カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を含む抗炎症性薬学的組成物
本発明は、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症または痛みの軽減用または治療用の薬学的組成物に関する。本発明は、カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物及びニンドウのエタノール抽出物の併用投与が、それらの単独投与に比べて、試験管内（in vitro）及び生体内（in vivo）の試験で、抗炎症効果及び鎮痛効果において顕著に優れた相乗効果を示すということを明らかにしたことに基づく。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カジノキ（Broussonetia papyrifera）抽出物及びニンドウ（Lonicera japonica）抽出物を有効成分として含む、炎症または痛みの予防用、軽減用または治療用の薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、生体組織が損傷を受けたときに体内で起こる防御反応であり、例えば、外傷、火傷、または細菌感染などに応答して、体の一部に充血、浮腫、発熱、痛みを起こしうる。炎症性シグナルは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路およびリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）経路を介して作られ、これらの経路により、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサンなどが産生される。炎症性シグナルが生体の標的部位に伝えられると、さまざまな変化が起こる。例えば、炎症を受ける標的部位の近傍の血管が拡張されて血管への血液供給を旺盛にし、細菌を捕食する好中球などの炎症反応に必要な血液細胞を標的部位に供給する。しかし、生体の防御反応が異常および過度に起これば、多様な炎症性疾患が現れることになる。したがって、炎症性シグナルを作る経路の酵素（例えば、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２、５−ＬＯＸ、または１２−ＬＯＸ）の産生を妨害して経路を遮断することによって、炎症反応を抑制する薬物が開発されている。
【０００３】
一方、ＬＯＸは、炎症反応以外に、気管支喘息、慢性閉鎖性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アトピー性皮膚炎、乾癬などにも関与すると知られている。
【０００４】
これまでＮＳＡＩＤ及びＳＡＩＤを始めとする多様なメカニズムの抗炎症薬物が開発されているが、それらは、副作用があるだけではなく、慢性閉鎖性肺疾患(COPD)、アトピー疾患などの慢性炎症、及びアレルギー疾患の根本的な治療には有効ではないので、炎症を抑制するための、効果的かつ安全で経済的な医薬品の開発が必要である。
【０００５】
カジノキ（Broussonetia papyrifera（L.）Vent.（Moraceae））は、中国、日本、韓国に分布しており、その皮は韓国の伝統医療で、抗炎症剤、抗気管支炎剤、鎮咳剤として使われてきた。カジノキの根のＰＴＰ１Ｂ及びチロシナーゼに対する阻害活性が報告され（非特許文献１及び非特許文献２）、最近では、カジノキの根、幹、葉、果実の９５％エタノール抽出物が、生体内で抗侵害受容活性及び抗炎症活性を示すと報告された（非特許文献３）。カジノキの根皮からパピリフラボノールＡ（papyriflavonol Ａ）及びブルッソカルコンＡ（broussochalcone Ａ）を含む何種かのプレニル化フラボノイド（prenylated flavonoid）が成功裏に分離された（非特許文献４）。
【０００６】
ニンドウ（Lonicera japonica（Thunb.）（Caprifoliaceae））は、他者に巻きついて育つ潅木であり、解毒剤として、または泌尿器障害、高熱、頭痛の治療に使われてきた（非特許文献５）。ニンドウは、抗炎症剤として知られており、上気道感染、糖尿病、関節リウマチの治療に使われている（非特許文献６）。ニンドウの植物全体からロニセロシド（loniceroside）及びイリドイド（iridoid）を含むさまざまな成分が分離されている（非特許文献７、非特許文献８及び非特許文献９）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Chen et al．，２００２
【非特許文献２】Hwang and Lee，２００７
【非特許文献３】Lin et al．，２００８
【非特許文献４】Son et al．，２００１
【非特許文献５】Shougakukan，１９８５
【非特許文献６】Lee et al．，１９９８
【非特許文献７】Lee et al．，１９９５
【非特許文献８】Kwak et al．，２００３
【非特許文献９】Qian et al．，２００７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
これまで多様なメカニズムの抗炎症薬物が開発されてきたが、それらは、副作用があるだけではなく、一部の疾患の治療においては、根本的な治療として有効ではない。そのため、さらに効果的かつ安定で経済的な医薬品の開発が必要である。そのような薬学的組成物は、二以上の有効成分を含む複合剤であるが、抗炎症作用、抗侵害受容作用を有する物質を併用投与した場合、生体内でのその効果は予測し難い。本発明は、異なる作用物質と併用投与した場合に、相乗的な抗炎症効果を有する新しい抗炎症複合組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的を達成するために、本発明者らは、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を併用して使用した場合、それぞれの抽出物を単独で使用するより、抗炎症効果及び抗侵害受容効果に優れるということを研究し、明らかにした。この発見を基に、本発明者らは、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの予防用、軽減用または治療用組成物を開発した。本薬学的組成物に含まれるカジノキ抽出物としては、プレニル化フラボノイド濃縮抽出物(prenylated flavonoid-enriched extract)が望ましく、ニンドウ抽出物としては、ニンドウのエタノール抽出物が望ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明による、カジノキの抽出物及びニンドウの抽出物を有効成分として含む組成物は、個別に用いるより併用した方が抗炎症効果及び抗侵害受容効果に優れるので、効果的な抗炎症剤、消炎剤または鎮痛剤として使われうる。
【００１１】
本発明の薬学的組成物は、カジノキとニンドウとの二種の抽出物成分を含めることで、治療範囲が広く、相乗的で強力な治療効果を示す。カジノキ抽出物とニンドウ抽出物を併用すると、治療効果が増大する。このように、抽出物を単独で使用するときより、少量の投与で所望の効果を達成でき、また少量の使用は副作用または有害作用を少なくすることができるという利点もある。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】５−ＬＯＸにより媒介されたＡ２３１８７で処理されたＲＢＬ−１細胞からのロイコトリエンの産生に対するカジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の効果を示したものである。＊及び＊＊はそれぞれ、Ａ２３１８７で処理された対照群と比較した、ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１の有意差を示している。
【図２】ＬＰＳで処理されたＲＡＷ ２６４．７細胞からのＰＧＥ２の産生に対するカジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物及び／またはニンドウのエタノール抽出物の効果を示したものである。ＬＰＳ−処理群は、１２０±８．０ｎM ＰＧＥ２を産生した（基底レベルは、それぞれ１．２±０．４ｎM ＰＧＥ２、０．８±０．３μM ＮＯである）。ｎ＝３。＊及び＊＊はそれぞれ、ＬＰＳ−処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１の有意差を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、カジノキ抽出物またはその画分、及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの軽減または治療のための薬学的組成物、ならびにこれを使用して炎症並びに痛みを治療する方法に関する。
【００１４】
本発明は、カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物及びニンドウのエタノール抽出物の併用投与が、それらの単独投与に比べて、試験管内（in vitro）及び生体内（in vivo）の試験で、抗炎症効果及び鎮痛効果において顕著に優れた相乗効果を示すということを明らかにしたことに基づく。
【００１５】
本発明の発明者らは、カジノキの根皮抽出物の画分を、酢酸エチルを使用して分画し、疎水性であるプレニル化フラボノイド濃縮画分（ＥＢＰ）を調製し、そして、ニンドウの植物全体からエタノール抽出物（ＥＬＪ）を調製した。ＥＢＰは、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）により媒介される、Ａ２３１８７で処理されたラット好塩基性白血病（ＲＢＬ−１）細胞からのロイコトリエンの産生を強力に阻害する。ＥＬＪは、同じものに対し弱い阻害作用を示す。しかし、ＥＢＰとＥＬＪを併用すると、強い相乗的な阻害活性が見られる（図１）。ＥＢＰおよびＥＬＪはまた、シクロオキシゲナーゼ−２で触媒されたＰＧＥ２の産生を阻害する（図２）。アラキドン酸で誘発されたマウスの耳浮腫に対しては、経口投与された５〜２００ｍｇ／ｋｇのＥＢＰが阻害活性を示し、ＥＢＰとＥＬＪとの１：１混合物であるＢＬはＥＢＰまたはＥＬＪ単独投与よりも強力な阻害活性を示した（表１）。λ−カラギーナンで誘導された足浮腫に対しては、ＢＬは強力かつ相乗的な抗炎症効果を示す（表２）。酢酸誘発ライジング（writhing）テストでＢＬは、５０〜４００ｍｇ／ｋｇで経口投与されたとき、強力な鎮痛活性を示す（表３）。かような結果は、実験した物質がすべて、試験管内及び生体内で抗炎症活性を有し、ＥＢＰまたはＥＬＪが併用投与されるとそれらの単独投与より強力かつ相乗的な抗炎症効果が得られるということを示している。
【００１６】
前記実験結果を基に本発明は、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの予防用，改善用または治療用薬学的組成物を提供する。
【００１７】
本発明はまた、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として投与することによる、炎症及び／または痛みの予防、改善または治療方法を提供する。
【００１８】
カジノキ抽出物は、例えば、熱湯、アルコール水溶液、または疎水性溶媒を利用して抽出することで調製できる。さらに、アルコール水溶液を疎水性溶媒で抽出することもできる。しかしながら、抽出方法はこれらに制限されるものではない。ニンドウの抽出物は、例えば、熱湯、アルコール水溶液、または疎水性溶媒などを使用して抽出することで調製できるが、これらに制限されるものではない。本発明の組成物として、カジノキの根皮の抽出物としてカジノキ由来のプレニル化フラボノイド濃縮抽出物を使用し、ニンドウ抽出物として、ニンドウ由来のエタノール抽出物を使用することが望ましい。カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物は、例えば、カジノキをエタノールで抽出し、真空下で乾燥させて酢酸エチルで分画するなどの方法で調製できる。しかしながら、プレニル化フラボノイド濃縮抽出物を調製するための様々な方法のうちの任意のものを使用しても差し支えない。使用されるエタノールの量は、５ないし１００％、望ましくは、５０〜１００％である。
【００１９】
本発明の組成物の有効成分として含まれるカジノキのプレニル化濃縮抽出物のニンドウのエタノール抽出物に対する重量比は、１：０．１〜１：１０、望ましくは１：０．５〜１：４、さらに望ましくは１：１である。
【００２０】
本発明の組成物は、薬学的分野での一般的な方法によって、経口投与に適した単位投与型の製剤または注射剤として剤形化させて投与できる。経口投与に適した剤形には、硬質及び軟質のカプセル剤、錠剤、懸濁剤、シロップ剤、散剤、徐放製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、エリキシル剤、流動エキス剤、沈殿剤、チンキ剤、酒精剤などが含まれる。かような経口投与用の製剤には、二種またはそれ以上の薬物学的活性成分以外に、一つまたはそれ以上の薬学的に不活性な一般的な担体が含まれる。薬学的に不活性な担体の例としては、澱粉、ラクトース、カルボキシメチルセルロース、カオリンなどの賦形剤；水、ゼラチン、アルコール、グルコース、アラビアゴム、トラガカントゴムなどの結合剤；澱粉、デキストリン、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤；タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、流動パラフィンなどの滑沢剤が挙げられる。本発明ではまた、溶解を促進するための溶解補助剤などをさらに用いることもできる。
【００２１】
本発明の薬学的組成物はまた、薬物の投与形態と治療的有効量とに適した方法で、例えば、経口、鼻腔内、静脈内、腹腔内、皮下または局所投与により投与できる。
【００２２】
薬学的組成物はまた、当該技術分野で開示されている他の公知の方法（例えば、Remington's Pharmaceutical Scienceに記載された方法）を使用して投与することもできる。例えば、注射剤の場合は、ハンクス液、リンゲル液、生理食塩緩衝液などの生理学的に適した緩衝液を使用して調製できる。前記溶液は、懸濁剤、安定剤及び／または分散剤を含むことができる。または、本発明の薬学的組成物は、粉末状に調製され、使用前に滅菌水などの適当な担体と一緒にして使われてもよい。または、本発明の薬学的組成物は、リポソーム、懸濁液、または徐放製剤中に調製されてもよい。本発明の薬学的組成物は、腫瘍治療のために、単独で、または手術、ホルモン治療、薬物治療及び生物学的反応調節剤などと併用して使用できる。
【００２３】
本発明の薬学的組成物は、急性または慢性の気管支炎、喘息、COPD、アトピー性皮膚炎、乾癬、アレルギー性鼻炎、胃炎、胃潰瘍、過敏性大腸症候群、胃食道逆流症、肝炎、血管炎症疾患、骨関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、多発性関節炎、腰痛、抜歯後の痛み、頭痛、手術後の痛み及び炎症、歯痛、生理痛などの消炎鎮痛効果を必要とする各種疾病の治療に使われるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
本発明の薬学的組成物は、多様な炎症性呼吸器疾患、炎症性自己免疫疾患、炎症性皮膚疾患、炎症性胃腸関連疾患、炎症性心血関連疾患及び炎症性骨格筋疾患などの治療のために使われうる。
【００２５】
本発明の薬学的組成物の投与量及び投与時期は、投与対象の年齢、性別、状態、体重、投与経路、薬の種類によって変わる。一日の投与量は、約０．０１μｇ／ｋｇないし１０ｇ／ｋｇでありえ、望ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇでありえる。
【００２６】
本発明で使われるあらゆる技術用語は、取り立てて定義しない限り、当業者が理解するのと同じ意味で使われる。また、本明細書には、望ましい方法や試料が記載されるが、これらと類似していたり、あるいは同等なものも本発明の範疇に含まれる。本明細書に参考文献として記載されるあらゆる刊行物の内容は、本発明に組み入れられる。
【００２７】
本発明について、下記実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明がそれらによって制限されるものではない。
【実施例】
【００２８】
実施例
＜試薬及び動物＞
Ａ２３１８７およびN−［２−シクロヘキシルオキシ−４−ニトロフェニル］メタンスルホンアミド（ＮＳ−３９８）は、Biomol（Plymouth Meeting、ＰＡ）から；２−アミノ−５，６−ジヒドロ−６−メチル−４H−１，３−チアジンヒドロクロライド（ＡＭＴ）は、Tocris Cookson Ltd.（ＵＫ）から；アラキドン酸（ＡＡ、９９％）、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、ノルジヒドログアヤレト酸（ＮＤＧＡ）、プレドニゾロン、インドメタシン、アスピリン及びリポ多糖（ＬＰＳ；大腸菌（Escherichia coli）０１２７：Ｂ８）は、Sigma Chem．（セントルイス、ＭＯ）から；ＤＭＥＭ及びＦＢＳなどの培養用試薬は、Gibco BRL（Grand Island、ＮＹ）から；蛋白質定量キットは、Bio-Rad Lab.（Hercules、ＣＡ）から購入した。
【００２９】
オスのSprague-Dawley（ＳＤ）ラット及びＩＣＲマウス（４周齢、特定病原菌フリー）をオリエント−バイオ（韓国）から購入した。実験動物は、標準実験用食餌（Purina Korea）と水とを自由に供給し、実験する少なくとも７日以前から、動物飼育場（ＫＮＵ）で、２０〜２２℃、相対湿度４０〜６０％、１２時間／１２時間（明／暗）周期で馴化させた。動物実験計画は、ＫＮＵ動物実験委員会の承認を受け（ＫＩＡＣＵＣ−０９−００１２）、本実験は、実験動物の保護及び使用に係わる韓国食品医薬品安全庁のガイドラインに記載された倫理規定に沿って実施された。
【００３０】
統計分析
実験値は、算術平均±ＳＤでもって示した。統計学的有意性の決定は、ＡＮＯＶＡテストで実施した。
【００３１】
＜実施例１＞カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の調製
カジノキは、韓国の南部地方（安東付近の地域）で収集した。カジノキの根の乾燥させた皮を細かく切り、１００％エタノールで抽出した。エタノール抽出物を真空下で乾燥させ、最終抽出物を水に分散させて酢酸エチルで分画した後、酢酸エチル画分を乾燥させ、乾燥させた酢酸エチル画分（ＥＢＰ）を試験に使用した。この画分から、パピリフラボノールＡ及びブルッソカルコンＡをSon et al．（２００１）に記載された方法で分離して確認した。
【００３２】
ニンドウは、生薬材市場で購入して使用した。乾燥させたニンドウを細かく切った後、７０％エタノールで抽出した。エタノール抽出物を真空下で乾燥させ、乾燥させたエタノール抽出物（ＥＬＪ）を試験に使用した。エタノール抽出物からロガニン（Loganin）及びスウェロシド（Sweroside）を、Kawai et al．（１９８８）に記載された方法によって分離した。
【００３３】
ＥＢＰのプレニル化フラボノイド（パピリフラボノールＡ及びブルッソカルコンＡ）及びＥＬＪのイリドイド（ロガニンおよびスウェロシド）の含有量はＨＰＬＣ分析で確認した。
【００３４】
ＢＬは、ＥＢＰ及びＥＬＪの１：１（ｗ／ｗ）混合物である。
【００３５】
＜実施例２＞ラット好塩基球白血病−１（ＲＢＬ−１）細胞培養及びロイコトリエン（ＬＴ）の測定
American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ、Rocksville）から入手したＲＢＬ−１細胞をＲＰＭＩ １６４０で、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン及び１％抗生物質とともに、５％ＣＯ２、３７℃でインキュベーションした。細胞を９６−ウェルプレートに２時間置き、試験物質と１０分間、あらかじめインキュベーションした。試験物質は、ＤＭＳＯに溶解し、無血清ＤＭＥＭで適切な濃度に希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度は、０．１％（ｖ／ｖ）に調節された。細胞生存能をMossman（１９８３）の方法によって、ＭＴＴアッセイで確認した。５−ＬＯＸを活性化させるために、Ａ−２３１８７（イオノフォア、３μM）を細胞に添加し、Triesら（２００２）の方法を若干修正した方法によって、細胞を１５分間インキュベーションした。培地を回収し、５−ＬＯＸの産物であるシステイニルロイコトリエン（cysteinyl leukotriene）（ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４）の濃度を、ＥＬＩＳＡキット（Cayman Chem．）を使用して、メーカーが勧めた方法によって測定した。
【００３６】
ＲＢＬ−１細胞がＡ２３１８７（カルシウムイオノフォア）で活性化されれば、５−ＬＯＸによって、多量のシステイニル−ＬＴが産生されるということが周知である。本実験でＲＢＬ−１細胞から産生されたＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４の量は、１５分間（ｎ＝３）の基底レベル（basal level）４．２±１．２ｐｇ／ｍｌから１，１０９．５±９３．６ｐｇ／ｍｌである。かような条件下で、カジノキ由来のプレニル化フラボノイド濃縮抽出物画分（ＥＢＰ）は、１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌで用いる場合、それぞれ５％、２４％、９６％、９９％及び９９％の対応する阻害活性を示す。ＥＢＰは、濃度依存的に５−ＬＯＸ媒介ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４産生を阻害した（図１）。線形回帰分析の結果、ＩＣ５０値は、３．１μｇ／ｍｌであった。
【００３７】
一方、ＥＬＪは、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ及び２５０μｇ／ｍｌで用いられ、それぞれ１％、６％、１８％、７４％及び９９％の対応する阻害活性を示した。すなわちＥＬＪは比較的弱い阻害活性を有し、５−ＬＯＸ媒介ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４産生を弱く阻害した（ＩＣ５０＝７８．７μｇ／ｍｌ）。
【００３８】
ＥＢＰとＥＬＪを含む混合物の場合は、それぞれを個別に使用した場合より強力に５−ＬＯＸ活性を阻害した。ＥＢＰの重量に基づき、ＩＣ５０＜１μｇ／ｍｌであった。ＥＢＰおよびＥＬＪの各物質の阻害活性の和と比較するとき、混合物の方が、５−ＬＯＸ活性に対する阻害効果がはるかに強力であり、混合物に相乗効果があるということが確認された。
【００３９】
例えば、ＥＢＰ １μｇ／ｍｌ及びＥＬＪ ４μｇ／ｍｌをそれぞれ個別に用いる場合、ロイコトリエン（ＬＴ）産生に対する阻害活性が現れないが、ＥＢＰとＥＬＪを併用（重量比で１：４の混合物）した場合、阻害活性は予想外に相乗的に６１％に増加した。ＥＢＰ ２μｇ／ｍｌ及びＥＬＪ ３μｇ／ｍｌをそれぞれ個別に用いる場合、ロイコトリエン（ＬＴ）産生に対する阻害活性は、それぞれ２４％及び０％であったが、ＥＢＰとＥＬＪを併用（重量比で１：１．５の混合物）した場合、阻害活性は予想外に相乗的に９２％に増加した。ＥＢＰ及びＥＬＪを、それぞれ２．５μｇ／ｍｌずつ混合した場合（重量比１：１）も、５−ＬＯＸ−媒介ＬＴ産生はほとんど完全に阻害され、阻害効果は予想外に相乗的に９６％増加した。
【００４０】
実験に使われたＥＬＪの量は、ＥＬＪ単独ではロイコトリエン産生阻害活性が生じないレベルに該当する。しかし、ＥＬＪがＥＢＰと併用される場合、ＥＢＰの５−ＬＯＸ阻害活性は、ＥＬＪを添加することによって有意に増強され、ＥＢＰとＥＬＪの混合物は、非常に高い阻害効果を示した。加えて、ＥＢＰ及びＥＬＪの重量比１：１の混合物（ＢＬ）を用いて追加の実験を行った。
【００４１】
ノルジヒドログアヤレト酸（ＮＤＧＡ）が比較化合物として使用され、５−ＬＯＸを強力に阻害した（１μMで９９％阻害）。
【００４２】
＜実施例３＞ＲＡＷ ２６４．７細胞でＰＧＥ２産生に及ぼす影響
炎症反応の媒介因子であるＰＧＥ２の産生における、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の効果について調べる。
【００４３】
American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ、Rocksville）から入手したＲＡＷ ２６４．７細胞を、１０％ＦＢＳ及び１％抗生物質（１００Ｕ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン）を補充されたＤＭＥＭ中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件下でインキュベートした。細胞をChi et al．（２００１）の方法でリポ多糖（ＬＰＳ）で活性化させた。細胞を９６−ウェルプレート（２ｘ１０５セル／ウェル）に添加して２時間あらかじめインキュベーションした後、試料物質及びＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を添加し、その培地を、取り立てて規定しない限り、２４時間インキュベーションした。培地中のＰＧＥ２濃度を、ＰＧＥ２用ＥＬＩＳＡキット（Cayman Chem．Ｃｏ．）を使用してメーカーの勧めによって測定した。
【００４４】
ＥＢＰ及びＢＬは５０μｇ／ｍｌの濃度で、ＬＰＳ処理されたマウスマイクロファージ細胞株であるＲＡＷ ２６４．７細胞からのＣＯＸ−２触媒ＰＧＥ２産生を統計学的に有意に阻害した（図２）。ＥＢＰ及びＢＬのＩＣ５０値は、ＰＧＥ２産生に対しては、それぞれ２１．４μｇ／ｍｌ及び２９．０μｇ／ｍｌであった。
【００４５】
＜実施例４＞アラキドン酸（ＡＡ）誘発マウス耳浮腫に対する効果
抗炎症動物モデルにおける生体内での抗炎症活性を確認するために、ＡＡ誘発マウス耳浮腫アッセイを採用した。Kim et al．（１９９３）の方法により、２％ＡＡアセトン溶液をマウスの耳に適用し（２０μｌ／耳）、１時間後、耳の厚さをダイヤル厚みゲージ（Mitutoyo、日本）を使用して測定した。ＡＡ処置１時間前に、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解した試験物質をマウスに経口投与した（０．１ｍｌ／マウス）。各群は５匹を含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表１のａ）。表１のｂは、ＡＡ処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、ＡＡ処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００４６】
（表１）ＡＡ誘発マウス耳浮腫の阻害
【００４７】
ＡＡ処理を行っていないネガティブ対照群は、耳の厚さが０．００３±０．００１ｍｍ増大した。ＥＢＰ及びＥＬＪを５０ないし２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、浮腫反応を阻害し、ＥＬＪよりＥＢＰの方がさらに強力な阻害効果を有した（表１）。ＥＢＰとＥＬＪとの１：１重量比混合物であるＢＬを投与した場合、ＥＢＰ及びＥＬＪそれぞれを投与した場合より、炎症抑制効果が相乗的に増大した。
【００４８】
例えば、ＥＢＰ ５０ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は２８．６％であり、ＥＬＪを５０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、阻害効果はなかった。しかし、ＥＢＰ ５０ｍｇ／ｋｇとＥＬＪ５０ｍｇ／ｋｇとの混合物であるＢＬ １００ｍｇ／ｋｇでは、３４．４％の阻害効果を示した。すなわち、ＢＬを投与した場合、予測できない相乗効果が現れた。また、ＥＢＰ ２００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は４５．７％であり、ＥＬＪを２００ｍｇ／ｋｇ投与した場合、耳浮腫の阻害効果は２５．０％であった。さらに、ＢＬ ２００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は６０．０％阻害であった。すなわち、ＢＬを投与した群が最も阻害効果が高かった。また、ＥＢＰ ２００ｍｇ／ｋｇとＥＬＪ２００ｍｇ／ｋｇとの混合物であるＢＬ ４００ｍｇ／ｋｇでは、７８．６％の阻害効果を示し、ＥＢＰの阻害活性とＥＬＪの阻害活性の和よりさらに高い阻害活性を示した。この結果から、ＥＢＰとＥＬＪの併用は相乗効果を有するということが分かる。特に、ＢＬ混合物４００ｍｇ／ｋｇの阻害活性は、インドメタシン（２０ｍｇ／ｋｇ）の阻害活性７０％よりさらに高かった。
【００４９】
＜実施例５＞マウスでのλ−カラギーナン（ＣＧＮ）誘発足浮腫に対する効果
抗炎症活性を測定するために、Winter et al．（１９６２）の方法を若干修正してマウスのＣＧＮ誘発足浮腫アッセイを実施した。試験物質をマウスに経口投与し、１時間後に、パイロジェンフリー滅菌生理食塩水にＣＧＮを溶解して調製した１％ＣＧＮ（ｗ／ｖ）溶液（０．０５ｍｌ／足）を足に注射した。５時間後に足の容積をplenthysmometer（Ugo Basil、Italy）で測定した。ＣＧＮ投与前の足の容積より増大すれば浮腫を発症したと見なした。
【００５０】
試験物質は、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解して経口投与した。ＣＧＮ処理を行っていないネガティブ対照群の足の容積は、０．１４９±０．０２５ｍｌであった。各群は、それぞれ５匹のマウスを含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表２のａ）。表２のｂは、ＣＧＮ処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、ＣＧＮ処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００５１】
（表２）マウスでのカラギーナン（ＣＧＮ）誘発足浮腫の阻害
【００５２】
ＣＧＮ−誘導足浮腫に対して、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇのＢＬを経口投与した場合、用量依存的な阻害活性を示した（表２）。ＥＢＰまたはＥＬＪを、個別にそれぞれ２００ｍｇ／ｋｇ投与した場合、それぞれ２３．７％及び１１．８％の阻害活性を示し、阻害活性の和は３５．５％であった。一方、ＥＢＰ及びＥＬＪ２００ｍｇ／ｋｇずつを含むＢＬ ４００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、ＢＬの阻害活性は４７．４％であった。したがって、ＥＢＰとＥＬＪの併用投与は、相乗的な阻害効果を示すということが確認される。
【００５３】
＜実施例６＞マウスでの酢酸誘発ライジングテスト
抗侵害受容活性を測定するために、１％酢酸（１００μｌ）を、マウスの腹腔内に投与した。酢酸の注射の１０分後から１０分間、ライジングの回数をカウントした。酢酸を注射する前に、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解した試験物質を経口投与（０．１ｍｌ／マウス）した。
【００５４】
各群は、それぞれ６匹のマウスを含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表３のａ）。表３のｂは、酢酸処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、酢酸処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００５５】
（表３）マウスでの酢酸誘発ライジングに対する阻害
【００５６】
抗侵害受容活性アッセイの結果、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇのＥＬＪを経口投与した場合、ＥＬＪの抗侵害受容活性は、ＥＢＰより強力であり、ＢＬは強力に用量依存的にマウスでの酢酸誘発ライジングを阻害した（表３）。
【００５７】
カジノキのいくつかの部分が、抗侵害受容活性及び抗炎症活性があると報告されている（Lin et al．，２００８）。カジノキの根、葉、実のエタノール抽出物を６００ないし２，０００ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、マウスでの酢酸誘発ライジングが生体内で阻害された。これらの結果を比較すると、本実験の組成物は、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇの濃度で、より強力な生体内抗侵害受容活性及び抗炎症活性を示した。
【００５８】
本発明のカジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含有する多様な種類の製剤を下記のように調製した。
【００５９】
製剤例１：錠剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 １００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 １００ｍｇ
乳糖 ５０ｍｇ
澱粉 １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を混合し、一般的な錠剤の調製方法によって打錠して錠剤を製剤した。
【００６０】
製剤例２：散剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 １００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 ４００ｍｇ
乳糖 ３０ｍｇ
澱粉 ２０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を完全に混合した後、ポリエチレンがコーティングされた包み（slice）に充填して密封して散剤を調製した。
【００６１】
製剤例３：カプセル剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 ２００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 １００ｍｇ
乳糖 １５０ｍｇ
澱粉 ２８ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を混合し、一般的なカプセル剤の調製方法によって、ゼラチン軟カプセルに充填してカプセル剤を調製した。
【００６２】
製剤例４：軟質カプセル剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 ２００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 ２００ｍｇ
ポリエチレングリコール４００ ４００ｍｇ
濃グリセリン ５５ｍｇ
精製水 ３５ｍｇ
ポリエチレングリコールと濃グリセリンとを混合した後、精製水を添加した。約６０℃に維持しながら混合物にフラボンを加え、撹拌機で約１，５００ｒｐｍの回転速度で均一に撹拌した。前記混合液を穏やかに撹拌しながら室温に冷却し、真空ポンプで気泡を除去して、軟質カプセルの中身を調製した。軟質カプセルの被膜は、１カプセル当たりゼラチン１３２ｍｇ、濃グリセリン５２ｍｇ、７０％ジソルビトール液６ｍｇ、及び着香剤としてエチルバニリン適量、コーティング基材としてカルナウバ蝋を使用し、一般的な調製方法で調製した。
【００６３】
＜参考文献＞
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【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明によるカジノキの抽出物及びニンドウの抽出物を有効成分として含む組成物は、抽出物を単独で用いるより併用した方が優れた抗炎症効果及び抗侵害受容効果を有するため、効果的な抗炎症剤、消炎剤または鎮痛剤として使われうる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カジノキ（Broussonetia papyrifera）抽出物及びニンドウ（Lonicera japonica）抽出物を有効成分として含む、炎症または痛みの予防用、軽減用または治療用の薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、生体組織が損傷を受けたときに体内で起こる防御反応であり、例えば、外傷、火傷、または細菌感染などに応答して、体の一部に充血、浮腫、発熱、痛みを起こしうる。炎症性シグナルは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路およびリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）経路を介して作られ、これらの経路により、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサンなどが産生される。炎症性シグナルが生体の標的部位に伝えられると、さまざまな変化が起こる。例えば、炎症を受ける標的部位の近傍の血管が拡張されて血管への血液供給を旺盛にし、細菌を捕食する好中球などの炎症反応に必要な血液細胞を標的部位に供給する。しかし、生体の防御反応が異常および過度に起これば、多様な炎症性疾患が現れることになる。したがって、炎症性シグナルを作る経路の酵素（例えば、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２、５−ＬＯＸ、または１２−ＬＯＸ）の産生を妨害して経路を遮断することによって、炎症反応を抑制する薬物が開発されている。
【０００３】
一方、ＬＯＸは、炎症反応以外に、気管支喘息、慢性閉鎖性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アトピー性皮膚炎、乾癬などにも関与すると知られている。
【０００４】
これまでＮＳＡＩＤ及びＳＡＩＤを始めとする多様なメカニズムの抗炎症薬物が開発されているが、それらは、副作用があるだけではなく、慢性閉鎖性肺疾患(COPD)、アトピー疾患などの慢性炎症、及びアレルギー疾患の根本的な治療には有効ではないので、炎症を抑制するための、効果的かつ安全で経済的な医薬品の開発が必要である。
【０００５】
カジノキ（Broussonetia papyrifera（L.）Vent.（Moraceae））は、中国、日本、韓国に分布しており、その皮は韓国の伝統医療で、抗炎症剤、抗気管支炎剤、鎮咳剤として使われてきた。カジノキの根のＰＴＰ１Ｂ及びチロシナーゼに対する阻害活性が報告され（非特許文献１及び非特許文献２）、最近では、カジノキの根、幹、葉、果実の９５％エタノール抽出物が、生体内で抗侵害受容活性及び抗炎症活性を示すと報告された（非特許文献３）。カジノキの根皮からパピリフラボノールＡ（papyriflavonol Ａ）及びブルッソカルコンＡ（broussochalcone Ａ）を含む何種かのプレニル化フラボノイド（prenylated flavonoid）が成功裏に分離された（非特許文献４）。
【０００６】
ニンドウ（Lonicera japonica（Thunb.）（Caprifoliaceae））は、他者に巻きついて育つ潅木であり、解毒剤として、または泌尿器障害、高熱、頭痛の治療に使われてきた（非特許文献５）。ニンドウは、抗炎症剤として知られており、上気道感染、糖尿病、関節リウマチの治療に使われている（非特許文献６）。ニンドウの植物全体からロニセロシド（loniceroside）及びイリドイド（iridoid）を含むさまざまな成分が分離されている（非特許文献７、非特許文献８及び非特許文献９）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Chen et al．，２００２
【非特許文献２】Hwang and Lee，２００７
【非特許文献３】Lin et al．，２００８
【非特許文献４】Son et al．，２００１
【非特許文献５】Shougakukan，１９８５
【非特許文献６】Lee et al．，１９９８
【非特許文献７】Lee et al．，１９９５
【非特許文献８】Kwak et al．，２００３
【非特許文献９】Qian et al．，２００７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
これまで多様なメカニズムの抗炎症薬物が開発されてきたが、それらは、副作用があるだけではなく、一部の疾患の治療においては、根本的な治療として有効ではない。そのため、さらに効果的かつ安定で経済的な医薬品の開発が必要である。そのような薬学的組成物は、二以上の有効成分を含む複合剤であるが、抗炎症作用、抗侵害受容作用を有する物質を併用投与した場合、生体内でのその効果は予測し難い。本発明は、異なる作用物質と併用投与した場合に、相乗的な抗炎症効果を有する新しい抗炎症複合組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的を達成するために、本発明者らは、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を併用して使用した場合、それぞれの抽出物を単独で使用するより、抗炎症効果及び抗侵害受容効果に優れるということを研究し、明らかにした。この発見を基に、本発明者らは、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの予防用、軽減用または治療用組成物を開発した。本薬学的組成物に含まれるカジノキ抽出物としては、プレニル化フラボノイド濃縮抽出物(prenylated flavonoid-enriched extract)が望ましく、ニンドウ抽出物としては、ニンドウのエタノール抽出物が望ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明による、カジノキの抽出物及びニンドウの抽出物を有効成分として含む組成物は、個別に用いるより併用した方が抗炎症効果及び抗侵害受容効果に優れるので、効果的な抗炎症剤、消炎剤または鎮痛剤として使われうる。
【００１１】
本発明の薬学的組成物は、カジノキとニンドウとの二種の抽出物成分を含めることで、治療範囲が広く、相乗的で強力な治療効果を示す。カジノキ抽出物とニンドウ抽出物を併用すると、治療効果が増大する。このように、抽出物を単独で使用するときより、少量の投与で所望の効果を達成でき、また少量の使用は副作用または有害作用を少なくすることができるという利点もある。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】５−ＬＯＸにより媒介されたＡ２３１８７で処理されたＲＢＬ−１細胞からのロイコトリエンの産生に対するカジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の効果を示したものである。＊及び＊＊はそれぞれ、Ａ２３１８７で処理された対照群と比較した、ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１の有意差を示している。
【図２】ＬＰＳで処理されたＲＡＷ ２６４．７細胞からのＰＧＥ２の産生に対するカジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物及び／またはニンドウのエタノール抽出物の効果を示したものである。ＬＰＳ−処理群は、１２０±８．０ｎM ＰＧＥ２を産生した（基底レベルは、それぞれ１．２±０．４ｎM ＰＧＥ２、０．８±０．３μM ＮＯである）。ｎ＝３。＊及び＊＊はそれぞれ、ＬＰＳ−処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１の有意差を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、カジノキ抽出物またはその画分、及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの軽減または治療のための薬学的組成物、ならびにこれを使用して炎症並びに痛みを治療する方法に関する。
【００１４】
本発明は、カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物及びニンドウのエタノール抽出物の併用投与が、それらの単独投与に比べて、試験管内（in vitro）及び生体内（in vivo）の試験で、抗炎症効果及び鎮痛効果において顕著に優れた相乗効果を示すということを明らかにしたことに基づく。
【００１５】
本発明の発明者らは、カジノキの根皮抽出物の画分を、酢酸エチルを使用して分画し、疎水性であるプレニル化フラボノイド濃縮画分（ＥＢＰ）を調製し、そして、ニンドウの植物全体からエタノール抽出物（ＥＬＪ）を調製した。ＥＢＰは、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）により媒介される、Ａ２３１８７で処理されたラット好塩基性白血病（ＲＢＬ−１）細胞からのロイコトリエンの産生を強力に阻害する。ＥＬＪは、同じものに対し弱い阻害作用を示す。しかし、ＥＢＰとＥＬＪを併用すると、強い相乗的な阻害活性が見られる（図１）。ＥＢＰおよびＥＬＪはまた、シクロオキシゲナーゼ−２で触媒されたＰＧＥ２の産生を阻害する（図２）。アラキドン酸で誘発されたマウスの耳浮腫に対しては、経口投与された５〜２００ｍｇ／ｋｇのＥＢＰが阻害活性を示し、ＥＢＰとＥＬＪとの１：１混合物であるＢＬはＥＢＰまたはＥＬＪ単独投与よりも強力な阻害活性を示した（表１）。λ−カラギーナンで誘導された足浮腫に対しては、ＢＬは強力かつ相乗的な抗炎症効果を示す（表２）。酢酸誘発ライジング（writhing）テストでＢＬは、５０〜４００ｍｇ／ｋｇで経口投与されたとき、強力な鎮痛活性を示す（表３）。かような結果は、実験した物質がすべて、試験管内及び生体内で抗炎症活性を有し、ＥＢＰまたはＥＬＪが併用投与されるとそれらの単独投与より強力かつ相乗的な抗炎症効果が得られるということを示している。
【００１６】
前記実験結果を基に本発明は、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含む、炎症及び／または痛みの予防用，改善用または治療用薬学的組成物を提供する。
【００１７】
本発明はまた、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として投与することによる、炎症及び／または痛みの予防、改善または治療方法を提供する。
【００１８】
カジノキ抽出物は、例えば、熱湯、アルコール水溶液、または疎水性溶媒を利用して抽出することで調製できる。さらに、アルコール水溶液を疎水性溶媒で抽出することもできる。しかしながら、抽出方法はこれらに制限されるものではない。ニンドウの抽出物は、例えば、熱湯、アルコール水溶液、または疎水性溶媒などを使用して抽出することで調製できるが、これらに制限されるものではない。本発明の組成物として、カジノキの根皮の抽出物としてカジノキ由来のプレニル化フラボノイド濃縮抽出物を使用し、ニンドウ抽出物として、ニンドウ由来のエタノール抽出物を使用することが望ましい。カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物は、例えば、カジノキをエタノールで抽出し、真空下で乾燥させて酢酸エチルで分画するなどの方法で調製できる。しかしながら、プレニル化フラボノイド濃縮抽出物を調製するための様々な方法のうちの任意のものを使用しても差し支えない。使用されるエタノールの量は、５ないし１００％、望ましくは、５０〜１００％である。
【００１９】
本発明の組成物の有効成分として含まれるカジノキのプレニル化濃縮抽出物のニンドウのエタノール抽出物に対する重量比は、１：０．１〜１：１０、望ましくは１：０．５〜１：４、さらに望ましくは１：１である。
【００２０】
本発明の組成物は、薬学的分野での一般的な方法によって、経口投与に適した単位投与型の製剤または注射剤として剤形化させて投与できる。経口投与に適した剤形には、硬質及び軟質のカプセル剤、錠剤、懸濁剤、シロップ剤、散剤、徐放製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、エリキシル剤、流動エキス剤、沈殿剤、チンキ剤、酒精剤などが含まれる。かような経口投与用の製剤には、二種またはそれ以上の薬物学的活性成分以外に、一つまたはそれ以上の薬学的に不活性な一般的な担体が含まれる。薬学的に不活性な担体の例としては、澱粉、ラクトース、カルボキシメチルセルロース、カオリンなどの賦形剤；水、ゼラチン、アルコール、グルコース、アラビアゴム、トラガカントゴムなどの結合剤；澱粉、デキストリン、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤；タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、流動パラフィンなどの滑沢剤が挙げられる。本発明ではまた、溶解を促進するための溶解補助剤などをさらに用いることもできる。
【００２１】
本発明の薬学的組成物はまた、薬物の投与形態と治療的有効量とに適した方法で、例えば、経口、鼻腔内、静脈内、腹腔内、皮下または局所投与により投与できる。
【００２２】
薬学的組成物はまた、当該技術分野で開示されている他の公知の方法（例えば、Remington's Pharmaceutical Scienceに記載された方法）を使用して投与することもできる。例えば、注射剤の場合は、ハンクス液、リンゲル液、生理食塩緩衝液などの生理学的に適した緩衝液を使用して調製できる。前記溶液は、懸濁剤、安定剤及び／または分散剤を含むことができる。または、本発明の薬学的組成物は、粉末状に調製され、使用前に滅菌水などの適当な担体と一緒にして使われてもよい。または、本発明の薬学的組成物は、リポソーム、懸濁液、または徐放製剤中に調製されてもよい。本発明の薬学的組成物は、腫瘍治療のために、単独で、または手術、ホルモン治療、薬物治療及び生物学的反応調節剤などと併用して使用できる。
【００２３】
本発明の薬学的組成物は、急性または慢性の気管支炎、喘息、COPD、アトピー性皮膚炎、乾癬、アレルギー性鼻炎、胃炎、胃潰瘍、過敏性大腸症候群、胃食道逆流症、肝炎、血管炎症疾患、骨関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、多発性関節炎、腰痛、抜歯後の痛み、頭痛、手術後の痛み及び炎症、歯痛、生理痛などの消炎鎮痛効果を必要とする各種疾病の治療に使われるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
本発明の薬学的組成物は、多様な炎症性呼吸器疾患、炎症性自己免疫疾患、炎症性皮膚疾患、炎症性胃腸関連疾患、炎症性心血関連疾患及び炎症性骨格筋疾患などの治療のために使われうる。
【００２５】
本発明の薬学的組成物の投与量及び投与時期は、投与対象の年齢、性別、状態、体重、投与経路、薬の種類によって変わる。一日の投与量は、約０．０１μｇ／ｋｇないし１０ｇ／ｋｇでありえ、望ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇでありえる。
【００２６】
本発明で使われるあらゆる技術用語は、取り立てて定義しない限り、当業者が理解するのと同じ意味で使われる。また、本明細書には、望ましい方法や試料が記載されるが、これらと類似していたり、あるいは同等なものも本発明の範疇に含まれる。本明細書に参考文献として記載されるあらゆる刊行物の内容は、本発明に組み入れられる。
【００２７】
本発明について、下記実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明がそれらによって制限されるものではない。
【実施例】
【００２８】
実施例
＜試薬及び動物＞
Ａ２３１８７およびN−［２−シクロヘキシルオキシ−４−ニトロフェニル］メタンスルホンアミド（ＮＳ−３９８）は、Biomol（Plymouth Meeting、ＰＡ）から；２−アミノ−５，６−ジヒドロ−６−メチル−４H−１，３−チアジンヒドロクロライド（ＡＭＴ）は、Tocris Cookson Ltd.（ＵＫ）から；アラキドン酸（ＡＡ、９９％）、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、ノルジヒドログアヤレト酸（ＮＤＧＡ）、プレドニゾロン、インドメタシン、アスピリン及びリポ多糖（ＬＰＳ；大腸菌（Escherichia coli）０１２７：Ｂ８）は、Sigma Chem．（セントルイス、ＭＯ）から；ＤＭＥＭ及びＦＢＳなどの培養用試薬は、Gibco BRL（Grand Island、ＮＹ）から；蛋白質定量キットは、Bio-Rad Lab.（Hercules、ＣＡ）から購入した。
【００２９】
オスのSprague-Dawley（ＳＤ）ラット及びＩＣＲマウス（４周齢、特定病原菌フリー）をオリエント−バイオ（韓国）から購入した。実験動物は、標準実験用食餌（Purina Korea）と水とを自由に供給し、実験する少なくとも７日以前から、動物飼育場（ＫＮＵ）で、２０〜２２℃、相対湿度４０〜６０％、１２時間／１２時間（明／暗）周期で馴化させた。動物実験計画は、ＫＮＵ動物実験委員会の承認を受け（ＫＩＡＣＵＣ−０９−００１２）、本実験は、実験動物の保護及び使用に係わる韓国食品医薬品安全庁のガイドラインに記載された倫理規定に沿って実施された。
【００３０】
統計分析
実験値は、算術平均±ＳＤでもって示した。統計学的有意性の決定は、ＡＮＯＶＡテストで実施した。
【００３１】
＜実施例１＞カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の調製
カジノキは、韓国の南部地方（安東付近の地域）で収集した。カジノキの根の乾燥させた皮を細かく切り、１００％エタノールで抽出した。エタノール抽出物を真空下で乾燥させ、最終抽出物を水に分散させて酢酸エチルで分画した後、酢酸エチル画分を乾燥させ、乾燥させた酢酸エチル画分（ＥＢＰ）を試験に使用した。この画分から、パピリフラボノールＡ及びブルッソカルコンＡをSon et al．（２００１）に記載された方法で分離して確認した。
【００３２】
ニンドウは、生薬材市場で購入して使用した。乾燥させたニンドウを細かく切った後、７０％エタノールで抽出した。エタノール抽出物を真空下で乾燥させ、乾燥させたエタノール抽出物（ＥＬＪ）を試験に使用した。エタノール抽出物からロガニン（Loganin）及びスウェロシド（Sweroside）を、Kawai et al．（１９８８）に記載された方法によって分離した。
【００３３】
ＥＢＰのプレニル化フラボノイド（パピリフラボノールＡ及びブルッソカルコンＡ）及びＥＬＪのイリドイド（ロガニンおよびスウェロシド）の含有量はＨＰＬＣ分析で確認した。
【００３４】
ＢＬは、ＥＢＰ及びＥＬＪの１：１（ｗ／ｗ）混合物である。
【００３５】
＜実施例２＞ラット好塩基球白血病−１（ＲＢＬ−１）細胞培養及びロイコトリエン（ＬＴ）の測定
American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ、Rocksville）から入手したＲＢＬ−１細胞をＲＰＭＩ １６４０で、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン及び１％抗生物質とともに、５％ＣＯ２、３７℃でインキュベーションした。細胞を９６−ウェルプレートに２時間置き、試験物質と１０分間、あらかじめインキュベーションした。試験物質は、ＤＭＳＯに溶解し、無血清ＤＭＥＭで適切な濃度に希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度は、０．１％（ｖ／ｖ）に調節された。細胞生存能をMossman（１９８３）の方法によって、ＭＴＴアッセイで確認した。５−ＬＯＸを活性化させるために、Ａ−２３１８７（イオノフォア、３μM）を細胞に添加し、Triesら（２００２）の方法を若干修正した方法によって、細胞を１５分間インキュベーションした。培地を回収し、５−ＬＯＸの産物であるシステイニルロイコトリエン（cysteinyl leukotriene）（ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４）の濃度を、ＥＬＩＳＡキット（Cayman Chem．）を使用して、メーカーが勧めた方法によって測定した。
【００３６】
ＲＢＬ−１細胞がＡ２３１８７（カルシウムイオノフォア）で活性化されれば、５−ＬＯＸによって、多量のシステイニル−ＬＴが産生されるということが周知である。本実験でＲＢＬ−１細胞から産生されたＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４の量は、１５分間（ｎ＝３）の基底レベル（basal level）４．２±１．２ｐｇ／ｍｌから１，１０９．５±９３．６ｐｇ／ｍｌである。かような条件下で、カジノキ由来のプレニル化フラボノイド濃縮抽出物画分（ＥＢＰ）は、１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌで用いる場合、それぞれ５％、２４％、９６％、９９％及び９９％の対応する阻害活性を示す。ＥＢＰは、濃度依存的に５−ＬＯＸ媒介ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４産生を阻害した（図１）。線形回帰分析の結果、ＩＣ５０値は、３．１μｇ／ｍｌであった。
【００３７】
一方、ＥＬＪは、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ及び２５０μｇ／ｍｌで用いられ、それぞれ１％、６％、１８％、７４％及び９９％の対応する阻害活性を示した。すなわちＥＬＪは比較的弱い阻害活性を有し、５−ＬＯＸ媒介ＬＴＣ４／Ｄ４／Ｅ４産生を弱く阻害した（ＩＣ５０＝７８．７μｇ／ｍｌ）。
【００３８】
ＥＢＰとＥＬＪを含む混合物の場合は、それぞれを個別に使用した場合より強力に５−ＬＯＸ活性を阻害した。ＥＢＰの重量に基づき、ＩＣ５０＜１μｇ／ｍｌであった。ＥＢＰおよびＥＬＪの各物質の阻害活性の和と比較するとき、混合物の方が、５−ＬＯＸ活性に対する阻害効果がはるかに強力であり、混合物に相乗効果があるということが確認された。
【００３９】
例えば、ＥＢＰ １μｇ／ｍｌ及びＥＬＪ ４μｇ／ｍｌをそれぞれ個別に用いる場合、ロイコトリエン（ＬＴ）産生に対する阻害活性が現れないが、ＥＢＰとＥＬＪを併用（重量比で１：４の混合物）した場合、阻害活性は予想外に相乗的に６１％に増加した。ＥＢＰ ２μｇ／ｍｌ及びＥＬＪ ３μｇ／ｍｌをそれぞれ個別に用いる場合、ロイコトリエン（ＬＴ）産生に対する阻害活性は、それぞれ２４％及び０％であったが、ＥＢＰとＥＬＪを併用（重量比で１：１．５の混合物）した場合、阻害活性は予想外に相乗的に９２％に増加した。ＥＢＰ及びＥＬＪを、それぞれ２．５μｇ／ｍｌずつ混合した場合（重量比１：１）も、５−ＬＯＸ−媒介ＬＴ産生はほとんど完全に阻害され、阻害効果は予想外に相乗的に９６％増加した。
【００４０】
実験に使われたＥＬＪの量は、ＥＬＪ単独ではロイコトリエン産生阻害活性が生じないレベルに該当する。しかし、ＥＬＪがＥＢＰと併用される場合、ＥＢＰの５−ＬＯＸ阻害活性は、ＥＬＪを添加することによって有意に増強され、ＥＢＰとＥＬＪの混合物は、非常に高い阻害効果を示した。加えて、ＥＢＰ及びＥＬＪの重量比１：１の混合物（ＢＬ）を用いて追加の実験を行った。
【００４１】
ノルジヒドログアヤレト酸（ＮＤＧＡ）が比較化合物として使用され、５−ＬＯＸを強力に阻害した（１μMで９９％阻害）。
【００４２】
＜実施例３＞ＲＡＷ ２６４．７細胞でＰＧＥ２産生に及ぼす影響
炎症反応の媒介因子であるＰＧＥ２の産生における、カジノキ抽出物及びニンドウ抽出物の効果について調べる。
【００４３】
American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ、Rocksville）から入手したＲＡＷ ２６４．７細胞を、１０％ＦＢＳ及び１％抗生物質（１００Ｕ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン）を補充されたＤＭＥＭ中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件下でインキュベートした。細胞をChi et al．（２００１）の方法でリポ多糖（ＬＰＳ）で活性化させた。細胞を９６−ウェルプレート（２ｘ１０５セル／ウェル）に添加して２時間あらかじめインキュベーションした後、試料物質及びＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を添加し、その培地を、取り立てて規定しない限り、２４時間インキュベーションした。培地中のＰＧＥ２濃度を、ＰＧＥ２用ＥＬＩＳＡキット（Cayman Chem．Ｃｏ．）を使用してメーカーの勧めによって測定した。
【００４４】
ＥＢＰ及びＢＬは５０μｇ／ｍｌの濃度で、ＬＰＳ処理されたマウスマイクロファージ細胞株であるＲＡＷ ２６４．７細胞からのＣＯＸ−２触媒ＰＧＥ２産生を統計学的に有意に阻害した（図２）。ＥＢＰ及びＢＬのＩＣ５０値は、ＰＧＥ２産生に対しては、それぞれ２１．４μｇ／ｍｌ及び２９．０μｇ／ｍｌであった。
【００４５】
＜実施例４＞アラキドン酸（ＡＡ）誘発マウス耳浮腫に対する効果
抗炎症動物モデルにおける生体内での抗炎症活性を確認するために、ＡＡ誘発マウス耳浮腫アッセイを採用した。Kim et al．（１９９３）の方法により、２％ＡＡアセトン溶液をマウスの耳に適用し（２０μｌ／耳）、１時間後、耳の厚さをダイヤル厚みゲージ（Mitutoyo、日本）を使用して測定した。ＡＡ処置１時間前に、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解した試験物質をマウスに経口投与した（０．１ｍｌ／マウス）。各群は５匹を含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表１のａ）。表１のｂは、ＡＡ処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、ＡＡ処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００４６】
（表１）ＡＡ誘発マウス耳浮腫の阻害
【００４７】
ＡＡ処理を行っていないネガティブ対照群は、耳の厚さが０．００３±０．００１ｍｍ増大した。ＥＢＰ及びＥＬＪを５０ないし２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、浮腫反応を阻害し、ＥＬＪよりＥＢＰの方がさらに強力な阻害効果を有した（表１）。ＥＢＰとＥＬＪとの１：１重量比混合物であるＢＬを投与した場合、ＥＢＰ及びＥＬＪそれぞれを投与した場合より、炎症抑制効果が相乗的に増大した。
【００４８】
例えば、ＥＢＰ ５０ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は２８．６％であり、ＥＬＪを５０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、阻害効果はなかった。しかし、ＥＢＰ ５０ｍｇ／ｋｇとＥＬＪ５０ｍｇ／ｋｇとの混合物であるＢＬ １００ｍｇ／ｋｇでは、３４．４％の阻害効果を示した。すなわち、ＢＬを投与した場合、予測できない相乗効果が現れた。また、ＥＢＰ ２００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は４５．７％であり、ＥＬＪを２００ｍｇ／ｋｇ投与した場合、耳浮腫の阻害効果は２５．０％であった。さらに、ＢＬ ２００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、耳浮腫の阻害効果は６０．０％阻害であった。すなわち、ＢＬを投与した群が最も阻害効果が高かった。また、ＥＢＰ ２００ｍｇ／ｋｇとＥＬＪ２００ｍｇ／ｋｇとの混合物であるＢＬ ４００ｍｇ／ｋｇでは、７８．６％の阻害効果を示し、ＥＢＰの阻害活性とＥＬＪの阻害活性の和よりさらに高い阻害活性を示した。この結果から、ＥＢＰとＥＬＪの併用は相乗効果を有するということが分かる。特に、ＢＬ混合物４００ｍｇ／ｋｇの阻害活性は、インドメタシン（２０ｍｇ／ｋｇ）の阻害活性７０％よりさらに高かった。
【００４９】
＜実施例５＞マウスでのλ−カラギーナン（ＣＧＮ）誘発足浮腫に対する効果
抗炎症活性を測定するために、Winter et al．（１９６２）の方法を若干修正してマウスのＣＧＮ誘発足浮腫アッセイを実施した。試験物質をマウスに経口投与し、１時間後に、パイロジェンフリー滅菌生理食塩水にＣＧＮを溶解して調製した１％ＣＧＮ（ｗ／ｖ）溶液（０．０５ｍｌ／足）を足に注射した。５時間後に足の容積をplenthysmometer（Ugo Basil、Italy）で測定した。ＣＧＮ投与前の足の容積より増大すれば浮腫を発症したと見なした。
【００５０】
試験物質は、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解して経口投与した。ＣＧＮ処理を行っていないネガティブ対照群の足の容積は、０．１４９±０．０２５ｍｌであった。各群は、それぞれ５匹のマウスを含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表２のａ）。表２のｂは、ＣＧＮ処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、ＣＧＮ処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００５１】
（表２）マウスでのカラギーナン（ＣＧＮ）誘発足浮腫の阻害
【００５２】
ＣＧＮ−誘導足浮腫に対して、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇのＢＬを経口投与した場合、用量依存的な阻害活性を示した（表２）。ＥＢＰまたはＥＬＪを、個別にそれぞれ２００ｍｇ／ｋｇ投与した場合、それぞれ２３．７％及び１１．８％の阻害活性を示し、阻害活性の和は３５．５％であった。一方、ＥＢＰ及びＥＬＪ２００ｍｇ／ｋｇずつを含むＢＬ ４００ｍｇ／ｋｇを投与した場合、ＢＬの阻害活性は４７．４％であった。したがって、ＥＢＰとＥＬＪの併用投与は、相乗的な阻害効果を示すということが確認される。
【００５３】
＜実施例６＞マウスでの酢酸誘発ライジングテスト
抗侵害受容活性を測定するために、１％酢酸（１００μｌ）を、マウスの腹腔内に投与した。酢酸の注射の１０分後から１０分間、ライジングの回数をカウントした。酢酸を注射する前に、ＤＭＳＯ：水の１：１混合物に溶解した試験物質を経口投与（０．１ｍｌ／マウス）した。
【００５４】
各群は、それぞれ６匹のマウスを含み、測定値は、算術平均±Ｓ．Ｄで示した（表３のａ）。表３のｂは、酢酸処理された対照群と比較した阻害％である。＊は、酢酸処理対照群と比較した、ｐ＜０．０５の有意差を示す。
【００５５】
（表３）マウスでの酢酸誘発ライジングに対する阻害
【００５６】
抗侵害受容活性アッセイの結果、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇのＥＬＪを経口投与した場合、ＥＬＪの抗侵害受容活性は、ＥＢＰより強力であり、ＢＬは強力に用量依存的にマウスでの酢酸誘発ライジングを阻害した（表３）。
【００５７】
カジノキのいくつかの部分が、抗侵害受容活性及び抗炎症活性があると報告されている（Lin et al．，２００８）。カジノキの根、葉、実のエタノール抽出物を６００ないし２，０００ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、マウスでの酢酸誘発ライジングが生体内で阻害された。これらの結果を比較すると、本実験の組成物は、５０ないし４００ｍｇ／ｋｇの濃度で、より強力な生体内抗侵害受容活性及び抗炎症活性を示した。
【００５８】
本発明のカジノキ抽出物及びニンドウ抽出物を有効成分として含有する多様な種類の製剤を下記のように調製した。
【００５９】
製剤例１：錠剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 １００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 １００ｍｇ
乳糖 ５０ｍｇ
澱粉 １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を混合し、一般的な錠剤の調製方法によって打錠して錠剤を製剤した。
【００６０】
製剤例２：散剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 １００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 ４００ｍｇ
乳糖 ３０ｍｇ
澱粉 ２０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を完全に混合した後、ポリエチレンがコーティングされた包み（slice）に充填して密封して散剤を調製した。
【００６１】
製剤例３：カプセル剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 ２００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 １００ｍｇ
乳糖 １５０ｍｇ
澱粉 ２８ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
前記の成分を混合し、一般的なカプセル剤の調製方法によって、ゼラチン軟カプセルに充填してカプセル剤を調製した。
【００６２】
製剤例４：軟質カプセル剤の調製
カジノキのプレニル化フラボノイド濃縮抽出物 ２００ｍｇ
ニンドウのエタノール抽出物 ２００ｍｇ
ポリエチレングリコール４００ ４００ｍｇ
濃グリセリン ５５ｍｇ
精製水 ３５ｍｇ
ポリエチレングリコールと濃グリセリンとを混合した後、精製水を添加した。約６０℃に維持しながら混合物にフラボンを加え、撹拌機で約１，５００ｒｐｍの回転速度で均一に撹拌した。前記混合液を穏やかに撹拌しながら室温に冷却し、真空ポンプで気泡を除去して、軟質カプセルの中身を調製した。軟質カプセルの被膜は、１カプセル当たりゼラチン１３２ｍｇ、濃グリセリン５２ｍｇ、７０％ジソルビトール液６ｍｇ、及び着香剤としてエチルバニリン適量、コーティング基材としてカルナウバ蝋を使用し、一般的な調製方法で調製した。
【００６３】
＜参考文献＞
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【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明によるカジノキの抽出物及びニンドウの抽出物を有効成分として含む組成物は、抽出物を単独で用いるより併用した方が優れた抗炎症効果及び抗侵害受容効果を有するため、効果的な抗炎症剤、消炎剤または鎮痛剤として使われうる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される、有効成分としての第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される、有効成分としての第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、炎症及び／または痛みの予防用、軽減用または治療用の薬学的組成物。
【請求項２】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、炎症性呼吸器疾患、炎症性自己免疫疾患、炎症性皮膚疾患、炎症性胃腸関連疾患、炎症性心血関連疾患及び炎症性骨格筋疾患からなる群より選択される疾病の予防用または治療用の薬学的組成物。
【請求項３】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、急性または慢性の気管支炎、喘息、COPD、アトピー性皮膚炎、乾癬、アレルギー性鼻炎、胃炎、胃潰瘍、過敏性大腸症候群、胃食道逆流症、肝炎、血管炎症疾患、骨関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、多発性関節炎、腰痛、抜歯後の痛み、頭痛、手術後の痛み及び炎症、歯痛、生理痛からなる群より選択される疾病の予防用または治療用の薬学的組成物。
【請求項４】
カジノキ抽出物の画分が、カジノキをアルコール水溶液で抽出し、そのアルコール抽出物を疎水性溶媒で分画した画分、またはプレニル化フラボノイド濃縮抽出物のいずれかであり、かつニンドウ抽出物が、エタノール抽出物であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
カジノキ抽出物またはカジノキ抽出物の画分とニンドウ抽出物の重量比が、１：０．１〜１０であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
カジノキ抽出物またはカジノキ抽出物の画分とニンドウ抽出物の重量比が、１：１であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
請求項１ないし請求項６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を用いて調製される薬学的製剤であって、経口投与用の製剤、粘膜適用製剤、注射剤、吸入剤及び外用剤からなる群より選択されることを特徴とする、薬学的製剤。
【請求項８】
経口投与用の製剤が硬質及び軟質のカプセル剤、錠剤、懸濁剤、シロップ剤、散剤、徐放製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、エリキシル剤、流動エキス剤、沈殿剤、チンキ剤、酒精剤からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７に記載の薬学的製剤。
【請求項１】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される、有効成分としての第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される、有効成分としての第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、炎症及び／または痛みの予防用、軽減用または治療用の薬学的組成物。
【請求項２】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、炎症性呼吸器疾患、炎症性自己免疫疾患、炎症性皮膚疾患、炎症性胃腸関連疾患、炎症性心血関連疾患及び炎症性骨格筋疾患からなる群より選択される疾病の予防用または治療用の薬学的組成物。
【請求項３】
カジノキ抽出物、カジノキ抽出物の画分、及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第１物質；ニンドウ抽出物及び薬学的に許容されるその塩からなる群より選択される第２物質；ならびに薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、急性または慢性の気管支炎、喘息、COPD、アトピー性皮膚炎、乾癬、アレルギー性鼻炎、胃炎、胃潰瘍、過敏性大腸症候群、胃食道逆流症、肝炎、血管炎症疾患、骨関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、多発性関節炎、腰痛、抜歯後の痛み、頭痛、手術後の痛み及び炎症、歯痛、生理痛からなる群より選択される疾病の予防用または治療用の薬学的組成物。
【請求項４】
カジノキ抽出物の画分が、カジノキをアルコール水溶液で抽出し、そのアルコール抽出物を疎水性溶媒で分画した画分、またはプレニル化フラボノイド濃縮抽出物のいずれかであり、かつニンドウ抽出物が、エタノール抽出物であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
カジノキ抽出物またはカジノキ抽出物の画分とニンドウ抽出物の重量比が、１：０．１〜１０であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
カジノキ抽出物またはカジノキ抽出物の画分とニンドウ抽出物の重量比が、１：１であることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
請求項１ないし請求項６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を用いて調製される薬学的製剤であって、経口投与用の製剤、粘膜適用製剤、注射剤、吸入剤及び外用剤からなる群より選択されることを特徴とする、薬学的製剤。
【請求項８】
経口投与用の製剤が硬質及び軟質のカプセル剤、錠剤、懸濁剤、シロップ剤、散剤、徐放製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、エリキシル剤、流動エキス剤、沈殿剤、チンキ剤、酒精剤からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７に記載の薬学的製剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５０６９１４（Ｐ２０１２−５０６９１４Ａ）
【公表日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４５３０８（Ｐ２０１１−５４５３０８）
【出願日】平成２２年１２月７日（２０１０．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００８７１０
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７１２９６
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５１１０５５５１１）ファーマキング カンパニー リミテッド (2)
【出願人】（５１１０５５５２２）ケーエヌユー−インダストリー コーポレーション ファウンデーション (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月７日（２０１０．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００８７１０
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７１２９６
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５１１０５５５１１）ファーマキング カンパニー リミテッド (2)
【出願人】（５１１０５５５２２）ケーエヌユー−インダストリー コーポレーション ファウンデーション (1)
【Ｆターム（参考）】
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