞の形成が、アテローム性動脈硬化症の発症における重要な事象である。
【０００４】
血中コレステロール濃度の維持は、遺伝因子及び環境因子の両方による影響を受ける。遺伝因子は、コレステロール生合成における律速酵素の濃度、肝臓における低密度リポタンパク質の受容体の濃度、コレステロールを胆汁酸へ変換する律速酵素の濃度、リポタンパク質を合成及び分泌する速度、及びヒトの性別を包含する。ヒトにおける血中コレステロール濃度の止血に影響する環境因子は、食事構成、喫煙率、身体的活動、各種医薬品の使用を包含する。食事変数は、脂肪（飽和及び多価不飽和脂肪酸）の量及び種類、コレステロールの量、繊維の量及び種類、及び多分、ビタミンＣ及びＤのようなビタミン並びにカルシウムのようなミネラルの量を包含する。
【０００５】
臨床研究によって、高い血漿ＬＤＬ濃度が、加速されたアテローム発生、すなわち、アテローム性動脈硬化症の形成と関連しているということが確証されている。
【０００６】
一方、高血圧が、脳卒中、心臓発作、心不全及び不整脈のような心血管疾患の主な原因であるということがよく認識されている。高血圧は、体中を循環する血管内の血液の圧力が正常より高い状態（疾患）である。長時間にわたって収縮期圧が１５０ｍｍＨｇより高い或いは拡張期圧が９０ｍｍＨｇを上回るときは、身体に損傷を受ける。例えば、過度な収縮期圧は何れかの血管を破裂させる可能性があり、脳内でそれが起こると、脳卒中をもたらす。高血圧は、最終的にアテローム性動脈硬化症をもたらす、血管の肥厚及び狭窄も引き起こす。
【０００７】
しかしながら、高血圧を減少させても、冠動脈疾患の罹病率及び死亡率に期待したより低い影響を与える。考えられる１つの理由は、抗−高血圧薬の異なった抗−動脈硬化能力である。高血圧の減少は、それ自体、抗−動脈硬化作用を有しているが、ある抗−高血圧薬については、血圧低下を凌駕する抗−動脈硬化特性が実験的及び臨床的に証拠付けられている。例えば、カルシウム拮抗薬については、大動脈脂質沈着の縮小及び動脈増殖の減少を報告する、実験データが発表されている。
【０００８】
アデノシンは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３に分類される４つの細胞膜受容体の活性化を介して多数の生理学的機能を発揮する。ごく最近発見されたサブタイプである、Ａ３サブタイプは、重要な薬理学的特性化の対象となっている。全てのアデノシンサブクラスがＧ−タンパク質結合受容体に属しているが、これらは異なったセカンドメッセンジャー系に関連している。Ａ３サブタイプは、特有のセカンドメッセンジャープロファイルを有していると考えられていて、アデニルサイクラーゼ阻害及びホスホリパーゼＣの活性化を介在することが示されている。
【０００９】
アデノシンＡ３受容体は、脳虚血、炎症、高血圧、虚血心プレコンディショニング及び喘息の調節に関与すると考えられている。このことがＡ３受容体を魅力ある新規な治療標的としている。例えば、Ａ３受容体に対する選択的拮抗薬が、脳における抗炎症及び抗虚血の薬として使用することが提案されている。更に、Ａ３拮抗薬が、抗−血管新生（癌）、抗−喘息、抗鬱、抗−不整脈、腎臓保護、及び抗−パキンソン病薬、並びに認識促進薬として開発されている。
【発明の概要】
【００１０】
驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、アデノシンＡ３拮抗薬の抗−高血圧効果とは無関係に、アテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進行を阻害又は遅延することにより、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療に用いることができるということをこの度見出した。従って、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、脳卒中及び心臓発作の予防にも用いることができる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができる。
【００１１】
従って、本発明は、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、単独で又はその他の治療薬剤と組合わせて、哺乳動物に投与することを含有している。
【００１２】
本発明の方法で用いられるアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、これに限定されないが、式
【００１３】
【化１】
【００１４】
（式中の、Ａ、Ｒ２及びＲ３は、本明細書の発明の詳細な説明に記載されているような意味を有している）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
【００１５】
本発明のその他の目的、特徴、利点及び態様は、以下の記載及び添付されている特許請求の範囲から当業者には明らかになるだろう。しかしながら、以下の記載、添付されている特許請求の範囲、及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施態様を示しているとはいえ、説明することだけを目的として示されていることを理解されたい。開示される発明の精神及び範囲内の多様な変更及び修正は、以下の記載から当業者には容易に明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ及び１Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現をそれぞれ示す。アデノシンＡ２Ｂ受容体の発現レベルを、各試料における内部標準（βアクチン）の発現レベルに対して正規化している。
【図２】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ及び２Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の発現のウェスタンブロット分析をそれぞれ示す。細胞抽出物を調製して、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３抗体を用いるイムノブロットアッセイに付した。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。
【図３】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ及び３Ｄは、結合試験によって評価した、ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のＢｍａｘ（タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）をそれぞれ示す。値は平均値であって、縦軸は、それぞれ３回実施した４つの独立した実験の平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を表す。
【図４】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ及び４Ｇは、正常酸素（Ｎ）条件下（それぞれ、図４Ａ、４Ｃ及び４Ｅ）及び低酸素（Ｈ）条件下（図４Ｂ、４Ｄ、４Ｆ及び４Ｇ）での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）におけるＨＩＦ−１αに対する１００μＭアデノシンの効果を示す。Ｕ９３７細胞を、５０及び１００μｇのｏｘＬＤＬで処理した（図４Ｅ、４Ｇ及び４Ｆ）。ＨＩＦ−１βは）タンパク質の等負荷を示す。ＨＩＦ−１αのウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図５】図５は、ＨＩＦ−１αの蓄積及び１００ｎＭのＭＲＥ−３００８Ｆ２０、ＳＣＨ５８２６１、ＤＰＣＰＸ及びＭＲＥ−２０２９Ｆ２０による拮抗作用に対するアデノシン（１００ｎＭ）の効果を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）である。
【図６】図６は、アデノシン受容体作動薬の非存在下（カラム１）、及び存在下：１０及び１００ｎＭのＣＨＡ（カラム２、３）；５００及び１０００ｎＭのＣＧＳ２１６８０（カラム４、５）；１０及び１００ｎＭの１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラヌロンアミド（カラム６、７）；１０及び１００ｎＭのＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（カラム８、９）：におけるＨＩＦ−１αの蓄積を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図７】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、７Ｈ及び７Ｉは、泡沫細胞（ＦＣ）におけるｓｉＲＮＡトランスフェクションによるアデノシン受容体サイレンシングを示す。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる、βアクチンｍＲＮＡに関連している、アデノシン受容体ｍＲＮＡの相対的定量化。泡沫細胞を、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｍＲＮＡでトランスフェクトして（それぞれ、図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ及び７Ｄ）、２４時間、４８時間及び７２時間培養した。プロットは平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり、対照と比較して（０時点）＊Ｐ＜０．０１。それぞれのアデノシン受容体サブタイプのｓｉＲＮＡで処理して２４、４８及び７２時間培養した泡沫細胞由来のタンパク質抽出物の、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体ポリクローナル抗体を用いるウェスタンブロット分析（それぞれ、図７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ及び７Ｈ）。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。図７Ｉは、ｓｉＲＮＡの非存在下（カラム２）、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ又はＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの存在下（それぞれ、カラム３、４、５、６）、並びにＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの同時存在下（ｓｉＡｄｏＲｓ）（カラム７）における、ＨＩＦ−α調節に対するアデノシンの効果を示す。ウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照（カラム１）（７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ＶＥＧＦ分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図９】図９は、ＩＬ-８分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均値の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図１０】図１０Ａ，１０Ｂ、１０Ｃ及び１０Ｄは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１０Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１０Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１０Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１０Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【図１１】図１１Ａ、１０Ｂ及び１０Ｃは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１１Ａ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１１Ｂ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１１Ｃは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ）の効果を示す。
【図１２】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ及び１２Ｄは、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１２Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１２Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１２Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１２Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書の上で述べたように、マクロファージ泡沫細胞形成は、アテローム性動脈硬化性病変及びプラークの進行における重要な過程である。アテローム性動脈硬化症は、動脈の壁にある損傷易発性部位の内皮細胞の機能障害によって始まって、動脈内膜への単球の侵入をもたらす。次いで、これらの細胞は、徐々にコレステロールを負荷した大きい「泡沫細胞」に変化する、大量の酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）を取り込むマクロファージに分化する。顕微鏡下では、この時点で、動脈壁中の脂肪線条として病変が現れる。アテローム性動脈硬化性病変の進行によって、動脈壁の厚さが増大して内膜への酸素伝播が著しく減少する。これらの低酸素領域は、これらの細胞がアテローム性動脈硬化性病変及びプラークが発症している間は低酸素に見舞われることを露呈する大量の泡沫細胞を含有している。実際、動脈壁における酸素の需要と供給のアンバランスがアテローム性動脈硬化性病変の進行に対する重要な因子であると示唆されている（Bjornheden et al., Arterioscler. Thromb. Vasc., 19:870-876, 1999）。
【００１８】
低酸素に対する細胞応答に関与している最も重要な因子である、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）は、誘導発現されるＨＩＦ−１αサブユニット及び恒常的に発現されるＨＩＦ−１βサブユニットからなるヘテロ二量体転写因子である（Semenza et al., Trends Mol. Med., 7:345-350,2001）。ｏｘＬＤＬが低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）のヒトＭｏｎｏ−Ｍａｃ−６マクロファージ内への蓄積を誘発することが報告されていて、ＨＩＦ−１がアテローム性動脈硬化症に関与していることを示唆している。ＨＩＦ−１が血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現及び血管形成に重要な役割を果たしているということは、ＶＥＧＦがマクロファージのアテローム発生及び血管形成活性に関連する重要な変更を介在するという認識によって確立されている。最近の研究結果では、アテローム性動脈硬化性プラーク内の新血管形成が進行したアテローム性動脈硬化症／再狭窄の兆候であることを示唆している（Shatrov et al., Blood, 101:4847-4849, 2003）。更に、アテローム性動脈硬化状態ではマクロファージにおけるＨＩＦ−１の高発現が泡沫細胞形成及びアテローム性動脈硬化症を促進することが報告されている（Jiang et al., Eur. J. Pharmacol., 562:183-190, 2007）。
【００１９】
ヒトのアテローム性動脈硬化組織から単離された泡沫細胞は、その他の強力な血管形成剤、インターロイキン−８（ＣＸＣＬ−８、ＩＬ−８）のレベルの上昇を示す。最近、ＣＸＣＬ８が、ウサギ及びヒト動脈硬化性プラーク内の低酸素領域中で見つけられた泡沫細胞によって上方制御されることが示されている。泡沫細胞からのＣＸＣＬ８の低酸素誘発分泌が、平滑筋、血管内皮及びＴ細胞のアテローム性動脈硬化性プラーク内への動員、それによるプラークの進行を引き起こすだろうということが報告されている。アテローム性動脈硬化症及び癌の全てのステージにおいて、新血管形成が組織病理学の主要特性である。
【００２０】
プリンヌクレオシドである、アデノシンは、特にエネルギーの供給が細胞エネルギーの需要量を満たさないとき、組織機能の主要な局所調節因子として合意の上に同定されているので、１９８０年代には、報復的代謝物と評価されていた（Newby A.C., Trends Biol. Sci., 9:42-44, 1984）。低酸素、虚血、炎症及び損傷の間は、アデノシン濃度が非常に高濃度に達すると考えられる。このような条件下で、アデノシンは細胞外空間に放出されて、細胞外Ｇ−タンパク質の活性化を介して、アデノシン受容体、すなわち、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体サブタイプ、を結合するように伝達する。Ａ３受容体の活性化を介して、アデノシンが、ある特定の癌細胞株において、低酸素条件下でＨＩＦ−１αの蓄積を誘発して、引き続きＶＥＧＦ濃度を増大することが報告され、癌性血管形成におけるアデノシンの強力な役割を示唆している（Merighi et al., Biochem. Pharmacol., 72:19-31, 2006; Merighi et al., Mol. Pharmacol., 72:395-406, 2007）。更に、イヌのマクロファージにおいて、アデノシンＡ２Ａ受容体サブタイプの活性化がＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発するのに対して、単球中で増大した濃度のＶＥＧＦがＡ１受容体の活性化と関連していることが、最近報告されている（De Ponti et al., J. Leukoc. Biol., 82:392-402, 2007; Ramanathan et al., Molecular Biology of the Cell, 18:14-23, 2007）。
【００２１】
驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体がマクロファージの泡沫細胞への低酸素誘導形質転換を促進することがこの度見出された。更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が泡沫細胞の形成を阻害するために使用できるということが見出された。従って、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、動脈硬化性プラーク蓄積の進行を抑えて遅延させることによってアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するために使用できる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が動脈硬化性プラークの退縮のために使用できることが明らかにされている。
【００２２】
従って、本発明は、泡沫細胞形成を阻害する方法、それによりアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、この方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を投与することを含有している。
【００２３】
更に本発明は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬を、（１）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬と組み合わせて含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用治療を提供する。
【００２４】
言い換えれば、本発明はアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び：
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；
又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：
よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬の組み合わせの治療有効量を投与することを含有している。
【００２５】
以下に記載されているものは、本発明のある特定の態様を述べるために本明細書で用いられている多様な用語のいくつかの定義である。しかしながら、本明細書で用いられている定義は、当該技術分野で一般に知られているようなもので、特定の場合にこれらが別段に限定されていない限り、これらは明細書を通して用いられる。
【００２６】
用語「予防」は、本明細書の上で述べられている疾患の発症を予防するために健康な患者に予防的に投与することを示す。
【００２７】
用語「治療」は、病気、疾患又は障害、例えばアテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進展と闘うことを目的とする患者の管理及びケアと理解される。
【００２８】
用語「治療有効量」は、研究者又は医者が求める組織、系又は動物（ヒトを含む）の目的とする生物学的又は医学的応答を引き起こすであろう薬物又は治療薬の量を示す。
【００２９】
用語「哺乳動物又は患者」は、本明細書では互換的に用いられて、これに限定されないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ、サル、ウサギ、マウス及び実験動物を包含する。好ましい哺乳動物はヒトである。
【００３０】
用語「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野で周知の方法に従って製造できる、製薬業界で通常用いられている非毒性の塩を示す。本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、酸で形成される塩、すなわち、鉱酸、有機カルボン酸及び有機スルホン酸、例えばそれぞれに塩酸、マレイン酸及びメタンスルホン酸のような酸付加塩を示す。同様に、本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、塩基で形成される塩、すなわち、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩、更にアンモニウム塩、例えばアンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム及びトリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム塩及び酸性基が構造の一部を構成する場合に、アミノ酸との塩のようなカチオン性の塩を示す。
【００３１】
用語、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、本明細書の上で言及されているその他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩、との「併用」は、その成分を、１つの医薬組成物として、又はその１部として、単一剤形で一緒に投与できることを意味する。併用は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び本明細書の上で言及されているその他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩を、それぞれ別々にしかし同一投与計画の１部として投与することも包含する。別々に投与する場合に、それが好ましくそれが可能であっても、成分を実質的に同時に投与する必要はない。従って、併用は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩と、その他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩とを、異なった調剤又は剤形として、しかし同時に投与することも示す。併用は、異なった時点であらゆる順序で別々に投与することも包含する。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「アルキル」は、好ましくは１〜２０個の炭素原子、より好ましくは１〜１０個の炭素原子（「低級アルキル」）そして最も好ましくは１〜６個の炭素原子を有する１価の直鎖又は分枝鎖の飽和炭化水素基を示す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ヘキシル等のような基で例示される。
用語「アルキレン」及び「低級アルキレン」は、対応するアルカンの２価の基を示す。更に、本明細書で用いられる、アルコキシ、アルカノイル、アルケニルその他のような、アルカンに由来する名称を有するその他の残基は、「低級」で修飾される場合、１０個以下の炭素原子の炭素鎖を有する。炭素の最小数が１より大きい、例えばアルケニル（２個の炭素が最小）のような場合は、「低級」が、少なくとも炭素の最小数を意味すると理解できる。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「置換アルキル」は、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオケト、カルボキシ、カルボキシアルキル、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、並びにモノ−及びジアルキルアミノ、モノ−及びジアリールアミノ、モノ−及びジヘテロアリールアミノ、モノ−及びジヘテロシクリルアミノ、並びに非対称ジ置換アミノ基よりなる群から選ばれる、１〜５個の置換基、そして好ましくは１〜３個の置換基を有している、アルキル基、好ましくは１〜１０炭素原子のもの（「置換低級アルキル」）を示す。本明細書で用いられる、接頭辞「置換」を有するその他の残基は、１つ又はそれ以上の上記置換基を包含するように意図されている。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、単一の環状リング又は複数の縮合環を有している３〜１２個の炭素原子の環状アルキル基を示す。このようなシクロアルキル基は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等のような単一環構造、又はアダマンチル等のような多環構造を包含する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「アラルキル」は、アリール置換を有するアルキル基を示す。結合はアルキル基を介する。アラルキル基の例は、ベンジル及びフェネチルを包含する。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「アルケニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つの二重結合を有している、不飽和で、直鎖又は分枝鎖の炭化水素基を示す。好ましいアルケニル基は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｉ−プロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）等を包含する。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「アルキニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つの三重結合を有している、不飽和で、直鎖又は分枝鎖の炭化水素基を示す。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「アルコキシ」は、基「アルキル−Ｏ−」を示し、ここでアルキルは上で定義されているようなものである。好ましいアルコキシ基は、例示すると、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、１，２−ジメチルブトキシな等を包含する。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「アルキルチオ」は、基「アルキル−Ｓ−］を示し、ここでアルキルは上で定義されているようなものである。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「アシル」は、基アルキル−Ｃ（Ｏ）−（アルカノイル）、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、を示し、ここでアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「アミノアシル」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”を示し、ここでＲ’及びＲ”は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「アシルアミノ」は、基Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ”を示し、ここでＲ’及びＲ”は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「アシルオキシ」は、基Ｒ’−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を示し、それぞれのＲ’はアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合（condensed、fused）環（例えば、ナフチル又はアントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を示す。好ましいアリールは、フェニル、ナフチル等を包含する。特に別段のアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなアリール基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、及びアシルアミノを包含する。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを示して、フルオロ又はクロロの何れかが好ましい。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」は、１〜１５個の炭素原子、及び１つより多い環がある場合、少なくとも１つの環内に酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる、１〜４個のヘテロ原子を有する、芳香族複素環を示す。
【００４７】
特に別段のヘテロアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなヘテロアリール基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、及びアシルアミノを包含する。このようなヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジル又はフリル）又は多縮合環（例えば、インドリジニル又はベンゾチエニル）を有することができる。
【００４８】
「複素環」又は「ヘテロシクリル」は、単環又は多縮合環、１〜１５個の炭素原子、及び１つより多い環がある場合、少なくとも１つの環内に酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子、を有する１価の飽和又は不飽和複素環基を示す。
【００４９】
特に別段の複素環基の定義に制約されない限り、このような複素環基は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ヘテロアリール、チオール、アルキルチオ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、アシルアミノ等よりなる群から選ばれる１〜５個の置換基好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。このような複素環基は単環又は多縮合環を有することができる。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「ヘテロシクロオキシ」は、酸素架橋を介して結合する複素環基を示す。
【００５１】
１つ又はそれ以上の置換基を含有している上記のあらゆる基に関して、そのような基が、立体的に非現実的でそして／又は合成的に実施不可能である置換又は置換パターンを何れも含んでいないことは、もちろん、理解される。
【００５２】
本発明が適用する適切なアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、ＭＲＳ１１９１、ＭＲＳ１２２０、ＭＲＳ１３３４、ＭＲＳ１５２３、ＭＲＳ３７７７ヘミシュウ酸塩、ＶＵＦ５５７４、ＰＳＢ１０塩酸塩、ＰＳＢ１１塩酸塩及びリバーシン（Sigma-Aldrich 及び／又は Tocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，３５８，９６４号、米国特許第６，６２０，８２５号、米国特許第６，６７３，８０２号、米国特許第６，６８６，３６６号、米国特許第６，９２１，８２５号、米国特許第７，０６４，２０４号、米国特許第７，３７１，７３７号；及び米国特許出願公開第２００６０１７３８５号（これらの全内容は参照により本明細書に取り込まれている）に記載されているようなものを包含する。更なるアデノシン受容体拮抗薬は、Jacobson et al., Neuropharmacology, 36: 1157-1165, 1997; Yao et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 232: 317-322, 1997; Kim et al., J. Med. Chem., 39(21): 4142-4148, 1996; van Rhee et al., Drug Devel. Res., 37: 131, 1996; van Rhee et al., J. Med. Chem., 39: 2980-2989, 1996; Siquidi et al., Nucleosides, Nucleotides 15: 693-718, 1996; van Rhee et al., J. Med. Chem., 39: 398-406, 1996; Jacobson et al., Drugs of the Future, 20: 689-699, 1995; Jacobson et al., J. Med. Chem., 38: 1720-1735, 1995; Karton et al., J. Med. Chem., 39: 2293-2301, 1996; Kohno et al., Blood, 88: 3569-3574, 1996; Jiang et al., J. Med. Chem., 39: 4667-4675, 1996; Yao et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 232: 317-322, 1997; 及びJiang et al., J. Med. Chem. 40: 2596-2608, 1996 に見出すことができる。
【００５３】
随意に、本発明の方法で用いられるアデノシンＡ３拮抗薬は、その他のアデノシン受容体サブタイプ、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【００５４】
一態様では、本発明は、米国特許第６，９２１，８２５号に開示されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【００５５】
より詳細には、本発明は式（Ｉ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を用いて、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【００５６】
【化２】
【００５７】
式中の、Ａはイミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールである。
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯ ｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２である。
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであって、ここでそれぞれのＲ１は同一又は異なるか、或いは窒素原子と結合している場合は、窒素原子と一緒になって、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ，及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の更なるヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成する。
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールである。
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１である。そして
ｂは、１又は２である。
【００５８】
好ましくは、Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロシクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ及びアシルアミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリール；アリール部分が上記のアリール基について示されている１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔの基（ここで、ＨｅｔはＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、ｍは０又は１〜５の整数である）であって；それぞれのＲ１は同一でも異なってもよい。
【００５９】
より好ましくは、Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＣ６〜Ｃ１０アリール若しくはＣ７〜Ｃ１０アラルキルであって、いずれの場合も、アリール基は、アリールについて本明細書の上に示されているように置換されていてもよく；そしてそれぞれのＲ１は同一でも異なってもよい。
【００６０】
特に好ましい化合物は、Ｒ１が水素；５〜６員のヘテロアリール又はフェニル基（いずれの場合も、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよく、それぞれのＲ１は同一でも異なってもよい）であるようなものである。
【００６１】
好ましいＣ１〜Ｃ８アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びイソペンチルである。好ましいＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを包含する。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基で置換されている好ましいＣ１〜Ｃ５アルキル基の例は、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル、及び２−シクロペンチルエチルを包含する。好ましい置換Ｃ１〜Ｃ５アルキル基の例も、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、３−アミノプロピル、２−（４−メチル−１−ピペラジン）エチル、２−（４−モルホリニル）エチル、２−アミノカルボニルエチル、２−ジメチルアミノエチル、及び３−ジメチルアミノプロピルを包含する。
【００６２】
アリールは、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ及びジ（低級アルキル）アミノ基から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニルが好ましい。
【００６３】
Ｎ、Ｏ及び／又はＳを含有している５〜６員の複素環基の好ましい例は、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、チアゾリル、及びテトラゾリルを包含する。
【００６４】
Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルの好ましい例は、それぞれのフェニル基がＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル及びジフルオロメトキシから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、ベンジル又はフェネチルを包含する。
【００６５】
Ｒ2が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルであることが好ましい。
【００６６】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであることが好ましい。
【００６７】
ＸがＯであり、Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ２〜Ｃ３アルキルであり、そしてＲ３がフリルであることが好ましい。
【００６８】
Ａの可能な態様は以下の構造式で示すことができる。
【００６９】
【化３】
【００７０】
本発明の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒ２が水素、アルキル、アルケニル及びアリールよりなる群から選ばれる、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７１】
本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがイミダゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７２】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがピラゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。より詳細には、Ａが次式のピラゾール環を示し、或いはこれらの薬学的に許容される塩である。
【００７３】
【化４】
【００７４】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがチアゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７５】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒが−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル（ここで、それぞれのＲ１は同一でも異なっていてもよい）であるか；又は窒素原子と結合する場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環又は、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成し；ＸはＯである）を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７６】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒが−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、Ｒ１は互いに異なり、一方は水素である）を示し；Ａが下記の式のピラゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７７】
【化５】
【００７８】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＩ）：
【００７９】
【化６】
【００８０】
（式中の、Ｒ２は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アラルキル、置換アラルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール又はアリールであり；
Ｒ３はフランであり；
Ｒ４は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルである）：
を有する、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００８１】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物の非限定的な例は、本明細書の以下に挙げられているもの及び表１に記載されているものを包含する。
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
【００８２】
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
Ｎ−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素；
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］尿素
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル］尿素
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−｛４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］フェニル｝尿素；及び
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素：
又はこれらの薬学的に許容される塩。
【００８３】
【表１】
【００８４】
特に以下よりなる群から選ばれる、式（ＩＩ）の化合物が好ましい。
【００８５】
【化７】
【００８６】
、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０としても知られている、５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン、又はその薬学的に許容される塩；
【００８７】
【化８】
【００８８】
、Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素、又はその薬学的に許容される塩、特にその塩酸塩；
【００８９】
【化９】
【００９０】
、Ｎ−１−（４−ジメチルアミノフェニル）−Ｎ’−Ｓ−［８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン］尿素、又はその薬学的に許容される塩；及び
【００９１】
【化１０】
【００９２】
、Ｎ−１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−Ｎ’−５−［８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン］尿素、又はその薬学的に許容される塩。
【００９３】
別の態様では、本発明は、米国特許第６，３５８，９６４号に開示されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【００９４】
より詳細には、本発明は、次の式（ＩＩＩ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を使用して、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【００９５】
【化１１】
【００９６】
式中の、Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２である。
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、又はヘテロシクリルである（ここでそれぞれのＲ１は、同一であっても異なっていてもよいか、又は窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳから選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成する。
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールである。
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリーリオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、チオアルキル、置換チオアルキル、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１である。
ｂは、１又は２である。
【００９７】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリール；アリール部分が、アリール基について上で指摘されている１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ７〜Ｃ１０アラルキル；式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、ＨｅｔはＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、そしてｍは０又は１〜５の整数である）の基；であり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、ことが好ましい。
【００９８】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロアリール；又はいずれの場合も、アリールについて本明細書の上で指摘されているように置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール或いはＣ７〜Ｃ１０アラルキルであり；そしてそれぞれのＲ１が同一でも異なっていてもよい、ことがより好ましい。
【００９９】
特に好ましい式（ＩＩＩ）の化合物は、Ｒ１が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、又はジ（低級アルキル）アミノ基よりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール、又はフェニル基であって、それぞれのＲ１が同一でも異なっていてもよい化合物である。
【０１００】
式（ＩＩＩ）の化合物については、好ましいＣ１〜Ｃ８アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びイソペンチルである。好ましいＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを包含する。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル基の好ましい例は、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル及び２-シクロペンチルエチルを包含する。好ましい置換Ｃ１〜Ｃ５アルキル基の例は、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、３−アミノプロピル、２−（４−メチル−１−ピペラジン）エチル、２−（４−モルホリニル）エチル、２−アミノカルボニルエチル、２−ジメチルアミノエチル、及び３−ジメチルアミノプロピルも包含する。
【０１０１】
式（ＩＩＩ）の化合物については、アリールは、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ及びジ（低級アルキル）アミノ基から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい、フェニルが好ましい。
【０１０２】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｎ、Ｏ及び／又はＳを含有している５〜６員環の複素環基の好ましい例は、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、トリアゾリル、及びテトラゾリルを包含する。
【０１０３】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル基の好ましい例は、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、及びジフルオロメトキシから選ばれる１つ又はそれ以上のの置換基で置換されていてもよい、ベンジル又はフェネチルを含んでいる。
【０１０４】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ２が、ハロゲン、好ましくはクロロ、Ｃ２〜Ｃ３アルキル、又は置換Ｃ２〜Ｃ３アルキルであることが好ましい。
【０１０５】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルキルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであることが好ましい。
【０１０６】
式（ＩＩＩ）の化合物については、ＸがＯであり、Ｒ２がクロロであり、そしてＲ３がフランであることが好ましい。
【０１０７】
本発明の特定の実施態様では、Ｒが−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（ここで、ＸはＯである）を示す、式（ＩＩＩ）の化合物の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによって、本発明の方法が実施される。
【０１０８】
式（ＩＩＩ）の化合物の非制限的な例は、以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；及び
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン
【０１０９】
更に別の態様では、本発明は、米国特許出願公開第２００６０１７８３８５号に記載されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【０１１０】
より詳細には、本発明は、次の式（ＩＶ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を使用して、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【０１１１】
【化１２】
【０１１２】
式中の、ＸはＣＨ又はＮである。
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールである。
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルである。
Ｒ４は、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである。そして
点線の一方は二重結合を示し、そして他方は一重結合を示す。
【０１１３】
式（ＩＶ）の化合物については、Ｒ４が、水素、アルキル又は置換アルキルであることが好ましく、Ｒ４が水素であることがより好ましい。
好ましい実施態様では、Ｒ３がアルキル、より好ましくはメチル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくは置換フェニル、より好ましくは４−置換フェニル、更により好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ１がアラルキルで、Ｒ２がアルキルであり、更により好ましくは、Ｒ２がｎ−プロピルである。
【０１１４】
本発明の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＶａ）を有する式（ＩＶ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１１５】
【化１３】
【０１１６】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、式（ＩＶ）の化合物について上で述べた通りである。
【０１１７】
式（ＩＶａ）の化合物については、Ｒ４が、水素、アルキル又は置換アルキルであることが好ましく、Ｒ４が水素であることがより好ましい。
好ましい実施態様では、Ｒ３は、アルキル、より好ましくはメチル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくは置換フェニル、より好ましくは４−置換フェニル、更により好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施多様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ２が、アルキル、更により好ましくは、プロピルであり、そしてＲ１が、アラルキル、より好ましくはベンジルである。
【０１１８】
本発明の別の特定な実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＶｂ）を有する式（ＩＶ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１１９】
【化１４】
【０１２０】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、式（ＩＶ）の化合物について上で述べた通りである。
【０１２１】
式（ＩＶｂ）の化合物については、好ましくはＲ４が、水素、アルキル又は置換アルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ３は、アルキル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくはフェニル、より好ましくは４−置換フェニル、さらにより好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ１がアルキル、さらにより好ましくはプロピルであり、そしてＲ２がアラルキル、より好ましくはベンジルである。
【０１２２】
式（ＩＶａ）及び（ＩＶｂ）の化合物の非制限的な例は本明細書の以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−メトキシフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（ビフェニル−４−イル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−フルオロフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−フェニル−１，３−ジプロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジイソブチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジメチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（ビフェニル−４−イル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−クロロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−ブロモフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−イソプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−ｔ−ブチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロヘキシル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−６−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；及び
１，３，７−トリメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン。
【０１２３】
式（ＩＶａ）を有する式（ＩＶ）の化合物が好ましく、特に式（ＩＶｃ）：
【０１２４】
【化１５】
【０１２５】
を有する化合物、すなわち、１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン、又はその薬学的に許容される塩が好ましい。
【０１２６】
さらに、本発明の別の特定な実施態様では、本発明の方法は、式（Ｖ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１２７】
【化１６】
【０１２８】
式中の、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールである。
Ｒ７は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、又は置換アラルキルである。そして
Ｒ８は、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである。
【０１２９】
式（Ｖ）の化合物の非制限的な例は本明細書中以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
８−ベンジル−１−メチル−３−フェニル−６−プロピル−１，４−ジヒドロ−８Ｈ−１，２，４ａ，６，８，９−ヘキサアザ−フルオレン−５，７−ジオン；及び
８−ベンジル−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−フェニル−６−プロピル−１，４−ジヒドロ−８Ｈ−１，２，４ａ，６，８，９−ヘキサアザ−フルオレン−５，７−ジオン。
【０１３０】
本明細書の上で述べたように、本発明は更に、（１）ＡＣＥ阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び （１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤と組み合わせた、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用療法を提供する。
【０１３１】
本明細書で上述したように、本発明の併用療法で用いられるアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して随意に拮抗薬活性を示してもよい。
【０１３２】
レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）の阻害薬は、例えば、N. Eng. J. Med., 316:1429-1435, 1987 に記載されているように、血圧を下げて、高血圧及び鬱血性心不全に有益に作用する、周知の薬剤である。天然の酵素レニンは腎臓から放出されて循環血液中でアンジオテンシノゲンを開裂してデカペプチドのアンジオテンシンＩを形成する。これは肺、腎臓及びその他の臓器内で、順にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって開裂してオクタペプチドのアンジオテンシンＩＩを形成する。このオクタペプチドは、動脈血管収縮により直接的に、そしてナトリウムイオン関連ホルモンアルドステロンを副腎から放出することにより間接的に、血圧を増大させ、細胞外液量の増大が同時に起こる。レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成の減少をもたらす。その結果、より少量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度が、レニン阻害剤の抗高血圧作用の直接要因である。
【０１３３】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、アンジオテンシンＩＩ受容体のＡＴ１−受容体サブタイプと結合するが、受容体を活性化しないような活性薬剤であると理解されている。ＡＴ１受容体を阻害することによって、これらの拮抗薬を、例えば抗高血圧剤として、用いることができる。
【０１３４】
本発明の併用に用いることができる適切なアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、異なった構造特性を有する、好ましくは非ペプチド構造を有するもののようなＡＴ１受容体拮抗薬を包含する。例えば、バルサルタン（valsartan；米国特許第５，３９９，５７８号；ヨーロッパ特許第４４３９８３号）、ロサルタン（losartan；米国特許第５，１３８．０６９号；ヨーロッパ特許第２５３３１０号）、カンデサルタン（candesartan；米国特許第５，７０３，１１０号；米国特許第５，１９６，４４４号；ヨーロッパ特許第４５９１３６号）、エプロサルタン（eprosartan；米国特許第５，１８５，３５１号；ヨーロッパ特許第４０３１５９号）、イルベサルタン（irbesartan；米国特許第５，２７０，３１７号；ヨーロッパ特許第４５４５１１号）、オルメサルタン（olmesartan；米国特許第５，６１６，５９９号；ヨーロッパ特許第５０３７８５号）、タソサルタン（tasosartan；米国特許第５，１４９，６９９号；ヨーロッパ特許第５３９０８６号）、及びテルミサルタン（telmisartan；米国特許第５，５９１，７６２号；ヨーロッパ特許第５０２３１４号）よりなる群から選ばれる化合物を挙げることができる。
【０１３５】
好ましいＡＴ１−受容体拮抗薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいものはロサルタン及びバルサルタン又は、いずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１３６】
ＡＣＥ阻害薬によるアンジオテンシンＩのアンジオテンシンＩＩへの酵素分解の阻害は、血圧を調節するための成功した変法であるので、高血圧を治療するための有用な治療方法も提供する。
【０１３７】
本発明の併用に用いられる適切なＡＣＥ阻害薬は、例えば、アラセプリル（alasepril）、ベナゼプリル（benazepril）、カプトプリル（captopril）、セロナプリル（ceronapril）、シラザプリル（cilazapril）、デラプリル（delapril）、エナラプリル（enalapril）、ホシノプリル（fosinopril）、イミダプリル（imidapril）、リシノプリル（lisinopril）、モエキシプリル（moexipril)、モベルトプリル（moveltopril）、ペリンドプリル（perindopril）、キナプリル（quinapril）、ラミプリル（ramipril）、スピラプリル（spirapril）、テモカプリル（temocapril）、トランドラプリル（trandolapril）、及びゾフェノプリル（zofenopril）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１３８】
好ましいＡＣＥ阻害薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいＡＣＥ阻害薬はラミプリル（米国特許第５，０６１，７２２号）である。
【０１３９】
レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成において減少をもたらす。その結果として、より少ない量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度が、例えば、レニン阻害剤の降圧作用の直接要因である。
【０１４０】
適切なレニン阻害剤は、異なった構造特性を有している化合物を包含する。例えば、ジテキレン（ditekiren）、レミキレン（remikiren）、テルラキレン（terlakiren）、及びザンキレン（zankiren）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１４１】
特に、本発明は、米国特許第５，５５９，１１１号、同第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号（これらの全ての内容は、参照により、本明細書に取り込まれている）に開示されているレニン阻害剤に関している。
【０１４２】
本発明の好ましいレニン阻害剤は、米国特許第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号に開示されているレニン阻害剤、特に、式（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）のそれぞれＲＯ６６−１１３２及びＲＯ６６−１１６８、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を包含する。
【０１４３】
【化１７】
【０１４４】
好ましいレニン阻害剤は、米国特許第５，５５９，１１１号に開示されている、δ−アミノ−γ−ヒドロキシ−ω−アリール−アルカン酸アミド誘導体、特に、アリスキレン（aliskiren）としても知られている、式（ＶＩＩＩ）の化合物も包含する。
【０１４５】
【化１８】
【０１４６】
特定に定義されない場合には、用語「アリスキレン」は、遊離塩基としても、及びその塩として、特にその薬学的に許容される塩、もっとも好ましくは、そのヘミフマル酸塩としても理解されるべきである。
【０１４７】
利尿剤は、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、メチルクロチアジド、及びクロロタリドンよりなる群から選ばれるチアジド誘導体である。もっとも好ましい利尿剤はヒドロクロロチアジドである。更に利尿剤は、アミロリド又はトリアメテリンのようなカリウム保持性利尿剤、又はこれらの薬学的に許容される塩である。
【０１４８】
ＣＣＢの群は本質的に、ジルチアゼム型及びベラパミル型のＣＣＢのような、ジヒドロピリジン（ＤＨＰｓ）及び非ＤＨＰｓを含有している。
【０１４９】
当該併用において有用なＣＣＢは、アムロジピン（amlodipine）、フェロジピン（felodipine）、リオシジン（ryosidine）、イスラジピン（isradipine）、ラシジピン（lasidipine）、ニカルジピン（nicardipine）、ニフェジピン（nifedipine）、ニグルジピン（niguldipine）、ニルジピン（niludipine）、ニモジピン（nimodipine）、ニソルジピン（nisoldipine）、ニトレンジピン（nitrendipine）及びニバルジピン（nivaldipine）よりなる群から選ばれる代表的なＤＨＰが好ましく、そして、フルナリジン（flunarizine）、プレニラミン（prenylamine）、ジルチアゼム（diltiazem）、フェンジリン(fendiline）、ガロパミル（gallopamil）、ミベフラジル（mibefradil）、アニパミル（anipamil）、チアパミル（tiapamil）及びベラパミル（verapamil）よりなる群から選ばれる代表的な非ＤＨＰが好ましく、そして何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩が好ましい。これらＣＣＢの全ては、例えば、抗高血圧薬、抗狭心症薬又は抗不整脈薬として、治療に用いられる。
【０１５０】
好ましいＣＣＢは、アムロジピン、ジルチアゼム（diltiazem）、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン及びベラパミル、又は例えば、特異的ＣＣＢに依存するもの、それらの薬学的に許容される塩を包含する。ＤＨＰとして特に好ましいものは、アムロジピン、又はその薬学的に許容される塩、特にそのベシル酸塩である。特に好ましい代表的な非ＤＨＰは、ベラパミル、又はその薬学的に許容される塩、特にその塩酸塩である。
【０１５１】
本発明で用いるのに適しているβ−ブロッカーは、β−アドレナリン受容体に対してエピネフィリンと競合して、エピネフィリンの作用を妨げる、ベータアドレナリン遮断薬（β−ブロッカー）を包含する。β−ブロッカーが、α−アドレナリン受容体と比べてβ−アドレナリン受容体に対して選択的であって、そのため顕著なα−ブロッキング効果を有していないことが好ましい。適切なβ−ブロッカーは、アセブトロール（acebutolol）、アテノロール（atenolol）、ベタキソロール（betaxolol）、ビソプロロール（bisoprolol）、カルテオロール（carteolol）、カルベジロール（carvedilol）、エスモロール（esmolol）、ラベタロール（labetalol）、メトプロロール（metoprolol）、ナドロール（nadolol）、オクスプレノロール（oxprenolol）、ペンブトロール（penbutolol）、ピンドロール（pindolol）、プロプラノロール（propranolol）、ソタロール（sotalol）及びチモロール（tomolol）から選ばれる化合物を包含する。β−ブロッカーが酸又は塩基であるか、又はそうでなければ薬学的に許容される塩又はプロドラッグを形成することが可能な場合は、これらの形態は本明細書に包含されるものと考えられ、その化合物を、遊離形態、又は生理的に加水分解可能で許容可能なエステルのような、生理学的に許容される塩、或いはプロドラッグの形態で投与できることが理解される。例えば、メトプロロールはその酒石酸塩として適切に投与され、プロプラノロールは塩酸塩として適切に投与される等である。
【０１５２】
血小板凝集阻害薬は、例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標；硫酸クレピドグレル(
clopidogrel bisulfate)）、ＰＬＥＴＡＬ（登録商標；シロスタゾール(cilostazol)）及びアスピリンを包含する。
【０１５３】
コレステロール吸収調節薬は、例えば、ＺＥＴＩＡ（登録商標；エゼチミブ(ezetimibe)）を包含する。
【０１５４】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬（β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイムＡ還元阻害薬、又はスタチンとも呼ばれる）は、血漿コレステロール濃度を含む脂質濃度を低下するために用いることのできる活性薬物であると理解されている。
【０１５５】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は異なった構造特徴を有する化合物を包含する。例えば、アトルバスタチン（atorvastatin）、セリバスタチン（cerivastatin）、フルバスタチン（fluvastatin）、ロバスタチン（lovastatin）、ピタバスタチン（pitavastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、ロスバスタチン（rosuvastatin）及びシンバスタチン（simvastatin）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１５６】
好ましいＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいのは、アトルバスタチン、ロスバスタチン及びシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１５７】
ＨＤＬ増大化合物は、これに限定されないが、コレステロールエステル転送タンパク（ＣＥＴＰ）阻害剤を包含する。ＣＥＴＰ阻害剤の例は、米国特許第６，１４０，３４３号及び同第６，１９７，７８６号に開示されているもの、例えば、トルセトラピブ（torcetrapib）として知られている化合物；国際ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００６０１４４１３号に開示されているもの、例えば、アナセトラピブ（anacetrapib）として知られている化合物；及び米国特許第６，４２６，３６５号に開示されているもの、例えば、ＪＴＴ−７０５として知られている化合物を包含する。
【０１５８】
アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレステロールからのコレステロールエステルの合成に触媒作用する酵素で、コレステロールの代謝及びその消化器への吸収に極めて重要な役割を果たしているので、ＡＣＡＴ酵素の阻害薬は抗−高脂血症薬として用いることができる。ＡＣＡＴ阻害薬の例は、これに限定されないが、アバシミベ（avasimibe）及びパクチミベ（pactimibe）を包含する。
【０１５９】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、これに限定されないが、ＰＳＢ１１１５カリウム塩、ＰＳＢ６０３、ＭＲＳ１７５４及びアロキサジン（alloxazine；Sigma-Aldrich及び／又はTocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，５４５，００２号；米国特許第６，８２５，３４９号；米国特許第６，９１６，８０４号；米国特許第７，１６０，８９２号；米国特許第７，２０５４０３号及び米国特許第７，３４２，００６号に開示されているもの、例えば、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０として知られる化合物を包含する。
【０１６０】
本発明による併用が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有していることが好ましい。
【０１６１】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６２】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、レニン阻害剤、例えば、アリスキレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、好ましくはそのヘミフマル酸塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６３】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＣＣＢ、例えばアムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６４】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、β−ブロッカー、例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、エスモロ（ド）ール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール及びチモロール、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそのれら薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６５】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、血小板凝集阻害薬、例えばクロピドグレル、又はアスピリン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、例えば、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６７】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６８】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６９】
一般名又は商標名によって同定される活性薬物の構造は、標準的な抄録「The Merck Index」又は「Physician's Desk Reference」の最新版から、又はデータベース、例えば、Patents International（例えば、IMS World Piblications）又は Current Drug から引き出すことができる。これらの対応する内容を、参照により、本明細書に取り込まれている。当業者は誰でも、活性薬剤の同定が可能で、これらの参考文献に基づいて、製造すること、及び医薬品の適応及び特性を、インビトロ及びインビボの両方で、標準的な試験モデルで、試験することも同様に可能である。
【０１７０】
本明細書で上述したように、本発明のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、及び併用パートナーは、それらの薬学的に許容される塩として存在していてもよい。これらの化合物が、例えばアミノ基のような少なくとも１つの塩基中心を有している場合は、これらはこれらの酸付加塩を形成できる。同様に、少なくとも１つの酸性基（例えば、ＣＯＯＨ）を有している化合物は、塩基との塩を形成できる。さらに化合物が、例えばカルボキシル基とアミノ基の両方を含有する場合、対応する内部塩（internal salts）を形成できる。
【０１７１】
対応する活性成分又は薬学的に許容される塩は、水和物のような溶媒和物の形態で、又は、例えばそれらの再結晶においてのような、用いる他の溶媒を含んで、も用いることができる。
【０１７２】
更に別の態様では、本発明は、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物に関している。
【０１７３】
本明細書で上述したように、本発明の医薬組成物で用いられるアデノシンＡ３拮抗薬は、随意に、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【０１７４】
更に、本発明は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、例えば、アテローム性動脈硬化性プラークの進行の遅延、及び最終的に退縮、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、
（１）ＡＣＥ阻害薬、好ましくは、ラミプリル、それらの薬学的に許容される塩；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、好ましくは、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（３）レニン阻害剤、好ましくは、アルスキレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、例えばそのヘミフマル酸塩；
（４）利尿剤、好ましくは、ヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、好ましくは、アムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、好ましくは、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの他の治療薬剤との組合せの治療有効量、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物を提供する。
【０１７５】
本明細書の上で開示したように、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、（１）ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン；（３）レニン阻害剤、例えば、アルスキレン；（４）利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、例えば、アムロジピン；（６）β−ブロッカー、例えば、メトプロロール；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬：又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれるれる少なくとも１つの他の治療薬剤と組み合わせて、医薬組成物として併用投与することができる。成分を従来の投与形態で、通常は薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に、併用投与することができる。
【０１７６】
本発明の方法の実施にあたって、本発明のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを、ヒトを含む、哺乳動物への経口又は経直腸、経皮及び非経口投与のような各種投経路を介する投与に適している医薬組成物に製剤化できる。経口投与用に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを含有してなる医薬組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、マイクロエマルジョン、単位用量パケット等の形態を採ることができる。ａ）希釈剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム又はカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；錠剤についてはｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、でんぷん糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン；所望によりｄ）崩壊剤、例えば、でんぷん、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩、又は発泡性混合物；及び／又はｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味剤と共に活性成分を含有している錠剤及びゼラチンカプセルが好ましい。注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液が好ましく、そして坐薬は、脂肪乳液又は懸濁液から有利に調製される。
【０１７７】
当該組成物を、滅菌させてもよく、そして／又は保存、安定化、湿潤又は乳化剤のような補助剤、溶解促進剤、浸透圧調節剤及び／又は緩衝剤を含有してもよい。更にこれらは、その他の治療有効物質を含有していてもよい。当該組成物は、それぞれに従来の混合、顆粒又はコーティング方法に従って調製されて、そして約０．１〜９０％、好ましくは約１〜８０％の活性成分を含有する。
【０１７８】
治療的に有効であるために必要な本発明の化合物の量は、勿論、治療する個々の哺乳動物によって変化するであろう、そして最終的には医師又は獣医師の判断によって決まる。考慮すべき因子は、治療する疾患の重症度、投与経路、製剤の特性、哺乳動物の体重、体表面積、年齢及び全身状態、並びに投与される特定の化合物を包含する。適切な投与計画を、このような因子を考慮し、そして文献に報告されている用量及び Physician's Desk Reference (58th ed., 2004）で推奨されている用量に従って、当業者が選択することができる。
【０１７９】
本発明による医薬併用剤の活性成分についての好ましい投与量は、治療的に有効な投与量であって、特に、市販品のそれである。
【０１８０】
通常は、経口投与の場合、例えば、体重が約７５ｋｇの患者に対して、１日当たり約１μｇ〜約３ｇの概算用量が推定される。
【０１８１】
例えば、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の適切な治療有効用量は、１日当たり患者の体重に対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ未満、最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ未満である。
ある特定の実施態様では、アデノシンＡ３受容体拮抗薬を、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約１．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、又は約１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量で投与する。
【０１８２】
ＡＣＥ阻害薬の場合は、好ましいＡＣＥ阻害薬の単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ又は４０ｍｇのベナゼプリル；約６．５〜１００ｍｇ、好ましくは、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ又は１００ｍｇのカプトプリル；約２．５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのエナラプリル；約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、１０ｍｇ又は２０ｍｇのフォシノプリル；約２．５ｍｇ〜約４ｍｇ、好ましくは、２ｍｇ又は４ｍｇのペリンドプリル；約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのキナプリル；又は約１．２５ｍｇ〜約５ｍｇ、好ましくは、１．２５ｍｇ、２．５ｍｇ又は５ｍｇのラミプリルを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。１日１回投与が好ましい。
【０１８３】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、バルサルタンは、適切な単位剤形、例えば、治療有効量のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、約２０〜約３２０ｍｇのバルサルタンを含有している、カプセル又は錠剤の形態で供給される。活性成分の投与は、例えばアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えばバルサルタンを、１日用量２０ｍｇ又は４０ｍｇで開始して、１日当たり８０ｍｇ及び更に１日当たり１６０ｍｇ、そして最終的に１日当たり３２０ｍｇまで増量して、１日３回まで可能である。その用量を、例えば、朝に、昼に又は夕方に摂取することができる。
【０１８４】
レニン阻害剤、例えば、アリスキレンの場合、体重約７５ｋｇの、ヒトを含む、温血動物に投与する用量は、特にレニン活性を阻害するのに有効な用量、例えば、血圧を下げるのに有効な用量は、約３ｍｇ〜約３ｇ、好ましくは、約１０ｍｇ〜約１ｇであり、例えば２０ｍｇ／ヒト／日〜２００ ｍｇ／ヒト／日を、例えば同じ大きさのものであってもよいが、好ましくは、１〜４つの単回用量に分割したものである。通常は、小児は成人用量の約半分を摂取する。各個体に必要な用量は、例えば活性成分の血清濃度を測定することによって、モニターして、最適濃度に調節することができる。単回用量は、成人患者当たり、例えば、７５ｍｇ、１５０ｍｇ又は３００ｍｇを含んでいる。
【０１８５】
利尿剤の場合は、好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは、約６．２５ｍｇ〜約２５ｍｇを含有している、例えば、錠剤又はカプセルである。ヒドロクロロチアジドの１日用量の６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ又は２５ｍｇを１日に１回投与することが好ましい。
【０１８６】
ＣＣＢｓ、例えば、アムロジピンの場合は、好ましい単位剤形は、経口で投与しときに、１日当たり、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ〜２０ｍｇを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。
【０１８７】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の場合は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約１２０ｍｇ、好ましくは、アトルバスタチンを用いるときは、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、又は８０ｍｇのアトルバスタチンを、例えば、１日１回投与するように、含有している、例えば錠剤又はカプセルである。
【０１８８】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の場合は、好ましい単位剤形は、例えば、１日に３回まで投与される、約５μｇ〜約１ｇ、好ましくは、約５０μｇ〜約１００ｍｇを含有している、例えば錠剤又はカプセルである。
【０１８９】
本発明は、別々に投与されてもよい化合物の併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法に関しているので、本発明は、キットの形態にある、別々になった医薬組成物の組み合わせにも関している。キットは、例えば、２つの別々の医薬組成物：（１）アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び（２）ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＬＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物：を含むことができる。（１）及び（２）の量は、別々に併用投与したときに有益な治療効果（複数を含む）が達成されるような量である。キットは、別々の組成物を収容するための、分離したボトル又は分離したホイルパックのような容器を含有していて、それぞれの区画は、例えば、（１）又は（２）を含有している複数の剤形（例えば、錠剤）を含有している。
あるいは、活性成分を含有している剤形を分離するのではなく、キットはそれぞれが全用量を含有する分離した区画（それが別々の剤形を含んでいる）を含有することができる。このタイプのキットの例は、個々のブリスターが２つ（又はそれ以上）の錠剤を含有していて、１つ（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（１）を含んでいて、第２（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（２）を含んでいる、ブリスターパックである。
一般に、キットは、別々の成分の投与に付いての説明書を含んでいる。キット形態は、別々の成分を異なった剤形（例えば、経口及び非経口）で投与することが好ましい場合、別々の成分を異なった投与間隔で投与するとき、又は併用の個々の成分の滴定を処方医師が望む場合に、特に有利である。
本発明の場合、それ故、キットは：
（１）第１剤形に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物の治療有効量；
（２）第２剤形に、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＬＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合もそれらの薬学的に許容される塩、を投与に続いて有益な治療効果（複数でも可）に到達するような量で、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び
（３）当該第１及び第２剤形を含有している容器：
を含有している。
【０１９０】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬の単独での作用、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、薬学的に許容される塩との併用での、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の作用は、とりわけ、インビトロ及び／又はインビボでの試験の方法によって、例えば、本明細書の具体的実施例に記載されているように、実験的に明らかにできる。
【０１９１】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの併用パートナーは各種の投与経路で投与できる。それぞれの薬剤は、それぞれの治療薬単独、又はそれらの特定の組み合わせについて、最大の応答を引き起こすための最適な薬物濃度を確認するために、幅広い用量範囲に渡って試験することができる。これらの検討には、１群あたり少なくとも６匹の動物からなる治療群を用いることが好ましい。それぞれの検討は、個々の成分を評価するのと同時に、併用治療群の効果を確認するという方法で、最良に実施される。薬物の効果は急性投与でも観察できるが、慢性期において応答を観察することが好ましい。長期の検討は、代償性反応の完全な発現を引き起こすことができる十分な期間を含んでいので、その観察された効果は、持続した或いは持続性の効果を示す試験系の実際の応答を最もよく表現するだろう。
【０１９２】
代表的な検討は、例えば、ＷＨＨＬ（Watanable heritable hyperlipidemic）ウサギを家族性高コレステロール血症モデルとして用いて（Atherosclerosis, 36:261-268, 1980）、又は今やアテローム性動脈硬化症の主要モデルの１つになっているアポリポタンパク質Ｅノックアウトマウスモデルを用いて（Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 24:1006-1014, 2004; Trends Cardiovasc. Med., 14:187-190, 2004）、実施できる。アポリポタンパク質Ｅノックアウトマウス検討は、例えば、Johnson et al.,（Circulation, 111:1422-1430, 2005）に記載のようにして、又はその変法を用いて、実施できる。
【０１９３】
得られる結果は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の抗高血圧効果とは無関係に、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に用いることができることを示している。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができるということが、明らかにされた。
【０１９４】
更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用が、その他の治療薬剤単独の投与より高い治療効果を達成することが見出された。より高い有効性は、長い作用持続時間としても立証できる。作用持続時間は、次の投与前にベースラインに戻るまでの時間として、又は濃度曲線下面積（ＡＵＣ）としての何れかでモニターすることができる。
【０１９５】
更なる利点は、本発明によって併用される個々の薬物のより低い用量は、例えば、その用量を少なくするばかりではなく、より少ない頻度で投与するように、用量を減らすために、又は副作用の発生を減少するために用いることができる。
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用投与は、より高い割合の治療患者に顕著な応答、すなわち、より高い応答比結果をもたらす。
【０１９６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用療法は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、及びそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に対してより有効な治療をもたらすということを示すことができる。
特に、いっそう驚くべきことは、本発明の併用が、有益な、特に相乗的な治療効果をもたらすばかりではなく、驚くべき有効性の持続のような併用療法からもたらされる利益をも導くという知見である。
【０１９７】
本発明は更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬単独の、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関する。
【０１９８】
従って、本発明の別の実施態様は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の単独での、又は（１）ＡＣＥ阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（３）レニン阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（４）利尿剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、又はそれらの薬学的に許容される塩；（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関している。
【０１９９】
上の記載は、好ましい実施態様を包含して本発明を十分に開示している。特に本明細書に開示されている実施態様の修正及び改良は以下の特許請求の範囲の範囲内である。更なる推考を必要とせずに、当業者は、前述の説明を用いて、本発明をその最大限に利用できるものと考える。従って、本明細書の実施例は、本発明のある特定の態様の単なる説明と解釈されるものであって、決して本発明の範囲を限定するものではない。本明細書を通して用いられている略語は当該技術分野で一般的に知られているようなものである。
【０２００】
材料及び方法
細胞培養
ヒト骨髄単球細胞株Ｕ９３７をＡＴＣＣから入手して、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補完したＲＰＭＩ１６４０培地中、５％ＣＯ２／９５％空気中、３７℃で保持した。
【０２０１】
末梢血からヒトマクロファージ（ＨＭ）の調製
末梢血単核細胞を軟膜から、フィコール・ハイパック分配（Ficoll-Hypaque gradient;Ficoll-Paque, research Grade, Amersham Pharmacia Biotech AB, Cologno Monzese, Italy）で、Gessi et al., (Mol. Pharmacol., 65:711-719, 2004）に既に記載されているようにして単離した。グルタミン（２ｍＭ）、ヒトＡＢ血清（５％,Sigma）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有しているＲＰＭＩ１６４０培地中で、単球を接着によって選択して、７日に渡る接着でマクロファージに分化させた。
【０２０２】
低酸素処理
モジュラー型培養チャンバー（modular incubator chamber）内で低酸素曝露を行って、１％のＯ２、５％のＣＯ２、及び残余のＮ２を含有する混合ガス（MiniGalaxy, RSBiotech, Irvine, Scotland）を供給した。
【０２０３】
泡沫細胞（ＦＣ）形成
Ｕ９３７細胞を酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ、４０ｎＭ）で７２時間処理にて誘発して、マクロファージに分化した。使用前に、ｏｘＬＤＬを、０．１５Ｍの塩化ナトリウム及び０．３ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）の溶液１Ｌに対して４℃で１２時間、次いでＲＰＭＩ１６４０培地（各回１Ｌで、２回交換）に対して２４時間、透析した。全ての透析は、ピアス社の Slide-A-Lyzer 透析カセット（分子量１０，０００画分）を用いて実施した。透析後、リポタンパク質は０．４５μｍ（細孔径）フィルターを通過させて滅菌し、次いでこれ（５０〜１００μｇ／ｍＬ、Intracel, Frederick, MD）をＰＭＡで処理したＵ９３７細胞に加えて、血清を含有していないＲＰＭＩ１６４０中で４８時間培養した。アデノシンによる細胞の処理は全て、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）阻害剤、エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン（ＥＨＮＡ、５μＭ）の存在下で実施し、そしてアデノシン拮抗薬による処理はＡＤＡの存在下で実施した。
【０２０４】
オイルレッドＯ染色分析
ＰＭＡ−分化Ｕ９３７細胞の試験薬物による処理を、ｏｘＬＤＬの添加２時間前に実施した。低酸素下で２４時間ｏｘＬＤＬに曝露した後、Ｕ９３７細胞をリン酸緩衝生理食塩水−緩衝４％パラホルムアルデヒド溶液中に１５分間固定し、次いで風乾した。オイルレッドＯ（６０％イソプロパノール溶液）染色を、基本的に Kalayoglu and Byrne（Infect. Immun., 66:5067-5072, 1998）に既に記載されているように、１５分間行った。ニコンの Eclipse E800 顕微鏡を用い、１００倍の顕微鏡明視野で細胞を表示した。泡沫細胞を、細胞質がオイルレッドＯで染色可能な脂質滴で膨らんでいるマクロファージと定義付けた。
【０２０５】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
全細胞質ＲＮＡを、酸性グアニジンチオシアネートフェノール法によって抽出した。アデノシン受容体ｍＲＮＡの定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイ（Higuchi et al., Biotehchnology, 11:1026-1030, 1993）を、ABI Prism 7700 Sequence Detection System（Applied Biosystems, Warrington Cheshire, UK）中、遺伝子特異的蛍光標識された TaqMan MGB プローブ（副溝バインダー；minor groove binder）を用いて実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシンサブタイプのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ０００６７４、ＮＭ０００６７５、ＮＭ０００６７６及びＮＭ０００６７７をそれぞれ用いた。更に、アデノシン受容体ｃＤＮＡプラスミド標準品の、少なくとも６オーダーの大きさ（１０−１１〜１０−１６ｇ／μＬ）の範囲に及ぶ曲線が生じた。これらの標準曲線は、Ｃｔ値とプラスミド量の対数との間の直線関係を表している（Gessi et al., Mol. Pharmacol. 67:2137-2147,2005）。アデノシン受容体伝達の定量化を、プラスミド希釈系列から作り出したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った（Kalayoglu and Byrne, Infect. Immun., 66:5067-5072, 1998）。ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ及びＩＬ−８のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ、ＮＭ及びＮＭをそれぞれ用いた。参照遺伝子のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲには、内在性コントロールヒトβ−アクチンキットを用い、そしてプローブはＶＩＣ（登録商標；Applera）で蛍光標識した。
【０２０６】
膜調製
Ｕ９３７細胞及びマクロファージを、それぞれ、低張緩衝液及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で、ポリトロン（Kinematica）を用いて、ホモジナイズして、先の記載（Gessi et al., Mol. Pharmacol., 65:711-719,2004）のように、４８，０００ｘｇで３０分間遠心分離した。タンパク質濃度を、ウシ血清を標準品として用いて、Bio Rad 法（Bradford, Anal. Biochem., 72:248-254, 1976）に従って測定した。
【０２０７】
結合実験
Gessi et al.（Mol. Pharmacol. 65:711-719, 2004）に従って、結合アッセイを実施した。飽和実験において、膜（アッセイ当たりタンパク質７０μｇ）を５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣＬ緩衝液（Ａ２Ａに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２；Ａ２Ｂに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ及び０．１ｍＭのベンズアミジン；そしてＡ３に対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２及び１ｍＭのＥＤＴＡ）、ｐＨ７．４中で培養して、１，３−ジプロピル−８−シクロペンチルキサンチン（［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ）（０．４〜４０ｎＭ）；（４−（２−［７−アミノ−２−（２−フリル）−［１，２，４］トリアゾロ−［２，３２］−［１，３，６］−トリアジニル−アミノ］エチル）−フェノール）（［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５）（０．３〜３０ｎＭ）；Ｎ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル−オキシ］−アセトアミド（［３Ｈ］ＭＲＥ２０２９Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）；５−Ｎ−（４−メトキシフェニル−カルバモイル）アミノ−８−プロピル−２−（２フリル）−ピラゾロ−［４，３ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（［３Ｈ］ＭＲＥ３００８Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）の濃度を上げて、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体をそれぞれ標識化した。フィルターに結合した放射能を、Micro-Scint20 を用いて、Top Count Microplate Scintillation Counter（効率５７％）上に集計した。
【０２０８】
ウェスタンブロット分析
全細胞溶解物を先に記載されている（２７）ようにして調製した。ヒトアデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ（Alpha Diagnostic）及びＡ３受容体（Aviva）に対する特異抗体（１：１０００希釈）を用いてアデノシン受容体を評価した。ＨＩＦの検出を目的とする実験では、５％の脱脂粉乳を含むＰＢＳ／０.１％のツイーン−２０中、４℃で１晩、ＨＩＦ−１αに対する抗体（１：２５０希釈）及びＨＩＦ−１βに対する抗体（１：１０００希釈）を用いてウェスタンブロットアッセイを実施した。ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Pierce, Rockford, IL）を用いて、タンパク質濃度を測定した。等しいタンパク質負荷を保証するために、チューブリン（１：２５０）を用いた。VersaDoc Imaging System (Bio-Rad）を用いて、免疫活性を算定して定量化した。
【０２０９】
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
細胞によって培地中に分泌されたＶＥＧＦ及びＩＬ−８タンパク質の濃度をＶＥＧＦ及びＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット（R & D Systems）を用い、製造会社の説明書に従って測定した。データは、３回の独立した実験から得た平均値±ＳＤとして表した。
【０２１０】
細胞のｓｉＲＮＡによる処理
泡沫細胞を６ウェルプレートに固定して、トランスフェクションの前に、５０〜７０％集密になるまで生育した。ｓｉＲＮＡのトランスフェクションを、RNAiFectTM Transfection Kit（Qiagen）を用い、１００ｎＭの濃度で実施した。非特異的コントロールリボヌクレオチドのセンス鎖（５’−ＡＣＵ ＣＵＡ ＵＣＵ ＧＣＡ ＣＧＣ ＵＧＡ ＣｄＴｄＴ−３’）及びアンチセンス鎖（５’−ｄＴｄＴ ＵＧＡ ＧＡＵ ＡＧＡ ＣＧＵ ＧＣＧ ＡＣＵ Ｇ−３’）を、Merighi et al., （Neoplasia, 7:894-903, 2005）によって既に報告されているのと同一条件下で用いた。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、Ａ３ＡＲ及びＨＩＦ−１αｓｉＲＮＡｓは、Santa Cruz Biotechnology （Santa Cruz, CA）から入手した。
【０２１１】
統計的分析
図中及びテキスト中の全ての値は、Ｎ回観測（Ｎ≧３で）の平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表されている。データセットは分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びダネット検定（必要に応じて）によって検定した。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であると見なした。
【０２１２】
結果
ＰＭＡで処理したＵ９３７、マクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、正常酸素及び低酸素条件下でのアデノシン受容体ｍＲＮＡの発現
正常酸素及び低酸素条件下でのＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、アデノシン受容体ｍＲＮＡの発現を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験によって評価した。
Ａ１サブタイプに関しては、正常酸素及び低酸素の両方で、３つの細胞モデル全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、１．３±０．２、１．１±０．１、１．２±０．１倍、図１Ａ）。
同様に、Ａ２Ａ及びＡ３受容体サブタイプでは、正常酸素及び低酸素の両方で、調べた３つの細胞タイプ全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ａ ０．９±０．１、１．１±０．２、０．９±０．１倍；Ａ３ ０．７±０．１、０．７±０．１、０．８±０．１倍、図１Ｂ及び図１Ｄ）。
Ａ２Ｂ受容体サブタイプの発現では、ヒトマクロファージにおいて最も高いレベルであって、３つの細胞タイプ全てで低酸素によって有意に上昇した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ｂ １．５±０．２、１．８±０．１、１．９±０．１倍、図１Ｃ）。
【０２１３】
アデノシン受容体伝達の評価を、プラスミド希釈系列から作成したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った。アデノシン受容体の発現レベルをβ−アクチンの発現レベルに正規化すると、類似結果が得られた。
【０２１４】
ウェスタンブロッティング及び結合試験の方法による、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞におけるアデノシン受容体タンパク質の発現
正常酸素及び低酸素条件における、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞において、全てのアデノシン受容体サブタイプのタンパク質評価を、ウェスタンブロッティング実験によって、試験した。図２で報告するように、ｍＲＮＡデータに従って調べた３つの細胞タイプ全てにおいて、全てのアデノシン受容体の存在が観察された。
【０２１５】
異なったアデノシンサブタイプのタンパク質の量を定量化するために、結合試験を実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の親和性（ＫＤ、ｎＭ）及び密度（Ｂｍａｘ、タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）値を評価するために、それぞれ、［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ、［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５、［３Ｈ］ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及び［３Ｈ］ＭＲＥ−３００８Ｆ２０拮抗薬放射性リガンドを用いた。
Ａ１受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．０±０．３及び４．４±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が５２±６及び８０±１０タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．８±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が８５±９及び８３±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が３．３±０．５及び３．７±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が７８±１０及び１０２±１２であった（図３Ａ）。
Ａ２Ａ受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．５±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が６２±９及び５７±８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．２±０．３及び２．３±０．３であり、そしてＢｍａｘ値が１０９±１２及び９０±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．１±０．１及び２．２±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が８４±９及び７５±７であった（図３Ｂ）。
Ａ２Ｂ受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．３±０．４及び４．１±０．５であり、そしてＢｍａｘ値が３３±３及び７３±６であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．９±０．３及び４．８±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が１７３±１５及び２４０±１８であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．０±０．２及び１．９８±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が９０±８及び１４０±１２であった（図３Ｃ）。
最後に、Ａ３受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．５±０．１及び２．０±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２３５±２６及び２６７±２８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．５±０．５及び４．８±０．７であり、そしてＢｍａｘ値が２５４±２４及び３６０±３３であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．７±０．１及び２．３±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２５０±３０及び２７５±３２タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった（図３Ｄ）。
【０２１６】
アデノシン受容体は、低酸素においてＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積を誘発する
ＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積に対するａｄｏの作用を評価するために、ＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞を、アデノシン（１００μＭ）と４、８及び２４時間培養した。ＰＭＡ及びｏｘＬＤＬが、正常酸素下においてＨＩＦ−１αを誘発することが単独に明らかにされているので、正常酸素及び低酸素の両方で、経時的実験を実施した。
この実験条件で、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞において、正常酸素条件下で、２４時間後のアデノシンによってほとんど増加しないＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出した（デンシトメトリー分析による評価で１．４倍の増加、図４Ａ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で４時間から現れ始めて、アデノシンによって有意に誘発され、そして２４時間まで安定であった（図４Ｂ）。
ヒトマクロファージにおいて、正常酸素条件下では、ＨＩＦ−１αの存在が観察されなかったのに対して、低酸素条件下ではアデノシン誘発を評価するために４時間の時点が最適であった（それぞれ、図４Ｃ及び４Ｄ）。
最後に、Ｕ９３７由来泡沫細胞では、ｏｘＬＤＬの２つの異なった用量（５０及び１００μｇ／ｍＬ）の存在下での経時的実験を実施した。この場合もやはり、正常酸素条件下で、５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬで処理した後、２４時間目にＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出して、これはアデノシンによる僅かな影響を受けたものであった（図４Ｅ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で、４時間から現れ始めて、アデノシン（１００μｍ）によって増大し、２４時間後にも安定であり、そして５０又は１００μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬを用いて得られたものと類似していた（図４Ｆ及び４Ｇ）。その結果、アデノシンの泡沫細胞へＨＩＦ−１αタンパク質を蓄積する効果を検討するために、５０μｇ／ｍＬの濃度で４時間の低酸素を選択した。
どのアデノシン受容体がアデノシン誘発ＨＩＦ−１αタンパク質に関与していたかを評価するために、低酸素条件下でアデノシンを添加する前に、泡沫細胞はアデノシン受容体の選択的拮抗薬で処理した。図５に示されているように、アデノシンの作用は、それぞれＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体の関与が示唆されている、ＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって部分的に拮抗された。従って、ＨＩＦ−１α蓄積に高い親和性を有する一連の作動薬：シクロヘキシル−アデノシン（ＣＨＡ；１０、１００ｎＭ）、２［ｐ−（カルボキシエチル）−フェネチルアミノ］−ＮＥＣＡ（ＣＧＳ２１６８０；５００、１０００ｎＭ）、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフランヌロンアミド（１０、１００ｎＭ）及びＮ６−（３−ヨードベンジル）−２−クロロアデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド（ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ；１０，１００ｎＭ）の濃度増大効果を評価した。図６に示されているように、全ての作動薬が、泡沫細胞においてＨＩＦ−１αタンパク質を誘導することができた。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞及びヒトマクロファージにおいて、同様の結果が得られた。
【０２１７】
ｓｉＲＮＡ処理によるアデノシン受容体のノックダウン
アデノシン誘発ＨＩＦ−１α蓄積における、異なった受容体サブタイプの関与を更に解明するために、それぞれのアデノシン受容体を、それぞれ、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の一過性サイレンシングを誘導する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を用いてノックダウンした。泡沫細胞を、それぞれのアデノシンサブタイプを標的とするｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。トランスフェクトの４８時間及び７２時間後に、アデノシン受容体ｍＲＮＡ（それぞれ、図７Ａ〜７Ｄ）及びタンパク質のレベルが有意に減少した（それぞれ、図７Ｅ〜７Ｈ）。模擬トランスフェクション及びｓｉＲＮＡによるトランスフェクションの何れも、関連のないｍＲＮＡを標的としておらず、アデノシン受容体発現を阻害した。図７Ｉに示されているように、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３サブタイプに対するｓｉＲＮＡでの低酸素条件下７２時間の細胞処理は、ＨＩＦ−１α調節に対するアデノシンの効力、この効力における全てのアデノシンサブタイプの役割をさらに支援するもの、を低減した。
【０２１８】
転写レベルでのＨＩＦ−１αタンパク質蓄積の制御
アデノシンによるＨＩＦ−１αタンパク質蓄積に関与する分子機構を検討するために、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡ発現に対するヌクレオシドの効力を評価した。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験では、正常酸素条件下でアデノシンによる細胞の処理がＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルに影響を及ぼさないのに対して、低酸素条件下で、処理の４時間後に、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルを、それぞれ、１．６±０．１、１．９±０．１及び１．５±０．１倍に時間依存的に増大させたことを明らかにした。
【０２１９】
アデノシン受容体は低酸素条件下でＶＥＧＦを誘発する
ＶＥＧＦ産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＶＥＧＦレベルを１６５±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体への関与が示唆されているＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって非常に減少して、それ程ではないが、Ａ２Ａ拮抗薬、ＳＣＨ５８２６１によって阻害された（図８）。更に、ＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡによる細胞の処理は、アデノシンが誘発したＶＥＧＦ産生の増大を無効にして、ヌクレオシドがＨＩＦ−１α調節を介して作動していることを示唆した。
【０２２０】
Ａ２Ｂアデノシン受容体は低酸素条件下でＩＬ−８の増大を誘発する
ＩＬ−８産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間及び４８時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＩＬ−８レベルを１５８±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ拮抗薬、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０又はＡ２Ｂサイレンシングによって阻害されたが、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８６２１及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（Ａ２Ｂ受容体に対する選択的な効果が示唆されている）によっては阻害されなかった（図９）。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラ（ン）ヌロンアミドの用量応答曲線は、ＩＬ−８分泌を刺激するＥＣ５０値が５８±６ｎＭであることを明らかにし、Ａ２Ｂ受容体サブタイプのこの応答への関与を示唆した。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬の効力（１μＭ、ＩＬ−８分泌の１４２±８％）がＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０によって完全に阻止された。最後に、アデノシンによって誘発されるＩＬ−８分泌がＨＩＦ−１αタンパク質の増大を介して影響を受けるのか否かを調べるために、アデノシンで刺激する前に、細胞をＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡで処理した。トランスフェクションの７２時間後に、ＩＬ−８分泌はＨＩＦ−１αサイレンシングの影響を受けず、アデノシンによって誘発されるこの効果が、ＨＩＦ−１αに依存していなかったことを示唆した。
【０２２１】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるコレステロール／コレステリルエステルの定量
Ｕ９３７細胞からの泡沫細胞形成を、コレステロール／コレステリルエステルの定量を実施して評価した。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の酸化ＬＤＬへの曝露が、コレステロールの０．１３７から０．２００への、コレステロール＋コレステリルエステル（総コレステロール）の０．２０５から０．４４３への、そしてコレステリルエステルの０．０６８から０．２４３への増大を誘発する。
【０２２２】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるオイルレッドＯ染色
図１０Ａに示されているように、ｏｘＬＤＬを伴わないＵ９３７細胞は、高濃度の中性脂質を含有しておらず、中性脂肪に特異的な染料である、オイルレッドＯで染色されない。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬによる２４時間処理後に、大きい細胞質内脂質液滴を特徴とする泡沫細胞の増大が観察された（図１０Ｂ）。この効果は、アデノシン（１００μＭ）と共に培養した後に増大した（図１０Ｃ）。しかしながら、それに続くアデノシンＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ、図１０Ｄ）及びＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ、図１１Ｃ）による処理が泡沫細胞の形成を阻止した。
【０２２３】
同様に、図１２Ｄに示されているように、Ｕ９３７由来泡沫細胞のアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｈ２０（１００ｎＭ）による処理も泡沫細胞の形成を阻止した。
【０２２４】
要するに、これらのデータは、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体の活性化が、泡沫細胞の形成及びプラークの血管形成及び発症をもたらす低酸素条件下でのＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発すること、及びＡ２Ｂ受容体サブタイプもＩＬ-８蓄積に関与していることを明らかにしている。従って、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体拮抗薬、又はＡ２Ｂ／Ａ３二重拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの形成及び進展を阻止するために用いることができる。
【図１−１】
【図１−２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩を、単独で又はその他の抗アテローム性動脈硬化症薬と組合わせて、その治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによるアテローム性動脈硬化症を予防及び治療するためのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
心血管疾患は、特に米国及び西欧諸国において、罹患率及び死亡率の主因である。心血管疾患で最も高頻度に見られる、アテローム性動脈硬化症は、心臓発作、脳卒中及び血管循環問題の本質的原因である。アテローム性動脈硬化症は、多くの細胞型、生化学的事象及び分子的因子に関連している複雑な疾患である。病気に対する遺伝的素因、性別、喫煙及びダイエットのような生活習慣、年齢、高血圧、及び高コレステロール血症を含む高脂血症を含む、幾つかの原因因子が、心血管疾患の発症に関係している。これらの因子の幾つか、特に高脂血症及び高コレステロール血症（高血中コレステロール濃度）がアテローム性動脈硬化症に関連する重要な危険因子をもたらしている。
【０００３】
コレステロールは、カイロミクロンとして一般に知られている、リポタンパク質粒子、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬｓ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬｓ）、及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬｓ）内に遊離及びエステル化したコレステロールとして、血中に存在している。血中総コレステロールの濃度は、（１）消化管からのコレステロールの吸収、（２）炭水化物、タンパク質、脂肪及びエタノールのような食品成分からのコレステロールの合成、及び（３）組織、特に肝臓による血液からのコレステロールの除去、及びそれに続くコレステロールの胆汁酸、ステロイドホルモン、及び胆汁性コレステロールへの変換、による影響を受ける。コレステロールの蓄積による、マクロファージ泡沫細胞の形成が、アテローム性動脈硬化症の発症における重要な事象である。
【０００４】
血中コレステロール濃度の維持は、遺伝因子及び環境因子の両方による影響を受ける。遺伝因子は、コレステロール生合成における律速酵素の濃度、肝臓における低密度リポタンパク質の受容体の濃度、コレステロールを胆汁酸へ変換する律速酵素の濃度、リポタンパク質を合成及び分泌する速度、及びヒトの性別を包含する。ヒトにおける血中コレステロール濃度の止血に影響する環境因子は、食事構成、喫煙率、身体的活動、各種医薬品の使用を包含する。食事変数は、脂肪（飽和及び多価不飽和脂肪酸）の量及び種類、コレステロールの量、繊維の量及び種類、及び多分、ビタミンＣ及びＤのようなビタミン並びにカルシウムのようなミネラルの量を包含する。
【０００５】
臨床研究によって、高い血漿ＬＤＬ濃度が、加速されたアテローム発生、すなわち、アテローム性動脈硬化症の形成と関連しているということが確証されている。
【０００６】
一方、高血圧が、脳卒中、心臓発作、心不全及び不整脈のような心血管疾患の主な原因であるということがよく認識されている。高血圧は、体中を循環する血管内の血液の圧力が正常より高い状態（疾患）である。長時間にわたって収縮期圧が１５０ｍｍＨｇより高い或いは拡張期圧が９０ｍｍＨｇを上回るときは、身体に損傷を受ける。例えば、過度な収縮期圧は何れかの血管を破裂させる可能性があり、脳内でそれが起こると、脳卒中をもたらす。高血圧は、最終的にアテローム性動脈硬化症をもたらす、血管の肥厚及び狭窄も引き起こす。
【０００７】
しかしながら、高血圧を減少させても、冠動脈疾患の罹病率及び死亡率に期待したより低い影響を与える。考えられる１つの理由は、抗−高血圧薬の異なった抗−動脈硬化能力である。高血圧の減少は、それ自体、抗−動脈硬化作用を有しているが、ある抗−高血圧薬については、血圧低下を凌駕する抗−動脈硬化特性が実験的及び臨床的に証拠付けられている。例えば、カルシウム拮抗薬については、大動脈脂質沈着の縮小及び動脈増殖の減少を報告する、実験データが発表されている。
【０００８】
アデノシンは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３に分類される４つの細胞膜受容体の活性化を介して多数の生理学的機能を発揮する。ごく最近発見されたサブタイプである、Ａ３サブタイプは、重要な薬理学的特性化の対象となっている。全てのアデノシンサブクラスがＧ−タンパク質結合受容体に属しているが、これらは異なったセカンドメッセンジャー系に関連している。Ａ３サブタイプは、特有のセカンドメッセンジャープロファイルを有していると考えられていて、アデニルサイクラーゼ阻害及びホスホリパーゼＣの活性化を介在することが示されている。
【０００９】
アデノシンＡ３受容体は、脳虚血、炎症、高血圧、虚血心プレコンディショニング及び喘息の調節に関与すると考えられている。このことがＡ３受容体を魅力ある新規な治療標的としている。例えば、Ａ３受容体に対する選択的拮抗薬が、脳における抗炎症及び抗虚血の薬として使用することが提案されている。更に、Ａ３拮抗薬が、抗−血管新生（癌）、抗−喘息、抗鬱、抗−不整脈、腎臓保護、及び抗−パキンソン病薬、並びに認識促進薬として開発されている。
【発明の概要】
【００１０】
驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、アデノシンＡ３拮抗薬の抗−高血圧効果とは無関係に、アテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進行を阻害又は遅延することにより、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療に用いることができるということをこの度見出した。従って、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、脳卒中及び心臓発作の予防にも用いることができる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができる。
【００１１】
従って、本発明は、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、単独で又はその他の治療薬剤と組合わせて、哺乳動物に投与することを含有している。
【００１２】
本発明の方法で用いられるアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、これに限定されないが、式
【００１３】
【化１】
【００１４】
（式中の、Ａ、Ｒ２及びＲ３は、本明細書の発明の詳細な説明に記載されているような意味を有している）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
【００１５】
本発明のその他の目的、特徴、利点及び態様は、以下の記載及び添付されている特許請求の範囲から当業者には明らかになるだろう。しかしながら、以下の記載、添付されている特許請求の範囲、及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施態様を示しているとはいえ、説明することだけを目的として示されていることを理解されたい。開示される発明の精神及び範囲内の多様な変更及び修正は、以下の記載から当業者には容易に明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ及び１Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現をそれぞれ示す。アデノシンＡ２Ｂ受容体の発現レベルを、各試料における内部標準（βアクチン）の発現レベルに対して正規化している。
【図２】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ及び２Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の発現のウェスタンブロット分析をそれぞれ示す。細胞抽出物を調製して、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３抗体を用いるイムノブロットアッセイに付した。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。
【図３】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ及び３Ｄは、結合試験によって評価した、ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のＢｍａｘ（タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）をそれぞれ示す。値は平均値であって、縦軸は、それぞれ３回実施した４つの独立した実験の平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を表す。
【図４】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ及び４Ｇは、正常酸素（Ｎ）条件下（それぞれ、図４Ａ、４Ｃ及び４Ｅ）及び低酸素（Ｈ）条件下（図４Ｂ、４Ｄ、４Ｆ及び４Ｇ）での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）におけるＨＩＦ−１αに対する１００μＭアデノシンの効果を示す。Ｕ９３７細胞を、５０及び１００μｇのｏｘＬＤＬで処理した（図４Ｅ、４Ｇ及び４Ｆ）。ＨＩＦ−１βは）タンパク質の等負荷を示す。ＨＩＦ−１αのウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図５】図５は、ＨＩＦ−１αの蓄積及び１００ｎＭのＭＲＥ−３００８Ｆ２０、ＳＣＨ５８２６１、ＤＰＣＰＸ及びＭＲＥ−２０２９Ｆ２０による拮抗作用に対するアデノシン（１００ｎＭ）の効果を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）である。
【図６】図６は、アデノシン受容体作動薬の非存在下（カラム１）、及び存在下：１０及び１００ｎＭのＣＨＡ（カラム２、３）；５００及び１０００ｎＭのＣＧＳ２１６８０（カラム４、５）；１０及び１００ｎＭの１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラヌロンアミド（カラム６、７）；１０及び１００ｎＭのＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（カラム８、９）：におけるＨＩＦ−１αの蓄積を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図７】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、７Ｈ及び７Ｉは、泡沫細胞（ＦＣ）におけるｓｉＲＮＡトランスフェクションによるアデノシン受容体サイレンシングを示す。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる、βアクチンｍＲＮＡに関連している、アデノシン受容体ｍＲＮＡの相対的定量化。泡沫細胞を、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｍＲＮＡでトランスフェクトして（それぞれ、図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ及び７Ｄ）、２４時間、４８時間及び７２時間培養した。プロットは平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり、対照と比較して（０時点）＊Ｐ＜０．０１。それぞれのアデノシン受容体サブタイプのｓｉＲＮＡで処理して２４、４８及び７２時間培養した泡沫細胞由来のタンパク質抽出物の、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体ポリクローナル抗体を用いるウェスタンブロット分析（それぞれ、図７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ及び７Ｈ）。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。図７Ｉは、ｓｉＲＮＡの非存在下（カラム２）、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ又はＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの存在下（それぞれ、カラム３、４、５、６）、並びにＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの同時存在下（ｓｉＡｄｏＲｓ）（カラム７）における、ＨＩＦ−α調節に対するアデノシンの効果を示す。ウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均値±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照（カラム１）（７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ＶＥＧＦ分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図９】図９は、ＩＬ-８分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均値の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図１０】図１０Ａ，１０Ｂ、１０Ｃ及び１０Ｄは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１０Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１０Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１０Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１０Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【図１１】図１１Ａ、１０Ｂ及び１０Ｃは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１１Ａ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１１Ｂ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１１Ｃは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ）の効果を示す。
【図１２】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ及び１２Ｄは、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１２Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１２Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１２Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１２Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書の上で述べたように、マクロファージ泡沫細胞形成は、アテローム性動脈硬化性病変及びプラークの進行における重要な過程である。アテローム性動脈硬化症は、動脈の壁にある損傷易発性部位の内皮細胞の機能障害によって始まって、動脈内膜への単球の侵入をもたらす。次いで、これらの細胞は、徐々にコレステロールを負荷した大きい「泡沫細胞」に変化する、大量の酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）を取り込むマクロファージに分化する。顕微鏡下では、この時点で、動脈壁中の脂肪線条として病変が現れる。アテローム性動脈硬化性病変の進行によって、動脈壁の厚さが増大して内膜への酸素伝播が著しく減少する。これらの低酸素領域は、これらの細胞がアテローム性動脈硬化性病変及びプラークが発症している間は低酸素に見舞われることを露呈する大量の泡沫細胞を含有している。実際、動脈壁における酸素の需要と供給のアンバランスがアテローム性動脈硬化性病変の進行に対する重要な因子であると示唆されている（Bjornheden et al., Arterioscler. Thromb. Vasc., 19:870-876, 1999）。
【００１８】
低酸素に対する細胞応答に関与している最も重要な因子である、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）は、誘導発現されるＨＩＦ−１αサブユニット及び恒常的に発現されるＨＩＦ−１βサブユニットからなるヘテロ二量体転写因子である（Semenza et al., Trends Mol. Med., 7:345-350,2001）。ｏｘＬＤＬが低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）のヒトＭｏｎｏ−Ｍａｃ−６マクロファージ内への蓄積を誘発することが報告されていて、ＨＩＦ−１がアテローム性動脈硬化症に関与していることを示唆している。ＨＩＦ−１が血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現及び血管形成に重要な役割を果たしているということは、ＶＥＧＦがマクロファージのアテローム発生及び血管形成活性に関連する重要な変更を介在するという認識によって確立されている。最近の研究結果では、アテローム性動脈硬化性プラーク内の新血管形成が進行したアテローム性動脈硬化症／再狭窄の兆候であることを示唆している（Shatrov et al., Blood, 101:4847-4849, 2003）。更に、アテローム性動脈硬化状態ではマクロファージにおけるＨＩＦ−１の高発現が泡沫細胞形成及びアテローム性動脈硬化症を促進することが報告されている（Jiang et al., Eur. J. Pharmacol., 562:183-190, 2007）。
【００１９】
ヒトのアテローム性動脈硬化組織から単離された泡沫細胞は、その他の強力な血管形成剤、インターロイキン−８（ＣＸＣＬ−８、ＩＬ−８）のレベルの上昇を示す。最近、ＣＸＣＬ８が、ウサギ及びヒト動脈硬化性プラーク内の低酸素領域中で見つけられた泡沫細胞によって上方制御されることが示されている。泡沫細胞からのＣＸＣＬ８の低酸素誘発分泌が、平滑筋、血管内皮及びＴ細胞のアテローム性動脈硬化性プラーク内への動員、それによるプラークの進行を引き起こすだろうということが報告されている。アテローム性動脈硬化症及び癌の全てのステージにおいて、新血管形成が組織病理学の主要特性である。
【００２０】
プリンヌクレオシドである、アデノシンは、特にエネルギーの供給が細胞エネルギーの需要量を満たさないとき、組織機能の主要な局所調節因子として合意の上に同定されているので、１９８０年代には、報復的代謝物と評価されていた（Newby A.C., Trends Biol. Sci., 9:42-44, 1984）。低酸素、虚血、炎症及び損傷の間は、アデノシン濃度が非常に高濃度に達すると考えられる。このような条件下で、アデノシンは細胞外空間に放出されて、細胞外Ｇ−タンパク質の活性化を介して、アデノシン受容体、すなわち、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体サブタイプ、を結合するように伝達する。Ａ３受容体の活性化を介して、アデノシンが、ある特定の癌細胞株において、低酸素条件下でＨＩＦ−１αの蓄積を誘発して、引き続きＶＥＧＦ濃度を増大することが報告され、癌性血管形成におけるアデノシンの強力な役割を示唆している（Merighi et al., Biochem. Pharmacol., 72:19-31, 2006; Merighi et al., Mol. Pharmacol., 72:395-406, 2007）。更に、イヌのマクロファージにおいて、アデノシンＡ２Ａ受容体サブタイプの活性化がＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発するのに対して、単球中で増大した濃度のＶＥＧＦがＡ１受容体の活性化と関連していることが、最近報告されている（De Ponti et al., J. Leukoc. Biol., 82:392-402, 2007; Ramanathan et al., Molecular Biology of the Cell, 18:14-23, 2007）。
【００２１】
驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体がマクロファージの泡沫細胞への低酸素誘導形質転換を促進することがこの度見出された。更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が泡沫細胞の形成を阻害するために使用できるということが見出された。従って、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、動脈硬化性プラーク蓄積の進行を抑えて遅延させることによってアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するために使用できる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が動脈硬化性プラークの退縮のために使用できることが明らかにされている。
【００２２】
従って、本発明は、泡沫細胞形成を阻害する方法、それによりアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、この方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を投与することを含有している。
【００２３】
更に本発明は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬を、（１）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬と組み合わせて含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用治療を提供する。
【００２４】
言い換えれば、本発明はアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び：
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；
又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：
よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬の組み合わせの治療有効量を投与することを含有している。
【００２５】
以下に記載されているものは、本発明のある特定の態様を述べるために本明細書で用いられている多様な用語のいくつかの定義である。しかしながら、本明細書で用いられている定義は、当該技術分野で一般に知られているようなもので、特定の場合にこれらが別段に限定されていない限り、これらは明細書を通して用いられる。
【００２６】
用語「予防」は、本明細書の上で述べられている疾患の発症を予防するために健康な患者に予防的に投与することを示す。
【００２７】
用語「治療」は、病気、疾患又は障害、例えばアテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進展と闘うことを目的とする患者の管理及びケアと理解される。
【００２８】
用語「治療有効量」は、研究者又は医者が求める組織、系又は動物（ヒトを含む）の目的とする生物学的又は医学的応答を引き起こすであろう薬物又は治療薬の量を示す。
【００２９】
用語「哺乳動物又は患者」は、本明細書では互換的に用いられて、これに限定されないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ、サル、ウサギ、マウス及び実験動物を包含する。好ましい哺乳動物はヒトである。
【００３０】
用語「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野で周知の方法に従って製造できる、製薬業界で通常用いられている非毒性の塩を示す。本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、酸で形成される塩、すなわち、鉱酸、有機カルボン酸及び有機スルホン酸、例えばそれぞれに塩酸、マレイン酸及びメタンスルホン酸のような酸付加塩を示す。同様に、本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、塩基で形成される塩、すなわち、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩、更にアンモニウム塩、例えばアンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム及びトリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム塩及び酸性基が構造の一部を構成する場合に、アミノ酸との塩のようなカチオン性の塩を示す。
【００３１】
用語、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、本明細書の上で言及されているその他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩、との「併用」は、その成分を、１つの医薬組成物として、又はその１部として、単一剤形で一緒に投与できることを意味する。併用は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び本明細書の上で言及されているその他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩を、それぞれ別々にしかし同一投与計画の１部として投与することも包含する。別々に投与する場合に、それが好ましくそれが可能であっても、成分を実質的に同時に投与する必要はない。従って、併用は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩と、その他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩とを、異なった調剤又は剤形として、しかし同時に投与することも示す。併用は、異なった時点であらゆる順序で別々に投与することも包含する。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「アルキル」は、好ましくは１〜２０個の炭素原子、より好ましくは１〜１０個の炭素原子（「低級アルキル」）そして最も好ましくは１〜６個の炭素原子を有する１価の直鎖又は分枝鎖の飽和炭化水素基を示す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ヘキシル等のような基で例示される。
用語「アルキレン」及び「低級アルキレン」は、対応するアルカンの２価の基を示す。更に、本明細書で用いられる、アルコキシ、アルカノイル、アルケニルその他のような、アルカンに由来する名称を有するその他の残基は、「低級」で修飾される場合、１０個以下の炭素原子の炭素鎖を有する。炭素の最小数が１より大きい、例えばアルケニル（２個の炭素が最小）のような場合は、「低級」が、少なくとも炭素の最小数を意味すると理解できる。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「置換アルキル」は、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオケト、カルボキシ、カルボキシアルキル、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、並びにモノ−及びジアルキルアミノ、モノ−及びジアリールアミノ、モノ−及びジヘテロアリールアミノ、モノ−及びジヘテロシクリルアミノ、並びに非対称ジ置換アミノ基よりなる群から選ばれる、１〜５個の置換基、そして好ましくは１〜３個の置換基を有している、アルキル基、好ましくは１〜１０炭素原子のもの（「置換低級アルキル」）を示す。本明細書で用いられる、接頭辞「置換」を有するその他の残基は、１つ又はそれ以上の上記置換基を包含するように意図されている。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、単一の環状リング又は複数の縮合環を有している３〜１２個の炭素原子の環状アルキル基を示す。このようなシクロアルキル基は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等のような単一環構造、又はアダマンチル等のような多環構造を包含する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「アラルキル」は、アリール置換を有するアルキル基を示す。結合はアルキル基を介する。アラルキル基の例は、ベンジル及びフェネチルを包含する。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「アルケニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つの二重結合を有している、不飽和で、直鎖又は分枝鎖の炭化水素基を示す。好ましいアルケニル基は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｉ−プロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）等を包含する。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「アルキニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つの三重結合を有している、不飽和で、直鎖又は分枝鎖の炭化水素基を示す。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「アルコキシ」は、基「アルキル−Ｏ−」を示し、ここでアルキルは上で定義されているようなものである。好ましいアルコキシ基は、例示すると、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、１，２−ジメチルブトキシな等を包含する。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「アルキルチオ」は、基「アルキル−Ｓ−］を示し、ここでアルキルは上で定義されているようなものである。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「アシル」は、基アルキル−Ｃ（Ｏ）−（アルカノイル）、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、を示し、ここでアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「アミノアシル」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”を示し、ここでＲ’及びＲ”は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「アシルアミノ」は、基Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ”を示し、ここでＲ’及びＲ”は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「アシルオキシ」は、基Ｒ’−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を示し、それぞれのＲ’はアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合（condensed、fused）環（例えば、ナフチル又はアントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を示す。好ましいアリールは、フェニル、ナフチル等を包含する。特に別段のアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなアリール基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、及びアシルアミノを包含する。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを示して、フルオロ又はクロロの何れかが好ましい。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」は、１〜１５個の炭素原子、及び１つより多い環がある場合、少なくとも１つの環内に酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる、１〜４個のヘテロ原子を有する、芳香族複素環を示す。
【００４７】
特に別段のヘテロアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなヘテロアリール基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、及びアシルアミノを包含する。このようなヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジル又はフリル）又は多縮合環（例えば、インドリジニル又はベンゾチエニル）を有することができる。
【００４８】
「複素環」又は「ヘテロシクリル」は、単環又は多縮合環、１〜１５個の炭素原子、及び１つより多い環がある場合、少なくとも１つの環内に酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子、を有する１価の飽和又は不飽和複素環基を示す。
【００４９】
特に別段の複素環基の定義に制約されない限り、このような複素環基は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、例えば、トリハロメチル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、例えば、ジハロメチル、ヘテロアリール、チオール、アルキルチオ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、カルボキシ、アシルアミノ等よりなる群から選ばれる１〜５個の置換基好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。このような複素環基は単環又は多縮合環を有することができる。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「ヘテロシクロオキシ」は、酸素架橋を介して結合する複素環基を示す。
【００５１】
１つ又はそれ以上の置換基を含有している上記のあらゆる基に関して、そのような基が、立体的に非現実的でそして／又は合成的に実施不可能である置換又は置換パターンを何れも含んでいないことは、もちろん、理解される。
【００５２】
本発明が適用する適切なアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、ＭＲＳ１１９１、ＭＲＳ１２２０、ＭＲＳ１３３４、ＭＲＳ１５２３、ＭＲＳ３７７７ヘミシュウ酸塩、ＶＵＦ５５７４、ＰＳＢ１０塩酸塩、ＰＳＢ１１塩酸塩及びリバーシン（Sigma-Aldrich 及び／又は Tocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，３５８，９６４号、米国特許第６，６２０，８２５号、米国特許第６，６７３，８０２号、米国特許第６，６８６，３６６号、米国特許第６，９２１，８２５号、米国特許第７，０６４，２０４号、米国特許第７，３７１，７３７号；及び米国特許出願公開第２００６０１７３８５号（これらの全内容は参照により本明細書に取り込まれている）に記載されているようなものを包含する。更なるアデノシン受容体拮抗薬は、Jacobson et al., Neuropharmacology, 36: 1157-1165, 1997; Yao et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 232: 317-322, 1997; Kim et al., J. Med. Chem., 39(21): 4142-4148, 1996; van Rhee et al., Drug Devel. Res., 37: 131, 1996; van Rhee et al., J. Med. Chem., 39: 2980-2989, 1996; Siquidi et al., Nucleosides, Nucleotides 15: 693-718, 1996; van Rhee et al., J. Med. Chem., 39: 398-406, 1996; Jacobson et al., Drugs of the Future, 20: 689-699, 1995; Jacobson et al., J. Med. Chem., 38: 1720-1735, 1995; Karton et al., J. Med. Chem., 39: 2293-2301, 1996; Kohno et al., Blood, 88: 3569-3574, 1996; Jiang et al., J. Med. Chem., 39: 4667-4675, 1996; Yao et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 232: 317-322, 1997; 及びJiang et al., J. Med. Chem. 40: 2596-2608, 1996 に見出すことができる。
【００５３】
随意に、本発明の方法で用いられるアデノシンＡ３拮抗薬は、その他のアデノシン受容体サブタイプ、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【００５４】
一態様では、本発明は、米国特許第６，９２１，８２５号に開示されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【００５５】
より詳細には、本発明は式（Ｉ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を用いて、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【００５６】
【化２】
【００５７】
式中の、Ａはイミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールである。
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯ ｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２である。
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであって、ここでそれぞれのＲ１は同一又は異なるか、或いは窒素原子と結合している場合は、窒素原子と一緒になって、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ，及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の更なるヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成する。
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールである。
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１である。そして
ｂは、１又は２である。
【００５８】
好ましくは、Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロシクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ及びアシルアミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリール；アリール部分が上記のアリール基について示されている１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔの基（ここで、ＨｅｔはＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、ｍは０又は１〜５の整数である）であって；それぞれのＲ１は同一でも異なってもよい。
【００５９】
より好ましくは、Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＣ６〜Ｃ１０アリール若しくはＣ７〜Ｃ１０アラルキルであって、いずれの場合も、アリール基は、アリールについて本明細書の上に示されているように置換されていてもよく；そしてそれぞれのＲ１は同一でも異なってもよい。
【００６０】
特に好ましい化合物は、Ｒ１が水素；５〜６員のヘテロアリール又はフェニル基（いずれの場合も、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよく、それぞれのＲ１は同一でも異なってもよい）であるようなものである。
【００６１】
好ましいＣ１〜Ｃ８アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びイソペンチルである。好ましいＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを包含する。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基で置換されている好ましいＣ１〜Ｃ５アルキル基の例は、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル、及び２−シクロペンチルエチルを包含する。好ましい置換Ｃ１〜Ｃ５アルキル基の例も、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、３−アミノプロピル、２−（４−メチル−１−ピペラジン）エチル、２−（４−モルホリニル）エチル、２−アミノカルボニルエチル、２−ジメチルアミノエチル、及び３−ジメチルアミノプロピルを包含する。
【００６２】
アリールは、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ及びジ（低級アルキル）アミノ基から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニルが好ましい。
【００６３】
Ｎ、Ｏ及び／又はＳを含有している５〜６員の複素環基の好ましい例は、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、チアゾリル、及びテトラゾリルを包含する。
【００６４】
Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルの好ましい例は、それぞれのフェニル基がＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル及びジフルオロメトキシから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、ベンジル又はフェネチルを包含する。
【００６５】
Ｒ2が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルであることが好ましい。
【００６６】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであることが好ましい。
【００６７】
ＸがＯであり、Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ２〜Ｃ３アルキルであり、そしてＲ３がフリルであることが好ましい。
【００６８】
Ａの可能な態様は以下の構造式で示すことができる。
【００６９】
【化３】
【００７０】
本発明の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒ２が水素、アルキル、アルケニル及びアリールよりなる群から選ばれる、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７１】
本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがイミダゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７２】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがピラゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。より詳細には、Ａが次式のピラゾール環を示し、或いはこれらの薬学的に許容される塩である。
【００７３】
【化４】
【００７４】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ａがチアゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７５】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒが−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル（ここで、それぞれのＲ１は同一でも異なっていてもよい）であるか；又は窒素原子と結合する場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環又は、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成し；ＸはＯである）を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７６】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、Ｒが−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、Ｒ１は互いに異なり、一方は水素である）を示し；Ａが下記の式のピラゾール環を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７７】
【化５】
【００７８】
更に本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＩ）：
【００７９】
【化６】
【００８０】
（式中の、Ｒ２は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アラルキル、置換アラルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール又はアリールであり；
Ｒ３はフランであり；
Ｒ４は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルである）：
を有する、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００８１】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物の非限定的な例は、本明細書の以下に挙げられているもの及び表１に記載されているものを包含する。
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
【００８２】
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
Ｎ−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素；
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］尿素
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル］尿素
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−｛４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］フェニル｝尿素；及び
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素：
又はこれらの薬学的に許容される塩。
【００８３】
【表１】
【００８４】
特に以下よりなる群から選ばれる、式（ＩＩ）の化合物が好ましい。
【００８５】
【化７】
【００８６】
、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０としても知られている、５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン、又はその薬学的に許容される塩；
【００８７】
【化８】
【００８８】
、Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素、又はその薬学的に許容される塩、特にその塩酸塩；
【００８９】
【化９】
【００９０】
、Ｎ−１−（４−ジメチルアミノフェニル）−Ｎ’−Ｓ−［８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン］尿素、又はその薬学的に許容される塩；及び
【００９１】
【化１０】
【００９２】
、Ｎ−１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−Ｎ’−５−［８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン］尿素、又はその薬学的に許容される塩。
【００９３】
別の態様では、本発明は、米国特許第６，３５８，９６４号に開示されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【００９４】
より詳細には、本発明は、次の式（ＩＩＩ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を使用して、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【００９５】
【化１１】
【００９６】
式中の、Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２である。
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、又はヘテロシクリルである（ここでそれぞれのＲ１は、同一であっても異なっていてもよいか、又は窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳから選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成する。
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールである。
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリーリオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、チオアルキル、置換チオアルキル、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１である。
ｂは、１又は２である。
【００９７】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリール；アリール部分が、アリール基について上で指摘されている１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ７〜Ｃ１０アラルキル；式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、ＨｅｔはＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、そしてｍは０又は１〜５の整数である）の基；であり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、ことが好ましい。
【００９８】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロアリール；又はいずれの場合も、アリールについて本明細書の上で指摘されているように置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール或いはＣ７〜Ｃ１０アラルキルであり；そしてそれぞれのＲ１が同一でも異なっていてもよい、ことがより好ましい。
【００９９】
特に好ましい式（ＩＩＩ）の化合物は、Ｒ１が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、又はジ（低級アルキル）アミノ基よりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール、又はフェニル基であって、それぞれのＲ１が同一でも異なっていてもよい化合物である。
【０１００】
式（ＩＩＩ）の化合物については、好ましいＣ１〜Ｃ８アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びイソペンチルである。好ましいＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを包含する。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル基の好ましい例は、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル及び２-シクロペンチルエチルを包含する。好ましい置換Ｃ１〜Ｃ５アルキル基の例は、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、３−アミノプロピル、２−（４−メチル−１−ピペラジン）エチル、２−（４−モルホリニル）エチル、２−アミノカルボニルエチル、２−ジメチルアミノエチル、及び３−ジメチルアミノプロピルも包含する。
【０１０１】
式（ＩＩＩ）の化合物については、アリールは、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ及びジ（低級アルキル）アミノ基から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい、フェニルが好ましい。
【０１０２】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｎ、Ｏ及び／又はＳを含有している５〜６員環の複素環基の好ましい例は、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、トリアゾリル、及びテトラゾリルを包含する。
【０１０３】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル基の好ましい例は、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、及びジフルオロメトキシから選ばれる１つ又はそれ以上のの置換基で置換されていてもよい、ベンジル又はフェネチルを含んでいる。
【０１０４】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ２が、ハロゲン、好ましくはクロロ、Ｃ２〜Ｃ３アルキル、又は置換Ｃ２〜Ｃ３アルキルであることが好ましい。
【０１０５】
式（ＩＩＩ）の化合物については、Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルキルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであることが好ましい。
【０１０６】
式（ＩＩＩ）の化合物については、ＸがＯであり、Ｒ２がクロロであり、そしてＲ３がフランであることが好ましい。
【０１０７】
本発明の特定の実施態様では、Ｒが−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（ここで、ＸはＯである）を示す、式（ＩＩＩ）の化合物の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによって、本発明の方法が実施される。
【０１０８】
式（ＩＩＩ）の化合物の非制限的な例は、以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；及び
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン
【０１０９】
更に別の態様では、本発明は、米国特許出願公開第２００６０１７８３８５号に記載されているアデノシンＡ３受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【０１１０】
より詳細には、本発明は、次の式（ＩＶ）のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を使用して、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【０１１１】
【化１２】
【０１１２】
式中の、ＸはＣＨ又はＮである。
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールである。
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルである。
Ｒ４は、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである。そして
点線の一方は二重結合を示し、そして他方は一重結合を示す。
【０１１３】
式（ＩＶ）の化合物については、Ｒ４が、水素、アルキル又は置換アルキルであることが好ましく、Ｒ４が水素であることがより好ましい。
好ましい実施態様では、Ｒ３がアルキル、より好ましくはメチル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくは置換フェニル、より好ましくは４−置換フェニル、更により好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ１がアラルキルで、Ｒ２がアルキルであり、更により好ましくは、Ｒ２がｎ−プロピルである。
【０１１４】
本発明の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＶａ）を有する式（ＩＶ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１１５】
【化１３】
【０１１６】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、式（ＩＶ）の化合物について上で述べた通りである。
【０１１７】
式（ＩＶａ）の化合物については、Ｒ４が、水素、アルキル又は置換アルキルであることが好ましく、Ｒ４が水素であることがより好ましい。
好ましい実施態様では、Ｒ３は、アルキル、より好ましくはメチル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくは置換フェニル、より好ましくは４−置換フェニル、更により好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施多様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ２が、アルキル、更により好ましくは、プロピルであり、そしてＲ１が、アラルキル、より好ましくはベンジルである。
【０１１８】
本発明の別の特定な実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＶｂ）を有する式（ＩＶ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１１９】
【化１４】
【０１２０】
式中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、式（ＩＶ）の化合物について上で述べた通りである。
【０１２１】
式（ＩＶｂ）の化合物については、好ましくはＲ４が、水素、アルキル又は置換アルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ３は、アルキル、置換アルキル、アリール、より好ましくはフェニル、置換アリール、好ましくはフェニル、より好ましくは４−置換フェニル、さらにより好ましくは４−フルオロフェニル、又はアラルキルである。
好ましい実施態様では、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル又はアラルキルである。より好ましくは、Ｒ１がアルキル、さらにより好ましくはプロピルであり、そしてＲ２がアラルキル、より好ましくはベンジルである。
【０１２２】
式（ＩＶａ）及び（ＩＶｂ）の化合物の非制限的な例は本明細書の以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−メトキシフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（ビフェニル−４−イル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−フルオロフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−フェニル−１，３−ジプロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジイソブチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジメチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（ビフェニル−４−イル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−クロロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−ブロモフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−イソプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−ｔ−ブチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロヘキシル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−６−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；及び
１，３，７−トリメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン。
【０１２３】
式（ＩＶａ）を有する式（ＩＶ）の化合物が好ましく、特に式（ＩＶｃ）：
【０１２４】
【化１５】
【０１２５】
を有する化合物、すなわち、１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン、又はその薬学的に許容される塩が好ましい。
【０１２６】
さらに、本発明の別の特定な実施態様では、本発明の方法は、式（Ｖ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施する。
【０１２７】
【化１６】
【０１２８】
式中の、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールである。
Ｒ７は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、又は置換アラルキルである。そして
Ｒ８は、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである。
【０１２９】
式（Ｖ）の化合物の非制限的な例は本明細書中以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
８−ベンジル−１−メチル−３−フェニル−６−プロピル−１，４−ジヒドロ−８Ｈ−１，２，４ａ，６，８，９−ヘキサアザ−フルオレン−５，７−ジオン；及び
８−ベンジル−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−フェニル−６−プロピル−１，４−ジヒドロ−８Ｈ−１，２，４ａ，６，８，９−ヘキサアザ−フルオレン−５，７−ジオン。
【０１３０】
本明細書の上で述べたように、本発明は更に、（１）ＡＣＥ阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び （１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤と組み合わせた、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用療法を提供する。
【０１３１】
本明細書で上述したように、本発明の併用療法で用いられるアデノシンＡ３受容体拮抗薬は、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して随意に拮抗薬活性を示してもよい。
【０１３２】
レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）の阻害薬は、例えば、N. Eng. J. Med., 316:1429-1435, 1987 に記載されているように、血圧を下げて、高血圧及び鬱血性心不全に有益に作用する、周知の薬剤である。天然の酵素レニンは腎臓から放出されて循環血液中でアンジオテンシノゲンを開裂してデカペプチドのアンジオテンシンＩを形成する。これは肺、腎臓及びその他の臓器内で、順にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって開裂してオクタペプチドのアンジオテンシンＩＩを形成する。このオクタペプチドは、動脈血管収縮により直接的に、そしてナトリウムイオン関連ホルモンアルドステロンを副腎から放出することにより間接的に、血圧を増大させ、細胞外液量の増大が同時に起こる。レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成の減少をもたらす。その結果、より少量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度が、レニン阻害剤の抗高血圧作用の直接要因である。
【０１３３】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、アンジオテンシンＩＩ受容体のＡＴ１−受容体サブタイプと結合するが、受容体を活性化しないような活性薬剤であると理解されている。ＡＴ１受容体を阻害することによって、これらの拮抗薬を、例えば抗高血圧剤として、用いることができる。
【０１３４】
本発明の併用に用いることができる適切なアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、異なった構造特性を有する、好ましくは非ペプチド構造を有するもののようなＡＴ１受容体拮抗薬を包含する。例えば、バルサルタン（valsartan；米国特許第５，３９９，５７８号；ヨーロッパ特許第４４３９８３号）、ロサルタン（losartan；米国特許第５，１３８．０６９号；ヨーロッパ特許第２５３３１０号）、カンデサルタン（candesartan；米国特許第５，７０３，１１０号；米国特許第５，１９６，４４４号；ヨーロッパ特許第４５９１３６号）、エプロサルタン（eprosartan；米国特許第５，１８５，３５１号；ヨーロッパ特許第４０３１５９号）、イルベサルタン（irbesartan；米国特許第５，２７０，３１７号；ヨーロッパ特許第４５４５１１号）、オルメサルタン（olmesartan；米国特許第５，６１６，５９９号；ヨーロッパ特許第５０３７８５号）、タソサルタン（tasosartan；米国特許第５，１４９，６９９号；ヨーロッパ特許第５３９０８６号）、及びテルミサルタン（telmisartan；米国特許第５，５９１，７６２号；ヨーロッパ特許第５０２３１４号）よりなる群から選ばれる化合物を挙げることができる。
【０１３５】
好ましいＡＴ１−受容体拮抗薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいものはロサルタン及びバルサルタン又は、いずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１３６】
ＡＣＥ阻害薬によるアンジオテンシンＩのアンジオテンシンＩＩへの酵素分解の阻害は、血圧を調節するための成功した変法であるので、高血圧を治療するための有用な治療方法も提供する。
【０１３７】
本発明の併用に用いられる適切なＡＣＥ阻害薬は、例えば、アラセプリル（alasepril）、ベナゼプリル（benazepril）、カプトプリル（captopril）、セロナプリル（ceronapril）、シラザプリル（cilazapril）、デラプリル（delapril）、エナラプリル（enalapril）、ホシノプリル（fosinopril）、イミダプリル（imidapril）、リシノプリル（lisinopril）、モエキシプリル（moexipril)、モベルトプリル（moveltopril）、ペリンドプリル（perindopril）、キナプリル（quinapril）、ラミプリル（ramipril）、スピラプリル（spirapril）、テモカプリル（temocapril）、トランドラプリル（trandolapril）、及びゾフェノプリル（zofenopril）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１３８】
好ましいＡＣＥ阻害薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいＡＣＥ阻害薬はラミプリル（米国特許第５，０６１，７２２号）である。
【０１３９】
レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成において減少をもたらす。その結果として、より少ない量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度が、例えば、レニン阻害剤の降圧作用の直接要因である。
【０１４０】
適切なレニン阻害剤は、異なった構造特性を有している化合物を包含する。例えば、ジテキレン（ditekiren）、レミキレン（remikiren）、テルラキレン（terlakiren）、及びザンキレン（zankiren）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１４１】
特に、本発明は、米国特許第５，５５９，１１１号、同第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号（これらの全ての内容は、参照により、本明細書に取り込まれている）に開示されているレニン阻害剤に関している。
【０１４２】
本発明の好ましいレニン阻害剤は、米国特許第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号に開示されているレニン阻害剤、特に、式（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）のそれぞれＲＯ６６−１１３２及びＲＯ６６−１１６８、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を包含する。
【０１４３】
【化１７】
【０１４４】
好ましいレニン阻害剤は、米国特許第５，５５９，１１１号に開示されている、δ−アミノ−γ−ヒドロキシ−ω−アリール−アルカン酸アミド誘導体、特に、アリスキレン（aliskiren）としても知られている、式（ＶＩＩＩ）の化合物も包含する。
【０１４５】
【化１８】
【０１４６】
特定に定義されない場合には、用語「アリスキレン」は、遊離塩基としても、及びその塩として、特にその薬学的に許容される塩、もっとも好ましくは、そのヘミフマル酸塩としても理解されるべきである。
【０１４７】
利尿剤は、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、メチルクロチアジド、及びクロロタリドンよりなる群から選ばれるチアジド誘導体である。もっとも好ましい利尿剤はヒドロクロロチアジドである。更に利尿剤は、アミロリド又はトリアメテリンのようなカリウム保持性利尿剤、又はこれらの薬学的に許容される塩である。
【０１４８】
ＣＣＢの群は本質的に、ジルチアゼム型及びベラパミル型のＣＣＢのような、ジヒドロピリジン（ＤＨＰｓ）及び非ＤＨＰｓを含有している。
【０１４９】
当該併用において有用なＣＣＢは、アムロジピン（amlodipine）、フェロジピン（felodipine）、リオシジン（ryosidine）、イスラジピン（isradipine）、ラシジピン（lasidipine）、ニカルジピン（nicardipine）、ニフェジピン（nifedipine）、ニグルジピン（niguldipine）、ニルジピン（niludipine）、ニモジピン（nimodipine）、ニソルジピン（nisoldipine）、ニトレンジピン（nitrendipine）及びニバルジピン（nivaldipine）よりなる群から選ばれる代表的なＤＨＰが好ましく、そして、フルナリジン（flunarizine）、プレニラミン（prenylamine）、ジルチアゼム（diltiazem）、フェンジリン(fendiline）、ガロパミル（gallopamil）、ミベフラジル（mibefradil）、アニパミル（anipamil）、チアパミル（tiapamil）及びベラパミル（verapamil）よりなる群から選ばれる代表的な非ＤＨＰが好ましく、そして何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩が好ましい。これらＣＣＢの全ては、例えば、抗高血圧薬、抗狭心症薬又は抗不整脈薬として、治療に用いられる。
【０１５０】
好ましいＣＣＢは、アムロジピン、ジルチアゼム（diltiazem）、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン及びベラパミル、又は例えば、特異的ＣＣＢに依存するもの、それらの薬学的に許容される塩を包含する。ＤＨＰとして特に好ましいものは、アムロジピン、又はその薬学的に許容される塩、特にそのベシル酸塩である。特に好ましい代表的な非ＤＨＰは、ベラパミル、又はその薬学的に許容される塩、特にその塩酸塩である。
【０１５１】
本発明で用いるのに適しているβ−ブロッカーは、β−アドレナリン受容体に対してエピネフィリンと競合して、エピネフィリンの作用を妨げる、ベータアドレナリン遮断薬（β−ブロッカー）を包含する。β−ブロッカーが、α−アドレナリン受容体と比べてβ−アドレナリン受容体に対して選択的であって、そのため顕著なα−ブロッキング効果を有していないことが好ましい。適切なβ−ブロッカーは、アセブトロール（acebutolol）、アテノロール（atenolol）、ベタキソロール（betaxolol）、ビソプロロール（bisoprolol）、カルテオロール（carteolol）、カルベジロール（carvedilol）、エスモロール（esmolol）、ラベタロール（labetalol）、メトプロロール（metoprolol）、ナドロール（nadolol）、オクスプレノロール（oxprenolol）、ペンブトロール（penbutolol）、ピンドロール（pindolol）、プロプラノロール（propranolol）、ソタロール（sotalol）及びチモロール（tomolol）から選ばれる化合物を包含する。β−ブロッカーが酸又は塩基であるか、又はそうでなければ薬学的に許容される塩又はプロドラッグを形成することが可能な場合は、これらの形態は本明細書に包含されるものと考えられ、その化合物を、遊離形態、又は生理的に加水分解可能で許容可能なエステルのような、生理学的に許容される塩、或いはプロドラッグの形態で投与できることが理解される。例えば、メトプロロールはその酒石酸塩として適切に投与され、プロプラノロールは塩酸塩として適切に投与される等である。
【０１５２】
血小板凝集阻害薬は、例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標；硫酸クレピドグレル(
clopidogrel bisulfate)）、ＰＬＥＴＡＬ（登録商標；シロスタゾール(cilostazol)）及びアスピリンを包含する。
【０１５３】
コレステロール吸収調節薬は、例えば、ＺＥＴＩＡ（登録商標；エゼチミブ(ezetimibe)）を包含する。
【０１５４】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬（β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイムＡ還元阻害薬、又はスタチンとも呼ばれる）は、血漿コレステロール濃度を含む脂質濃度を低下するために用いることのできる活性薬物であると理解されている。
【０１５５】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は異なった構造特徴を有する化合物を包含する。例えば、アトルバスタチン（atorvastatin）、セリバスタチン（cerivastatin）、フルバスタチン（fluvastatin）、ロバスタチン（lovastatin）、ピタバスタチン（pitavastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、ロスバスタチン（rosuvastatin）及びシンバスタチン（simvastatin）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１５６】
好ましいＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいのは、アトルバスタチン、ロスバスタチン及びシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１５７】
ＨＤＬ増大化合物は、これに限定されないが、コレステロールエステル転送タンパク（ＣＥＴＰ）阻害剤を包含する。ＣＥＴＰ阻害剤の例は、米国特許第６，１４０，３４３号及び同第６，１９７，７８６号に開示されているもの、例えば、トルセトラピブ（torcetrapib）として知られている化合物；国際ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００６０１４４１３号に開示されているもの、例えば、アナセトラピブ（anacetrapib）として知られている化合物；及び米国特許第６，４２６，３６５号に開示されているもの、例えば、ＪＴＴ−７０５として知られている化合物を包含する。
【０１５８】
アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレステロールからのコレステロールエステルの合成に触媒作用する酵素で、コレステロールの代謝及びその消化器への吸収に極めて重要な役割を果たしているので、ＡＣＡＴ酵素の阻害薬は抗−高脂血症薬として用いることができる。ＡＣＡＴ阻害薬の例は、これに限定されないが、アバシミベ（avasimibe）及びパクチミベ（pactimibe）を包含する。
【０１５９】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、これに限定されないが、ＰＳＢ１１１５カリウム塩、ＰＳＢ６０３、ＭＲＳ１７５４及びアロキサジン（alloxazine；Sigma-Aldrich及び／又はTocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，５４５，００２号；米国特許第６，８２５，３４９号；米国特許第６，９１６，８０４号；米国特許第７，１６０，８９２号；米国特許第７，２０５４０３号及び米国特許第７，３４２，００６号に開示されているもの、例えば、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０として知られる化合物を包含する。
【０１６０】
本発明による併用が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有していることが好ましい。
【０１６１】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６２】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、レニン阻害剤、例えば、アリスキレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、好ましくはそのヘミフマル酸塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６３】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＣＣＢ、例えばアムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６４】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、β−ブロッカー、例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、エスモロ（ド）ール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール及びチモロール、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそのれら薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６５】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、血小板凝集阻害薬、例えばクロピドグレル、又はアスピリン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、例えば、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６７】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６８】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１６９】
一般名又は商標名によって同定される活性薬物の構造は、標準的な抄録「The Merck Index」又は「Physician's Desk Reference」の最新版から、又はデータベース、例えば、Patents International（例えば、IMS World Piblications）又は Current Drug から引き出すことができる。これらの対応する内容を、参照により、本明細書に取り込まれている。当業者は誰でも、活性薬剤の同定が可能で、これらの参考文献に基づいて、製造すること、及び医薬品の適応及び特性を、インビトロ及びインビボの両方で、標準的な試験モデルで、試験することも同様に可能である。
【０１７０】
本明細書で上述したように、本発明のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、及び併用パートナーは、それらの薬学的に許容される塩として存在していてもよい。これらの化合物が、例えばアミノ基のような少なくとも１つの塩基中心を有している場合は、これらはこれらの酸付加塩を形成できる。同様に、少なくとも１つの酸性基（例えば、ＣＯＯＨ）を有している化合物は、塩基との塩を形成できる。さらに化合物が、例えばカルボキシル基とアミノ基の両方を含有する場合、対応する内部塩（internal salts）を形成できる。
【０１７１】
対応する活性成分又は薬学的に許容される塩は、水和物のような溶媒和物の形態で、又は、例えばそれらの再結晶においてのような、用いる他の溶媒を含んで、も用いることができる。
【０１７２】
更に別の態様では、本発明は、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物に関している。
【０１７３】
本明細書で上述したように、本発明の医薬組成物で用いられるアデノシンＡ３拮抗薬は、随意に、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ２Ｂ受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【０１７４】
更に、本発明は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、例えば、アテローム性動脈硬化性プラークの進行の遅延、及び最終的に退縮、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、
（１）ＡＣＥ阻害薬、好ましくは、ラミプリル、それらの薬学的に許容される塩；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、好ましくは、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（３）レニン阻害剤、好ましくは、アルスキレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、例えばそのヘミフマル酸塩；
（４）利尿剤、好ましくは、ヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、好ましくは、アムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、好ましくは、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの他の治療薬剤との組合せの治療有効量、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物を提供する。
【０１７５】
本明細書の上で開示したように、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、（１）ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン；（３）レニン阻害剤、例えば、アルスキレン；（４）利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、例えば、アムロジピン；（６）β−ブロッカー、例えば、メトプロロール；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬：又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれるれる少なくとも１つの他の治療薬剤と組み合わせて、医薬組成物として併用投与することができる。成分を従来の投与形態で、通常は薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に、併用投与することができる。
【０１７６】
本発明の方法の実施にあたって、本発明のアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを、ヒトを含む、哺乳動物への経口又は経直腸、経皮及び非経口投与のような各種投経路を介する投与に適している医薬組成物に製剤化できる。経口投与用に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを含有してなる医薬組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、マイクロエマルジョン、単位用量パケット等の形態を採ることができる。ａ）希釈剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム又はカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；錠剤についてはｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、でんぷん糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン；所望によりｄ）崩壊剤、例えば、でんぷん、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩、又は発泡性混合物；及び／又はｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味剤と共に活性成分を含有している錠剤及びゼラチンカプセルが好ましい。注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液が好ましく、そして坐薬は、脂肪乳液又は懸濁液から有利に調製される。
【０１７７】
当該組成物を、滅菌させてもよく、そして／又は保存、安定化、湿潤又は乳化剤のような補助剤、溶解促進剤、浸透圧調節剤及び／又は緩衝剤を含有してもよい。更にこれらは、その他の治療有効物質を含有していてもよい。当該組成物は、それぞれに従来の混合、顆粒又はコーティング方法に従って調製されて、そして約０．１〜９０％、好ましくは約１〜８０％の活性成分を含有する。
【０１７８】
治療的に有効であるために必要な本発明の化合物の量は、勿論、治療する個々の哺乳動物によって変化するであろう、そして最終的には医師又は獣医師の判断によって決まる。考慮すべき因子は、治療する疾患の重症度、投与経路、製剤の特性、哺乳動物の体重、体表面積、年齢及び全身状態、並びに投与される特定の化合物を包含する。適切な投与計画を、このような因子を考慮し、そして文献に報告されている用量及び Physician's Desk Reference (58th ed., 2004）で推奨されている用量に従って、当業者が選択することができる。
【０１７９】
本発明による医薬併用剤の活性成分についての好ましい投与量は、治療的に有効な投与量であって、特に、市販品のそれである。
【０１８０】
通常は、経口投与の場合、例えば、体重が約７５ｋｇの患者に対して、１日当たり約１μｇ〜約３ｇの概算用量が推定される。
【０１８１】
例えば、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の適切な治療有効用量は、１日当たり患者の体重に対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ未満、最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ未満である。
ある特定の実施態様では、アデノシンＡ３受容体拮抗薬を、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約１．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、又は約１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量で投与する。
【０１８２】
ＡＣＥ阻害薬の場合は、好ましいＡＣＥ阻害薬の単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ又は４０ｍｇのベナゼプリル；約６．５〜１００ｍｇ、好ましくは、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ又は１００ｍｇのカプトプリル；約２．５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのエナラプリル；約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、１０ｍｇ又は２０ｍｇのフォシノプリル；約２．５ｍｇ〜約４ｍｇ、好ましくは、２ｍｇ又は４ｍｇのペリンドプリル；約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのキナプリル；又は約１．２５ｍｇ〜約５ｍｇ、好ましくは、１．２５ｍｇ、２．５ｍｇ又は５ｍｇのラミプリルを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。１日１回投与が好ましい。
【０１８３】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、バルサルタンは、適切な単位剤形、例えば、治療有効量のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、約２０〜約３２０ｍｇのバルサルタンを含有している、カプセル又は錠剤の形態で供給される。活性成分の投与は、例えばアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えばバルサルタンを、１日用量２０ｍｇ又は４０ｍｇで開始して、１日当たり８０ｍｇ及び更に１日当たり１６０ｍｇ、そして最終的に１日当たり３２０ｍｇまで増量して、１日３回まで可能である。その用量を、例えば、朝に、昼に又は夕方に摂取することができる。
【０１８４】
レニン阻害剤、例えば、アリスキレンの場合、体重約７５ｋｇの、ヒトを含む、温血動物に投与する用量は、特にレニン活性を阻害するのに有効な用量、例えば、血圧を下げるのに有効な用量は、約３ｍｇ〜約３ｇ、好ましくは、約１０ｍｇ〜約１ｇであり、例えば２０ｍｇ／ヒト／日〜２００ ｍｇ／ヒト／日を、例えば同じ大きさのものであってもよいが、好ましくは、１〜４つの単回用量に分割したものである。通常は、小児は成人用量の約半分を摂取する。各個体に必要な用量は、例えば活性成分の血清濃度を測定することによって、モニターして、最適濃度に調節することができる。単回用量は、成人患者当たり、例えば、７５ｍｇ、１５０ｍｇ又は３００ｍｇを含んでいる。
【０１８５】
利尿剤の場合は、好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは、約６．２５ｍｇ〜約２５ｍｇを含有している、例えば、錠剤又はカプセルである。ヒドロクロロチアジドの１日用量の６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ又は２５ｍｇを１日に１回投与することが好ましい。
【０１８６】
ＣＣＢｓ、例えば、アムロジピンの場合は、好ましい単位剤形は、経口で投与しときに、１日当たり、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ〜２０ｍｇを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。
【０１８７】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の場合は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約１２０ｍｇ、好ましくは、アトルバスタチンを用いるときは、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、又は８０ｍｇのアトルバスタチンを、例えば、１日１回投与するように、含有している、例えば錠剤又はカプセルである。
【０１８８】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の場合は、好ましい単位剤形は、例えば、１日に３回まで投与される、約５μｇ〜約１ｇ、好ましくは、約５０μｇ〜約１００ｍｇを含有している、例えば錠剤又はカプセルである。
【０１８９】
本発明は、別々に投与されてもよい化合物の併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法に関しているので、本発明は、キットの形態にある、別々になった医薬組成物の組み合わせにも関している。キットは、例えば、２つの別々の医薬組成物：（１）アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び（２）ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＬＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物：を含むことができる。（１）及び（２）の量は、別々に併用投与したときに有益な治療効果（複数を含む）が達成されるような量である。キットは、別々の組成物を収容するための、分離したボトル又は分離したホイルパックのような容器を含有していて、それぞれの区画は、例えば、（１）又は（２）を含有している複数の剤形（例えば、錠剤）を含有している。
あるいは、活性成分を含有している剤形を分離するのではなく、キットはそれぞれが全用量を含有する分離した区画（それが別々の剤形を含んでいる）を含有することができる。このタイプのキットの例は、個々のブリスターが２つ（又はそれ以上）の錠剤を含有していて、１つ（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（１）を含んでいて、第２（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（２）を含んでいる、ブリスターパックである。
一般に、キットは、別々の成分の投与に付いての説明書を含んでいる。キット形態は、別々の成分を異なった剤形（例えば、経口及び非経口）で投与することが好ましい場合、別々の成分を異なった投与間隔で投与するとき、又は併用の個々の成分の滴定を処方医師が望む場合に、特に有利である。
本発明の場合、それ故、キットは：
（１）第１剤形に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物の治療有効量；
（２）第２剤形に、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＬＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合もそれらの薬学的に許容される塩、を投与に続いて有益な治療効果（複数でも可）に到達するような量で、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び
（３）当該第１及び第２剤形を含有している容器：
を含有している。
【０１９０】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬の単独での作用、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、薬学的に許容される塩との併用での、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の作用は、とりわけ、インビトロ及び／又はインビボでの試験の方法によって、例えば、本明細書の具体的実施例に記載されているように、実験的に明らかにできる。
【０１９１】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの併用パートナーは各種の投与経路で投与できる。それぞれの薬剤は、それぞれの治療薬単独、又はそれらの特定の組み合わせについて、最大の応答を引き起こすための最適な薬物濃度を確認するために、幅広い用量範囲に渡って試験することができる。これらの検討には、１群あたり少なくとも６匹の動物からなる治療群を用いることが好ましい。それぞれの検討は、個々の成分を評価するのと同時に、併用治療群の効果を確認するという方法で、最良に実施される。薬物の効果は急性投与でも観察できるが、慢性期において応答を観察することが好ましい。長期の検討は、代償性反応の完全な発現を引き起こすことができる十分な期間を含んでいので、その観察された効果は、持続した或いは持続性の効果を示す試験系の実際の応答を最もよく表現するだろう。
【０１９２】
代表的な検討は、例えば、ＷＨＨＬ（Watanable heritable hyperlipidemic）ウサギを家族性高コレステロール血症モデルとして用いて（Atherosclerosis, 36:261-268, 1980）、又は今やアテローム性動脈硬化症の主要モデルの１つになっているアポリポタンパク質Ｅノックアウトマウスモデルを用いて（Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 24:1006-1014, 2004; Trends Cardiovasc. Med., 14:187-190, 2004）、実施できる。アポリポタンパク質Ｅノックアウトマウス検討は、例えば、Johnson et al.,（Circulation, 111:1422-1430, 2005）に記載のようにして、又はその変法を用いて、実施できる。
【０１９３】
得られる結果は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の抗高血圧効果とは無関係に、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に用いることができることを示している。更に驚くべきことに、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができるということが、明らかにされた。
【０１９４】
更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用が、その他の治療薬剤単独の投与より高い治療効果を達成することが見出された。より高い有効性は、長い作用持続時間としても立証できる。作用持続時間は、次の投与前にベースラインに戻るまでの時間として、又は濃度曲線下面積（ＡＵＣ）としての何れかでモニターすることができる。
【０１９５】
更なる利点は、本発明によって併用される個々の薬物のより低い用量は、例えば、その用量を少なくするばかりではなく、より少ない頻度で投与するように、用量を減らすために、又は副作用の発生を減少するために用いることができる。
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用投与は、より高い割合の治療患者に顕著な応答、すなわち、より高い応答比結果をもたらす。
【０１９６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用療法は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、及びそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に対してより有効な治療をもたらすということを示すことができる。
特に、いっそう驚くべきことは、本発明の併用が、有益な、特に相乗的な治療効果をもたらすばかりではなく、驚くべき有効性の持続のような併用療法からもたらされる利益をも導くという知見である。
【０１９７】
本発明は更に、アデノシンＡ３受容体拮抗薬単独の、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関する。
【０１９８】
従って、本発明の別の実施態様は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬の単独での、又は（１）ＡＣＥ阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（３）レニン阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（４）利尿剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、又はそれらの薬学的に許容される塩；（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関している。
【０１９９】
上の記載は、好ましい実施態様を包含して本発明を十分に開示している。特に本明細書に開示されている実施態様の修正及び改良は以下の特許請求の範囲の範囲内である。更なる推考を必要とせずに、当業者は、前述の説明を用いて、本発明をその最大限に利用できるものと考える。従って、本明細書の実施例は、本発明のある特定の態様の単なる説明と解釈されるものであって、決して本発明の範囲を限定するものではない。本明細書を通して用いられている略語は当該技術分野で一般的に知られているようなものである。
【０２００】
材料及び方法
細胞培養
ヒト骨髄単球細胞株Ｕ９３７をＡＴＣＣから入手して、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補完したＲＰＭＩ１６４０培地中、５％ＣＯ２／９５％空気中、３７℃で保持した。
【０２０１】
末梢血からヒトマクロファージ（ＨＭ）の調製
末梢血単核細胞を軟膜から、フィコール・ハイパック分配（Ficoll-Hypaque gradient;Ficoll-Paque, research Grade, Amersham Pharmacia Biotech AB, Cologno Monzese, Italy）で、Gessi et al., (Mol. Pharmacol., 65:711-719, 2004）に既に記載されているようにして単離した。グルタミン（２ｍＭ）、ヒトＡＢ血清（５％,Sigma）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有しているＲＰＭＩ１６４０培地中で、単球を接着によって選択して、７日に渡る接着でマクロファージに分化させた。
【０２０２】
低酸素処理
モジュラー型培養チャンバー（modular incubator chamber）内で低酸素曝露を行って、１％のＯ２、５％のＣＯ２、及び残余のＮ２を含有する混合ガス（MiniGalaxy, RSBiotech, Irvine, Scotland）を供給した。
【０２０３】
泡沫細胞（ＦＣ）形成
Ｕ９３７細胞を酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ、４０ｎＭ）で７２時間処理にて誘発して、マクロファージに分化した。使用前に、ｏｘＬＤＬを、０．１５Ｍの塩化ナトリウム及び０．３ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）の溶液１Ｌに対して４℃で１２時間、次いでＲＰＭＩ１６４０培地（各回１Ｌで、２回交換）に対して２４時間、透析した。全ての透析は、ピアス社の Slide-A-Lyzer 透析カセット（分子量１０，０００画分）を用いて実施した。透析後、リポタンパク質は０．４５μｍ（細孔径）フィルターを通過させて滅菌し、次いでこれ（５０〜１００μｇ／ｍＬ、Intracel, Frederick, MD）をＰＭＡで処理したＵ９３７細胞に加えて、血清を含有していないＲＰＭＩ１６４０中で４８時間培養した。アデノシンによる細胞の処理は全て、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）阻害剤、エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン（ＥＨＮＡ、５μＭ）の存在下で実施し、そしてアデノシン拮抗薬による処理はＡＤＡの存在下で実施した。
【０２０４】
オイルレッドＯ染色分析
ＰＭＡ−分化Ｕ９３７細胞の試験薬物による処理を、ｏｘＬＤＬの添加２時間前に実施した。低酸素下で２４時間ｏｘＬＤＬに曝露した後、Ｕ９３７細胞をリン酸緩衝生理食塩水−緩衝４％パラホルムアルデヒド溶液中に１５分間固定し、次いで風乾した。オイルレッドＯ（６０％イソプロパノール溶液）染色を、基本的に Kalayoglu and Byrne（Infect. Immun., 66:5067-5072, 1998）に既に記載されているように、１５分間行った。ニコンの Eclipse E800 顕微鏡を用い、１００倍の顕微鏡明視野で細胞を表示した。泡沫細胞を、細胞質がオイルレッドＯで染色可能な脂質滴で膨らんでいるマクロファージと定義付けた。
【０２０５】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
全細胞質ＲＮＡを、酸性グアニジンチオシアネートフェノール法によって抽出した。アデノシン受容体ｍＲＮＡの定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイ（Higuchi et al., Biotehchnology, 11:1026-1030, 1993）を、ABI Prism 7700 Sequence Detection System（Applied Biosystems, Warrington Cheshire, UK）中、遺伝子特異的蛍光標識された TaqMan MGB プローブ（副溝バインダー；minor groove binder）を用いて実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシンサブタイプのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ０００６７４、ＮＭ０００６７５、ＮＭ０００６７６及びＮＭ０００６７７をそれぞれ用いた。更に、アデノシン受容体ｃＤＮＡプラスミド標準品の、少なくとも６オーダーの大きさ（１０−１１〜１０−１６ｇ／μＬ）の範囲に及ぶ曲線が生じた。これらの標準曲線は、Ｃｔ値とプラスミド量の対数との間の直線関係を表している（Gessi et al., Mol. Pharmacol. 67:2137-2147,2005）。アデノシン受容体伝達の定量化を、プラスミド希釈系列から作り出したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った（Kalayoglu and Byrne, Infect. Immun., 66:5067-5072, 1998）。ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ及びＩＬ−８のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ、ＮＭ及びＮＭをそれぞれ用いた。参照遺伝子のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲには、内在性コントロールヒトβ−アクチンキットを用い、そしてプローブはＶＩＣ（登録商標；Applera）で蛍光標識した。
【０２０６】
膜調製
Ｕ９３７細胞及びマクロファージを、それぞれ、低張緩衝液及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で、ポリトロン（Kinematica）を用いて、ホモジナイズして、先の記載（Gessi et al., Mol. Pharmacol., 65:711-719,2004）のように、４８，０００ｘｇで３０分間遠心分離した。タンパク質濃度を、ウシ血清を標準品として用いて、Bio Rad 法（Bradford, Anal. Biochem., 72:248-254, 1976）に従って測定した。
【０２０７】
結合実験
Gessi et al.（Mol. Pharmacol. 65:711-719, 2004）に従って、結合アッセイを実施した。飽和実験において、膜（アッセイ当たりタンパク質７０μｇ）を５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣＬ緩衝液（Ａ２Ａに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２；Ａ２Ｂに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ及び０．１ｍＭのベンズアミジン；そしてＡ３に対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２及び１ｍＭのＥＤＴＡ）、ｐＨ７．４中で培養して、１，３−ジプロピル−８−シクロペンチルキサンチン（［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ）（０．４〜４０ｎＭ）；（４−（２−［７−アミノ−２−（２−フリル）−［１，２，４］トリアゾロ−［２，３２］−［１，３，６］−トリアジニル−アミノ］エチル）−フェノール）（［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５）（０．３〜３０ｎＭ）；Ｎ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル−オキシ］−アセトアミド（［３Ｈ］ＭＲＥ２０２９Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）；５−Ｎ−（４−メトキシフェニル−カルバモイル）アミノ−８−プロピル−２−（２フリル）−ピラゾロ−［４，３ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（［３Ｈ］ＭＲＥ３００８Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）の濃度を上げて、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体をそれぞれ標識化した。フィルターに結合した放射能を、Micro-Scint20 を用いて、Top Count Microplate Scintillation Counter（効率５７％）上に集計した。
【０２０８】
ウェスタンブロット分析
全細胞溶解物を先に記載されている（２７）ようにして調製した。ヒトアデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ（Alpha Diagnostic）及びＡ３受容体（Aviva）に対する特異抗体（１：１０００希釈）を用いてアデノシン受容体を評価した。ＨＩＦの検出を目的とする実験では、５％の脱脂粉乳を含むＰＢＳ／０.１％のツイーン−２０中、４℃で１晩、ＨＩＦ−１αに対する抗体（１：２５０希釈）及びＨＩＦ−１βに対する抗体（１：１０００希釈）を用いてウェスタンブロットアッセイを実施した。ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Pierce, Rockford, IL）を用いて、タンパク質濃度を測定した。等しいタンパク質負荷を保証するために、チューブリン（１：２５０）を用いた。VersaDoc Imaging System (Bio-Rad）を用いて、免疫活性を算定して定量化した。
【０２０９】
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
細胞によって培地中に分泌されたＶＥＧＦ及びＩＬ−８タンパク質の濃度をＶＥＧＦ及びＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット（R & D Systems）を用い、製造会社の説明書に従って測定した。データは、３回の独立した実験から得た平均値±ＳＤとして表した。
【０２１０】
細胞のｓｉＲＮＡによる処理
泡沫細胞を６ウェルプレートに固定して、トランスフェクションの前に、５０〜７０％集密になるまで生育した。ｓｉＲＮＡのトランスフェクションを、RNAiFectTM Transfection Kit（Qiagen）を用い、１００ｎＭの濃度で実施した。非特異的コントロールリボヌクレオチドのセンス鎖（５’−ＡＣＵ ＣＵＡ ＵＣＵ ＧＣＡ ＣＧＣ ＵＧＡ ＣｄＴｄＴ−３’）及びアンチセンス鎖（５’−ｄＴｄＴ ＵＧＡ ＧＡＵ ＡＧＡ ＣＧＵ ＧＣＧ ＡＣＵ Ｇ−３’）を、Merighi et al., （Neoplasia, 7:894-903, 2005）によって既に報告されているのと同一条件下で用いた。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、Ａ３ＡＲ及びＨＩＦ−１αｓｉＲＮＡｓは、Santa Cruz Biotechnology （Santa Cruz, CA）から入手した。
【０２１１】
統計的分析
図中及びテキスト中の全ての値は、Ｎ回観測（Ｎ≧３で）の平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表されている。データセットは分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びダネット検定（必要に応じて）によって検定した。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であると見なした。
【０２１２】
結果
ＰＭＡで処理したＵ９３７、マクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、正常酸素及び低酸素条件下でのアデノシン受容体ｍＲＮＡの発現
正常酸素及び低酸素条件下でのＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、アデノシン受容体ｍＲＮＡの発現を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験によって評価した。
Ａ１サブタイプに関しては、正常酸素及び低酸素の両方で、３つの細胞モデル全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、１．３±０．２、１．１±０．１、１．２±０．１倍、図１Ａ）。
同様に、Ａ２Ａ及びＡ３受容体サブタイプでは、正常酸素及び低酸素の両方で、調べた３つの細胞タイプ全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ａ ０．９±０．１、１．１±０．２、０．９±０．１倍；Ａ３ ０．７±０．１、０．７±０．１、０．８±０．１倍、図１Ｂ及び図１Ｄ）。
Ａ２Ｂ受容体サブタイプの発現では、ヒトマクロファージにおいて最も高いレベルであって、３つの細胞タイプ全てで低酸素によって有意に上昇した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ｂ １．５±０．２、１．８±０．１、１．９±０．１倍、図１Ｃ）。
【０２１３】
アデノシン受容体伝達の評価を、プラスミド希釈系列から作成したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った。アデノシン受容体の発現レベルをβ−アクチンの発現レベルに正規化すると、類似結果が得られた。
【０２１４】
ウェスタンブロッティング及び結合試験の方法による、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞におけるアデノシン受容体タンパク質の発現
正常酸素及び低酸素条件における、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞において、全てのアデノシン受容体サブタイプのタンパク質評価を、ウェスタンブロッティング実験によって、試験した。図２で報告するように、ｍＲＮＡデータに従って調べた３つの細胞タイプ全てにおいて、全てのアデノシン受容体の存在が観察された。
【０２１５】
異なったアデノシンサブタイプのタンパク質の量を定量化するために、結合試験を実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の親和性（ＫＤ、ｎＭ）及び密度（Ｂｍａｘ、タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）値を評価するために、それぞれ、［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ、［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５、［３Ｈ］ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及び［３Ｈ］ＭＲＥ−３００８Ｆ２０拮抗薬放射性リガンドを用いた。
Ａ１受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．０±０．３及び４．４±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が５２±６及び８０±１０タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．８±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が８５±９及び８３±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が３．３±０．５及び３．７±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が７８±１０及び１０２±１２であった（図３Ａ）。
Ａ２Ａ受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．５±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が６２±９及び５７±８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．２±０．３及び２．３±０．３であり、そしてＢｍａｘ値が１０９±１２及び９０±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．１±０．１及び２．２±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が８４±９及び７５±７であった（図３Ｂ）。
Ａ２Ｂ受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．３±０．４及び４．１±０．５であり、そしてＢｍａｘ値が３３±３及び７３±６であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．９±０．３及び４．８±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が１７３±１５及び２４０±１８であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．０±０．２及び１．９８±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が９０±８及び１４０±１２であった（図３Ｃ）。
最後に、Ａ３受容体に関して、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．５±０．１及び２．０±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２３５±２６及び２６７±２８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．５±０．５及び４．８±０．７であり、そしてＢｍａｘ値が２５４±２４及び３６０±３３であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．７±０．１及び２．３±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２５０±３０及び２７５±３２タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった（図３Ｄ）。
【０２１６】
アデノシン受容体は、低酸素においてＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積を誘発する
ＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積に対するａｄｏの作用を評価するために、ＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞を、アデノシン（１００μＭ）と４、８及び２４時間培養した。ＰＭＡ及びｏｘＬＤＬが、正常酸素下においてＨＩＦ−１αを誘発することが単独に明らかにされているので、正常酸素及び低酸素の両方で、経時的実験を実施した。
この実験条件で、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞において、正常酸素条件下で、２４時間後のアデノシンによってほとんど増加しないＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出した（デンシトメトリー分析による評価で１．４倍の増加、図４Ａ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で４時間から現れ始めて、アデノシンによって有意に誘発され、そして２４時間まで安定であった（図４Ｂ）。
ヒトマクロファージにおいて、正常酸素条件下では、ＨＩＦ−１αの存在が観察されなかったのに対して、低酸素条件下ではアデノシン誘発を評価するために４時間の時点が最適であった（それぞれ、図４Ｃ及び４Ｄ）。
最後に、Ｕ９３７由来泡沫細胞では、ｏｘＬＤＬの２つの異なった用量（５０及び１００μｇ／ｍＬ）の存在下での経時的実験を実施した。この場合もやはり、正常酸素条件下で、５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬで処理した後、２４時間目にＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出して、これはアデノシンによる僅かな影響を受けたものであった（図４Ｅ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で、４時間から現れ始めて、アデノシン（１００μｍ）によって増大し、２４時間後にも安定であり、そして５０又は１００μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬを用いて得られたものと類似していた（図４Ｆ及び４Ｇ）。その結果、アデノシンの泡沫細胞へＨＩＦ−１αタンパク質を蓄積する効果を検討するために、５０μｇ／ｍＬの濃度で４時間の低酸素を選択した。
どのアデノシン受容体がアデノシン誘発ＨＩＦ−１αタンパク質に関与していたかを評価するために、低酸素条件下でアデノシンを添加する前に、泡沫細胞はアデノシン受容体の選択的拮抗薬で処理した。図５に示されているように、アデノシンの作用は、それぞれＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体の関与が示唆されている、ＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって部分的に拮抗された。従って、ＨＩＦ−１α蓄積に高い親和性を有する一連の作動薬：シクロヘキシル−アデノシン（ＣＨＡ；１０、１００ｎＭ）、２［ｐ−（カルボキシエチル）−フェネチルアミノ］−ＮＥＣＡ（ＣＧＳ２１６８０；５００、１０００ｎＭ）、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフランヌロンアミド（１０、１００ｎＭ）及びＮ６−（３−ヨードベンジル）−２−クロロアデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド（ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ；１０，１００ｎＭ）の濃度増大効果を評価した。図６に示されているように、全ての作動薬が、泡沫細胞においてＨＩＦ−１αタンパク質を誘導することができた。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞及びヒトマクロファージにおいて、同様の結果が得られた。
【０２１７】
ｓｉＲＮＡ処理によるアデノシン受容体のノックダウン
アデノシン誘発ＨＩＦ−１α蓄積における、異なった受容体サブタイプの関与を更に解明するために、それぞれのアデノシン受容体を、それぞれ、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の一過性サイレンシングを誘導する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を用いてノックダウンした。泡沫細胞を、それぞれのアデノシンサブタイプを標的とするｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。トランスフェクトの４８時間及び７２時間後に、アデノシン受容体ｍＲＮＡ（それぞれ、図７Ａ〜７Ｄ）及びタンパク質のレベルが有意に減少した（それぞれ、図７Ｅ〜７Ｈ）。模擬トランスフェクション及びｓｉＲＮＡによるトランスフェクションの何れも、関連のないｍＲＮＡを標的としておらず、アデノシン受容体発現を阻害した。図７Ｉに示されているように、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３サブタイプに対するｓｉＲＮＡでの低酸素条件下７２時間の細胞処理は、ＨＩＦ−１α調節に対するアデノシンの効力、この効力における全てのアデノシンサブタイプの役割をさらに支援するもの、を低減した。
【０２１８】
転写レベルでのＨＩＦ−１αタンパク質蓄積の制御
アデノシンによるＨＩＦ−１αタンパク質蓄積に関与する分子機構を検討するために、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡ発現に対するヌクレオシドの効力を評価した。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験では、正常酸素条件下でアデノシンによる細胞の処理がＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルに影響を及ぼさないのに対して、低酸素条件下で、処理の４時間後に、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルを、それぞれ、１．６±０．１、１．９±０．１及び１．５±０．１倍に時間依存的に増大させたことを明らかにした。
【０２１９】
アデノシン受容体は低酸素条件下でＶＥＧＦを誘発する
ＶＥＧＦ産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＶＥＧＦレベルを１６５±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体への関与が示唆されているＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって非常に減少して、それ程ではないが、Ａ２Ａ拮抗薬、ＳＣＨ５８２６１によって阻害された（図８）。更に、ＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡによる細胞の処理は、アデノシンが誘発したＶＥＧＦ産生の増大を無効にして、ヌクレオシドがＨＩＦ−１α調節を介して作動していることを示唆した。
【０２２０】
Ａ２Ｂアデノシン受容体は低酸素条件下でＩＬ−８の増大を誘発する
ＩＬ−８産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間及び４８時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＩＬ−８レベルを１５８±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ拮抗薬、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０又はＡ２Ｂサイレンシングによって阻害されたが、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８６２１及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（Ａ２Ｂ受容体に対する選択的な効果が示唆されている）によっては阻害されなかった（図９）。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラ（ン）ヌロンアミドの用量応答曲線は、ＩＬ−８分泌を刺激するＥＣ５０値が５８±６ｎＭであることを明らかにし、Ａ２Ｂ受容体サブタイプのこの応答への関与を示唆した。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬の効力（１μＭ、ＩＬ−８分泌の１４２±８％）がＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０によって完全に阻止された。最後に、アデノシンによって誘発されるＩＬ−８分泌がＨＩＦ−１αタンパク質の増大を介して影響を受けるのか否かを調べるために、アデノシンで刺激する前に、細胞をＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡで処理した。トランスフェクションの７２時間後に、ＩＬ−８分泌はＨＩＦ−１αサイレンシングの影響を受けず、アデノシンによって誘発されるこの効果が、ＨＩＦ−１αに依存していなかったことを示唆した。
【０２２１】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるコレステロール／コレステリルエステルの定量
Ｕ９３７細胞からの泡沫細胞形成を、コレステロール／コレステリルエステルの定量を実施して評価した。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の酸化ＬＤＬへの曝露が、コレステロールの０．１３７から０．２００への、コレステロール＋コレステリルエステル（総コレステロール）の０．２０５から０．４４３への、そしてコレステリルエステルの０．０６８から０．２４３への増大を誘発する。
【０２２２】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるオイルレッドＯ染色
図１０Ａに示されているように、ｏｘＬＤＬを伴わないＵ９３７細胞は、高濃度の中性脂質を含有しておらず、中性脂肪に特異的な染料である、オイルレッドＯで染色されない。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬによる２４時間処理後に、大きい細胞質内脂質液滴を特徴とする泡沫細胞の増大が観察された（図１０Ｂ）。この効果は、アデノシン（１００μＭ）と共に培養した後に増大した（図１０Ｃ）。しかしながら、それに続くアデノシンＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ、図１０Ｄ）及びＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ、図１１Ｃ）による処理が泡沫細胞の形成を阻止した。
【０２２３】
同様に、図１２Ｄに示されているように、Ｕ９３７由来泡沫細胞のアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｈ２０（１００ｎＭ）による処理も泡沫細胞の形成を阻止した。
【０２２４】
要するに、これらのデータは、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体の活性化が、泡沫細胞の形成及びプラークの血管形成及び発症をもたらす低酸素条件下でのＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発すること、及びＡ２Ｂ受容体サブタイプもＩＬ-８蓄積に関与していることを明らかにしている。従って、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体拮抗薬、又はＡ２Ｂ／Ａ３二重拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの形成及び進展を阻止するために用いることができる。
【図１−１】
【図１−２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
方法が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、泡沫細胞の形成を阻害する方法。
【請求項２】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、患者に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式：
【化１９】
（式中の、Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯ ｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであるか（ここで、それぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよく）；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい、５〜６員の複素環を形成し；
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；そして
ｂは１又は２である）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；又は式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、Ｈｅｔは、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、ｍは０又は１〜５の整数である）の基；であり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、ジハロメトキシ、ジ（低級アルキル）アミノ、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；又はＣ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルであり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１が、水素；Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニル基であり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＸがＯであり；Ｒ３がフリルである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ａが式：
【化２０】
：のピラゾール環を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２
（式中の、Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであり（ここでそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよく）；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい、５〜６員の複素環を形成し；
ＸはＯである）：
を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒが、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）２
（式中の、それぞれのＲ１は互いに異なっていて、１つは水素である）：
を示し、
Ａが式：
【化２１】
のピラゾール環を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物が、次式（ＩＩ）：
【化２２】
（式中の、Ｒ２は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アラルキル、置換アラルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール又はアリールであり；
Ｒ３は、フランであり；
Ｒ4は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルである）：
を有しているか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
式（ＩＩ）の化合物が、
【化２３】
よりなる群から選ばれるか、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の化合物が：
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
Ｎ−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素；
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル］尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−｛４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］フェニル｝尿素；及び
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素：よりなる群から選ばれるか、それらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＩＩ）：
【化２４】
（式中の、Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、又はヘテロシクリル（ここでは、それぞれのＲ１は、同一であっても異なっていてもよい）であるか；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と一緒になって、−Ｎ（Ｒ１）２が、アゼチジン、又はＮ、Ｏ、及びＳから選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成し；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、チオアルキル、置換チオアルキル、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
ｂは、１又は２である）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルより選ばれる１〜３個の置換基で置換されていている、Ｃ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；又は式：−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、Ｈｅｔは、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している芳香族又は非芳香族の複素環であり、そしてｍは０、又は１〜５の整数である）：の基；であり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、ジハロメトキシ、ジ（低級アルキル）アミノ、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる、１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；又はＣ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルであり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１が、水素；Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニルであり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２が、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ３アルキル、又は置換Ｃ2〜Ｃ３アルキルであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６〜１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２がクロロであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６〜２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＸがＯであり；
Ｒ３がフランである；
又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、ＸはＯであり；そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい）であるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
式（ＩＩＩ）の化合物が：
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；及び
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；
よりなる群から選ばれる化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶ）：
【化２５】
（式中の、ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールであり；そして
一方の点線は二重結合を示し、そして他方の点線は単結合を示す）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶａ）：
【化２６】
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶｂ）：
【化２７】
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が：
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−メトキシフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（ビフェニル−４−イル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−フルオロフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−フェニル−１，３−ジプロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジイソブチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジメチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（ビフェニル−４−イル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−クロロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−ブロモフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−イソプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−ｔ−ブチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロヘキシル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−６−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；及び
１，３，７−トリメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン：
よりなる群から選ばれるか又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項１〜３２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；
よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３５】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３７】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項３６に記載の方法。
【請求項１】
方法が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、泡沫細胞の形成を阻害する方法。
【請求項２】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、患者に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式：
【化１９】
（式中の、Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯ ｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであるか（ここで、それぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよく）；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい、５〜６員の複素環を形成し；
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又は置換ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アラルキル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アルキルチオ、置換アルキルチオ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；そして
ｂは１又は２である）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；又は式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、Ｈｅｔは、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５〜６員の芳香族又は非芳香族複素環であり、ｍは０又は１〜５の整数である）の基；であり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、ジハロメトキシ、ジ（低級アルキル）アミノ、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；又はＣ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルであり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１が、水素；Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニル基であり、そしてそれぞれのＲ１が、同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＸがＯであり；Ｒ３がフリルである、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ａが式：
【化２０】
：のピラゾール環を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２
（式中の、Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルであり（ここでそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよく）；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と共に、−Ｎ（Ｒ１）２がアゼチジン環、又はＮ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１つ又はそれ以上の追加のヘテロ原子を含有していてもよい、５〜６員の複素環を形成し；
ＸはＯである）：
を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒが、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）２
（式中の、それぞれのＲ１は互いに異なっていて、１つは水素である）：
を示し、
Ａが式：
【化２１】
のピラゾール環を示す、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物が、次式（ＩＩ）：
【化２２】
（式中の、Ｒ２は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アラルキル、置換アラルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール又はアリールであり；
Ｒ３は、フランであり；
Ｒ4は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルである）：
を有しているか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
式（ＩＩ）の化合物が、
【化２３】
よりなる群から選ばれるか、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）の化合物が：
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
５−［（ベンジル）カルボニル｝アミノ−８−（３−フェニルプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；
Ｎ−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素；
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル］尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−｛４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］フェニル｝尿素；及び
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１、２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素：よりなる群から選ばれるか、それらの薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＩＩ）：
【化２４】
（式中の、Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｂＲ１、−ＳＯｂＯＲ１、−ＳＯｂＳＲ１、又は−ＳＯｂ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、又はヘテロシクリル（ここでは、それぞれのＲ１は、同一であっても異なっていてもよい）であるか；又は
窒素原子と結合している場合は、窒素原子と一緒になって、−Ｎ（Ｒ１）２が、アゼチジン、又はＮ、Ｏ、及びＳから選ばれる１つ又はそれ以上のヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員の複素環を形成し；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、チオアルキル、置換チオアルキル、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンズピロール、ベンゾチオフェンであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
ｂは、１又は２である）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル；Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキルより選ばれる１〜３個の置換基で置換されていている、Ｃ１〜Ｃ５アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル；又は式：−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ（式中の、Ｈｅｔは、Ｎ、Ｏ、及びＳよりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している芳香族又は非芳香族の複素環であり、そしてｍは０、又は１〜５の整数である）：の基；であり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１が、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、ジハロメトキシ、ジ（低級アルキル）アミノ、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる、１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ６〜Ｃ１０アリール；又はＣ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、ジ（低級アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、Ｃ７〜Ｃ１０アラルキルであり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１が、水素；Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、５〜６員のヘテロアリール；又はＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、メトキシ、ニトロ、シアノ、メチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、及びジ（低級アルキル）アミノよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フェニルであり、そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２が、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ３アルキル、又は置換Ｃ2〜Ｃ３アルキルであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６〜１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２がクロロであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ３が、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びアルキルチオよりなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンであるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６〜２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＸがＯであり；
Ｒ３がフランである；
又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２（式中の、ＸはＯであり；そしてそれぞれのＲ１は同一であっても異なっていてもよい）であるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
式（ＩＩＩ）の化合物が：
５−｛［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；及び
５−｛［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン；
よりなる群から選ばれる化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶ）：
【化２５】
（式中の、ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールであり；そして
一方の点線は二重結合を示し、そして他方の点線は単結合を示す）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶａ）：
【化２６】
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が、式（ＩＶｂ）：
【化２７】
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、又は置換アリールであり；
Ｒ３は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキルであり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、アラルキル、置換アラルキル、アリール、又は置換アリールである）：
の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ１がアラルキルであり；
Ｒ２がアルキルであり；
Ｒ４が水素、アルキル又は置換アルキルであるか、又は
それらの薬学的に許容される塩である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬が：
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−フェニル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−メトキシフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（ビフェニル−４−イル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−（４−フルオロフェニル）−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−フェニル−１，３−ジプロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジイソブチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１，３−ジメチル−７−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（ビフェニル−４−イル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−クロロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−ブロモフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
７−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−ピロロ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，６Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−イソプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−ｔ−ブチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロプロピル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−シクロヘキシル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−６，７−ジメチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；
１−ベンジル−７−エチル−６−メチル−３−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン；及び
１，３，７−トリメチル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｆ］プリン−２，４（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン：
よりなる群から選ばれるか又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項１〜３２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬；
よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３５】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
方法が、アデノシンＡ３受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３７】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項３６に記載の方法。
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４−１】
【図４−２】
【図４−３】
【図４−４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４−１】
【図４−２】
【図４−３】
【図４−４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２０１１−５２８３６３（Ｐ２０１１−５２８３６３Ａ）
【公表日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１８８６４（Ｐ２０１１−５１８８６４）
【出願日】平成２１年７月１５日（２００９．７．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５０６２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／００９１９０
【国際公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【出願人】（５０４０４３０１５）キング・ファーマシューティカルズ・リサーチ・アンド・デベロプメント・インコーポレイティッド (17)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年７月１５日（２００９．７．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５０６２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／００９１９０
【国際公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【出願人】（５０４０４３０１５）キング・ファーマシューティカルズ・リサーチ・アンド・デベロプメント・インコーポレイティッド (17)
【Ｆターム（参考）】
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