本発明は、表１Ｂに示した配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの機能を変調する薬剤を同定する方法であって、（ａ）表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドを含有する試料と、候補薬剤とを用意して、候補薬剤が上記ポリペプチドに結合することが可能になる条件下でインキュベートするステップ；（ｂ）その試料における、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの候補薬剤への結合を測定するステップ；ならびに（ｃ）その試料における、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの上記候補薬剤への結合を、表１Ｂに記載するその配列を有するポリペプチドの、表１Ｂに示したその配列を有するポリペプチドに結合しないことが公知の対照物質への結合と比較するステップ、を含み、ここで、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドによる対照物質への結合と比較した、試料における表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの候補薬剤への結合の増大により、上記候補薬剤が表１Ｂに記載のその配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの機能を変調することが示される、上記方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの機能を変調する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドを含有する試料と、候補薬剤とを用意し、前記候補薬剤が前記ポリペプチドに結合するのを可能にする条件下でインキュベートするステップ、
（ｂ）表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドの、試料中での前記候補薬剤への結合を測定するステップ、および
（ｃ）表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドの試料中での前記候補薬剤への結合を、表１Ｂに記載の配列を有する前記ポリペプチドの、表１Ｂに記載の配列を有する前記ポリペプチドに結合しないことが既知である対照物質への結合と比較するステップ、
を含み、表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドによる前記対照物質への結合と比べて、表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドによる試料中の前記候補薬剤への結合が増大していることによって、前記候補薬剤が表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドの機能を変調することが示される、方法。
【請求項２】
表１Ｂから選択される遺伝子によってコードされているアポトーシス関連タンパク質の阻害剤を同定する方法であって、前記コードされているタンパク質を含有する調製物を用意するステップ；スクリーニングする被験薬剤が前記タンパク質に結合するのを可能にする条件下で、前記調製物を前記被験薬剤とともにインキュベートするステップ；および、前記薬剤の前記タンパク質との相互作用から生成されるシグナルの存在または不在を検出することによって、前記被験薬剤が前記タンパク質と相互作用するかどうか判定するステップ、および、それによって、前記被験薬剤が前記アポトーシス関連タンパク質を阻害するかどうか判定するステップ、を含む方法。
【請求項３】
前記タンパク質を含有する前記調製物が、前記タンパク質を発現する細胞を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
表１Ｂから選択されるプロテインキナーゼ遺伝子によってコードされているアポトーシス関連プロテインキナーゼの阻害剤を同定する方法であって、前記コードされているプロテインキナーゼを含有する調製物を用意するステップ；スクリーニングする被験薬剤が前記プロテインキナーゼに結合するのを可能にする条件下で、前記調製物を前記被験薬剤とともにインキュベートするステップ；前記プロテインキナーゼのホスホトランスフェラーゼ活性の変化を検出することによって、前記被験薬剤が前記プロテインキナーゼと相互作用するかどうか判定するステップ、および、それによって、前記被験薬剤が前記アポトーシス関連プロテインキナーゼを阻害するかどうか判定するステップ、を含む方法。
【請求項５】
表１Ｂから選択される遺伝子によってコードされているアポトーシス関連細胞表面受容体タンパク質の阻害剤を同定する方法であって、表１Ｂから選択される細胞表面受容体遺伝子によってコードされているタンパク質への薬剤の結合に反応して検出可能なシグナルを提供できる第２の構成要素と連結したそのタンパク質を表面上に発現している細胞を提供するステップ；前記タンパク質に結合するのを可能にする条件下で、被験薬剤と接触させるステップ；および、前記薬剤が前記タンパク質に結合しそれを阻害するかどうかを、その化合物による前記タンパク質との相互作用から生成されるシグナルの存在または不在を検出することによって判定するステップ、および、それによって、前記表１Ｂから選択される遺伝子によってコードされているアポトーシス関連細胞表面受容体タンパク質の活性を、前記被験薬剤が阻害するかどうか判定するステップ、を含む方法。
【請求項６】
前記検出可能なシグナルを提供できる第２の構成要素がＧタンパク質であり、かつＧｉ、Ｇｏ、Ｇｓ、Ｇ_１６、Ｇ_１５、Ｇｑ、またはＧ_{１２−１３}のＧタンパク質である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
化学化合物が、表１Ｂから選択される遺伝子によってコードされているアポトーシス関連タンパク質に特異的に結合し、かつこれを阻害するかどうか判定する方法であって、セカンドメッセンジャー反応を生成し、かつ表１Ｂから選択された遺伝子によってコードされているタンパク質を発現する細胞を、タンパク質阻害に適した条件下で、前記化学化合物と接触させるステップ、および前記化学化合物の存在下および不在下で前記セカンドメッセンジャー反応を測定するステップを含み、そのような細胞は、通常は前記タンパク質を発現しないものであり、前記化学化合物の存在下における前記セカンドメッセンジャー反応の変化は、前記化合物が、表１Ｂから選択される遺伝子によってコードされるアポトーシス関連タンパク質を阻害することを示すものである、方法。
【請求項８】
前記セカンドメッセンジャー反応が、塩素イオンチャンネルの活性化、細胞内カルシウムイオンレベルの変化、イノシトールリン酸の遊離、アラキドン酸の遊離、ＧＴＰγＳ結合、ＭＡＰキナーゼの活性化、ｃＡＭＰの蓄積、細胞内カリウムイオンレベルの変化、または、細胞内ナトリウムイオンレベルの変化を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記セカンドメッセンジャー反応が、分泌型アルカリ性ホスファターゼ、ルシフェラーゼ、およびβガラクトシダーゼから好ましくは選択されるレポーター遺伝子活性の変化によって測定される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験薬剤が低分子量有機分子、抗体または抗体フラグメント、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子抑制性ｄｓＲＮＡ、およびリボザイムから選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
試料中の、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの存在を検出する方法であって、
（ａ）ＤＮＡまたはＲＮＡを含有する生物試料を、ハイブリダイゼーション条件下で、表１Ｂに記載の配列を有する核酸の、少なくとも１５ヌクレオチドの断片を含むプローブと接触させるステップ；および
（ｂ）前記プローブと、前記試料中の核酸との間で形成された二本鎖分子を検出するステップ、
を含み、二本鎖分子が検出されることによって、試料中の、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの存在が示される、方法。
【請求項１２】
試料中の、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの存在を検出する方法であって、
（ａ）表１Ｂに記載の配列を有する前記アポトーシス関連ポリペプチドに結合できる抗体を用意するステップ；
（ｂ）抗体抗原複合体の形成を可能にする条件下で、生物試料を前記抗体とともにインキュベートするステップ；および
（ｃ）前記抗体を含む抗体抗原複合体を検出するステップ、
を含み、抗体抗原複合体が検出されることによって、前記試料中の、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドの存在が示される、方法。
【請求項１３】
細胞におけるアポトーシスを変調する方法であって、
（ａ）表１Ｂに記載の配列、またはその相補配列を有する二本鎖核酸を前記細胞内に導入し形質転換させるステップであって、その核酸配列が調節配列に作用可能に連結している、ステップ；および
（ｂ）前記核酸配列が発現される条件下で、前記細胞を培養するステップ、
を含み、それによって、前記細胞におけるアポトーシスを変調する、方法。
【請求項１４】
細胞におけるアポトーシスを変調する方法であって：
（ａ）表１Ｂに記載の配列を有するポリペプチドをコードする二本鎖核酸配列を前記細胞内に導入し形質転換させるステップであって、その核酸配列が調節配列に作用可能に連結している、ステップ；および
（ｂ）前記核酸配列が発現される条件下で、前記細胞を培養するステップ、
を含み、それによって、前記細胞におけるアポトーシスを変調する方法。
【請求項１５】
細胞におけるアポトーシスを変調する方法であって、
（ａ）表１Ｂに記載の配列を有するポリペプチドに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする二本鎖核酸配列を、前記細胞内に導入し形質転換させるステップであって、前記核酸配列が調節配列に作用可能に連結している、ステップ；および
（ｂ）前記核酸配列が発現される条件下で、前記細胞を培養するステップ、
を含み、それによって、前記細胞におけるアポトーシスを変調する方法。
【請求項１６】
細胞におけるアポトーシスを変調する方法であって、
（ａ）リボ核酸（ＲＮＡ）前駆体をコードする核酸配列に作用可能に連結した調節配列を含む単離された核酸分子を、前記細胞内に導入し形質転換させるステップであって、ここで前記前駆体が、
（ｉ）表１Ｂに記載の配列上の連続した１５〜４０ヌクレオチドに同一である１５〜４０ヌクレオチド長の配列を含む第１のステム部分と、
（ｉｉ）表１Ｂに記載の配列上の連続した１５から４０ヌクレオチドに相補的である１５〜４０ヌクレオチド長の配列を含む第２のステム部分と、
（ｉｉｉ）その２つのステム部分を結合するループ部分と、
を含み、かつ、前記第１のステム部分および前記第２のステム部分は互いにハイブリダイズして、二本鎖ステムを形成することができる、ステップ；および
（ｂ）前記核酸配列が発現される条件下で、前記細胞を培養するステップ、
を含み、それによって前記細胞におけるアポトーシスを変調する、方法。
【請求項１７】
前記核酸配列が、表１Ｂに記載の配列またはその相補配列を有する核酸である、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記核酸配列が、表１Ｂに記載の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記核酸が、表１Ｂに記載の配列を有するポリペプチドに対して８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
アポトーシスが低減される、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
アポトーシスが増強される、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
表１Ｂに記載の配列を有する核酸配列によってコードされているＲＮＡ前駆体。
【請求項２３】
請求項２２に記載のＲＮＡ前駆体を、生物活性成分として含む組成物。
【請求項２４】
請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法で形質転換された宿主細胞。
【請求項２５】
抗アポトーシスタンパク質を哺乳動物に与える方法であって、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法で形質転換された哺乳類細胞を、前記哺乳動物に導入することを含む方法。
【請求項２６】
哺乳類組織における異常なアポトーシスを特徴とする疾患または病的状態を治療する方法であって、前記組織を、請求項２２に記載のＲＮＡ前駆体と接触させることを含む方法。
【請求項２７】
前記疾患が癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
活性成分としての表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連核酸および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２９】
活性成分としての表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３０】
活性成分としての表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連核酸に対する抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３１】
活性成分としての表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドに対する抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３２】
哺乳類組織における異常なアポトーシスを特徴とする疾患または病的状態を診断する方法であって、前記組織を、請求項３０または３１に記載の抗体と接触させるステップ、および、抗体／抗原複合体を検出するステップを含み、それが検出されることによって前記疾患または病的状態であることが示される、方法。
【請求項３３】
哺乳類組織における異常なアポトーシスを特徴とする疾患または病的状態を治療する方法であって、前記組織を、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドのアンタゴニストと接触させるステップを含む、方法。
【請求項３４】
哺乳類組織における異常なアポトーシスを特徴とする疾患または病的状態を治療する方法であって、前記組織を、表１Ｂに記載の配列を有するアポトーシス関連ポリペプチドのアゴニストと接触させるステップを含む、方法。
【請求項３５】
哺乳類組織における異常なアポトーシスを特徴とする疾患または病的状態を治療するためのキットであって、
（ａ）表１Ｂに記載の配列を有する核酸によってコードされるポリペプチド；
（ｂ）表１Ｂに記載のヌクレオチド配列を有する核酸；または
（ｃ）（ａ）に記載のポリペプチドのエピトープを認識する抗体
を含むキット。
【請求項３６】
表１Ｂに記載の配列を有する核酸配列をそれぞれ有する少なくとも２つのアポトーシス遺伝子を含むアレイ。
【請求項３７】
前記核酸配列がＤＮＡ配列である、請求項３６に記載のアレイ。
【請求項３８】
前記核酸配列がＲＮＡ配列である、請求項３６に記載のアレイ。
【請求項３９】
表１Ｂに記載の配列を有するポリペプチド配列をそれぞれ有する少なくとも２つのアポトーシスタンパク質を含むアレイ。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１−１】

【図２１−２】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７−１】

【図２７−２】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１−１】

【図３１−２】

【図３２−１】

【図３２−２】

【図３２−３】

【図３３−１】

【図３３−２】

【図３３−３】

【図３４】

【図３５】

【図３６−１】

【図３６−２】

【図３７】

【図３８】

【図３９−１】

【図３９−２】

【図４０】

【図４１】

【図４２−１】

【図４２−２】

【図４２−３】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８−１】

【図４８−２】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４−１】

【図５４−２】

【図５４−３】

【図５４−４】

【図５４−５】

【図５４−６】

【図５４−７】

【図５５】

【公表番号】特表２００６−５１８５９０（Ｐ２００６−５１８５９０Ａ）
【公表日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５００２３５（Ｐ２００６−５００２３５）
【出願日】平成１６年１月２３日（２００４．１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／０００２７１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６５９５９
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【出願人】（５０５２７０８４３）アイルクス　セラピューティクス　リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】