ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、それらの製造、ならびにその医薬品および化粧品用途
本発明は、一般式Ｉ
［式中、
０≦ｎ≦４
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］
のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、それを製造するための方法、ならびに医薬品および／または化粧品分野におけるその使用に関する。
［式中、
０≦ｎ≦４
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］
のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、それを製造するための方法、ならびに医薬品および／または化粧品分野におけるその使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明はショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、その製造のための方法、ならびに医薬品および／または化粧品分野におけるその使用に関する。
【０００２】
オリゴ糖は、加水分解でオース(oses)のみを生じる炭水化物である。それらは、結合した少なくとも２分子の単糖類（またはオース）からなる糖類である。オリゴ糖はショ糖を含み、グルコース分子１個とフルクトース分子１個の２つのオースの縮合により形成される二糖である。
【０００３】
硫酸化オリゴ糖は文献から公知であり、様々な生物活性、美容活性および／または治療活性を有する。
【０００４】
ＷＯ２００６／０１７７５２は、オリゴ糖を有効成分として用いて気道の炎症を処置するための方法を開示している。オリゴ糖は、さらに、グルコースの縮合およびフルクトースの縮合により得られる完全硫酸化オリゴ糖を含む。
【０００５】
硫酸化オリゴ糖、主としてショ糖オクタ硫酸エステルアルミニウム塩もまた、脱毛症の処置に使用される（ＵＳ５７６７１０４）。
【０００６】
ショ糖オクタ硫酸エステルは、その修復／治癒特性のために、胃潰瘍の処置において有効成分として使用される。ＦＲ２６４６６０４は、創傷または他の潰瘍性炎症の処置に好適な抗炎症特性および治癒特性を有するショ糖オクタ硫酸エステルアルミニウム塩、またはスクラルファートの処方を開示している。ＷＯ９４／００４７６は、硫酸化ショ糖塩、より詳しくは、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムまたはナトリウム塩の投与により消化器官の損傷および／または炎症を処置するための方法を開示している。
【０００７】
ＦＲ１３９０００７は、硫酸銅および硫酸亜鉛を組織再生、治癒、および無痛化剤として組み合わせたスクラルファートを含んでなる処方の局所的使用を開示している。
【０００８】
ＥＰ０２３００２３は、創傷治癒のための薬剤として、ポリ硫酸化オリゴ糖、より詳しくは、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩の使用を開示している。
【発明の開示】
【０００９】
本発明の目的は、修復特性、抗菌特性および抗ラジカル特性を組み合わせた新規化合物を提供することである。このような化合物は、皮膚修復、創傷治癒および瘢痕形成促進に好適な医薬組成物および／または化粧品組成物の製造において有用であることが見出されている。この種の組成物は、皮膚処置および抗菌性保護の両方を兼ね備えている。
【００１０】
本発明は、一般式Ｉ：
【化１】
［式中、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］
の化合物に関する。
【００１１】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＩ：
【化２】
の化合物である。
【００１２】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが４である一般式Ｉの化合物である。
【００１３】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＩＩ：
【化３】
の化合物である。
【００１４】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが３である一般式Ｉの化合物である。
【００１５】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＶ：
【化４】
の化合物である。
【００１６】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが２である一般式Ｉの化合物である。
【００１７】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式Ｖ：
【化５】
の化合物である。
【００１８】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが１である一般式Ｉの化合物である。
【００１９】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＶＩ
【化６】
の化合物である。
【００２０】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが０である一般式Ｉの化合物である。
【００２１】
本発明はまた、これらの化合物を製造するための方法を提供する。
【００２２】
一般式Ｉの化合物は、スキーム１：
【化７】
［式中、
ＭはＫ、Ｎａ、またはＨを表し、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、ＢＦ４、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表し、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数である］
に従って製造される。
【００２３】
一般式Ｉの化合物は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＭはＫを表す）、ショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＭはＮａを表す）または酸性型のショ糖オクタ硫酸エステル（ＭはＨを表す）から得られる。出発ショ糖オクタ硫酸エステル塩がナトリウム塩またはカリウム塩である場合、カリウムまたはナトリウムとプロトンとのイオン交換工程は、イオン交換樹脂上にロードすることにより行う。酸性型のショ糖オクタ硫酸エステルには、Ｚｎ（ＯＨ）２、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２から選択される無機亜鉛塩、またはＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２から選択される有機亜鉛塩のいずれかを添加する。該亜鉛塩は、一般式Ｉの化合物を生成するために必要な量を添加し、この際、数ｎは０〜４の間、または０および４に等しい整数である。
【００２４】
従って、本発明は以下の製造方法を含む。
【００２５】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法は、
１）ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）該塩をイオン交換カラム上にロードする工程、
３）亜鉛塩を添加する工程、
４）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる。
【００２６】
本発明の一つの実施態様では、工程１の該ショ糖オクタ硫酸エステル塩は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩またはショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩から選択される。
【００２７】
イオン交換カラム通過後、酸性型のショ糖オクタ硫酸エステル塩が得られる。より好ましくは、それは陽イオン交換樹脂である。本発明の一つの実施態様では、該陽イオン交換樹脂はアンバーライトである。
【００２８】
本発明の一つの実施態様では、該亜鉛塩は、無機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＯＨ）２、ＺｎＯ、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２、または有機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２のいずれかから選択される。該亜鉛塩は、例えば水酸化亜鉛Ｚｎ（ＯＨ）２である。
【００２９】
本発明の一つの実施態様では、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の沈澱はアセトンを添加することにより行う。
【００３０】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法は、
１）酸性型ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）亜鉛塩を添加する工程、
３）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる。
【００３１】
該亜鉛塩は、無機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＯＨ）２、ＺｎＯ、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２、または有機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２のいずれかから選択される。
【００３２】
本発明の一つの実施態様では、該ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の沈澱はアセトンを添加することにより行う。
【００３３】
本発明の式Ｉの化合物は、局所経路または経口経路により投与することができる。特に、該化合物は、好適な処方で局所的に投与することができる。本発明の組成物中の式Ｉの化合物の用量レベルは、投与方法に適した組成物に対して所望の治療応答および／または美容応答を達成するために効果的な有効成分の量を得る目的で調整することができる。従って、選択される用量レベルは、所望の治療効果および／または美容効果、投与経路、所望の処置期間ならびに他の因子によって決まる。
【００３４】
従って、本発明はまた、少なくとも１つの一般式Ｉの化合物と薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる医薬組成物および／または化粧品組成物にも関する。
【００３５】
本発明はまた、少なくとも１つの一般式Ｉの化合物と薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる医療装置に関する。
【００３６】
「薬学上および／または美容学上許容される」という表現は、それらが動物またはヒトに投与された場合に、有害な副作用、アレルギーまたは他の望ましくない反応を引き起こさない、分子実体および組成物を意味する。
【００３７】
一つの実施態様では、本発明による組成物は０．０１〜３０重量％の間の量の一般式Ｉのショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を含有する。
【００３８】
本発明による一つの実施態様では、該組成物は式ＩＩの化合物を含んでなる。
【００３９】
本発明による組成物を得るための薬学上および／または美容学上許容される賦形剤は、局所または経口投与に適するように選択される。
【００４０】
有利には、該局所形は、乳液、クリーム、香油、オイル、ローション、ゲル、起泡性ゲル、軟膏、スプレー、ペースト、パッチ、坐剤などからなる群から選択される。
【００４１】
有利には、該経口形は、ガム、トローチ剤、錠剤、調理糖(cooked sugar)、ドリンクゲル(drinking gel)、溶解用粉末などからなる群から選択される。
【００４２】
本発明の目的では、該局所形は、皮膚使用、経口使用（口腔粘膜）、生殖器使用（肛門、膣粘膜）および／または胃使用のための局所投与形を含む。
【００４３】
本発明の目的では、該経口形は、経口使用（口腔粘膜）および／または胃使用のための経口投与形を含む。
【００４４】
本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、創傷治癒を促進するために設計される。
【００４５】
亜鉛の抗菌性は十分に記載されている。このために、本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、さらに細菌感染に対する保護を提供することを意図する。
【００４６】
従って、本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、創傷治癒を促進し、かつ／または細菌感染に対する保護を提供する。
【００４７】
in vitro試験では、本発明による化合物はケラチノサイト移動を誘導することが示された。これに対して、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩は細胞移動を誘導しない。
【００４８】
従って、驚くことに、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩双方とは異なり、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩はケラチノサイト移動に対して極めて有用な特性を示し、従って皮膚治癒に好適であることが認められている。
【００４９】
従って、本発明の化合物は、特に治癒プロセスにおける皮膚の処置、およびその審美的外観を増進するために使用することができる。
【００５０】
従って、本発明の化合物は、創傷治癒を促進する目的で、組成物ならびに医薬品および／または化粧品の製造のために使用することができる。
【００５１】
従って、本発明のもう一つの目的は、薬剤として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５２】
本発明の化合物の別の目的はまた、化粧品の有効成分として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５３】
本発明の別の目的はさらに、薬剤および／または化粧品の有効成分として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５４】
本発明の特定の一つの実施態様では、式Ｉの化合物は皮膚の処置のために使用される。
【００５５】
より詳しくは、該式Ｉの化合物は創傷治癒を促進するために使用される。より詳しくは、本発明は、急性創傷、例えば、擦り傷、火傷、放射線皮膚炎など、または慢性創傷、例えば潰瘍、褥瘡、および糖尿病性足などの創傷治癒に関する。
【００５６】
より詳しくは、本発明は火傷（熱、物理的、化学的、放射線起源）、放射線皮膚炎、様々な発疹、皮膚炎、擦り傷、引っ掻き傷、かすり傷、切り傷、下肢潰瘍、褥瘡、糖尿病性創傷、胃潰瘍、口腔びらん、口腔環境における様々な創傷、瘢痕性座瘡、凍結療法の瘢痕、外科手術後または皮膚形成外科手術後瘢痕（レーザー、脱毛、ピーリング、注射）、水泡、口唇炎、湿疹、おむつかぶれ、皮膚粗鬆症等の創傷治癒に関する。
【００５７】
本発明の特定の一つの実施態様では、該式Ｉの化合物は、創傷治癒を促進し、かつ／または細菌感染に対する保護のために使用される。
【実施例】
【００５８】
以下に示す実施例は例示的なものであり、限定されるものではない。
【００５９】
実施例１：式ＩＩの化合物の製造
ａ．製造手順
【化８】
【００６０】
１００ｍＬの丸底フラスコに水（２０ｍｌ）中、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩溶液（１．５０ｇ；１．１６ｍｍｏｌ，１．００当量，９９％）を添加する。該溶液を２５０ｇのイオン交換樹脂アンバーライトＩＲ １２０ Ｈを含むカラム（φ４０×５００ｍｍ）に、流速２〜３ｍＬ／分、０℃でロードする。酸性画分（１２０ｍＬ；ｐＨ＝１．２）を回収し、新しく作製した水酸化亜鉛（６００ｍｇ；５．７６ｍｍｏｌ；５．０５当量，９５％）を添加することにより、直ちに中和する。得られた混合物（約ｐＨ６では濁っている）を、室温、撹拌下で一晩（約１２時間）静置する。これらの工程は総て、反応媒体をアルミニウムホイルで覆うことにより、暗所で行った。
【００６１】
次に、該混合物を濾過し、３６０ｍＬのアセトンを濾液に添加する。得られた混合物を一晩静置する。上清をデカントし、残ったシロップをアセトンで洗浄する。ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩が白色固体として得られる（０．４０ｇ；２８％）。
【００６２】
1H NMR (D2O, ppm): δ: 4.02-4.50 (m, 10 H); 4.53-4.71 (m, 2 H); 5.03 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 5.70-5.71 (d, J = 3.6 Hz, 1 H).
【００６３】
ｂ．ショ糖オクタ硫酸エステルの測定
ショ糖オクタ硫酸エステルの量を、アンスロン法を用いた分光光度アッセイにより測定する(Brooks, J.; Griffin, V. K.; Kattan, M. W.; ≪A Modified Method for Total Carbohydrate Analysis of Glucose Syrups, Maltodextrins, and Other Starch Hydrolysis Products≫; Cereal Chemistry, 63, 5, 465-466, 1986)。
【００６４】
アンスロンの標準溶液は、５０ｍｇのアンスロンを１０ｍＬの蒸留水および９０ｍＬの濃硫酸の混合物に溶解させることにより作製する。
【００６５】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩は、あらかじめ真空（約２３．５Ｐａ）で３０℃にて６時間、脱水しておく。それぞれ０．３、０．６および０．７ｍＬの容量のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩水溶液（０．４０１８ｍｇ／ｍＬ）の３つのサンプルを蒸留水で２ｍＬに希釈する。６．０ｍＬのアンスロン標準溶液を各溶液に添加する。得られた溶液を水浴中で１０分間加熱する。直ちに室温まで冷却した後、ショ糖を参照として用いて各溶液の吸光度を６２０ｎｍにて測定する（結果を表１に示す）。
【００６６】
【表１】
【００６７】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩中のショ糖オクタ硫酸エステルの量は：０．２９６ｍＭ／０．４０１８ｍｇ／ｍＬ＝０．７３７ｍｍｏｌ／ｇである。
【００６８】
ｃ．亜鉛含量の測定
亜鉛含量は、ＥＤＴＡを用いた滴定で測定した。
【００６９】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（０．２００９ｇ）を脱イオン水（２５０ｍＬ）に溶解させる。塩は、６ｍＬのヘキサメチレンテトラミン（２０％）をバッファー溶液として、また２滴のキシレノール・オレンジ（０．２％）を呈色指示薬として含有するＥＤＴＡ水溶液（０．０１０１Ｍ）を用いて滴定する（表２）。
【００７０】
【表２】
【００７１】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩中の亜鉛量は：２．３０ｍＭ×０．２５０ｌ／０．２００９ｇ＝２．８６ｍｍｏｌ／ｇである。
【００７２】
亜鉛／ショ糖オクタ硫酸エステルの比は２．８６／０．７３７、すなわち３．８８である。
【００７３】
ｄ．カリウム不純物の分析
ＵＦＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を使用して、出発材料由来のカリウムの存在を検出した。
【００７４】
条件：
カラム：Ｍｅｒｃｋ ＳｅＱｕａｎｔ ＺＩＣ＿ＨＩＬＩＣ １５０×４．６ｍｍ
５μｍ ２００Ａ
移動相Ａ：アセトニトリル
移動相Ｂ：１００ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ＝５．０
流速：０．６ｍｌ／分
カラム温度：３５℃
検出器：ＥＬＳＤ
勾配：１１．０分かけて１５％から８５％Ｂ、８．０分かけて８５％から９５％Ｂ、９５％Ｂ ５分間
【００７５】
結果：
実施例１に従って得られたショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩および２つの対照をＵＦＬＣにより分析した：
ＺｎＣｌ２（図１参照）；
ＺｎＣｌ２＋ＫＣｌ（図２参照）；
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（式ＩＩ）（図３参照）。
【００７６】
この分析から、合成された生成物中にカリウムは存在しないことが確認された。亜鉛のみが陽イオンとして存在する。
【００７７】
実施例２：in vitro細胞移動アッセイ
上皮細胞移動は、発生および組織修復プロセス、例えば胚発生および創傷治癒の実質的な段階である。
【００７８】
細胞移動の開始、協調および停止のメカニズムは十分には解明されていないが、細胞移動が重要な役割を果たすことは立証されている(Santoro M.M. and Gaudino G. Cellular and molecular facets of keratinocyte reepithelization during wound healing Exp. Cell. Res. 304 (1): 274-286, 2005; Werner S. and Grose R. Regulation of wound healing by growth factors and cytokines Physiol. Rev. 3(3): 835-870, 2003; Steffensen B, Akkinen L., Lariava H. Proteolytic events of wound healing-coordinated interactions among matrix metalloproteinases(MMPs), integrins, and extracellular matrix molecules Crit. Rev. Oral Biol. Med. 12(5): 373-398, 2001).
【００７９】
皮膚の治癒過程および皮膚の慢性炎症状態において、ケラチノサイトは「活性化」され、移動プロセスを開始する。次に、該細胞は、一方では細胞外マトリックスとの相互作用により、また他方では細胞−細胞相互作用により、それらの表現型を支配する(McMillan JR, Akiyama M., Shimizu H.Epidermal basement membrane zone component: ultrastructural distribution and molecular interactions J. Derm. Sc. 31: 169-177, 2003)。創傷の境界の基底面のケラチノサイトは、移動して創傷を覆う。
【００８０】
実際に、ケラチノサイトは、フィブロネクチン、間質皮膚コラーゲン（１型）、コラーゲンＩＶ、および基底膜由来のラミニン５と接触した場合に活性化される。それらはまた、一部のポリペプチド増殖因子、例えば、ＴＧＦβ、ＴＧＦα、およびＥＧＦによっても制御される。さらに、サイトカイン（ＩＬ１、ＴＮＦα）、ならびにケモカイン（ＲＡＮＴＥＳおよびＩＬ−８）もまた、ケラチノサイトを活性化することにより創傷の再上皮化の速度を増加させるのを助ける(Szabo I., Wetzel M. A., Rogers TJ. Cell-Density-Regulated Chemotactic Resposiveness of Keratinocytes In Vitro J. Invest. Dermatol. 117: 1083-1090, 2001)。
【００８１】
試験の目的
本試験の目的は、Ｏｒｉｓ細胞移動アッセイキット(Platypus Technologies)を用いて、ケラチノサイト細胞系統であるＨａＣＡＴの細胞移動に対するショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の効果を評価することであった。本試験は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩、およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩と比較して行った。
【００８２】
従って、３つのショ糖のＨａＣａＴ細胞の移動に対する効果について分析した。
【００８３】
材料および方法
ａ．生物材料
自然に不死化したヒトケラチノサイト細胞系統ＨａＣＡＴは、文献において頻繁に標準モデルとして紹介されている。
【００８４】
ｂ．細胞移動プロトコール
細胞移動試験に用いたプロトコールは、９６穴Ｏｒｉｓ細胞移動アッセイキット(Platypus Technologies-TEBU)の使用に基づき、この細胞プロセスの縮小化および定量化を提供する。それは、コード番号ＱＲＤ／ＴＯ／１５４／１０７で表される。
【００８５】
本アッセイの原理は、９６穴プレートのウェルの中心部への細胞移動を調査することである。一部のウェルにはストッパーを配置し、直径２ｍｍの検出ゾーンを設ける。次に、細胞が該ストッパー周囲の表面に十分付着した後に該ストッパーを除去し、細胞が検出ゾーンに向かって移動できるようにする。ストッパー無しで活性物質を含むプレートをＤＭＥＭ ０％ＳＶＦ中で３７℃、２４時間インキュベートする。この後、ストッパーが配置されていたゾーンに位置する細胞量を分析し、細胞移動を評価する。マスクは可視化およびこのゾーンに位置する細胞のみの読み取りを制限する。各条件につき、平均４から８個のウェルを計算する。
【００８６】
ｃ．試験品
陽性対照：ＴＧＦβ１
ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＳＯＳ−Ｋ）
ショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＳＯＳ−Ｎａ）
実施例１のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（ＳＯＳ−Ｚｎ）
【００８７】
ｄ．結果の分析
結果はＯＤとして表す（移動した細胞の量に比例）。
【００８８】
陰性対照に対する活性パーセントは次のように計算する。
【数１】
【００８９】
ＴＧＦβに対する活性パーセントは次のように計算する。
【数２】
【００９０】
結果
様々な濃度の３種類のショ糖を、それらのＨａＣａＴ細胞移動に対する効果について、二重測定で分析した（表３および４）。
【００９１】
ａ．実験１
【表３】
【００９２】
ｂ．実験２
【表４】
【００９３】
以下のことが確認された。
・実験の陽性対照であるＴＧＦβは５ｎｇ／ｍＬはケラチノサイト移動を再現性良く誘導する。
・ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（ＳＯＳ−Ｚｎ）もまた、１μＭにおいて細胞移動を再現性良く誘導する。この濃度では、それは陽性対照であるＴＧＦβと同等の活性を有する。
・試験した濃度では、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＳＯＳ−Ｋ）およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＳＯＳ−Ｎａ）はケラチノサイト移動を誘導しない。
【００９４】
この細胞移動キットを用いて、３種類のショ糖のケラチノサイト移動に対する効果を検討した。
【００９５】
本発明者らは、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩がケラチノサイト移動を誘導することを示した。これに対して、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩は細胞移動を誘導しない。
【００９６】
ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩とは異なり、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩はケラチノサイト移動に対して極めて有用な特性を有し、従って、皮膚治癒に好適であることが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】
【図２】
【図３】
【発明の背景】
【０００１】
本発明はショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、その製造のための方法、ならびに医薬品および／または化粧品分野におけるその使用に関する。
【０００２】
オリゴ糖は、加水分解でオース(oses)のみを生じる炭水化物である。それらは、結合した少なくとも２分子の単糖類（またはオース）からなる糖類である。オリゴ糖はショ糖を含み、グルコース分子１個とフルクトース分子１個の２つのオースの縮合により形成される二糖である。
【０００３】
硫酸化オリゴ糖は文献から公知であり、様々な生物活性、美容活性および／または治療活性を有する。
【０００４】
ＷＯ２００６／０１７７５２は、オリゴ糖を有効成分として用いて気道の炎症を処置するための方法を開示している。オリゴ糖は、さらに、グルコースの縮合およびフルクトースの縮合により得られる完全硫酸化オリゴ糖を含む。
【０００５】
硫酸化オリゴ糖、主としてショ糖オクタ硫酸エステルアルミニウム塩もまた、脱毛症の処置に使用される（ＵＳ５７６７１０４）。
【０００６】
ショ糖オクタ硫酸エステルは、その修復／治癒特性のために、胃潰瘍の処置において有効成分として使用される。ＦＲ２６４６６０４は、創傷または他の潰瘍性炎症の処置に好適な抗炎症特性および治癒特性を有するショ糖オクタ硫酸エステルアルミニウム塩、またはスクラルファートの処方を開示している。ＷＯ９４／００４７６は、硫酸化ショ糖塩、より詳しくは、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムまたはナトリウム塩の投与により消化器官の損傷および／または炎症を処置するための方法を開示している。
【０００７】
ＦＲ１３９０００７は、硫酸銅および硫酸亜鉛を組織再生、治癒、および無痛化剤として組み合わせたスクラルファートを含んでなる処方の局所的使用を開示している。
【０００８】
ＥＰ０２３００２３は、創傷治癒のための薬剤として、ポリ硫酸化オリゴ糖、より詳しくは、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩の使用を開示している。
【発明の開示】
【０００９】
本発明の目的は、修復特性、抗菌特性および抗ラジカル特性を組み合わせた新規化合物を提供することである。このような化合物は、皮膚修復、創傷治癒および瘢痕形成促進に好適な医薬組成物および／または化粧品組成物の製造において有用であることが見出されている。この種の組成物は、皮膚処置および抗菌性保護の両方を兼ね備えている。
【００１０】
本発明は、一般式Ｉ：
【化１】
［式中、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］
の化合物に関する。
【００１１】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＩ：
【化２】
の化合物である。
【００１２】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが４である一般式Ｉの化合物である。
【００１３】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＩＩ：
【化３】
の化合物である。
【００１４】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが３である一般式Ｉの化合物である。
【００１５】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＩＶ：
【化４】
の化合物である。
【００１６】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが２である一般式Ｉの化合物である。
【００１７】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式Ｖ：
【化５】
の化合物である。
【００１８】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが１である一般式Ｉの化合物である。
【００１９】
本発明の一つの実施態様では、該化合物は式ＶＩ
【化６】
の化合物である。
【００２０】
本発明の本実施態様では、該式ＩＩの化合物は、ｎが０である一般式Ｉの化合物である。
【００２１】
本発明はまた、これらの化合物を製造するための方法を提供する。
【００２２】
一般式Ｉの化合物は、スキーム１：
【化７】
［式中、
ＭはＫ、Ｎａ、またはＨを表し、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、ＢＦ４、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表し、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数である］
に従って製造される。
【００２３】
一般式Ｉの化合物は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＭはＫを表す）、ショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＭはＮａを表す）または酸性型のショ糖オクタ硫酸エステル（ＭはＨを表す）から得られる。出発ショ糖オクタ硫酸エステル塩がナトリウム塩またはカリウム塩である場合、カリウムまたはナトリウムとプロトンとのイオン交換工程は、イオン交換樹脂上にロードすることにより行う。酸性型のショ糖オクタ硫酸エステルには、Ｚｎ（ＯＨ）２、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２から選択される無機亜鉛塩、またはＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２から選択される有機亜鉛塩のいずれかを添加する。該亜鉛塩は、一般式Ｉの化合物を生成するために必要な量を添加し、この際、数ｎは０〜４の間、または０および４に等しい整数である。
【００２４】
従って、本発明は以下の製造方法を含む。
【００２５】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法は、
１）ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）該塩をイオン交換カラム上にロードする工程、
３）亜鉛塩を添加する工程、
４）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる。
【００２６】
本発明の一つの実施態様では、工程１の該ショ糖オクタ硫酸エステル塩は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩またはショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩から選択される。
【００２７】
イオン交換カラム通過後、酸性型のショ糖オクタ硫酸エステル塩が得られる。より好ましくは、それは陽イオン交換樹脂である。本発明の一つの実施態様では、該陽イオン交換樹脂はアンバーライトである。
【００２８】
本発明の一つの実施態様では、該亜鉛塩は、無機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＯＨ）２、ＺｎＯ、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２、または有機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２のいずれかから選択される。該亜鉛塩は、例えば水酸化亜鉛Ｚｎ（ＯＨ）２である。
【００２９】
本発明の一つの実施態様では、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の沈澱はアセトンを添加することにより行う。
【００３０】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法は、
１）酸性型ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）亜鉛塩を添加する工程、
３）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる。
【００３１】
該亜鉛塩は、無機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＯＨ）２、ＺｎＯ、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩ２、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２、または有機亜鉛塩、例えばＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２のいずれかから選択される。
【００３２】
本発明の一つの実施態様では、該ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の沈澱はアセトンを添加することにより行う。
【００３３】
本発明の式Ｉの化合物は、局所経路または経口経路により投与することができる。特に、該化合物は、好適な処方で局所的に投与することができる。本発明の組成物中の式Ｉの化合物の用量レベルは、投与方法に適した組成物に対して所望の治療応答および／または美容応答を達成するために効果的な有効成分の量を得る目的で調整することができる。従って、選択される用量レベルは、所望の治療効果および／または美容効果、投与経路、所望の処置期間ならびに他の因子によって決まる。
【００３４】
従って、本発明はまた、少なくとも１つの一般式Ｉの化合物と薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる医薬組成物および／または化粧品組成物にも関する。
【００３５】
本発明はまた、少なくとも１つの一般式Ｉの化合物と薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる医療装置に関する。
【００３６】
「薬学上および／または美容学上許容される」という表現は、それらが動物またはヒトに投与された場合に、有害な副作用、アレルギーまたは他の望ましくない反応を引き起こさない、分子実体および組成物を意味する。
【００３７】
一つの実施態様では、本発明による組成物は０．０１〜３０重量％の間の量の一般式Ｉのショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を含有する。
【００３８】
本発明による一つの実施態様では、該組成物は式ＩＩの化合物を含んでなる。
【００３９】
本発明による組成物を得るための薬学上および／または美容学上許容される賦形剤は、局所または経口投与に適するように選択される。
【００４０】
有利には、該局所形は、乳液、クリーム、香油、オイル、ローション、ゲル、起泡性ゲル、軟膏、スプレー、ペースト、パッチ、坐剤などからなる群から選択される。
【００４１】
有利には、該経口形は、ガム、トローチ剤、錠剤、調理糖(cooked sugar)、ドリンクゲル(drinking gel)、溶解用粉末などからなる群から選択される。
【００４２】
本発明の目的では、該局所形は、皮膚使用、経口使用（口腔粘膜）、生殖器使用（肛門、膣粘膜）および／または胃使用のための局所投与形を含む。
【００４３】
本発明の目的では、該経口形は、経口使用（口腔粘膜）および／または胃使用のための経口投与形を含む。
【００４４】
本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、創傷治癒を促進するために設計される。
【００４５】
亜鉛の抗菌性は十分に記載されている。このために、本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、さらに細菌感染に対する保護を提供することを意図する。
【００４６】
従って、本発明による医薬組成物および／または化粧品組成物は、創傷治癒を促進し、かつ／または細菌感染に対する保護を提供する。
【００４７】
in vitro試験では、本発明による化合物はケラチノサイト移動を誘導することが示された。これに対して、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩は細胞移動を誘導しない。
【００４８】
従って、驚くことに、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩双方とは異なり、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩はケラチノサイト移動に対して極めて有用な特性を示し、従って皮膚治癒に好適であることが認められている。
【００４９】
従って、本発明の化合物は、特に治癒プロセスにおける皮膚の処置、およびその審美的外観を増進するために使用することができる。
【００５０】
従って、本発明の化合物は、創傷治癒を促進する目的で、組成物ならびに医薬品および／または化粧品の製造のために使用することができる。
【００５１】
従って、本発明のもう一つの目的は、薬剤として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５２】
本発明の化合物の別の目的はまた、化粧品の有効成分として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５３】
本発明の別の目的はさらに、薬剤および／または化粧品の有効成分として使用するための本発明による化合物に関する。
【００５４】
本発明の特定の一つの実施態様では、式Ｉの化合物は皮膚の処置のために使用される。
【００５５】
より詳しくは、該式Ｉの化合物は創傷治癒を促進するために使用される。より詳しくは、本発明は、急性創傷、例えば、擦り傷、火傷、放射線皮膚炎など、または慢性創傷、例えば潰瘍、褥瘡、および糖尿病性足などの創傷治癒に関する。
【００５６】
より詳しくは、本発明は火傷（熱、物理的、化学的、放射線起源）、放射線皮膚炎、様々な発疹、皮膚炎、擦り傷、引っ掻き傷、かすり傷、切り傷、下肢潰瘍、褥瘡、糖尿病性創傷、胃潰瘍、口腔びらん、口腔環境における様々な創傷、瘢痕性座瘡、凍結療法の瘢痕、外科手術後または皮膚形成外科手術後瘢痕（レーザー、脱毛、ピーリング、注射）、水泡、口唇炎、湿疹、おむつかぶれ、皮膚粗鬆症等の創傷治癒に関する。
【００５７】
本発明の特定の一つの実施態様では、該式Ｉの化合物は、創傷治癒を促進し、かつ／または細菌感染に対する保護のために使用される。
【実施例】
【００５８】
以下に示す実施例は例示的なものであり、限定されるものではない。
【００５９】
実施例１：式ＩＩの化合物の製造
ａ．製造手順
【化８】
【００６０】
１００ｍＬの丸底フラスコに水（２０ｍｌ）中、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩溶液（１．５０ｇ；１．１６ｍｍｏｌ，１．００当量，９９％）を添加する。該溶液を２５０ｇのイオン交換樹脂アンバーライトＩＲ １２０ Ｈを含むカラム（φ４０×５００ｍｍ）に、流速２〜３ｍＬ／分、０℃でロードする。酸性画分（１２０ｍＬ；ｐＨ＝１．２）を回収し、新しく作製した水酸化亜鉛（６００ｍｇ；５．７６ｍｍｏｌ；５．０５当量，９５％）を添加することにより、直ちに中和する。得られた混合物（約ｐＨ６では濁っている）を、室温、撹拌下で一晩（約１２時間）静置する。これらの工程は総て、反応媒体をアルミニウムホイルで覆うことにより、暗所で行った。
【００６１】
次に、該混合物を濾過し、３６０ｍＬのアセトンを濾液に添加する。得られた混合物を一晩静置する。上清をデカントし、残ったシロップをアセトンで洗浄する。ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩が白色固体として得られる（０．４０ｇ；２８％）。
【００６２】
1H NMR (D2O, ppm): δ: 4.02-4.50 (m, 10 H); 4.53-4.71 (m, 2 H); 5.03 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 5.70-5.71 (d, J = 3.6 Hz, 1 H).
【００６３】
ｂ．ショ糖オクタ硫酸エステルの測定
ショ糖オクタ硫酸エステルの量を、アンスロン法を用いた分光光度アッセイにより測定する(Brooks, J.; Griffin, V. K.; Kattan, M. W.; ≪A Modified Method for Total Carbohydrate Analysis of Glucose Syrups, Maltodextrins, and Other Starch Hydrolysis Products≫; Cereal Chemistry, 63, 5, 465-466, 1986)。
【００６４】
アンスロンの標準溶液は、５０ｍｇのアンスロンを１０ｍＬの蒸留水および９０ｍＬの濃硫酸の混合物に溶解させることにより作製する。
【００６５】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩は、あらかじめ真空（約２３．５Ｐａ）で３０℃にて６時間、脱水しておく。それぞれ０．３、０．６および０．７ｍＬの容量のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩水溶液（０．４０１８ｍｇ／ｍＬ）の３つのサンプルを蒸留水で２ｍＬに希釈する。６．０ｍＬのアンスロン標準溶液を各溶液に添加する。得られた溶液を水浴中で１０分間加熱する。直ちに室温まで冷却した後、ショ糖を参照として用いて各溶液の吸光度を６２０ｎｍにて測定する（結果を表１に示す）。
【００６６】
【表１】
【００６７】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩中のショ糖オクタ硫酸エステルの量は：０．２９６ｍＭ／０．４０１８ｍｇ／ｍＬ＝０．７３７ｍｍｏｌ／ｇである。
【００６８】
ｃ．亜鉛含量の測定
亜鉛含量は、ＥＤＴＡを用いた滴定で測定した。
【００６９】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（０．２００９ｇ）を脱イオン水（２５０ｍＬ）に溶解させる。塩は、６ｍＬのヘキサメチレンテトラミン（２０％）をバッファー溶液として、また２滴のキシレノール・オレンジ（０．２％）を呈色指示薬として含有するＥＤＴＡ水溶液（０．０１０１Ｍ）を用いて滴定する（表２）。
【００７０】
【表２】
【００７１】
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩中の亜鉛量は：２．３０ｍＭ×０．２５０ｌ／０．２００９ｇ＝２．８６ｍｍｏｌ／ｇである。
【００７２】
亜鉛／ショ糖オクタ硫酸エステルの比は２．８６／０．７３７、すなわち３．８８である。
【００７３】
ｄ．カリウム不純物の分析
ＵＦＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を使用して、出発材料由来のカリウムの存在を検出した。
【００７４】
条件：
カラム：Ｍｅｒｃｋ ＳｅＱｕａｎｔ ＺＩＣ＿ＨＩＬＩＣ １５０×４．６ｍｍ
５μｍ ２００Ａ
移動相Ａ：アセトニトリル
移動相Ｂ：１００ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ＝５．０
流速：０．６ｍｌ／分
カラム温度：３５℃
検出器：ＥＬＳＤ
勾配：１１．０分かけて１５％から８５％Ｂ、８．０分かけて８５％から９５％Ｂ、９５％Ｂ ５分間
【００７５】
結果：
実施例１に従って得られたショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩および２つの対照をＵＦＬＣにより分析した：
ＺｎＣｌ２（図１参照）；
ＺｎＣｌ２＋ＫＣｌ（図２参照）；
ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（式ＩＩ）（図３参照）。
【００７６】
この分析から、合成された生成物中にカリウムは存在しないことが確認された。亜鉛のみが陽イオンとして存在する。
【００７７】
実施例２：in vitro細胞移動アッセイ
上皮細胞移動は、発生および組織修復プロセス、例えば胚発生および創傷治癒の実質的な段階である。
【００７８】
細胞移動の開始、協調および停止のメカニズムは十分には解明されていないが、細胞移動が重要な役割を果たすことは立証されている(Santoro M.M. and Gaudino G. Cellular and molecular facets of keratinocyte reepithelization during wound healing Exp. Cell. Res. 304 (1): 274-286, 2005; Werner S. and Grose R. Regulation of wound healing by growth factors and cytokines Physiol. Rev. 3(3): 835-870, 2003; Steffensen B, Akkinen L., Lariava H. Proteolytic events of wound healing-coordinated interactions among matrix metalloproteinases(MMPs), integrins, and extracellular matrix molecules Crit. Rev. Oral Biol. Med. 12(5): 373-398, 2001).
【００７９】
皮膚の治癒過程および皮膚の慢性炎症状態において、ケラチノサイトは「活性化」され、移動プロセスを開始する。次に、該細胞は、一方では細胞外マトリックスとの相互作用により、また他方では細胞−細胞相互作用により、それらの表現型を支配する(McMillan JR, Akiyama M., Shimizu H.Epidermal basement membrane zone component: ultrastructural distribution and molecular interactions J. Derm. Sc. 31: 169-177, 2003)。創傷の境界の基底面のケラチノサイトは、移動して創傷を覆う。
【００８０】
実際に、ケラチノサイトは、フィブロネクチン、間質皮膚コラーゲン（１型）、コラーゲンＩＶ、および基底膜由来のラミニン５と接触した場合に活性化される。それらはまた、一部のポリペプチド増殖因子、例えば、ＴＧＦβ、ＴＧＦα、およびＥＧＦによっても制御される。さらに、サイトカイン（ＩＬ１、ＴＮＦα）、ならびにケモカイン（ＲＡＮＴＥＳおよびＩＬ−８）もまた、ケラチノサイトを活性化することにより創傷の再上皮化の速度を増加させるのを助ける(Szabo I., Wetzel M. A., Rogers TJ. Cell-Density-Regulated Chemotactic Resposiveness of Keratinocytes In Vitro J. Invest. Dermatol. 117: 1083-1090, 2001)。
【００８１】
試験の目的
本試験の目的は、Ｏｒｉｓ細胞移動アッセイキット(Platypus Technologies)を用いて、ケラチノサイト細胞系統であるＨａＣＡＴの細胞移動に対するショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩の効果を評価することであった。本試験は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩、およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩と比較して行った。
【００８２】
従って、３つのショ糖のＨａＣａＴ細胞の移動に対する効果について分析した。
【００８３】
材料および方法
ａ．生物材料
自然に不死化したヒトケラチノサイト細胞系統ＨａＣＡＴは、文献において頻繁に標準モデルとして紹介されている。
【００８４】
ｂ．細胞移動プロトコール
細胞移動試験に用いたプロトコールは、９６穴Ｏｒｉｓ細胞移動アッセイキット(Platypus Technologies-TEBU)の使用に基づき、この細胞プロセスの縮小化および定量化を提供する。それは、コード番号ＱＲＤ／ＴＯ／１５４／１０７で表される。
【００８５】
本アッセイの原理は、９６穴プレートのウェルの中心部への細胞移動を調査することである。一部のウェルにはストッパーを配置し、直径２ｍｍの検出ゾーンを設ける。次に、細胞が該ストッパー周囲の表面に十分付着した後に該ストッパーを除去し、細胞が検出ゾーンに向かって移動できるようにする。ストッパー無しで活性物質を含むプレートをＤＭＥＭ ０％ＳＶＦ中で３７℃、２４時間インキュベートする。この後、ストッパーが配置されていたゾーンに位置する細胞量を分析し、細胞移動を評価する。マスクは可視化およびこのゾーンに位置する細胞のみの読み取りを制限する。各条件につき、平均４から８個のウェルを計算する。
【００８６】
ｃ．試験品
陽性対照：ＴＧＦβ１
ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＳＯＳ−Ｋ）
ショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＳＯＳ−Ｎａ）
実施例１のショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（ＳＯＳ−Ｚｎ）
【００８７】
ｄ．結果の分析
結果はＯＤとして表す（移動した細胞の量に比例）。
【００８８】
陰性対照に対する活性パーセントは次のように計算する。
【数１】
【００８９】
ＴＧＦβに対する活性パーセントは次のように計算する。
【数２】
【００９０】
結果
様々な濃度の３種類のショ糖を、それらのＨａＣａＴ細胞移動に対する効果について、二重測定で分析した（表３および４）。
【００９１】
ａ．実験１
【表３】
【００９２】
ｂ．実験２
【表４】
【００９３】
以下のことが確認された。
・実験の陽性対照であるＴＧＦβは５ｎｇ／ｍＬはケラチノサイト移動を再現性良く誘導する。
・ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩（ＳＯＳ−Ｚｎ）もまた、１μＭにおいて細胞移動を再現性良く誘導する。この濃度では、それは陽性対照であるＴＧＦβと同等の活性を有する。
・試験した濃度では、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩（ＳＯＳ−Ｋ）およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩（ＳＯＳ−Ｎａ）はケラチノサイト移動を誘導しない。
【００９４】
この細胞移動キットを用いて、３種類のショ糖のケラチノサイト移動に対する効果を検討した。
【００９５】
本発明者らは、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩がケラチノサイト移動を誘導することを示した。これに対して、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩は細胞移動を誘導しない。
【００９６】
ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩およびショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩とは異なり、ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩はケラチノサイト移動に対して極めて有用な特性を有し、従って、皮膚治癒に好適であることが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】
【図２】
【図３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉの化合物：
【化１】
［式中、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、ＢＦ４、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化２】
の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の一般式Ｉの化合物を製造するための方法であって、
１）ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）該塩をイオン交換カラム上にロードする工程、
３）亜鉛塩を添加する工程、
４）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる、方法。
【請求項４】
ショ糖オクタ硫酸エステル塩が、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩またはショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法であって、
１）酸性型ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）亜鉛塩を添加する工程、
３）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる、方法。
【請求項６】
前記亜鉛塩が、Ｚｎ（ＯＨ）２、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩｒ、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２から選択される無機亜鉛塩、またはＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２から選択される有機亜鉛塩である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１または２に記載の少なくとも１つの化合物と、薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる、医薬品および／または化粧品組成物。
【請求項８】
薬剤として使用するための、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
皮膚または粘膜の処置のための、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
創傷治癒を促進するための、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
火傷および急性または慢性創傷の治癒に好適である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
火傷、放射線皮膚炎、様々な発疹、皮膚炎、擦り傷、引っ掻き傷、かすり傷、切り傷、下肢潰瘍、褥瘡、糖尿病性創傷、胃潰瘍、口腔びらん、口腔環境における様々な創傷、瘢痕性座瘡、凍結療法の瘢痕、外科手術後または皮膚形成外科手術後瘢痕、水泡、口唇炎、湿疹、おむつかぶれ、および皮膚粗鬆症の治癒に好適である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１または２に記載の少なくとも１つの化合物の有効成分としての適用を含む、皮膚および粘膜の美容学的処置の方法。
【請求項１】
一般式Ｉの化合物：
【化１】
［式中、
０≦ｎ≦４、
ｎは整数であり、
ＹはＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ３、ＢＦ４、Ｃ６Ｈ５Ｏ７、ＣＨ３ＣＯ２、ＣＦ３ＣＯ２、または−ＯＣＨ３を表す］。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化２】
の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の一般式Ｉの化合物を製造するための方法であって、
１）ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）該塩をイオン交換カラム上にロードする工程、
３）亜鉛塩を添加する工程、
４）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる、方法。
【請求項４】
ショ糖オクタ硫酸エステル塩が、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム塩またはショ糖オクタ硫酸エステルナトリウム塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
一般式Ｉの化合物を製造するための方法であって、
１）酸性型ショ糖オクタ硫酸エステル塩を水に溶解させる工程、
２）亜鉛塩を添加する工程、
３）ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩を沈殿させる工程
を含んでなる、方法。
【請求項６】
前記亜鉛塩が、Ｚｎ（ＯＨ）２、ＺｎＣｌ２、ＺｎＢｒ２、ＺｎＩｒ、Ｚｎ（ＮＯ３）２、もしくはＺｎ（ＢＦ４）２から選択される無機亜鉛塩、またはＺｎ（ＣＨ３ＣＯ２）２、Ｚｎ（ＣＦ３ＣＯ２）２、Ｚｎ３（Ｃ６Ｈ５Ｏ７）２、もしくはＺｎ（ＣＨ３Ｏ）２から選択される有機亜鉛塩である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１または２に記載の少なくとも１つの化合物と、薬学上および／または美容学上許容される賦形剤とを含んでなる、医薬品および／または化粧品組成物。
【請求項８】
薬剤として使用するための、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
皮膚または粘膜の処置のための、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
創傷治癒を促進するための、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
火傷および急性または慢性創傷の治癒に好適である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
火傷、放射線皮膚炎、様々な発疹、皮膚炎、擦り傷、引っ掻き傷、かすり傷、切り傷、下肢潰瘍、褥瘡、糖尿病性創傷、胃潰瘍、口腔びらん、口腔環境における様々な創傷、瘢痕性座瘡、凍結療法の瘢痕、外科手術後または皮膚形成外科手術後瘢痕、水泡、口唇炎、湿疹、おむつかぶれ、および皮膚粗鬆症の治癒に好適である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１または２に記載の少なくとも１つの化合物の有効成分としての適用を含む、皮膚および粘膜の美容学的処置の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１３−５１２９３８（Ｐ２０１３−５１２９３８Ａ）
【公表日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４２４７５（Ｐ２０１２−５４２４７５）
【出願日】平成２２年１２月３日（２０１０．１２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６８８７３
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６９９２１
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５００１６６２３１）ピエール、ファブレ、デルモ‐コスメティーク (30)
【氏名又は名称原語表記】ＰＩＥＲＲＥ ＦＡＢＲＥ ＤＥＲＭＯ−ＣＯＳＭＥＴＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月３日（２０１０．１２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６８８７３
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６９９２１
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５００１６６２３１）ピエール、ファブレ、デルモ‐コスメティーク (30)
【氏名又は名称原語表記】ＰＩＥＲＲＥ ＦＡＢＲＥ ＤＥＲＭＯ−ＣＯＳＭＥＴＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
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