グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミン製造のためのプロセスおよび材料
グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生合成法が開示される。この様な方法には、遺伝子修飾された微生物による発酵でグルコサミンおよび／またはＮ−アセチルグルコサミンを生産する工程が含まれる。グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生産に有用な遺伝子修飾微生物も開示される。さらに、高純度のＮ−アセチルグルコサミンが得られる方法を含む、発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンの回収法も説明する。Ｎ−アセチルグルコサミンからグルコサミンの製造法も開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる、該培養工程から製造された生成物を採集する工程
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項２】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する前記遺伝子修飾が、グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；微生物によるグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少；およびグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の増加でなる群から選ばれる結果を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、前記微生物が形質転換される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする前記核酸配列が、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記組み換え核酸分子の発現が誘導可能である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記組み換え核酸分子の発現がラクトースで誘導可能である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物がラクトースによる転写誘導の阻害を減少する遺伝子修飾をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記遺伝子修飾がＬａｃＩレプレッサータンパク質をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で形質転換される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較して前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害を減少する修飾を、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、および配列番号１４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する前記遺伝子修飾が、前記微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する前記遺伝子修飾が、前記微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記発酵培地中で炭素源を約０．５％〜約５％の濃度に保つ工程を前記培養工程が含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記培養工程が酵母抽出物を含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
グルコース、フラクトース、ペントース糖、ラクトースおよびグルコン酸でなる群から選ばれる炭素源を含む発酵培地中で前記培養工程が行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ペントース糖がリボース、キシロースおよびアラビノースでなる群より選ばれる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記培養工程がグルコースおよびリボースを含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記培養工程がグルコースおよびグルコン酸を含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記培養工程が約２５℃〜約４５℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記培養工程が約３７℃で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記培養工程が約ｐＨ４〜約ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記培養工程が約ｐＨ６．７〜約ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記培養工程が約ｐＨ４．５〜約ｐＨ５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記微生物がバクテリアおよび菌類でなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記微生物がバクテリアおよび酵母でなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓでなる群から選ばれた属由来のバクテリアである、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓでなる群から選ばれた種由来のバクテリアである、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、およびＰｈａｆｆｉａでなる群から選ばれた属由来の酵母である、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓおよびＰｈａｆｆｉａ ｒｈｏｄｏｚｙｍａでなる群から選ばれた種由来の酵母である、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ、ＮｅｕｒｏｓｐｏｒａおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａでなる群から選ばれた属由来の菌類である、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｂｓｉｄｉａ ｃｏｅｒｕｌｅａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｎ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、およびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍ ｒｅｅｓｅｉでなる群から選ばれた種由来の菌類である、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
前記微生物中でホスフォグルコイソメラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
前記微生物が前記ホスフォグルコイソメラーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で形質転換される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ホスフォグルコイソメラーゼが配列番号１０５のアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記微生物中でホスフォフラクトキナーゼの部分的または完全な欠失または不活性化を該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４８】
前記微生物がグルタミンシンテターゼ活性を増加する遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
グルタミンシンテターゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で前記微生物が形質転換されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記グルタミンシンテターゼが配列番号８９のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５２】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、前記微生物が形質転換されている、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼが配列番号９５のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記微生物中でグリコーゲン合成に関与する酵素をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を、該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５５】
グリコーゲン合成に関与する酵素をコードする前記遺伝子は、ＡＤＰ−グルコースピロホスフォリラーゼ、グリコーゲンシンターゼおよび分枝酵素を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記遺伝子修飾が前記微生物のガラクトース代謝能を阻害しない、請求項１に記載の方法。
【請求項５７】
前記採集工程が、細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれる細胞内生成物を前記微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる細胞外生成物を前記発酵培地から回収する工程を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５８】
ａ）グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物を前記発酵培地から精製する工程；
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を前記微生物から回収する工程；
ｃ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、グルコサミンを製造する工程；
ｄ） Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、Ｎ−アセチルグルコサミンを製造する工程；
ｅ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を処理し、グルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれたグルコサミン製品を製造する工程、
でなる群から選ばれた工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項５９】
Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた前記生成物を、酸および加熱条件下または酵素的脱アセチル化で加水分解する工程を工程（ｅ）が含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む固体を発酵ブロスから沈殿させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンを回収する、請求項１に記載の方法。
【請求項６１】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む固体を発酵ブロスから結晶化させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンを回収する、請求項１に記載の方法。
【請求項６２】
ａ）グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を、発酵培地中で培養する工程；ならびに
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程で製造された生成物を採集する工程、
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項６３】
前記微生物によるグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの酵素活性の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの逆反応の増加によるグルコサミン−６−燐酸生成の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの正反応の減少によるフラクトース−６−燐酸生成の減少；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのフラクトース−６−燐酸に対する親和性の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の減少；およびグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれた結果を、前記遺伝子修飾が提供する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの酵素活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする核酸配列が有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが有し、ここでグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが配列番号４２のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中でグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；微生物によるグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少；およびグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の増加でなる群から選ばれる結果を遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で微生物が形質転換されることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれたアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中のグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項７８】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ酵素活性の減少；グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有する酵素の微生物による過剰発現；グルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの親和性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼの親和性の減少；およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれる結果を遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
微生物が二元活性グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性が増加することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼをコードする核酸配列、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列が、それぞれグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼまたはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが、配列番号５６のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有し、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性が減少された、またはその活性を持たない短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを核酸配列がコードすることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を有し、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少させる遺伝子修飾を微生物がさらに有することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８８】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少させる遺伝子修飾が、微生物中のグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれた細胞内生成物を微生物から回収するか、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群から選ばれた細胞外生成物を発酵培地から回収する工程を、採集工程が有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項９０】
ａ）グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾、およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物の、培養工程から生成された生成物を採集する工程
を有することを特徴とするグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項９１】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ酵素活性の減少；グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有する酵素の微生物による過剰発現；グルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの親和性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼの親和性の減少；およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれた結果を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
微生物が二元活性グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性が増加することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼをコードする核酸配列、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼまたはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列が、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性をそれぞれ増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが、配列番号５６のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有し、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性が減少、またはその活性がない短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを核酸配列がコードすることを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項１０２】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する遺伝子修飾が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子での微生物の形質転換を含むことを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群から選ばれるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較してグルコサミン−６−燐酸の生成物阻害が減少する修飾を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２および配列番号１４でなる群から選ばれるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群からから選ばれた細胞内生成物を微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた細胞外生成物を発酵培地から回収する工程を、採集工程が含むことを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項１０８】
ａ）内因性グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼとグルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも１種の遺伝子修飾とを有する微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンからなる群から選ばれる、培養工程から生産された生成物を採集する工程、
を有することを特徴とするグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項１０９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する少なくとも一つの組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれたアミノ酸配列に少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルタミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較してグルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害が減少する修飾を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２および配列番号１４でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性が減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１５】
その方法がＮ−アセチルグルコサミンの発酵による製造法であり、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程から製造された生成物を採集する工程を採集工程が有することを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１６】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する遺伝子修飾微生物。
【請求項１１７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１１８】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１１９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２０】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする遺伝子修飾微生物。
【請求項１２１】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２２】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２３】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２２に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２５】
グルコサミン−１−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２４に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２６】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾と、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする遺伝子修飾微生物。
【請求項１２７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２６に記載の修飾微生物。
【請求項１２８】
ａ）発酵プロセスの生成物である可溶化Ｎ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスを得る工程；および
ｂ）発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を回収する工程、
を有することを特徴とするＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項１２９】
発酵ブロスから細胞物質を除去する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
発酵ブロスを脱色する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
Ｎ−アセチルグルコサミンの繰り返し再結晶、活性炭処理およびクロマトグラフィー脱色でなる群から、脱色工程が選ばれることを特徴とする請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
発酵ブロスをイオン交換樹脂と接触させる工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂と接触させる工程を、発酵ブロスをイオン交換樹脂と接触させる工程が有することを特徴とする請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂の混合ベッドと接触させる工程を、発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂と接触させる工程が有することを特徴とする請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を沈殿させる工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３６】
発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を結晶化する工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３７】
可溶化Ｎ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスを濃縮する工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３８】
濃縮工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
濃縮工程が膜分離で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
濃縮工程が約４０℃〜約７５℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
濃縮工程が約４５℃〜約５５℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４２】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約３０％固形になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４３】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約４０％固形になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４４】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約４５％になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４５】
濃縮工程の後に発酵ブロスを冷却する工程をさらに有することを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４６】
発酵ブロスを約−５℃〜約４５℃の間の温度に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
発酵ブロスを約−５℃〜約室温の間の温度に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４８】
発酵ブロスを室温に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４９】
発酵ブロスにＮ−アセチルグルコサミン結晶を接種する工程をさらに有することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１５０】
発酵ブロス中の核生成で形成したＮ−アセチルグルコサミン結晶、および外部から提供されたＮ−アセチルグルコサミン結晶でなる群からＮ−アセチルグルコサミンの種結晶が選ばれることを特徴とする請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
回収工程がＮ−アセチルグルコサミンを水混和性溶剤と接触させる工程を有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５２】
イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、エタノール、メタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサンおよびアセトニトリルでなる群より水混和性溶剤が選ばれることを特徴とする請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
回収されたＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５４】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む乾燥固体を水混和性溶剤で洗浄する工程をさらに有することを特徴とする請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
回収されたＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を溶解してＮ−アセチルグルコサミン溶液を形成する工程と、この溶液からＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５６】
発酵ブロスを濾過してバクテリア内毒素を除去する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５７】
ａ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群から選ばれたＮ−アセチルグルコサミン源を得る工程；および
ｂ）工程ａ）のＮ−アセチルグルコサミン源を処理して、Ｎ−アセチルグルコサミン源からグルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群から選ばれるグルコサミン製品を製造する工程、
を有するＮ−アセチルグルコサミン源からグルコサミンの製造方法。
【請求項１５８】
原料中の乾燥固体の比率としてＮ−アセチルグルコサミン源が少なくとも約４０％のＮ−アセチルグルコサミンであることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンであることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が、発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスであり、発酵ブロスが処理されて実質的に細胞物質が除去されていることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６１】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が固体として、または溶液中に提供されることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６２】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を水性で低沸点の一級または二級アルコール中に懸濁することを特徴とする請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
処理工程ｂ）が酸および加熱条件下にＮ−アセチルグルコサミン源を加水分解する工程を有することを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６４】
加水分解工程が約６０℃〜約１００℃の温度で行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
加水分解工程が約７０℃〜約９０℃の温度で行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６６】
加水分解工程が約１０重量％〜約４０重量％の濃度の塩酸を用いて行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６７】
塩酸溶液の重量と純乾燥重量としてのＮ−アセチルグルコサミン源との比率が約１：１重量比〜約５：１重量比であることを特徴とする請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
加水分解工程が約１０分〜約２４時間行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６９】
ａ）Ｎ−アセチルグルコサミン源を加熱条件下で塩酸溶液または循環加水分解母液と組み合わせて加水分解し、グルコサミン塩酸塩を含む溶液を製造する工程；
ｂ）工程ａ）の溶液を冷却してグルコサミン塩酸塩を沈殿させる工程；および
ｃ）工程ｂ）から沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を取り出す工程、
を有することを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１７０】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を塩酸塩溶液または循環加水分解母液と連続的にブレンドし、Ｎ−アセチルグルコサミン源を溶解溶液として維持し、次いで加熱条件下に無水塩酸水溶液を工程ａ）の溶液に加えて加水分解を開始し、Ｎ−アセチルグルコサミンをグルコサミン塩酸塩に変換することで加水分解工程ａ）が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
加水分解母液が工程ｃ）で沈殿したグルコサミン塩酸塩を回収した後に残る加水分解溶液であり、加水分解工程が行われる前、工程中、または工程後に一級または二級アルコールが加水分解溶液に添加されることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７２】
一級または二級アルコールがメタノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールおよびｓｅｃ−ブタノールでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
溶液が約−５℃〜約４０℃になるまで冷却工程が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７４】
回収工程が：
ｉ）沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を採集する工程；
ｉｉ）グルコサミン塩酸塩を含む固体を水混和性溶剤で洗浄する工程；および
ｉｉｉ）グルコサミン塩酸塩を含む固体を乾燥する工程、
を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７５】
回収工程が：
ｉ）沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を採集する工程；
ｉｉ）工程（ｉ）からの固体を水に溶解して溶液とする工程；
ｉｉ）工程（ｉｉ）の溶液のｐＨを約２．５〜４の間に調整する工程；
ｉｖ）工程（ｉｉｉ）の溶液を活性炭と接触させ、グルコサミン塩酸塩を含む固体を脱色する工程；
ｖ）工程（ｉｖ）の溶液から活性炭を除去する工程；および
ｖｉ）グルコサミン塩酸塩を工程（ｖ）の溶液から結晶化する工程、
を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７６】
結晶化工程が約７０℃以下の温度でグルコサミン塩酸塩を濃縮する工程を有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
結晶化工程が約５０℃以下の温度でグルコサミン塩酸塩を濃縮する工程を有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７８】
結晶化工程がグルコサミン塩酸塩を大気圧以下で濃縮する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７９】
結晶化工程（ｖｉ）〜（ｉ）後に残留する溶液を循環する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８０】
結晶化工程（ｖｉ）から次の結晶化工程後に残留する溶液を循環する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８１】
工程（ｖｉ）後の結晶化グルコサミン塩酸塩を水混和性溶剤で洗浄する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８２】
水混和性溶剤がメタノール、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドおよびジオキサンでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１８１に記載の方法。
【請求項１８３】
洗浄後の結晶化グルコサミン塩酸塩を約７０℃以下の温度で約６時間以下乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１８１に記載の方法。
【請求項１８４】
乾燥工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
乾燥工程が空気吹き付けで行われることを特徴とする請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８６】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を水性で低沸点の一級または二級アルコール中に懸濁され、その方法が、加水分解後、または再使用のために加水分解溶液を循環する前にアルコールで生成したエステルを除去する工程（ａ）〜（ｂ）の間に追加工程を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１８７】
蒸留、フラッシングおよび濃縮でなる群から選ばれたプロセスで、大気圧以下で酢酸エステルが除去されることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
加水分解工程が約６０℃〜約１００℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８９】
加水分解工程が１気圧で溶液の沸点で行われることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９０】
塩酸と乾燥重量としてのＮ−アセチルグルコサミン源との比率が約３：１〜約５：１で、約８０℃以下の温度で加水分解工程が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１９１】
工程（ｃ）で回収されたグルコサミン塩酸塩を水混和性溶剤で洗浄する工程を有することを特徴とする請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
水混和性溶剤がメタノール、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドおよびジオキサンでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
洗浄後の結晶化グルコサミン塩酸塩を約７０℃以下の温度で約６時間以下乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９４】
乾燥工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
乾燥工程が空気吹き付けで行われることを特徴とする請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９６】
処理工程（ｂ）がＮ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させ、グルコサミン製品を製造する工程を有することを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１９７】
Ｎ−アセチルグルコサミン−６−ＰデアセチラーゼおよびＮ−アセチルグルコサミンデアセチラーゼでなる群より脱アセチル化酵素が選ばれることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
脱アセチル化酵素が、Ｎ−アセチルグルコサミンモノマーを脱アセチル化しグルコサミンを製造する様に修飾されたか、またはそのような能力についてキチンデアシラーゼであることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９９】
結晶化で製造したグルコサミン製品を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２００】
沈殿で製造したグルコサミン製品を回収する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０１】
脱アセチル化酵素が基質に固定化されていることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０２】
塩化ナトリウムまたは塩化カルシウム水溶液の存在でＮ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させる工程を、接触工程が有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０３】
結晶化または沈殿でグルコサミン製品を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
アルコールの存在下、Ｎ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させ、アルコールをエステル化する工程を接触工程が有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０５】
塩をグルコサミン製品と混合し、その混合物をイオン交換媒体と接触させる工程をさらに有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０６】
塩が塩化物、燐酸塩、硫酸塩、沃素塩および亜硫酸塩でなる群より選ばれることを特徴とする請求項２０５に記載の方法。
【請求項２０７】
ａ）グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で形質転換された微生物を、発酵培地中で培養する工程であって、組み換え核酸分子の発現がラクトース誘導で制御され、発酵工程が
ｉ）グルコースを炭素源として含む培地中、約ｐＨ４．５〜約７のｐＨ、約２５℃〜約３７℃の温度で微生物を生育させる工程と；
ｉｉ）それ以上のグルコースを添加せず、発酵培地にラクトースを添加して核酸配列の転写を誘導する工程と；
ｉｉｉ）グルコースの存在で、約４．５〜６．７のｐＨ、約２５℃〜３７℃の温度で工程（ｉｉ）の後に微生物発酵を行う工程と
を有する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程で製造された生成物を採集する工程、
を有する発酵によるグルコサミンの製造方法。
【請求項２０８】
微量元素源を発酵工程（ｉｉｉ）に添加することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２０９】
微量元素が鉄を含むことを特徴とする請求項２０８に記載の方法。
【請求項２１０】
グルコースを炭素源として含む発酵培地中、約ｐＨ６．９で微生物を生育させる工程を、工程（ｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２１１】
工程（ｉｉ）の後にグルコースの存在下で、約４．５〜５のｐＨで微生物発酵を行う工程を、工程（ｉｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２１２】
工程（ｉｉ）の後にグルコースの存在で、ｐＨ約６．７で微生物発酵を行う工程を、工程（ｉｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項１】
ａ）グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる、該培養工程から製造された生成物を採集する工程
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項２】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する前記遺伝子修飾が、グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；微生物によるグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少；およびグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の増加でなる群から選ばれる結果を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、前記微生物が形質転換される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする前記核酸配列が、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記組み換え核酸分子の発現が誘導可能である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記組み換え核酸分子の発現がラクトースで誘導可能である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物がラクトースによる転写誘導の阻害を減少する遺伝子修飾をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記遺伝子修飾がＬａｃＩレプレッサータンパク質をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で形質転換される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約５０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４配列番号、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較して前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害を減少する修飾を、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、および配列番号１４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する前記遺伝子修飾が、前記微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記微生物がグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する前記遺伝子修飾が、前記微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記発酵培地中で炭素源を約０．５％〜約５％の濃度に保つ工程を前記培養工程が含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記培養工程が酵母抽出物を含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
グルコース、フラクトース、ペントース糖、ラクトースおよびグルコン酸でなる群から選ばれる炭素源を含む発酵培地中で前記培養工程が行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ペントース糖がリボース、キシロースおよびアラビノースでなる群より選ばれる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記培養工程がグルコースおよびリボースを含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記培養工程がグルコースおよびグルコン酸を含む発酵培地中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記培養工程が約２５℃〜約４５℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記培養工程が約３７℃で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記培養工程が約ｐＨ４〜約ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記培養工程が約ｐＨ６．７〜約ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記培養工程が約ｐＨ４．５〜約ｐＨ５のｐＨで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記微生物がバクテリアおよび菌類でなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記微生物がバクテリアおよび酵母でなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓでなる群から選ばれた属由来のバクテリアである、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓでなる群から選ばれた種由来のバクテリアである、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、およびＰｈａｆｆｉａでなる群から選ばれた属由来の酵母である、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓおよびＰｈａｆｆｉａ ｒｈｏｄｏｚｙｍａでなる群から選ばれた種由来の酵母である、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ、ＮｅｕｒｏｓｐｏｒａおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａでなる群から選ばれた属由来の菌類である、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｂｓｉｄｉａ ｃｏｅｒｕｌｅａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｎ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、およびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍ ｒｅｅｓｅｉでなる群から選ばれた種由来の菌類である、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
前記微生物中でホスフォグルコイソメラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
前記微生物が前記ホスフォグルコイソメラーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で形質転換される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ホスフォグルコイソメラーゼが配列番号１０５のアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記微生物中でホスフォフラクトキナーゼの部分的または完全な欠失または不活性化を該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４８】
前記微生物がグルタミンシンテターゼ活性を増加する遺伝子修飾をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
グルタミンシンテターゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で前記微生物が形質転換されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記グルタミンシンテターゼが配列番号８９のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５２】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、前記微生物が形質転換されている、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼが配列番号９５のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記微生物中でグリコーゲン合成に関与する酵素をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を、該微生物がさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５５】
グリコーゲン合成に関与する酵素をコードする前記遺伝子は、ＡＤＰ−グルコースピロホスフォリラーゼ、グリコーゲンシンターゼおよび分枝酵素を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記遺伝子修飾が前記微生物のガラクトース代謝能を阻害しない、請求項１に記載の方法。
【請求項５７】
前記採集工程が、細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれる細胞内生成物を前記微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる細胞外生成物を前記発酵培地から回収する工程を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５８】
ａ）グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物を前記発酵培地から精製する工程；
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を前記微生物から回収する工程；
ｃ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、グルコサミンを製造する工程；
ｄ） Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、Ｎ−アセチルグルコサミンを製造する工程；
ｅ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を処理し、グルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれたグルコサミン製品を製造する工程、
でなる群から選ばれた工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項５９】
Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた前記生成物を、酸および加熱条件下または酵素的脱アセチル化で加水分解する工程を工程（ｅ）が含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む固体を発酵ブロスから沈殿させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンを回収する、請求項１に記載の方法。
【請求項６１】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む固体を発酵ブロスから結晶化させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンを回収する、請求項１に記載の方法。
【請求項６２】
ａ）グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を、発酵培地中で培養する工程；ならびに
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程で製造された生成物を採集する工程、
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項６３】
前記微生物によるグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの酵素活性の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの逆反応の増加によるグルコサミン−６−燐酸生成の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの正反応の減少によるフラクトース−６−燐酸生成の減少；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのフラクトース−６−燐酸に対する親和性の増加；グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の減少；およびグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼのグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれた結果を、前記遺伝子修飾が提供する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの酵素活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする核酸配列が有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが有し、ここでグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼが配列番号４２のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中でグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；微生物によるグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼの過剰発現；グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−６−燐酸生成物阻害の減少；およびグルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼのグルコサミン−６−燐酸に対する親和性の増加でなる群から選ばれる結果を遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で微生物が形質転換されることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれたアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼが有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中のグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を微生物がさらに有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項７８】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ酵素活性の減少；グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有する酵素の微生物による過剰発現；グルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの親和性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼの親和性の減少；およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれる結果を遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
微生物が二元活性グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性が増加することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼをコードする核酸配列、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列が、それぞれグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼまたはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが、配列番号５６のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有し、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性が減少された、またはその活性を持たない短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを核酸配列がコードすることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を有し、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少させる遺伝子修飾を微生物がさらに有することを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項８８】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少させる遺伝子修飾が、微生物中のグルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれた細胞内生成物を微生物から回収するか、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群から選ばれた細胞外生成物を発酵培地から回収する工程を、採集工程が有することを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項９０】
ａ）グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾、およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物の、培養工程から生成された生成物を採集する工程
を有することを特徴とするグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項９１】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼの活性を減少する遺伝子修飾が、微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化であることを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの酵素活性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ酵素活性の減少；グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有する酵素の微生物による過剰発現；グルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼの親和性の増加；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸に対するグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼの親和性の減少；およびグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼのＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸生成物阻害の減少でなる群より選ばれた結果を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾が提供することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
微生物が二元活性グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性が増加することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼをコードする核酸配列、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼまたはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列が、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性、またはグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性をそれぞれ増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが、配列番号５６のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を有し、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼ活性が減少、またはその活性がない短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼを核酸配列がコードすることを特徴とする請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが有し、短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼがグルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ酵素活性を有することを特徴とする請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
短縮型グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ／Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸ウリジルトランスフェラーゼが配列番号５８のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項１０２】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する遺伝子修飾が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子での微生物の形質転換を含むことを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群から選ばれるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較してグルコサミン−６−燐酸の生成物阻害が減少する修飾を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２および配列番号１４でなる群から選ばれるアミノ酸配列をグルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
細胞内グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群からから選ばれた細胞内生成物を微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた細胞外生成物を発酵培地から回収する工程を、採集工程が含むことを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項１０８】
ａ）内因性グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼとグルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも１種の遺伝子修飾とを有する微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンからなる群から選ばれる、培養工程から生産された生成物を採集する工程、
を有することを特徴とするグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項１０９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する少なくとも一つの組み換え核酸分子で、微生物が形質転換されることを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれたアミノ酸配列に少なくとも約３５％同一であるアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルタミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較してグルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害が減少する修飾を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２および配列番号１４でなる群より選ばれたアミノ酸配列を、グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有することを特徴とする請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性が減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１５】
その方法がＮ−アセチルグルコサミンの発酵による製造法であり、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程から製造された生成物を採集する工程を採集工程が有することを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１６】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有する遺伝子修飾微生物。
【請求項１１７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１１８】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１１９】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１１６に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２０】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする遺伝子修飾微生物。
【請求項１２１】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２２】
グルコサミン−６−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２３】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２２に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２４】
グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２０に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２５】
グルコサミン−１−燐酸シンターゼ活性を減少する遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２４に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項１２６】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾と、グルコサミン−１−燐酸Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を有することを特徴とする遺伝子修飾微生物。
【請求項１２７】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、微生物がさらに有することを特徴とする請求項１２６に記載の修飾微生物。
【請求項１２８】
ａ）発酵プロセスの生成物である可溶化Ｎ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスを得る工程；および
ｂ）発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を回収する工程、
を有することを特徴とするＮ−アセチルグルコサミンの製造方法。
【請求項１２９】
発酵ブロスから細胞物質を除去する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
発酵ブロスを脱色する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
Ｎ−アセチルグルコサミンの繰り返し再結晶、活性炭処理およびクロマトグラフィー脱色でなる群から、脱色工程が選ばれることを特徴とする請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
発酵ブロスをイオン交換樹脂と接触させる工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂と接触させる工程を、発酵ブロスをイオン交換樹脂と接触させる工程が有することを特徴とする請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂の混合ベッドと接触させる工程を、発酵ブロスを陰イオン交換樹脂および陽イオン交換樹脂と接触させる工程が有することを特徴とする請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を沈殿させる工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３６】
発酵ブロスからＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を結晶化する工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３７】
可溶化Ｎ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスを濃縮する工程を、回収工程が有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３８】
濃縮工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
濃縮工程が膜分離で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
濃縮工程が約４０℃〜約７５℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
濃縮工程が約４５℃〜約５５℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４２】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約３０％固形になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４３】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約４０％固形になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４４】
発酵ブロス中の固形分が少なくとも約４５％になる様に濃縮工程が行われることを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４５】
濃縮工程の後に発酵ブロスを冷却する工程をさらに有することを特徴とする請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４６】
発酵ブロスを約−５℃〜約４５℃の間の温度に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
発酵ブロスを約−５℃〜約室温の間の温度に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４８】
発酵ブロスを室温に冷却することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４９】
発酵ブロスにＮ−アセチルグルコサミン結晶を接種する工程をさらに有することを特徴とする請求項１４５に記載の方法。
【請求項１５０】
発酵ブロス中の核生成で形成したＮ−アセチルグルコサミン結晶、および外部から提供されたＮ−アセチルグルコサミン結晶でなる群からＮ−アセチルグルコサミンの種結晶が選ばれることを特徴とする請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
回収工程がＮ−アセチルグルコサミンを水混和性溶剤と接触させる工程を有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５２】
イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、エタノール、メタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサンおよびアセトニトリルでなる群より水混和性溶剤が選ばれることを特徴とする請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
回収されたＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５４】
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む乾燥固体を水混和性溶剤で洗浄する工程をさらに有することを特徴とする請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
回収されたＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を溶解してＮ−アセチルグルコサミン溶液を形成する工程と、この溶液からＮ−アセチルグルコサミンを含む固体を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５６】
発酵ブロスを濾過してバクテリア内毒素を除去する工程をさらに有することを特徴とする請求項１２８に記載の方法。
【請求項１５７】
ａ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群から選ばれたＮ−アセチルグルコサミン源を得る工程；および
ｂ）工程ａ）のＮ−アセチルグルコサミン源を処理して、Ｎ−アセチルグルコサミン源からグルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群から選ばれるグルコサミン製品を製造する工程、
を有するＮ−アセチルグルコサミン源からグルコサミンの製造方法。
【請求項１５８】
原料中の乾燥固体の比率としてＮ−アセチルグルコサミン源が少なくとも約４０％のＮ−アセチルグルコサミンであることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンであることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が、発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンを含む発酵ブロスであり、発酵ブロスが処理されて実質的に細胞物質が除去されていることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６１】
Ｎ−アセチルグルコサミン源が固体として、または溶液中に提供されることを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６２】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を水性で低沸点の一級または二級アルコール中に懸濁することを特徴とする請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
処理工程ｂ）が酸および加熱条件下にＮ−アセチルグルコサミン源を加水分解する工程を有することを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６４】
加水分解工程が約６０℃〜約１００℃の温度で行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
加水分解工程が約７０℃〜約９０℃の温度で行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６６】
加水分解工程が約１０重量％〜約４０重量％の濃度の塩酸を用いて行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６７】
塩酸溶液の重量と純乾燥重量としてのＮ−アセチルグルコサミン源との比率が約１：１重量比〜約５：１重量比であることを特徴とする請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
加水分解工程が約１０分〜約２４時間行われることを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６９】
ａ）Ｎ−アセチルグルコサミン源を加熱条件下で塩酸溶液または循環加水分解母液と組み合わせて加水分解し、グルコサミン塩酸塩を含む溶液を製造する工程；
ｂ）工程ａ）の溶液を冷却してグルコサミン塩酸塩を沈殿させる工程；および
ｃ）工程ｂ）から沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を取り出す工程、
を有することを特徴とする請求項１６３に記載の方法。
【請求項１７０】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を塩酸塩溶液または循環加水分解母液と連続的にブレンドし、Ｎ−アセチルグルコサミン源を溶解溶液として維持し、次いで加熱条件下に無水塩酸水溶液を工程ａ）の溶液に加えて加水分解を開始し、Ｎ−アセチルグルコサミンをグルコサミン塩酸塩に変換することで加水分解工程ａ）が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
加水分解母液が工程ｃ）で沈殿したグルコサミン塩酸塩を回収した後に残る加水分解溶液であり、加水分解工程が行われる前、工程中、または工程後に一級または二級アルコールが加水分解溶液に添加されることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７２】
一級または二級アルコールがメタノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールおよびｓｅｃ−ブタノールでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
溶液が約−５℃〜約４０℃になるまで冷却工程が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７４】
回収工程が：
ｉ）沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を採集する工程；
ｉｉ）グルコサミン塩酸塩を含む固体を水混和性溶剤で洗浄する工程；および
ｉｉｉ）グルコサミン塩酸塩を含む固体を乾燥する工程、
を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７５】
回収工程が：
ｉ）沈殿したグルコサミン塩酸塩を含む固体を採集する工程；
ｉｉ）工程（ｉ）からの固体を水に溶解して溶液とする工程；
ｉｉ）工程（ｉｉ）の溶液のｐＨを約２．５〜４の間に調整する工程；
ｉｖ）工程（ｉｉｉ）の溶液を活性炭と接触させ、グルコサミン塩酸塩を含む固体を脱色する工程；
ｖ）工程（ｉｖ）の溶液から活性炭を除去する工程；および
ｖｉ）グルコサミン塩酸塩を工程（ｖ）の溶液から結晶化する工程、
を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７６】
結晶化工程が約７０℃以下の温度でグルコサミン塩酸塩を濃縮する工程を有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
結晶化工程が約５０℃以下の温度でグルコサミン塩酸塩を濃縮する工程を有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７８】
結晶化工程がグルコサミン塩酸塩を大気圧以下で濃縮する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７９】
結晶化工程（ｖｉ）〜（ｉ）後に残留する溶液を循環する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８０】
結晶化工程（ｖｉ）から次の結晶化工程後に残留する溶液を循環する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８１】
工程（ｖｉ）後の結晶化グルコサミン塩酸塩を水混和性溶剤で洗浄する工程をさらに有することを特徴とする請求項１７５に記載の方法。
【請求項１８２】
水混和性溶剤がメタノール、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドおよびジオキサンでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１８１に記載の方法。
【請求項１８３】
洗浄後の結晶化グルコサミン塩酸塩を約７０℃以下の温度で約６時間以下乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１８１に記載の方法。
【請求項１８４】
乾燥工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
乾燥工程が空気吹き付けで行われることを特徴とする請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８６】
Ｎ−アセチルグルコサミン源を水性で低沸点の一級または二級アルコール中に懸濁され、その方法が、加水分解後、または再使用のために加水分解溶液を循環する前にアルコールで生成したエステルを除去する工程（ａ）〜（ｂ）の間に追加工程を有することを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１８７】
蒸留、フラッシングおよび濃縮でなる群から選ばれたプロセスで、大気圧以下で酢酸エステルが除去されることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
加水分解工程が約６０℃〜約１００℃の間の温度で行われることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８９】
加水分解工程が１気圧で溶液の沸点で行われることを特徴とする請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９０】
塩酸と乾燥重量としてのＮ−アセチルグルコサミン源との比率が約３：１〜約５：１で、約８０℃以下の温度で加水分解工程が行われることを特徴とする請求項１６９に記載の方法。
【請求項１９１】
工程（ｃ）で回収されたグルコサミン塩酸塩を水混和性溶剤で洗浄する工程を有することを特徴とする請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
水混和性溶剤がメタノール、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドおよびジオキサンでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
洗浄後の結晶化グルコサミン塩酸塩を約７０℃以下の温度で約６時間以下乾燥する工程をさらに有することを特徴とする請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９４】
乾燥工程が大気圧以下で行われることを特徴とする請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
乾燥工程が空気吹き付けで行われることを特徴とする請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９６】
処理工程（ｂ）がＮ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させ、グルコサミン製品を製造する工程を有することを特徴とする請求項１５７に記載の方法。
【請求項１９７】
Ｎ−アセチルグルコサミン−６−ＰデアセチラーゼおよびＮ−アセチルグルコサミンデアセチラーゼでなる群より脱アセチル化酵素が選ばれることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
脱アセチル化酵素が、Ｎ−アセチルグルコサミンモノマーを脱アセチル化しグルコサミンを製造する様に修飾されたか、またはそのような能力についてキチンデアシラーゼであることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９９】
結晶化で製造したグルコサミン製品を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２００】
沈殿で製造したグルコサミン製品を回収する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０１】
脱アセチル化酵素が基質に固定化されていることを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０２】
塩化ナトリウムまたは塩化カルシウム水溶液の存在でＮ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させる工程を、接触工程が有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０３】
結晶化または沈殿でグルコサミン製品を回収する工程をさらに有することを特徴とする請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
アルコールの存在下、Ｎ−アセチルグルコサミン源を脱アセチル化酵素と接触させ、アルコールをエステル化する工程を接触工程が有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０５】
塩をグルコサミン製品と混合し、その混合物をイオン交換媒体と接触させる工程をさらに有することを特徴とする請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０６】
塩が塩化物、燐酸塩、硫酸塩、沃素塩および亜硫酸塩でなる群より選ばれることを特徴とする請求項２０５に記載の方法。
【請求項２０７】
ａ）グルコサミン−６−燐酸シンターゼをコードする核酸配列を有する組み換え核酸分子で形質転換された微生物を、発酵培地中で培養する工程であって、組み換え核酸分子の発現がラクトース誘導で制御され、発酵工程が
ｉ）グルコースを炭素源として含む培地中、約ｐＨ４．５〜約７のｐＨ、約２５℃〜約３７℃の温度で微生物を生育させる工程と；
ｉｉ）それ以上のグルコースを添加せず、発酵培地にラクトースを添加して核酸配列の転写を誘導する工程と；
ｉｉｉ）グルコースの存在で、約４．５〜６．７のｐＨ、約２５℃〜３７℃の温度で工程（ｉｉ）の後に微生物発酵を行う工程と
を有する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミンでなる群より選ばれた、培養工程で製造された生成物を採集する工程、
を有する発酵によるグルコサミンの製造方法。
【請求項２０８】
微量元素源を発酵工程（ｉｉｉ）に添加することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２０９】
微量元素が鉄を含むことを特徴とする請求項２０８に記載の方法。
【請求項２１０】
グルコースを炭素源として含む発酵培地中、約ｐＨ６．９で微生物を生育させる工程を、工程（ｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２１１】
工程（ｉｉ）の後にグルコースの存在下で、約４．５〜５のｐＨで微生物発酵を行う工程を、工程（ｉｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【請求項２１２】
工程（ｉｉ）の後にグルコースの存在で、ｐＨ約６．７で微生物発酵を行う工程を、工程（ｉｉｉ）が有することを特徴とする請求項２０７に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【公表番号】特表２００６−５０８６４３（Ｐ２００６−５０８６４３Ａ）
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５１８２２５（Ｐ２００４−５１８２２５）
【出願日】平成１５年７月１日（２００３．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２０９２５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／００３１７５
【国際公開日】平成１６年１月８日（２００４．１．８）
【出願人】（５０５００１５２４）アーキオン ライフ サイエンシーズ エルエルシー ディー／ビー／エー バイオ−テクニカル リソーセズ ディビジョン (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年７月１日（２００３．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２０９２５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／００３１７５
【国際公開日】平成１６年１月８日（２００４．１．８）
【出願人】（５０５００１５２４）アーキオン ライフ サイエンシーズ エルエルシー ディー／ビー／エー バイオ−テクニカル リソーセズ ディビジョン (3)
【Ｆターム（参考）】
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