シクロアルタン型トリテルペンサポニンおよびその用途
【課題】低いコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ、副腎皮質刺激ホルモン放出因子）レベルにより示されるようなストレス系の機能低下は、いくつかの疾患の原因となる。低減したＣＲＦの作用を増強することにより、前記のようなストレス系の機能低下などによる疾患を効果的に処置することを目的とする
【解決手段】本発明は新規なシクロアルタン型トリテルペンサポニン、これを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤である。
【解決手段】本発明は新規なシクロアルタン型トリテルペンサポニン、これを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
低いコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ、副腎皮質刺激ホルモン放出因子）レベルにより示されるようなストレス系の機能低下は、いくつかの疾患の原因となる。例えば、肥満症のいくつかの形態は、機能低下した視床下部−下垂体−副腎軸によって特徴づけられ、外傷後ストレス症候群の患者は低いコルチゾル排泄を有し、そして禁煙中の患者はアドレナリン及びノルアドレナリンの排泄の減少、ならびに血中のコルチゾル量の減少を有する。ＣＲＦが視床下部−下垂体−副腎軸の主要なレギュレーターであるので、これらの発現にはＣＲＦが中心的役割を果たす。これらの疾患の処置にはあまり有効なものはない。例えば、肥満症を処置するために最も有効なアプローチは、行動変更プログラムである。しかし、目標体重に到達する参加者はほとんどなく、そして再発率が高い。このような疾患および病気の処置における欠点を考慮すると、より有効な処置が必要とされる。従来は、副腎機能不全や肥満など各種疾患の改善、予防に生理活性ペプチドを使用した副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）分泌調節剤が知られている（特許文献１）。
【特許文献１】特開２００２−１７３４４４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、低減したＣＲＦの作用を増強することにより、前記のようなストレス系の機能低下などによる疾患を効果的に処置することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、次式
【０００５】
【化３】
または次式
【０００６】
【化４】
【０００７】
に示されるシクロアルタン型トリテルペンサポニンである。また本発明は、このシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤である。さらに本発明は、シクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤である。
【０００８】
シクロアルタン型トリテルペンサポニンはブラックコホシュに含まれる化合物である。ブラックコホシュはシミシフガ・ラセモサ（Cimicifuga racemosa）の学名で、キンポウゲ科に属する植物である。その主成分のシミシフギン（Cimicifugin）は急激なエストロゲンの減少を抑えて、更年期障害の症状を和らげることが知られている。ブラックコホシュ抽出物の使用については、心臓血管疾患、特にアテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症および更年期障害の治療および予防として用いられている。しかし、ブラックコホシュおよびその構成成分にＣＲＦのＡＣＴＨ分泌作用を促進させる効果は言及されていない。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のシクロアルタン型トリテルペンサポニンは、キンポウゲ科ブラックコホシュ（シミシフガ・ラセモサ）根及び根茎部より抽出することができ、新規のシクロアルタン型トリテルペンサポニンneocimicigenoside A、neocimicigenoside Bを有効成分とする。これら化合物はコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）の副腎皮質ホルモン刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）分泌作用を促進させる効果を有する。従って、これら化合物は、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤として有用である。具体的には、肥満症、アジソン病、副腎皮質機能低下症、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、副腎機能不全などの各種疾患の治療、改善、予防に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（１）neocimicigenoside A、neocimicigenoside B の抽出、精製、単離の検討
シミシフガ・ラセモサ（Cimicifuga racemosa、別名ブラックコホシュ）の根および根茎（５．２ｋｇ）を熱メタノールで抽出（３時間、２回）し、抽出液を減圧濃縮した。濃縮エキス（４４５ｇ）を３０％メタノールにて懸濁させ、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付し、３０％メタノール、５０％メタノール、メタノール、エタノール、酢酸エチルで順次極性を下げながら溶出させ、５つの粗画分に分画した。
【００１１】
【化５】
【００１２】
得られたメタノール画分（１８１ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１９：１、９：１，４：１、２：１）、メタノール］により７つの画分（フラクションＡ〜Ｇ）に分画した。
フラクションＣをシリカゲルクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１９：１）］、オクタデシル化シリカゲルクロマトグラフィー［アセトニトリル−水（１：１）］、セファデックスＬＨ−２０（メタノール）により、さらに５つの画分（フラクションＣ−１からＣ−５）に分画した。
フラクションＤをメタノールに溶解し、室温で放置しておいたところ沈殿が生じた。沈殿物をろ過し、ろ液をシリカゲルクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（２５：１、１９：１）］、オクタデシル化シリカゲルクロマトグラフィー［アセトニトリル−水（２：１、５：３）］、セミ分取オクタデシル化シリカゲル高速液体クロマトグラフィー［アセトニトリル−水（５：３）］を繰り返し行うことにより精製して、neocimicigenoside A（４５．０ｍｇ）, neocimicigenoside B（１６．４ｍｇ）を単離した。
【００１３】
【化６】
【００１４】
アモルファス固体 Ｃ３７Ｈ５８Ｏ１０
［α］Ｄ２７＋58.0°（ｃ＝0.10，Ｃ５Ｈ５Ｎ）
HRESITOFMS ｍ/ｚ663.4111［Ｍ＋Ｈ］＋（calcd for Ｃ３７Ｈ５９Ｏ１０，633.4108）
ＩＲ（film）νmax 3443(OH), 2993 and 2871(CH),
1732(C=O), 1455, 1377, 1336, 1250, 1140, 1070, 1042, 990cm-1
1H-NMR（表１）
13Ｃ-NMR（表１）
【００１５】
【化７】
【００１６】
アモルファス固体 Ｃ３７Ｈ５８Ｏ１０
［α］Ｄ２７＋18.0°（ｃ＝0.10，Ｃ５Ｈ５Ｎ）
HRESITOFMS ｍ/ｚ663.4111［Ｍ＋Ｈ］＋（calcd for Ｃ３７Ｈ５９Ｏ１０，633.4108）
ＩＲ（film）νmax 3347(OH), 2928 and 2870(CH),
1732(C=O), 1454, 1413, 1377, 1257, 1145, 1069, 1049, 991, 957cm-1
1H-NMR（表１）
13Ｃ-NMR（表１）
【００１７】
【表１】
【００１８】
（２）副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）分泌促進作用の検討
マウス下垂体腫瘍細胞ＡｔＴ−２０を１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ／ｍｌで２４ｗｅｌｌプレートに蒔き、８０−９０％コンフルエントになるまで培養した。０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌで２回洗浄し、０．１％ＤＭＳＯ、０．１％ＢＳＡ含有ＤＭＥＭ培地１ｍｌを各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で１時間インキュベートした。０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌで２回洗浄し、neocimicigenoside A、neocimicigenoside Bを０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌに溶解し、最終濃度１μｇ／ｍｌで各ｗｅｌｌに１ｍｌずつ添加した。対照群およびＣＲＦ群には、０．１％ＤＭＳＯ、０．１％ＢＳＡ含有ＤＭＥＭ培地１ｍｌを各ｗｅｌｌに添加した。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で３０分間インキュベート後、ＣＲＦを最終濃度１０ｎｇ／ｍｌで対照群を除く各ｗｅｌｌに添加した。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２時間インキュベート後、培養上清を回収し、１００００ｇで５分間遠心した。ＡＣＴＨ測定キットにて培養上清中のＡＣＴＨ濃度を測定した。
表２に示す通り、ＣＲＦ刺激によりＡＣＴＨ分泌が対照群により有意に上昇した。Neocimicigenoside A、neocimicigenoside B添加によりＣＲＦ刺激時のＡＣＴＨ分泌が更に上昇する傾向が観察された。
【００１９】
表２ neocimicigenoside A, neocimicigenoside BのＣＲＦ作用増強効果
ＡＣＴＨ（ｐｇ／ｍｌ）
対照群 ７．０±０．７
ＣＲＦ群 ９．９±０．４＊＊
Neocimicigenoside A群 １３．７±１．５＊＊
Neocimicigenoside B群 １４．９±２．９＊＊
（平均値±標準偏差、＊＊ｐ＜０．０１ｖｓ対照群）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
低いコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ、副腎皮質刺激ホルモン放出因子）レベルにより示されるようなストレス系の機能低下は、いくつかの疾患の原因となる。例えば、肥満症のいくつかの形態は、機能低下した視床下部−下垂体−副腎軸によって特徴づけられ、外傷後ストレス症候群の患者は低いコルチゾル排泄を有し、そして禁煙中の患者はアドレナリン及びノルアドレナリンの排泄の減少、ならびに血中のコルチゾル量の減少を有する。ＣＲＦが視床下部−下垂体−副腎軸の主要なレギュレーターであるので、これらの発現にはＣＲＦが中心的役割を果たす。これらの疾患の処置にはあまり有効なものはない。例えば、肥満症を処置するために最も有効なアプローチは、行動変更プログラムである。しかし、目標体重に到達する参加者はほとんどなく、そして再発率が高い。このような疾患および病気の処置における欠点を考慮すると、より有効な処置が必要とされる。従来は、副腎機能不全や肥満など各種疾患の改善、予防に生理活性ペプチドを使用した副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）分泌調節剤が知られている（特許文献１）。
【特許文献１】特開２００２−１７３４４４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、低減したＣＲＦの作用を増強することにより、前記のようなストレス系の機能低下などによる疾患を効果的に処置することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、次式
【０００５】
【化３】
または次式
【０００６】
【化４】
【０００７】
に示されるシクロアルタン型トリテルペンサポニンである。また本発明は、このシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤である。さらに本発明は、シクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤である。
【０００８】
シクロアルタン型トリテルペンサポニンはブラックコホシュに含まれる化合物である。ブラックコホシュはシミシフガ・ラセモサ（Cimicifuga racemosa）の学名で、キンポウゲ科に属する植物である。その主成分のシミシフギン（Cimicifugin）は急激なエストロゲンの減少を抑えて、更年期障害の症状を和らげることが知られている。ブラックコホシュ抽出物の使用については、心臓血管疾患、特にアテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症および更年期障害の治療および予防として用いられている。しかし、ブラックコホシュおよびその構成成分にＣＲＦのＡＣＴＨ分泌作用を促進させる効果は言及されていない。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のシクロアルタン型トリテルペンサポニンは、キンポウゲ科ブラックコホシュ（シミシフガ・ラセモサ）根及び根茎部より抽出することができ、新規のシクロアルタン型トリテルペンサポニンneocimicigenoside A、neocimicigenoside Bを有効成分とする。これら化合物はコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）の副腎皮質ホルモン刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）分泌作用を促進させる効果を有する。従って、これら化合物は、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤および副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤として有用である。具体的には、肥満症、アジソン病、副腎皮質機能低下症、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、副腎機能不全などの各種疾患の治療、改善、予防に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（１）neocimicigenoside A、neocimicigenoside B の抽出、精製、単離の検討
シミシフガ・ラセモサ（Cimicifuga racemosa、別名ブラックコホシュ）の根および根茎（５．２ｋｇ）を熱メタノールで抽出（３時間、２回）し、抽出液を減圧濃縮した。濃縮エキス（４４５ｇ）を３０％メタノールにて懸濁させ、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付し、３０％メタノール、５０％メタノール、メタノール、エタノール、酢酸エチルで順次極性を下げながら溶出させ、５つの粗画分に分画した。
【００１１】
【化５】
【００１２】
得られたメタノール画分（１８１ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１９：１、９：１，４：１、２：１）、メタノール］により７つの画分（フラクションＡ〜Ｇ）に分画した。
フラクションＣをシリカゲルクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１９：１）］、オクタデシル化シリカゲルクロマトグラフィー［アセトニトリル−水（１：１）］、セファデックスＬＨ−２０（メタノール）により、さらに５つの画分（フラクションＣ−１からＣ−５）に分画した。
フラクションＤをメタノールに溶解し、室温で放置しておいたところ沈殿が生じた。沈殿物をろ過し、ろ液をシリカゲルクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（２５：１、１９：１）］、オクタデシル化シリカゲルクロマトグラフィー［アセトニトリル−水（２：１、５：３）］、セミ分取オクタデシル化シリカゲル高速液体クロマトグラフィー［アセトニトリル−水（５：３）］を繰り返し行うことにより精製して、neocimicigenoside A（４５．０ｍｇ）, neocimicigenoside B（１６．４ｍｇ）を単離した。
【００１３】
【化６】
【００１４】
アモルファス固体 Ｃ３７Ｈ５８Ｏ１０
［α］Ｄ２７＋58.0°（ｃ＝0.10，Ｃ５Ｈ５Ｎ）
HRESITOFMS ｍ/ｚ663.4111［Ｍ＋Ｈ］＋（calcd for Ｃ３７Ｈ５９Ｏ１０，633.4108）
ＩＲ（film）νmax 3443(OH), 2993 and 2871(CH),
1732(C=O), 1455, 1377, 1336, 1250, 1140, 1070, 1042, 990cm-1
1H-NMR（表１）
13Ｃ-NMR（表１）
【００１５】
【化７】
【００１６】
アモルファス固体 Ｃ３７Ｈ５８Ｏ１０
［α］Ｄ２７＋18.0°（ｃ＝0.10，Ｃ５Ｈ５Ｎ）
HRESITOFMS ｍ/ｚ663.4111［Ｍ＋Ｈ］＋（calcd for Ｃ３７Ｈ５９Ｏ１０，633.4108）
ＩＲ（film）νmax 3347(OH), 2928 and 2870(CH),
1732(C=O), 1454, 1413, 1377, 1257, 1145, 1069, 1049, 991, 957cm-1
1H-NMR（表１）
13Ｃ-NMR（表１）
【００１７】
【表１】
【００１８】
（２）副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）分泌促進作用の検討
マウス下垂体腫瘍細胞ＡｔＴ−２０を１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ／ｍｌで２４ｗｅｌｌプレートに蒔き、８０−９０％コンフルエントになるまで培養した。０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌで２回洗浄し、０．１％ＤＭＳＯ、０．１％ＢＳＡ含有ＤＭＥＭ培地１ｍｌを各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で１時間インキュベートした。０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌで２回洗浄し、neocimicigenoside A、neocimicigenoside Bを０．１％ＢＳＡ含ＤＭＥＭ培地１ｍｌに溶解し、最終濃度１μｇ／ｍｌで各ｗｅｌｌに１ｍｌずつ添加した。対照群およびＣＲＦ群には、０．１％ＤＭＳＯ、０．１％ＢＳＡ含有ＤＭＥＭ培地１ｍｌを各ｗｅｌｌに添加した。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で３０分間インキュベート後、ＣＲＦを最終濃度１０ｎｇ／ｍｌで対照群を除く各ｗｅｌｌに添加した。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２時間インキュベート後、培養上清を回収し、１００００ｇで５分間遠心した。ＡＣＴＨ測定キットにて培養上清中のＡＣＴＨ濃度を測定した。
表２に示す通り、ＣＲＦ刺激によりＡＣＴＨ分泌が対照群により有意に上昇した。Neocimicigenoside A、neocimicigenoside B添加によりＣＲＦ刺激時のＡＣＴＨ分泌が更に上昇する傾向が観察された。
【００１９】
表２ neocimicigenoside A, neocimicigenoside BのＣＲＦ作用増強効果
ＡＣＴＨ（ｐｇ／ｍｌ）
対照群 ７．０±０．７
ＣＲＦ群 ９．９±０．４＊＊
Neocimicigenoside A群 １３．７±１．５＊＊
Neocimicigenoside B群 １４．９±２．９＊＊
（平均値±標準偏差、＊＊ｐ＜０．０１ｖｓ対照群）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式
【化１】
または次式
【化２】
に示されるシクロアルタン型トリテルペンサポニン。
【請求項２】
請求項１記載のシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤。
【請求項３】
請求項１記載のシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤。
【請求項１】
次式
【化１】
または次式
【化２】
に示されるシクロアルタン型トリテルペンサポニン。
【請求項２】
請求項１記載のシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）増強剤。
【請求項３】
請求項１記載のシクロアルタン型トリテルペンサポニンを有効成分として含有する副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）刺激時の副腎皮質刺激ホルモン分泌促進剤。
【公開番号】特開２００６−５２１４１（Ｐ２００６−５２１４１Ａ）
【公開日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２３２５５１（Ｐ２００４−２３２５５１）
【出願日】平成１６年８月９日（２００４．８．９）
【出願人】（０００００００５５）アサヒビール株式会社 (535)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月９日（２００４．８．９）
【出願人】（０００００００５５）アサヒビール株式会社 (535)
【Ｆターム（参考）】
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