アミノアシルプロドラッグ
本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、並びに、疾患、特に血栓塞栓性疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、並びに、疾患、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロドラッグは、実際の有効成分が遊離する前に、１つまたはそれ以上の段階において、インビボで酵素的および／または化学的な生物変換を受ける有効成分の誘導体である。プロドラッグの残基は、通常、基礎となる有効成分の特性のプロフィールを改善するために使用される［P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)］。これに関して、最良の効果のプロフィールを達成するために、プロドラッグの残基の設計および所望の遊離メカニズムを、個々の有効成分、適応症、作用部位および投与経路と非常に正確に調和させることが必要である。多数の医薬が、基礎となる有効成分と比較して改良されたバイオアベイラビリティーを示すプロドラッグとして投与され、それは、例えば、物理化学的プロフィール、特に、溶解性、能動的または受動的吸収特性または組織特異的分布を改良することにより達成される。プロドラッグに関する広範な文献から言及し得る例は、H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985 である。
【０００３】
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］は、血液凝固の調節において必須の機能を果たすセリンプロテアーゼＸａ因子の、経口で有効な直接的阻害剤である。オキサゾリジノン化合物は、現在、血栓塞栓性障害の予防および処置用の潜在的な新しい有効医薬成分として、綿密な臨床試験を受けている [S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)]。
【化１】
【０００４】
しかしながら、化合物（Ａ）は、水および生理的媒体において限られた溶解性しか有さず、このことは、例えば、有効成分の静脈内投与を困難にしている。従って、上述の媒体において改善された溶解性を有し、同時に、投与後に患者の体内での有効成分（Ａ）の遊離の制御を可能にする、化合物（Ａ）の誘導体またはプロドラッグを同定することが、本発明の目的であった。
【０００５】
ＷＯ２００５／０２８４７３は、経口のバイオアベイラビリティーの上昇に役立つオキサゾリジノンのアシルオキシメチルカルバメートプロドラッグを記載している。ＷＯ０１／００６２２は、イノシン−５'−一リン酸デヒドロゲナーゼのカルバメート阻害剤のアシルプロドラッグを開示している。基礎となる有効成分を多段階の活性化メカニズムにより遊離させるオキサゾリジノン類のアミドプロドラッグのさらなるタイプは、ＷＯ０３／００６４４０に記載されている。
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化２】
［式中、
ｎは、１または２の数であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している］
の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物に関する。
【０００７】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に包含される後述する式の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含される例示的実施態様として後述する化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（後述する式（Ｉ）に包含される化合物が、既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合に）である。
【０００８】
本発明による化合物は、それらの構造によって、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性的に純粋な構成分を既知の方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できる場合、本発明は、全ての互変異性体を含む。
【０００９】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。しかしながら、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１０】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１１】
本発明の目的上、溶媒和物は、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態を表す。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。本発明に関して、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００１２】
本発明に関して、断りのない限り、置換基は、以下の意味を有する：
Ｒ１の意味におけるα−アミノ酸の側鎖の基は、天然産生α−アミノ酸の側鎖の基およびこれらのα−アミノ酸のホモログおよび異性体の側鎖の基の両方を含む。α−アミノ酸は、これに関して、α−アミノ酸は、ＬおよびＤ配置の両方を有し得るか、または、Ｌ体およびＤ体の混合物であり得る。言及し得る側鎖の基の例は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、２−メチルプロパン−１−イル（ロイシン）、１−メチルプロパン−１−イル（イソロイシン）、ブタン−１−イル（ノルロイシン）、フェニル（２−フェニルグリシン）、ベンジル（フェニルアラニン）、ｐ−ヒドロキシベンジル（チロシン）、インドール−３−イルメチル（トリプトファン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、２−ヒドロキシエチル（ホモセリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、メルカプトメチル（システイン）、メチルチオメチル（Ｓ−メチルシステイン）、２−メルカプトエチル（ホモシステイン）、２−メチルチオエチル（メチオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、カルボキシメチル（アスパラギン酸）、２−カルボキシエチル（グルタミン酸）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、４−アミノ−３−ヒドロキシブタン−１−イル（ヒドロキシリジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）、３−ウレイドプロパン−１−イル（シトルリン）である。Ｒ２の意味における好ましいα−アミノ酸の側鎖の基は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）である。Ｌ配置が好ましい。
【００１３】
本発明による化合物中のラジカルが置換されている場合、そのラジカルは、断りのない限り、一置換または多置換されていてよい。本発明に関して、１回より多く出てくる全てのラジカルは、相互に独立の意味を有する。１個または２個の同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００１４】
好ましいのは、式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している、
式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１５】
好ましいのは、また、式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が水素であり、
Ｒ３が水素である、
式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１６】
好ましいのは、また、ｎが２の数である、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、ＸがＮＨである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ２が水素である、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ３が水素である、式（Ｉ）の化合物である。
【００１７】
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関し、それは、以下を特徴とする；
［Ａ］式
【化３】
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化４】
（式中、ｎは上記の意味を有し、
そして、Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化５】
（式中、ｎおよびＱは、上記の意味を有する）
の化合物に変換し、
【００１８】
次いで、後者を、以下の方法に従って反応させる；
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化８】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、そして、
ＸはＯまたはＳである）
の化合物をもたらす、
【００１９】
または、
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化１０】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１１】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物をもたらす、
【００２０】
または、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１２】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１３】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基を常套の方法により除去し、式
【化１４】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物をもたらし、
【００２１】
次いで、塩基の存在下、式
【化１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって、活性化エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくはギ酸アルキル、特に好ましくはギ酸エチルを形成しており、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、式
【化１６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物をもたらし、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する。
【００２２】
式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＸ）の化合物は、それらの塩の形態でも存在できる。これらの塩は、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基での処理により、遊離塩基に変換できる。
【００２３】
ラジカルＲ１中に必要に応じて存在する官能基は、好都合または必要であれば、上記の連続反応において、一時的な保護形態にあってもよい。そのような保護基並びに保護基ＰＧの導入および除去は、これに関して、ペプチド化学から知られている常套の方法により行う［例えば、T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky and A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984 参照]。
【００２４】
必要に応じてＲ１中に存在するそのような保護基は、これに関して、ＰＧの除去と同時に、または、ＰＧの除去前または後の別の反応段階で、除去し得る。
【００２５】
上記方法において好ましく使用されるアミノ保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）である。これらの保護基の除去、および、工程（ＶＩＩＩ）→（Ｘ）における保護基の除去は、常套の方法により、好ましくは、塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸などの強酸と、ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸などの不活性溶媒中で反応させることにより、実施する。
【００２６】
工程（Ａ）＋（ＩＩ）→（ＩＩＩ）および（Ａ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、水素化ナトリウムである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００２７】
工程（ＩＩＩ）＋（ＶＩ）→（Ｖ−Ａ）および（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、エチルジイソプロピルアミンである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００２８】
工程（ＩＩＩ）＋（ＩＶ）→（Ｖ）は、好ましくは、溶媒としてのＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中で行う。この反応は、一般的に、０℃ないし＋５０℃の温度範囲で、好ましくは＋２０℃ないし＋５０℃で、大気圧下で行う。この反応は、また、超音波処理により有利に実施できる。
【００２９】
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）および（Ｘ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献中の常套の方法により製造できる。化合物（Ａ）の製造は、実施例に記載されている。
【００３０】
本発明による化合物の製造は、以下の合成スキームにより例示説明できる：
スキーム
【化１８】
【００３１】
本発明による化合物およびそれらの塩は、有効成分化合物（Ａ）の有用なプロドラッグである。一方では、それらは、例えばｐＨ４で良好な安定性を示し、他方では、それらはインビボで、有効成分化合物（Ａ）への効率的な変換を示す。本発明による化合物は、さらに、水および他の生理的に耐容される媒体中での良好な溶解性を有し、それらを特に静脈内投与での治療的使用に適するものにしている。
【００３２】
本発明はさらに、障害、好ましくは血栓塞栓性障害および／または血栓塞栓性合併症の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３３】
本発明に関して、「血栓塞栓性障害」には、特に、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）または非ＳＴ上昇型心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術または大動脈冠動脈バイパス術などの冠動脈介入後の再閉塞および再狭窄、末梢動脈閉塞疾患、肺栓塞症、深部静脈血栓および腎静脈血栓、一過性虚血発作、並びに、血栓性および血栓塞栓性卒中などの障害が含まれる。
【００３４】
従って、これらの物質は、例えば心房細動などの急性、間欠性または持続性心不整脈を有する患者、および、電気的除細動を受けている者、また、心臓弁疾患を有するか、または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば、脳虚血、卒中および全身性血栓塞栓症および虚血の予防および処置にも適する。加えて、本発明による化合物は、汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の処置に適する。
【００３５】
血栓塞栓性合併症は、また、微小血管障害性溶血性貧血、血液透析などの体外循環、および、心臓代用弁と関連して起こる。
【００３６】
さらに、本発明による化合物は、アテローム硬化性血管障害および炎症障害、例えば筋骨格系のリウマチ性障害の予防および／または処置にも、さらに同様に、アルツハイマー病の予防および／または処置にも適する。さらに、本発明による化合物は、腫瘍成長および転移形成の阻害、微小血管障害、加齢に伴う黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症および他の微小血管の障害、また、例えば、腫瘍患者における、特に大きい外科手術または化学療法もしくは放射線治療を受けている者における、静脈血栓塞栓症などの血栓塞栓性合併症の予防および処置にも用いることができる。
【００３７】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３８】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３９】
本発明は、さらに、本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法に関する。
【００４０】
本発明は、さらに、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる有効成分を含む医薬に関する。好ましく言及し得る適当な組合せの有効成分の例は、以下のものである：
・脂質低下剤、特にＨＭＧ−ＣｏＡ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ）リダクターゼ阻害剤；
・冠血管治療剤／血管拡張剤、特にＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤；ＡＩＩ（アンジオテンシンＩＩ）受容体アンタゴニスト；β−アドレナリン受容体アンタゴニスト；アルファ−１−アドレナリン受容体アンタゴニスト；利尿剤；カルシウムチャネル遮断剤；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の上昇をもたらす物質、例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤；
・プラスミノーゲン活性化剤（血栓溶解剤／線維素溶解剤）および血栓溶解／線維素溶解を高める化合物、例えば、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子の阻害剤（ＰＡＩ阻害剤）またはトロンビン活性型線維素溶解阻害因子の阻害剤（ＴＡＦＩ阻害剤）；
・凝血活性を有する物質（抗凝血剤）；
・血小板凝集阻害性物質（血小板凝集阻害剤）；
・フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト）；
・並びに抗不整脈薬。
【００４１】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用に関する。
【００４２】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口、非経腸、肺または鼻の経路で、投与できる。本発明による化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
【００４３】
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速におよび／または改変された様式で送達し、本発明による化合物を結晶および／または無定形および／または溶解形態で含有する投与形であり、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、不溶であるか、または、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御する被覆を有する錠剤）、口中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤などである。
【００４４】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤の形態の注射および点滴用製剤である。
【００４５】
他の投与経路に適するのは、例えば、粉末吸入器または噴霧器などの吸入用医薬形、または、点鼻薬、液またはスプレーなどの、鼻腔投与できる医薬形である。
非経腸投与、特に静脈内投与が好ましい。
【００４６】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の隠蔽剤が含まれる。
【００４７】
一般に、非経腸投与で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになり、経口投与では、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００４８】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり、一方、上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別投与に分割するのが望ましいことがある。
【００４９】
以下の例示的実施態様は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に基づく。
【実施例】
【００５０】
Ａ. 実施例
略号および頭字語：
【表１】
【００５１】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１：装置：DAD 検出を備えたHP 1100；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→６.５分９０％Ｂ→６.７分２％Ｂ→７.５分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５２】
方法２：装置：DAD 検出を備えたHP 1100；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→９分０％Ｂ→９.２分２％Ｂ→１０分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５３】
方法３：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD；カラム：Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分,２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５４】
方法４：装置：Micromass GCT, GC6890；カラム：Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm；一定のヘリウム流速：０.８８ｍｌ／分；オーブン：６０℃；入口：２５０℃；グラジエント：６０℃（０.３０分間維持）、５０℃／分→１２０℃、１６℃／分→２５０℃、３０℃／分→３００℃（１.７分間維持）。
【００５５】
方法５：カラム：GROM-SIL 120 ODS-4 HE, 10 μM, 250 mm x 30 mm；流速：５０ｍｌ／分；移動相およびグラジエントのプログラム：アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０（０−３分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０→９５：５（３−２７分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸９５：５（２７−３４分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０（３４−３８分）；温度：２２℃；ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
【００５６】
方法６：装置：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分。２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５７】
方法７（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Waters (Micromass) Quattro Micro；ＨＰＬＣ装置タイプ：Agilent 1100 Series；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→３.０分１０％Ａ→４.０分１０％Ａ→４.０１分１００％Ａ（流速２.５ｍｌ）→５.００分１００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５８】
方法８（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.０１分９０％Ａ；流速：２ｍｌ／分；；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５９】
方法９（分析的ＨＰＬＣ）：装置：HP1090 Series II；カラム：Waters XTerra C18-5, 3.9 mm x 150 mm WAT 186000478；移動相Ａ：水２.５ｌ中の７０％濃度の過塩素酸１０ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分２０％Ｂ→１分２０％Ｂ→４分９０％Ｂ→６分９０％Ｂ→８分２０％Ｂ。温度：４０℃；流速：１ｍｌ／分。
【００６０】
方法１０（分析的ＨＰＬＣ）：装置：HP 1090 Series II；カラム：Merck Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 mm x 4.6 mm; precolumn Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e, 5-4.6 mm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２０％Ｂ→０.５分２０％Ｂ→３分９０％Ｂ→３.５分９０％Ｂ→３.５１分２０％Ｂ→４分２０％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；カラム温度：４０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６１】
方法１１（分取ＨＰＬＣ）：装置：ＵＶ検出器を備えた Gilson, カラム: Kromasil C18, 5μm/ 250 mm x 20 mm（流速：２５ｍｌ／分）；移動相Ａ：水（０.０１％トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０.０１％トリフルオロ酢酸）；グラジエント：０分５−２０％Ｂ、１０分−１５分５−２０％Ｂ、４５分９０％Ｂ、５０分９０％Ｂ；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；流速：２５ｍｌ／分。
【００６２】
方法１２（分取ＨＰＬＣ）：装置：ＵＶ検出器を備えた Gilson, カラム: YMC ODS AQ C18, 10μm/ 250 mm x 30 mm （流速：５０ｍｌ／分）；移動相Ａ：水（０.０１％トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０.０１％トリフルオロ酢酸）；グラジエント：０分５−２０％Ｂ、１０分−１５分５−２０％Ｂ、４５分９０％Ｂ、５０分９０％Ｂ；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；流速：５０ｍｌ／分。
【００６３】
方法１３（ＬＣ−ＭＳ）：装置：Waters UPLC Acquity を備えた Micromass Quattro Premier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50 mm x 1 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.３３ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６４】
ＮＭＲ分光法：
ＮＭＲ測定は、プロトン周波数４００.１３ＭＨｚまたは５００.１３ＭＨｚで実施した。サンプルを通常はＤＭＳＯ−ｄ６に溶解した；温度：３０２Ｋ。
【００６５】
出発化合物：
使用した出発物質は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］であった。
【化１９】
【００６６】
実施例１Ａ
５−クロロチオフェン−２−カルボニルクロリド
【化２０】
塩化オキサリル１３７ｍｌ（１.５７ｍｏｌ）を、ジクロロメタン３０７ｍｌ中の５−クロロチオフェン−２−カルボン酸５１.２ｇ（０.３１５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。ＤＭＦ２滴の添加後、混合物を室温で１５時間撹拌した。次いで、溶媒および過剰の塩化オキサリルをロータリーエバポレーターで除去した。残渣を減圧下で蒸留した。生成物は、７４−７８℃および４−５ｍｂａｒの圧力で沸騰した。これにより、油状物５０.５ｇ（理論値の８７％）を得、これは、冷蔵庫での保存で凝固した。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3, δ/ppm): 7.79 (d, 1H), 7.03 (d, 1H).
GC/MS (方法 4): Rt = 5.18 分.
MS (EI+, m/z): 180/182/184 (2 35Cl/37Cl) M+.
【００６７】
実施例２Ａ
（（Ｓ）−２,３−ジヒドロキシプロピル）−５−クロロチオフェン−２−カルボキサミド
（C.R. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-10300111-A1 (2004)より)
【化２１】
１３−１５℃で、重炭酸ナトリウム４６１ｇ（４.３５ｍｏｌ）および（２Ｓ）−３−アミノプロパン−１,２−ジオール塩酸塩３５０ｇ（３.８５ｍｏｌ）を、先ず、水２.１ｌに加え、２−メチルテトラヒドロフラン９５０ｍｌを添加した。１５−１８℃で冷却しながら、トルエン１８０ｍｌ中の５−クロロチオフェン−２−カルボニルクロリド（実施例１Ａの化合物）５３５ｇ（２.９５ｍｏｌ）をこの混合物に２時間かけて滴下して添加した。後処理に、相を分離し、全部で１.５ｌのトルエンを数段階で有機相に添加した。沈殿した生成物を吸引濾過し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥させた。これにより、生成物５９３.８ｇ（理論値の９２％）を得た。
【００６８】
実施例３Ａ
（（Ｓ）−３−ブロモ−２−ヒドロキシプロピル）−５−クロロチオフェン−２−カルボキサミド
（C.R. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-10300111-A1 (2004)より)
【化２２】
３０分間かけて、酢酸中の３３％濃度の臭化水素の溶液３０１.７ｍｌを、２１−２６℃で、氷酢酸２５０ｍｌ中の実施例２Ａの化合物１００ｇ（０.４２３ｍｏｌ）の懸濁液に添加した。次いで無水酢酸４０ｍｌを添加し、反応混合物を６０−６５℃で３時間撹拌した。次いで、２０−２５℃で、メタノール９６０ｍｌを３０分間かけて添加した。反応混合物を還流下で２.５時間撹拌し、次いで２０−２５℃で終夜撹拌した。後処理に、溶媒を約９５ｍｂａｒの減圧下で蒸留した。ｎ−ブタノール５０ｍｌおよび水３５０ｍｌを残った懸濁液に添加した。沈殿した生成物を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、生成物８９.８ｇ（理論値の７１％）を得た。
【００６９】
実施例４Ａ
５−クロロ−Ｎ−［（２Ｓ）−オキシラン−２−イルメチル］チオフェン−２−カルボキサミド
【化２３】
粉末状炭酸カリウム１５５ｇ（１.１２ｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ５００ｍｌ中の実施例３Ａの化合物５０ｇ（０.１６７ｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で３日間撹拌した。次いで、無機塩を珪藻土層で吸引濾過し、各場合で１００ｍｌのＴＨＦで２回洗浄し、濾液をロータリーエバポレーターで室温で濃縮した。これにより、生成物３６ｇ（理論値の８１％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.81 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.29-3.22 (m, 1H), 3.10-3.06 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.57-2.54 (m, 1H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.52 分.
MS (DCI, NH3, m/z): (35Cl/37Cl) 218/220 (M+H)+, 235/237 (M+NH4)+.
【００７０】
実施例５Ａ
Ｎ,Ｎ−ジベンジル−２−フルオロ−４−ヨードアニリン
【化２４】
水１００ｍｌおよびジクロロメタン２００ｍｌの混合物中、２−フルオロ−４−ヨードアニリン２４.３７ｇ（０.１０３ｍｏｌ）、臭化ベンジル３１.８ｍｌ（０.２６７ｍｏｌ）、炭酸ナトリウム２３.９８ｇ（０.２２６ｍｏｌ）およびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージド１.９ｇ（５.１４ｍｍｏｌ）を還流で６日間加熱した。室温に冷却後、相を互いに分離した。有機相を水および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた残渣をシリカゲルの吸引濾過により、移動相シクロヘキサンを使用して精製した。これにより、表題化合物３５ｇ（理論値の８２％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.48 (1H, dd), 7.32-7.21 (m, 11H), 6.69 (dd, 1H), 4.33 (s, 4H).
HPLC (方法 1): Rt = 5.87 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 418 (M+H)+.
【００７１】
実施例６Ａ
４−［４−（ジベンジルアミノ）−３−フルオロフェニル］モルホリン−３−オン
【化２５】
実施例５Ａの化合物１.５ｇ（３.５９ｍｍｏｌ）を無水ジオキサン２０ｍｌに溶解し、モルホリノン０.４５ｇ（４.４９ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）１３７ｍｇ（０.７１９ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム１.５３ｇ（７.１９ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン１５３μｌ（１.４４ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。還流器具を、僅かな減圧とアルゴンによる換気を繰り返し適用することにより不活性化した。反応混合物を還流で１５時間加熱した。この期間の後、混合物を室温に放冷した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄した。抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いで濾過し、濾液から溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルの吸引濾過により、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル１：１を使用して精製した。これにより、表題化合物１.３８ｇ（理論値の９８％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.32-7.28 (m, 9H), 7.26-7.20 (m, 2H), 7.00-6.92 (m, 2H), 4.33 (s, 4H), 4.15 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.55 (dd, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 4.78 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 391 (M+H)+.
【００７２】
実施例７Ａ
４−（４−アミノ−３−フルオロフェニル）モルホリン−３−オン
【化２６】
方法１：
実施例６Ａの化合物７００ｍｇ（１.７９ｍｍｏｌ）をエタノール７０ｍｌに溶解し、パラジウム／活性炭（１０％）９５ｍｇを添加した。混合物を室温で、水素圧１ｂａｒで、１時間水素化した。次いで触媒を少量の珪藻土で濾過し、濾液をロータリーエバポレーターで濃縮した。これにより、表題化合物３７８ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.04 (dd, 1H), 6.87 (dd, 1H), 6.73 (dd, 1H), 5.17 (s, broad, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.62 (dd, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 0.93 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 211 (M+H)+, 228 (M+NH4)+.
【００７３】
方法２：
アルゴン下、ジオキサン３００ｍｌ中の２−フルオロ−４−ヨードアニリン２９.６ｇ（１２５ｍｍｏｌ）、モルホリン−３−オン［J.-M. Lehn, F. Montavon, Helv. Chim. Acta 1976, 59, 1566-1583］１５.８ｇ（１５６ｍｍｏｌ、１.２５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）９.５ｇ（５０ｍｍｏｌ、０.４当量）、リン酸カリウム５３.１ｇ（２５０ｍｍｏｌ、２当量）およびＮ,Ｎ‘−ジメチルエチレンジアミン８.０ｍｌ（７５ｍｍｏｌ、０.６当量）の懸濁液を、還流下で終夜撹拌した。室温に冷却後、反応混合物を珪藻土層で濾過し、残渣をジオキサンで洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、ジクロロメタン／メタノール１００：１→１００：３）により精製した。これにより、表題化合物２４ｇ（理論値の７４％）を得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 0.87 分;
MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 7.05 (dd, 1H), 6.87 (dd, 1H), 6.74 (dd, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.63 (dd, 2H).
【００７４】
実施例８Ａ
５−クロロ−Ｎ−［（２Ｒ）−３−｛［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］アミノ｝−２−ヒドロキシプロピル］チオフェン−２−カルボキサミド
【化２７】
過塩素酸マグネシウム６００ｍｇ（２.６９ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１０ｍｌ中の実施例７Ａの生成物３７６ｍｇ（１.７９ｍｍｏｌ）および実施例４Ａの化合物４２９ｍｇ（１.９７ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で１５時間撹拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法５）により精製した。これにより、表題化合物５０３ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.61 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.11 (dd, 1H), 6.97 (dd, 1H), 6.73 (dd, 1H), 5.33 (t, 1H), 5.14 (d, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.87-3.79 (m, 1H), 3.63 (dd, 2H), 3.39-3.22 (m, 2H, 部分的に水のシグナルが重なる), 3.21-3.15 (m, 1H), 3.08-3.02 (m, 1H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.75 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 428/430 (35Cl/37Cl) (M+H)+, 445/447 (M+NH4)+.
【００７５】
実施例９Ａ
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２８】
方法１：
４−ジメチルアミノピリジン２.７ｍｇ（０.０２２ｍｍｏｌ）を、ブチロニトリル１０ｍｌ中の実施例８Ａの生成物４７８ｍｇ（１.１２ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール３６３ｍｇ（２.２４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を７０℃で加熱した。３日後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。生成物を残渣から分取ＨＰＬＣ（方法５）により単離した。これにより、表題化合物３４４ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.98 (t, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 4.91-4.84 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.98 (dd, 2H), 3.80 (dd, 1H), 3.76 (dd, 2H), 3.68-3.57 (m, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.82 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 471/473 (35Cl/37Cl) (M+NH4)+.
【００７６】
方法２：
０℃で、実施例１Ａの化合物７.９ｇ（４３ｍｍｏｌ、１.２ｅｑ.）を、ピリジン２２４ｍｌ中の実施例６２Ａの化合物１１.２ｇ（３６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。３０分後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水およびジクロロメタンに取る。相分離後、水相をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンと混合し、濾過し、減圧下で乾燥させ、表題化合物７.４ｇ（理論値の４５％）を得た。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、ジクロロメタン／メタノール１００：１→１００：２）により精製し、さらに１.９ｇ（理論値の１２％）の表題化合物を得た。
HPLC (方法 2): Rt = 3.74 分;
MS (ESIpos): m/z = 454 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.94 (t, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.92-4.84 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.81 (dd, 1H), 3.76 (t, 2H), 3.67-3.56 (m, 2H);
融点: 177℃, ΔH 84 Jg-1 および 183℃, ΔH 7 Jg-1.
【００７７】
実施例１０Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロブタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２９】
アルゴン下、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］４００ｍｇ（０.８８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ４０ｍｌに溶解した。水素化ナトリウム（純度９８％）１.６７７ｇ（１.７６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで、反応温度を室温に維持しながら、クロロブタノイルクロリド４６１ｍｇ（１１.９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで、少量の水を添加し、続いて混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液／酢酸エチル１：１に注いだ。相を分離し、酢酸エチル相を、まず重炭酸ナトリウム溶液で、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、続いて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。エノール化の後に形成された、得られたジアシル化された化合物を、ジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液５ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標的化合物２０ｍｇ（理論値の４％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.8 分;
LC-MS (方法 7): Rt = 1.2 分; m/z = 558 (M+H)+.
【００７８】
実施例１１Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロペンタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化３０】
アルゴン下、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］１００ｍｇ（０.２２ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した。水素化ナトリウム（純度９８％）１１ｍｇ（０.４４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで、反応温度を室温に維持しながら、クロロペンタノイルクロリド４６１ｍｇ（２.９８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで飽和塩化アンモニウム水溶液／酢酸エチル１：１に注いだ。相を分離し、酢酸エチル相をまず重炭酸ナトリウム溶液で、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。エノール化の後に形成された、得られたジアシル化された化合物を、塩化水素の飽和溶液およびジクロロメタン２ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで混合物を減圧下で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標題化合物２０ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.9 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.4 分; m/z = 572 (M+H)+.
【００７９】
実施例１２Ａ
Ｎ−（４−アミノブタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化３１】
工程ａ）：
アルゴン雰囲気下、化合物（Ａ）０.５ｇ（１.１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２７ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム７９ｍｇ（３.３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、ＤＭＦ３ｍｌに溶解した、新たに製造した実施例１４Ａの化合物４.１４ｇ（１１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温でさらに１５分間撹拌し、次いでメタノール１ｍｌを添加した。混合物を１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液でもう２回洗浄した。次いで、有機相を濃縮し、残渣を室温でジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液５ｍｌと２０時間撹拌し、最初に形成されたエノールエステルを開裂した。次いで、混合物を濃縮し、残った残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより移動相トルエン／酢酸エチルを用いて精製し、混合比を１：１から１：２を経て１：３に高めた。適当な画分を濃縮し、二重に保護された中間体１２４ｍｇ（理論値の８％）を泡状物として得た。
HPLC (方法 10): Rt = 2.3 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 2.33 分; m/z = 793 (M+H)+.
【００８０】
工程ｂ）：
室温で、上記で得られた中間体１１８ｍｇ（０.１４９ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸６ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで、温度を約２０℃で維持しながら、混合物を高真空下で濃縮した。残渣をｐＨ３に調節した水性塩酸５０ｍｌに取り、ジクロロメタン７５ｍｌを溶液に添加した。振盪により混合物を混合し、次いで水相を分離し、高真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、濃縮し、次いで１Ｎ塩酸から凍結乾燥した。収量：５９ｍｇ（理論値の６９％）
HPLC (方法 10): Rt = 0.98 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 0.98 分; m/z = 539 (M+H)+.
【００８１】
実施例１３Ａ
Ｎ−（５−アミノペンタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化３２】
表題化合物は、実施例１２Ａと同様に、化合物（Ａ）および実施例１９Ａの化合物から製造できる。
【００８２】
実施例１４Ａ
ベンジル（４−クロロ−４−オキソブチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化３３】
製造は、実施例１９Ａと同様に、４−アミノ酪酸から出発して実施した。
【００８３】
実施例１５Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオ−Ｓ−酸
【化３４】
表題化合物を、Ｂｏｃ−バリンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８４】
実施例１６Ａ
［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エタンチオ−Ｓ−酸
【化３５】
表題化合物を、Ｂｏｃ−グリシンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８５】
実施例１７Ａ
（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサンチオ−Ｓ−酸
【化３６】
表題化合物を、ビス−Ｂｏｃ−リジンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８６】
実施例１８Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパンチオ−Ｓ−酸
【化３７】
表題化合物を、Ｂｏｃ−アラニンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８７】
実施例１９Ａ
ベンジル（５−クロロ−５−オキソペンチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化３８】
５−アミノ吉草酸１０ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）、ｐ−アニスアルデヒド１７.４ｇ（１２８ｍｍｏｌ）および硫酸マグネシウム１０.３ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）を、エタノール３３０ｍｌに取り、還流下で１時間加熱した。混合物を濾過し、フィルターの残渣をエタノールで洗浄し、次いで、水素化ホウ素ナトリウム１.９４ｇ（５１.２ｍｍｏｌ）を少しずつ１５分間かけて溶液に添加した。先ず、水１０ｍｌを添加し、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１２８ｍｌを添加した。５分後に、混合物を水３００ｍｌで希釈し、次いで各場合で酢酸エチル２００ｍｌで３回抽出した。４Ｍ塩酸を使用して水相をｐＨ２に調節し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相アセトニトリル／水／酢酸５：１：０.１を使用して精製した。適当な画分を濃縮し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルでトリチュレートした。次いで、残渣を吸引濾過し、高真空下で乾燥させた。これにより、ｐ−メトキシベンジル保護アミノ酸９.１ｇ（理論値の４５％）を得た。
【００８８】
そのアミノ酸を１.６ｌのジオキサン／水１：１に取り、水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ１０に調節し、次いで、クロロ炭酸ベンジル１２.９７ｇ（７６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。室温で１５分間撹拌した後、ジオキサンを減圧下で除去し、２Ｍ塩酸を使用して残った溶液をｐＨ２に調節した。混合物を酢酸エチルで抽出し、次いで有機相を水で２回洗浄した。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これに続き、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相アセトニトリルを使用して精製した。適当な画分を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、保護アミノ酸５.６ｇ（理論値の３８％）を得た。
LC-MS (方法 6): Rt = 2.47 分; m/z = 372 (M+H)+.
【００８９】
５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝吉草酸５.６ｇ（１５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、塩化チオニル２.２ｍｌを添加した。混合物を還流下で３０分間加熱した。次いで混合物を減圧下で濃縮し、さらなるジクロロメタンを残渣に添加し、混合物を再度濃縮した。残った物は、粘性の油状物であり、それを高真空下で乾燥させた。これにより、標題化合物５.７ｇ（理論値の９８％）を得、これをさらに精製および特徴解析せずに、さらに反応させた。
【００９０】
例示的実施態様：
カルボン酸のセシウム塩または適切に保護されたアミノ酸誘導体を製造するための一般的方法１：
適当なカルボン酸１ｍｍｏｌをジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌの混合物に溶解し、炭酸セシウム０.５ｍｍｏｌを添加する。これに続き、凍結乾燥する。
【００９１】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物を製造するための一般的方法２：
【化３９】
アミノ酸誘導体のウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物は、購入できるか、または、文献の方法：M. Johnston et al. J.Org.Chem. 1985, 50, 2200; W.D. Fuller et al. J.Am.Chem.Soc. 1990, 112, 7414; S. Mobasheri et al. J.Org.Chem. 1992, 57, 2755 に従って製造できる。
【００９２】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを製造するための一般的方法３：
【化４０】
アミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルは、購入できるか、または、ペプチド化学の標準的な方法により製造できる。
【００９３】
実施例１
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−４−オキソブチルグリシネート塩酸塩
【化４１】
表題化合物は、実施例２および２５と同様に、実施例１０Ａの化合物およびＢｏｃ−グリシンから製造できる。
【００９４】
実施例２
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルグリシネート塩酸塩
【化４２】
実施例２５の化合物５ｍｇを、ｐＨ３に調節した水性塩酸に溶解し、続いて凍結乾燥することにより、表題化合物を製造した。収量：４.４ｍｇ（理論値の９９％）
HPLC (方法 10): Rt = 1.3 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.08 分; m/z = 611 (M+H)+.
【００９５】
実施例３
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルＬ−バリネート塩酸塩
【化４３】
実施例２および２５と同様に、実施例１１Ａの化合物およびＢｏｃ−バリンから、表題化合物を製造できる。
【００９６】
実施例４
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化４４】
実施例２６の化合物７.４ｍｇをｐＨ３に調節した水性塩酸に溶解し、続いて凍結乾燥することにより、表題化合物を製造した。収量：６.４ｍｇ（定量的）
HPLC (方法 10): Rt = 1.6 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.52 分; m/z = 669 (M+H)+.
【００９７】
実施例５
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）アミノエタンチオエート塩酸塩
【化４５】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１６Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【００９８】
実施例６
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２,６−ジアミノヘキサンチオエート二塩酸塩
【化４６】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１７Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【００９９】
実施例７
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノプロパンチオエート塩酸塩
【化４７】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１８Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【０１００】
実施例８
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−４−オキソブチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化４８】
実施例４および２６と同様に、実施例１０Ａおよび１５Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【０１０１】
実施例９
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ブタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４９】
実施例２３と同様に、実施例１２Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グリシンを使用して、表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により、表題化合物を生成させられる。
【０１０２】
実施例１０
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ペンタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５０】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グリシンを使用して、表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を使用する複分解により、表題化合物を生成させられる。
【０１０３】
実施例１１
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−プロリンアミド塩酸塩
【化５１】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−プロリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、表題化合物を、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により生成させることができる。
【０１０４】
実施例１２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化５２】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ビス−Ｂｏｃ−ヒスチジンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０５】
実施例１３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−バリンアミド塩酸塩
【化５３】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−バリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０６】
実施例１４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−リジンアミド塩酸塩
【化５４】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ビス−Ｂｏｃ−リジンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０７】
実施例１５
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−スレオニルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５５】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−スレオニンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０８】
実施例１６
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−チロシンアミド塩酸塩
【化５６】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−チロシンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０９】
実施例１７
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アスパルトアミド塩酸塩
【化５７】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−アスパラギンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１０】
実施例１８
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−フェニルアラニンアミド塩酸塩
【化５８】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−フェニルアラニンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１１】
実施例１９
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−グルタムアミド塩酸塩
【化５９】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グルタミンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１２】
実施例２０
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−グルタミン塩酸塩
【化６０】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ｔｅｒｔ−ブチルＢｏｃ−グルタメートを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１３】
実施例２１
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−セリルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６１】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−セリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１４】
実施例２２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ロイシンアミド塩酸塩
【化６２】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−ロイシンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１５】
実施例２３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソブチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化６３】
工程ａ）：
実施例１２Ａの化合物５９ｍｇ（０.１０３ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ１５ｍｌに加えた。次いで、Ｎ,１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ヒスチジン５１ｍｇ（０.１４４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール１９ｍｇ（０.１２３ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ‘−エチルカルボジイミド塩酸塩２４ｍｇ（０.１２３ｍｍｏｌ）並びにエチルジイソプロピルアミン１２ｍｇを添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、混合物を飽和塩化アンモニウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、モノ−Ｂｏｃ−保護中間体の泡状物６６ｍｇ（理論値の５５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.2 分
LC-MS (方法 13): Rt = 0.93 分; m/z = 776 (M+H)+
【０１１６】
工程ｂ）：
モノ−Ｂｏｃ−保護中間体６６ｍｇ（０.０８５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液３ｍｌに溶解し、室温で３０分間振盪した。得られた沈殿を吸引濾過し、母液で抽出した。水相を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、濃縮し、残渣を１Ｎ塩酸から凍結乾燥した。これにより、表題化合物３ｍｇ（理論値の４％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.07 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1 分; m/z = 676 (M+H)+.
【０１１７】
実施例２４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−アスパラギン塩酸塩
【化６４】
実施例２３と同様に、適当な出発物質から、表題化合物を製造できる。
【０１１８】
実施例２５
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルグリシネートトリフルオロ酢酸塩
【化６５】
工程ａ）：
実施例１１Ａの化合物４８ｍｇ（０.０８４ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−グリシンのセシウム塩（Ｂｏｃ−グリシンから、一般的方法１に従って製造した）７７ｍｇ（０.２５２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した。３時間６０℃で撹拌した後、もう一度同量のセシウム塩を添加し、混合物を６０℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を飽和水性塩化アンモニウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相として、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノール１５：５：１を使用して精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させ、次いで、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、Ｂｏｃ保護中間体１０ｍｇ（理論値の１６％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.9 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.98 分; m/z = 711 (M+H)+.
【０１１９】
工程ｂ）：
保護化合物９ｍｇ（０.０１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１.５ｍｌに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.５ｍｌを添加し、次いで、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をジオキサン／水から凍結乾燥した。これにより、表題化合物８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.3 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 0.83 分; m/z = 611 (M+H)+.
【０１２０】
実施例２６
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエートトリフルオロ酢酸塩
【化６６】
工程ａ）：
実施例１１Ａの化合物４７ｍｇ（０.０８２ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオ−Ｓ−酸のセシウム塩（実施例１５Ａから一般的方法１に従い製造した）９０ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２ｍｌに溶解した。６０℃で３時間撹拌した後、もう一度同量のセシウム塩を添加し、混合物を６０℃で終夜撹拌した。混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相として、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノール１５：５：１を使用して精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させた。この精製工程を２回繰り返した。次いで、残った残渣を再度分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させた。これにより、Ｂｏｃ−保護中間体７ｍｇ（理論値の１１％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 2.3 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 1.43 分; m/z = 769 (M+H)+.
【０１２１】
工程ｂ）：
保護化合物７ｍｇ（０.００９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍｌに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１ｍｌを添加し、次いで、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これにより、表題化合物６.８ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.6 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.24 分; m/z = 669 (M+H)+.
【０１２２】
Ｂ. 溶解性、安定性および遊離挙動の測定
ａ）溶解度の決定：
試験物質を水または希塩酸（ｐＨ４）に懸濁する。この懸濁液を室温で２４時間振盪する。２２４０００ｇで３０分間の超遠心の後、上清をＤＭＳＯで希釈し、ＨＰＬＣにより分析する。ＤＭＳＯ中の試験化合物の２点較正プロットを定量に使用する。
【０１２３】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1315A)、quat. ポンプ (G1311A)、オートサンプラー CTC HTS PAL、脱気装置(G1322A) およびカラムサーモスタット (G1316A) を備えた Agilent 1100; カラム: Zorbax Extend-C18 3.5 μ；温度：４０℃；移動相Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：０.７ｍｌ／分；グラジエント：０−０.５分９８％Ａ、２％Ｂ；勾配０.５−４.５分１０％Ａ、９０％Ｂ；４.５−６分１０％Ａ、９０％Ｂ；勾配６.５−６.７分９８％Ａ、２％Ｂ；６.７−７.５分９８％Ａ、２％Ｂ。
【０１２４】
ｂ）様々なｐＨ値のバッファー中での安定性：
試験物質０.２５ｍｇを、２ｍｌのＨＰＬＣバイアルに量り入れ、アセトニトリル０.５ｍｌを添加する。物質を、サンプル容器を超音波浴に約１０秒間置くことにより溶解させる。次いで、各バッファー溶液０.５ｍｌを添加し、サンプルを再度超音波浴で処理する。
【０１２５】
用いるバッファー溶液：
ｐＨ４.０：Millipore 水１ｌを、１Ｎ塩酸でｐＨ４.０に調節する；
ｐＨ７.４：塩化ナトリウム９０ｇ、リン酸二水素カリウム１３.６１ｇおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液８３.３５ｇを、Millipore 水で１ｌとし、次いで１：１０に希釈する。
試験溶液１０μｌ分を、ＨＰＬＣにより、未変化の試験物質の含有量について、３７℃で２４時間にわたり毎時間分析する。適切なピークのパーセントの面積を定量に使用する。
【０１２６】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 125 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；移動相Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント：
０−１.０分９８％Ａ、２％Ｂ→１.０−１３.０分５０％Ａ、５０％Ｂ→１３.０−１７.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１７.０１８.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１８.０−１９.５９８％Ａ、２％Ｂ→１９.５−２３.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１２７】
ｃ）ラット血漿およびヒト血清におけるインビトロの安定性（ＨＰＬＣ検出）：
物質０.５ｍｇを１ｍｌのジメチルスルホキシド／水１：１に溶解する。このサンプル溶液５００μｌをラット血漿５００μｌと３７℃で混合し、振盪する。最初のサンプル（１０μｌ）をすぐにＨＰＬＣ分析用に取る。インキュベーションの開始後２時間までの期間に、さらなるアリコートを２、５、１０、３０、６０および９０分後に取り、各試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の含有量を決定する。
【０１２８】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント：
０−３.０分６９％Ａ、３１％Ｂ→３.０−１８.０分６９％Ａ、３１％Ｂ→１８.０−２０.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→２０.０−２１.０９０％Ａ、１０％Ｂ→２１.０−２２.５.０分９８％Ａ、２％Ｂ→２２.５−２５.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２４８ｎｍ。
【０１２９】
ｄ）ラットおよびヒト血漿におけるインビトロの安定性（ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ検出）：
所定の血漿体積（例えば２.０ｍｌ）を、水浴中の密閉試験管で３７℃に温める。意図した温度に達した後、所定の量の試験物質を溶液（溶媒の体積は、血漿体積の２％以下である）として添加する。血漿を振盪し、最初のサンプル（５０−１００μｌ）をすぐに取る。次いで４−６個のさらなるアリコートを、インキュベーション開始後２時間までの期間中に取る。
【０１３０】
アセトニトリルを血漿サンプルに添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法により定量的に測定する。
ヘパリン化ラットまたはヒト血液における安定性の決定は、血漿について記載した通りに実施する。
【０１３１】
ｅ）Wistar ラットにおけるｉ.ｖ.薬物動態：
物質投与の前日に、実験動物（オスの Wistar ラット、体重２００−２５０ｇ）の頸静脈に、血液を得るためのカテーテルを、イソフルラン（登録商標）麻酔下で移植する。
実験当日、所定の用量の試験物質を、Hamilton（登録商標）ガラスシリンジを使用して、溶液として尾静脈に投与する（ボーラス投与、投与期間＜１０秒）。血液サンプル（８−１２時点）を、カテーテルを通して、物質投与後２４時間の期間にわたり連続的に取る。ヘパリン処理管中でサンプルを遠心分離することにより、血漿を得る。アセトニトリルを時点毎に所定の血漿体積に添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質、および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法を使用して定量的に測定する。
【０１３２】
測定される血漿濃度を使用して、試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔ１／２（半減期）およびＣＬ（クリアランス）などの薬物動態的パラメーターを算出する。
【０１３３】
ｆ）代謝的安定性を測定するための肝細胞アッセイ：
肝細胞の存在下の試験化合物の代謝的安定性は、実験において可能な限り線形の動態学的条件を確実にするために、化合物を低濃度（好ましくは１μＭ未満）で、かつ、少数の細胞（好ましくは１ｘ１０６細胞／ｍｌ）とインキュベートすることにより測定する。化合物の半減期（即ち、分解）を測定するために、インキュベーション溶液の７個のサンプルを、固定した時間パターンで、ＬＣ−ＭＳ分析用に取る。様々なクリアランスパラメーター（ＣＬ）およびＦｍａｘ値をこの半減期から算出する（下記参照）。
【０１３４】
ＣＬおよびＦｍａｘ値は、肝細胞における第１相および第２相の化合物の代謝の測定を表す。インキュベーション混合物中の酵素に対する有機溶媒の影響を最小にするために、その濃度を一般的に１％（アセトニトリル）または０.１％（ＤＭＳＯ）に限定する。
【０１３５】
１.１ｘ１０８細胞／肝臓１ｇの肝臓中の肝細胞の細胞数を、全ての種（species and breeds）について計算に使用する。インキュベーション時間（通常９０分間）を超えて延びる半減期に基づいて算出したＣＬパラメーターは、大まかなガイドラインと見なし得るだけである。
【０１３６】
算出したパラメーターおよびそれらの意味は、以下の通りである:
Ｆｍａｘ十分に撹拌［％］ 経口投与後の最大の可能なバイオアベイラビリティー
計算： （１−ＣＬ血液十分に撹拌／ＱＨ）＊１００
ＣＬ血液十分に撹拌［Ｌ／（ｈ＊ｋｇ）］ 算出される血液クリアランス（十分に撹拌したモデル）
計算： （ＱＨ＊ＣＬ'内因性）／（ＱＨ＋ＣＬ'内因性）
ＣＬ'内因性［ｍｌ／（分＊ｋｇ）］ 化合物を代謝する肝臓の（肝細胞の）最大能力（肝臓の血流が律速ではないと仮定して）
計算： ＣＬ'内因性、明白＊種特異的肝細胞数［１.１＊１０８／肝臓１ｇ］＊種特異的肝臓重量［ｇ／ｋｇ］
ＣＬ'内因性、明白［ｍｌ／（分＊ｍｇ）］ 用いた肝細胞の細胞数ｘ（ｘ＊１０６／ｍｌ）で除去定数（elimination constant）を除すことにより、それを標準化する
計算： ｋｅｌ［１／分］／（細胞数［ｘ＊１０６］／インキュベーション体積［ｍｌ］）
（ＱＨ＝種特異的な肝臓の血流）
【０１３７】
ｇ）ラットの動静脈シャントモデルにおける抗血栓効果の測定：
絶食中のオスのラット (系統: HSD CPB:WU) を、Rompun/Ketavet 溶液（１２ｍｇ／ｋｇ／５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔する。P.C. Wong et al. [Thrombosis Research 83 (2), 117-126 (1996)] により記載された方法に基づき、動静脈シャントで血栓形成を誘導する。この目的で、左頸静脈および右頸動脈を露出させる。長さ８ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinsonより）を動脈に設置し、続いて、血栓形成性表面をもたらすために、二重ループにした粗いナイロン糸（60 x 0.26 mm、Berkley Trileneより）を含む長さ６ｃｍの Tygon チューブ (R-3606, ID 3.2 mm, Kronlabより）を設置する。長さ２ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinson より）を頸静脈に設置し、長さ６ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE160、Becton-Dickinson より) により Tygon チューブに連結する。シャントを開く前に、チューブを生理塩水で満たす。体外循環を１５分間維持する。次いで、シャントを取り除き、血栓を伴うナイロン糸の重量をすぐに量る。ナイロン糸の空の重量は、実験開始前に測定した。体外循環を取り付ける前に、試験物質（０.１Ｎ塩酸でｐＨ４に調節した生理塩水中の溶液として）をボーラス注射として投与する。
【０１３８】
Ｃ. 医薬組成物の例示的実施態様
本発明による化合物は、例えば、以下の方法で医薬製剤に変換できる：
ｉ.ｖ.溶液：
本発明による化合物を、生理的に耐容される溶媒に飽和溶解度より低い濃度で溶解させる（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ ４００溶液、各々ｐＨ３−５に調節する）。溶液を必要に応じて濾過滅菌し、かつ／または、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に分配する。
【技術分野】
【０００１】
本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、並びに、疾患、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロドラッグは、実際の有効成分が遊離する前に、１つまたはそれ以上の段階において、インビボで酵素的および／または化学的な生物変換を受ける有効成分の誘導体である。プロドラッグの残基は、通常、基礎となる有効成分の特性のプロフィールを改善するために使用される［P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)］。これに関して、最良の効果のプロフィールを達成するために、プロドラッグの残基の設計および所望の遊離メカニズムを、個々の有効成分、適応症、作用部位および投与経路と非常に正確に調和させることが必要である。多数の医薬が、基礎となる有効成分と比較して改良されたバイオアベイラビリティーを示すプロドラッグとして投与され、それは、例えば、物理化学的プロフィール、特に、溶解性、能動的または受動的吸収特性または組織特異的分布を改良することにより達成される。プロドラッグに関する広範な文献から言及し得る例は、H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985 である。
【０００３】
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］は、血液凝固の調節において必須の機能を果たすセリンプロテアーゼＸａ因子の、経口で有効な直接的阻害剤である。オキサゾリジノン化合物は、現在、血栓塞栓性障害の予防および処置用の潜在的な新しい有効医薬成分として、綿密な臨床試験を受けている [S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)]。
【化１】
【０００４】
しかしながら、化合物（Ａ）は、水および生理的媒体において限られた溶解性しか有さず、このことは、例えば、有効成分の静脈内投与を困難にしている。従って、上述の媒体において改善された溶解性を有し、同時に、投与後に患者の体内での有効成分（Ａ）の遊離の制御を可能にする、化合物（Ａ）の誘導体またはプロドラッグを同定することが、本発明の目的であった。
【０００５】
ＷＯ２００５／０２８４７３は、経口のバイオアベイラビリティーの上昇に役立つオキサゾリジノンのアシルオキシメチルカルバメートプロドラッグを記載している。ＷＯ０１／００６２２は、イノシン−５'−一リン酸デヒドロゲナーゼのカルバメート阻害剤のアシルプロドラッグを開示している。基礎となる有効成分を多段階の活性化メカニズムにより遊離させるオキサゾリジノン類のアミドプロドラッグのさらなるタイプは、ＷＯ０３／００６４４０に記載されている。
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化２】
［式中、
ｎは、１または２の数であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している］
の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物に関する。
【０００７】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に包含される後述する式の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含される例示的実施態様として後述する化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（後述する式（Ｉ）に包含される化合物が、既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合に）である。
【０００８】
本発明による化合物は、それらの構造によって、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性的に純粋な構成分を既知の方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できる場合、本発明は、全ての互変異性体を含む。
【０００９】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。しかしながら、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１０】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１１】
本発明の目的上、溶媒和物は、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態を表す。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。本発明に関して、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００１２】
本発明に関して、断りのない限り、置換基は、以下の意味を有する：
Ｒ１の意味におけるα−アミノ酸の側鎖の基は、天然産生α−アミノ酸の側鎖の基およびこれらのα−アミノ酸のホモログおよび異性体の側鎖の基の両方を含む。α−アミノ酸は、これに関して、α−アミノ酸は、ＬおよびＤ配置の両方を有し得るか、または、Ｌ体およびＤ体の混合物であり得る。言及し得る側鎖の基の例は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、２−メチルプロパン−１−イル（ロイシン）、１−メチルプロパン−１−イル（イソロイシン）、ブタン−１−イル（ノルロイシン）、フェニル（２−フェニルグリシン）、ベンジル（フェニルアラニン）、ｐ−ヒドロキシベンジル（チロシン）、インドール−３−イルメチル（トリプトファン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、２−ヒドロキシエチル（ホモセリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、メルカプトメチル（システイン）、メチルチオメチル（Ｓ−メチルシステイン）、２−メルカプトエチル（ホモシステイン）、２−メチルチオエチル（メチオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、カルボキシメチル（アスパラギン酸）、２−カルボキシエチル（グルタミン酸）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、４−アミノ−３−ヒドロキシブタン−１−イル（ヒドロキシリジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）、３−ウレイドプロパン−１−イル（シトルリン）である。Ｒ２の意味における好ましいα−アミノ酸の側鎖の基は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）である。Ｌ配置が好ましい。
【００１３】
本発明による化合物中のラジカルが置換されている場合、そのラジカルは、断りのない限り、一置換または多置換されていてよい。本発明に関して、１回より多く出てくる全てのラジカルは、相互に独立の意味を有する。１個または２個の同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００１４】
好ましいのは、式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している、
式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１５】
好ましいのは、また、式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が水素であり、
Ｒ３が水素である、
式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１６】
好ましいのは、また、ｎが２の数である、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、ＸがＮＨである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ２が水素である、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ３が水素である、式（Ｉ）の化合物である。
【００１７】
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関し、それは、以下を特徴とする；
［Ａ］式
【化３】
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化４】
（式中、ｎは上記の意味を有し、
そして、Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化５】
（式中、ｎおよびＱは、上記の意味を有する）
の化合物に変換し、
【００１８】
次いで、後者を、以下の方法に従って反応させる；
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化８】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、そして、
ＸはＯまたはＳである）
の化合物をもたらす、
【００１９】
または、
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化１０】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１１】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物をもたらす、
【００２０】
または、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１２】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１３】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基を常套の方法により除去し、式
【化１４】
（式中、ｎは上記の意味を有する）
の化合物をもたらし、
【００２１】
次いで、塩基の存在下、式
【化１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって、活性化エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくはギ酸アルキル、特に好ましくはギ酸エチルを形成しており、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、式
【化１６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物をもたらし、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する。
【００２２】
式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＸ）の化合物は、それらの塩の形態でも存在できる。これらの塩は、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基での処理により、遊離塩基に変換できる。
【００２３】
ラジカルＲ１中に必要に応じて存在する官能基は、好都合または必要であれば、上記の連続反応において、一時的な保護形態にあってもよい。そのような保護基並びに保護基ＰＧの導入および除去は、これに関して、ペプチド化学から知られている常套の方法により行う［例えば、T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky and A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984 参照]。
【００２４】
必要に応じてＲ１中に存在するそのような保護基は、これに関して、ＰＧの除去と同時に、または、ＰＧの除去前または後の別の反応段階で、除去し得る。
【００２５】
上記方法において好ましく使用されるアミノ保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）である。これらの保護基の除去、および、工程（ＶＩＩＩ）→（Ｘ）における保護基の除去は、常套の方法により、好ましくは、塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸などの強酸と、ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸などの不活性溶媒中で反応させることにより、実施する。
【００２６】
工程（Ａ）＋（ＩＩ）→（ＩＩＩ）および（Ａ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、水素化ナトリウムである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００２７】
工程（ＩＩＩ）＋（ＶＩ）→（Ｖ−Ａ）および（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、エチルジイソプロピルアミンである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００２８】
工程（ＩＩＩ）＋（ＩＶ）→（Ｖ）は、好ましくは、溶媒としてのＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中で行う。この反応は、一般的に、０℃ないし＋５０℃の温度範囲で、好ましくは＋２０℃ないし＋５０℃で、大気圧下で行う。この反応は、また、超音波処理により有利に実施できる。
【００２９】
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）および（Ｘ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献中の常套の方法により製造できる。化合物（Ａ）の製造は、実施例に記載されている。
【００３０】
本発明による化合物の製造は、以下の合成スキームにより例示説明できる：
スキーム
【化１８】
【００３１】
本発明による化合物およびそれらの塩は、有効成分化合物（Ａ）の有用なプロドラッグである。一方では、それらは、例えばｐＨ４で良好な安定性を示し、他方では、それらはインビボで、有効成分化合物（Ａ）への効率的な変換を示す。本発明による化合物は、さらに、水および他の生理的に耐容される媒体中での良好な溶解性を有し、それらを特に静脈内投与での治療的使用に適するものにしている。
【００３２】
本発明はさらに、障害、好ましくは血栓塞栓性障害および／または血栓塞栓性合併症の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３３】
本発明に関して、「血栓塞栓性障害」には、特に、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）または非ＳＴ上昇型心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術または大動脈冠動脈バイパス術などの冠動脈介入後の再閉塞および再狭窄、末梢動脈閉塞疾患、肺栓塞症、深部静脈血栓および腎静脈血栓、一過性虚血発作、並びに、血栓性および血栓塞栓性卒中などの障害が含まれる。
【００３４】
従って、これらの物質は、例えば心房細動などの急性、間欠性または持続性心不整脈を有する患者、および、電気的除細動を受けている者、また、心臓弁疾患を有するか、または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば、脳虚血、卒中および全身性血栓塞栓症および虚血の予防および処置にも適する。加えて、本発明による化合物は、汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の処置に適する。
【００３５】
血栓塞栓性合併症は、また、微小血管障害性溶血性貧血、血液透析などの体外循環、および、心臓代用弁と関連して起こる。
【００３６】
さらに、本発明による化合物は、アテローム硬化性血管障害および炎症障害、例えば筋骨格系のリウマチ性障害の予防および／または処置にも、さらに同様に、アルツハイマー病の予防および／または処置にも適する。さらに、本発明による化合物は、腫瘍成長および転移形成の阻害、微小血管障害、加齢に伴う黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症および他の微小血管の障害、また、例えば、腫瘍患者における、特に大きい外科手術または化学療法もしくは放射線治療を受けている者における、静脈血栓塞栓症などの血栓塞栓性合併症の予防および処置にも用いることができる。
【００３７】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３８】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３９】
本発明は、さらに、本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法に関する。
【００４０】
本発明は、さらに、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる有効成分を含む医薬に関する。好ましく言及し得る適当な組合せの有効成分の例は、以下のものである：
・脂質低下剤、特にＨＭＧ−ＣｏＡ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ）リダクターゼ阻害剤；
・冠血管治療剤／血管拡張剤、特にＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤；ＡＩＩ（アンジオテンシンＩＩ）受容体アンタゴニスト；β−アドレナリン受容体アンタゴニスト；アルファ−１−アドレナリン受容体アンタゴニスト；利尿剤；カルシウムチャネル遮断剤；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の上昇をもたらす物質、例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤；
・プラスミノーゲン活性化剤（血栓溶解剤／線維素溶解剤）および血栓溶解／線維素溶解を高める化合物、例えば、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子の阻害剤（ＰＡＩ阻害剤）またはトロンビン活性型線維素溶解阻害因子の阻害剤（ＴＡＦＩ阻害剤）；
・凝血活性を有する物質（抗凝血剤）；
・血小板凝集阻害性物質（血小板凝集阻害剤）；
・フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト）；
・並びに抗不整脈薬。
【００４１】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用に関する。
【００４２】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口、非経腸、肺または鼻の経路で、投与できる。本発明による化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
【００４３】
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速におよび／または改変された様式で送達し、本発明による化合物を結晶および／または無定形および／または溶解形態で含有する投与形であり、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、不溶であるか、または、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御する被覆を有する錠剤）、口中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤などである。
【００４４】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤の形態の注射および点滴用製剤である。
【００４５】
他の投与経路に適するのは、例えば、粉末吸入器または噴霧器などの吸入用医薬形、または、点鼻薬、液またはスプレーなどの、鼻腔投与できる医薬形である。
非経腸投与、特に静脈内投与が好ましい。
【００４６】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の隠蔽剤が含まれる。
【００４７】
一般に、非経腸投与で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになり、経口投与では、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００４８】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり、一方、上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別投与に分割するのが望ましいことがある。
【００４９】
以下の例示的実施態様は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に基づく。
【実施例】
【００５０】
Ａ. 実施例
略号および頭字語：
【表１】
【００５１】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１：装置：DAD 検出を備えたHP 1100；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→６.５分９０％Ｂ→６.７分２％Ｂ→７.５分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５２】
方法２：装置：DAD 検出を備えたHP 1100；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→９分０％Ｂ→９.２分２％Ｂ→１０分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５３】
方法３：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD；カラム：Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分,２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５４】
方法４：装置：Micromass GCT, GC6890；カラム：Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm；一定のヘリウム流速：０.８８ｍｌ／分；オーブン：６０℃；入口：２５０℃；グラジエント：６０℃（０.３０分間維持）、５０℃／分→１２０℃、１６℃／分→２５０℃、３０℃／分→３００℃（１.７分間維持）。
【００５５】
方法５：カラム：GROM-SIL 120 ODS-4 HE, 10 μM, 250 mm x 30 mm；流速：５０ｍｌ／分；移動相およびグラジエントのプログラム：アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０（０−３分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０→９５：５（３−２７分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸９５：５（２７−３４分）、アセトニトリル／０.１％水性ギ酸１０：９０（３４−３８分）；温度：２２℃；ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
【００５６】
方法６：装置：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分。２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５７】
方法７（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Waters (Micromass) Quattro Micro；ＨＰＬＣ装置タイプ：Agilent 1100 Series；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→３.０分１０％Ａ→４.０分１０％Ａ→４.０１分１００％Ａ（流速２.５ｍｌ）→５.００分１００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５８】
方法８（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.０１分９０％Ａ；流速：２ｍｌ／分；；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５９】
方法９（分析的ＨＰＬＣ）：装置：HP1090 Series II；カラム：Waters XTerra C18-5, 3.9 mm x 150 mm WAT 186000478；移動相Ａ：水２.５ｌ中の７０％濃度の過塩素酸１０ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分２０％Ｂ→１分２０％Ｂ→４分９０％Ｂ→６分９０％Ｂ→８分２０％Ｂ。温度：４０℃；流速：１ｍｌ／分。
【００６０】
方法１０（分析的ＨＰＬＣ）：装置：HP 1090 Series II；カラム：Merck Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 mm x 4.6 mm; precolumn Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e, 5-4.6 mm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２０％Ｂ→０.５分２０％Ｂ→３分９０％Ｂ→３.５分９０％Ｂ→３.５１分２０％Ｂ→４分２０％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；カラム温度：４０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６１】
方法１１（分取ＨＰＬＣ）：装置：ＵＶ検出器を備えた Gilson, カラム: Kromasil C18, 5μm/ 250 mm x 20 mm（流速：２５ｍｌ／分）；移動相Ａ：水（０.０１％トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０.０１％トリフルオロ酢酸）；グラジエント：０分５−２０％Ｂ、１０分−１５分５−２０％Ｂ、４５分９０％Ｂ、５０分９０％Ｂ；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；流速：２５ｍｌ／分。
【００６２】
方法１２（分取ＨＰＬＣ）：装置：ＵＶ検出器を備えた Gilson, カラム: YMC ODS AQ C18, 10μm/ 250 mm x 30 mm （流速：５０ｍｌ／分）；移動相Ａ：水（０.０１％トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０.０１％トリフルオロ酢酸）；グラジエント：０分５−２０％Ｂ、１０分−１５分５−２０％Ｂ、４５分９０％Ｂ、５０分９０％Ｂ；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；流速：５０ｍｌ／分。
【００６３】
方法１３（ＬＣ−ＭＳ）：装置：Waters UPLC Acquity を備えた Micromass Quattro Premier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50 mm x 1 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度のギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.３３ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６４】
ＮＭＲ分光法：
ＮＭＲ測定は、プロトン周波数４００.１３ＭＨｚまたは５００.１３ＭＨｚで実施した。サンプルを通常はＤＭＳＯ−ｄ６に溶解した；温度：３０２Ｋ。
【００６５】
出発化合物：
使用した出発物質は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］であった。
【化１９】
【００６６】
実施例１Ａ
５−クロロチオフェン−２−カルボニルクロリド
【化２０】
塩化オキサリル１３７ｍｌ（１.５７ｍｏｌ）を、ジクロロメタン３０７ｍｌ中の５−クロロチオフェン−２−カルボン酸５１.２ｇ（０.３１５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。ＤＭＦ２滴の添加後、混合物を室温で１５時間撹拌した。次いで、溶媒および過剰の塩化オキサリルをロータリーエバポレーターで除去した。残渣を減圧下で蒸留した。生成物は、７４−７８℃および４−５ｍｂａｒの圧力で沸騰した。これにより、油状物５０.５ｇ（理論値の８７％）を得、これは、冷蔵庫での保存で凝固した。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3, δ/ppm): 7.79 (d, 1H), 7.03 (d, 1H).
GC/MS (方法 4): Rt = 5.18 分.
MS (EI+, m/z): 180/182/184 (2 35Cl/37Cl) M+.
【００６７】
実施例２Ａ
（（Ｓ）−２,３−ジヒドロキシプロピル）−５−クロロチオフェン−２−カルボキサミド
（C.R. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-10300111-A1 (2004)より)
【化２１】
１３−１５℃で、重炭酸ナトリウム４６１ｇ（４.３５ｍｏｌ）および（２Ｓ）−３−アミノプロパン−１,２−ジオール塩酸塩３５０ｇ（３.８５ｍｏｌ）を、先ず、水２.１ｌに加え、２−メチルテトラヒドロフラン９５０ｍｌを添加した。１５−１８℃で冷却しながら、トルエン１８０ｍｌ中の５−クロロチオフェン−２−カルボニルクロリド（実施例１Ａの化合物）５３５ｇ（２.９５ｍｏｌ）をこの混合物に２時間かけて滴下して添加した。後処理に、相を分離し、全部で１.５ｌのトルエンを数段階で有機相に添加した。沈殿した生成物を吸引濾過し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥させた。これにより、生成物５９３.８ｇ（理論値の９２％）を得た。
【００６８】
実施例３Ａ
（（Ｓ）−３−ブロモ−２−ヒドロキシプロピル）−５−クロロチオフェン−２−カルボキサミド
（C.R. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-10300111-A1 (2004)より)
【化２２】
３０分間かけて、酢酸中の３３％濃度の臭化水素の溶液３０１.７ｍｌを、２１−２６℃で、氷酢酸２５０ｍｌ中の実施例２Ａの化合物１００ｇ（０.４２３ｍｏｌ）の懸濁液に添加した。次いで無水酢酸４０ｍｌを添加し、反応混合物を６０−６５℃で３時間撹拌した。次いで、２０−２５℃で、メタノール９６０ｍｌを３０分間かけて添加した。反応混合物を還流下で２.５時間撹拌し、次いで２０−２５℃で終夜撹拌した。後処理に、溶媒を約９５ｍｂａｒの減圧下で蒸留した。ｎ−ブタノール５０ｍｌおよび水３５０ｍｌを残った懸濁液に添加した。沈殿した生成物を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、生成物８９.８ｇ（理論値の７１％）を得た。
【００６９】
実施例４Ａ
５−クロロ−Ｎ−［（２Ｓ）−オキシラン−２−イルメチル］チオフェン−２−カルボキサミド
【化２３】
粉末状炭酸カリウム１５５ｇ（１.１２ｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ５００ｍｌ中の実施例３Ａの化合物５０ｇ（０.１６７ｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で３日間撹拌した。次いで、無機塩を珪藻土層で吸引濾過し、各場合で１００ｍｌのＴＨＦで２回洗浄し、濾液をロータリーエバポレーターで室温で濃縮した。これにより、生成物３６ｇ（理論値の８１％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.81 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.29-3.22 (m, 1H), 3.10-3.06 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.57-2.54 (m, 1H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.52 分.
MS (DCI, NH3, m/z): (35Cl/37Cl) 218/220 (M+H)+, 235/237 (M+NH4)+.
【００７０】
実施例５Ａ
Ｎ,Ｎ−ジベンジル−２−フルオロ−４−ヨードアニリン
【化２４】
水１００ｍｌおよびジクロロメタン２００ｍｌの混合物中、２−フルオロ−４−ヨードアニリン２４.３７ｇ（０.１０３ｍｏｌ）、臭化ベンジル３１.８ｍｌ（０.２６７ｍｏｌ）、炭酸ナトリウム２３.９８ｇ（０.２２６ｍｏｌ）およびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージド１.９ｇ（５.１４ｍｍｏｌ）を還流で６日間加熱した。室温に冷却後、相を互いに分離した。有機相を水および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた残渣をシリカゲルの吸引濾過により、移動相シクロヘキサンを使用して精製した。これにより、表題化合物３５ｇ（理論値の８２％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.48 (1H, dd), 7.32-7.21 (m, 11H), 6.69 (dd, 1H), 4.33 (s, 4H).
HPLC (方法 1): Rt = 5.87 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 418 (M+H)+.
【００７１】
実施例６Ａ
４−［４−（ジベンジルアミノ）−３−フルオロフェニル］モルホリン−３−オン
【化２５】
実施例５Ａの化合物１.５ｇ（３.５９ｍｍｏｌ）を無水ジオキサン２０ｍｌに溶解し、モルホリノン０.４５ｇ（４.４９ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）１３７ｍｇ（０.７１９ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム１.５３ｇ（７.１９ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン１５３μｌ（１.４４ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。還流器具を、僅かな減圧とアルゴンによる換気を繰り返し適用することにより不活性化した。反応混合物を還流で１５時間加熱した。この期間の後、混合物を室温に放冷した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄した。抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いで濾過し、濾液から溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルの吸引濾過により、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル１：１を使用して精製した。これにより、表題化合物１.３８ｇ（理論値の９８％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.32-7.28 (m, 9H), 7.26-7.20 (m, 2H), 7.00-6.92 (m, 2H), 4.33 (s, 4H), 4.15 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.55 (dd, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 4.78 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 391 (M+H)+.
【００７２】
実施例７Ａ
４−（４−アミノ−３−フルオロフェニル）モルホリン−３−オン
【化２６】
方法１：
実施例６Ａの化合物７００ｍｇ（１.７９ｍｍｏｌ）をエタノール７０ｍｌに溶解し、パラジウム／活性炭（１０％）９５ｍｇを添加した。混合物を室温で、水素圧１ｂａｒで、１時間水素化した。次いで触媒を少量の珪藻土で濾過し、濾液をロータリーエバポレーターで濃縮した。これにより、表題化合物３７８ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.04 (dd, 1H), 6.87 (dd, 1H), 6.73 (dd, 1H), 5.17 (s, broad, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.62 (dd, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 0.93 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 211 (M+H)+, 228 (M+NH4)+.
【００７３】
方法２：
アルゴン下、ジオキサン３００ｍｌ中の２−フルオロ−４−ヨードアニリン２９.６ｇ（１２５ｍｍｏｌ）、モルホリン−３−オン［J.-M. Lehn, F. Montavon, Helv. Chim. Acta 1976, 59, 1566-1583］１５.８ｇ（１５６ｍｍｏｌ、１.２５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）９.５ｇ（５０ｍｍｏｌ、０.４当量）、リン酸カリウム５３.１ｇ（２５０ｍｍｏｌ、２当量）およびＮ,Ｎ‘−ジメチルエチレンジアミン８.０ｍｌ（７５ｍｍｏｌ、０.６当量）の懸濁液を、還流下で終夜撹拌した。室温に冷却後、反応混合物を珪藻土層で濾過し、残渣をジオキサンで洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、ジクロロメタン／メタノール１００：１→１００：３）により精製した。これにより、表題化合物２４ｇ（理論値の７４％）を得た。
LC-MS (方法 3): Rt = 0.87 分;
MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 7.05 (dd, 1H), 6.87 (dd, 1H), 6.74 (dd, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.63 (dd, 2H).
【００７４】
実施例８Ａ
５−クロロ−Ｎ−［（２Ｒ）−３−｛［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］アミノ｝−２−ヒドロキシプロピル］チオフェン−２−カルボキサミド
【化２７】
過塩素酸マグネシウム６００ｍｇ（２.６９ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１０ｍｌ中の実施例７Ａの生成物３７６ｍｇ（１.７９ｍｍｏｌ）および実施例４Ａの化合物４２９ｍｇ（１.９７ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で１５時間撹拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法５）により精製した。これにより、表題化合物５０３ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.61 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.11 (dd, 1H), 6.97 (dd, 1H), 6.73 (dd, 1H), 5.33 (t, 1H), 5.14 (d, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.87-3.79 (m, 1H), 3.63 (dd, 2H), 3.39-3.22 (m, 2H, 部分的に水のシグナルが重なる), 3.21-3.15 (m, 1H), 3.08-3.02 (m, 1H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.75 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 428/430 (35Cl/37Cl) (M+H)+, 445/447 (M+NH4)+.
【００７５】
実施例９Ａ
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２８】
方法１：
４−ジメチルアミノピリジン２.７ｍｇ（０.０２２ｍｍｏｌ）を、ブチロニトリル１０ｍｌ中の実施例８Ａの生成物４７８ｍｇ（１.１２ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール３６３ｍｇ（２.２４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を７０℃で加熱した。３日後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。生成物を残渣から分取ＨＰＬＣ（方法５）により単離した。これにより、表題化合物３４４ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 8.98 (t, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 4.91-4.84 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.98 (dd, 2H), 3.80 (dd, 1H), 3.76 (dd, 2H), 3.68-3.57 (m, 2H).
HPLC (方法 1): Rt = 3.82 分.
MS (DCI, NH3, m/z): 471/473 (35Cl/37Cl) (M+NH4)+.
【００７６】
方法２：
０℃で、実施例１Ａの化合物７.９ｇ（４３ｍｍｏｌ、１.２ｅｑ.）を、ピリジン２２４ｍｌ中の実施例６２Ａの化合物１１.２ｇ（３６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。３０分後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水およびジクロロメタンに取る。相分離後、水相をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンと混合し、濾過し、減圧下で乾燥させ、表題化合物７.４ｇ（理論値の４５％）を得た。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、ジクロロメタン／メタノール１００：１→１００：２）により精製し、さらに１.９ｇ（理論値の１２％）の表題化合物を得た。
HPLC (方法 2): Rt = 3.74 分;
MS (ESIpos): m/z = 454 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.94 (t, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.92-4.84 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.81 (dd, 1H), 3.76 (t, 2H), 3.67-3.56 (m, 2H);
融点: 177℃, ΔH 84 Jg-1 および 183℃, ΔH 7 Jg-1.
【００７７】
実施例１０Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロブタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２９】
アルゴン下、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］４００ｍｇ（０.８８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ４０ｍｌに溶解した。水素化ナトリウム（純度９８％）１.６７７ｇ（１.７６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで、反応温度を室温に維持しながら、クロロブタノイルクロリド４６１ｍｇ（１１.９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで、少量の水を添加し、続いて混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液／酢酸エチル１：１に注いだ。相を分離し、酢酸エチル相を、まず重炭酸ナトリウム溶液で、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、続いて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。エノール化の後に形成された、得られたジアシル化された化合物を、ジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液５ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標的化合物２０ｍｇ（理論値の４％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.8 分;
LC-MS (方法 7): Rt = 1.2 分; m/z = 558 (M+H)+.
【００７８】
実施例１１Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロペンタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化３０】
アルゴン下、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］１００ｍｇ（０.２２ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した。水素化ナトリウム（純度９８％）１１ｍｇ（０.４４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで、反応温度を室温に維持しながら、クロロペンタノイルクロリド４６１ｍｇ（２.９８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで飽和塩化アンモニウム水溶液／酢酸エチル１：１に注いだ。相を分離し、酢酸エチル相をまず重炭酸ナトリウム溶液で、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で抽出し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。エノール化の後に形成された、得られたジアシル化された化合物を、塩化水素の飽和溶液およびジクロロメタン２ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで混合物を減圧下で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標題化合物２０ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.9 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.4 分; m/z = 572 (M+H)+.
【００７９】
実施例１２Ａ
Ｎ−（４−アミノブタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化３１】
工程ａ）：
アルゴン雰囲気下、化合物（Ａ）０.５ｇ（１.１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２７ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム７９ｍｇ（３.３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、ＤＭＦ３ｍｌに溶解した、新たに製造した実施例１４Ａの化合物４.１４ｇ（１１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温でさらに１５分間撹拌し、次いでメタノール１ｍｌを添加した。混合物を１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液でもう２回洗浄した。次いで、有機相を濃縮し、残渣を室温でジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液５ｍｌと２０時間撹拌し、最初に形成されたエノールエステルを開裂した。次いで、混合物を濃縮し、残った残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより移動相トルエン／酢酸エチルを用いて精製し、混合比を１：１から１：２を経て１：３に高めた。適当な画分を濃縮し、二重に保護された中間体１２４ｍｇ（理論値の８％）を泡状物として得た。
HPLC (方法 10): Rt = 2.3 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 2.33 分; m/z = 793 (M+H)+.
【００８０】
工程ｂ）：
室温で、上記で得られた中間体１１８ｍｇ（０.１４９ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸６ｍｌ中で終夜撹拌した。次いで、温度を約２０℃で維持しながら、混合物を高真空下で濃縮した。残渣をｐＨ３に調節した水性塩酸５０ｍｌに取り、ジクロロメタン７５ｍｌを溶液に添加した。振盪により混合物を混合し、次いで水相を分離し、高真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、濃縮し、次いで１Ｎ塩酸から凍結乾燥した。収量：５９ｍｇ（理論値の６９％）
HPLC (方法 10): Rt = 0.98 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 0.98 分; m/z = 539 (M+H)+.
【００８１】
実施例１３Ａ
Ｎ−（５−アミノペンタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化３２】
表題化合物は、実施例１２Ａと同様に、化合物（Ａ）および実施例１９Ａの化合物から製造できる。
【００８２】
実施例１４Ａ
ベンジル（４−クロロ−４−オキソブチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化３３】
製造は、実施例１９Ａと同様に、４−アミノ酪酸から出発して実施した。
【００８３】
実施例１５Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオ−Ｓ−酸
【化３４】
表題化合物を、Ｂｏｃ−バリンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８４】
実施例１６Ａ
［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エタンチオ−Ｓ−酸
【化３５】
表題化合物を、Ｂｏｃ−グリシンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８５】
実施例１７Ａ
（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサンチオ−Ｓ−酸
【化３６】
表題化合物を、ビス−Ｂｏｃ−リジンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８６】
実施例１８Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパンチオ−Ｓ−酸
【化３７】
表題化合物を、Ｂｏｃ−アラニンから、文献［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201］から知られている方法と同様に製造した。
【００８７】
実施例１９Ａ
ベンジル（５−クロロ−５−オキソペンチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化３８】
５−アミノ吉草酸１０ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）、ｐ−アニスアルデヒド１７.４ｇ（１２８ｍｍｏｌ）および硫酸マグネシウム１０.３ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）を、エタノール３３０ｍｌに取り、還流下で１時間加熱した。混合物を濾過し、フィルターの残渣をエタノールで洗浄し、次いで、水素化ホウ素ナトリウム１.９４ｇ（５１.２ｍｍｏｌ）を少しずつ１５分間かけて溶液に添加した。先ず、水１０ｍｌを添加し、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１２８ｍｌを添加した。５分後に、混合物を水３００ｍｌで希釈し、次いで各場合で酢酸エチル２００ｍｌで３回抽出した。４Ｍ塩酸を使用して水相をｐＨ２に調節し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相アセトニトリル／水／酢酸５：１：０.１を使用して精製した。適当な画分を濃縮し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルでトリチュレートした。次いで、残渣を吸引濾過し、高真空下で乾燥させた。これにより、ｐ−メトキシベンジル保護アミノ酸９.１ｇ（理論値の４５％）を得た。
【００８８】
そのアミノ酸を１.６ｌのジオキサン／水１：１に取り、水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ１０に調節し、次いで、クロロ炭酸ベンジル１２.９７ｇ（７６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。室温で１５分間撹拌した後、ジオキサンを減圧下で除去し、２Ｍ塩酸を使用して残った溶液をｐＨ２に調節した。混合物を酢酸エチルで抽出し、次いで有機相を水で２回洗浄した。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これに続き、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相アセトニトリルを使用して精製した。適当な画分を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、保護アミノ酸５.６ｇ（理論値の３８％）を得た。
LC-MS (方法 6): Rt = 2.47 分; m/z = 372 (M+H)+.
【００８９】
５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝吉草酸５.６ｇ（１５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、塩化チオニル２.２ｍｌを添加した。混合物を還流下で３０分間加熱した。次いで混合物を減圧下で濃縮し、さらなるジクロロメタンを残渣に添加し、混合物を再度濃縮した。残った物は、粘性の油状物であり、それを高真空下で乾燥させた。これにより、標題化合物５.７ｇ（理論値の９８％）を得、これをさらに精製および特徴解析せずに、さらに反応させた。
【００９０】
例示的実施態様：
カルボン酸のセシウム塩または適切に保護されたアミノ酸誘導体を製造するための一般的方法１：
適当なカルボン酸１ｍｍｏｌをジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌの混合物に溶解し、炭酸セシウム０.５ｍｍｏｌを添加する。これに続き、凍結乾燥する。
【００９１】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物を製造するための一般的方法２：
【化３９】
アミノ酸誘導体のウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物は、購入できるか、または、文献の方法：M. Johnston et al. J.Org.Chem. 1985, 50, 2200; W.D. Fuller et al. J.Am.Chem.Soc. 1990, 112, 7414; S. Mobasheri et al. J.Org.Chem. 1992, 57, 2755 に従って製造できる。
【００９２】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを製造するための一般的方法３：
【化４０】
アミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルは、購入できるか、または、ペプチド化学の標準的な方法により製造できる。
【００９３】
実施例１
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−４−オキソブチルグリシネート塩酸塩
【化４１】
表題化合物は、実施例２および２５と同様に、実施例１０Ａの化合物およびＢｏｃ−グリシンから製造できる。
【００９４】
実施例２
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルグリシネート塩酸塩
【化４２】
実施例２５の化合物５ｍｇを、ｐＨ３に調節した水性塩酸に溶解し、続いて凍結乾燥することにより、表題化合物を製造した。収量：４.４ｍｇ（理論値の９９％）
HPLC (方法 10): Rt = 1.3 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.08 分; m/z = 611 (M+H)+.
【００９５】
実施例３
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルＬ−バリネート塩酸塩
【化４３】
実施例２および２５と同様に、実施例１１Ａの化合物およびＢｏｃ−バリンから、表題化合物を製造できる。
【００９６】
実施例４
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化４４】
実施例２６の化合物７.４ｍｇをｐＨ３に調節した水性塩酸に溶解し、続いて凍結乾燥することにより、表題化合物を製造した。収量：６.４ｍｇ（定量的）
HPLC (方法 10): Rt = 1.6 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.52 分; m/z = 669 (M+H)+.
【００９７】
実施例５
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）アミノエタンチオエート塩酸塩
【化４５】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１６Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【００９８】
実施例６
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２,６−ジアミノヘキサンチオエート二塩酸塩
【化４６】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１７Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【００９９】
実施例７
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノプロパンチオエート塩酸塩
【化４７】
実施例４および２６と同様に、実施例１１Ａおよび１８Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【０１００】
実施例８
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−４−オキソブチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化４８】
実施例４および２６と同様に、実施例１０Ａおよび１５Ａの化合物から、表題化合物を製造できる。
【０１０１】
実施例９
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ブタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４９】
実施例２３と同様に、実施例１２Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グリシンを使用して、表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により、表題化合物を生成させられる。
【０１０２】
実施例１０
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ペンタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５０】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グリシンを使用して、表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を使用する複分解により、表題化合物を生成させられる。
【０１０３】
実施例１１
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−プロリンアミド塩酸塩
【化５１】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−プロリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、表題化合物を、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により生成させることができる。
【０１０４】
実施例１２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化５２】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ビス−Ｂｏｃ−ヒスチジンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０５】
実施例１３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−バリンアミド塩酸塩
【化５３】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−バリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０６】
実施例１４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−リジンアミド塩酸塩
【化５４】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ビス−Ｂｏｃ−リジンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０７】
実施例１５
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−スレオニルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５５】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−スレオニンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０８】
実施例１６
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−チロシンアミド塩酸塩
【化５６】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−チロシンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１０９】
実施例１７
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アスパルトアミド塩酸塩
【化５７】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−アスパラギンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１０】
実施例１８
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−フェニルアラニンアミド塩酸塩
【化５８】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−フェニルアラニンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１１】
実施例１９
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−グルタムアミド塩酸塩
【化５９】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−グルタミンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１２】
実施例２０
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−グルタミン塩酸塩
【化６０】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、ｔｅｒｔ−ブチルＢｏｃ−グルタメートを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１３】
実施例２１
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−セリルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６１】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−セリンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１４】
実施例２２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ロイシンアミド塩酸塩
【化６２】
実施例２３と同様に、実施例１３Ａの化合物から、Ｂｏｃ−ロイシンを使用して表題化合物を製造できる。あるいは、脱保護は、実施例２５、工程ｂ）に記載の通りに、トリフルオロ酢酸を使用して実施することもでき、最初に形成されるトリフルオロ酢酸塩から、水性塩酸を用いる複分解により表題化合物を生成させられる。
【０１１５】
実施例２３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソブチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化６３】
工程ａ）：
実施例１２Ａの化合物５９ｍｇ（０.１０３ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ１５ｍｌに加えた。次いで、Ｎ,１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ヒスチジン５１ｍｇ（０.１４４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール１９ｍｇ（０.１２３ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ‘−エチルカルボジイミド塩酸塩２４ｍｇ（０.１２３ｍｍｏｌ）並びにエチルジイソプロピルアミン１２ｍｇを添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、混合物を飽和塩化アンモニウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、モノ−Ｂｏｃ−保護中間体の泡状物６６ｍｇ（理論値の５５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.2 分
LC-MS (方法 13): Rt = 0.93 分; m/z = 776 (M+H)+
【０１１６】
工程ｂ）：
モノ−Ｂｏｃ−保護中間体６６ｍｇ（０.０８５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液３ｍｌに溶解し、室温で３０分間振盪した。得られた沈殿を吸引濾過し、母液で抽出した。水相を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、濃縮し、残渣を１Ｎ塩酸から凍結乾燥した。これにより、表題化合物３ｍｇ（理論値の４％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.07 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1 分; m/z = 676 (M+H)+.
【０１１７】
実施例２４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−アスパラギン塩酸塩
【化６４】
実施例２３と同様に、適当な出発物質から、表題化合物を製造できる。
【０１１８】
実施例２５
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルグリシネートトリフルオロ酢酸塩
【化６５】
工程ａ）：
実施例１１Ａの化合物４８ｍｇ（０.０８４ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−グリシンのセシウム塩（Ｂｏｃ−グリシンから、一般的方法１に従って製造した）７７ｍｇ（０.２５２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した。３時間６０℃で撹拌した後、もう一度同量のセシウム塩を添加し、混合物を６０℃で終夜撹拌した。次いで、混合物を飽和水性塩化アンモニウム溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相として、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノール１５：５：１を使用して精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させ、次いで、残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、Ｂｏｃ保護中間体１０ｍｇ（理論値の１６％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.9 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.98 分; m/z = 711 (M+H)+.
【０１１９】
工程ｂ）：
保護化合物９ｍｇ（０.０１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１.５ｍｌに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.５ｍｌを添加し、次いで、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をジオキサン／水から凍結乾燥した。これにより、表題化合物８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.3 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 0.83 分; m/z = 611 (M+H)+.
【０１２０】
実施例２６
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［２−フルオロ−４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエートトリフルオロ酢酸塩
【化６６】
工程ａ）：
実施例１１Ａの化合物４７ｍｇ（０.０８２ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオ−Ｓ−酸のセシウム塩（実施例１５Ａから一般的方法１に従い製造した）９０ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２ｍｌに溶解した。６０℃で３時間撹拌した後、もう一度同量のセシウム塩を添加し、混合物を６０℃で終夜撹拌した。混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルの１：１混合物に注いだ。有機相を分離し、１０％濃度の重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。次いで、有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、移動相として、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノール１５：５：１を使用して精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させた。この精製工程を２回繰り返した。次いで、残った残渣を再度分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を蒸発させた。これにより、Ｂｏｃ−保護中間体７ｍｇ（理論値の１１％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 2.3 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 1.43 分; m/z = 769 (M+H)+.
【０１２１】
工程ｂ）：
保護化合物７ｍｇ（０.００９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍｌに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１ｍｌを添加し、次いで、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これにより、表題化合物６.８ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
HPLC (方法 10): Rt = 1.6 分;
LC-MS (方法 8): Rt = 1.24 分; m/z = 669 (M+H)+.
【０１２２】
Ｂ. 溶解性、安定性および遊離挙動の測定
ａ）溶解度の決定：
試験物質を水または希塩酸（ｐＨ４）に懸濁する。この懸濁液を室温で２４時間振盪する。２２４０００ｇで３０分間の超遠心の後、上清をＤＭＳＯで希釈し、ＨＰＬＣにより分析する。ＤＭＳＯ中の試験化合物の２点較正プロットを定量に使用する。
【０１２３】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1315A)、quat. ポンプ (G1311A)、オートサンプラー CTC HTS PAL、脱気装置(G1322A) およびカラムサーモスタット (G1316A) を備えた Agilent 1100; カラム: Zorbax Extend-C18 3.5 μ；温度：４０℃；移動相Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：０.７ｍｌ／分；グラジエント：０−０.５分９８％Ａ、２％Ｂ；勾配０.５−４.５分１０％Ａ、９０％Ｂ；４.５−６分１０％Ａ、９０％Ｂ；勾配６.５−６.７分９８％Ａ、２％Ｂ；６.７−７.５分９８％Ａ、２％Ｂ。
【０１２４】
ｂ）様々なｐＨ値のバッファー中での安定性：
試験物質０.２５ｍｇを、２ｍｌのＨＰＬＣバイアルに量り入れ、アセトニトリル０.５ｍｌを添加する。物質を、サンプル容器を超音波浴に約１０秒間置くことにより溶解させる。次いで、各バッファー溶液０.５ｍｌを添加し、サンプルを再度超音波浴で処理する。
【０１２５】
用いるバッファー溶液：
ｐＨ４.０：Millipore 水１ｌを、１Ｎ塩酸でｐＨ４.０に調節する；
ｐＨ７.４：塩化ナトリウム９０ｇ、リン酸二水素カリウム１３.６１ｇおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液８３.３５ｇを、Millipore 水で１ｌとし、次いで１：１０に希釈する。
試験溶液１０μｌ分を、ＨＰＬＣにより、未変化の試験物質の含有量について、３７℃で２４時間にわたり毎時間分析する。適切なピークのパーセントの面積を定量に使用する。
【０１２６】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 125 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；移動相Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント：
０−１.０分９８％Ａ、２％Ｂ→１.０−１３.０分５０％Ａ、５０％Ｂ→１３.０−１７.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１７.０１８.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１８.０−１９.５９８％Ａ、２％Ｂ→１９.５−２３.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１２７】
ｃ）ラット血漿およびヒト血清におけるインビトロの安定性（ＨＰＬＣ検出）：
物質０.５ｍｇを１ｍｌのジメチルスルホキシド／水１：１に溶解する。このサンプル溶液５００μｌをラット血漿５００μｌと３７℃で混合し、振盪する。最初のサンプル（１０μｌ）をすぐにＨＰＬＣ分析用に取る。インキュベーションの開始後２時間までの期間に、さらなるアリコートを２、５、１０、３０、６０および９０分後に取り、各試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の含有量を決定する。
【０１２８】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント：
０−３.０分６９％Ａ、３１％Ｂ→３.０−１８.０分６９％Ａ、３１％Ｂ→１８.０−２０.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→２０.０−２１.０９０％Ａ、１０％Ｂ→２１.０−２２.５.０分９８％Ａ、２％Ｂ→２２.５−２５.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２４８ｎｍ。
【０１２９】
ｄ）ラットおよびヒト血漿におけるインビトロの安定性（ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ検出）：
所定の血漿体積（例えば２.０ｍｌ）を、水浴中の密閉試験管で３７℃に温める。意図した温度に達した後、所定の量の試験物質を溶液（溶媒の体積は、血漿体積の２％以下である）として添加する。血漿を振盪し、最初のサンプル（５０−１００μｌ）をすぐに取る。次いで４−６個のさらなるアリコートを、インキュベーション開始後２時間までの期間中に取る。
【０１３０】
アセトニトリルを血漿サンプルに添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法により定量的に測定する。
ヘパリン化ラットまたはヒト血液における安定性の決定は、血漿について記載した通りに実施する。
【０１３１】
ｅ）Wistar ラットにおけるｉ.ｖ.薬物動態：
物質投与の前日に、実験動物（オスの Wistar ラット、体重２００−２５０ｇ）の頸静脈に、血液を得るためのカテーテルを、イソフルラン（登録商標）麻酔下で移植する。
実験当日、所定の用量の試験物質を、Hamilton（登録商標）ガラスシリンジを使用して、溶液として尾静脈に投与する（ボーラス投与、投与期間＜１０秒）。血液サンプル（８−１２時点）を、カテーテルを通して、物質投与後２４時間の期間にわたり連続的に取る。ヘパリン処理管中でサンプルを遠心分離することにより、血漿を得る。アセトニトリルを時点毎に所定の血漿体積に添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質、および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法を使用して定量的に測定する。
【０１３２】
測定される血漿濃度を使用して、試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔ１／２（半減期）およびＣＬ（クリアランス）などの薬物動態的パラメーターを算出する。
【０１３３】
ｆ）代謝的安定性を測定するための肝細胞アッセイ：
肝細胞の存在下の試験化合物の代謝的安定性は、実験において可能な限り線形の動態学的条件を確実にするために、化合物を低濃度（好ましくは１μＭ未満）で、かつ、少数の細胞（好ましくは１ｘ１０６細胞／ｍｌ）とインキュベートすることにより測定する。化合物の半減期（即ち、分解）を測定するために、インキュベーション溶液の７個のサンプルを、固定した時間パターンで、ＬＣ−ＭＳ分析用に取る。様々なクリアランスパラメーター（ＣＬ）およびＦｍａｘ値をこの半減期から算出する（下記参照）。
【０１３４】
ＣＬおよびＦｍａｘ値は、肝細胞における第１相および第２相の化合物の代謝の測定を表す。インキュベーション混合物中の酵素に対する有機溶媒の影響を最小にするために、その濃度を一般的に１％（アセトニトリル）または０.１％（ＤＭＳＯ）に限定する。
【０１３５】
１.１ｘ１０８細胞／肝臓１ｇの肝臓中の肝細胞の細胞数を、全ての種（species and breeds）について計算に使用する。インキュベーション時間（通常９０分間）を超えて延びる半減期に基づいて算出したＣＬパラメーターは、大まかなガイドラインと見なし得るだけである。
【０１３６】
算出したパラメーターおよびそれらの意味は、以下の通りである:
Ｆｍａｘ十分に撹拌［％］ 経口投与後の最大の可能なバイオアベイラビリティー
計算： （１−ＣＬ血液十分に撹拌／ＱＨ）＊１００
ＣＬ血液十分に撹拌［Ｌ／（ｈ＊ｋｇ）］ 算出される血液クリアランス（十分に撹拌したモデル）
計算： （ＱＨ＊ＣＬ'内因性）／（ＱＨ＋ＣＬ'内因性）
ＣＬ'内因性［ｍｌ／（分＊ｋｇ）］ 化合物を代謝する肝臓の（肝細胞の）最大能力（肝臓の血流が律速ではないと仮定して）
計算： ＣＬ'内因性、明白＊種特異的肝細胞数［１.１＊１０８／肝臓１ｇ］＊種特異的肝臓重量［ｇ／ｋｇ］
ＣＬ'内因性、明白［ｍｌ／（分＊ｍｇ）］ 用いた肝細胞の細胞数ｘ（ｘ＊１０６／ｍｌ）で除去定数（elimination constant）を除すことにより、それを標準化する
計算： ｋｅｌ［１／分］／（細胞数［ｘ＊１０６］／インキュベーション体積［ｍｌ］）
（ＱＨ＝種特異的な肝臓の血流）
【０１３７】
ｇ）ラットの動静脈シャントモデルにおける抗血栓効果の測定：
絶食中のオスのラット (系統: HSD CPB:WU) を、Rompun/Ketavet 溶液（１２ｍｇ／ｋｇ／５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔する。P.C. Wong et al. [Thrombosis Research 83 (2), 117-126 (1996)] により記載された方法に基づき、動静脈シャントで血栓形成を誘導する。この目的で、左頸静脈および右頸動脈を露出させる。長さ８ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinsonより）を動脈に設置し、続いて、血栓形成性表面をもたらすために、二重ループにした粗いナイロン糸（60 x 0.26 mm、Berkley Trileneより）を含む長さ６ｃｍの Tygon チューブ (R-3606, ID 3.2 mm, Kronlabより）を設置する。長さ２ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinson より）を頸静脈に設置し、長さ６ｃｍのポリエチレンカテーテル（PE160、Becton-Dickinson より) により Tygon チューブに連結する。シャントを開く前に、チューブを生理塩水で満たす。体外循環を１５分間維持する。次いで、シャントを取り除き、血栓を伴うナイロン糸の重量をすぐに量る。ナイロン糸の空の重量は、実験開始前に測定した。体外循環を取り付ける前に、試験物質（０.１Ｎ塩酸でｐＨ４に調節した生理塩水中の溶液として）をボーラス注射として投与する。
【０１３８】
Ｃ. 医薬組成物の例示的実施態様
本発明による化合物は、例えば、以下の方法で医薬製剤に変換できる：
ｉ.ｖ.溶液：
本発明による化合物を、生理的に耐容される溶媒に飽和溶解度より低い濃度で溶解させる（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ ４００溶液、各々ｐＨ３−５に調節する）。溶液を必要に応じて濾過滅菌し、かつ／または、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に分配する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中、
ｎは、１または２の数であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している］
の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項２】
式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が水素であり、
Ｒ３が水素である、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または、それらの塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、以下を特徴とする方法；
［Ａ］式
【化２】
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化３】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、
そして、Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化４】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、
Ｑは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物に変換し、
次いで、最後のものを、以下の方法に従って反応させる；
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載を有し、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＸはＯまたはＳである）
の化合物をもたらす、
または、
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化９】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１０】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらす、
または、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１１】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１２】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基を常套の方法により除去し、式
【化１３】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらし、次いで、塩基の存在下、式
【化１４】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって、活性化エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくはギ酸アルキル、特に好ましくはギ酸エチルを形成しており、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、式
【化１５】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらし、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する。
【請求項５】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項７】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項８】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、さらなる有効成分と組み合わせて含む、医薬。
【請求項９】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防のための、請求項７または請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
静脈内使用のための請求項７ないし請求項９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項７ないし請求項１０のいずれかに記載の医薬を使用する、ヒトおよび動物における血栓塞栓性障害の処置および／または予防方法。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中、
ｎは、１または２の数であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している］
の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項２】
式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって５員または６員の環を形成している、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
ｎが、１または２の数であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が水素であり、
Ｒ３が水素である、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、それらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または、それらの塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、以下を特徴とする方法；
［Ａ］式
【化２】
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化３】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、
そして、Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化４】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、
Ｑは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物に変換し、
次いで、最後のものを、以下の方法に従って反応させる；
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載を有し、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化７】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＸはＯまたはＳである）
の化合物をもたらす、
または、
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化９】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１０】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらす、
または、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１１】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１２】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基を常套の方法により除去し、式
【化１３】
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらし、次いで、塩基の存在下、式
【化１４】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって、活性化エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくはギ酸アルキル、特に好ましくはギ酸エチルを形成しており、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、式
【化１５】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、本請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式
【化１６】
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物をもたらし、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する。
【請求項５】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項７】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項８】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、さらなる有効成分と組み合わせて含む、医薬。
【請求項９】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防のための、請求項７または請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
静脈内使用のための請求項７ないし請求項９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項７ないし請求項１０のいずれかに記載の医薬を使用する、ヒトおよび動物における血栓塞栓性障害の処置および／または予防方法。
【公表番号】特表２０１０−５３２７７０（Ｐ２０１０−５３２７７０Ａ）
【公表日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１５３７７（Ｐ２０１０−５１５３７７）
【出願日】平成２０年６月２８日（２００８．６．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００５３０１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００７０２６
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（５０７１１３１８８）バイエル・シェーリング・ファルマ・アクチェンゲゼルシャフト (141)
【氏名又は名称原語表記】Ｂａｙｅｒ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２８日（２００８．６．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００５３０１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００７０２６
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（５０７１１３１８８）バイエル・シェーリング・ファルマ・アクチェンゲゼルシャフト (141)
【氏名又は名称原語表記】Ｂａｙｅｒ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ
【Ｆターム（参考）】
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